التعبير الجيني المرتبط بالمناعة في الكلى والطحال من الأبقار المصابة بالفيروس الفلكي الكلوي أووز

اتصالtina.xiang@wecistanche.comلمزيد من المعلومات.

نبذة مختصرةتم عزل الفيروس النجمي الكلوي (GNAstV) لأول مرة في عام 2018 ، مما تسبب في خسائر اقتصادية كبيرة لصناعة الأوز. ومع ذلك ، لا يُعرف الكثير عن المضيفاستجابة مناعيةلعدوى GNAstV. في هذه الدراسة ، تم تقسيم أربعين {0} يومًا بشكل عشوائي إلى مجموعتين: العدوى ومجموعات التحكم السلبية. تم تحدي كل طائر في مجموعة الإصابة بـ 0.5 مل من GNAstV-JSHA في العضل ، في حين تم تلقيح الأوزان في المجموعة الضابطة السلبية بنفس الكمية من PBS. التغيرات النسيجية المرضية وموقع الفيروس فيطحالوالكلىتم فحصها ، وتم تحديد التعبير عن الجينات المرتبطة بالمناعة بواسطة qPCR في 7 و 14 يومًا بعد الإصابة. أظهرت نتائجنا أن تنكس ونخر الخلايا الليمفاوية الطحالية والخلايا الظهارية الكلوية الناجم عن عدوى GNAstV ، وكانت هذه الخلايا إيجابية للفيروس. بالإضافة إلى ذلك ، تسببت عدوى GNAstV في تنشيط مستقبلات التعرف على الأنماط (RIG-I و MDA -5 و TLR3) وجزيئات المحولات الرئيسية

(MyD88 ، MAVS ، و IRF7) في الطحال والكلى ، وانتظم التعبير الجيني للإنترفيرون في الطحال والبروتينات المضادة للفيروسات (MX1 و OASL و IFITM3) في الطحال والكلى. علاوة على ذلك ، تم العثور على مستويات عالية من التعبير عن إنترلوكين (IL) -1 و IL -8 في الطحال و iNOS في الطحال والكلى. أشارت هذه النتائج إلى أن عدوى GNAstV تنشط الاستجابة المناعية الفطرية للمضيف. علاوة على ذلك ، زادت عدوى GNAstV من مستويات التعبير عن CD8t و MHCI و MHCII ، مما يشير إلى تنشيط الاستجابة المناعية التكيفية. إلى جانب ذلك ، تم التعبير عن TGF- بشكل كبير في الطحال والكلى ، والتي قد تكون استراتيجية تهرب مناعي لـ GNAstV لإحداث العدوى. ومن المثير للاهتمام أن مستويات كل من IL -1 و IL -6 mRNA قد انخفضت في الكلى ، مما قد يساعد في تقليل آفات الكلى. هذه هي الدراسة الأولى التي تُبلغ عن تغييرات في التعبير الجيني المرتبط بالمناعة استجابةً لعدوى GNAstV ، وتوفر نتائجنا نظرة ثاقبة حول التسبب في المرض الفيروسي.

الكلمات الدالة: الفيروس النجمي الكلوي أوزة ، الاستجابة المناعية ، الطحال ، الكلى ، الوخز

انقر لتتعلم فوائد نظام cistanche ولديك خبرة مستمرة

المقدمة

منذ عام 2017 ، شهد العديد من قطعان الأوز تفشيًا حادًا لمرض النقرس في 4- إلى طيور 16- عمرها يوم واحد في شرق الصين ، مما أدى إلى خسائر اقتصادية فادحة في صناعة الأوز. أظهرت الأوزان المصابة انخفاضًا في وزن الجسم ، وتورمًا وشحوبًا في الكلى ، مع وجود بول أبيض في الحالب وتصريف البول على سطح الأعضاء الحشوية والتجويف المفصلي. في عام 2018 ، تم عزل فيروس نجمي أوزة جديد من الأوزان المصابة ، وأثبتت تجارب التكاثر الحيواني أنه كان العامل المسبب الرئيسي لمرض النقرس. كان هذا الفيروس متميزًا وراثيًا عن الفيروس النجمي والفيروس النجمي المعروفين. لقد شكلت كليدًا مميزًا وفقًا لتسلسل الأحماض الأمينية لبروتين ORF2 كامل الطول (بروتين القفيصة) ، وهي المنطقة الأكثر تغيرًا في الجينوم. ومن ثم ، ينبغي إيلاء المزيد من الاهتمام للأضرار التي يسببها الفيروس للأبناء. في هذه الدراسة ، يشار إلى الفيروس النجمي للأوز الجديد باسم الفيروس النجمي الكلوي أوزة (GNAstV).

نظرًا لأن GNAstV هو فيروس ناشئ حديثًا ، فقد ركزت معظم الدراسات على عزله وتحليله الجيني وإنشاء طرق التشخيص (Yuan et al ، 2018 ؛ Wan et al. ، 2019 ؛ Yin et al. ، 2020). ومع ذلك ، لا يُعرف الكثير عن الاستجابة المناعية للمضيف لعدوى GNAstV. يتسبب الفيروس النجمي الكلوي في الإوز بشكل أساسي في تلف الكلى والكبد والطحال في الأبقار ، وقد تم اكتشاف حمولة فيروسية أعلى في الكلى والطحال مقارنة بالأعضاء الأخرى (Jin et al ، 2018 ؛ Xu et al ، 2019). تشير آفات الطحال والحمل الفيروسي المرتفع إلى أن الفيروس قد يتسبب في تلف الاستجابة المناعية. يلعب الجهاز المناعي الفطري دورًا مهمًا أثناء الإصابة بالفيروس من خلال العمل كخط دفاع أول ضد الغزو الفيروسي (Chow J et al. ، 2015). تتعرف مستقبلات التعرف على الأنماط (PRR) على الأحماض النووية الفيروسية وتثير استجابة فطرية ، بما في ذلك إنتاج السيتوكينات ، مثل I -1 و TNF-x و IFN والبروتينات المضادة للفيروسات مثل OASL و IFITM3 و MX1. إن المستقبلات الشبيهة بالغشاء Toll-like 3 (TLR3) والمستقبلات الشبيهة بـ RIG-I الخلوية والتي تحتوي بشكل أساسي على RIG -1 و MDA -5 هي أهم PRR التي تتعرف على الحمض النووي الريبي الفيروسي. تحث الاستجابة المناعية الفطرية الإشارات لاستنباط الاستجابة المناعية التكيفية ، التي تتحكم في العدوى الفيروسية في مرحلة لاحقة من العدوى. يشمل المناعة التكيفية استجابة الجسم المضاد / استجابة الخلية B الأولى والاستجابة بوساطة الخلية ، والتي تتطلب مشاركة جزيئات CD3 plus و CD4 plus و CD8 plus و MHC من الصنف الأول والثاني. حاليًا ، الآليات التي يؤثر بها GNAstV على الاستجابات المناعية الفطرية والتكيفية للمضيف غير واضحة. الصين هي موطن لأعلى عدد من الأوز في جميع أنحاء العالم ؛ لذلك ، فإن التحقيق في استجابة مناعية الأوز لعدوى GNAstV مهم لتوضيح آلية الإمراضية ومناعة GNAstVand للسيطرة على انتشاره. في هذه الدراسة ، أصيب 2- فصيلة بعمر يوم بـ GNAstV. ثم تم فحص التغيرات النسيجية المرضية وموقع الفيروس ، وكذلك التعبير الجيني المرتبط بالمناعة في الطحال والكلى.

المواد والأساليب

بيان الأخلاق

تم إجراء جميع التجارب على الحيوانات وفقًا للمبادئ التوجيهية للحيوانات التجريبية التابعة لوزارة العلوم والتكنولوجيا (بكين ، الصين) وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسية واستخدامها في جامعة نانجينغ الزراعية.

فايروس

تم عزل عزلة GNAstV-JSHA (انضمام GenBank رقم MK125058) عن طائر البرسيم المصابة بالنقرس (مقاطعة Jiangsu ، الصين) وتم الاحتفاظ بها في مختبرنا. كان عيار GAstV-JSHA 1 × 104. 25 50 في المائة من الجرعة المعدية لزراعة الأنسجة (TCID50) / مل كما هو محدد بالمعايرة على الخلايا الظهارية للكلى أوزة وفقًا لطريقة Reed & Muench.

تجربة الحيوان

تم جمع عينات الطحال والكلى من تجربتنا الحيوانية السابقة التي تم وصفها في دراسة Xu (Xuet al.، 2 0 19). باختصار ، تم فصل 2- أربعون يومًا من العمر دون إصابة GNAstV بشكل عشوائي إلى مجموعتين: العدوى ومجموعات التحكم السلبية. تم تحدي كل طائر في مجموعة الإصابة بـ 0.5 مل من GNAstV-JSHA عن طريق التلقيح العضلي ، بينما تم تلقيح الأوزان في المجموعة الضابطة السلبية بنفس الكمية من PBS.

تمت مراقبة جميع الأوتار يوميًا بحثًا عن العلامات السريرية. في 7 أيام بعد الإصابة (نقطة في البوصة) ، تم قتل 10 فراخ من كل مجموعة وفحص التغيرات الإجمالية ، ثم تم جمع الكلى والطحال. تم إصلاح جزء من هذه المشكلات في 10 بالمائة فورمالدهايد للفحص النسيجي المرضي ، وتم تخزين الباقي بدرجة -80 لإجراء مزيد من التجارب. عند 14 نقطة في البوصة ، تم التخلص من الأبقار الباقية على قيد الحياة وتم جمع الأنسجة وتخزينها كما هو مذكور أعلاه.

فحص الأنسجة

تم تجفيف العينات الثابتة بواسطة سلسلة من الكحوليات ، وتم توضيحها في زيلين ، ودمجها في البارافين. ثم تم تقطيع العينات بشكل متسلسل إلى أقسام 4 ميكرومتر وصبغها بالهيماتوكسيلين ويوزين بالطرق الروتينية. تم فحص المقاطع الملطخة بالمجهر الضوئي.

اكتشاف موقع الفيروس عن طريق التهجين الموضعي

تم إجراء طريقة التهجين في الموقع (FISH) وفقًا لتعليمات مجموعة ISH التجارية (Boster ، الصين) ، مع بعض التعديلات. قبل إجراء ISH ، تم اختبار حساسية ونوعية العينة وتحسينها عبر سلسلة من المعالجات المسبقة. باختصار ، تمت معالجة أقسام الأنسجة منزوعة الكافيين مسبقًا بـ HCl (0. 2 متر ، 15 دقيقة) وبروتيناز K 4 0 ميكروغرام / مل ، 20 دقيقة ، 37 درجة）. تم تثبيط البروتياز K عن طريق التثبيت في بارافورمالدهيد 4 في المائة لمدة 5 دقائق. بعد ذلك ، تم إجراء خطوات التهجين وما بعد التهجين. تمت إضافة مجسات إلى المخزن المؤقت للتهجين بتركيز 0. 5-2 ميكروغرام / مل ؛ تم تغيير طبيعة المخزن المؤقت الذي يحتوي على المجسات عند 98 درجة لمدة 10 دقائق وتم تبريده على الفور على الجليد. تم ضخ ما يقرب من 20 ميكرولتر من مزيج التهجين على أقسام الأنسجة ، ومغطاة بأغطية مغطاة بثنائي إيثيل البيروكربونات ، وحضنت لمدة 16 إلى 20 ساعة عند 42 درجة. تم الكشف عن المجسات التي تم تهجينها مع الحمض النووي الريبي الفيروسي باستخدام جسم مضاد لـ DIG مترافق مع 3 ، 3- N-diaminobenzidine tetrahydrochloride. تمت مواجهة الشرائح بأخضر الميثيل ومختومة بصمغ محايد. لتحسين الحساسية ، تم استخدام بروتيناز K لتعزيز نفاذية الأنسجة لتسهيل دخول المجسات إلى الأنسجة.

تحليل الجينات المناعية عن طريق PCR الكمي في الوقت الحقيقي

تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام Trizol (Invitrogen ، CA) ، وتم إجراء النسخ العكسي للحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة HiScript Q RT SuperMix (Vazyme ، الصين). تم استخدام مُدرب حراري (AB73 0 0 ؛ تقنيات الحياة) في PCR الكمي. تم استخدام برنامج Primer 5.0 لتعيين الجينات المرتبطة بالمناعة ، كما هو موضح في الجدول 1. تم تطبيع تعبير الحمض النووي الريبي عن طريق القياس الكمي لـ GAPDH كجين تدبير منزلي. تم تحليل مستويات النسخة النسبية بالطريقة باستخدام 2- AACT

التحليل الإحصائي

تم تحليل الفروق بين المجموعة الضابطة والمجموعة التجريبية بواسطة اختبار الطالب. يتم التعبير عن النتائج على أنها متوسط ​​± الانحراف المعياري. ص<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistical="" significance="" compared="" with="" the="" control="" group,="" and="">< 0.01="" was="" considered="" to="" indicate="" a="" high="" degree="" of="" significance="" compared="" with="" the="" control="">

النتائج

التغييرات السريرية

لم يلاحظ أي موت أو علامات سريرية واضحة في مجموعة التحكم غير الملقحة. ومع ذلك ، مات 5 من أصل 20 من الأوزان المصابة أثناء التجربة ، ولوحظ انخفاض في وزن الجسم في الأوزان المصابة بـ GNAstV. في تشريح الجثة ، بدت الأعضاء في المجموعة الضابطة السلبية طبيعية ، ولكن تم اكتشاف التخلص من البول على سطح الأعضاء (الكبد والقلب والكلى) والأكياس الصفراوية والتجويف المفصلي في الأوزان الميتة. علاوة على ذلك ، لوحظ تورم وشحوب الكلى مع وجود بول أبيض في الحالب في جميع الأوزان المصابة. تم عرض التغييرات المرضية في دراستنا السابقة (Xu et al .. 2019). أشارت هذه النتائج إلى أننا نجحنا في إنشاء نموذج حيواني لعدوى GNAstV في الأبقار.

التغيرات النسيجية المرضية في الكلى والطحال

في الفحص التشريحي المرضي ، بدت الكلى والطحال من فصيلة التحكم السلبي طبيعية من الناحية النسيجية (الشكلان 1 أ و 1 ب). ومع ذلك ، تنكس ونخر الخلايا الظهارية الكلوية والتهاباتوقد لوحظ تسلل الخلايا في كليتي الأبقار المصابة (الشكل 1 ج). علاوة على ذلك ، نخر الطحالالخلايا الليمفاويةكما تم العثور على تسلل الخلايا الالتهابية في الطحال (الشكل 1 د).

موقع الفيروس في الكلى والطحال

تم فحص موقع الفيروس النجمي الكلوي الإوز في الكلى والطحال باستخدام ISH. كما هو مبين في الشكل 2 ، تم اكتشاف العديد من الجسيمات البنية في سيتوبلازم الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية ، ولكن لم يلاحظ وجود جزيئات بنية اللون في كبيبات الكلى. تم الكشف عن عدد قليل من الجسيمات البنية في الخلايا الليمفاوية الطحالية وخلايا البلاعم في الطحال. تشير هذه النتائج إلى أن GNAstV يمكن أن يصيب الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية والخلايا الليمفاوية الطحالية.

التعبير عن جزيئات PRR وجزيئات المحول في الطحال والكلى للأغنام المصابة بـ GNAstV تعبير PRR (RIG -1 و MDA -5 و TLR3) وجزيئات المحول الرئيسي (MAVS و MyD88 وتم تحديد IRF7) في الطحال والكلى بواسطة qPCR كما هو موضح في الشكل 3. زاد مستوى mRNA لـ 3 PRR في الطحال بشكل كبير في المجموعة المصابة عند 7 و 14 نقطة في البوصة مقارنة بمجموعة التحكم السلبية (P<0.05). the="" rig-1="" and="" tlr3="" mrna="" levels="" in="" the="" kidneys="" were="" also="" increased="" in="" the="" infected="" group="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" compared="" with="" that="" in="" the="" negative="" control="">< 0.01).="" the="" mda-5="" mrna="" level="" was="" higher="" in="" the="" infected="" group="" at="" 14="" dpi,="" but="" no="" difference="" in="" mda-5="" mrna="" expression="" was="" observed="" between="" the="" infected="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0 05). وفقًا لذلك ، كان التعبير عن جزيئات المحول في المجموعة المصابة عند 7 و 14 نقطة في البوصة أعلى بكثير من التعبير في المجموعة الضابطة (P<0.05). these="" results="" indicate="" that="" gnastv="" infection="" activates="" the="" host's="" innate="" immune="">

التعبير الخلوي في الطحال والكلى للأغنام المصابة بـ GNAstV

تم تحديد تعبيرات السيتوكين ، IL -1 ، I -6 ، IL -8 ، Ⅱ -10 ، TGF-B ، و iNOS بواسطة qPCR كما هو موضح في الشكل 4. في الطحال ، مستويات الرنا المرسال لـ IL -1 B و TGF-B في مجموعة العدوى عند 7 و 14كان من الواضح أن نقطة في البوصة أعلى من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة السلبية (P<0.01). furthermore,="" the="" i-8="" and="" inos="" mrna="" levels="" in="" the="" infection="" group="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="">< 0.05).="" but="" no="" differences="" in="" the="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p=""> 0.05). Moreover, no difference in I-6 mRNA expression at 7 and 14 dpi was observed between the infection and control groups(P>0 05). في الكلى ، كانت مستويات mRNA لـ I -1 عند 7 و 14 نقطة في البوصة و -6 عند 7 نقطة في البوصة أقل في مجموعة الإصابة من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة السلبية (P< 0.05),="" whereas="" the="" tgf-b="" and="" inos="" mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" and="" the="" i-8="" mrna="" level="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="" in="" the="" infection="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05). no="" difference="" in="" i-10="" expression="" was="" detected="" between="" the="" infection="" and="" control="" groups(p="">0.05).

التعبير عن البروتينات المضادة للفيروسات في الطحال والكلى للأغنام المصابة بـ GNAstV

مستوى مرنا من IFN-d. في الطحال والتعبير عن البروتينات المضادة للفيروسات (OASL ، IFITM3. و MIX1) في الكلى والطحال كما هو موضح في الشكل 5. في الطحال ، تم تحديد مستويات mRNA منIFN -2. كانت OASL و IFITM3 و MX1 بدقة 7 و 14 نقطة في البوصة أعلى بشكل ملحوظ في المجموعة المصابة من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة السلبية (P< 0.05).="" in="" the="" kidney,="" the="" mrna="" levels="" of="" oasl,="" ifitm3,="" and="" mx1="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" significant="" differences="" in="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" group="" at="" 7="" dpi(p="">0.05).

التعبير عن جزيئات CD4t و CD8 plus و MHC Class و I في طحال Goslings المصابة بـ GNAstV

تم تحديد التعبير عن الجينات المرتبطة بعرض المستضد (جزيئات CD4 'و CD8' و MHC من الصنف الأول والثاني) في الطحال بواسطة qPCR كما هو موضح في الشكل 6. مستويات التعبير عن MHC I في 7 و 14كانت نقطة في البوصة أعلى بشكل ملحوظ في المجموعة المصابة من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة السلبية (P <0. 05).="" من="" الواضح="" أن="" مستويات="" التعبير="" عن="" mhc="" ii="" عند="" 14="" نقطة="" في="" البوصة="" كانت="" أعلى="" في="" المجموعة="" المصابة="" من="" تلك="" الموجودة="" في="" المجموعة="" الضابطة="" السلبية=""><0.05); however,="" no="" difference="" in="" levels="" was="" observed="" between="" the="" 2="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0 05). كانت مستويات CD8 plus mRNA عند 7 و 14 نقطة في البوصة أعلى بشكل ملحوظ في المجموعة المصابة من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة السلبية (P< 0.05).="" but="" no="" changes="" in="" cd4+mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" were="" found="" between="" the="" 2="" groups="" (p="">0.05).

نقاش

الفيروس النجمي الكلوي للأوز هو فيروس معزول حديثًا يمكن أن يتسبب في النقرس الحشوي وموت صغار الأوز ، مما يؤدي إلى ضرر كبير لحقير الإوز ، وحتى الآن لا توجد لقاحات وعوامل علاجية لعلاجه. وبالتالي ، من الضروري التحقيق في الاستجابة المناعية للمضيف للفيروس لفهم أسبابه وتطوير اللقاحات والعلاجات. في هذه الدراسة ، أنشأنا بنجاح نموذجًا حيوانيًا في الأبقار عن طريق التلقيح العضلي باستخدام GNAst V-JSHA. يشير موقع الفيروس في الخلايا الليمفاوية الطحالية والضامة ونخر الخلايا الليمفاوية الطحالية إلى أن GNAstV يمكن أن يصيب الطحال ويحدث تلفًا في جهاز المناعة المضيف. ومع ذلك ، حتى الآن ، لم تكن هناك تقارير عن الاستجابة المناعية للأغنام المصابة بـ GNAstV. بالإضافة إلى ذلك ، لوحظ ارتفاع عيار فيروسي في الخلايا الظهارية الكلوية. وقد يساهم ذلك في تلف الكلى واضطراب إفراز حمض البوليك.

جهاز المناعة الفطري هو خط الدفاع الأول ضد مسببات الأمراض الغازية. في دراستنا ، تسببت عدوى GNAstV في زيادة TLR3. RIG -1 ، و MIDA -5 تعبير mRNA في الطحال والكلى ، مما يشير إلى أن الجهاز المناعي الفطري قد تم تنشيطه مما قد يساهم في تثبيط الغزو الفيروسي ، وتنظيم جزيئات المحول الرئيسية (MyD88 و IRF7 ) أكد هذه النتائج. يتم إنتاج IFN بعد تنشيط PRR ، والتي تلعب دورًا حاسمًا في كبت الفيروس عن طريق تحريض العديد من الجينات التي تحفز IFN والتي تمتلك منتجاتها نشاطًا مباشرًا مضادًا للفيروسات. في دراستنا ، تم زيادة تعبير IFN-z في الطحال والتعبير عن البروتينات المضادة للفيروسات (OASL و MX1 و IFITM3) في الطحال والكلى بعد الإصابة بـ GNAstrV. قد تكون زيادة إنتاج البروتينات المضادة للفيروسات مفيدة لتثبيط الغزو الفيروسي. وفقًا لهذا ، أظهرت نتائجنا أن TLR3.RIG -1. تم تنشيط MDA -5 و IRF7 أثناء الإصابة بعدوى GNAstV. أظهرت دراسة سابقة أيضًا أن نوع النظام يحد من تكاثر الفيروس النجمي البشري في المختبر وفي الجسم الحي ويوفر الحماية ضد نفاذية الحاجز الناجم عن الفيروس النجمي (مارفن وآخرون ... 2015). ومع ذلك ، كانت نتائج TLR3 و OASL مختلفة عن تلك الخاصة بالبروتينات الأخرى PRR والبروتينات المضادة للفيروسات في الطحال ، حيث انخفض التعبير عن كل من TLR3 و OASL بمعدل 14 نقطة في البوصة مقارنة بـ 7 نقطة في البوصة. قد يكون هذا مرتبطًا بتنظيم التعليقات السلبية أو تقليل حمل الفيروس. وفقًا لذلك ، قد يكون lL -1 B عند 14 نقطة في البوصة نتيجة لآليات تنظيم الجسم ضد إنتاج السيتوكين الالتهابي الزائد. ومن المثير للاهتمام أن مستوى mRNA لـ I -1 في الكلى انخفض في المجموعة المصابة. قد يساعد المستوى المنخفض من هذا السيتوكين المنبه للالتهابات في تخفيف تلف الكلى. أفادت الدراسات السابقة أن عدوى الفيروس النجمي البشري والفيروس النجمي للديك الرومي من النوع 2 (TASt V -2) لم تكن مرتبطة بالتهاب وتسبب في إصابات قليلة في الزغابات المعوية (Koci وآخرون 2003 ؛ Sebire وآخرون 2004) ، مما يشير إلى أن هذا قد يكون سمة من سمات عدوى الفيروس النجمي في الخلايا الظهارية. -6 هو أيضًا سيتوكين التهابي يحفز التأثيرات المضادة للفيروسات عبر استجابة مناعية فعالة ولكنه يشارك أيضًا في العمليات التي تؤدي إلى تلف الأوعية الدموية ،اشتعالمن جدار الأوعية الدموية ، والتجلط. في دراستنا ، لم يتم العثور على تغيير كبير في IL -6 في الطحال بعد الإصابة GNAstV. قد يكون هذا مرتبطًا بالاختلافات الكبيرة بين الفرشاة الفردية. ومع ذلك ، -6 انخفض التعبير في الكلى ، على غرار ملاحظة -1 ب ؛ قد يساعد هذا أيضًا في التخفيف من تلف الكلى. أنا -8 وسيط مسؤول عن تجنيد العدلات التي تشارك في التسلل الالتهابي المحلي. في هذه الدراسة ، -8 تم انتظامي في الطحال والكلى ، وربما يكون هذا قد ساهم في حدوث الالتهاب. IL -10 هو سيتوكين مضاد للالتهابات يمكن أن يثبط إنتاج السيتوكينات المنشطة للالتهابات. في هذه الدراسة ، تسبب GNAstV في انخفاض واضح في مستويات IL -10 في الطحال. قد يكون هذا مؤشرا على التهاب حاد في الطحال وأحد أسباب تلف الطحال. تبين أيضًا أن الإصابة بعدوى vi-ruses الأخرى ، مثل فيروس التهاب الدماغ الياباني وفيروس Zika ، تؤدي إلى انخفاض في التعبير I -10 (Swarup et al.2007؛ Abreu 2019) ، ولكن الآلية الدقيقة يحتاج GNAstr Vinfection الأساسي إلى مزيد من الدراسة. TGF- هو سيتوكين مناعي. وبالتالي ، فإن الزيادة في مستويات TGF-B في الطحال والكلى تشير إلى أن عدوى GNAstV قد تؤدي إلى كبت المناعة. علاوة على ذلك ، تم الإبلاغ عن أن عدوى T AStV -2 زادت من مستوى مصل TGF- في الديوك الرومية (Koci وآخرون ، 2003). لقد ثبت أن زيادة إنتاج TGF- يثبط الاستجابة المناعية ويعزز تكاثر الفيروس (ليتريو وروبرتس ، 1998). ومن ثم ، فإن زيادة إنتاج TGF- قد تساهم في تكرار GNAstV عن طريق تثبيط الاستجابة المناعية للمضيف. iNOS هو عنصر مهم في الاستجابة المناعية الفطرية ويلعب دورًا رئيسيًا في السيطرة على الالتهابات الفيروسية. في دراستنا ، أشارت النتائج إلى أن عدوى GNAstV

تعبير INOS منظم بشكل واضح. قد يُمكِّن الإنتاج العالي لنظام iNOS المضيف من مقاومة العدوى الفيروسية. كانت نتائجنا متوافقة مع نتائج الدراسات السابقة ، والتي أظهرت أن عدوى TAStV -2 تحفز إنتاج iNOS ، مما يحد من تكاثر الفيروسات النجمية (Qureshi et al.، 200l؛ Koci et al.، 2004؛ Meyerhoff et al.، 2012 ).

يلعب الجهاز المناعي التكيفي دورًا رئيسيًا في السيطرة على الالتهابات الفيروسية. في دراستنا ، زادت GNAstVinfection من مستوى الرنا المرسال لكل من MHC Ia و MHC Iix و CD8 plus ، وهذا يشير إلى تنشيط الاستجابات المناعية الخلطية والخلوية. في السابق ، تم الإبلاغ عن أن عدوى الفيروس النجمي البشري تستدعي إنتاج الأجسام المضادة ، والتي يمكن أن تحيد الفيروس (Kurtzand Lee ، 1978). ومع ذلك ، لم يتم العثور على تغييرات كبيرة في CD4 بالإضافة إلى تعبير mRNA في الدراسة. بالنظر إلى أن الخلايا التائية CD4 ضرورية لنضج الخلايا البائية وخصوصية الجسم المضاد ، فمن الممكن أن GNAst V لا تستطيع إحداث استجابة مناعية خلطية قوية. قد يفسر هذا سبب عدم ملاحظة زيادة واضحة في تعبير MHC عند 7 نقطة في البوصة. بالإضافة إلى ذلك ، انخفضت مستويات mRNA لـ CD8 و MHCIa بدقة 14 نقطة في البوصة مقارنة بـ 7 نقطة في البوصة. قد يكون هذا مرتبطًا بتقليل حمل الفيروس ، كما هو مذكور أعلاه. في هذه الدراسة ، لم يتم اكتشاف الجسم المضاد GNAst V بسبب عدم توفر مجموعة تجارية. ، يحتاج دور الأجسام المضادة في عدوى GNAst إلى مزيد من التحقيق.

في الختام ، كشفت بياناتنا عن أنماط الاستجابة المناعية في الطحال والكلى للأغنام المصابة بـ GNAst V. على عدوى GNAst V ، تم تنشيط الجينات المتعلقة بالمناعة الفطرية والتكيفية. ومع ذلك ، فإن إنتاج السيتوكينات والبروتينات المضادة للفيروسات لم يحمي الأفراخ من المرض. هذه هي الدراسة الأولى التي تبلغ عن التغييرات في تعبيرات الجينات المرتبطة بالمناعة استجابةً لخلع GNAst ، والذي قد يساعد بشكل أكبر في توضيح الآليات الجزيئية لتفاعلات GNAstV للمضيف.