تقييم التعرض لنيتروجين الأمونيا في الدفاعات المناعية الموجودة في الطحال والكلى الرأسية لسمك الدنيس Wuchang (Megalobrama Amblycephala) Ⅱ

3. المناقشة

أصبحت كيفية استجابة الجهاز المناعي للأسماك لأنواع مختلفة من الملوثات البيئية موضوعًا ساخنًا.34–37]. باعتبارها مادة سامة في كل مكان، قد يكون للأمونيا تأثير غير متوقع على صحة الحيوانات المائية لأن الأسماك غالبا ما تعاني من إجهاد الأمونيا المزمن في مواقف واقعية. أوضحت دراستنا الحالية تأثيرات التعرض طويل الأمد للأمونيا على مناعة الأسماك وآليتها.

في تجربتنا الحالية، زاد الكورتيزول في الدم بشكل ملحوظ مع زيادة تركيز التعرض للأمونيا، مما يشير إلى حدوث إجهاد في سمك الدنيس Wuchang. وقد لوحظت نتائج مماثلة في سمك الترس (Scophthalmus ma. imus)، والكارب الشائع (Cyprinuscarpio)، والسمك اليافع ذو الخطم الحاد (Megalobrama). الغمش) [32،38،39. أدى التعرض المزمن للأمونيا أيضًا إلى انخفاض كبير في الليزوزيم في الدم والمكمل وC4 في هذه الدراسة. الليزوزيم، كمؤشر على وظيفة المناعة الفطرية، هو الإنزيم المناعي الأساسي لمكافحة العدوى (40).يلعب النظام المكمل، باعتباره أحد الجسور بين المناعة الفطرية والمناعة المكتسبة، أدوارًا أساسية في إزالة المجمعات المناعية وقتل مسببات الأمراض. البكتيريا والفيروسات [41،42). أفادت بعض الدراسات السابقة أن إجهاد الأمونيا الحاد يمكن أن يثبط أنشطة الليزوزيم (17،43] ويقلل مستويات البروتين والحمض النووي الريبوزي المرسال لـ C3 وC4 في الأسماك (44-46). وهكذا، كشفت نتائجنا الحالية أن إجهاد الأمونيا المزمن قد أفسد عملية إجهاد الأمونيا المزمن. المناعة الفطرية للأسماك.في هذه الدراسة، تم العثور على زيادات تعتمد على التركيز في تركيزات الأمونيا في كل من الطحال وكلية الرأس ولكن تم اكتشاف اختلاف كبير فقط في الطحال.تم العثور على زيادات مماثلة في الطحال وكلية الرأس.مؤشرات الرأس والكلىمما يشير إلى أن إجهاد الأمونيا تسبب في أضرار جسيمة لاثنين من أعضاء المناعة الرئيسية. وكشفت النتائج النسيجية كذلك أن تراكم الأمونيا قد يكون السبب الرئيسي للإصابات المرضية في الطحال وكلية الرأس، والتي تميزت بزيادة مراكز البلاعم الميلانينية وتفريغ السيتوبلازم. تُعرف مراكز البلاعم الميلانوية باسم مجاميع البلاعم، وتتمثل وظائفها الرئيسية في تخزين الفسفوليبيدات المشتقة من الخلايا والحديد بعد كثرة الكريات الحمر، وترسب مسببات الأمراض المقاومة، ومعالجة المستضد في الاستجابات المناعية [47-51]. غالبًا ما يشير الحجم المتزايد وتواتر مراكز البلاعم الميلانية إلى أن الأسماك تعاني من الإجهاد أو الضرر أو تتقدم في السن [36،48،52]. أفاد البحث الذي أجراه كوون وتشانغ أن التعرض للأمونيا لمدة 5-يوم (4.0~10.4 مجم/لتر إجمالي نيتروجين الأمونيا) أدى إلى ترسب شديد للهيموسيديرين وزيادة بلاعم الميلانين في طحال الدنيس الأسود [ 53]. ولوحظ تجمع مماثل من البلاعم الميلانوية في طحال Pelteobagrus vachellii المعرض لـ 1 و5 ملغم / لتر من نيتروجين الأمونيا الكلي [17]. بالإضافة إلى ذلك، أظهر التقييم الكمي للتغيرات التشريحية المرضية أن درجة الإصابة المرضية الناجمة عن إجهاد الأمونيا المستمر كانت أعلى في الطحال منها في كلية الرأس.

مستخلص سيستانش عضوي يحتوي على 25% من الإكيناكوسيد و9% من الأكتيوسايد لعلاج عدوى الكلى

يرتبط تلف الأعضاء المناعية في الأسماك دائمًا بتغييرات في الجزيئات المناعية [35]. في النظام المناعة الفطري، الالسيتوكينات الالتهابية IL-1و TNF- هما المنظمان المهمان لبدء وتعديل الاستجابة الالتهابية [54-57]. تمثل المستويات المنخفضة من جزيئات السيتوكين (TNF-، IL-1 ) انخفاضًا في الوظيفة المناعية الخلوية، مما يؤدي في النهاية إلى ارتفاع معدل الإصابة تحت الضغوطات الخارجية [58-60]. لقد وثقت دراسات محدودة أن التعرض الحاد لـ 40 ملغم / لتر من إجمالي نيتروجين الأمونيا يمكن أن يرفع مستويات النسخ من السيتوكينات مثل IL-1 وTNF- في سمك الترس (Scophthalmus maximus)، في حين أن التعرض المزمن لمستويات عالية من الأمونيا (50 ملغم / لتر) أدى إجمالي نيتروجين الأمونيا) إلى حدوث اتجاه معاكس في أسماك مبروك الدوع (Carassius auratus) [14,60]. أظهرت نتائجنا الحالية أن التعرض المزمن للأمونيا تسبب في انخفاض ملحوظ في البروتين ومستويات النسخ من IL -1 الطحالي وTNF-، والتي تم دعمها بشكل أكبر من خلال تحليل ارتباط سبيرمان بين تركيزات الأمونيا ومستويات IL الطحالي {{15} } و TNF- . كما تم العثور على نتائج مماثلة في كلية الرأس. تشير بياناتنا الحالية إلى أن التعرض المزمن للأمونيا يعطل الدفاع المناعي الفطري عن طريق تثبيط النسخ وتخليق البروتين للجزيئات الالتهابية IL-1 وTNF- في عضوين مناعيين، هما الطحال والكلى الرأسية.

بالإضافة إلى نظام الدفاع المناعي الفطري، تلعب المناعة التكيفية أيضًا دورًا حاسمًا في الدفاع المناعي للأسماك. IgM هو أول جسم مضاد يفرز عن طريق الاستجابة المناعية التكيفية لعدوى جديدة أو لمستضد غريب، والتي يتم التعبير عنها بشكل رئيسي في الطحال والكلى الرأسية للأسماك [61،62]. قد تترافق المستويات المنخفضة من IgM مع ضعف المناعة التكيفية [63]. في الدراسة الحالية، تم اكتشاف انخفاضات كبيرة في البروتين ومستويات النسخ من IgM في الطحال ولكن ليس في كلية الرأس، مما يشير إلى أن التعرض للأمونيا له تأثير مثبط على إنتاج IgM الطحالي. تشين وآخرون. ذكرت أن التعرض لـ 1 ملغم / لتر من نيتروجين الأمونيا الكلي لمدة 48 ساعة و 96 ساعة أدى إلى انخفاض كبير في مستويات النسخ من IGM في الطحال في Pelteobagrus vachellii، ولكن ليس في الكلى الرأسية [17]. تم العثور أيضًا على انخفاض مستويات IgM في الخياشيم والطحال والدماغ لدى Rhynchocypris lagowski المعرض لـ 0.99 ملغم/لتر من الأمونيا غير المتأينة لمدة 96 ساعة [18]. أظهر تحليل ارتباط سبيرمان الخاص بنا أيضًا أن تركيز التعرض للأمونيا كان سلبيًا بشكل كبير مرتبطًا بـ IgM الطحال، ولكنه لا يرتبط بشكل كبير بـ IgM في الرأس والكلى. وهكذا، أشارت دراستنا إلى أن إجهاد الأمونيا المزمن يقلل من المناعة التكيفية في الطحال فقط. قد يشير ذلك إلى أن الطحال أكثر عرضة لضغط الأمونيا المحيط من كلية الرأس. قد يكون أحد أسباب هذه الفرضية هو الاختلال المتناقض في بنية الطحال وكلية الرأس الناجم عن إجهاد الأمونيا في دراستنا الحالية.

إن TLRs الموزعة على نطاق واسع في الخلايا المناعية هي أجهزة استشعار أولية لمسببات الأمراض الغازية. في الدراسة الحالية، تم اكتشاف انخفاض مستويات النسخ من TLRs في الطحال والكلى الرأسية لسمك الدنيس Wuchang، مما يعني أن الأمونيا يمكن أن تسبب تأثيرات سلبية عبر مسار إشارات TLR. في الواقع، قد يكون تثبيط TLRs مرتبطًا بالزيادات في الكورتيزول في الدم الناجم عن التعرض للأمونيا. كاريزو وآخرون. أثبت أن علاج الكورتيزول قلل من مستويات الرنا المرسال في TLRs (tlr1/5 م/9/22) في Oncorhynchus mykiss myotubes [64]. سوسارلا وآخرون. وجد أن الكورتيزول يمكن أن يقلل مستويات النسخ من السيتوكينات (VEGF، CCL5، IFN-، CXCL-10، IL-8 وGCSF) بعد تحفيز TLR3 وTLR4 أو كليهما للخلايا الليفية القرنية البشرية الأولية [65]. علاوة على ذلك، فإن تثبيط TLR قد يعني وجود كتلة من مسارات إشارات TLR. يتم تنظيم المسار المعتمد على MyD88- بواسطة جميع TLRs، والمسار المستقل MyD88- خاص بمسارات إشارات TLR3 وTLR4 [66]. تؤدي إشارات TLR أيضًا إلى تنشيط مسار PI3 K-AKT، والذي بدوره ينشط الخلايا B لإنتاج الأجسام المضادة وتوليف الجزيئات المسببة للالتهابات مثل IL-1 وTNF- من خلال مسار إشارات NF-κB [67–69]. تجدر الإشارة إلى أن مستويات النسخ من traf6 انخفضت في كل من الطحال وكلية الرأس بعد التعرض للأمونيا، في حين لم يتم اكتشاف أي تغييرات مهمة في التعبير عن myd88 وpi3 k. وبالتالي، أشارت نتائجنا إلى أن الأمونيا تمارس تداخلًا مع المسار المستقل MyD88- - عن طريق تثبيط TRAF6 في كل من الطحال وكلية الرأس. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يؤدي تنشيط TRAF6 إلى تنشيط إشارات NF-κB وإشارات MAPK (p38 وJNK وERK)، مما يؤدي في النهاية إلى إنتاج العديد من السيتوكينات الالتهابية بما في ذلك TNF- وinterleukin-1 /6/12 (إيل-1 /6/12) [70،71]. بالإضافة إلى ذلك، يعد TRAF6 أيضًا الوسيط الحاسم لإشارة CD40 التي تنظم إفراز IL-6 وIg [72]. في دراستنا، اقترح التنظيم السفلي الكبير لـ erk1 الطحال وnf-κb2 mRNAs وكذلك erk1 وjnk1 وnf-κb1 mRNAs أن التعرض للأمونيا يثبط جزيئات الإشارة NF-κB وMAPK في الطحال والرأس. -كلية. علاوة على ذلك، فإن التعرض للأمونيا لإشارة NF-κB الخاضعة للتنظيم عن طريق قمع الجين nf-κb1 في الطحال ولكن الجين nf-κb2 في الكلية الرأسية، مما يعكس الاستجابة الالتهابية الخاصة بالأنسجة بينالطحال والرأس والكلى. أما بالنسبة لمسار إشارات MAPK، فإن التعرض للأمونيا يمنع بشكل كبير التعبير عن الطحال erk1 وerk1 والرأس والكلى وjnk1. بعد إجراء تحليل ارتباط سبيرمان، وجدنا أن تركيز التعرض للأمونيا كان مرتبطًا بشكل سلبي بشكل كبير بمستويات المعلمات المناعية (IL-1 وTNF- وIgM) بالإضافة إلى التعبير عن الجينات المرتبطة بإشارات TLR في الطحال و الكلى الرأس. لذلك، تشير نتائجنا إلى أن التعرض المزمن للأمونيا يمكن أن يضعف المناعة الفطرية والتكيفية عبر مسار الإشارات المستقل TLRs/MyD88-.

تعكس قيم IBR المرتفعة الاستجابات البيولوجية المعززة والحالة الصحية السيئة للكائنات الحية [73]. زادت النتائج الحالية لقيم IBR مع الزيادات في تركيز الأمونيا المحيطة في كل من الطحال وكلية الرأس. وكانت هذه النتيجة متسقة مع البيانات المتعلقة بالتشريح المرضي والمعلمات المناعية في الدم. علاوة على ذلك، في ظل نفس تركيز إجهاد الأمونيا، كانت قيمة IBR أعلى في الطحال منها في كلية الرأس، مما أثبت أيضًا أن تأثيرات إجهاد الأمونيا على الطحال كانت أكثر شدة من تأثيرها على كلية رأس الدنيس Wuchang.

4. المواد والأساليب

4.1. صيانة الحيوان والبروتوكول التجريبي للأحداث

تم نقل سمك الدنيس Wuchang بمتوسط ​​وزن 9.98 ± 0.48 جم من Tuanfeng Fishery (هوبي، الصين) إلى 3 00 لتر من خزانات الألياف الزجاجية، حيث تم تزويدها بالجري المزيل للكلور والتهوية المستمرة ماء. تم تأقلمها لمدة 14 يومًا عن طريق تغذية الأنظمة الغذائية التجارية مرتين يوميًا (9:{{10}} صباحًا و15:00 مساءً). بعد تجربة أولية، تم العثور على 96 ساعة LC50 والتركيزات الآمنة لنيتروجين الأمونيا الكلي لصغار الدنيس تبلغ 46.013 ملجم/لتر و4.601 ملجم/لتر، على التوالي. لذلك، تم تحديد نطاق التعرض للأمونيا على أنه 0 مجم / لتر، 5 مجم / لتر، 10 مجم / لتر، 20 مجم / لتر و 30 مجم / لتر إجمالي نيتروجين الأمونيا. تم توزيع الأسماك عشوائيا على 5 مجاميع معالجة بأحواض ثلاثية، وبلغت كثافة التأجيج 20 حدثا لكل حوض. تم الحصول على التركيزات التجريبية للأمونيا من محلول مخزون قدره 10 جم/لتر مصنوع من كلوريد الأمونيا من الدرجة الكاشفة (BASFR، 99.5%). للحفاظ على تركيزات معالجة الأمونيا المستقرة، يتم تجديد نصف محلول التجربة كل يوم بتركيز جديد ومتساوي من محلول نيتروجين الأمونيا. وفي الوقت نفسه، خضعت المجموعة الضابطة لمعالجة مماثلة مع مياه الصنبور الغازية. تم قياس إجمالي مستويات نيتروجين الأمونيا الحقيقية لكل علاج عن طريق neslerization كل يوم. خلال الفترة التجريبية بأكملها، أظهرت بيانات المراقبة اليومية بواسطة محلل المياه HQ40 D (Hach، Loveland، CO، USA) أن درجة حرارة الماء كانت 25.0 ± 0.60 ◦C، وكانت تركيزات الأكسجين المذاب أعلى من 5.0 مجم / لتر، وتم الحفاظ على الرقم الهيدروجيني عند 7.55 ± 0.04، مع تعديلات طفيفة باستخدام 10% H2SO4 و10% NaOH. تم تغذية الأسماك بنظام غذائي تجاري مرتين يوميًا مثل نظام التأقلم.

4.2. جمع العينات وإعدادها

بعد التعرض التجريبي لمدة 30-يوم، تم صيام الأسماك لمدة 48 ساعة أولاً ثم تم تخديرها في محلول MS-222. تم قياس وزن الجسم لكل حدث قبل التشريح، وتم جمع الدم على الفور من الأوردة الذيلية لفصل المصل لتحديد المعلمة البيوكيميائية اللاحقة. تم استخراج الأنسجة (الطحال والكلى والرأس) ووزنها. تم حساب مؤشرات الطحال والرأس والكلى باستخدام الصيغة [وزن الأنسجة (جم)/وزن الجسم (جم) * 100٪]. تم استخدام ثلاث طحال وكلى رأس فردية من كل مجموعة للتحليل النسيجي المرضي، وتم تجميد الطحال الأخرى فورًا عند -80 درجة مئوية لتحليل تركيزات الأمونيا في الأنسجة، ومعايير المناعة ومستويات النسخ الجيني. تمت الموافقة على هذا العمل الذي أجري على M. amblycephala من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان (IACUC) التابعة لجامعة هواتشونغ الزراعية، ووهان، الصين (HZAUFI-2019-018).

4.3. كشف الأمونيا في الطحال والرأس والكلى

لتحليل مستويات الأمونيا، تم إجراء المعالجة المسبقة لعينات الأنسجة والكشف عن الأمونيا وفقًا للدراسات السابقة [74،75]. يمكن العثور على خطوات الاختبار التفصيلية في المعلومات الداعمة (النص التكميلي S1).

4.4. فحص المعلمات المناعية في الدم

تم طرد عينات الدم (845 جم، 20 دقيقة، 4 درجات مئوية) لتحضير عينات المصل. كان لكل مجموعة تجريبية ستة مكررات ونسخة واحدة شملت المصل من 10 أفراد من نفس الخزان. تم تحديد الكورتيزول في المصل عن طريق المقايسة المناعية الإشعاعية (RIA) باستخدام مجموعة أدوات معهد شمال بكين للتكنولوجيا الحيوية المحدودة (بكين، الصين) (www.bnibt.com، تم الوصول إليه في 15 مارس 2020) وفقًا لدراسة سابقة [76]. تم قياس محتويات المكمل C3 والمكمل C4 ونشاط الليزوزيم باستخدام مجموعات تجارية أنتجها معهد Jiancheng للهندسة الحيوية (نانجينغ، الصين) (www.njjcbio.com، تم الوصول إليه في 15 مارس 2020).

4.5. فحص المعلمات المناعية للأنسجة

تم تجميع عينات الأنسجة من خمس أسماك من نفس المجموعة كنسخة واحدة ومتجانسة باستخدام 0.85% كلوريد الصوديوم، ثم تم طردها بالطرد المركزي عند 845 × جم لمدة 15 دقيقة (4 ◦م) لتجميع المادة الطافية. كان لكل مجموعة تجريبية ستة مكررات. كما هو موضح في الدراسات السابقة [77،78]، تم استخدام المادة الطافية لاختبار تركيزات IgM، IL-1، TNF- والبروتين الكلي باستخدام مجموعات تجارية. تم شراء جميع المجموعات من معهد Jiancheng للهندسة الحيوية (نانجينغ، الصين) (www.njjcbio.com، تم الوصول إليه في 15 مارس 2020).

4.6. تحليل التعبير الجيني

تم اختبار مستويات مرنا للجينات المرتبطة بالمناعة في الطحال والكلى الرأسية وفقًا للطريقة الموجودة في دراسة سابقة [79]. يتم توفير معلومات تفصيلية حول إجراء الاختبار في المعلومات الداعمة (النص التكميلي S2). يتم سرد تسلسلات التمهيدي في الجدول 3. تم إجراء تحليل منحنى الذوبان لكل كتاب تمهيدي في نهاية التفاعل لإثبات خصوصية التفاعل. بعد التحقق من أن كفاءة التضخيم لجميع الجينات المختارة تتراوح بين 90-110٪، تم حساب مستويات Mrna النسبية بطريقة 2−∆∆Ct مع -actin كعنصر تحكم داخلي [80].

4.7. التقييم النسيجي

تم تثبيت عينات الطحال والكلى والرأس في 10٪ من الفورمالين المحايد المخزن، ثم تم تجفيفها في الإيثانول ودمجها في البارافين. وأخيرا، كانت ملطخة شرائح الأنسجة مع الهيماتوكسيلين ويوزين (H&E). تم إجراء مزيد من التحليل الكمي للتغيرات المرضية وفقا للدراسات السابقة [82،83]. يتم توفير بروتوكول التحليل التفصيلي في المعلومات الداعمة (النص التكميلي S3).

4.8. تحليل استجابة العلامات الحيوية المتكاملة

يعد تحليل IBR طريقة لدمج جميع استجابات العلامات الحيوية المقاسة في فهرس متكامل لتقييم مستويات التوتر [84–86]. في الدراسة الحالية، تم تطبيقه لتقييم التأثيرات السامة لتركيزات مختلفة من الأمونيا على الطحال وكلية الرأس لسمك الدنيس Wuchang بعد التعرض ليوم 30-. تتوفر معلومات تفصيلية حول إجراء الحساب في المعلومات الداعمة (النص التكميلي S4).

4.9. تحاليل احصائية

خضعت جميع القيم لتحليل التباين أحادي الاتجاه متبوعًا باختبار Dunnett اللاحق لتقييم الاختلافات بين الوسائل (SPSS 22.0، Chicago، IL، USA). تم اختيار تحليل ارتباط رجل الرمح لتحديد العلاقة بين إجمالي تركيزات الأمونيا والمعلمات المناعية ومستويات التعبير الجيني. تم التحقق من تجانس الحياة الطبيعية والتباين مسبقًا. تم قياس الاختلافات واعتبرت ذات دلالة عند القيمة p < 0.05.

5. الاستنتاجات

تقدم دراستنا دليلًا على أن إجهاد الأمونيا المزمن يؤدي إلى ارتفاع COR في المصل، وانخفاض ليسوزيم المصل وC3/C4، وانخفاض مستويات البروتين والنسخ لـ IL-1 وTNF- وIgM بالإضافة إلى مستويات التعبير للجينات المشاركة في TLRs /MyD88- مسار إشارات مستقل في الطحال والكلى الرأسية لـ M.أمبليسيفالا. بالإضافة إلى ذلك، فإن مؤشرات والضرر المرضيإلى الجهازين المناعيين يزداد مع تراكم الأمونيا في الأنسجة. أشارت هذه النتائج إلى أن تراكم الأمونيا في الطحال والكلى الرأسية تسبب في تلف الأنسجة المرضية وتسبب في تثبيط المناعة من خلال تثبيط الإشارات المستقلة TLRs/MyD88-. بالإضافة إلى ذلك، تبين أن التأثيرات الضارة لإجهاد الأمونيا المزمن على الطحال كانت أكثر خطورة من تلك الموجودة على الكلى والرأس لسمك الدنيس Wuchang.

التمويل: تم دعم هذا العمل بشكل مشترك من قبل البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2019 YFD0900303)، ونظام البحوث الزراعية الصينية التابع لوزارة المالية وMARA (CAS-45-24) والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 32071621). .

بيان مجلس المراجعة المؤسسية: لقد التزمنا بجميع اللوائح والاتفاقيات المحلية والوطنية والدولية، واحترمنا الممارسات الأخلاقية العلمية العادية. العينات المستخدمة في هذه الدراسة جاءت من مجموعة سكانية تتكون أساسًا من أفراد يتم صيدهم تجاريًا بغرض الاستهلاك البشري. تمت الموافقة على بروتوكول الحيوان من قبل لجنة أخلاقيات رعاية واستخدام الحيوان المؤسسية التابعة لجامعة هواتشونغ الزراعية (ووهان، الصين) (HZAUFI-2019-018).

بيان الموافقة المستنيرة: تم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع الأشخاص المشاركين في الدراسة.

بيان توفر البيانات: تم تضمين جميع مجموعات البيانات التي تم إنشاؤها لهذه الدراسة في المقالة / المواد التكميلية.

تضارب المصالح: يعلن المؤلفون عن تضارب المصالح.

مراجع

1. راندال، دي جي؛ تسوي، T. سمية الأمونيا في الأسماك. مارس التلوث. ثور. 2002، 45، 17-23. [المرجع المتقاطع]

2. ديفيد، أأ؛ ديبي، سي. ألين، WK. جون، EC تفاعل الأمونيا المؤينة وغير المؤينة على البقاء على المدى القصير ونمو يرقات الجمبري، Macrobrachium rosenbergii. بيول. ثور. 1978، 154، 15-31. [المرجع المتقاطع]

3. ثورستون، آر في؛ روسو، RC؛ فينوغرادوف، GA سمية الأمونيا للأسماك. تأثير الرقم الهيدروجيني على سمية أنواع الأمونيا النقابية. البيئة. الخيال العلمي. تكنول. 1981، 15، 837-840. [المرجع المتقاطع]

4. ارمسترونج، بي إم. لازورتشاك، جي إم؛ ميرفي، كاليفورنيا؛ هارينغ، HJ. جنسن، كم. سميث، ME تحديد آثار الأمونيا على تكاثر أسماك المنوة ذات الرأس الكبير (Pimephales promelas). الخيال العلمي. مجموع البيئة. 2012، 420، 127-133. [CrossRef] [مجلات]

5. إيدي، FB الأمونيا في مصبات الأنهار وتأثيرها على الأسماك. جي فيش بيول. 2005، 67، 1495-1513. [المرجع المتقاطع]

6. ميرون، DS. مورايس، ب. بيكر، AG. كريستاني، م. سبانفيللو، ر. لورو، VL. تأثير Baldisserotto, B. الأمونيا والأس الهيدروجيني على بعض المعايير الأيضية وأنسجة الخياشيم في سمك السلور الفضي Rhamdia quelen (Heptapteridae). تربية الأحياء المائية 2008، 277، 192-196. [المرجع المتقاطع]

7. يو، سي؛ هوانغ، X.؛ تشن، ه.؛ جودفري، محكمة العدل العليا؛ رايت، شبيبة. هول، جي دبليو؛ غونغ، P.؛ ني، س. تشياو، S.؛ هوانغ، G.؛ وآخرون. إدارة النيتروجين لاستعادة جودة المياه في الصين طبيعة 2019, 567, 516. [CrossRef] 8. منظمة الصحة العالمية (WHO). نظرة عامة عالمية على اللوائح والمعايير الوطنية لجودة مياه الشرب، الطبعة الثانية؛ منظمة الصحة العالمية: جنيف، سويسرا، 2021؛ 66 ص.

9. باسيل، HD؛ دهم، CN؛ Bedrick، EJ، نمذجة الأمونيا لتقييم السمية المحتملة لأنواع الأسماك في RIO grande، 1989-2002. إيكول. تطبيق. 2007، 17، 2087-2099. [المرجع المتقاطع]

10. فان، ب.؛ لي، J.؛ وانغ، العاشر. تشن، J.؛ جاو، X.؛ لي، دبليو؛ منظمة العفو الدولية، S.؛ واجهة المستخدم الرسومية، L.؛ جاو ، إس. Liu، Z. توزيع الأمونيا الزماني المكاني وتقييم المخاطر لأنواع المياه العذبة في النظام البيئي المائي في الصين. السموم البيئية. البيئة. ساف. 2021، 207، 111541. [المرجع المتقاطع]

11. يو، ف.؛ عموم، LQ. شيه، ب. تشنغ، د.؛ Li، J. الاستجابات المناعية والتعبير عن الجينات المرتبطة بالمناعة في سلطعون السباحة Portunus trituberculatus المعرض لضغط الأمونيا-N المرتفع. شركات. الكيمياء الحيوية. فيزيول. مول. متكامل. فيزيول. 2010، 157، 246-251. [المرجع المتقاطع]

12. تشين، سي جيه؛ شاو، T.؛ تشاو، دي إكس؛ دوان، زئبق؛ ون، زي. يوان، د.؛ لي، HT؛ Qi، ZM تأثير الأمونيا-N وتحدي مسببات الأمراض على تعبير المكون 8 و 8 في سمك السلور الداكن Pelteobagrus vachellii. الأسماك المحار Immunol. 2017، 62، 107-115. [CrossRef] [مجلات]

13. تشنغ، CH؛ يانغ، ف.ف. لينغ، ر.ز. لياو، سا؛ مياو، أي تي؛ أيها، سي إكس؛ وانغ، آل آثار التعرض للأمونيا على موت الخلايا المبرمج، والإجهاد التأكسدي والاستجابة المناعية في السمكة المنتفخة (Takifugu obscurus). اكوات. توكسيكول. 2015، 164، 61-71. [المرجع المتقاطع]

14. ليو، بي إل؛ جيا، ر. هوانغ، ب. Lei، JL التأثير التفاعلي للأمونيا وضغط الازدحام على التنظيم الأيوني والتعبير عن الجينات المرتبطة بالمناعة في سمك الترس الصغير (Scophthalmus maximus). مارس فريشو. بيهاف. فيزيول. 2017، 50، 179-194. [المرجع المتقاطع]

15. لي، م.؛ تشانغ، م. تشيان، Y.؛ شي، ج. وانغ، ر. سمية الأمونيا في سمك السلور الأصفر (Pelteobagrus fulvidraco): الرؤية الآلية من إزالة السموم الفسيولوجية إلى التسمم. الأسماك المحار Immunol. 2020, 102, 195-202. [CrossRef] [مجلات]

الخدمة الداعمة لشركة Wecistanche - أكبر مصدر للسيستانش في الصين:

البريد الإلكتروني:wallence.suen@wecistanche.com

واتس اب/هاتف:+86 15292862950

تسوق لمزيد من تفاصيل المواصفات:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

احصل على مستخلص السيستانش العضوي الطبيعي الذي يحتوي على 25% من الإكيناكوسيد و9% من الأكتيوسايد لعلاج عدوى الكلى