كيف يمنع Cistanche أمراض الكبد

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

الملخص

للبحث في التوصيفات الأولية ، ومضادات الأكسدة والنشاط الوقائي للكبد من السكريات منCistanche Deserticola (CDPs)، تم الحصول على ثلاثة كسور عديد السكاريد ، CDP-A ، CDP-B ، و CDP-C ، عن طريق الترشيح الغشائي المتتالي (الترشيح الدقيق ، الترشيح الفائق ، الترشيح النانوي). تم تحليل الأوزان الجزيئية والتركيبات أحادية السكاريد والنقاء وأطياف الأشعة تحت الحمراء للكسور الثلاثة. أظهرت النتائج أن CDP-C يحتوي على نسبة أعلى من حمض الجالاكتورونيك (GalUA) من CDP-B و CDP-A. تم تحليل الأنشطة المضادة للأكسدة أيضًا وأظهرت النتائج أن CDP-C يمتلك أعلى نشاط. وهكذا ، تمت دراسة النشاط الوقائي للكبد لـ CDP-C بشكل أكبر. في الأبحاث المختبرية ، عزز CDP-C جدوى خلايا HepG2. في الأبحاث المجراة ، خفف CDP-C التعديلات التي يسببها الكحول ، بما في ذلك الفهارس المصلية (alanine transaminase ، حامض الفوسفاتيز ، -Glutamyl transpeptidase ، و triglyceride) والمؤشرات الكبدية (superoxide disutase ، malondialdehyde ، glutathione S-transferase ، and triglyceride) في النموذج الحيوانات. تم أيضًا تخفيف التنكس الدهني الحويصلي البارز والنخر الخفيف في الأنسجة الكبدية للحيوانات النموذجية عن طريق إدارة CDP-C. أشارت هذه النتائج إلى أن CDP-C يمتلك نشاطًا كبدًا ضد الإصابة الكبدية المزمنة التي يسببها الكحول. قد تكون الآلية الأساسية هي أن CDP-C يمكنه تقليل محتويات MDA و TG ، وتعديل أنشطة الإنزيم النسبي. قد ترتبط هذه الخاصية بـ GalUA في CDP-C.

الكلمة الرئيسية: Cistanche deserticola؛ السكريات. التوصيفات الأولية مضادات الأكسدة. نشاط وقائي للكبد.

cistancheثنائياتالصحراء

1 المقدمة

Cistanche هو طفيلي معمر وينتشر بشكل رئيسي في المنطقة الصحراوية في شمال غرب الصين [1 ، 2]. تم تسجيل جذع أنواع Cistanche (Orobanchaceae) لأول مرة في Shen Nong's Chinese Materia Medica. لطالما استُخدم الكستانش كدواء عشبي تقليدي لعلاج قصور الكلى والعجز الجنسي وإمساك الشيخوخة ووجع وضعف الخصر والركبتين ونقص الدم [3 ، 4]. كشفت الأبحاث الدوائية أن Cistanche له نشاط مضاد للالتهابات [5 ، 6] ، نشاط مضاد لهشاشة العظام [7 ، 8] ، تأثير مهدئ [9] ، نشاط مضاد للتعب [10] ، تأثير اعصاب [11]. إلى جانب ذلك ، فإن السكريات من Cistanche deserticola (CDPs) لها تأثيرات مضادة لفرط سكر الدم ونقص شحميات الدم [12] ، والنشاط المناعي [13] ، وتأثير الانتشار على الخلايا الليمفاوية [14].

تسبب الكحول ، وهو مشروب مستهلك عالميًا ، ومضافات غذائية في حدوث ما يقرب من 2.5 مليون حالة وفاة كل عام في العالم [15 ، 16]. ترتبط هذه الوفيات بشكل رئيسي بأمراض الكبد الناجمة عن تعاطي الكحول [17 ، 18]. مرض الكبد الناجم عن الكحول هو تطور مزمن معقد متعدد الخطوات ، يتطور عادة من التنكس الدهني الكحولي إلى التهاب الكبد الكحولي وأخيراً إلى تليف الكبد الكحولي [19]. وبالتالي ، فإن تحديد المنتجات الطبيعية النشطة لمستهلكي الكحول لمنع أو إبطاء تقدم إصابة الكبد الكحولي في المرحلة المبكرة هو استراتيجية إدارة مفيدة.

Cistanche deserticola YC Ma و Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight نوعان من الأدوية المسجلة في دستور الأدوية الصيني [3]. لقد أوضحت العديد من الأوراق الأنشطة الوقائية للكبد لنبات C. tubulosa [20-24] و C. Deserticola [25 ، 26]. لكن هذه الأبحاث الوقائية للكبد تهدف دائمًا إلى إصابة الكبد الحادة التي يسببها رابع كلوريد الكربون (CCl4) أو D-galactosamine و lipopolysaccharide ، ولكنها لا تهتم بإصابة الكبد المزمنة المرتبطة بتعاطي الكحول. بالإضافة إلى ذلك ، ركزت هذه التقارير بشكل أساسي على آلية جليكوسيدات الفينيثانويد (PhGs) بدلاً من CDPs. لذلك ، في هذه الدراسة ، تم فحص التوصيفات الأولية لـ CDPs وأنشطتها المضادة للأكسدة (في المختبر). علاوة على ذلك ، تم إنشاء نموذج إصابة الكبد لفئران ICR التي يسببها نبيذ الروح الأبيض لفحص النشاط الوقائي للكبد لـ CDPs ضد إصابة الكبد المزمنة التي يسببها الكحول.

cistanche ومستخلص تونغكات علي هيربا

2. المواد والأساليب

2.1. المواد

تم جمع سيقان C.وحددها البروفيسور Xiaodong Wang (قسم هندسة التكرير الحيوي ، معهد هندسة العمليات ، الأكاديمية الصينية للعلوم ، بكين ، جمهورية الصين الشعبية).

ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) ، 2 ، 2- azino-bis (3- ethylbenzthiazoline -6- حمض السلفونيك) (ABTS) ، 3- (4 ، 5- ثنائي ميثيلثيازول { {8}} yl) -2 ، 5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) ، و 1 ، 1- diphenyl -2- picryl-hydrazyl (DPPH) تم شراؤها من شركة Sigma Chemical Co. (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) ومصل بقري الجنين (FBS) من Invitrogen، Inc. تم شراء Er Guo-tou white Spirit من Beijing Red Star Co.، LTD. تم شراء Bicyclol من Beijing Union Pharmaceutical Factory. تم تحضير المحاليل المائية بمياه نقية للغاية من نظام تنقية المياه Milli-Q (Millipore ، Bedford ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية). جميع الكواشف الأخرى كانت من الصف التحليلية.

2.2. استخراج CDPs والترشيح الجزئي

تم تحضير CDPs الخام وفقًا للطريقة المبلغ عنها مسبقًا لمجموعتنا [27] مع تعديل طفيف. باختصار ، تم استخلاص مسحوق (40 شبكة) من C. تم فصل السكريات المتعددة من المستخلص براتنج كبير مسام (HPD 300). تم تركيز محلول عديد السكاريد تحت ضغط منخفض ، ونزع البروتين باستخدام طريقة Sevag [28] ، وتم تجفيف المنتج بالتجميد وكان يسمى CDPs الخام.

ثم تمت إذابة 5 0 جم من CDPs الخام في 2.5 لتر من الماء عالي النقاوة وفصلها على التوالي باستخدام الترشيح الدقيق ، والترشيح الفائق ، والترشيح النانوي (كان الحد الاسمي للوزن الجزيئي 300 كيلو دالتون ، و 10 كيلو دالتون ، و 200 دا. غشاء فعال كانت المساحة 0.625 م 2). تم تجميد محلول الترشيح الدقيق المحتفظ به وتسمى CDP-A. تم ترشيح محلول الترشيح الدقيق المتخلل بالترشيح الفائق ، بينما تم تجميد المحلول المحتفظ به وتسميته CDP-B. تم ترشيح المحلول المتخلل للترشيح الفائق باستخدام ترشيح نانوي ، وتم تجميد المحلول المحتفظ به وتسميته باسم CDP-C.

2.3 التوصيفات الأولية لل CDPs

تم تقييم الأحجام الجزيئية لـ CDPs وفقًا للطريقة التي تم الإبلاغ عنها مسبقًا لـمجموعتنا [29]. تم تحليل تركيبات السكاريد الأحادي باستخدام الطريقة الموصوفة بواسطة P. Zhang et al [30]. تم تحديد النقاء وفقًا لطريقة حمض الفينول والكبريتيك [31]. تم تحديد محتويات البروتين باستخدام الطريقة التي ذكرها برادفورد وماجا كوزارسكي [32 ، 33]. تم التقاط أطياف FT-IR لـ CDPs باستخدام مطياف فورييه للأشعة تحت الحمراء (FT / IR -660 Plus ، JASCO) في نطاق 400 ~ 4000 سم -1.

2.4 أنشطة مضادات الأكسدة

تم تقييم تأثيرات الكسح لـ CDPs على جذور الهيدروكسيل وأنيون الأكسيد الفائق و DPPH و ABTS وفقًا للطرق التي وصفها Sun [34] و Wang [35] و Yap [36] و Fatiha [37] على التوالي.

عدم القدرة على الانتصابإلى عن علىالكلى

2.5 النشاط الوقائي للكبد لـ CDP-C في المختبر

على أساس نتائج مقايسة مضادات الأكسدة ، تم اختيار CDP-C لدراسة نشاط الكبد. تمت زراعة خلايا HepG2 (التي تم شراؤها من المركز الصيني لمجموعة ثقافة النوع ، بكين ، الصين) في DMEM التي تحتوي على FBS المعطل بالحرارة (1 0 بالمائة) ، الستربتومايسين (0. 1 ميكروغرام / مل) ، البنسلين (1 0 0 وحدة دولية / مل) ، وحمض أميني غير أساسي. تم تحضين الخلايا في جو رطب بنسبة 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة ، وتم حصادها في مرحلة النمو الأسي ، وزرعها في 96- ألواح بئر (4 × 104 خلية لكل بئر ، 1 00 ميكرولتر) ، و حضنت لمدة 24 ساعة. عولجت خلايا المجموعة السلبية بالكحول (التركيز النهائي كان 3.5٪ ، حجم / حجم) بينما عولجت المجموعة الساذجة بالماء. عولجت خلايا المجموعة الإيجابية بالكحول والبيسيكلول (كان التركيز النهائي 2 00 ميكروغرام / مل). عولجت خلايا مجموعات الاختبار الأربع بالكحول و CDP-C (كان التركيز النهائي لـ CDP-C 0.11 و 0.3333 و 1.00 و 3.00 مجم / مل). تمت زراعة جميع الخلايا لمدة 48 ساعة أخرى.

تم تحديد قابلية خلايا HepG2 للحياة من خلال طريقة اختبار MTT التي ذكرها J. Tong et al [38] مع تعديل طفيف. باختصار ، تمت إضافة MTT (5 مجم / مل ، 20 ميكرولتر لكل بئر) إلى أطباق البئر المصنفة بالخلايا 96- ، وتم تحضين الخلايا لمدة 4 ساعات. تمت إزالة المحاليل وإضافة DMSO (150 ميكرولتر / بئر). تم قياس امتصاص كل بئر عند 492 نانومتر باستخدام قارئ لوحة البئر 96- (Thermo Scientific ، America). تم حساب صلاحية الخلية باستخدام الصيغة التالية:

قابلية بقاء الخلية (النسبة المئوية)=(عينة- Ablank) × 100 / (ساذج- Ablank)

حيث كانت العينة ممتصة للمجموعة التجريبية ؛ كان من السذاجة امتصاص المجموعة الضابطة بدون عينة ؛ كان الفراغ هو امتصاص وسط المزرعة بدون أي عينة وخلية بذر.

2.6. النشاط الوقائي للكبد لـ CDP-C في الجسم الحي

2.6.1. الحيوانات

تم استخدام إناث فئران ICR البالغة (22-25 جم ، تم شراؤها من شركة Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. ، كان رقم ترخيص الحيوان 11400700128). تم إيواء الحيوانات في غرفة خاضعة للتحكم بيئيًا مع تغذية وماء للشهرة الإعلانية (كانت الرطوبة النسبية 40-60 في المائة ، 22-26 درجة) ، وكانت تهوية الهواء 12-18 مرة / ساعة ، وحالة إشعاع خفيف كانت دورة فاتحة / مظلمة مدتها 12 ساعة من 150-300 لوكس. تم تأقلم الفئران مع ظروف غرفة الحيوانات لمدة 7 أيام قبل التجارب. تم إجراء جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات في جميع التجارب بما يتفق بدقة مع قواعد استخدام حيوانات المختبر كما تم تبنيها وإصدارها من قبل المعاهد الوطنية للصحة بالولايات المتحدة.

2.6.2. تصميم تجريبي

تم تقسيم الفئران ICR بشكل عشوائي إلى ست مجموعات (مجموعة ساذجة ، مجموعة تحكم سلبية ، مجموعة تحكم إيجابية ، وثلاث مجموعات اختبار) مع 10 حيوانات في كل مجموعة. تم إعطاء المجموعة الساذجة عن طريق الفم بالماء المقطر. تم إعطاء مجموعة التحكم السلبية عن طريق الفم بالكحول (روح Er Guo-tou البيضاء ، 56 بالمائة ، 6 مل / كجم). تم إعطاء المجموعة الضابطة الإيجابية عن طريق الفم مع bicyclol (300 مجم / كجم) وبعد 5 ساعات مع الكحول. تم إعطاء ثلاث مجموعات اختبار عن طريق الفم باستخدام CDP-C بجرعة 200 ، 600 ، 1800 مجم / كجم ، وبعد 5 ساعات مع الكحول. تم إعطاء جميع الفئران لمدة 31 يومًا متتاليًا.

2.6.3. تحديد الفهارس المصلية

بعد حوالي 4 ساعات من العلاج الكحولي الأخير ، تم جمع الدم من محجر العين وطرده عند 3000 جم لمدة 15 دقيقة. بعد فصل المصل ، تم تحديد أنشطة إنزيم ترانس أميناز ألانين (ALT) ، حمض الفوسفاتيز (ACP) ، -جلوتاميل ترانسبيبتيداز (-GTP) ، والدهون الثلاثية (TG) باستخدام أدوات التشخيص.
2.6.4. تحديد المؤشرات الكبدية

بعد جمع الدم ، تم إعدام جميع الفئران. تم استئصال كبد كل فأر على الفور وغسله بمحلول ملحي فسيولوجي. تم فصل قطعة من نسيج الكبد عن الفص الأيسر. ثم تم فرم الأنسجة وتجانسها بمحلول مائي من كلوريد البوتاسيوم (1.15 بالمائة ، وزن / حجم) في خالط زجاجي (بوتر إلفيجم تفلون) لمدة 60 ثانية لعمل تجانس الكبد (10 بالمائة وزن / حجم). تم قياس أنشطة إنزيم ديسموتاز الفائق (SOD) ، مالونديالديهايد (MDA) ، الجلوتاثيون S-ترانسفيراز (GST) وكذلك محتويات الدهون الثلاثية (TG) باستخدام مجموعات التشخيص.

2.6.5. دراسات الأنسجة

تم إصلاح الجزء المتبقي من الكبد في مثبت بوين لمدة 24 ساعة ، بعد التجفيف باستخدام محلول إيثانول مائي (50-100 في المائة ، حجم / حجم) ، تم تطهير أنسجة الكبد في الزيلين وتضمينها في البارافين. كانت المقاطع الكبدية (5 مم) ملطخة بشب الهيماتوكسيلين ويوزين (HE). تم التقاط صور لأقسام الكبد والتغيرات النسيجية المرضية بواسطة مجهر ضوئي (Nikon-DS-L 1-5 M).

2.7. تحليل احصائي

تم التعبير عن البيانات كوسائل ± الخطأ المعياري للمتوسط ​​(SEM) من ثلاثة (تحليل التركيب الكيميائي ومقايسة مضادات الأكسدة) ، أو خمسة (قابلية الخلية للبقاء) ، أو عشرة (بحث في الجسم الحي) تجارب مستقلة. تم تحليل الدلالات الإحصائية للاختلافات بين المجموعات عن طريق تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) متبوعًا باختبار النطاق المتعدد للطالب Student-Newman-Keuls باستخدام برنامج SPSS 19. {4}}. في جميع التحليلات ، ص<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. النتائج والمناقشة

3.1. توصيفات CDPs

كما هو مبين في الشكل 1 أ ، يحتوي CDP-A على مجموعتين ، الأوزان الجزيئية 4000 كيلو دالتون و 3946 كيلو دالتون. الأوزان الجزيئية لـ CDP-B و CDP-C هي 2400 كيلو دالتون و 1300 كيلو دالتون ، التراكيب أحادية السكاريد موضحة في الشكل 1 ب. يحتوي CDP-A و CDP-B و CDP-C على ستة سكريات أحادية أساسية بنسب مختلفة ، بما في ذلك مانوز (مان) ورامنوز (Rha) وحمض الجالاكتورونيك (GalUA) والجلوكوز (Glc) والجالاكتوز (غال) والأرابينوز ( آرا). بالإضافة إلى ستة السكريات الأحادية المذكورة أعلاه ، يظهر الزيلوز (Xyl) أيضًا في CDP-C. بالإضافة إلى ذلك ، يحتوي CDP-C على نسبة أكبر من GalUA من الكسور الأخرى.

يتم عرض النقاوة ومحتويات البروتين في CDPs في الجدول 1. يوضح الجدول 1 أن CDP-A لديه أعلى نقاء ، وهو 75.57 بالمائة ، في حين أن درجة نقاء CDP-B و CDP-C تبلغ 74.72 بالمائة و 68.92 بالمائة على التوالي. محتويات البروتين في CDP-A و CDP-B و CDP-C هي 1.27 بالمائة و 1.24 بالمائة و 1.05 بالمائة على التوالي.

الجدول 1.النقاوة ومحتويات البروتين في CDPs. البيانات هي الوسيلة ± SEM لثلاث مكررات.

تُستخدم أطياف الكربوهيدرات FT-IR لتحديد سماتها الهيكلية وتُستخدم عادةً للتحليل النوعي للمجموعات الوظيفية العضوية ، خاصةً بالنسبة إلى OH و CO و C=O [39]. يتم عرض أطياف FT-IR لـ CDPs في الشكل 1C. يُظهر كل طيف ذروة تمدد قوية وواسعة حوالي 3293 سم -1 لاهتزاز تمدد OH بالإضافة إلى ذروة امتصاص ضعيفة عند 2939 سم -1 لاهتزاز تمدد CH. ينتج نطاق الامتصاص عند 1650 سم -1 عن اهتزاز التمدد غير المتماثل C=O. ينسب نطاق الامتصاص الواسع عند 1418 سم -1 إلى تشوه اهتزاز رابطة CH. يحتوي كل عديد السكاريد على نطاق محدد في منطقة 1000-1200 سم -1 ، والتي يهيمن عليها اهتزاز حلقية متداخلة مع اهتزاز ممتد للمجموعات الجانبية (C-OH) و (COC) اهتزاز النطاق الجليكوسيدي. يشير الامتصاص عند 1036 سم -1 إلى شكل بيرانوز من السكر. تشير الامتصاصية عند حوالي 829 سم -1 إلى ارتباط -جليكوزيدات في التركيب الجزيئي لـ CDPs. كما هو موضح في الشكل 1 ج ، فإن نطاق امتصاص CDP-C عند 1650 سم -1 أقوى من CDP-A و CDP-B ، مما يعني أن محتوى C=O في CDP-C أكثر من تلك الموجودة في CDP-A و CDP-B. تتوافق هذه النتيجة مع نتائج الشكل 1 أ ، الذي يكشف أن نسبة GalUA في CDP-C أكبر من تلك الموجودة في CDP-A و CDP-B.

3.2 الأنشطة المضادة للأكسدة من CDPs

3.2.1. فحص جذري الهيدروكسيل

من بين أنواع الأكسجين التفاعلية ، يعتبر شق الهيدروكسيل هو الأكثر تفاعلًا ويحدث ضررًا شديدًا للجزيئات الحيوية المجاورة [40]. بالنسبة لجذر الهيدروكسيل ، هناك نوعان من آليات مضادات الأكسدة: أحدهما يقوم بكسح جذور الهيدروكسيل المتولدة بالفعل ، والآخر يقوم بقمع توليد جذور الهيدروكسيل. بالنسبة للأخير ، يتم إنشاء شق الهيدروكسيل عن طريق تفاعل معقد Fe (II) مع بيروكسيد الهيدروجين. قد ترتبط الأنشطة المضادة للأكسدة لـ CDPs بالأيونات المعدنية ، التي لا تتفاعل مع H2O2 وتنتج جذور الهيدروكسيل ولكنها تتخلب مع CDPs وتشكل المركب المعدني. لا يمكن للمركب المعدني أن يتفاعل أكثر مع H2O2 لإعطاء شق الهيدروكسيل [41-43]. لذلك ، تُظهر CDPs تأثيرات إزالة جذور الهيدروكسيل.

يوضح الشكل 2 أ قدرات الكسح لـ CDPs على جذور الهيدروكسيل بطريقة تعتمد على التركيز. معدل الكسح لـ CDP-A و CDP-B و CDP-C هو 29.56 بالمائة و 33.44 بالمائة و 38.22 بالمائة على التوالي. يُظهر CDP-C نشاطًا أعلى في مسح جذور الهيدروكسيل. بالنظر إلى أن CDP-C يحتوي على نسبة أعلى من GalUA مقارنة بـ CDP-A و CDP-B ، فإن مضادات الأكسدة الخاصة بـ CDPs قد لا تتعلق فقط بخاصية ربط أيونات المعادن ، ولكن أيضًا بمحتويات GalUA و Ara و Gal [{{15 }}].

3.2.2. الفحص الجذري لأكسيد الأكسيد الفائق

جذري الأنيون الفائق هو نوع سام ينتج عن العديد من التفاعلات البيولوجية والكيميائية الضوئية ، وبالتالي يتسبب في تلف الأنسجة [47]. على الرغم من أن أنيون الأكسيد الفائق هو عامل مؤكسد ضعيف نسبيًا ، إلا أنه يلعب دورًا مهمًا في تكوين أنواع مؤكسدة تفاعلية أقوى أخرى ، مثل الأكسجين المفرد وجذر الهيدروكسيل [48]. يوضح الشكل 2 ب العلاقة بين التركيزات وقدرات الكسح لـ CDPs على جذور الأنيون الفائق. مع زيادة التركيز ، يُظهر CDP-C قدرة تنظيف أعلى من CDP-B و CDP-A.

3.2.3. فحص جذري DPPH

DPPH ، أحد المركبات المستقرة التي تركز على النيتروجين والتي تمتلك جذرًا خالٍ من البروتون مع امتصاص مميز عند 517 نانومتر ، ينخفض ​​بشكل كبير عند التعرض لكسامات جذور البروتونات ، لذلك ، يستخدم على نطاق واسع لتقدير أنشطة إزالة الجذور الحرة لمضادات الأكسدة. من المقبول جيدًا أن الجذور الحرة DPPH التي يتم تنظيفها بواسطة مضادات الأكسدة ترجع إلى قدراتها على التبرع بالهيدروجين. تقوم مضادات الأكسدة بنقل الإلكترونات أو ذرات الهيدروجين إلى جذر DPPH وتشكل DPPH-H ، وهو تكوين غير جذري [49].

تم اختبار تأثيرات الكسح الكلية لـ DPPH لجميع العينات وتظهر النتائج في الشكل 2 ج. تعرض قدرات الكسح لـ CDPs على جذور DPPH بطريقة تعتمد على التركيز. مع زيادة التركيز من 1. 0 إلى 5. 0 مجم / مل ، زادت قدرات الكسح لـ CDP-C من 52.5 بالمائة إلى 58.7 بالمائة ، أعلى من CDP-B (من 34.2 بالمائة إلى 56.8 بالمائة في المئة) و ​​CDP-A (من 12.5 في المئة إلى 52.8 في المئة). قد يترافق تأثير مسح DPPH لـ CDP-C مع مجموعات الكربونيل في GalUA.

3.2.4. فحص ABTS الجذري

غالبًا ما يتم استخدام اختبار ABTS الجذري لقياس القوة الكلية لمضادات الأكسدة لمضادات الأكسدة القوية لعينات الاختبار [5 0]. تظهر تأثيرات الكسح ABTS لجميع العينات في الشكل 2 د. تُظهر قدرات الكسح الخاصة بـ CDPs على جذور ABTS طريقة تعتمد على الجرعة. تبلغ نسبة IC50 لـ CDP-A و CDP-B و CDP-C حوالي 4.0 مجم / مل و 2.5 مجم / مل و 1.2 مجم / مل على التوالي. تشير النتائج إلى أن CDPs تمتلك نشاط الكسح ABTS.

باختصار ، كان نشاط مضادات الأكسدة لـ CDP-C أعلى من CDP-A و CDP-B. وذكرت أن بعض الأنشطة الدوائية للسكريات كانت مرتبطة بـ GalUA [51]. في هذه التجربة ، كانت نسبة GalUA في CDP-C أكبر من تلك الموجودة في CDP-A و CDP-B ، وتم اختيار CDP-C للتحقيق في التأثير الوقائي للكبد ضد أمراض الكبد المزمنة التي يسببها الكحول.

3.3 آثار CDP-C على صلاحية خلية HepG2

يعد قياس صلاحية الخلية طريقة شائعة لتقييم فعالية الأدوية الطبيعية [52]. بناءً على النتائج التي أظهرت أن CDP-C يمتلك أعلى نشاط مضاد للأكسدة ، تم تقييم تأثيرات CDP-C على قابلية خلية HepG2. النتائج موضحة في الشكل 3. انخفاض ملحوظ في قابلية خلايا HepG2 الناجم عن العلاج الكحولي. لكن يمكن لـ CDP-C تحسين معدلات البقاء على قيد الحياة بشكل ملحوظ عند مقارنتها بالمجموعة السلبية. كما هو مبين في الشكل 3 ، لا تظهر قابلية الخلية للبقاء بطريقة دقيقة تعتمد على التركيز مع CDP-C. في المقابل ، عندما يصل تركيز CDP-C إلى 3. 00 ملغ / مل ، تنخفض قابلية بقاء الخلية HepG2 بشكل كبير. قد يكون سبب انخفاض قابلية الخلية للحياة هو أن التركيز المنخفض لـ CDP-C كان مفيدًا في بقاء خلايا HepG2. ومع ذلك ، عندما كان تركيز السكريات في وسط الاستزراع مرتفعًا بما يكفي لتغيير البيئة المكروية للخلايا ، تم تثبيط قابلية بقاء خلية HepG2.

3.4. التأثيرات الدوائية لـ CDP-C

3.4.1. آثار CDP-C على الفهارس المصلية

يُعزى تعاطي الكحول إلى ما يقرب من 4 في المائة من جميع معدلات الوفيات ، والتي أصبحت مشكلة اجتماعية خطيرة في العالم. في جسم الإنسان ، يتم استقلاب الكحول في الكبد بعد امتصاصه من خلال الغشاء المخاطي المعدي والأمعاء الدقيقة [53-55]. تحدث أمراض الكبد الكحوليّة عادةً بعد سنوات من تعاطي الكحول [56]. تُلاحظ الحالات المرضية الشائعة مثل الكبد الدهني والتهاب الكبد والتليف والتليف الكبدي [57] ، أو حتى الأمراض السرطانية مثل سرطان الخلايا الكبدية وسرطان القولون [58] ، في اضطرابات الكبد المرتبطة بالكحول. لذلك ، يعتبر الكحول من المواد السامة للكبد ، ويستخدم على نطاق واسع كمحفز لإصابة الكبد في البحث العلمي [59]. بالنظر إلى أن أمراض الكبد التي يسببها الكحول غالبًا ما تكون ناجمة عن المشروبات الكحولية والمضافات الغذائية بدلاً من الإيثانول الصناعي ، وبالتالي تم استخدام روح Er Guo-tou البيضاء لإنشاء نموذج إصابة الكبد في الفئران ICR في هذه الدراسة. Bicyclol هو عامل شائع يستخدم لعلاج إصابة الكبد المزمنة ، لذلك تم استخدامه لتعيين نموذج تحكم إيجابي.

تحتوي الخلايا الكبدية على تركيزات أعلى من ALT في السيتوبلازم والميتوكوندريا. بسبب العديد من أضرار الخلايا الكبدية ، فإن تسرب العصارة الخلوية سيؤدي إلى زيادة ALT في المصل. وبالتالي فإن تعزيز ALT هو مؤشر على التسرب الخلوي والاضطرابات الوظيفية للكبد [60]. لذلك يتم تحديد مستوى ALT في المصل كمؤشر لتقييم صحة الكبد [61]. لأسباب مماثلة ، يتم استخدام -GTP و ACP و TG أيضًا كمؤشرات لتقييم الحالة الصحية للكبد [62].

في هذه الدراسة ، تم تقييم النشاط الوقائي للكبد لـ CDP-C من خلال تحديد مستويات ALT و ACP و -GTP و TG. النتائج موضحة في الشكل 4 أ ، ب ، ج ، د. أربعة مؤشرات مصلية تم تعزيزها بشكل كبير عن طريق العلاج الكحولي في المجموعة السلبية. لكن CDP-C يمكن أن يخفف من هذه التعديلات التي يسببها تعاطي الكحول. ومع ذلك ، لا تظهر جميع الفهارس المصلية طريقة تعتمد على الجرعة مع CDP-C. في الشكل 4 A و B ، يكون لـ CDP-C عند التركيز المنخفض تأثير كبير على استعادة ALT و ACP ، لكن تأثير CDP-C عند أعلى تركيز لم يكن مهمًا. في الواقع ، العديد من المنتجات الطبيعية مفيدة للصحة بجرعات منخفضة ، ولكنها ضارة بالصحة بجرعات عالية [60]. قد يكون السبب هو أن الإفراط في تناول السكريات سيؤثر على التمثيل الغذائي الطبيعي للكائنات الحية ،لتؤثر سلبًا على صحة الجسم. ومع ذلك ، فإن الآلية التفصيلية تحتاج إلى مزيد من البحث.

3.4.2. آثار CDP-C على مؤشرات الكبد

عادة ما تطور الكائنات الحية المعرضة للإجهاد التأكسدي آلية دفاع مضادة للأكسدة ، و SOD هو نظام مضاد للأكسدة يعتمد على الإنزيم [63]. يحفز SOD تفكيك الأنيون الفائق إلى O2 و H2O2 [64]. يلعب GST ، وهو بروتين قابل للذوبان موجود في العصارة الخلوية ، دورًا مهمًا أيضًا في إزالة السموم من الكبد. للأسباب المذكورة أعلاه ، تصبح SOD و GST مؤشرات في السمية الكبدية التي يسببها الكحول. يتم استخدام MDA و TG في الكبد أيضًا كمؤشرات على السمية الكبدية [65].

في هذه الدراسة ، تظهر تأثيرات CDP-C على وظائف الكبد في الشكل 5. تظهر الصورة A و B و C و D تأثيرات CDP-C على SOD و MDA و GST و TG ، على التوالي. تُظهر هذه الصور الأربع أن الفئران المعالجة بالكحول تقلل بشكل ملحوظ مستويات SOD و GST ، وتزيد من مستويات MDA و TG ، لكن CDP-C يمكن أن يخفف من هذا التغيير بوضوح. على غرار الظواهر الموضحة في القسم 3.4.1 ، لم تكن المؤشرات الكبدية أيضًا بطريقة تعتمد على الجرعة مع CDP-C. قد يكون سبب ذلك مماثلاً للآلية الموضحة في القسم 3.4.1. أفادت دراسات سابقة أن تأثيرات السكريات على SOD والكتلاز قد تترافق مع تحريض التعبيرات الجينية لـ SOD والكاتلاز [66]. ومع ذلك ، لا تزال هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات لتوضيح آلية حماية الكبد لـ CDP-C والعلاقة بين هيكلها ووظيفتها.

3.5 التأثيرات النسيجية المرضية لـ CDP-C على الفئران التي يسببها الكحول

على أساس الملاحظات النسيجية المرضية لأقسام الكبد ، أظهرت المجموعة الساذجة بنية خلوية طبيعية مع خلايا كبدية مميزة ولا تشوهات نسيجية (الشكل 6 أ). وبالمقارنة ، تسبب تناول الكحوليات في تلف كبدي خطير في فئران المجموعة السلبية. أظهرت أقسام الكبد اختفاء ترسب الدهون في خلايا الكبد ونخر وتورم خلايا الكبد وتشكيل فجوة في الخلايا والحدود الخلوية أيضًا (الشكل 6 ب). أظهرت أقسام الكبد للفئران المُعطاة بالبيسيكلول (الشكل 6 ج) ، بجرعات متفاوتة من CDP-C (الشكل 6 DF) استعادة واضحة لتلك التشوهات التي ظهرت في المجموعة الضابطة السلبية. أثبتت هذه النتائج أن الكحول الذي يسببه الكحول قدراً معيناً من التشويه في خلايا الكبد في مجموعة التحكم السلبية. ومع ذلك ، استعاد CDP-C هذه التغييرات.

من المقبول جيدًا أن التأثير الوقائي للكبد للسكريات يرتبط بنشاطها المضاد للأكسدة [67 ، 68]. ثبت أن المحتوى العالي من حمض اليورونيك مفيد للتأثيرات المضادة للأكسدة للسكريات [44 ، 45]. كما تم التحقق من أن السكريات الغنية بـ Gal و Ara تمتلك تأثيرات مضادة للأكسدة أعلى [46]. ومع ذلك ، فمن الصعب على السكريات الجزيئية الكبيرة أن تدخل الخلايا الظهارية المعوية مباشرة. بالنسبة لـ CDP-C (بوزن جزيئي 1300 كيلو دالتون) ، ليس من السهل دخول الجسم مباشرة ولعب دور حماية الكبد. كشفت التقارير المنشورة أن الأوزان الجزيئية للسكريات انخفضت بعد الهضم المعدي والأمعاء [69]. وبالتالي ، افترضنا أن CDP-C قد يتحلل إلى عديد السكاريد بأوزان جزيئية منخفضة وتمتصه الخلايا الظهارية المعوية. يمكن زيادة الحد من نهايات السكريات بسبب انهيار الروابط الجليكوسيدية [69 ، 70]. وفقًا لتكوين السكاريد الأحادي لـ CDP-C ، يجب أن تحتوي تلك السكريات المتدهورة ذات الأوزان الجزيئية المنخفضة على GalUA و Ara و Gal. ومن ثم فإن هذه السكريات منخفضة الوزن الجزيئي ، والتي تمتلك نهايات مختزلة وتحتوي على GalUA و Ara و Gal ، قد تلعب دور حماية الكبد في الجسم. ومع ذلك ، فإن الآلية التفصيلية تحتاج إلى مزيد من البحث.

4 - نتائج

وفقًا لتحليلات تكوين السكاريد الأحادي وأطياف FT-IR ، احتوت جميع الكسور الثلاثة من CDPs على Man و Rha و GalUA و Glc و Gal و Ara. احتوى CDP-C على نسبة كبيرة من GalUA. كان CDP-C أعلى نشاط مضاد للأكسدة. أوضحت نتائج كل من الأبحاث المختبرية والحيوية أن CDP-C يمتلك نشاطًا كبدًا ضد الإصابة الكبدية المزمنة التي يسببها الكحول. كانت الآلية الأساسية مرتبطة بتعديل أنشطة الإنزيم النسبي ، وتقليل MDA و TG في الكبد. قد يرتبط النشاط الفسيولوجي لـ CDP-C بـ GalUA. توفر هذه النتائج رؤى جديدة حول الأهداف الدوائية لفطر C. الصحراء في الوقاية من مرض الكبد الكحولي.

سيستانش هيربايحميكبدويحسن المناعة.

لمزيد من المعلومات، يرجى الضغط هنا.