arلغة
الصفحة الرئيسية / معرفة / المحتوى

معرفة

يعمل مستخلص الجينسنغ الأحمر الكوري على تحسين تولد الميلانين في البشر ويحفز تأثيرات مضادة للشيخوخة في الفئران عديمة الشعر المشعّة بالأشعة فوق البنفسجية ، الجزء 1

May 16, 2023

خلاصة

خلفية: الجينسنغ باناكس علاج عشبي رائع لجميع أمراض الجسم. قد يكون هذا سبب تسميته باناكس ، مما يعني "علاج للجميع". الميلانين هو صبغة تعطي لونا لبشرتنا. ومع ذلك ، فإن زيادة إنتاج الميلانين يمكن أن يؤدي إلى تكوين الورم. زاد تعرض الإنسان للأشعة فوق البنفسجية ب بشكل كبير بسبب زيادة ضوء الشمس بسبب الاحتباس الحراري. وبالتالي ، لوحظت ظاهرة تسمى التشيخ الضوئي لجميع ألوان وأنواع البشرة. نتيجة لهذه الظاهرة ، يتم زيادة مجموعة من الإنزيمات تسمى matrix metalloproteinases ، والتي تعمل بمثابة إنزيمات تحلل لبروتينات المصفوفة خارج الخلية ، وخاصة الكولاجين ، مما يؤدي إلى استنفاد الكولاجين مما يؤدي إلى تكوين التجاعيد المبكرة.

وفقًا للدراسات ذات الصلة ، فإن cistanche هو عشب شائع يُعرف باسم "العشبة المعجزة التي تطيل العمر". مكونه الرئيسي هو cistanoside ، الذي له تأثيرات مختلفة مثل مضادات الأكسدة ومضادات الالتهابات وتعزيز وظيفة المناعة. تكمن الآلية بين cistanche وتبييض الجلد في التأثير المضاد للأكسدة من cistanche glycosides. ينتج الميلانين في جلد الإنسان عن طريق أكسدة التيروزين المحفز بالتيروزيناز ، ويتطلب تفاعل الأكسدة مشاركة الأكسجين ، لذلك تصبح الجذور الخالية من الأكسجين في الجسم عاملاً مهمًا يؤثر على إنتاج الميلانين. يحتوي Cistanche على السيستانوزيد ، وهو مضاد للأكسدة ويمكن أن يقلل من إنتاج الجذور الحرة في الجسم ، وبالتالي يمنع إنتاج الميلانين.

rou cong rong benefits

انقر فوق مستودع Cistanche Chemist للتبييض

لمزيد من المعلومات:

david.deng@wecistanche.com WhatApp: 86 13632399501

طُرق: لذلك ، في دراستنا ، استخدمنا خط خلايا سرطان الجلد الفأري B16 / F10 لدراسة تثبيط تكون الميلانين بواسطة مستخلص الجينسنغ الكوري الأحمر (KRG) في المختبر و HRM -2 الفئران الخالية من الشعر المعرضة للأشعة فوق البنفسجية الاصطناعية B لفحص فعالية KRG في الجسم الحي. قمنا بإعداد كريم مستخلص الجينسنغ الأحمر بنسبة 3 في المائة وقمنا بتقييم آثاره على جلد الإنسان.

نتائج: أظهرت نتائجنا أن KRG تسببت في قمع قوي لنشاط التيروزيناز وإنتاج الميلانين في خلايا B16 / F10 ؛ علاوة على ذلك ، فقد قلل من نسخ وترجمة المكونات المشاركة في مسار إنتاج الميلانين. في التجارب في الجسم الحي ، قامت KRG بقمع التعبير عن البروتينات المعدنية للمصفوفة ، وتقليل تكوين التجاعيد ، وتثبيط تدهور الكولاجين. على بشرة الإنسان ، يزيد كريم الجينسنغ من مرونة الجلد ورطوبته ويعزز لون البشرة.

خاتمة: لذلك ، نستنتج أن KRG هو منتج ممتاز لتبييض البشرة ومكافحة الشيخوخة.

·2019 الجمعية الكورية للجينسنغ. خدمات النشر من قبل Elsevier BV هذه مقالة مفتوحة الوصول

1. مقدمة

الميلانين هو مركب مسؤول عن تصبغ الجلد ، ويعزى تنوع ألوان الجلد في الجنس البشري إلى كمية الخلايا المنتجة للميلانين الموجودة في الجلد [1]. تسمى العملية المسؤولة عن تكوين الميلانين تكوين الميلانين. في هذه العملية ، يرتبط هرمون تحفيز الخلايا الصباغية (a-MSH) بمستقبلاته (أي مستقبل الميلانوكورتين 1) مما يؤدي إلى ارتفاع مستويات cAMP ، والذي بدوره ينشط العامل المرتبط بصغر العين (MITF) من خلال مسارات مختلفة ، مثل cyclic Adenosine Monophosphate (cAMP) بروتين رابط لعنصر استجابة ، كيناز منظم خارج الخلية ، وبروتين كيناز B (AKT) ، مما تسبب في تدهوره. بسبب هذا التحلل ، تتأثر خطوة تحديد المعدل في عملية تكوين الميلانين (أي عمل إنزيم التيروزيناز ، TYR) وتصبح نشطة. TYR هي المسؤولة عن تحويل التيروزين إلى L -3 ، 4- ثنائي هيدروكسي فينيل ألانين (L-DOPA) ، الذي يشكل الميلانين. يعد البروتين 1 المرتبط بالتيروزيناز (TRP -1) والبروتين 2 المرتبط بالتيروزيناز (TRP -2) من العوامل الأخرى المصبّة لـ TYR و MITF التي يتم تنشيطها وتشارك في تكوين الميلانين. وبالتالي ، طوال العملية برمتها ، يعتبر TYR هو العنصر الأكثر أهمية في تنظيم إنتاج الميلانين في خلايا الجلد [2-4].

cistanche herb

Panax ginseng هو عشب عجيب تم استهلاكه على نطاق واسع في شرق آسيا لأكثر من 1 ، 000 عام حيث أن له العديد من الآثار الصحية المفيدة. وهي متوفرة في أشكال متنوعة ، بما في ذلك المشروبات والكبسولات والأقراص [5،6]. كشفت الدراسات السابقة عن آثار الجينسنغ الجديرة بالملاحظة عند استخدامه لتقليل الإصابة بأنواع مختلفة من الأورام والعديد من التشوهات العقلية ومرض السكري وارتفاع ضغط الدم وفرط شحميات الدم والالتهابات [7-13]. على وجه الخصوص ، في شبه الجزيرة الكورية ، تشكل مكملات الجنسنغ جزءًا من النظام الغذائي العادي. من الناحية التجارية ، يتوفر الجينسنغ في شكل خلاصة جذر الجنسنغ الكامل ، أو مستخلصات جينسينوسيد مفردة ، أو كبسولات. الجينسنوسيدات هي المركبات النشطة المكونة الموجودة في جذر الجنسنغ الكامل والمسؤولة عن خصائص تعزيز الصحة الفعالة للجينسنغ [14].

كانت هناك العديد من الدراسات حول تأثير جينسينوسيد واحد على إنتاج الميلانين والكلف [15]. ومع ذلك ، في الوقت الحالي ، لم تبلغ أي دراسة عن التأثيرات المضادة للميلانين لمستخلص الجينسنغ الكوري الأحمر (KRG) على إنتاج الميلانين وفحصت تأثير تبييض البشرة ومضاد الشيخوخة ، خاصة عند البشر. لذلك ، قمنا بالتحقيق في تثبيط TYR وتثبيط إنتاج الميلانين بواسطة KRG في المختبر في خط خلايا سرطان الجلد B16 / F10 من خلال دراسة آلية للمسارات المشاركة في هذه العملية. أشارت نتائجنا إلى أن KRG يثبط بشكل ملحوظ نشاط TYR ويقلل من محتوى الميلانين عبر مسار تدهور MITF. علاوة على ذلك ، كشفت دراستنا في الجسم الحي باستخدام نموذج الماوس الخالي من الشعر المشع بالأشعة فوق البنفسجية B (UVB) (HRM -2) عن التشيخ الضوئي وفرط التصبغ أن إنتاج الميلانين في فئران HRM -2 قد انخفض بشكل كبير وملحوظ بواسطة تطبيق KRG (150 و 300 مجم / كجم). علاوة على ذلك ، أظهر كريم مستخلص الجينسنغ الأحمر بنسبة 3 في المائة خصائص ممتازة في مكافحة التجاعيد وتبييض البشرة لدى البشر. وهكذا ، خلصنا إلى أن تركيبات KRG و KRG ككريم يجب أن تكون مفيدة في صناعة مستحضرات التجميل كعوامل تبييض البشرة ومكافحة الشيخوخة.

2. المواد والأساليب

2.1. المواد الكيميائية والكواشف

وسيط النسر المعدل Dulbecco (WelGene Co ، كوريا) ؛ مصل بقري جنيني (شركة WelGene ، كوريا) ؛ الستربتومايسين والبنسلين (لونزا ، دكتوراه في الطب ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ كاشف TRIzol (Invitrogen ، كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ تم الحصول على بادئات oligodT و MITF و TYR و TRP -1 و TRP -2 و b-actin من (Bioneer ، Daejeon ، كوريا). 3- (4 ، 5- Dimethylthiazol -2- yl) -2 ، 5- diphenyltetrazoliumbromide تم شراؤه من Sigma-Aldrich. تم الحصول على الأجسام المضادة لـ MITF و TYR و TRP -1 و TRP -2 (Santa Cruz Biotechnology، Santa Cruz، Inc.، TX، USA). تم شراء Mushroom TYR و L-DOPA من Sigma (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية). جميع الكواشف الأخرى كانت من الدرجة التحليلية المحلية.

cistanche for sale

2.2. إعداد عينة

تم تقديم حكومة إقليم كردستان من قبل مؤسسة كوريا للجينسنغ التي تتكون من تركيبة الجينسنوسيدات الإحدى عشر التالية (مجم / جم): Rb 1 6. 67، Rb 2 2. 79، Rc 1. 0 1 ، Rd 1.01 ، Rg3s 2.22 ، Rg3r 0.79 ، Re 1.97 ، Rf 1.40 ، Rg 1 1. 67 ، Rg2s 1.23 ، و Rh 1 0 .77 كما تم تحليلها بواسطة تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء (HPLC). بينما 3 في المائة من كريم الجينسنغ الأحمر (تركيبة الجينسنوسيدات كانت هي نفسها الموصوفة سابقًا) أعدتها جامعة كيونغنام ، تشانغوون ، جمهورية كوريا. باختصار ، تم تسخين خليط من 80 مل من الماء النقي و 30 مل من زيت اللوز الحلو أو زيت بذور عباد الشمس عند 80 درجة مئوية. بعد ذلك ، تمت إضافة الماء النقي مرة أخرى واستحلب باستخدام الخلاط. بعد ذلك ، تمت إضافة توكوفيرول كمضاد للأكسدة ، وأضيف 3 في المائة من مستخلص الجينسنغ الأحمر كمكون نشط ؛ الخليط كان يسمى كريم الجنسنغ الأحمر.

2.3 تقييم ثبات كريم الجنسنغ الأحمر

تم إجراء الاختبارات التالية لتقييم ثبات كريم الجينسنغ الأحمر بنسبة 3٪:

cistanche amazon

(1) اختبار درجة الحموضة

تم قياس الأس الهيدروجيني لكريم الجنسنغ الأحمر في الأيام 1 و 7 و 15 و 30 من تجربة اليوم 30-. كان الرقم الهيدروجيني لكريم الجينسنغ الأحمر حمضيًا قليلاً ولم يظهر أي تغيير تقريبًا على مدار الثلاثين يومًا (الجدول 2).

(2) اختبار تلون

تم قياس درجة تغير لون كريم الجنسنغ الأحمر في الأيام 1 و 7 و 15 و 30. ولم يلاحظ أي تغيير في اللون خلال الفترة التجريبية 30- يومًا (الشكل التكميلي 1).

(3) اختبار البقعة

للتحقق من الاستجابة التحسسية لكريم الجينسنغ ، تم وضع 1 مل من كريم الجنسنغ الأحمر على منطقة الظهر المركزية الظهرية (1 سم × 1 سم) من المتطوعين ، وتم تقييم رد فعل الجلد بعد 24 ساعة. تم تقييم أنواع مختلفة من تفاعلات الجلد ، كما هو موضح في الجدول التكميلي. 3A-B ، ولم يلاحظ أي حمامي أو وذمة أو تفاعل غير مرغوب فيه. لذلك ، تم اختبار هذا الكريم لمزيد من العوامل الأخرى على الجلد. علاوة على ذلك ، تم تقييم درجة تهيج الجلد ، كما هو موضح في الجدول التكميلي. 4 ، للحصول على مؤشر تهيج الجلد الأساسي.

2.4 نظام علاج كريم الجنسنغ الأحمر وتقييم التأثيرات على محتوى الزيت والرطوبة والمرونة وتبييض البشرة

لتقييم آثار كريم الجنسنغ الأحمر على محتوى الزيت ، ومحتوى الرطوبة ، والمرونة ، وتبييض الجلد ، 0 امرأة واحدة (حوالي 40 عامًا ، غير مدخنات ، وليس لديهن تاريخ للإصابة بأمراض الجلد أو علاج الوجه) قسمت إلى مجموعتين تحتوي كل منهما على خمسة أفراد: المجموعة الضابطة ، حيث تم تطبيق الكريم بدون مستخلص الجينسنغ الأحمر (غير KRG) ، والمجموعة التجريبية ، حيث تم تطبيق الكريم بمستخلص الجينسنغ الأحمر (المجموعة المعالجة بحكومة إقليم كردستان). تم حساب عدد الأفراد باستخدام البرنامج الإحصائي G * Power 3.1 omicX ؛ كان معامل الأهمية 0.05 والقوة 80 وعدد المجموعات 2 وعدد القياسات المتكررة 6.

how to take cistanche

تم اختيار عشرة أفراد (خمسة في المجموعة التجريبية وخمسة عشر في المجموعة الضابطة) لحساب معدل التسرب بنسبة 20 في المائة. تم السماح بتجارب التجارب البشرية من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لجامعة Kyungnam (IRB # 1040460- A -2017-040).
كل يوم لمدة شهر ، تم وضع الكريم على الجلد بعد ساعة واحدة من التنظيف. بعد ذلك ، تم قياس المعلمات المذكورة أعلاه في الجلد في الأسابيع 0 و 2 و 4.

تم وضع الكريم على منطقة T (1) من الوجه ، والتي تقع على ارتفاع 1 سم فوق الجزء العلوي من منتصف حرف T على الجبهة بين الحاجبين وعلى الجانبين الأيمن والأيسر لمدة 3e5 ثوانٍ. تم رسم منطقة U (2) أفقيًا من الأنف وعموديًا لأسفل من ذيل العين ، كما هو موضح في الشكل التكميلي 2. لتوحيد شروط القياس ، تم إجراء البحث عند 24 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية و 55 بالمائة ± 10٪ رطوبة نسبية.

تم قياس محتوى الزيت ، والمحتوى المائي ، والمرونة ، ومحتوى الميلانين باستخدام مقياس الدهون SM815 (إلكترونيات CK ، ألمانيا) ، ومقياس الكرونومتر CM825 (إلكترونيات CK ، ألمانيا) ، ومقياس سداسي MX18 (إلكترونيات CK ، ألمانيا) ، ومقياس قطع (إلكترونيات CK ، ألمانيا) ، ألمانيا) ، على التوالي ، عن طريق لمس هذه الأدوات للجلد لمدة 3-5 ثانية.
تم تحليل محتوى الرطوبة والزيوت ولون البشرة من خلال اختبار T. تم اعتبار التحليل التجريبي لنتائج الدراسة للإشارة إلى تغييرات ذات دلالة إحصائية لقيم p لـ<0.05. After the end of the application period, the satisfaction of the product assessed through a questionnaire was converted into a score for each response.

2.5 زراعة الخلايا

تم الحصول على خط خلايا الورم الميلانيني B16 / F10 من مجموعة American Type Culture Collection وتم تربيتها في Dulbecco's Modified Eagle's Medium مع 8 بالمائة من مصل بقري جنيني (WelGene Co ، Daejeon) ، 100 وحدة دولية / مل من البنسلين ، و 100 مجم / مل من كبريتات الستربتومايسين (لونزا ، دكتوراه في الطب ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الحفاظ على الخلايا في حاضنة مرطبة بنسبة 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية.

2.6. مقايسة تثبيط TYR الخالية من الخلايا

تم إجراء الفحص باستخدام بروتوكول معدّل قليلاً كما هو موضح سابقًا [3]. باختصار ، تم وضع 1 0 مل من KRG في ثلاث نسخ في 96- صفيحة جيدة وخلطها مع 60 مل من 50 مليمول / لتر من المخزن المؤقت للفوسفات على الجليد (الرقم الهيدروجيني 6.8). بعد ذلك ، تمت إضافة 20 مل من 0.9 مجم / مل L-DOPA إلى كل بئر. أخيرًا ، تمت إضافة 10 مل فطر TYR إلى كل بئر ، وتم تحضين اللوحة عند 27 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. بعد الحضانة ، تم قياس إنتاج الدوباكروم قياسًا طيفيًا عند 450 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة (Versamax ؛ Molecular Devices ، LLC ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ في هذه التجربة ، تم استخدام حمض الكوجيك كعنصر تحكم إيجابي [16].

cistanche side effects reddit

2.7. مقايسة تثبيط الميلانين

تم زرع خلايا B16 / F1 0 في 6- ألواح زرع بئر بكثافة 2.5 × 103 خلية / بئر وحضنت لمدة 5 أيام. بعد أن وصلت الخلايا إلى الطلاقة المرغوبة ، تم تطبيق علاج KRG وتم تحفيز الخلايا باستخدام MSH. تم تحضين الخلايا بعد ذلك لمدة 3 أيام ، وتم حصادها باستخدام 0.25 بالمائة من محلول حمض التربسين إيثيلين ديامينيتتراسيتيك ، وتم نقلها إلى 1. 5- مل من أنابيب الطرد المركزي الدقيقة. تم بعد ذلك الطرد المركزي للأنابيب عند 10 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ، وتم إذابة الحبيبات في 2 مول / لتر هيدروكسيد الصوديوم لمدة 15 دقيقة عند 60 درجة مئوية. تم قياس امتصاص كل بئر عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية (Versamax ؛ Molecular Devices ، LLC ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تمت مقارنة الامتصاصية مع المنحنيات القياسية المنتجة من الميلانين الاصطناعي (سيغما).

2.8 تجربة الحيوانات وتجميعها

تم الحصول على الفئران الخالية من الشعر التي تمتلك مادة الميلانين من الذكور البالغ من العمر ستة أسابيع من شركة Central Lab Animal Inc. (سيول ، كوريا الجنوبية) وتم إيواؤها في غرفة خاضعة للرقابة (23 درجة ± 1 درجة ، 55 بالمائة ± 5 بالمائة الرطوبة النسبية ، دورة الضوء / الظلام لمدة 12 ساعة) وإمكانية الوصول إلى الماء والأعلاف. تم إجراء جميع التجارب على الحيوانات بدقة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسية بجامعة دايجون (دايجون ، كوريا) (رقم الإذن: DJUARB 2017-033). بعد فترة تأقلم مدتها أسبوع واحد ، تم تقسيم الفئران بشكل عشوائي إلى خمس مجموعات ، تحتوي كل مجموعة على خمسة عشر حيوانًا: المجموعة الطبيعية التي لم تتلق أي علاج ؛ مجموعة التحكم المشعة بالأشعة فوق البنفسجية ؛ المجموعة الضابطة الإيجابية ، والتي تلقت 0. 01٪ من الواقي من الشمس وأشعة UVB ؛ مجموعة KRG ذات الجرعة المنخفضة ، والتي تلقت 150 مجم / كجم من KRG مع إشعاع UVB ؛ ومجموعة KRG ذات الجرعات العالية ، والتي تلقت 300 مجم / كجم من KRG مع إشعاع UVB.

2.9 تشعيع الأشعة فوق البنفسجية وتحريض الشيخوخة الضوئية

تم تشعيع الجلد الظهري لفئران HRM {0} بواسطة مصباح UVB (15 واط ؛ أقصى طول موجي ، 312 نانومتر ؛ كثافة الأشعة فوق البنفسجية ، 100 ميغاواط سم مكعب ؛ شركة IedaBoeki ، طوكيو ، اليابان). لتقييم آثار التحكم الإيجابي (0.01٪ من الواقي الشمسي) و KRG على تكوين التجاعيد والتصبغ ، تم تعريض فئران HRM -2 للإشعاع باستخدام 100 مللي جول / سم 2 من الأشعة فوق البنفسجية المتوسطة (جرعة واحدة صغيرة من الحمامي =100 مللي جول / سم 2 ) يوميًا للأسبوع الأول ثم 200 مللي جول / سم 2 من الأشعة فوق البنفسجية من الأسابيع 2-5. تمت مراقبة الفئران ثلاث مرات في الأسبوع. تم قياس المدخول الغذائي ووزن الجسم كل أسبوع لمدة 12 أسبوعًا.

cistanche para que serve

2.10. التأثير على إنتاج الميلانين في فئران HRM -2

لتقييم إنتاج الميلانين الناتج عن تعرض الفئران للأشعة فوق البنفسجية ، تم تقسيم المنطقة الظهرية للفئران إلى الجانبين الأيمن والأيسر. في جميع المجموعات باستثناء المجموعة العادية ، تلقى الجانب الأيسر إشعاع UVB (تحكم) أو واقي من الشمس أو أشعة KRG و UVB لمدة 5 أسابيع. ترك الجانب الأيمن دون علاج. تم تطبيق تشعيع UVB ثلاث مرات في الأسبوع لمدة 5 أسابيع (كما هو موضح أعلاه) ، وتم تحليل حالة تصبغ الجلد في الأسابيع 1 و 3 و 5 باستخدام الكاميرا الرقمية (طراز D70 ؛ نيكون ، طوكيو ، اليابان) بعد تم تخدير الفئران بالإيثر. تم إجراء تحليل صورة الجلد الظهري باستخدام برنامج (Bio-Rad ، الولايات المتحدة الأمريكية) على صور الكاميرا الرقمية. تم تحليل درجة ترسب الميلانين من الفرق بين المنطقة المصطبغة والمعرضة للأشعة فوق البنفسجية والعينة المعالجة على الجانب الأيسر مقارنة بالمنطقة غير المعالجة وغير المصبوغة على الجانب الأيمن.

2.11. قياس تجاعيد الجلد 

تم قياس درجة شيخوخة الجلد التي تسببها الأشعة فوق البنفسجية من خلال مراقبة تكوين التجاعيد. لتقييم تكوين التجاعيد ، تم تخدير فئران إدارة الموارد البشرية {0} عن طريق الحقن داخل الصفاق لهيدرات الكلورال (0. 1 مل من 7٪ كلورال هيدرات / 25 جم فأر) في الأسبوع الخامس تم وصف التعرض للأشعة فوق البنفسجية B والعينة العلاجية في القسم السابق. تم تقييم تجاعيد الجلد في الأسابيع 3 و 4 و 5 باستخدام DETAX System II (MIXPAC) و Double-Stick Disc (3M Healthcare ، ألمانيا) بعد تشعيع UVB. تم توصيل قرص مزدوج العصا (تم رشه باستخدام DETAX System II) بجلد الفأر وإزالته بعد 2e3 دقائق. تم تقييم تجاعيد القرص عن طريق نظام Bissett [17]: الدرجة 0 ، عدم وجود التجاعيد ؛ الصف الأول ، عدة تجاعيد ضحلة. الصف 2 ، بعض التجاعيد. والصف الثالث ، بعض التجاعيد العميقة. بعد إزالة القرص وتنظيف الجلد بنسبة 70 في المائة من الإيثانول ، تم تصوير الجلد باستخدام مجهر رقمي USB (× 400 ؛ CE FOROHS ، الصين) ، وتم إجراء تحليل مرئي لتجاعيد الجلد.

2.12. انزيم مرتبط المناعي فحص

لاستقصاء تأثير الجينات المرتبطة بالتجاعيد المستحثة بالأشعة فوق البنفسجية (أي ، البروتينات المعدنية المصفوفة ؛ MMP -2) ، تم حصاد الجلد من جميع المجموعات المعالجة وتم تحليل البروتينات باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) مجموعة حسب إرشادات الشركة المصنعة (MMP -2 مجموعة ELISA ؛ أنظمة R&D ، الولايات المتحدة الأمريكية).

2.13. المراقبة النسيجية للجلد

تم تثبيت أنسجة الجلد المستخرجة من كل مجموعة تجريبية في محلول فورمالين بنسبة 10٪ لمدة 48 ساعة ثم تلطيخها بالهيموكسيلين والأيوزين بطريقة كارديف [18] لتحديد سمك البشرة. لتصور الكولاجين ، تم إجراء تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان من خلال البروتوكولات المعمول بها [19].

2.14. استخراج الحمض النووي الريبي وتفاعل البلمرة المتسلسل في الوقت الحقيقي

تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي من خلايا B16 / F10 وجلد الماوس المتوسع UVB-ira بعد معالجتها بـ KRG وتحفيزها باستخدام MSH باستخدام TRIzol وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. تم تلدين الحمض النووي الريبي (2 مجم) باستخدام oligodT (Bioneer Co ، Daejeon) لمدة 10 دقائق عند 70 درجة مئوية وتبريده لمدة 5 دقائق على الجليد ، والنسخ العكسي باستخدام مزيج النسخ العكسي (شركة Bioneer ، Daejeon) في 20 مل من خليط التفاعل ، وتشغيل لمدة 90 دقيقة عند 42.5 درجة في دورة حرارية. تم إنهاء التفاعل عند 95 درجة لمدة 5 دقائق لتعطيل إنزيم النسخ العكسي. تم إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي (PCR) على أجزاء من (كدنا) تم الحصول عليها من تفاعل النسخ العكسي (RT) في مزيج PCR (Bioneer Co ، Daejeon). تم بعد ذلك عزل منتجات PCR بالكهرباء على هلام agarose بنسبة 1 في المائة ، وملطخة ببروميد الإيثيديوم ، وتم تصورها باستخدام ImageQuant LAS 500 (GE Healthcare Life Sciences ، سيول ، كوريا الجنوبية). تم تطبيع شدة كثافة النطاق مع كثافة Glyceraldehyde 3- نازعة هيدروجين الفوسفات (GAPDH) ، ويتم توفير متواليات التمهيدي في الجدول الإضافي. 1. تم تحليل تعبير MMP -2 و MMP -9 و interleukin (IL) -1 b باستخدام PCR الكمي في الوقت الفعلي باستخدام Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR system ( النظم الحيوية التطبيقية ، الولايات المتحدة الأمريكية).

cistanche tubulosa supplement

2.15. تحليل لطخة غربية

تمت معالجة خلايا B16 / F1 0 باستخدام KRG في وجود a-MSH (10 مللي مولار). تم استخراج البروتينات الكلية من الخلايا وجلد الفأر المشع بالأشعة فوق البنفسجية من خلال تعليمات محلول تحلل PRO-PREP (iNtRON Biotechnology ، كوريا). تم بعد ذلك قياس تركيز البروتين باستخدام مجموعة مقايسة PRO-MEASURE (PRO-PREP ؛ iNtRON Biotechnology ، كوريا) ، وتم فصل كميات متساوية من البروتين بنسبة 10 في المائة من مادة البولي أكريلاميد الهلامية باستخدام هلام دوديسيل كبريتات الصوديوم - بولي أكريلاميد الكهربائي (SDS-PAGE) ونقلها إلى أغشية Polyvinylidene difluoride (PVDF) (Immobilon-P ؛ Millipore ، Billerica MA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تقليل الارتباط غير المحدد بأغشية PVDF عن طريق حضانة الغشاء في مخزن مؤقت يحتوي على 5 في المائة من الحليب الجاف الخالي من الدسم و 0.1 في المائة توين -20 في محلول ملحي تريس (TBS). ثم تم تحضين الأغشية طوال الليل عند 4 درجات بأجسام مضادة أولية محددة ، تليها حضانة لمدة ساعة واحدة مع الأجسام المضادة المترافقة مع بيروكسيداز الفجل (تخفيف 1: 3000). تم تصور الأجسام المضادة المقيدة من خلال تطبيق محلول التلألؤ الكيميائي المحسن (Supex ، Daegu ، كوريا) ، وتم تحليل الصور باستخدام برنامج ImageJ. ب- تم استخدام الأكتين كرقابة داخلية.

2.16. تحليل احصائي

تم تقديم البيانات على أنها متوسط ​​الخطأ المعياري للمتوسط ​​(SEM). تم تطبيق تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) واختبار Dunnett واختبار t غير المقيد للطالب من أجل التقييم الإحصائي للبيانات أو حيثما تمت الإشارة إلى غير ذلك على وجه التحديد. تم اعتبار نتائج التحليل الإحصائي لـ *** p <0. 0 0 1 و ** p <0.05 و * p <0.01 مهمة.

لمزيد من المعلومات: david.deng@wecistanche.com WhatApp: 86 13632399501

قد يعجبك ايضا