تطوير لقاح مرض الحمى القلاعية والتحديات في إحداث مناعة طويلة الأمد: الاتجاهات والآفاق الحالية

خلاصة:

مرض الحمى القلاعية (FMD) هو مرض فيروسي شديد العدوى يصيب الماشية وينتج عن جنس فيروس الحمى القلاعية: Aphthovirus ، والذي يتسبب في تأثير اقتصادي خطير على كل من المزارعين والاقتصاد الوطني. فشلت العديد من المحاولات لتطوير لقاح ضد مرض الحمى القلاعية في إحداث مناعة معقمة. كانت الطرق التقليدية لإنتاج اللقاح ناتجة عن التراكم الانتقائي للطفرات حول مواقع المستضدات والالتصاق. عكس العامل عن طريق الاختيار الإيجابي وسرب شبه الأنواع ، واستخدام هذه الطريقة غير قابل للتطبيق للاستخدام في المناطق غير الموبوءة. أدى التوهين الكيميائي باستخدام ثنائي إيثيلين أمين (BEI) إلى حماية سلامة القفيصة وأنتج مناعة واضحة ضد سلالة التحدي.

مرض الحمى القلاعية هو مرض فيروسي يؤثر على الجهاز المناعي للحيوان. يمكن لفيروس الحمى القلاعية أن يغزو الخلايا الحيوانية ، ويدمر أغشية الخلايا والأعضاء الداخلية ، ويضعف وظيفة المناعة لدى الحيوان ، ويجعله عرضة للإصابة بمسببات الأمراض الأخرى.

في الوقت نفسه ، يمكن أن يحسن لقاح مرض الحمى القلاعية مناعة الحيوانات ويجعلها محصنة ضد الفيروس. بعد نجاح التطعيم ، ينتج الحيوان أجسامًا مضادة ، وعندما يتعرض لفيروس مرض الحمى القلاعية مرة أخرى ، سيكون قادرًا على إنتاج استجابة مناعية بسرعة ، مما يمنع الفيروس بشكل فعال من الإصابة بمزيد من العدوى ويسبب المرض ليحدث.

لذلك ، فإن تحسين مناعة الحيوانات ، وخاصة من خلال التطعيم ضد مرض الحمى القلاعية ، هو وسيلة مهمة للوقاية من مرض الحمى القلاعية. في الوقت نفسه ، يمكن أن تساعد إدارة التغذية العلمية والصرف الصحي وتدابير الوقاية من الأوبئة أيضًا في الحد من انتشار الفيروس وحدوث مرض الحمى القلاعية. من وجهة النظر هذه ، نحتاج إلى التفكير فيما إذا كان جسم الإنسان بحاجة إلى الاهتمام بتحسين المناعة. يمكن أن يحسن cistanche بشكل كبير مناعة الإنسان. يحتوي Cistanche أيضًا على تأثيرات مضادة للفيروسات ومضادة للسرطان ، والتي يمكن أن تعزز قدرة الجهاز المناعي على محاربة وتحسين مناعة الجسم.

انقر فوق فوائد cistanche tubulosa

تمت تجربة المستضدات الفيروسية التي تم تصنيعها أو التعبير عنها كيميائيًا في الفيروسات أو البلازميدات أو النباتات في تطعيم الحيوانات. تمت تجربة لقاحات الدنا التي تعبر عن مستضدات بروتينية هيكلية أو غير بنائية لتحصين الحيوانات. إن استخدام الإنترلوكينات كمساعد وراثي للقاحات الحمض النووي له تأثير واعد. في حين أن تحديات إحداث مناعة معقمة تكمن في البروتينات غير التركيبية (NS) من FMDV المسؤولة عن موت الخلايا المبرمج للخلايا المتغصنة ولها آثار سلبية على الاستجابات التكاثرية اللمفاوية التي تؤدي إلى كبت المناعة العابر. علاوة على ذلك ، فإن تدمير الاتجار بالبروتين المضيف عن طريق البروتينات غير الهيكلية أدى إلى كبح تكاثر الخلايا التائية CD8 بالإضافة إلى تكاثر الخلايا التائية. حاولت هذه المراجعة معالجة مناهج متعددة لتجارب تطوير اللقاح ومعوقات إنتاج مناعة معقمة.

الكلمات الدالة:

لقاح الحمى القلاعية ، مناعة طويلة الأمد ، مناعة معقمة.

خلفية

مرض الحمى القلاعية (FMD) هو مرض فيروسي شديد العدوى يصيب الماشية وينتج عن فيروس مرض الحمى القلاعية ، من الجنس: Aphthovirus ، و Picornaviridae ؛ التي تتسبب في خسائر اقتصادية فادحة .1،2 تتأثر ذوات الحوافر المنزلية والبرية بشدة بمرض الحمى القلاعية. VP1 و VP3 و VP 0 ، خمسة منها تتجمع في 12S pentamer. في حين أن القفيصة الفيروسية 75S تتكون من تجميع 12 خماسية ، تم الإبلاغ عن 6،7 أن مستضد مرض القدم والفم (FMDV) 146S له خصائص مستضد مشابهة جدًا للقفيصة الفيروسية. يحتوي فيروس مرض الفم على مجموعة واسعة من المضيفات ، ومعدل مرتفع من التباين الجيني ، واختلافات كبيرة في المستضدات ، وله سبعة أنماط مصلية (A ، و O ، و C ، و Asia1 ، و SAT1 ، و SAT2 ، و SAT3) وأكثر من 100 نوع فرعي. نظرًا لوجود أشباه سرب من الأنواع ، تظهر أيضًا العديد من المتغيرات الجديدة كل عام. لا توجد مناعة متصالبة تسببها الأنماط المصلية السبعة. يوجد أيضًا حصانة متصالبة جزئية بين الأنواع الفرعية المختلفة من نفس النمط المصلي. أظهرت تأثير وقائي 12-14

تحتوي اللقاحات التقليدية المعطلة على العديد من أوجه القصور ، بما في ذلك عدم الاستقرار الحراري ، والمناعة قصيرة العمر ، والتكلفة العالية ، وخطر إعادة التركيب مع السلالات البرية ، وعودة الإمراضية.

على الرغم من 90 عامًا من البحث ، لا يوجد لقاح فعال ينتج مناعة معقمة وصلبة ضد مرض الحمى القلاعية ، لكن المرض لا يزال متوطنًا في مناطق واسعة من العالم. فشلت العديد من المحاولات لتطوير لقاح ضد مرض الحمى القلاعية في إحداث مناعة معقمة ، مع القليل من الحماية من النمط المصلي ، ومدة مناعة غير كافية. الحيوانات ومضيفها الطبيعي كانا قادرين على إضعاف الفيروس. ويرجع ذلك إلى التراكم الانتقائي للطفرات حول مواقع المستضدات والارتباط .19-21 ومع ذلك ، فإن استخدام ارتداد العامل عن طريق الاختيار الإيجابي وطريقة سرب شبه الأنواع غير قابل للتطبيق للاستخدام في المناطق غير الموبوءة. لقد حسنت تقنيات البروتين البحث عن طريق تعديل مستقبلات إنتغرين ، 23 باستخدام الببتيدات الاصطناعية التي يمكن أن تحفز استجابة مناعية صريحة في الحيوان. تحفيز المناعة الخلطية .25 إن استخدام الإنترفيرون المؤتلف (IFN) والإنترلوكين البقري 18 (IL -18) كمساعد قد عزز المناعة طويلة المدى في حيوانات المختبر.

في الآونة الأخيرة ، لقاحات الدنا الحية المؤتلفة هي محفزات قوية للخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا (CTL) ، 28،29 لإعلان هذا التأثير في مرض الحمى القلاعية ، يلزم استخدام مادة مساعدة مناسبة. والاستجابة المناعية الخلوية للحيوان.

يتم إعاقة مشكلة عنق الزجاجة في إحداث مناعة معقمة وطويلة الأمد من خلال تدمير تهريب البروتين المضيف عن طريق البروتينات غير البنيوية (NS) ، وخاصة 3A ، لذلك لا تثير تمايزًا عنقوديًا 8 إيجابيًا (CD8 plus) استجابة الخلايا التائية بسبب ضعف CTL والفيروس موجود في الحيوان .31 مستقبلات إنتغرين التي توسطت في موت الخلايا المتغصن المشتق من نخاع العظم (DC) أعاقت المناعة الفطرية للمضيف. أو إنتاج IFN بواسطة CD8 معربًا عن الخلايا ، لكن العديد من الخلايا الليمفاوية المعبرة عن CD8 بالإضافة إلى الخلايا الليمفاوية التي ليست CTL تنتج IFN ، بما في ذلك الخلايا القاتلة الطبيعية (NK) ومجموعات فرعية من خلايا دلتا جاما (δ). 35 - 37

وفقًا لـ Oh et al ، 38 يمكن إعادة تحفيز استجابة IFN في الماشية المحصنة التي أظهرت مستوى عالٍ من عيار الأجسام المضادة المعادلة للفيروسات في الدورة الدموية في يوم التحدي ، والتي لها علاقة مباشرة بالحماية التي يسببها اللقاح مع IFN - وتحييد الجسم المضاد. علاوة على ذلك ، فإن خلايا CD4 plus T هي النمط الظاهري الرئيسي المزدهر والخلايا المنتجة لـ IFN. ومع ذلك ، في العدوى الطبيعية ، كان هناك قلة اللمف ، والتي تداخلت مع ذروة فيروسية واستجابة IFN في المصل بينما في خلايا البلازما DC (pDC) في الجسم الحي وفي المختبر pDC IFN- انخفض إفراز IFN لفترة وجيزة في غضون يومين من الإصابة .39 إنتاج IFN- من يتم تثبيط DCs المشتقة من الخلايا الأحادية (MoDCs) و DCs المشتقة من الجلد (الجلد DC) في المرحلة الحادة من إصابة الخنازير. من خلال تعزيز إنتاج الأجسام المضادة وتكاثر الخلايا التائية ، تم تحقيق مستويات أعلى من نشاط CTL والتعبير IFN في خلايا CD8 T بواسطة oligonucleotides الاصطناعية كمساعدات لقاح مخاطي .41 الهدف الرئيسي من هذه الورقة هو مراجعة الاتجاهات في تطوير لقاح الحمى القلاعية و تحديات لإحداث مناعة عقيمة وطويلة الأجل.

لقاح موهن ومعطل

كانت هناك محاولات عديدة لتحسين اللقاحات الحية الموهنة ضد مرض الحمى القلاعية بالطرق التقليدية مثل المرور المتسلسل في الحيوانات غير المسموح بها أو زراعة الخلايا. تم تحقيق الضعف عن طريق المرور في الأنواع غير الحساسة ، مثل الفئران والأرانب والبيض الجنيني حتى فقد الفوعة في الماشية. أدت الممرات التسلسلية لفيروس FMDV C-S8c1 مع تعدد العدوى في مزرعة الخلايا إلى خلل في الجينوم (C-S8p260) ، والذي كان وقائيًا تمامًا للفئران ضد التحدي المميت مع FMDV C-S8c1 وآمن للخنازير بعد التطعيم بجرعة واحدة من C-S8p260.42 تسبب أيضًا في حدوث عيارات عالية من الأجسام المضادة المعادلة وتنشيط الخلايا التائية في الخنازير .42

يقلل انتقال التلامس التسلسلي لعزلة O Taiwan 97 شديدة الإمراض والمتكيفة مع الخنازير بشكل كبير من الضراوة بعد مرور الخنازير الرابع عشر وإلغائها بعد مرور 16. (1D) كانت مؤقتة. قد يؤدي تطوير لقاح الحمى القلاعية في العوائل غير المسموح بها إلى تحفيز العامل على استخدام مستقبلات خلوية أخرى غير Arg-GlyAsp (RGD) ، وقد يظهر اختبار البلاك في اختبار BHK 21 سلبيًا بينما الفيروس سليم .43 استبدال الأحماض الأمينية السلاسل الجانبية الموجودة بالقرب من الوحدة الفرعية القفيصة بواسطة حمض أميني آخر يمكن أن تنشئ روابط ثاني كبريتيد جديدة أو تفاعلات كهروستاتيكية بين واجهات الوحدة الفرعية وإما أن تكون قابلة للاستهلاك للعدوى عن طريق زيادة تحمل الحرارة لسلالات اللقاح ، 44 باستخدام الإجراءات الحالية ، لقاحات الحمى القلاعية التي تكون أقل اعتمادًا على سلسلة التبريد المثالية. سلالات FMDV C-S8p260 مجزأة وكذلك قادرة على التكرار والتي يمكن أن توفر أساسًا لتوهين اللقاحات مع حاجزين أمان.

تظهر معظم الأبحاث أن تعطيل النموذج الحيواني FMDV باستخدام استبدال الأحماض الأمينية في 2C لم يكن قابلاً للاكتشاف في C-S8c1 ولكنه كان موجودًا في نسبة منخفضة من FMDV المتكيف مع خنزير غينيا. إعادة إدخال الفيروس المتكيف مع خنازير غينيا في الخنازير. تُظهِر هذه النتائج كيف أن إدخال فيروسات متباينة من الأقليات في مضيف اصطناعي قد يرتفع إلى هيمنتها عند إعادة إصابة الأنواع المضيفة الأصلية. 22

فشل تثبيط الفيروس باستخدام الفورمالين والنوكلياز الداخلي في تعطيل الفيروس وتحطيم مواقع المستضدات ، على التوالي .48 كما تم استخدام ثنائي إيثيلين أمين (BEI) لتخفيف الفيروس مع الحفاظ على سلامة القفيصة. تُستخدم المستقبلات الخلوية المعطلة FMD ، والإنتغرينات ، للربط والاستيعاب في الخلايا المستنبتة ، ويتم التفاعل بوساطة بقايا الأحماض الأمينية الموجودة داخل حلقة GH لبروتين قفيصة VP1. أظهر الأجسام المضادة أحادية النسيلة الخاصة بـ FMDV أو الببتيد الصناعي ارتباطًا بـ BEI- تم استيعاب مرض الحمى القلاعية المعطلة من خلال توطينهم المشترك مع بروتين الواسم في BHK -21 ، بوساطة نموذج ربط الإنتجرين RGD.50 بالإضافة إلى ذلك ، لا يؤثر تعطيل BEI على مولد الضد في حلقة GH. فضل تعطيل BEI ، وهندسة الفيروسات المحفوظة ، والمستقبلات استيعاب الفيروس في الخلايا المستنبتة ، وكذلك في الجسم الحي ، عن طريق التعرف على إنتيجرين ، ومع ذلك ، فإن القياس الكمي للفيروس بالكامل يُظهر الحد الأدنى من النتائج مقارنةً بالفورمالين التعطيل (65-71.6 بالمائة) ، بينما تعطيل BEI 44.2 بالمائة .49

يؤدي المرور المتسلسل للنوع C FMDV من الخنازير وخنازير غينيا ، والمحافظة عليه في الخنازير والفئران الرضيعة ، إلى بدائل الأحماض الأمينية (I2483T في 2C ، Q443R في 3A ، و L1473P في VP1). ألغى الحمض الأميني الذي تم استبداله (L1473P) ، بجوار نموذج RGD المرتبط بالإنتجرين ، نمو الفيروس في سلالات خلوية مختلفة وغيّر مولده الضد. plus 1 و RGD plus 4 تمنع ارتباط الفيروس والعدوى التي يسهلها v 6 أو v 8 ، لكن الفيروس يستخدم v 3 لربط الخلية. تعتبر الاستبدالات بالميثيونين أو الأرجينين في موقع الربط مثبطات فعالة لـ v 6. اثبتت بقايا ليوسين في البقع RGD plus 1 و RGD plus 4 الارتباط المعتمد على الهيكل مباشرة C الطرف إلى RGD.20،54 EDTA المقاوم للربط مع v 6 هي السمة المميزة ، وكان من المتوقع أن ينتج عن المركب المستقر بمستقبلاته الخلوية نسبة عالية من العدوى بفيروس FMDV (21).

يؤدي استبدال Alanine بـ leucines في الموضعين الأول والرابع في مواقع RGD plus 1 و RGD plus 4 إلى تثبيط ارتباط الفيروس وربط الفيروس بـ v 6 أو v 8. ومع ذلك ، يستخدم الفيروس v 3 لدخول الخلية. تستخدم السلالات المتكيفة مع ثقافة الخلية بروتين الهيباران كبريتات (HSPG) كمستقبل بديل. يعد تأكيد النطاقات الخارجية الخاصة بها وحالة الإنتجرين المرتبطة بالرابط عاملاً مهماً في الانتثار بالنسبة للفيروسات .54

استوعبت فيروسات رابطة كبريتات الهيبارين DC بشكل فعال ولكنها لم تقدم مستضدًا للخلايا الليمفاوية ، مما أدى إلى استجابة IgG الخاصة بـ FMDV. شرط حصري.

يلعب الضغط الانتقائي الذي تمارسه الاستجابة المناعية الخلطية للمضيف دورًا مهمًا في كل من اختيار واستقرار متغيرات FMDV المستضدية ، مما يؤدي إلى تغيير في انتفاخ الخلية. في المختبر ، كشفت الاختبارات أن المرور الموازي لـ FMDV في وجود الأمصال المتجانسة شبه المعادلة أدى إلى الحفاظ على الطفرات. ومع ذلك ، تم تلقيح انتشار مرض الحمى القلاعية من النوع A24 الذي يحتوي على تسلسل SGD في موقع ربط مستقبل الخلية في الماشية. ، نما الفيروس بشكل سيئ في خلايا BHK -21 وتم الحفاظ على التسلسل بثبات أثناء التكاثر في خلايا BHK -21 التي تعبر عن الأبقار V 6 إنتغرين (BHK3 V 6) ، وكذلك في الماشية الملقحة تجريبياً والاتصال .56

من سلسلتي نقل مستقلتين في الماشية ، هناك تغييرات جينية ناتجة عن المرور المتسلسل على سلالة BHK -21- المتكيفة مع الخلية (ارتباط كبريتات الهيباران) من FMDV. تم اختيار متغير من النوع البري مع طفرة في الأحماض الأمينية عند VP 1 356 سريعًا للتكاثر الفيروسي في الجسم الحي.

تشفر جينات الحذف بروتين NS غير الضروري لتكاثر الفيروس في المختبر هو أسلوب بديل لتوليد لقاحات حية موهنة. ومع ذلك ، لكي يكون فيروس الحذف مفيدًا كلقاحًا ، يجب أن يظل قادرًا على التكاثر في الحيوانات المعرضة للإصابة. ميزة هذا النهج ، مقارنة بالطريقة الكلاسيكية للتوهين ، والتي تقدم بشكل عام طفرات في عدد محدود من المواقع ، هي أن خطر الانتكاس إلى الفوعة ينخفض ​​بشكل كبير 58 ، وبروتينات NS عبارة عن حواتم قوية للخلايا التائية .59

وقد ظهر التأثير في سلالات لقاح FMDV المعدلة وراثيًا مع استبدال بعض الأحماض الأمينية في مواقع المستضدات ، مع خصائص نمو مماثلة للفيروس البري الذي ثبت أنه يحمي الحيوان تمامًا من التحدي ولكن مع القدرة على التكاثر في المختبر .60

أظهر لقاح الحمى القلاعية المزدوج الطارئ المزود بزيت مزدوج انخفاضًا في نسبة الفيروس وتظليل الفيروس ولم تظهر عليه أي علامات سريرية. كان هناك اكتشاف متسق لـ IL -6 و IL -8 و IL -12 في الحيوانات الملقحة. 61 بينما السيتوكينات الأخرى IL -1 ، IL -2 ، TNF و TGF و interferons لم يتم اكتشافها ؛ هذا يدل على أن اللقاح لم يحرض استجابة التهابية جهازية بالإضافة إلى الارتفاع الجهازي لنشاط الخلايا اللمفاوية التائية ، والذي يرتبط بالحماية قصيرة العمر ضد مرض الحمى القلاعية .61

إن IL البشري المؤتلف -2 هو محفز مناعي خلطي قوي في لقاح الحمى القلاعية في الفئران. 62 تظل الحيوانات الملقحة إيجابية التحوّل المصلي لمدة 7-8 أشهر والمستويات النظامية للسيتوكينات (IL -6 ، IL {{5 }} و IL -12) بعد التطعيم 63

كبسولات فيروسية فارغة

القفيصات الفيروسية الفارغة ، والمعروفة أيضًا باسم الجسيمات الشبيهة بالفيروسات (VLP) ، تشتمل على ذخيرة كاملة من المواقع المناعية الموجودة في الفيروسات السليمة ولكنها تفتقر إلى الأحماض النووية المعدية وتتضمن استنساخ الجينوم الفيروسي الضروري لتخليق ومعالجة وتجميع الفيروس. البروتينات الهيكلية في كبسولات فيروسية فارغة (جينات ترميز P 1-2 A و 3 Cpro ؛ الشكل 1) .64 يتم إنتاج الكبسولات الفارغة بشكل طبيعي في المختبر في مزرعة الخلية ، وهي متشابهة من الناحية المستضدية ، وهي مناعية .65

يعد استخدام لقاح الكابسيد الفارغ مرشحًا واعدًا لأنه يتحايل على استخدام الفيروس في إنتاج اللقاح ويحافظ على شكل الحواتم. تم استخدام خلايا الثدييات الخالية من المصل التي تنمو في المعلق للتعبير الجيني العابر (TGE) للقفيصات الفارغة المؤتلفة من FMDV.

لقاح الوحدة الفرعية

يحتوي لقاح الوحدة الفرعية على مستضدات فيروسية يتم حصادها عن طريق الاستخلاص الكيميائي أو التعبير الحيوي لكمية قليلة من المستضدات غير الفيروسية في وسط مزرعة .70 كشف الباحثون أن VP1 هو أحد بروتينات قفيصة FMDV ، والتي تعرضت بشكل كبير للسطح في السبعينيات. ، والتطورات الحديثة في علم الفيروسات الهيكلي 71

تم استخدام الهندسة الوراثية لتحويل أجزاء من الجينوم أو إلغاء منطقة ترميز البروتين في VP1 في المحاولات الأخيرة لإنشاء لقاحات موهنة. باستخدام الحمض النووي المؤتلف ، تم إنشاء فيروس مع موقع ربط مستقبل RGD على FMDV الذي تمت إزالته من VP1. 72 في 7- 10- من الفئران أو الخنازير التي يبلغ عمرها يومًا واحدًا ، لم يكن هذا الفيروس قادرًا على الالتصاق بالخلايا ولم يكن كذلك حمل العدوى 73

يحتوي بروتين القفيصة VP1 الخاص بـ FMDV والمنطقة الكربوكسية الطرفية لـ VP1 على حلقة G-H شديدة الاستمناع ، تتوافق مع حواتم الخلية B. أدى الببتيد المركب كيميائيًا المكون من مناطق (بقايا 141 إلى 158) من بروتين طلاء الفيروس (VP1) من النمط المصلي FMDV إلى مستويات عالية من الأجسام المضادة المعادلة والماشية المحمية ضد التلقيح داخل الأدمة للفيروس المعدي ، مما يشير إلى أهمية G - حلقة H في إحداث استجابة مناعية خلطية. يحتوي VP1 أيضًا على المنطقة شديدة التغير والموقع المناعي ؛ سيكون استغلال الموقع هو الأساس لاستمناع واسع النطاق 74

أدى دمج IFN كمساعد وراثي إلى تأخر ظهور العلامات السريرية وظهور الفيروس في الدم .75 فيروس باكول دودة القز المؤتلف ، والذي يشفر البروتياز P 1-2 A و 3 C من FMDV Asia 1 ، كان قادرًا على إنتاج أجسام مضادة محددة في الحيوانات الملقحة وحمايتها بعد التحدي بفيروس متماثل خبيث ، وتم تخفيف الأعراض السريرية وتأخيرها .64

تم تحفيز جرعة واحدة من الفيروس الغدي 5 (Ad5) المعيب الذي يحتوي على منطقة الترميز P1 و 3 C من النمط المصلي A FMDV (Ad5A24) ، مما أدى إلى تحييد الأجسام المضادة وحماية الخنازير من التحدي المتماثل. 76 ومع ذلك ، لم يتم التحقيق في التأثير على الذراع المناعية الخلوية .

لكل من فيروس اللقاح والتعبير الذي يحركه الفيروس البكتيري عن قفيصات النوع المصلي الفارغة ؛ تحتوي هذه الطريقة لإنتاج مستضد اللقاح على طفرات مصممة بشكل عقلاني ، وقد تم تعزيز الاستقرار في الخلايا حقيقية النواة.

ناقل الفيروس الغدي البشري من النوع 5 الذي يعبر عن بروتين القفيصة (P 1-2 A والبروتياز الفيروسي المتحور 3C) يمنح مناعة خلطية وخلوية ومخاطية مهمة في الفئران BALB / c. لقد أدى تطعيم خنازير غينيا إلى إنتاج أضداد معادلة كبيرة وأجسام مضادة للغلوبولين المناعي A (IgA) مع حماية 100٪ لخنازير غينيا من التحدي .78

كان الفيروس الغدي الناب المؤتلف من النوع 2 (CAV2) الذي يعبر عن بروتينات القفيصة (P1 / 3C) (الشكل 1) قادرًا على إثارة استجابة مناعية خلطية قوية في خنازير غينيا. ومع ذلك ، فإن بروتين VP1 المعبر عن الفيروس الغدي للكلاب من النوع 2 (CAV2) لم يثير استجابة مستدامة للأجسام المضادة في خنازير غينيا أو الفئران.

تم تطعيم الخنازير بلقاح Adenovirus 5 باستخدام ترميز مُحسِّن للفيروس المضخم للخلايا A 24-2 B (Ad 5- CI- A 24-2 قبل الميلاد) والذي حقق ذروة استجابة الجسم المضاد المعادلة بمقدار 7-14 dpv وأثار إنتاج IgM أعلى عند 14.7 نقطة في البوصة .14 عزز محفز الفيروس المضخم للخلايا المعدل من فعالية الناقل وتقدم لزيادة عدوى الخلايا في مزرعة الخلية ، تمت حماية المجموعة التي تلقت اللقاح تمامًا بعد التحدي.

تم تحفيز التلقيح العضلي للفئران مع المؤتلف ، وبروتين القفيصة المؤتلف لفيروس FMDV baculovirus المستنسخ مع محسن مبكر للفيروس المضخم للخلايا كمحفز (CMV-IE) ، ومنطقة ترميز المناعة للخلايا التائية مع حمات الخلايا التائية ، تم تحفيز الأجسام المضادة المعادلة بشكل فعال و جاما إنترفيرون ( IFN-) .80 P 1- 2 مناطق ترميز A و 3 C ، كان النمط المصلي A المعبر عنه في خادرة دودة القز (Bombyx mori) قادرًا على تحفيز التتر العالي من الأجسام المضادة المحددة ومحمية تمامًا ضد تحدي الفيروس المتماثل الخبيث .81

يعد نظام الببتيد متعدد المستضدات مناعيًا عاليًا مقارنة بالببتيد الخطي الأحادي لمولدات المضادات التطعيمية ضد مرض الحمى القلاعية .82 إلى موقع مستضد الخلايا التائية غير المتجانسة من البروتين غير الهيكلي 3A [3A (21-35)] ، فقد ثبت أنه يحمي الخنازير من التحدي الفيروسي. كما حسنت حاتمة الخلايا التائية الأجسام المضادة المعادلة واستجابات IFN. 84 في 70 بالمائة من الخنازير الملقحة بفيتامين B2T ، لوحظت الحماية الكاملة - لا توجد علامات سريرية للمرض - عند تحدي الفيروس في اليوم 25 بعد التحصين .84

لقاحات الحمض النووي

تم حذف موقع دخول الريبوسوم الداخلي لفيروس التهاب عضلة القلب (EMCV) وإزالة الجين L ، الذي يشارك في إغلاق الخلايا عن طريق التحلل البروتيني لـ eIF46،85 ، كما تمت إزالة EMCV IRES ، الذي ثبت أنه يزيد من كفاءة التعبير. تم إدخالها في بداية تسلسل P1. 86 ترميز لقاح الحمض النووي P 1-2 A و GM-CSF كجسم مضاد قوي ومُعادل مستحث بمواد مساعدة ، بالإضافة إلى تحريض السيتوكينات IL -8 وإنتاج IFN في الخنازير 87

لقاحات الدنا المستندة إلى جينات فيروسية صغيرة تقابل ثلاثة حواتم رئيسية للخلايا B و T-cell FMDV لـ VP1 (تسلسل الأحماض الأمينية 133-156) -3 A (تسلسل الأحماض الأمينية 11-40) و VP4 (20–34) حماية الفئران ، في حالة عدم وجود أجسام مضادة محددة وقت التحدي

إعطاء لقاح DNA عبر الأنف ؛ إن استخدام الكيتوزان كوسيلة توصيل و IL -15 كمساعد جزيئي ، قد تسبب في استجابة مناعية مخاطية وجهازية مع مناعة خلوية معززة (CMI) ، كما يتضح من المستوى الأعلى لتكاثر الخلايا التائية ، واستجابة CTL ، والتعبير عن IFN- في كل من CD4 plus و CD8 plus T. 73

الفئران التي تم تلقيحها بالبلازميد الذي يعبر عن VP1 و IL9 كمساعد وراثي مع تشغيل آلية مكافحة موت الخلايا المبرمج ، طورت استجابة خلطية قوية ومستوى عالٍ من IFN- و perforin في CD8 بالإضافة إلى الخلايا التائية ، ولكن ليس مع IL {{6} } في هذه الخلايا التائية. نظم IL -9 تعبيرات جين بيكلين ومنع موت الخلايا المبرمج للخلايا التائية .89

كشفت دراسة أخرى أن لقاح الحمض النووي VP1 الذي يعبر عن الإنترلوكين -6 و IFN- المستخدم كمواد مساعدة جزيئية قد حسن الاستجابات الخلوية الخاصة بمستضد معين. كما تسبب أيضًا في ارتفاع عيار IgG2a / IgG1 و IFN- و IL -4 ونضج الخلايا المتغصنة.

باستخدام IL {0}} كعامل مساعد وراثي في ​​ترميز لقاح الحمض النووي ، يجب أن يستحث اثنان من حلقات FMDV VP1 (بقايا الأحماض الأمينية 141-160 و200-213) التي تشتمل على حلقات متعددة على تكاثر الخلايا التائية وتحييد الجسم المضاد ضد مرض الحمى القلاعية في الخنازير باستخدام IL -2 كمساعد وراثي 91،92

تم تحصين الخنازير باستخدام ترميز البلازميد لقاح الحمض النووي DNA المضاد لـ FMDV P 1-2 A3C3D والبلازميد الذي يعبر عن الخنازير "عامل تنشيط الخلية B الذي ينتمي إلى عائلة TNF" (BAFF) عزز تنشيط نضج الخلايا البائية وتبديل فئة الغلوبولين المناعي.

يقدم لقاح الحمض النووي المتماثل مع التعزيز المنتظم استراتيجية لقاح فعالة ضد مرض الحمى القلاعية. 94 يعد دمج أهداف مستضدية مختلفة في لقاحات الحمض النووي طريقة مثالية لصنع مزيج مستضد في تركيبة لقاح واحد. أظهرت الفئران المحصنة بثلاثة بلازميدات ترميز مستضد فيروس مرض الحمى القلاعية (FMDV) وفيروس الكاذب (PRV) وفيروس حمى الخنازير الكلاسيكية (CSFV) نتائج واعدة.

أظهر التلقيح العضلي لخنازير غينيا ببلازميدات الحمض النووي التي تعبر عن FMDV الذي يحتوي على تسلسل إشارة لجين الخنازير IgG الملقح استجابة معادلة للأجسام المضادة وزيادة تكاثر خلايا الطحال بعد التعزيز ، لكن الحيوانات لم تكن محمية من التحدي الفيروسي.

لقاح الحمض النووي المشفر للخلايا التائية وحلقات الخلايا البائية من المواقع 135-167 من VP1 والموقع 1 يشتمل على 141-160 منطقة (حلقة G-H) ونهاية الكربوكسيل لـ VP1 من النوع O من FMDV قد أثارت استجابة مناعية خلوية قوية كما لوحظ باستخدام مقايسة تكاثر الخلايا التائية 97

أظهر التوصيل الأنفي للقاح DNA المشفر لقاح FMDV البروتين القفيص ، الكاتيوني PLGA (بولي (lactide-co-glycolide) كوسيلة ، و IL البقري -6 كمساعد جيني ، استجابات مناعية مخاطية وجهازية محسنة في الحيوانات الملقحة.

أظهر لقاح الدنا الذي يعبر عن بروتين القفيصة (P 1-2 A و 3 C و 3D) معزز بـ pGM-CSF ومعزز بمستضد FMDV المعطل مستوى كبير من تفاعل النمط المتقاطع في الخنازير المحصنة. تم الإبلاغ عن مستوى كبير من تفاعل النمط المصلي المتقاطع ضد A و C و Asia1 في تحييد الفيروس واختبارات ELISA .99 ومع ذلك ، فإن لقاح الحمض النووي الذي يعبر عن بروتين VP1 وينتج RNA المضاد للتفاعل يستهدف 5ʹUTR من FMDV تسبب في استجابة مناعية محددة في اللقاح. الفئران 72

لقاح الحمض النووي الذي يعبر عن VP1 مع IL -15 (مساعد جزيئي) يعزز إفراز الغشاء المخاطي IgA ومصل IgG والمناعة الخلوية (CMI) ، كما ثبت من خلال مستويات أعلى من تكاثر الخلايا التائية الخاصة بمستضد معين ، والخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا استجابة (CTL) ، والتعبير العالي عن IFN- في كل من CD4 plus و CD8 plus T-cells التي تبلغ مواقع الطحال والأغشية المخاطية .73

يتم تصنيع اللقاحات المؤتلفة عن طريق إعادة اتحاد عائلة Ig الفائقة المضيفة وقد حسنت الحواتم الفيروسية الاستجابة المناعية الخلطية والخلوية للحيوانات الملقحة. لقاحات الحمض النووي الريبي هي محولات فئة IgG قوية ، بالإضافة إلى ذلك ، لوحظ وجود عيار مرتفع من IgM أيضًا في الفئران المحصنة.

التحديات في تحريض مناعة طويلة الأمد

هناك تغيير كبير في المجموعات السكانية الفرعية للخلايا اللمفاوية التائية ، والكفاءة الوظيفية ، والوفرة بعد الإصابة بأنماط مصلية مختلفة من مرض الحمى القلاعية. 102 هناك تنظيم سفلي لخلايا boCD4 plus و boCD8 plus T حتى 48 ساعة بعد الإصابة (pi). ومع ذلك ، لوحظ التنظيم السفلي لخلايا boWC1 plus T-cells حتى 48 حصانًا مع النمط المصلي FMDV O. أظهرت الخلايا الليمفاوية من الحيوانات المحصنة تنظيمًا صعوديًا كبيرًا لخلايا boCD4 plus و boCD8 plus و boWC1 بالإضافة إلى الخلايا التائية بعد التعرض لمرض FMDV. 102

بعد الإصابة الطبيعية ، هناك زيادة كبيرة في تعبير البروتين 3A-NS في الخلايا الليمفاوية المختلفة في دورات مختلفة من المرض مما يؤدي إلى تثبيط مناعي عابر لـ CD4 plus و CD8 plus T-cells. 34

تدمير تهريب البروتين المضيف عن طريق بروتينات NS ، وخاصة 3A ، يعطل تمامًا ، لذلك لا يؤدي إلى استجابة CD8 بالإضافة إلى T-cell ، 31 بسبب ضعف CTL ، استمر الفيروس في الحيوان. تتوسط مستقبلات إنتجرين في موت الخلايا المبرمج DC المشتق من نخاع العظم ، مما يعيق المناعة الفطرية للمضيف. I استجابة IFN مثل الجين المحفز لحمض الريتينويك I (RIG-I) ، كيناز 1 المرتبط بـ TANK (TBK1) ، العامل المرتبط بمستقبلات TNF 6 (TRAF6) ، و TRAF3.103 هذا يقلل من مستوى البدء الفوري والمبكر لـ IFN منتجات الجينات المحفزة لـ IFN و mRNA .102 علاوة على ذلك ، تمنع 3Cpro النقل داخل Golgi عن طريق تحطيم البروتين المطلوب للنقل داخل Golgi.

قام Guzman et al33 و Joshi et al بتحليل الاستجابات البديلة لقتل CTL ، مثل تكاثر أو إنتاج IFN بواسطة CD8 معربًا عن الخلايا التي تم الإبلاغ عنها ولكن العديد من CD8 plus معبرة عن الخلايا الليمفاوية التي ليست CTLs التي تنتج IFN ، بما في ذلك الخلايا القاتلة الطبيعية ومجموعات فرعية من δ T -خلايا. 35–37،39،104

تم تقييم نشاط CTL بعد 10 أيام من التحدي مع الإعلان 5- FMDV -3 C مما يشير إلى زيادة ملحوظة في نشاط CTL بعد 10 أيام من التحدي مقارنة بمستويات التعزيز ، ولكن تم إرجاعه إلى مستويات خط الأساس لمدة 17 يومًا بعد ومع ذلك ، فشلت محاولة تقييم نشاط CTL في اليوم الرابع في الحصول على عدد كافٍ من الخلايا. كان هذا بسبب قلة اللمفاويات وأمراض المناعة التي يسببها مرض الحمى القلاعية. هناك ارتباط إيجابي بين الاستجابة IFN- والحماية التي يسببها اللقاح إلى جانب انخفاض في استمرار فيروس الحمى القلاعية على المدى الطويل .38

وفقًا لأوه وآخرون ، فإن 38 خلية CD4 بالإضافة إلى الخلايا التائية هي النمط الظاهري الرئيسي المضاعف والخلايا المنتجة لـ IFN.

بغض النظر عن النمط المصلي لـ FMDV ، بلغ ذروته IFN في المصل 2-3 أيام بعد الإصابة ، تتوافق اللمفاويات مع ذروة فيروسية واستجابة IFN في الدم ، وتعداد الخلايا المتغصنة بالبلازما (pDC) وتعداد IFN في المختبر pDC- انخفض بشكل عابر بعد 48 ساعة. بغض النظر عن النمط المصلي من مرض الحمى القلاعية (FMDV) المحقون أو عمر الحيوان المصاب ، لم يتم العثور على عدوى بالخلايا الليمفاوية أو pDCs .39

يتم قمع توليد IFN- من DCs المشتقة من monocyte (MoDCs) و DCs المشتقة من الجلد (DCs من الجلد) خلال المرحلة الحادة من عدوى الخنازير. يحدث هذا التأثير جنبًا إلى جنب مع زيادة التتر الفيروسي في الدم ، لكن هذه الخلايا ليست مصابة بشكل منتج. ومن المثير للاهتمام أن قدرة هذه المراكز على امتصاص الجسيمات ومعالجة المستضدات لا تتغير ، مما يدل على أن المستضدات لا تؤثر على قدرتها على امتصاص الجسيمات ومعالجة المستضدات .35

خاتمة

بناءً على الأدبيات المذكورة أعلاه وفجوة البحث ، تقدم التوصيات التالية. يجب دراسة الاستيعاب الخلوي ونمط الارتباط بالجليكوزيل وعرض المستضد وآليات الاختيار الإيجابي (تطور السلالة المسببة للأمراض) للقاحات التقليدية. CD8 بالإضافة إلى T CMI المستحث باللقاح يقوي الاستجابة المناعية طويلة العمر والحماية المتبادلة. هناك دور لمستقبلات الخلايا التائية في التسبب في المرض المناعي ، والثبات ، وإنتاج CTL ، والتي يجب دراستها على نطاق واسع. البروتين المؤتلف ، تحت استخدام مقياس التدفق الخلوي ، و ELISpot ELISA لتحليل استيعاب جسيمات اللقاح ، وعرض المستضد ، وتقييم الخلايا العارضة للمستضد.

يجب تطوير أدوات جديدة قائمة على الويب تُظهر آثار السلاسل الجانبية على حاتمة الخلية B أو T. يجب البحث عن استخدام عدوى النموذج الحيواني واختبارات تطوير اللقاح وفعاليته بوضوح نظرًا لوجود اختلاف ملحوظ في مستقبلات الإنتجرين في حيوانات المختبر ، كما توجد الخنازير والمجترات. التقدير الحسابي للحلقات CTL على مستوى الجينوم من خلال دمج أدوات تخمين الحاتمة في حساب عدد كبير من التسلسلات الفيروسية والتقييم اللاحق في الجسم الحي له ميزة كبيرة لإنتاج لقاحات ذات حماية طويلة الأمد وقدرة على الحماية المتبادلة.

الاختصارات

3 أ ، بروتين غير هيكلي ؛ Ad5 ، Adenovirus 5 Vector ؛ 3Cpro ، 3C بروتياز (بروتين غير هيكلي) ؛ BEI ، ثنائي Ethylenemines ؛ خلية BHK ، خلية الكلى للرضع ؛ CD4 plus ، عامل التمايز العنقودي أربعة موجب ؛ CD8 plus ، عامل التمايز العنقودي ثمانية موجب ؛ [كدنا] ، DNA مكمل ؛ CTL ، الخلايا التائية السامة للخلايا ؛ DC ، خلية شجيري ؛ ELISA ، مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم ؛ مرض الحمى القلاعية ومرض الحمى القلاعية. مرض الحمى القلاعية ، فيروس مرض الحمى القلاعية ؛ GM-CSF ، عامل تحفيز الخلايا المحببة و Monocytes Colony ؛ IFN- ، انترفيرون ألفا ؛ IFN- ، انترفيرون جاما ؛ Ig ، الغلوبولين المناعي. IL ، انترلوكين ؛ LTR ، تكرار المحطة الطويلة ؛ الخلايا القاتلة الطبيعية ، الخلايا القاتلة الطبيعية ؛ بروتين NS ، بروتين غير إنشائي ؛ P 1-2 أ ، جين لسلائف البروتين البنيوي ؛ P 1-2 A3C3D ، سلائف البروتين الهيكلي الفيروسي P1-2A والبروتينات غير البنيوية 3C و 3 D ؛ PBMC ، أحادي النواة في الدم المحيطي ؛ RT- PCR ، تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي ؛ SAT ، نوع جنوب إفريقيا ؛ TGE ، التعبير الجيني العابر ؛ TGF ، عامل نمو الورم. عامل نخر الورم ؛ الخلايا التائية ، الخلايا التائية المساعدة ؛ VP1 ، بروتين فيروسي 1 ؛ δ الخلايا التائية ، خلايا جاما دلتا تي.

بيان مشاركة البيانات

البيانات المستخدمة في هذه المراجعة ثانوية وتم تضمينها في المقالة.

إعتراف

أنا ممتن جدًا لمكتب نائب رئيس البحوث وخدمة المجتمع بجامعة جوندار لتوفير المواد والدعم المالي. كما أشكر كلية الطب البيطري وعلوم الحيوان ، جامعة جوندر ، على دعم المرفق الإضافي.

التمويل

المؤلف يشكر جامعة جوندار ، مكتب نائب الرئيس للبحوث وخدمة المجتمع.

إفشاء

يعلن المؤلف أنه لا يوجد تضارب في المصالح في هذا العمل.

مراجع

1. كيتشنج ف ، هاموند ج ، جيجو إم ، وآخرون. المكافحة العالمية للحمى القلاعية - هل هي خيار؟ مصل. 2007 ؛ 25 (30): 5660-5664. دوى: 10.1016 / ي. لقاح 2006.10.052

2. Raza S ، Siddique K ، Rabbani M ، et al. كشف التسبب الميكروبي في تحليل السيليكو لأربعة بروتينات هيكلية للأنماط المصلية للفيروس القلاعي عن حواتم خلية B و T مهمة. ميكروب الممرض. 2019 ؛ 128 (أغسطس 2018): 254-262. دوى: 10.1016 / j.micpath.2019.01.007

3. Arzt J ، Belsham GJ. انتقال مرض الحمى القلاعية من الأبقار الحاملة المصابة بشكل مستمر إلى الماشية الساذجة عن طريق نقل السائل الفموي البلعومي. عالم بيطري. 2018 ؛ 3: 318. دوى: 10.1128 / mSphere. 00365-318

4. Arzt J ، Pacheco JM ، Stenfeldt C. التسبب في الإصابة بفيروس مرض الحمى القلاعية الخبيث والمضعف في الماشية. عالم بيطري. 2017 ؛ 14:89. دوى: 10.1186 / ث 12985-017-0758-759

5. صبحي نم ، بيومي واي إتش ، مور إس كي ، الزهار هاي ، جويال إس إم. تفشي مرض الحمى القلاعية في مصر: علم الأوبئة الجزيئية ، والتطور ، وأهمية المؤشرات الحيوية للقلب. Int J Vet Sci Med. 2018 ؛ 6 (1): 22-30. دوى: 10.1016 / ي. فقط 2018.02.001

6. سينثيلكوماران سي ، يانغ إم ، بيتنر إتش ، وآخرون. الكشف عن الجينوم والمستضد والأجسام المضادة في سوائل الفم من الخنازير المصابة بفيروس مرض الحمى القلاعية. هل يمكن لـ J Vet Res. 2017 ؛ 81: 82-90.

7. Palinski RM ، Bertram MR. تسلسل الجينوم الأول لفيروس الحمى القلاعية من النمط المصلي O سلالة Ind2001e من جنوب فيتنام. إعلان موارد ميكروبيول. 2019 ؛ 8: e01424–18. دوى: 10.1128 / م. 01424-1418

8. Pulido MR ، و Sobrino F ، و Borrego B ، وآخرون. الحمض النووي الريبي لفيروس الحمى القلاعية الموهن الذي يحمل حذفًا في المنطقة غير المشفرة 3 يمكن أن يثير المناعة في الخنازير. ياء فيرول. 2009 ؛ 83 (8): 3475–85. دوى: 10.1128 / JVI. 01836-08

9. Saravanan P، Iqbal Z، Selvaraj DPR، Aparna M، Umapathi V. مقارنة بين طرق الاستخراج الكيميائية لتحديد محتوى 146S في لقاح مرض الحمى القلاعية بالزيت. J أبل ميكروبيول. 2019 ؛ 1 (Rueckert 1985): 1–9. دوى: 10.1111 / مربى .14465

10. جمال SM ، بيلشام جي. مرض الحمى القلاعية: الماضي والحاضر والمستقبل. بيطري الدقة. 2013 ؛ 44 (1): 1-14. دوى: 10.1186 / 1297-9716- 44-116

11. Robinson L ، Knight-Jones TJ ، Charleston B ، et al. تحديث أبحاث مرض الحمى القلاعية العالمية وتحليل الثغرات: 7 - مسببات الأمراض والبيولوجيا الجزيئية. Transbound Emerg Dis. 2016 ؛ 63 (1): 63-71. دوى: 10.1111 / tbed.12520

12. Sreenivasa BP، Mohapatra JK، Pauszek SJ، et al. الفيروس الغدي البشري المؤتلف -5 الذي يعبر عن بروتينات قفيصة لسلالات اللقاح الهندي لفيروس مرض الحمى القلاعية يثير استجابة فعالة من الجسم المضاد في الماشية. طبيب بيطري ميكروبيول. 2017 ؛ 203: 196 - 201. دوى: 10.1016 / j.vetmic.2017.03.019

13. نيلان جي جي ، شوتا سي ، باريرا جي ، وآخرون. فعالية الأنماط المصلية لفيروس الحمى القلاعية الموجه بالفيروس الغدي. لقاح وحدة فرعية في الماشية باستخدام نموذج انتقال الاتصال المباشر. BMC البيطري Res. 2018 ؛ 14 (1): 1–9. دوى: 10.1186 / ثانية 12917-018- 1582-1

14. بينا لام ، بيريس إم ، كوستر إم ، وآخرون. إن توصيل مستضد الوحدة الفرعية القفيص الفارغ مع البروتين غير البنيوي 2B لفيروس الحمى القلاعية يحسن حماية الخنازير. مصل. 2008 ؛ 26 (45): 5689-5699. دوى: 10.1016 / j.vaccine.2008.08.022

15. Barteling SJ، Cassim NI. تثبيط سريع (وآمن) لفيروس الحمى القلاعية والفيروسات المعوية عن طريق مزيج من ثنائي إيثيلين أمين والفورمالدهيد. ديف بيول (بازل). 2004 ؛ 119: 449-455

16. Rweyemamu MM، Umehara O، Giorgi W، Medeiros R، Neto DL، Baltazar M. تأثير الفورمالديهايد وثنائي الإيثيلين أمين (BEI) على سلامة قفيصة مرض الحمى القلاعية. Rev Sci Tech. 1989 ؛ 8 (3): 747-764. دوى: 10.20506 / rst.8.3.425

17. باتش جي آر ، كيني إم ، باتشيكو جي إم ، غروبمان إم جي ، جولدي دبليو تي. توصيف وظيفة الخلايا الليمفاوية التائية السامة للخلايا بعد الإصابة بفيروس مرض الحمى القلاعية والتحصين. المناعية الفيروسية. 2013 ؛ 26 (4): 239-249. دوى: 10.1089 / vim.2013.0011

18. Rodriguez-Calvo T، Ojosnegros S، Sanz-Ramos M، Garcia-Arriaza J، Escarmis C، Domingo E، Sevilla N. تصميم لقاح جديد قائم على الجينومات المعيبة التي تجمع بين سمات اللقاحات الموهنة والمعطلة. بلوس واحد. 2010 ؛ 5 (4): 1-11. دوى: 10.1371 / journal.pone.0010414

19. نونيز جي ، بارانوفسكي إي ، مولينا إن وآخرون. يمكن أن يؤدي استبدال الأحماض في البروتين غير البنيوي 3 أ إلى تكيف فيروس مرض الحمى القلاعية مع خنزير غينيا. ياء فيرول. 2001. doi: 10.1128 / JVI.75.8. 3977-3983. 2001

20. بورمان أ ، كلارك إس ، أبريسيا نجا ، وآخرون. خصوصية الحلقة VP1 GH لفيروس مرض الحمى القلاعية لـ v 6 من إنتاج الإنتغرينات. ياء فيرول. 2006 ؛ 80 (19): 9798-9810. دوى: 10.1128 / JVI. 00577-06

21. Dicara D ، Burman A ، Clark S ، وآخرون. يشكل فيروس مرض الحمى القلاعية مركبًا شديد الاستقرار ومقاوم للـ EDTA مع مستقبله الرئيسي ، Integin v 6: الآثار المترتبة على العدوى. ياء فيرول. 2008 ؛ 82 (3): 1537-1546. دوى: 10.1128 / JVI. 01480-07

22. Domingo E، Sheldon J، Perales C، et al. تطور أشباه الأنواع الفيروسية. ميكروبيول مول بيول ريف .2012 ؛ 76 (2): 159-216. دوى: 10.1128 / MMBR. 05023-11

23. Mckenna TS، Lubroth J، Rieder E، et al. فيروس الحمى القلاعية (FMD) المحذوف من الموقع المرتبط بالمستقبلات يحمي الماشية من مرض الحمى القلاعية. ياء فيرول. 1995 ؛ 69 (9): 5787-5790. دوى: 10.1128 / jvi.69.9. 5787-5790. 1995

24. Dimarchi R، Brooke G، Gale C، Cracknell V، Doel T، Mowat N. حماية الماشية من مرض الحمى القلاعية بواسطة الببتيد الاصطناعي. علوم. 1986 ؛ 232: 639-641. دوى: 10.1126 / العلوم .3008333

25. Gómez N ، Salinas J ، Escribano JM ، et al. الاستجابة المناعية الوقائية لفيروس مرض الحمى القلاعية مع VP1 المعبر عنها في النباتات المعدلة وراثيا الاستجابة المناعية الوقائية لفيروس مرض الحمى القلاعية مع VP1 المعبر عنها في النباتات المعدلة وراثيا. ياء فيرول. 1998 ؛ 72: 2-5.

For more information:1950477648nn@gmail.com