أنشطة في المختبر لمكافحة الشيخوخة من المستخلصات الإيثانولية من Pink Rambutan (Nephelium Lappaceum Linn.) لتطبيقات البشرة ، الجزء 1

خلاصة

يتميز شيخوخة الجلد بسمات مثل التجاعيد ، وفقدان المرونة ، والتراخي ، والمظهر الخشن ، والكلف ، والنمش. ركزت عدة أنواع من الأبحاث على منع وعلاج شيخوخة الجلد باستخدام العديد من المكونات الطبيعية. هدفت هذه الدراسة إلى تقييم الأنشطة المضادة للشيخوخة لمكافحة شيخوخة الجلد للمستخلصات الإيثانولية لـ Pink rambutan (PR) (Nephelium lappaceum Linn.) من الأوراق (L) والفروع (B) والبذور (S) والقشور من الثمار الناضجة (R) والصغيرة (Y). تراوحت إنتاجية استخلاص كل بينك رامبوتان (PR) المستخرج من النقع (M) واستخراج Soxhlet (Sox) باستخدام 95 بالمائة من الإيثانول كمذيب ، من 1 0. 62 بالمائة إلى 3 0 .63 بالمائة. تم العثور على مركبات الفلافونويد باعتبارها المواد الكيميائية النباتية الرئيسية في جميع مستخلصات العلاقات العامة تقريبًا. أعطت مستخلصات PR-YM و PR-Y-Sox أعلى محتويات فينولية إجمالية بواسطة مقايسة Folin-Ciocalteu البالغة 67.6 0 ± 4.38 mgGAE / g ، ومحتويات الفلافونويد الكلية بواسطة مقايسة لونية كلوريد الألومنيوم المعدلة بمقدار 678.72 ± 23.59 مجم QE / جم على التوالي. أظهرت مستخلصات PR-LM أعلى ثلاثة أنشطة مضادة للأكسدة ؛ مسح الجذور الحرة (SC5 0 من 0. 32 0 ± 0. {{4 0}} 7 0 مجم / مل) ، تثبيط بيروكسيد الدهون (LC5 0 من 0. 274 ± 0.029 مجم / مل) ، ونشاط إزالة معدن ثقيل (MC50 بقيمة 0.203 ± 0.021 مجم / مل). أظهرت جميع مستخلصات PR عند 0.01 و 0.1 مجم / مل عدم وجود سمية خلوية على خلايا B16F10 وخلايا الجلد الليفية البشرية على التوالي. وبالمثل ، أظهر مستخلص PR-R-Sox أعلى مستوى مضاد لتكوين الميلانين في خلايا B16F10 (52.7 ± 0.9 في المائة) ، ونشاط تثبيط تيروزيناز الفطر (IC50 0.04 ± 0.02 مجم / مل) ، والذي كان مشابهًا بشكل كبير لـ حمض كوجيك (p <0.05). أظهر مستخلص PR-Y-Sox تخليقًا حيويًا للكولاجين بطريقة Sirius Red ، وتحفيز الجينات المضادة للشيخوخة (Sirt1 و Foxo1) على الخلايا الليفية لجلد الإنسان بواسطة طريقة RT-PCR ، والتي كانت مشابهة لمعايير حمض الأسكوربيك و ريسفيراترول ، على التوالي. تشير هذه الدراسة إلى أنه يمكن تطوير مستخلصات PR-R-Sox و PR-Y-Sox بشكل أكبر كعوامل طبيعية مضادة للشيخوخة للتبييض ومكافحة التجاعيد في مستحضرات التجميل ومستحضرات التجميل والصناعات الدوائية. 2023 المؤلف (المؤلفون). تم النشر بواسطة Elsevier BV نيابة عن جامعة الملك سعود.

يمكن أن يزيد الجليكوزيد من cistanche أيضًا من نشاط SOD في أنسجة القلب والكبد ، ويقلل بشكل كبير من محتوى lipofuscin و MDA في كل نسيج ، ويزيل بشكل فعال العديد من جذور الأكسجين التفاعلية (OH- ، H₂O₂ ، إلخ) والحماية من تلف الحمض النووي الناتج عن ذلك. بواسطة OH- الجذور. جليكوسيدات Cistanche phenylethanoid لديها قدرة قوية على إزالة الجذور الحرة ، وقدرة تخفيض أعلى من فيتامين C ، وتحسن نشاط SOD في تعليق الحيوانات المنوية ، وتقليل محتوى MDA ، ولها تأثير وقائي معين على وظيفة غشاء الحيوانات المنوية. يمكن أن يعزز عديد السكاريد القارص نشاط SOD و GSH-Px في كريات الدم الحمراء وأنسجة الرئة للفئران المسنة تجريبياً الناتجة عن D-galactose ، وكذلك تقليل محتوى MDA والكولاجين في الرئة والبلازما ، وزيادة محتوى الإيلاستين ، تأثير الكسح الجيد على DPPH ، وإطالة وقت نقص الأكسجة في الفئران الشائخة ، وتحسين نشاط SOD في مصل الدم ، وتأخير التنكس الفسيولوجي للرئة في الفئران الشائخة تجريبياً مع التنكس المورفولوجي الخلوي ، أظهرت التجارب أن Cistanche لديه قدرة جيدة على مضادات الأكسدة وله القدرة على أن يكون دواءً لمنع وعلاج أمراض شيخوخة الجلد. في الوقت نفسه ، يتمتع إشنكوسايد في Cistanche بقدرة كبيرة على البحث عن الجذور الحرة لـ DPPH ولديه القدرة على البحث عن أنواع الأكسجين التفاعلية ومنع تدهور الكولاجين الناجم عن الجذور الحرة ، وله أيضًا تأثير إصلاح جيد على تلف أنيون الثايمين الجذور الحرة.

انقر فوق أين يمكنني شراء Cistanche

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】

1 المقدمة

على الصعيد العالمي ، ينمو السكان المسنون في العالم بوتيرة أسرع من جميع الفئات العمرية الأخرى. قدرت منظمة الصحة العالمية أن عدد سكان العالم الذين تزيد أعمارهم عن 60 عامًا سيكون 2.1 مليار نسمة في عام 2050 ، وسيواجهون حالات شائعة بما في ذلك التهاب المفاصل والسكري وفقدان السمع ومرض الزهايمر وأمراض الانسداد الرئوي المزمن والاكتئاب والخرف. والسرطانات والأمراض العصبية والقلب والأوعية الدموية (Darawsha et al.، 2021، WHO، 2021). الجلد هو أحد أكثر الأعضاء وضوحا خلال عملية الشيخوخة. شيخوخة الجلد مرتبطة بالتواصل الاجتماعي لأن المظهر الجيد يعطي انطباعًا إيجابيًا ويحسن الثقة بالنفس. تتأثر شيخوخة الجلد بالعوامل البيئية أو الخارجية مثل ملوثات الهواء والمواد الغريبة الحيوية والأشعة فوق البنفسجية والتدخين والعوامل الداخلية مثل الوراثة والتمثيل الغذائي الخلوي والهرمونات وعمليات التمثيل الغذائي (Darawsha et al.، 2021). ركزت العديد من أنواع الأبحاث الحديثة على الحفاظ على بشرة صحية من خلال تأجيل الشيخوخة ومنعها وعلاجها لتحسين مظهر الجلد عن طريق تجديد وتحفيز العمليات الفسيولوجية الطبيعية لحماية البشرة من الشيخوخة.

يمكن أن تتسبب أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) من الإجهاد التأكسدي الخلوي في تحريض موت الخلايا المبرمج عن طريق تنشيط العمليات الالتهابية ومسارات إشاراتها ، وزيادة مستويات البروتينات المعدنية (MMPs) ، وتدهور الدهون غير المشبعة ، وتغيير هياكل الألياف الليفية البروتينات بما في ذلك الكولاجين والإيلاستين التي تسببها شيخوخة الجلد (Miastkowska and Sikora، 2018، Darawsha et al.، 2021). بعد تكوين الميلانين ، الميلانين هو صبغة بوليفينول تنتج في الميلانوزومات للخلايا الصباغية الموجودة في عيون الحيوانات وشعرها وجلودها ، ويمكن أن تحمي الجلد المتضرر من الأشعة فوق البنفسجية (علي وناز ، 2018). Tyrosinase هو الإنزيم المحتوي على النحاس ، والذي يمكنه تحويل L-tyrosine إلى L-dopa و L-dopa إلى odopaquinone-H plus عن طريق تفاعلات الهيدروكسيل والأكسدة ، ثم يمر عبر الوسطاء أخيرًا إلى الميلانين (Solano ، 2018). يلعب ROS أيضًا دورًا مهمًا في تنظيم الإجهاد التأكسدي الخلوي في الخلايا الصباغية وهي خلايا متغصنة تتوضع في الطبقة القاعدية من البشرة في الجلد. الوسطاء الالتهابيون في الجلد مثل الإنترلوكين (IL) ، والبروستاغلاندين E2 ، وعامل نخر الورم ، والإنترفيرون جاما التي تفرزها بشكل أساسي الخلايا Th ، والخلايا الليمفاوية ، والخلايا المتغصنة ، والخلايا الأحادية ، وتنظم نشاط التيروزيناز وتنظم TYRP {{11 }} وتعبير TYRP -2 وتعزيز تكاثر الخلايا الصباغية المرتبطة بإنتاج الميلانين (Fu et al. ، 2020). ومع ذلك ، فإن الإفراط في إنتاج الميلانين وتراكمه العالي يسببان شيخوخة الجلد مثل الكلف والنمش والبقع الداكنة والنمش واضطرابات فرط التصبغ ، والتي يمكن أن تكون غير مرغوب فيها من الناحية الجمالية (علي وناز ، 2018).

السرتوينات عبارة عن نيكوتيناميد نووي أدينين ثنائي النوكليوتيد (NAD plus) - تعتمد على الدرجة الثالثة هيستون ديسيتيلاز التي تنظم شيخوخة الخلايا وموت الخلايا المبرمج ، ونمو الخلايا عن طريق التحكم في p53 ، وعوامل نسخ رأس الشوكة (FOXOs) ، وغاما مستقبلات البيروكسيسوم المنشط (PPAR-c) التي تتضمن لوائح التمثيل الغذائي وتمايز الخلايا والبقاء والشيخوخة. (سون وآخرون ، 2021). تم تنظيم SIRT1 و SIRT6 ونادرًا SIRT7 في عائلة sirtuin لمشاكل الأمراض الجلدية ، بما في ذلك التهاب الجلد ، والعدوى الجلدية ، والسرطان ، وأمراض المناعة الذاتية ، والأمراض الجلدية الموروثة ، وخاصة شيخوخة الجلد (Son et al. ، 2021). كذلك ، FOXO1 هو عامل نسخ موجود في السيتوبلازم. يعمل SIRT1 على إزالة الأسيتيل من FOXO1 وتنشيط نسخ FoxO1 في مسارات متعددة مثل MAPK (بروتين كيناز منشط بالميتوجين) ، وبروتين كيناز (AKT) ، ومثلية البنكرياس والاثني عشر -1 (Pdx1) (سين وآخرون ، 2015) . زيادة تعبير Sirt1 و Foxo1 mRNA ينظم استقلاب الجلوكوز وإصلاح الحمض النووي وحماية الأعصاب والتمايز وحماية الأوعية الدموية وإفراز الأنسولين ؛ ويقلل من الشيخوخة والأمراض المرتبطة بالعمر مثل الإجهاد التأكسدي ، والشيخوخة الخلوية ، والتنكس العصبي ، والالتهابات ، ومقاومة الأنسولين ، وأمراض القلب والأوعية الدموية ، والسمنة ، والتشحم الكبدي بالإضافة إلى شيخوخة الجلد (Son et al. ، 2021).

يعرّف قانون المستحضرات الصيدلانية (الأدوية) ومستحضرات التجميل لعام 1940 الدواء على أنه `` جميع الأدوية للاستخدامات الداخلية أو الخارجية من قبل البشر أو الحيوانات ، وجميع المواد المعدة للاستخدام في أو في تشخيص أو علاج أو تخفيف أو الوقاية من أي مرض أو اضطراب يصيب الإنسان أو الحيوان. "مستحضرات التجميل هي أي مقال يقصد به فرك أو سكب أو رش أو رش أو إدخال أو تطبيق على أي جزء من جسم الإنسان لتطهير أو تجميل أو تعزيز الجاذبية أو تغيير المظهر ، ويتضمن أي مادة مخصصة للاستخدام كعنصر من مكونات مستحضرات التجميل. مستحضرات التجميل هي مستحضرات تجميل صيدلانية هجينة تهدف إلى تعزيز الصحة والجمال من خلال المكونات التي تؤثر على القوام والوظائف البيولوجية للبشرة (Joshi and Pawar ، 2015). حاليًا ، مكافحة الشيخوخة تحتوي مستحضرات التجميل ومستحضرات التجميل والمستحضرات الصيدلانية على مركبات نشطة تعمل على تحييد الجذور الحرة مثل فيتامين E وفيتامين C والجلوتاثيون والإنزيم المساعد Q10 ؛ وتأخير شيخوخة الجلد من التجاعيد والكلف مثل الأحماض النووية ومحللات البروتين ومستخلصات الطحالب والزيوت النباتية والهرمونات النباتية ، السيتوكينات ، والببتيدات العصبية (Kim et al. ، 2015 ، Miastkowska and Sikora ، 2018) ، وكذلك البوليفينول والفلافونيدات من مستخلصات نباتية طبيعية مختلفة مثل مقتطفات Vigna subterranean و Stichopus japonicus و Citrus aurantifolia و Ananus comosus و Manihot esculenta (Chutoprapat et al. ، 2020 ؛ Ding et al.، 2020 Boonpisuttinant et al.، 2022، Jampa et al.، 2022).

الرامبوتان الوردي أو Ngo See Chom Pu (Nephelium lappaceum L.) هو نبات من عائلة Sapindaceae ، وهو النبات الأصلي لمنطقة كلونج ، مقاطعة تشانثابوري ، في الجزء الشرقي من تايلاند. ثمار الرامبوتان الوردية (PR) حلوة وذات مذاق جيد. لديهم قشرة رقيقة ذات قشرة وردية مصفرة وعمود فقري وردي فاتح مع طرف أخضر فاتح ، وهو يختلف عن الأنواع الأخرى مثل Ngo Rongrien و Ngo Nasarn ، التي لها قشور وأشواك حمراء فاتحة. المواد الكيميائية النباتية الرئيسية الموجودة في نباتات الرامبوتان هي حمض إيلاجيك ، كوريلاجين ، جيرانين ، كيرسيتين ، وروتين (Phuong et al. ، 2019 ، Phuong et al. ، 2020). تم الإبلاغ سابقًا عن أن قشور الرامبوتان من الأنواع الأخرى قد تم العثور عليها تحتوي على مستوى عالٍ من المركبات الفينولية ولها العديد من الأنشطة البيولوجية مثل الكسح الجذري لـ DPPH ومضاد الالتهاب ومضاد الفيروسات ومضاد السرطان ومضاد للبكتيريا (Chingsuwanrote et al. .، 2016؛ Hernández-Hernández et al.، 2019؛ Rohman، 2017؛ Sukmandari et al.، 2017؛ Thitilertdecha and Rakariyatham، 2011). ومع ذلك ، لا تحتوي مستخلصات رامبوتان الوردي على تقرير علمي للأنشطة البيولوجية ، وخاصة نشاط مكافحة الشيخوخة للأغراض الصحية والجمالية. لذلك ، هدفت الدراسة الحالية إلى تقييم وتقييم إمكانات مستخلصات العلاقات العامة في تطبيقات البشرة في مستحضرات التجميل ومستحضرات التجميل والمستحضرات الصيدلانية. تشير التحقيقات في الأنشطة البيولوجية المضادة للشيخوخة في المختبر ، بما في ذلك تثبيط التيروزيناز والتكوين المضاد ، والتخليق الحيوي للكولاجين ، وتحفيز تعبيرات Sirt1 و Foxo1 mRNA ، والأنشطة الثلاثة المضادة للأكسدة وكذلك السمية الخلوية على الخلايا الليفية الجلدية البشرية ، إلى الكفاءة وسلامة مستخلصات العلاقات العامة التي يمكن تطويرها إلى منتجات العناية بالبشرة الطبيعية.

2. المواد والأساليب

2.1. التحضير والاستخراج

تم جمع الأجزاء الخمسة من الرامبوتان الوردي (PR) بما في ذلك الأوراق (L) والفروع (B) والبذور (S) والقشور الناضجة (R) والشباب (Y) من منطقة Klung ، Chantaburi ، تايلاند من يونيو إلى أغسطس 2017. تم تحديد عينات القسيمة بواسطة عالم نبات في Forest Herbarium في تايلاند وتم تسجيلها في المعشبة (الرمز: RSPG-RMUTT -0102) للمنتجات الطبيعية المبتكرة من وحدة أبحاث الحكمة التايلاندية ، كلية الطب التكاملي ، RMUTT ، باثوم ثاني ، تايلاند. تم قطع جميع أجزاء رامبوتان الوردي وغسلها بماء الصنبور وتجفيفها عند 60 درجة في فرن هواء ساخن وطحنها إلى مسحوق باستخدام مطحنة. تم استخراج جميع أجزاء الرامبوتان الوردي عن طريق استخلاص النقع والسوكسليت باستخدام 95٪ من الإيثانول كمذيب ، وهو الأكثر استخدامًا لاستخراج النباتات الطبية لأنه آمن واقتصادي. باختصار ، تم استخلاص 10 جم من كل من مساحيق العلاقات العامة بواسطة (1): النقع (M) في 100 مل من 95 بالمائة (حجم / حجم) إيثانول (بانكوك كحول صناعي ، تايلاند) مع الرج عند 200 دورة في الدقيقة عند درجة حرارة الغرفة (25 ± 2 درجة) لمدة 48 ساعة ؛ و (2): استخراج Soxhlet (Sox) مع 100 مل من 95 بالمائة (حجم / حجم) إيثانول عند 80 ± 5 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، تم ترشيح المستخلصات أولاً من خلال الصوف القطني ثم تم تمريرها عبر ورق ترشيح متصل بمضخة تفريغ. تم جمع الترشيح وتجميعها وتجفيفها بواسطة مبخر دوار. تم حفظ المستخلصات الخام PR في عبوات زجاجية وتخزينها في 4 درجات في الثلاجة لحين استخدامها. تم إنتاج محصول الاستخلاص على أساس الوزن الجاف. تم استخدام الإيثانول بنسبة 95 في المائة كمذيب لإذابة مستخلصات PR قبل التجارب.

2.2. المواد الكيميائية النباتية ، الفينولات الكلية والفلافونويد ، ومحتويات كيرسيتين

تم فحص المواد الكيميائية النباتية مثل الأنثراكينونات ، والقلويدات ، والكاروتينات ، والجليكوزيدات ، والفلافونويد ، والعفص ، والزانثونات من مستخلصات العلاقات العامة على النحو الموصوف سابقًا (Boonpisuttinant et al. ، 2022). يتم التعبير عن النتائج النوعية على أنها (زائد) للوجود و (-) لغياب المواد الكيميائية النباتية. تم فحص إجمالي محتويات الفينول (TPC) بواسطة مقايسة Folin-Ciocalteu كما هو موصوف سابقًا (Boonpisuttinant et al. ، 2022). باختصار ، تمت إضافة 50 لترًا من مستخلصات العلاقات العامة ، و 75 لترًا من كاشف Folin-Ciocalteu (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، و 75 لترًا بنسبة 7.5 بالمائة (وزن / حجم) Na2CO3 (Loba Chemie ، الهند) إلى {{13} } صفيحة ميكروسكوبية جيدة ، مختلطة بلطف ، ثم تحضينها في درجة حرارة الغرفة في مكان مظلم لمدة 90 دقيقة. بعد ذلك ، تم قياس الامتصاصيات عند الطول الموجي 725 نانومتر بواسطة قارئ الصفيحة الدقيقة. تم حساب محتويات الفينول من المنحنى القياسي لحمض الغال (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم إجراء النتائج على شكل مجم من مكافئ حمض الجاليك (GAE) / جم من المستخلص.

تم تقييم محتوى الفلافونويد الكلي (TFC) بطريقة كلوريد الألومنيوم المعدل بعد Shraim et al. (2021). باختصار ، تمت إضافة 50 لترًا من مستخلصات PR ، و 25 لترًا من 10 بالمائة AlCl3 (BDH Prolabo Chemicals ، بلجيكا) ، و 100 لتر من 5 بالمائة NaNO2 (Loba Chemie ، الهند) إلى 96- صفيحة ميكروية للبئر. بعد 5 دقائق من الحضانة ، تمت إضافة الألواح 25 لتر من 1 مولار هيدروكسيد الصوديوم (BDH Prolabo Chemicals ، بلجيكا). تم السماح بالتفاعل عن طريق الحضانة عند درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، تم قياس الامتصاصيات عند الطول الموجي 450 نانومتر بواسطة قارئ الصفيحة الدقيقة. تم حساب محتويات الفلافونويد من المنحنى القياسي للكيرسيتين (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم إجراء النتائج على شكل ملجم من معادلات كيرسيتين (QE) / جم من المستخلص.

تم فحص محتويات الكيرسيتين في مقتطفات العلاقات العامة بواسطة طريقة HPLC (Shaikh and Jain، 2 0 18). باختصار ، تمت إذابة كمية وزنها بدقة من الكيرسيتين القياسي في ميثانول في 1 0 0 مل من القارورة الحجمية ، للحصول على محلول مخزون 1 ، 000 lg / mL. تم بعد ذلك تخفيف الحلول القياسية 2- بشكل متسلسل إلى 3.125 مجم / مل. لتحضير العينة ، تمت إذابة 2.5 جم من المستخلصات في 25 مل من الميثانول في 25 مل من الدورق الحجمي للحصول على 1 ، 000 مجم / مل. تم إجراء جميع التحليلات على نظام Agilent 1260 infinity HPLC (ووترز ، ميلفورد ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) المجهز بكاشف صفيف ثنائي ضوئي. كان العمود التحليلي المستخدم عبارة عن عمود ممتد من Agilent Zorbax C18 (5 لتر × 100 مم × 4.6 مم) مع طور متحرك من الميثانول: 0.1 بالمائة من حمض الفوسفوريك (75:25) بمعدل تدفق 0.6 مل / دقيقة. تم الحفاظ على درجة حرارة العمود عند 25 درجة وتم ضبط الطول الموجي للكشف عند 370 نانومتر. تم ترشيح جميع المحاليل والمذيبات من خلال مرشح 0.22 lm وإزالة الغاز. كان حجم حقن العينة 10 لتر ، ووقت التشغيل كان 8 دقائق.

2.3 النشاط المضاد للأكسدة

2.3.1. نشاط إزالة الجذور الحرة

تم تقييم نشاط الكسح الجذور الحرة لمستخلصات العلاقات العامة بواسطة طريقة 2 ، 2- ثنائي فينيل -1- بيكريل هيدرازيل (DPPH) بواسطة Boonpisuttinant et al. (2 0 19). تمت إضافة كمية 100 لتر من مستخلصات العلاقات العامة أو حمض الأسكوربيك (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) كعنصر تحكم إيجابي و 100 لتر من 0.1 مجم / مل من محلول DPPH (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) في الإيثانول المطلق. 96 صفيحة جيدة. بعد الحضانة في درجة حرارة الغرفة في مكان مظلم لمدة 30 دقيقة ، تم قياس الامتصاصية بطول موجة 515 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية. تم حساب النسب المئوية لنشاط الكسح الجذري لـ DPPH وفقًا للصيغة التالية:

نسبة نشاط الكسح الجذري لـ DPPH {{0}} [A 0 - A1 / A0] × 100 (1)

حيث A 0 هو الامتصاص لعنصر التحكم و A1 هو امتصاص العينات. تم حساب التركيزات التي توفر الكسح بنسبة 50 في المائة (SC50) من الرسم البياني المرسوم بين النسبة المئوية لكسح الجذور الحرة وتركيزات العينة.

2.3.2. تثبيط بيروكسيد الدهون

تم تقييم تثبيط بيروكسيد الدهون لمستخلصات PR باستخدام طريقة Ferric-thiocyanate Boonpisuttinant et al. (2019). تمت إضافة كمية 50 لترًا من مستخلصات العلاقات العامة أو توكوفيرول (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) كعنصر تحكم إيجابي و 50 لترًا من حمض اللينوليك بنسبة 50 بالمائة (حجم / حجم) DMSO (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) إلى 96 صفيحة جيدة. بدأ التفاعل بإضافة 50 لتر من 5 ملي مولار NH 4- SCN و 50 لتر من 2 ملي مول FeCl2. بعد الحضانة عند 37 درجة في مكان مظلم لمدة 60 دقيقة ، تم قياس الامتصاصية بطول موجة 490 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية. تم حساب النسب المئوية لتثبيط بيروكسيد الدهون وفقًا للصيغة التالية:

حيث A 0 هو الامتصاص لعنصر التحكم و A1 هو امتصاص العينات. تم حساب التركيزات التي توفر 50 في المائة من تثبيط بيروكسيد الدهون (LC50) من الرسم البياني المرسوم بين النسبة المئوية لتثبيط بيروكسيد الدهون وتركيزات العينة.

2.3.3. إزالة معدن ثقيل

تم اختبار عملية إزالة معدن ثقيل لمستخلصات PR باستخدام طريقة مخلب الأيونات الحديدية (FIC) بواسطة Boonpisuttinant et al. (2019). تمت إضافة كمية 50 لترًا من مستخلصات PR أو EDTA (Loba Chemie ، الهند) كعنصر تحكم إيجابي ، 1 مجم / مل FeCl2 ، و 50 لترًا من 1 مجم / مل من ferrozine في 1 بالمائة HCl (TCI ، الولايات المتحدة الأمريكية) 96 صفيحة ميكروسكوبية جيدة. بعد الحضانة في درجة حرارة الغرفة في مكان مظلم لمدة 60 دقيقة ، تم قياس الامتصاصية بطول موجة 570 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية. تم حساب النسب المئوية لاستخلاب المعادن وفقًا للصيغة التالية:

حيث A 0 هو الامتصاص لعنصر التحكم و A1 هو امتصاص العينات. تم حساب التركيزات التي توفر 50 في المائة من عملية إزالة معدن ثقيل من المعدن (MC50) من الرسم البياني المرسوم بين النسبة المئوية لاستخلاب المعدن وتركيزات العينة.

2.4 تثبيط التيروزيناز الفطر

تم تقييم نشاط تثبيط تيروزيناز الفطر لمستخلصات PR باستخدام طريقة dopachrome المعدلة (Boonpisuttinant et al. ، 2 0 22). كمية 5 0 لتر من مستخلصات العلاقات العامة أو حمض الكوجيك (Sisco Research Laboratories (SRL) ، الهند) كعنصر تحكم إيجابي ، 5 0 lL من 0.1 مجم / مل L-tyrosine (Sigma- Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، تمت إضافة 50 لترًا من محلول فوسفات 0.1 ملي مولار ، و 50 لترًا من 0.1 مجم / مل من تيروسيناز الفطر (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) إلى 96- صفيحة ميكروية جيدة. قبل وبعد الحضانة عند 37 درجة مئوية في مكان مظلم لمدة 60 دقيقة ، تم قياس الامتصاصية بطول موجة 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية. تم حساب النسب المئوية لتثبيط التيروزينات في الفطر وفقًا للصيغة التالية:

نسبة تثبيط إنزيم الفطر التيروزيني=[(أ - ب) - (ج - د)] /=(أ - ب) × 100 (4)

حيث A هي امتصاص الفراغ بعد الحضانة ، B هي امتصاص الفراغ قبل الحضانة ، C هي امتصاص العينات بعد الحضانة ، و D هي امتصاص العينات قبل الحضانة. تم حساب التركيزات التي توفر 50 في المائة من تثبيط التيروزيناز (IC50 مجم / مل) من الرسم البياني المرسوم بين النسبة المئوية لتثبيط التيروزيناز وتركيزات العينة

2.5 أنشطة مكافحة الشيخوخة في المختبر على مزارع الخلايا

2.5.1. مزارع الخلايا

تم استخدام الأورام الميلانينية في الفئران (B16F10) والأورام الليفية لجلد الإنسان للتحقيق في تكوين مضادات الميلانين ، والتخليق الحيوي للكولاجين ، ومكافحة الشيخوخة لتعبير Sirt1 و Foxo1 mRNA ، على التوالي. تم الحصول على هاتين الخليتين من American Type Culture Collection (ATCC) ، فرجينيا ، الولايات المتحدة الأمريكية. تم استنبات الخلايا في Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) (Sigma-Aldrich Biotechnology ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية) مع 10 بالمائة من مصل بقري جنيني (FBS) (شركة سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميسوري ، الولايات المتحدة الأمريكية ) ، 100 وحدة دولية / مل من البنسلين و 100 مجم / مل من الستربتومايسين (Gibco BRL ، Gaithersburg ، الولايات المتحدة الأمريكية) في ظل الظروف القياسية عند 37 درجة مئوية تحت حاضنة ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 بالمائة قبل التجارب.

2.5.2. اختبار السمية الخلوية على الخلايا الليفية لجلد الإنسان

تم فحص التركيزات المختلفة لمستخلصات العلاقات العامة من أجل السمية الخلوية على الأورام الميلانينية الفئران (B16F1 0) والأرومات الليفية لجلد الإنسان بواسطة 3- (4 ، 5- ثنائي ميثيل ثيازول -2- yl ) -2 ، 5- مقايسة ثنائي الفينيل رباعي البروميد (MTT) كما تم وصفه سابقًا Boonpisuttinant et al. (2022). تم طلاء الخلايا الليفية لجلد الإنسان بكثافة 1 × 104 خلية لكل بئر في 96- ألواح بئر ، وضبط الحجم إلى 180 لترًا باستخدام DMEM ، وحضنت عند 37 درجة تحت جو من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 بالمائة لمدة 24 ساعة. ثم أضيفت المستخلصات بتركيزات مختلفة. تم تحضين الخلايا عند 37 درجة مئوية تحت جو من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 في المائة لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، تم غسل الخلايا بـ 10 ملي مولار من PBS عند درجة الحموضة 6.8 لمدة 3 مرات وإضافة 1 مل من 0.5 مجم / مل من محلول MTT كان (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية). بعد الحضانة عند درجة حرارة الغرفة لمدة 3 ساعات ، تمت إزالة محلول MTT ، وتمت إضافة 100 لتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) إلى كل بئر. تم اهتزاز الصفائح برفق عند 200 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة. تم قياس الامتصاصيات عند الطول الموجي 570 نانومتر من المحاليل باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة. تم حساب النسب المئوية لصلاحية الخلية وفقًا للصيغة التالية:

حيث يكون Acontrol هو الامتصاص لعنصر التحكم والعينة هي امتصاص العينات.

2.5.3. مضاد لتكوين الميلانين على خلايا B16F10

تم فحص مضاد تكوين الميلانين على خلايا B16F1 0 من مستخلصات العلاقات العامة باستخدام الطريقة الموصوفة سابقًا بواسطة Boonpisuttinant et al. (2022). تم زرع خلايا B16F10 بكثافة 2.5 × 105 خلية لكل بئر في 6- أطباق جيدة واحتضانها عند 37 درجة تحت جو من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 بالمائة طوال الليل. تمت إضافة المستخلصات بتركيز 0.01 مجم / مل. تم استخدام حمض كوجيك كعنصر تحكم إيجابي. تم تحضين الخلايا عند 37 درجة تحت جو من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 في المائة لمدة 72 ساعة. بعد ذلك ، تم جمع المواد الطافية في أنابيب microfuge النظيفة ، في حين تم غسل الخلايا بمحلول ملحي فوسفات 10 ملي مولار عند درجة الحموضة 6.8 لمدة 3 مرات ، وتم إذابتها في 200 لتر من هيدروكسيد الصوديوم بنسبة 10 في المائة ، وحضنت عند 60 درجة ساعة واحدة. . تم قياس الامتصاصية بطول موجة 450 نانومتر من المواد الطافية ومحللات الخلية باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة. تم حساب النسب المئوية لمحتوى الميلانين بالصيغة التالية:

2.5.4. التخليق الحيوي للكولاجين على الخلايا الليفية لجلد الإنسان

تم فحص التخليق الحيوي للكولاجين لمستخلصات العلاقات العامة كطريقة موصوفة سابقًا بواسطة Boonpisuttinant et al. (2 0 22). تم زرع الأرومات الليفية لجلد الإنسان بكثافة 5 × 1 0 5 خلايا لكل بئر في 6- أطباق جيدة واحتضانها عند 37 درجة تحت جو من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 بالمائة طوال الليل. ثم تمت إضافة المستخلصات بتركيز 0. 1 مجم / مل. تم استخدام حمض بيتا-الأسكوربيك كعنصر تحكم إيجابي. تم تحضين الخلايا عند 37 درجة تحت جو من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 في المائة لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، تم غسل الخلايا بـ 10 ملي مولار من PBS عند درجة الحموضة 6.8 لمدة 3 مرات ، تمت إضافة 1 مل من 0.1 بالمائة (وزن / حجم) محلول أحمر سيريوس (Sigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) في حمض البيكريك المشبع (Sisco Research Laboratories (SRL ) ، الهند) ، ثم تحضينها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. تمت إزالة الصبغة ، وغُسلت الألواح بـ 1 مل من 10 ملي مولار حمض الهيدروكلوريك (ميرك ميليبور ، ألمانيا) 5 مرات. بعد ذلك ، تم إذابة الخلايا بإضافة 1 مل من 0.1 مولار هيدروكسيد الصوديوم. تم قياس الامتصاصية بطول موجة 450 نانومتر من المواد الطافية ومحللات الخلية باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة. تم حساب النسب المئوية لكمية الكولاجين بالصيغة التالية:

حيث ، كان Csample هو محتوى الكولاجين للعينات ، وكان Ccontrol هو محتوى الكولاجين الخاص بالتحكم.

2.5.5. تحفيز الجينات المضادة للشيخوخة على الخلايا الليفية لجلد الإنسان

تم تحديد تحفيز الجينات المضادة للشيخوخة (Foxo1 و Sirt1) لمستخلصات العلاقات العامة بواسطة RT-PCR كما تم وصفه سابقًا بواسطة Polouliakh et al. (2 0 2 0). تم زرع الخلايا الليفية لجلد الإنسان بكثافة 5 × 105 خلية لكل بئر في 6- صفائح بئر تم تحضينها عند 37 درجة مئوية تحت جو من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 بالمائة طوال الليل. تمت إضافة المستخلصات بتركيز 0.01 مجم / مل. بعد الحضانة لمدة 24 ساعة ، تم استخلاص إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام NucleoSpin RNA Plus (Macherey Nagel ، Dueren ، ألمانيا) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. تم قياس كمية إجمالي الحمض النووي الريبي بواسطة مقياس التألق Qubit 2.0 (Invitrogen ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء المواد الأولية المحددة لـ RT-PCR بما في ذلك Foxo1 و Sirt1 و b-actin من Macrogen Oceania ، أستراليا. تم اتباع تسلسل البادئات المحددة ؛ Foxo1: 5 ′ -GAC GCC GTG CTA CTC GTT -3 ′ (للأمام) و 5′-CGG TTC ATA CCC GAG GTG -3 ′ (عكسي) ؛ Sirt1: 5 ′ -TAG CCT TGT CAG ATA AGG AAG GA -3 ′ (إعادة توجيه) ، 5 ′ -ACA GCT TCA CAG TCA ACT TTG T -3 ′ (عكس) ؛ و b-actin: 5 ′ TCA TGC AGT GTG ACG TTG ACA TCC GT -3 ′ (إعادة توجيه) ، 5 ′ -CCT AGA AGC ATT TGC GGT GCA CGA TG -3 ′ (عكسي). احتوت مخاليط PCR على 1x SuperScriptTM III من نظام RT-PCR بخطوة واحدة مع PlatinumTM Taq DNA Polymerase Supermix (Invitrogen ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، 250 نانومتر من بادئات محددة ، و 2 lg من الحمض النووي الريبي. تم إجراء جميع تفاعلات RT-PCR على TProfessional Basic Gradient 070-601 (Biometra GmbH ، Göttingen ، ألمانيا) في ظل ظروف التضخيم: 60 درجة مئوية و 30 دقيقة للنسخ العكسي ؛ ثم 40 دورة عند 94 درجة لمدة 15 ثانية من التمسخ ، و 55 درجة مئوية لمدة 30 ثانية من التلدين ، و 68 درجة لمدة 30 ثانية من التمديد ؛ وأخيراً عند 68 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. بعد عمليات RT-PCR ، تم فصل منتجات PCR بعد ذلك على هلام agarose بنسبة 1.5 في المائة ممزوجًا بمخزن تحميل DNA Novel Juice 6x (GeneDireXTM ، الصين) ، وتم عرضه باستخدام أداة إضاءة ، ثم تم تصويره باستخدام Quantity One 4.6.8 (أساسي) (مختبرات بيو راد ، إنك ، كاليفورنيا). بعد ذلك ، تم قياس كثافة النطاق باستخدام الصورة J (الإصدار 1.47 ، المعاهد الوطنية للصحة ، Bethesda ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وتم تطبيعها مع جين التدبير المنزلي ، b-actin.

2.6. تحليل احصائي

تم التعبير عن جميع التجارب على أنها متوسط ​​± الانحراف المعياري (SD) للتجارب المستقلة (ن {{0}}). تم تحليل الفروق الإحصائية بواسطة ANOVA مع اختبار Tukey (P <0.05). تم اختبار العلاقات بين الأنشطة الحيوية بواسطة معامل ارتباط بيرسون.

3. النتائج

3.1. ينتج عن الاستخراج ، الخصائص الفيزيائية ، والمحتويات الكيميائية النباتية لمستخلصات PR

تم عرض إنتاجية الاستخلاص والخصائص الفيزيائية والمحتويات الكيميائية النباتية لمستخلصات PR في الجدول 1. تراوحت غلة الاستخراج لمستخلصات PR من 10.62 بالمائة إلى 30.63 بالمائة. كانت المكونات الكيميائية النباتية الرئيسية لمستخلصات PR هي مركبات الفلافونويد. بشكل استثنائي ، لم تحتوي مستخلصات الرامبوتان الوردية من البذور (PR-SM و PR-S-Sox) على مركبات الفلافونويد ولكنها أظهرت فقط جليكوسيدات كمواد كيميائية نباتية. فقط ، أظهرت مقتطفات العلاقات العامة من القشور الناضجة والشابة بواسطة النقع (M) وجود الزانثونات ، وهي مادة بوليفينول قابلة للحرارة. بالإضافة إلى ذلك ، يبدو أن إنتاجية مستخلصات العلاقات العامة عن طريق استخراج Soxhlet (Sox) أعلى من النقع (M).

3.2 إجمالي محتويات الفينول (TPC) والفلافونويد (TFC) وكيرسيتين من مستخلصات العلاقات العامة

أعطى مستخلص PR من قشور الثمار الصغيرة بالنقع (PRY-M) أعلى محتوى فينولي إجمالي بواسطة مقايسة FolinCiocalteu بمقدار 67.6 0 ± 4.38 mgGAE / g ، بينما مستخلص PR من قشور الفاكهة الصغيرة بواسطة أعطى استخراج Soxhlet (PR-Y-Sox) أعلى محتوى إجمالي من الفلافونويد بواسطة مقايسة قياس الألوان لكلوريد الألومنيوم المعدل من 678.72 ± 23.59 mgQE / g (الشكل 1) (p <0. 05). ومع ذلك ، لم تظهر مستخلصات PR-BM و PR-SM و PR-S-Sox أي محتوى فينولي. تم الكشف عن أن جميع مستخلصات العلاقات العامة أظهرت محتويات كيرسيتين المحددة بواسطة تحليل HPLC. بالإضافة إلى ذلك ، أعطى مستخلص PR من قشور الثمار الناضجة بالنقع (PR-RM) أعلى محتوى من الكيرسيتين 190.10 ± 0.28 lg / mL. (الصورة 2).

3.3 مضادات الأكسدة وأنشطة تثبيط التيروزيناز الفطر من مستخلصات العلاقات العامة

يوضح الجدول 2 الأنشطة الثلاثة المضادة للأكسدة ، بما في ذلك نشاط إزالة الجذور الحرة بطريقة DPPH ، وتثبيط بيروكسيد الدهون بطريقة الحديديك-ثيوسيانات ؛ عملية إزالة معدن ثقيل بطريقة FIC ؛ وتثبيط فطر التيروزيناز لمستخلصات العلاقات العامة. أظهرت معظم مستخلصات PR باستثناء مستخلصات PR-LM و PR-BM و PR-S-Sox نشاطًا فائقًا في إزالة الجذور الحرة باستخدام نطاق SC5 {{1 0} 0. { {18}} 23 - {{2 0}}. 0 45 مجم / مل ، والتي كانت قابلة للمقارنة مع حمض الأسكوربيك القياسي (SC5 0 من 0. 0 36 ± 0. {{4 0} 0 3 مجم / مل) في p <0. 0 5. بالإضافة إلى ذلك ، أظهر مستخلص PR-LM أعلى تثبيط بيروكسيد الدهون مع LC5 0 من 0. 274 ± 0. 029 مجم / مل ، ونشاط إزالة معدن ثقيل باستخدام MC50 من 0.203 ± 0.021 مجم / مل ، والذي كان مشابهًا لمعيار a-tocopherol (LC50 من 0.122 ± 0.015 مجم / مل) و EDTA (MC50 من 0.518 ± 0.034 مجم / مل) ، على التوالي (p <0.05). أظهرت جميع مستخلصات العلاقات العامة نشاط تثبيط التيروزيناز في الفطر ، بينما أظهر مستخلص PR-R-Sox أعلى نشاط مع IC50 بمقدار 0.04 ± 0.02 مجم / مل ، والذي كان مشابهًا لحمض الكوجيك القياسي (IC50 من 0.02 ± 0.01 مجم. / مل) (ف <0.05).

3.4. السمية الخلوية لمستخلصات العلاقات العامة

Fig. 3 showed the cytotoxicity on the B16F10 cells (A) human skin fibroblasts by the MTT assay of the PR extracts. All of the PR  extracts at the concentrations of 0.01 and 0.1 mg/mL had no cytotoxicity on the B16F10 cells and human skin fibroblasts, respectively since they gave>80 في المائة من الجدوى النسبية مقارنة بالمجموعة غير المعالجة. على الرغم من ذلك ، فإن التركيزات الأعلى لجميع مستخلصات العلاقات العامة تعتبر سامة للخلايا على تلك الخلايا. لم يتم اختبار التركيز الأعلى من 1 مجم / مل لأنه لا يمكن أن يذوب تمامًا في المذيب.

3.5 مضادات تكوين الميلانين لمستخلصات العلاقات العامة

In this study, there is a screening method from many samples,  therefore we highlight only the highest concentration that had no cytotoxicity on both cells and might have the highest anti-melanogenesis activity. This concentration is the highest concentration that showed no cytotoxicity on the B16F10 cells after being treated with the PR extracts and kojic acid (>8 0 بالمائة من صلاحية الخلية) (البيانات غير معروضة). أظهر الشكل 4 مضادًا لتكوين الميلانين على خلايا الأورام الميلانينية (B16F1 0) من مستخلصات العلاقات العامة بتركيز 0.01 مجم / مل. أظهرت جميع مستخلصات العلاقات العامة التولد المضاد على خلايا B16F10. مقتطفات العلاقات العامة من الأوراق والفروع والبذور والفواكه الناضجة والشابة عن طريق استخراج Soxhlet (PR-L-Sox و PR-B-Sox و PR-S-Sox و PR-R-Sox و PR-Y-Sox ) أعلى مستوى مضاد لتكوين الميلانين بنسبة 50.6-54.1 في المائة ، والذي كان متفوقًا بشكل كبير على حمض الكوجيك القياسي (37.9 ± 3.9 في المائة) بحوالي 1.5 ضعف ، في حين أن نشاط مستخلصي RB-M و PR-YM كان مشابهًا لمادة حمض كوجيك القياسي (p <0.05).

3.6 تحفيز التركيب الحيوي للكولاجين لمستخلصات العلاقات العامة

أظهرت جميع مستخلصات العلاقات العامة بتركيز {0}. 1 مجم / مل تحفيزًا لتخليق الكولاجين الحيوي على الخلايا الليفية لجلد الإنسان الذي تحدده طريقة Sirius Red. تركيز 0. 1 مجم / مل من مستخلصات PR وحمض الاسكوربيك هو أعلى تركيز لم يُظهر أي سمية خلوية على الخلايا الليفية لجلد الإنسان. أظهرت مقتطفات PR من الأوراق والفروع عن طريق مستخلص Soxhlet (مستخلصات PR-LM و PR-BM) أعلى تخليق حيوي للكولاجين (16.46 ± 0. {{2 0}} 7 بالمائة و 14.66 ± 0.09 بالمائة ، على التوالي) ، والتي كانت أقل من حمض الأسكوربيك القياسي (34.07 ± 0.03 بالمائة) بحوالي ضعفين (p <0.05) (الشكل 5).

3.7 تحفيز الجينات المضادة للشيخوخة

أظهر الشكل 6 تحفيز الجينات المضادة للشيخوخة بما في ذلك جينات Sirt1 و Foxo1 على الخلايا الليفية لجلد الإنسان لمستخلصات العلاقات العامة في 0. 0 تم تحديد 1 مجم / مل بواسطة تقنية RT-PCR. تركيز {{2 0}}. 0 1 مجم / مل من مستخلصات العلاقات العامة وريسفيراترول هو أعلى تركيز لم يُظهر أي سمية خلوية على الخلايا الليفية لجلد الإنسان. ومن المثير للاهتمام ، أن مستخلصات PR-L-Sox و PR-S-Sox و PRR-M و PR-R-Sox و PR-YM و PR-Y-Sox عند 0.01 مجم / مل أظهرت أعلى تحفيز لمضاد للشيخوخة Foxo1 تعبير mRNA (495 نقطة أساس) ، والذي كان متفوقًا بشكل كبير على ريسفيراترول القياسي بحوالي 2 أضعاف (p <0.05). من ناحية أخرى ، أظهرت مستخلصات PR-S-Sox و PR-Y-Sox أعلى تحفيز لتعبير مرنا Sirt1 المضاد للشيخوخة (160 نقطة أساس) ، والذي كان أقل من ذلك الخاص بالريسفيراترول (p <0.05). على الرغم من أن جميع مستخلصات العلاقات العامة تقريبًا أظهرت تحفيزًا للتعبير الجيني المضاد للشيخوخة ، إلا أن مستخلصات PR-R-Sox و PR-BM لم تحفز تعبير Sirt1 و Foxo1 ، على التوالي.

4. مناقشة

عادة ما يتم فحص العديد من النباتات الطبيعية بحثًا عن المواد الكيميائية النباتية والمركبات النشطة بيولوجيًا والخصائص البيولوجية للعثور على مكونات طبيعية واعدة جديدة للأدوية والمكملات الغذائية وتطبيقات مستحضرات التجميل. الرامبوتان الوردي هو أحد الفواكه المحلية في منطقة كلونج ، مقاطعة تشانثابوري ، تايلاند. هناك عدد قليل من التقارير العلمية عن أنشطتها البيولوجية والصيدلانية ، وخاصة نشاطها لمكافحة الشيخوخة. في هذه الدراسة ، تم استخلاص الأجزاء الخمسة من الرامبوتان الوردي ، بما في ذلك الأوراق والفروع والبذور والقشور من الثمار الناضجة والشابة ، عن طريق النقع واستخراج Soxhlet باستخدام 95 بالمائة من الإيثانول كمذيب. تمت دراسة العديد من المواد الكيميائية النباتية المكتشفة حديثًا ، بما في ذلك الكيرسيتين ، وهي مستقلب ثانوي للنباتات ، لتأثيراتها المضادة للشيخوخة في الخلايا والحيوانات والبشر (Phuong et al.، 2 0 2 0). من نتائج هذه الدراسة ، كانت مركبات الفلافونويد هي المواد الكيميائية النباتية الرئيسية لمستخلصات العلاقات العامة. تم الإبلاغ سابقًا أن المستخلصات من الأنواع الأخرى من الرامبوتان تم تقديمها مع المواد الكيميائية النباتية بما في ذلك الفلافونويد والعفص والكاروتينات ، والتي ترتبط بخصائصها المضادة للأكسدة (Rohman ، 2 0 17). قد يكون عدم وجود الزانثونات بواسطة استخراج Soxhlet ناتجًا عن درجات حرارة عالية (Yuvanatemiya et al. 2 0 22 ، Sankeshwari et al. ، 2 0 18). الكيرسيتين هو أحد أكثر المركبات الفينولية والفلافونويد وفرة الموجودة في العديد من الفواكه والخضروات ، وكذلك في الرامبوتان (Phuong et al.، 2 0 2 0). في هذه الدراسة ، يمكن لارتفاع درجة الحرارة (80 درجة مئوية) لعملية Soxhlet استخراج مادة غير قابلة للحرارة قابلة للتغير بما في ذلك كيرسيتين أكثر من العملية الباردة. يمكن استخدام كمية كيرسيتين التي يحددها تحليل HPLC كعلامة لمراقبة جودة مستخلصات العلاقات العامة على مقياس الإنتاج. كان معامل ارتباط بيرسون (R2) بين TFC و TPC لمستخلصات PR هو 0.825 يصنف علاقة قوية جدًا (R 2=± 0.80 إلى ± 1. 00) (p <0.01) مما يعني إذا تم زيادة TFC ، ستزداد TPC بشكل كبير أيضًا. بالإضافة إلى ذلك ، كان معامل R2 بين TPC ومحتوى كيرسيتين لمستخلصات PR 0.650 يصنف علاقة قوية (R 2=± 0.60 إلى ± 0.79) (p <0.05). قد يتأثر الاختلاف في غلات الاستخراج ، والمواد الكيميائية النباتية ، وكذلك TPC و TFC و quercetin لمستخلصات PR بالمذيبات وعمليات الاستخراج ودرجات الحرارة (Chutoprapat et al. ، 2020). وجدت العديد من الدراسات أن مركبات الفلافونويد والفينول ، وكذلك الكيرسيتين ، لها مجموعة واسعة من الأنشطة البيولوجية والصيدلانية ، بما في ذلك النشاط المضاد للميكروبات ، ومضادات الأكسدة ، ومضاد الالتهاب ، ومكافحة الشيخوخة (بانش وآخرون ، 2016 ، شهيدي. and Yeo، 2018، Musika et al.، 2021، Wang et al.، 2022).

كما ذكرنا سابقًا ، يمكن أن تسبب أنواع الأكسجين الجذرية ، أو ROS ، ضررًا مرتبطًا بالعمر على مستوى الخلايا والأنسجة ، مما يؤدي إلى تسريع الشيخوخة الزمنية والبيئية التي تتميز بالتجاعيد والتصبغ اللانمطي (Papaccio et al.، 2 0 22). يمكن لمضادات الأكسدة الطبيعية التخلص من الجذور الحرة ، مما يؤدي إلى تقليل التأثيرات المضادة للالتهابات والوقاية من السرطان والسكري واضطرابات الدماغ وتقليل ضغط الدم وتصلب الشرايين وإبطاء شيخوخة الجلد (Miracle Uwa، 2 {{20} } 17). تم التحقيق على نطاق واسع في إزالة الجذور الحرة ، وتثبيط بيروكسيد الدهون ، واستخلاب المعادن كنظم للتحقيق في النشاط المضاد للأكسدة للمنتجات الطبيعية. بالنسبة لكسح الجذور الحرة DPPH ، يتم تقليل الإلكترونات الفردية في جزيئات DPPH عن طريق تلقي ذرة هيدروجين من مضادات الأكسدة لتصبح جزيئات هيدرازين (Ionita ، 2021). تعتمد طريقة بيروكسيد الدهون على أكسدة النحاس (II) إلى أيونات النحاس (III) التي يمر بها مستحلب حمض اللينوليك (Bakir et al. ، 2017) ، بينما تعتمد طريقة إزالة معدن ثقيل على أكسدة النحاس (II) لتشكيل مركب حديدي-فيروزين (Wong et al. ، 2014). قد يكون وجود محتوى الفلافونويد والفينول في مستخلصات العلاقات العامة من هذه الدراسة قد ساهم في الأنشطة الثلاثة المضادة للأكسدة. وجد أن المركبات الفينولية (على سبيل المثال ، كوريلاجين ، وحمض إيلاجيك ، وجيرانين ، وكيرسيتين) من مستخلصات رامبوتان تظهر نشاطًا مضادًا للأكسدة عن طريق الكسح الجذري لـ DPPH وتثبيط بيروكسيد الدهون (هيرنانديز-هيرنانديز وآخرون ، 2019 ، Phuong et al. ، 2019، Monrroy et al.، 2020، Araujo et al.، 2021). هذا مشابه للتقارير السابقة التي تفيد بأن مستخلصات القشور من الأنواع الأخرى من الرامبوتان تظهر نسبة عالية من TPC و TFC ، بالإضافة إلى أنها تُظهر أنشطة أقوى من مضادات الأكسدة مثل ABTS و DPPH و O 2- الكسح ، وقدرة الفحص الحديدي (FRAP) ) ، وعوامل مخلبية ، وبيروكسيد الدهون (Lourith et al. ، 2017 ، Rohman ، 2017 ، Monrroy et al. ، 2020). ومن المثير للاهتمام ، أن معامل R2 بين عملية إزالة معدن ثقيل وتثبيط بيروكسيد الدهون لمستخلصات PR أظهر ارتباطًا إيجابيًا قويًا جدًا قدره 0.953 ، مما يصنف علاقة قوية عند مستوى معنوي من p <0.01.

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】