يكشف الليبيدومكس عن حدوث تغيرات في الدهون الكلوية التي يسببها سيسبلاتين أثناء إصابة الكلى الحادة وتوهينها بواسطة سيلاستاتين

edmund.chen@wecistanche.com

الملخص:  تعتبر السمية الكلوية من المضاعفات الرئيسية للعلاج الكيميائي القائم على السيسبلاتين ، مما يؤدي إلى الإصابة بمرض حادإصابة في الكلىفي كاليفورنيا. 30 في المائة من المرضى ، دون تدخل وقائي أو علاج متاح للاستخدام السريري. أثبت Cilastatin أنه يمارس تأثيرًا واقيًا للكلية لعلاجات سيسبلاتين في النماذج المختبرية والحيوية ، بعد أن دخلت مؤخرًا في التجارب السريرية. فهم أعمق على المستوى الجزيئي الناجم عن السيسبلاتينتلف كلويوتأثير العوامل الوقائية المحتملة يمكن أن يكون مفتاحًا لتطوير علاجات وقائية للكلى ناجحة وإنشاء مؤشرات حيوية جديدة لـتلف كلويوحماية الكلية. تم استخدام نهج الدهون المستهدفة ، باستخدام LC-MS / MS ، للتقدير الكمي لـ 108 نوعًا من الدهون (تشمل الفوسفوليبيدات ، السفينجوليبيدات ، والكوليسترول الحر والمُستَرِف) فيالكلىمستخلصات القشرة والنخاع من الفئران المعالجة بالسيسبلاتين و / أو السيلاستاتين. تم العثور على ما يصل إلى 56 و 63 نوعًا من الدهون قد تغيرت في القشرة المخية والنخاع ، على التوالي ، بعد علاج سيسبلاتين. خفف العلاج المشترك مع سيلاستاتين العديد من هذه التغيرات الدهنية ، إما كليًا أو جزئيًا فيما يتعلق بمستويات التحكم. كشف التحليل متعدد المتغيرات أنه يمكن استخدام الأنواع الدهنية للتمييزتلف كلويوحماية الكلية، مع استرات الكوليسترول هي الأنواع الأكثر تمييزًا ، إلى جانب الكبريتيدات والفوسفوليبيدات. المؤشرات الحيوية التشخيصية المحتملة للالتي يسببها سيسبلاتين تلف كلويوسيلاستاتينحماية الكليةتم العثور عليها أيضا.

الكلمات الدالة:الشحوم. سيسبلاتين. إصابة الكلى الحاد؛ سيلاستاتين. حماية الكلية. المؤشرات الحيوية. استرات الكوليسترول سفينغوليبيدات. الفسفوليبيدات. العلاج الكيميائي

مقدمة تعتبر السمية الكلوية من الآثار الجانبية الخطيرة للعلاج الكيميائي لسيسبلاتين [1] ، مع أعراض حادةإصابة في الكلى(AKI) يجري تطويره في كاليفورنيا. 30 بالمائة من المرضى المعالجين [2]. هذا أيضًا هو العامل الرئيسي المحدد للجرعة وعيبًا مهمًا في العلاجات القائمة على السيسبلاتين ، وهو أحد العلاجات الأكثر صلة بالأورام الصلبة [2]. يتراكم سيسبلاتين ويسبب إصابةكلويالخلايا الظهارية الأنبوبية القريبة (RPTECs) ، والضرر يقع بشكل خاص في الجزء S3 من النبيبات القريبة ، التي تنحدر منكلويقشرة نحو تقاطع القشرة النخاعية والنخاع الخارجي [3]. ومع ذلك ، تم اقتراح ضرر مباشر لحلقة هنلي النخاعية [4،5]. تحدث سلسلة من الأحداث الخلوية فيما يتعلق بـكلويإصابة الخلايا الأنبوبية ، بعد امتصاص السيسبلاتين ، بما في ذلك الإجهاد التأكسدي ، والإجهاد النتري ، وإصابة الأوعية الدموية ، والتهاب ، وتلف الميتوكوندريا أو تثبيط Na plus ، و K plus - ATPase في غشاء الخلية ، وإجهاد الشبكة الإندوبلازمية ، متبوعًا بموت خلية النبيبات القريبة بشكل رئيسي عن طريق موت الخلايا المبرمج (يشمل كلاهما مسارات داخلية وخارجية) أو نخر ، مما يؤدي إلى فقدانوظيفة الكلى[2،6،7]. يتجلى ذلك في انخفاض معدل الترشيح الكبيبي (GFR) ومستويات المغنيسيوم والبوتاسيوم في الدم ، مع زيادة نيتروجين اليوريا في الدم (BUN) والكرياتينين في الدم [2].

تم التحقيق في طرق مختلفةحماية الكليةخلال علاجات سيسبلاتين في المختبر وفي الجسم الحي ، بناءً على عدد من الأهداف الجزيئية [7-9]. ومع ذلك ، فإن الاضطراب المحتمل للتأثير السام للخلايا للسيسبلاتين على الخلايا السرطانية والتأثير الوقائي غير المكتمل في كثير من الأحيان قد حد من تطور أجهزة حماية الكلى [9]. نتيجة لذلك ، لا يوجد تدخل للاستخدام السريري يمنع بنجاح أو يعالج القصور الكلوي الحاد الناجم عن السيسبلاتين [7]. فهم أعمق للمسارات الجزيئية المتعلقة بالـ AKI الناجم عن سيسبلاتين والأهداف المحتملة لـحماية الكليةيبدو حاسما في هذا الصدد.

ثبت أن سيلاستاتين يحمي بشكل فعالالكلىمن الأضرار التي تسببها عدة عوامل ، بما في ذلك سيسبلاتين [10،11] ، جنتاميسين [12] ، فانكومايسين [13] ، سيكلوسبورين أ ، وتاكروليموس [14] ، في كل من النماذج المختبرية والحيوية. يمارس سيلاستاتين تأثيره الوقائي عن طريق تثبيط انتقائيكلويديهيدروبيبتيداز 1 (DHP-I) الموجود في أطواف الدهون على حدود الفرشاة من RPTECs [11]. نتيجة لذلك ، فإن العمليات التي تنطوي على تخارج الغشاء مثل موت الخلايا المبرمج الخارجي بوساطة Fas تضعف بسبب سيلاستاتين ، وتطورتلف كلويبعد اعتقال إهانة سامة [11]. وبصرف النظر عن ضعف apop tosis الخارجي بسبب السيلاستاتين ، فقد وجد أن الإجهاد التأكسدي ، والالتهاب ، وتراكم المركبات السامة للكلية قد انخفض [١٠-١٣ ، ١٥ ، ١٦]. هكذا،وظيفة الكلىيبقى محفوظًا تحت المعالجة المشتركة مع سيسبلاتين وسيلاستاتين [11]. في الآونة الأخيرة ، أكمل سيلاستاتين بنجاح المرحلة الأولى من التجارب السريرية لاستخدامه كواقي للكلى وهو على وشك الدخول في تجارب المرحلة الثانية. كشفت دراسة حديثة واعدة أيضًا أن السيلاستاتين (يُعطى على شكل إيميبينيم زائد سيلاستاتين) قد يحقق تأثيرًا كلى في المرضى المصابين بالسرطان البريتوني أثناء علاج سيسبلاتين بفرط الحرارة [17].

في السنوات الأخيرة ، أثبتت تقنيات omics ، وخاصة البروتينات [18،19] وعلم الأيض [20-23] ، فائدتها في اكتشاف العلامات الحيوية التشخيصية المبكرة الجديدة لـ AKI ، باستثناء BUN أو الكرياتينين في مصل الدم [18،20]. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يوفر تحليل الأيض معلومات قيمة لفهم آليات السيسبلاتين للسمية الكلوية [5،24] والتأثير العلاجي لأجهزة حماية الكلية المحتملة [25-27].

على وجه الخصوص ، يمكن أن توفر الدهون الدهنية أيضًا المعلومات ذات الصلة بخصوصمرض كلوي[28] ، مع الأخذ في الاعتبار أن الدهون تلعب دورًا أساسيًا في التركيب ، وإشارات الخلايا ، والأيض ، ويمكن تغييرها في الخلايا والأنسجة والسوائل الحيوية الموجودة تحتكلويالظروف المرضية [29،30]. في هذا الصدد ، تم العثور على مستويات متزايدة من الدهون الثلاثية والأحماض الدهنية غير esterifified فيالكلىأثناء العلاج بالسيسبلاتين [31] ، بالإضافة إلى التل المحايد للدهون [32]. لوحظ أيضًا ارتفاع مستويات سفينجوليبيدات - سيراميدات (سير) وسيراميد هيكوسيل (HexCer) - فيكلويالقشرة أثناء القصور الكلوي الحاد الناجم عن السيسبلاتين [33]. من ناحية أخرى ، تم العثور أيضًا على أنواع الفوسفوليبيد ، بما في ذلك فوسفاتيديل كولين (PC) ، وفوسفاتيد إيثانولامين (PE) ، وليزوفوسفاتيديل كولين (LPC) ، فيأنسجة الكلىأو الخلايا أثناء العلاج سيسبلاتين [26]. تم العثور أيضًا على مستويات أنواع LPC المتنوعة التي تم تغييرها في مصل الفئران بعد إدارة السيسبلاتين [23]. علاوة على ذلك ، سمح أسلوب قياس الطيف الكتلي غير المستهدف شبه الكمي بمقارنة توزيع الدهون في الفئرانالكلىالمقاطع واقترح أن بلاتين رابطة الدول المستقلة أدى إلى تغييرات في الفوسفوليبيدات المتنوعة (PC ، PE ، phosphatidylglycerols (PG) ، phosphatidylinosytols (PI) ، phosphatidylserines (PS) ، phosphatidic acids (PA)) ، sulfatides (Sulf) ، or cardiolipins) [34] (يظهر سلوكًا مختلفًا في القشرة والنخاع) ، بينما يميل العلاج المشترك مع السيلاستاتين إلى التخفيف من بعض هذه التغييرات [4].

في هذا العمل ، قطعنا خطوة إلى الأمام وألقينا نظرة فاحصة على الدهون الهيكلية الهامة فيالكلى، مثل الفوسفوليبيدات (PC ، LPC و PE) ، السفينجوليبيدات (الكبريت ، السفينجوميلين (SM) ، ثنائي هيدرو سفينجوميلين (dhSM) ، سير ، ثنائي هيدروكراميدات (dhCer) ، HexCer ، ثنائي هيدروهكسوسيلسراميدات (dhHexCer)) ، والكوليسترول الحر (FCHexCer)) أشكال (استرات الكوليسترول (CE)) ، تغطي فئات وأنواع الدهون الجديدة وتستخدم نهجًا كميًا مستهدفًا أكثر موثوقية يعتمد على كروماتوجرافيا السائل إلى جانب تحليل الطيف الكتلي الترادفي (LC-MS / MS). تم تحديد ما مجموعه 108 نوعًا من الدهون على حد سواءكلويمستخلصات القشرة والنخاع من الفئران المعالجة ، من أجل فهم أفضل للتأثير الكلوي السام للسيسبلاتين والتأثير الكلوي لسيلاستاتين. معلومات جديدة عن تأثير سيسبلاتين المرتبط بـ AKI علىكلويتم الحصول على أنواع الدهون واكتسبت رؤى إضافية حول التأثير الوقائي لسيلاستاتين ، مما أدى إلى إضعاف بعض التغيرات الدهنية المحددة التي يسببها سيسبلاتين إما فيكلويالقشرة أو النخاع. المؤشرات الحيوية المحتملة المتنوعة التي يسببها السيسبلاتينتلف كلويوحماية الكليةمع السيلاستاتين.

نتائج

تأثير وقائي لسيلاستاتين ضد التلف الكلوي الناجم عن سيسبلاتين

تقييم لوظيفة الكلىفي الفئران المعالجة بالسيسبلاتين و / أو السيلاستاتين تم إجراء خامسًا باستخدام العديد من المؤشرات البيوكيميائية في مصل الدم والبول. كما هو مبين في الجدول 1 ، تم زيادة الكرياتينين في الدم ، BUN ، بروتينات البول ، حجم البول ، والإفراز الجزئي للصوديوم والبوتاسيوم بشكل ملحوظ بسبب علاج سيسبلاتين مقارنة بمجموعة التحكم ، بينما أدى العلاج المشترك مع سيلاستاتين وسيسبلاتين إلى انخفاضها مقارنة مع مستويات التحكم. من ناحية أخرى ، انخفض معدل الترشيح الكبيبي (GFR) في الفئران المعالجة بالسيسبلاتين فيما يتعلق بعينات التحكم ، بينما قللت الإدارة المشتركة لسيلاستاتين من هذا التأثير. هذه النتائج تؤكدتلف كلويالناجم عن سيسبلاتين والحماية عن طريق سيلاستاتين. لم يظهر سيلاستاتين وحده أي تأثير علىوظيفة الكلىالمعلمات.

تم إجراء تحليل الأنسجة المرضية أيضًا في الأقسام الملطخة بالهيماتوكسيلين / الأيوزين لدراسة التغيرات المورفولوجية المتعلقة بـتلف كلوي. يوضح الشكل 1 علامات التلف التي يسببها السيسبلاتين في المنطقة القريبةكلويالأنابيب ، بما في ذلك تورم النبيبات ، أو انفصال حطام الخلية ، أو فقدان غشاء حدود الفرشاة (الشكل 1C ، G ، I). لوحظ أيضًا تراكم قوالب البروتين في القشرة والنبيبات النخاعية (الشكل 1C ، G ، على التوالي). هذا على النقيض من التشكل الطبيعي الذي لوحظ في مجموعات التحكم أو السيلاستاتين في القشرة (الشكل 1A ، B ، على التوالي) والنخاع (الشكل 1E ، F ، على التوالي). أدى العلاج المشترك لسيلاستاتين مع سيسبلاتين إلى تقليل واضح لجميع هذه التغييرات التي يسببها سيسبلاتين في القشرة والنخاع (الشكل 1 د ، ح ، ي).

تغيير سيسبلاتين لفئات الدهون الكلوية العالمية في القشرة والنخاع. التأثير الوقائي لسيلاستاتين

تم تحديد المستويات الإجمالية لفئات الدهون المختلفة ، بما في ذلك الستيرولات (CE ، FC) ، الفوسفوليبيدات (LPC ، PC ، PE) ، و sphingolipids (Cer ، dhCer ، HexCer ، dhHexCer ، Sulf ، SM ، dhSM) فيكلويالقشرة والنخاع ، من أجل تقييم التأثير العالمي للسيسبلاتين على الدهون أثناء القصور الكلوي الحاد. تم العثور على النتائج الكاملة لتحليل الدهون في الجدول S1. كما يتضح من الشكل 2 أ ، ب ، لوحظت اتجاهات متشابهة تمامًا في القشرة المخية واللب لجميع المجموعات. تمت زيادة CE و Cer بشكل كبير ، بينما انخفض SM و dhSM و PE ، في كل من القشرة المخية والنخاع أثناء العلاج بالسيسبلاتين ، فيما يتعلق بمجموعات التحكم. من بين هؤلاء ، يعاني Cer و CE من أبرز التغيرات التي يسببها السيسبلاتين. علاوة على ذلك ، تمت زيادة dhCer و HexCer بشكل كبير في النخاع ، بينما في القشرة ، تمت زيادة dhHexCer وانخفض LPC والكبريت أثناء العلاج بالسيسبلاتين.

الشكل 1. تحليل الأنسجة من الهيماتوكسيلين / يوزين الملونكلويتظهر المقاطع حماية السيلاستاتين ضد الضرر الناجم عن السيسبلاتين. تظهر الصور عند تكبير 20 × لقشرة التحكم (A) ؛ (ب) قشرة السيلاستاتين. (ج) قشرة سيسبلاتين. (د) سيسبلاتين زائد قشرة cilastatin؛ (هـ) السيطرة على النخاع. (F) النخاع السيلاستاتين ؛ (ز) النخاع سيسبلاتين. و (H) سيسبلاتين بالإضافة إلى النخاع السيلاستاتين. يمثل شريط المقياس من A إلى H 100 ميكرومتر. صور مفصلة لـكلوييتم عرض الأنابيب عند تكبير 60 × لـ (I) سيسبلاتين و (J) سيسبلاتين بالإضافة إلى سيلاستاتين. يمثل شريط مقياس I و J 25 ميكرومتر.كلوييتم تمثيل مؤشرات الضرر: →: تراكم قوالب البروتين فيكلويالأنابيب. والمنطقة: تورم النبيبات. *: فقدان غشاء حدود الفرشاة. #: فصل حطام الخلية.

تميل الإدارة المشتركة لسيلاستاتين وسيسبلاتين إلى التخفيف من بعض هذه التغيرات الدهنية التي يسببها السيسبلاتين ، مما يؤدي إلى عدم وجود فرق فيما يتعلق بمجموعات التحكم في حالة مستويات Cer و dhHexCer في القشرة ، أو dhCer ، HexCer ، SM ، dhSM ، و PE المستويات في النخاع. علاوة على ذلك ، في حالة زيادة CE المستحثة بالسيسبلاتين في القشرة ، أدى تناول السيلاستاتين مع سيسبلاتين إلى انخفاض كبير في المستويات مقارنة بمجموعة سيسبلاتين ، على الرغم من أن الانتعاش كان جزئيًا فيما يتعلق بمجموعات الكياترول. بقيت بقية فئات الدهون التي تم تغييرها بواسطة السيسبلاتين غير مستردة من العلاج المشترك durirtg cilastatisi. من ناحية أخرى ، لم يكن لسيلاستاتين نفسه أي تأثير على القشرة والشحوم النخاعية ، باستثناء LPC و dhCer في القشرة ، والذي بدا أنه انخفض وزاد ، على التوالي ، مقارنة بمجموعة التحكم. لم تظهر المستويات الإجمالية لـ FC و PC و dhHexCer أي تغيير كبير في القشرة والنخاع بعد علاج سيسبلاتين.

يعرض الشكل 2C ، D خرائط حرارة الارتباط لفئات الدهون في القشرة المخية والنخاع ، على التوالي ، مما يوفر اتجاهات مماثلة.

التحوير الفردي لأنواع الدهون الكلوية عن طريق علاج سيسبلاتين. البيض المخفف لسيلاستاتين

استرات الكوليسترولتحليل خمسة أنواع فردية من CE (CE 18: 1 ، CE 18: 2 ، CE 18: 0 ، CE 20: 4 ، CE 22: 6) تم إجراؤها فيكلويكشفت القشرة والنخاع أن السيسبلاتين زاد كل منهما بشكل كبير مقارنة بمستويات التحكم (الشكل 3). من ناحية أخرى ، أدت الإدارة المشتركة لسيلاستاتين وسيسبلاتين إلى انخفاض عام في مستويات الأنواع الفردية من CE فيما يتعلق بمعالجة سيسبلاتين ، والتي كانت ذات دلالة إحصائية لجميع أنواع CE في القشرة و CE 18: 2 في النخاع ، كما يمكن أن يكون كما هو موضح في الشكل 3. كان هذا الانتعاش في أنواع القشرة المخية بسبب التناول المشترك لسيلاستاتين جزئيًا مقارنة بمستويات المجموعة الضابطة ، بينما لم يلاحظ أي انتعاش ذي دلالة إحصائية في معظم أنواع ميديلا (باستثناء CE 18: 2) للإدارة المشتركة لسيلاستاتين مقارنة مع سيسبلاتين. يتم عرض نتائج التحليل الإحصائي الكاملة على أنواع الدهون القشرة والنخاع في الجدولين S2 و S3 ، على التوالي.

الشحميات السفينغولية: Cer ، و dhCer ، و HexCer ، و dhHexCer ، و SM ، و dhSM ، و Sulfتم تحديد ما مجموعه 43 نوعًا من أنواع السفينجوليبيد فيكلويالقشرة والنخاع لتقييم تأثير علاج سيسبلاتين وسيلاستاتين على مستوياتهما ، كما هو معروض في الشكل 4. فيما يتعلق بـ Cer (الشكل 4A) و dhCer (الشكل 4B) و HexCer (الشكل 4C) و dhHexCer (الشكل 4D) الأنواع ، مثل يمكن ملاحظته ، أدى علاج سيسبلاتين إلى زيادة كبيرة في 19 نوعًا من أربع فئات فيكلويالقشرة والنخاع. مرة أخرى ، يُظهر العلاج المشترك مع السيسبلاتين والسيلاستاتين ميلًا لتقليل تأثير السيسبلاتين ، مع انخفاض عام في مستويات الدهون المتغيرة بالسيسبلاتين في القشرة والنخاع. في الواقع ، بالنسبة لأنواع dhCer (الشكل 4B) و dhHexCer (الشكل 4D) ، لم يلاحظ أي فرق بين المجموعات المعالجة بالسيسبلاتين بالإضافة إلى السيلاستاتين والتحكم في groujts لتلك الأنواع المعدلة من السيسبلاتين ، مما يشير إلى الشفاء التام. في حالة Cer (الشكل 4 أ) و HexCer (الشكل 4C) ، كان هذا المسترد أيضًا هو الحال بالنسبة لبعض الأنواع المعدلة ، مثل HexCer 34: 1 (القشرة والنخاع) و HexCer 38: 1 و HexCer 42: 1 (النخاع) ) ؛ النص الإنكليزي 36: 1 ، والنصائح 38: 1 ، والنصائح 40: 1 ، والنصائح 42: 1 ، والحرف 42: 2 في القشرة ؛ و Cer 34: 1 و Cer 42: 2 في النخاع ، إما أنها تعافت كليًا أو جزئيًا. على العكس من ذلك ، لا يزال علاج السيسبلاتين بالإضافة إلى السيلاستاتين يظهر اختلافات كبيرة فيما يتعلق بمجموعات التحكم بالنسبة لـ Cer 36: 1 و Cer 38: 1 و Cer 40: 1 و Cer 42: 1 و HexCer 36: 1 في النخاع ، مع عدم وجود تعافي ، مشيرًا لتأثير الاسترداد الذي يمارسه السيلاستاتين في القشرة أفضل بكثير مما يحدث في النخاع لـ Cer و HexCer.

في حالة الأنواع SM (الشكل 4E) و dhSMt (الشكل 4F) ، أدى السيسبلاتين إلى انخفاض في القشرة والنخاع لأقصر الأنواع وأطولها سلسلة ، وهو ما كان ذا دلالة إحصائية بالنسبة لـ SM 34: 1 ، dhSM 34: {{ 5}} و SM 42: 2 و SM 42: 1 و dhSM 42: 1. في المقابل ، كان التأثير الملحوظ لعلاج السيسبلاتين على السلاسل المتوسطة SM و dhSM في القشرة والنخاع زيادة ، والتي كانت ذات دلالة إحصائية لـ dhSM 36: 0 (في كل من القشرة والنخاع) و dhSM 4 {{ 15}}: 0 ، SM 36: 1 ، SM 38: 1 ، SM 4 0: 1 في النخاع. تميل الإدارة المشتركة لسيسبلاتين وسيلاستاتين إلى تطبيع مستويات SM و dhSM في كثير من الحالات ، مع SM 34: 1 ، SM 36: 1 ، SM 38: 1 ، SM 40: 1 ، SM 42: 2 ، SM 42: 1 ، dhSM 36: 0 و dhSM 40: 0 و dhSM 42: 1 تظهر عدم وجود فرق فيما يتعلق بمجموعات التحكم في النخاع. أخيرًا ، تم تغيير بعض أنواع الكبريت أيضًا عن طريق معالجة سيسبلاتين فيكلويالقشرة والنخاع ، كما هو موضح في الشكل 4G. بينما تم اكتشاف زيادة كبيرة في الكبريت 4 0: 1 في كل من القشرة المخية والنخاع بعد معالجة السيسبلاتين ، فإن الأنواع الأخرى مثل Sulf-OH 40: 1 أو Sulf-OH 42: 2 أو Sulf-OH طويلة السلسلة انخفض 42: 2 في القشرة ، مع تناقص الكبريت 42: 0 و Sulf-OH 42: 1 في كل من القشرة المخية والنخاع. أدى تناول سيلاستاتين بالاشتراك مع سيسبلاتين مرة أخرى إلى تأثير انتعاش خفيف ، خاصة بالنسبة للكبريت 40: 1 (القشرة والنخاع) والكبريت 40: 2 وكبريتات OH 42: 1 (النخاع) ، ولم يظهر أي فرق مقارنة بمجموعات التحكم.

الفوسفوليبيدات: PC ، PE ، و LPCتم إجراء القياس الكمي لـ 60 نوعًا من الفوسفوليبيد (28 قطعة ، 20 PE ، و 12 LPC) فيكلويالقشرة والنخاع لتقييم التغيرات المحتملة التي يسببها السيسبلاتين وتأثير cilastatin الكلوي. تظهر نتائج أنواع أجهزة الكمبيوتر في الشكل 5 أ ، ب ، على التوالي. كما يمكن رؤيته ، قام السيسبلاتين بتغيير كبير في ما يصل إلى 19 نوعًا من أجهزة الكمبيوتر في القشرة أو النخاع. تم تقليل معظم أنواع أجهزة الكمبيوتر بواسطة السيسبلاتين ، باستثناء PC 40: 2 و PC 40: 4 و PC 34: 2 ، والتي زادت في القشرة. انخفض جزء أنواع أجهزة الكمبيوتر غير المشبعة بشكل كبير في كل من النخاع والقشرة ، بينما تمت زيادة جزء الأنواع التي تحتوي على رابطتين مزدوجتين بشكل كبير ، كما يتضح من الشكل 5C ، D. أظهر العلاج باستخدام كل من سيسبلاتين وسيلاست أتين تأثيرات مماثلة لتلك التي لوحظت سابقًا ، مع ملاحظة بعض التأثير المخفف ، وفي بعض الحالات أدى إلى الشفاء التام لمستويات الكمبيوتر الشخصي ، مع عدم وجود اختلافات كبيرة مع المجموعة الضابطة ، أو إلى الشفاء الجزئي. وقد لوحظ هذا الانتعاش بشكل رئيسي في نتائج تحديد أنواع البولي إيثيلين في القشرة والنخاع في الشكل 6 أ ، ب ، على التوالي. تم تغيير ما مجموعه 16 نوعًا من أنواع البولي إيثيلين بشكل كبير بواسطة سيسبلاتين في القشرة أو النخاع ، مع وجود أكبر عدد من الأنواع المتغيرة في النخاع. في معظم الحالات ، انخفضت أنواع PE عن طريق العلاج السيسبلاتين ، باستثناء PE 38: 2 و PE 40: 6 و PE 40: 4 ، والتي تمت زيادتها إما في القشرة أو النخاع أو كل من القشرة المخية والنخاع ، على التوالى. وفقًا لذلك ، بالنظر إلى الطول الإجمالي لسلاسل الأحماض الدهنية في أنواع البولي إيثيلين في النخاع ، انخفض إجمالي كمية البولي إيثيلين مع 34 و 36 و 38 درجة مئوية بشكل كبير مع سيسبلاتين ، بينما تمت زيادة الأنواع من 40 درجة مئوية ، كما هو موضح في الشكل 6 ج . خففت المعالجة المشتركة لسيلاستاتين مع سيسبلاتين معظم التغيرات التي يسببها السيسبلاتين في أنواع PE الفردية الموجودة في النخاع ، مما يوفر مستويات مع عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية مقارنة بمجموعات التحكم في 11 نوعًا من 15 نوعًا متغيرًا من السيسبلاتين في النخاع ، مع نوعين آخرين من البولي إيثيلين. تعافى جزئيا. ومع ذلك ، في القشرة ، تم استرداد نوعين فقط من أصل 11 نوعًا تم تغييره بواسطة السيسبلاتين مع سيلاستاتين للتحكم في المستويات ، مع استرجاع نوعين إضافيين من البولي إيثيلين جزئيًا. على غرار الملاحظات الخاصة بأنواع أجهزة الكمبيوتر الشخصية ، انخفض جزء أنواع PE غير المشبعة بشكل كبير في النخاع ، بينما تمت زيادة جزء الأنواع التي تحتوي على روابط مزدوجة 1-3 بشكل كبير ، كما هو موضح في الشكل 6 د.

فيما يتعلق بتحليل أنواع LPC ، تم العثور على معظم التغييرات التي يسببها سيسبلاتين فيكلويالقشرة ، حيث انخفض LPC 16: 1 ، LPC 16: 0 ، LPC 18: 1 ، LPC 18: 0 ، LPC 20: 3 ، LPC 22: 6 ، LPC 22: 5 بشكل ملحوظ مع فيما يتعلق بعينات التحكم ، كما يتضح من الشكل 7 أ. من ناحية أخرى ، تم العثور على زيادة LPC 17: 1 و LPC 18: 2 في النخاع أثناء العلاج سيسبلاتين (الشكل 7 ب). لم يكن للعلاج المشترك مع سيسبلاتين وسيلاستاتين أي تأثير على الشفاء على أنواع القشرة LPC. على العكس من ذلك ، تم استرداد LPC 17: 1 و LPC 18: 2 في النخاع ، مع عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية مقارنة بعينات التحكم.

الدهون الكلوية كمتغيرات تصنيف لتلف الكلىوالحماية 

تم إجراء تحليل متعدد المتغيرات باستخدام جميع المتغيرات الدهنية المقاسة في القشرة والنخاع لتقييم ما إذا كانت هذه الأنواع يمكن أن تعمل في تصنيف المجموعة والتمييز الناجم عن السيسبلاتينتلف كلويوحماية الكليةبواسطة سيلاستاتين. تم إجراء تحليل المكون الرئيسي (PCA) والإسقاطات المتعامدة لتحليل تمييز الهياكل الكامنة (OPLS-DA) باستخدام الدهون بشكل منفصل إما القشرة أو النخاع ، كما هو معروض في الشكل 8. تحليل PCA للقشرة (الشكل 8A) والنخاع (الشكل 8B) عرضت الدهون للنماذج القدرة على إظهار فصل واضح لمجموعة سيسبلاتين فيما يتعلق بمجموعات السيطرة والسيلاستاتين ، وتتجمع المجموعتان الأخيرتان عن كثب. من ناحية أخرى ، تميل المجموعة المعالجة سيسبلاتين بالإضافة إلى السيلاستاتين إلى الانفصال عن مجموعة سيسبلاتين وتقع بين مجموعتي التحكم والسيسبلاتين ، مما يشير إلى وجود اختلافات بين المجموعتين. قدمت جميع طرز PCA R2 أعلى من 0. 7 و Q2 أعلى من 0 .5.

أظهر تحليل OPLS-DA متعدد المجموعات أيضًا مجموعات منفصلة بشكل واضح للمجموعات المختلفة سواء باستخدام القشرة (الشكل 8C) أو متغيرات اللب (الشكل 8 د). قدمت نماذج OPLS-DA قيم Q2 مقبولة وقيم R2 أعلى من 0 .7 وثبت أنها صالحة أثناء اختبار التقليب لـ 100 تكرار ، كما هو موضح في الشكل 8E ، F. يمكن العثور على الميزات ذات الأهمية المتغيرة في درجات الإسقاط (VIP) الأعلى من 1 في الشكل 8G ، H ، مما يشير إلى دهون القشرة أو النخاع ، على التوالي ، والتي لها تأثير أكبر على انفصال المجموعات. تتألف هذه الأنواع من الدهون المتنوعة من فئات CE و sphingolipid و phospholipid. لتحديد الفروق الدهنية المحددة بين المجموعات الفردية المتعلقة بعلاج السيسبلاتين وحماية الكلية، تم إجراء مزيد من تحليل OPLS-DA بشكل منفصل باستخدام دهون القشرة والنخاع ، كما يتضح من الشكلين 9 و 10 ، على التوالي. تم بناء نماذج OPLS-DA لسيسبلاتين مقارنة مع مجموعة التحكم ، سيسبلاتين زائد سيلاستاتين مقارنة مع سيسبلاتين ، وكذلك سيسبلاتين بالإضافة إلى سيلاستاتين مقارنة مع مجموعة التحكم. كانت نماذج OPLS-DA الأكثر تمييزًا هي تلك التي بين مجموعة التحكم وإما المجموعات المعالجة بالسيسبلاتين أو السيسبلاتين بالإضافة إلى السيلاستاتين ، مع الأخذ في الاعتبار أعلى قيم R2 و Q2 ، مع التحقق المناسب بناءً على نتائج اختبار التقليب مع 100 دورة (الشكل 9 أ ، ب ، د ، E والشكل 10A ، B ، D ، E).

من ناحية أخرى ، فإن نماذج OPLS-DA لمجموعات السيسبلاتين بالإضافة إلى السيلاستاتين والسيسبلاتين ، سواء باستخدام القشرة (الشكل 9 ج) أو اللبيدات (الشكل 1 0 ج) ، سمحت أيضًا بأمة تمييز المجموعة ، مع قيم R2 و Q2 معقولة ونتائج التحقق المناسبة من 100- اختبارات تبديل الدورة (الشكلان 9 و 10 و) ، حيث تكون دهون النخاع هي تلك التي تقدم إمكانية تنبؤ أفضل. يتم تضمين مخططات S لنماذج OPLS-DA المختلفة في الشكل 9G و H و I والشكل 10G و H و I ، إما لميزات القشرة أو النخاع الدهني. الأنواع ذات|p (corr)|تم تحديد درجات أعلى من 0.5 و VIP أعلى من 1 في S-plots على أنها أكثر الميزات ذات الصلة بتمييز المجموعات. يمكن العثور على البيانات الكاملة بما في ذلك قيم p (corr) و VIP من نماذج OPLS-DA ، جنبًا إلى جنب مع الإحصائيات أحادية المتغير لكل نوع من أنواع الدهون ، في الجداول التكميلية S2 (دهون القشرة) و S3 (دهون النخاع). يبدو من الواضح أنكلوييمكن أن تكون دهون القشرة والدهن النخاعية بمثابة معايير تمييزية يسببها السيسبلاتينتلف كلويولسيلاستاتينحماية الكليةأثناء العلاج سيسبلاتين.

الدهون الكلوية كواسمات حيوية محتملة للضرر الكلوي الناجم عن السيسبلاتين من أجل اختيار المؤشرات الحيوية للدهون المحتملة لتلف الكلى

بسبب سيسبلاتين ، تم استخدام مجموعة معايير متعددة من قيم p ذات دلالة إحصائية من التحليل أحادي المتغير لسيسبلاتين مقابل مجموعات التحكم ، بالإضافة إلى قيم p (corr) و VIP الموجودة في نموذج OPLS-DA المغلف. دهون مختارة بقيم p <0. 0="" 5="" ؛="" fdr=""><0. 1="" ؛|ع="" (كور)|يمكن="" العثور="" على=""> 0.5 و VIP> 1 في الجدول 2 (دهون القشرة) والجدول 3 (دهون النخاع) ، حيث يتم أيضًا تضمين تغيير الطي (FC) والمناطق الواقعة أسفل المنحنى (AUC) لمنحنيات خاصية تشغيل المستقبِل (ROC).

كما يتضح ، تم اختيار ما يصل إلى 4 0 دهون من اللب و 27 دهونًا من القشرة ، بما في ذلك أنواع CE و sphingolipids و phospholipid ، في الجدولين 2 و 3 على التوالي. كانت قيم AUC لمنحنيات ROC التي تم الحصول عليها لكل دهون أعلى من 0. 85 وفي معظم الحالات ، قريبة من 1 ، مما يشير إلى قدرات تمييز جيدة للأنواع بين السيسبلاتين ومجموعات التحكم. من اللافت للنظر أن أنواع CE المزودة بسيسبلاتين (CE 18: 1 ، CE 18: 2 ، CE 18: 0 ، CE 2 0: 4 ، CE 22: 6) يبدو أنها الأكثر تمييزًا ميزات في كل من النخاع والقشرة ، مما يُظهر أعلى قيم FC و VIP و p (corr) و AUC. dhHexCer 34: 0 هو دهون أخرى زائدة في القشرة مع FC عالية ودرجات ذات صلة. من ناحية أخرى ، فإن الكبريتيدات مثل Sulf 42: 0 ، Sulf-OH 40: 1 ، أو Sulf-OH 42: 1 هي أيضًا وثيقة الصلة بالقشرة ، بينما PE 36: 5 ، PE 38: 6 ، PE 38: 5 تعد أجهزة الكمبيوتر 36: 5 أو الكمبيوتر 36: 6 مهمة جدًا أيضًا في النخاع ، حيث يتم تقليلها جميعًا أثناء العلاج بالسيسبلاتين.

الدهون الكلوية كواسمات حيوية محتملة لحماية الكلى من سيلاستاتين

لتحديد المؤشرات الحيوية للدهون المحتملة لحماية السيلاستاتين من السمية الكلوية سيسبلاتين ، تم تطبيق نفس نهج المعايير المتعددة كما في القسم 2.5 ، باستخدام التحليل أحادي المتغير لسيسبلاتين زائد سيلاستاتين مقابل مجموعات سيسبلاتين ، وقيم p (corr) وكبار الشخصيات الموجودة في OPLS- المقابلة. نموذج DA. دهون مختارة بقيم p <0. 0="" 5="" ؛="" fdr=""><0. 1="" ؛|ع="" (كور)|=""> 0.5 ، ويمكن العثور على VIP> 1 في الجدول 4 (دهون القشرة) والجدول 5 (دهون النخاع) ، حيث تم أيضًا حساب منحنيات FC و AUC لمنحنيات ROC.

كما يتضح من الجدول 4 ، جميع أنواع CE (CE 18: 1 ، CE 18: 2 ، CE 18: 0 ، CE 2 0: 4 ، CE 22: 6) في يمكن اعتبار القشرة أقوى مؤشرات الحماية التي يمارسها السيلاستاتين ، مما يقلل بشكل كبير ، في نفس الوقت ، من التغيرات التي يسببها سيسبلاتين. PE 36: 5 و dhHexCer 34: 0 في القشرة هي أيضًا مؤشرات حيوية محتملة مهمة لحماية السيلاستاتين ، خاصة الأخيرة ، التي تخضع للتعافي التام بسبب cilastatin نحو مستويات التحكم. فيما يتعلق بدهون النخاع ، كما هو موضح في الجدول 5 ، تم العثور على كمية أكبر من المؤشرات الحيوية المحتملة لحماية السيلاستاتين مقارنة بالقشرة. والجدير بالذكر أن Sulf 4 0: 2 يبدو أنه أكثر الأنواع تميزًا في النخاع ، مع الأخذ في الاعتبار أعلى درجات FC و VIP. تم العثور أيضًا على أنواع متنوعة من أجهزة الكمبيوتر الشخصية و PE ، بما في ذلك PE 36: 5 ، PE 38: 5 ، PE 38: 6 ، PE 36: 4 ، PE 34: 3 ، و PC 36: 6 ، على سبيل المثال لا الحصر ، بالإضافة إلى Cer 42: 2 ، dhHexCer 36: 0 ، و HexCer 34: 1 ، كواسمات حيوية مهمة لحماية السيلاستاتين في النخاع. في جميع الحالات ، ارتبطت هذه الدهون إما بالانتعاش الجزئي أو الكلي الناجم عن السيلاستاتين من مستويات التحكم مقارنة بمستوياتها المتغيرة بواسطة السيسبلاتين. بالنسبة لجميع الأنواع ، كانت قيم AUC لمنحنيات ROC التي تم الحصول عليها أعلى من 0.85 ، مما يثبت قدراتها التمييزية الجيدة

مناقشةفي هذا العمل ، قمنا بتحديد ما مجموعه 108 نوعًا من الدهون التي تشتمل على دهون هيكلية مهمة مثل الدهون الفوسفورية ، والسفينجوليبيدات ، والكوليسترول جنبًا إلى جنب مع أشكالها المؤسترة ، علىالكلىالقشرة والنخاع من الفئران المعالجة بالسيسبلاتين و / أو السيلاستاتين. تم إجراء هذا من أجل فهم التأثير الكلوي السام للسيسبلاتين والتأثير الوقائي لسيلاستاتين بشكل أفضل. تم العثور على ما يصل إلى 63 نوعًا من الدهون تغيرت بشكل كبير في النخاع عن طريق العلاج بالسيسبلاتين ، بينما تأثر 56 نوعًا من الدهون في القشرة ، مما يعكس انعكاسًا.تلف كلويفي كلا المنطقتين. على الرغم من أن معظم دراسات AKI التي يسببها السيسبلاتين تركز على خلايا الأنابيب القريبة وكلويتلف القشرة ، حيث يتركز تراكم الأدوية بشكل أساسي ، تشير الدراسات الحديثة إلى حقيقة أن الإصابة في النخاع قد تكون شديدة كما في القشرة ، بناءً على فحوصات موت الخلايا المبرمج TUNEL [5]. قد يكون هذا مرتبطًا بتراكم السيسبلاتين في الجزء S3 من الأنابيب القريبة [3،5] ، نزولًا نحو النخاع الخارجي ، بصرف النظر عن الضرر المباشر والثانوي المحتمل لحلقة هنلي [4]. بالإضافة إلى ذلك ، تمت الإشارة إلى اللب باعتباره الأكثر حساسيةكلويمنطقة لمراقبة التغيرات الأيضية العالمية المرتبطة بالسيسبلاتين بالمقارنة مع القشرة [5]. أشارت نتائجنا السابقة أيضًا إلى حدوث تلف مباشر لخلايا النخاع (بصرف النظر عن الضرر الثانوي) بواسطة السيسبلاتين ، والذي انعكس في تغيرات الفوسفوليبيد والكارديوليبين المتنوعة [4]. توسع هذه النتائج الجديدة تلك الملاحظات بأنواع وفئات دهنية إضافية تم تغييرها بواسطة سيسبلاتين وتعزز أهمية تلف النخاع في AKI الناجم عن سيسبلاتين.

على الرغم من أن FC فيالكلىلم يتم تغييره بشكل كبير عن طريق العلاج بالسيسبلاتين ، فقد تم زيادة كل من إجمالي CE وجميع أنواع CE الفردية المقاسة بشكل ملحوظ في كل من القشرة (زيادة ثمانية أضعاف لإجمالي CE) والنخاع (زيادة أربعة أضعاف لإجمالي CE) بالاقتران مع سيسبلاتين الناجم عنتلف كلوي.يعتبر الكوليسترول مكونًا رئيسيًا لأغشية البلازما ، حيث يتداخل بين الدهون الفسفورية ويؤثر على السيولة ، والشحنة السطحية ، وتفاعلات مجموعات الرأس القطبية [35 ، 36]. وجوده أساسي أيضًا في أطواف الدهون ، وإنشاء تفاعلات كارهة للماء مع SM ، وكونه ضروريًا لفصل الجزيئات والتحكم في تفاعلها مع المكونات الأخرى في الغشاء [37]. تحافظ الخلايا على توازن الكوليسترول بين تخليق de novo في الشبكة الإندوبلازمية (ER) وامتصاص LDL بوساطة. يقع معظم الكوليسترول في غشاء البلازما ، ولكن يمكن أيضًا أن يتحول مرة أخرى إلى ER حيث يمكن تحويل FC (من خلال الأسترة بوساطة ACAT) إلى CE ، والذي يعتبر بمثابة تخزين خلوي للكوليسترول [36]. يمكن أيضًا تحلل CE مرة أخرى إلى FC ، مما يشكل دورة إستر الكوليسترول [36]. حقيقة أن FC لم يتغير أثناء العلاج بالسيسبلاتين ، ولكن زاد CE في كل من القشرة المخية والنخاع ، تشير إلى حدوث تغيير.كلوياستقلاب الكوليسترول المرتبط بـ AKI الناجم عن السيسبلاتين. أظهرت الدراسات السابقة ملاحظات متشابهة تمامًا في كل من خلايا الأنابيب البشرية القريبة -2 من هونج كونج وفي القشرة الكلوية المأخوذة من الفئران ، أثناء الإقفار الحادإصابة في الكلى، مع FC دون تغيير ومستويات CE متزايدة [36]. في هذه الحالة ، يبدو أن إصابة غشاء البلازما ، التي أدت إلى زيادة حركة انتقال FC من الغشاء إلى ER ، هي التفسير الأكثر منطقية ، مما أدى إلى تصاعد جيل CE. في هذا الصدد ، يبدو أن الأضرار التي لحقت بطوافات الدهون الغنية بالكوليسترول بدلاً من غشاء البلازما أكثر فاعلية في زيادة انتقال الكوليسترول إلى ER [36]. كما تم تضمين دور الحماية الخلوية لـ CE في مثل هذه الدراسات السابقة. كما تم الإبلاغ عن زيادة في مستويات CE في الفئرانكلويالقشرة خلال المرحلة المبكرة من اعتلال الكلية السكري [29]. تتوافق النتائج أيضًا مع الزيادة العالمية في الدهون المحايدة فيكلويذكرت الأنابيب الدانية أثناء العلاج سيسبلاتين [32]. تشير نتائجنا للمرة الأولى إلى زيادة عالمية في إجمالي CE بالإضافة إلى أنواع CE الفردية ، كلاهما فيكلويالقشرة والنخاع ، أثناء التهاب المفاصل الروماتويدي الناجم عن السيسبلاتين. من ناحية أخرى ، يبدو أن سيلاستاتين نفسه زاد بشكل طفيف CE 18: 0 و CE 22: 6 فقط في القشرة ، على الرغم من أن المستويات الإجمالية لـ FC أو CE لم تتغير. قد يكون هذا التأثير الطفيف بسبب حقيقة أن هدفه ، DHP-I ، يقع في أطواف الدهون في النبيبات القريبة (بشكل رئيسي في القشرة) ، وقد يكون هناك بعض الاضطرابات الصغيرة في الغشاء أثناء تفاعله. من ناحية أخرى ، أدت الإدارة المشتركة لسيسبلاتين وسيلاستاتين إلى انخفاض في جميع أنواع CE المزودة بسيسبلاتين في القشرة ، بينما في النخاع ، لم يلاحظ أي تأثير استرداد تقريبًا ، مع استرداد جزئي فقط لـ CE18: 2 . يشير هذا إلى التأثير المحدد للسيلاستاتين في الخلايا النبيبية القريبة ، مما يؤدي إلى حماية كبيرة لتوسيع موت الخلايا المرتبط بالتلف المباشر للسيسبلاتين على غشاء البلازما وطوافات الدهون في القشرة ، بينما يبدو أن تلف الخلايا المرتبط باختلال توازن الكوليسترول في النخاع بأكمله أن تظل غير محمية إلى حد كبير.

الشحميات السفينجولية هي دهون نشطة توجد أساسًا في أغشية الخلايا وهي غنية جدًا بطوافات الدهون [37]. السيراميدات هي المستقلبات المركزية لعملية التمثيل الغذائي للدهون السفينغولية ، والتي تتضمن جزيئات وأنزيمات متنوعة لها أدوار مهمة في العمليات الخلوية ، في نمو الخلايا ، موت الخلايا المبرمج ، التمايز ، مقاومة الأدوية ، والشيخوخة [38 ، 39]. بالإضافة إلى ذلك ، تشارك السفينجوليبيدات في المسارات المتعلقة بموت خلايا سرطان سيسبلاتين و AKI [33]. يمكن إنتاج السيراميد من خلال عدة مسارات ، بما في ذلك تخليق دي نوفو ، أو التحلل المائي للسفينجوميلين ، أو إعادة تدوير شحميات السفينجوليبيد المعقدة [38]. يعتبر تخليق دي نوفو هو المسار الرئيسي ، ويحدث في ER ، من palmitoyl-CoA و serine ، عبر سلسلة من المسارات الأنزيمية لإنتاج السفينغانين ، مما يؤدي إلى ثنائي هيدرو سيراميدات من خلال سينسيز ثنائي هيدرو سيراميد (سيرس). أخيرًا ، يؤدي إزالة التشبع من dhCer إلى توليد Cer [40]. يمكن أيضًا تحلل SM عن طريق sphingomyelinases ، وإنتاج Cer. يمكن تحويل Cer إلى شحميات سفينجولية أكثر تعقيدًا في جهاز Golgi: تمت الفسفرة لتوليد Cer -1- P ، وهو جزيء تأشير ؛ تم تحويلها إلى SM بفعل SM synthase ؛ أو غليكوزيلاتيد لإنتاج هيسوكسيل سيراميدات (جلوكوزيل أو جالاكتوزيل- سيراميد) ، سلائف الكبريتيدات [38]. يمكن أيضًا أن يتحلل Cer إلى السفينجوزين ، وهو مقدمة من سفينجوزين -1- فوسفات (S1P) ، مع أدوار مهمة في بقاء الخلايا وتكاثرها ، والالتهاب ، ومقاومة الأدوية [39]. أخيرًا ، تحلل S1P إلى إيثانول أمين وسداسي كلوي هو مخرج مسار هذا الطريق [38].

أثناء القياس الكمي لأنواع السفينغوليبيد ، لوحظت زيادة عالمية في المستويات الإجمالية من Cer و dhCer و HexCer و dhHexCer أثناء معالجة السيسبلاتين ، والتي كانت ذات صلة بشكل خاص بـ Cer. الاختلافات فيما يتعلق بالسيطرةالكلىكانت أكثر وضوحًا عندما تم تحديد نوع فرعي فردي كميًا ، مع زيادة 19 نوعًا من 22 نوعًا إما في القشرة (11 نوعًا) و / أو النخاع (18 نوعًا) مع علاج سيسبلاتين. هذا يتفق مع الملاحظات السابقة التي تشير إلى زيادة في Cer و HexCer في الماوسكلويقشرة دماغية مرتبطة بعلاج سيسبلاتين [33] ، ولكن هنا وجدنا أن النخاع يتأثر أيضًا بهذا التأثير.

يمكن أن تعكس هذه الملاحظات زيادة إنتاج التمثيل الغذائي من Cer / dhCer و HexCer / dhHexCer. من ناحية أخرى ، يمكن أن يحدث هذا من خلال زيادة نشاط سيرس ، في ضوء الملاحظات السابقة فيكلويالقشرة المخية ، حيث تم قياس نشاط سيرس طويل السلسلة أثناء معالجة سيسبلاتين وتثبيط سيرس أدى إلى انخفاض في تراكم Cer / HexCer المرصود [33]. علاوة على ذلك ، يشير الانخفاض الناجم عن السيسبلاتين في مستويات SM / dhSM الموجودة في القشرة والنخاع إلى زيادة الإنتاج الإضافي لـ Cer / dhCer عن طريق التحلل المائي لـ SM / dhSM عبر مسار sphingomyelinase (SMase) [38] ، مع تأثير خاص على سلسلة طويلة من Cer / dhCer ، كلها ضارة في نماذج AKI [40]. سيكون هذا أيضًا متفقًا مع حقيقة أن أنواع الحبوب طويلة السلسلة تبدو ذات صلة أثناء AKI [40] ومع الملاحظات السابقة لزيادة نشاط SMase فيكلويالقشرة أثناء العلاج سيسبلاتين [33]. يشارك Cer في موت الخلايا المبرمج المستحث بالسيسبلاتين عن طريق إرسال إشارات في كل من المسارات الداخلية والخارجية [39]. في مسار الميتوكوندريا الجوهري ، يتسبب السيسبلاتين في نفاذية الغشاء الخارجي للميتوكوندريا. يمكن أن تساهم الزيادة في Cer ، جنبًا إلى جنب مع مستقلباته النهائية ، في هذا النفاذية ، كما أن تكوين القنوات بواسطة Cer يسهل موت الخلايا المبرمج في غشاء الميتوكوندريا ، مما يسمح بدخول Bax في غشاء الغشاء الخارجي للميتوكوندريا ، وكذلك تدفق الخارج من السيتوكروم ج [39]. علاوة على ذلك ، يوظف موت الخلايا المبرمج الخارجي بوساطة Fas مستقبلات Fas الموجودة في أطواف الدهون ، مع تكتلها عن طريق تنشيط SMase الناجم عن سيسبلاتين وارتفاع Cer [39]. لذلك ، يحدد Cer موت الخلايا المبرمج في AKI الناجم عن السيسبلاتين ، بينما يبدو أن تسويتها من خلال تحولها إلى HexCer وقائي [33] ويرتبط بمقاومة السيسبلاتين [39]. يمكن أن يؤثر إنتاج الحبوب بكميات كبيرة أيضًا على الخصائص الفيزيائية للأغشية ويمكن أن يزيح الكوليسترول ويؤدي إلى الأسترة [35]. من ناحية أخرى ، SM موجود بشكل رئيسي في أغشية البلازما وله ارتباط مباشر بجزيئات الكوليسترول ، وهو مهم بشكل خاص في أطواف الدهون [41]. يمكن أن يكون نقص تجديد SM سلبيًا لوظيفة الغشاء المناسبة [41].

الكبريت وفيرة فيالكلى،خاصة في الغشاء القمي للنبيبات البعيدة [42]. على الرغم من أنها ليست ضرورية للطبيعيوظائف الكلى، تم العثور على نقص في الكبريت يتم تعويضه عن طريق زيادة توليد الدهون السكرية الكبريتية والكول تيرول [42]. كبريتيد هو مفتاح L- سيليكتين يجند فيالكلى،مع دور حيوي في تسلل الوحيدات إلىالكلىالخلالي [42]. من ناحية أخرى ، يشكل المايلين والبروتين الليمفاوي المرتبط بالطوافة الدهنية (MAL) معقدات تحتوي على الكبريتيدات والجليكوسفينجوليبيدات فيكلويأغشية ، مما يساهم في تثبيت وفرز النطاقات الدقيقة المخصبة بالجليكوسفينجوليبيد [42]. تؤكد النتائج التي توصلنا إليها عن تغييرات الكبريت في القشرة المخية والنخاع الدراسات السابقة حيث يُعتقد أيضًا أن أنواع الكبريتيدات المتنوعة قد تغيرت بواسطة سيسبلاتين في الكلى [34].

تم استرداد جميع أنواع Cer و dhCer و HexCer و dhHexCer التي تم تغييرها في القشرة بواسطة السيسبلاتين جزئيًا أو كليًا عن طريق الإدارة المشتركة لسيلاستاتين ، بينما في النخاع ، لم يتم استرداد كمية كبيرة من أنواع Cer ، مع استرداد شبه كامل لل dhCer و HexCer و dhHexCer. بالنظر إلى تورط أنواع Cer في موت الخلايا المبرمج الخارجي بوساطة Fas وانسداده عن طريق ارتباط السيلاستاتين بـ DHP-I في أطواف الدهون في النبيبات القريبة ، يمكن أن يفسر هذا التأثير الوقائي واستعادة Cer بشكل رئيسي في خلايا القشرة. بالنسبة إلى SM ، و dhSM ، والكبريت ، يبدو أن استعادة سيلاستاتين أكثر صلة في النخاع منه في القشرة ، مما يشير إلى أن الضرر الثانوي يضعف بسبب عمل السيلاستاتين في الأنابيب القريبة التي تصل إلى النخاع الخارجي ، حيثتلف كلوييتركز [4].

الفسفوليبيدات هي أكثر الأنواع وفرة في أغشية الخلايا ، حيث يسود PC ، وبدرجة أقل ، PE ، مع وجود أعلى للكمبيوتر في الجانب اللمعي و PE أكثر وفرة في المنشور الخلوي [35،43]. من ناحية أخرى ، تعد الليزوفوسفوليبيدات إشارات إلى الأنواع التي يمكن إنشاؤها من التحلل المائي للجليسيروفوسفوليبيد بما في ذلك LPC [35]. تم العثور على أكثر من 60 نوعًا من أنواع أجهزة الكمبيوتر ، و PE ، و LPC التي تم تحديدها كمياً لتغييرها عن طريق معالجة السيسبلاتين ، إما في القشرة أو النخاع ، حيث يقدم الكمبيوتر الشخصي و LPC قدرًا أكبر من التغييرات في القشرة ، بينما كانت التغييرات المرتبطة بـ PE أكثر عددًا وبارزة في النخاع. تعديلاتكلويتتوافق أنواع أجهزة الكمبيوتر الشخصي أو البولي إيثيلين أو LPC نتيجة العلاج بالسيسبلاتين مع الملاحظات السابقة المبلغ عنها فيالكلىخلال AKI [4،5،26،34،44]. تشير نتائجنا إلى أن معظم أنواع PE و PC و LPC التي تم تغييرها قد انخفضت بواسطة السيسبلاتين في كل من القشرة المخية والنخاع. فيما يتعلق بتأثير cilastatin الكلوي ، اللافت للنظر ، لوحظ درجة أعلى من تأثير الانتعاش الجزئي أو الكلي في النخاع بالنسبة للدهون المعدلة من السيسبلاتين مقارنة بالقشرة. حقيقة أخرى مثيرة للاهتمام هي أن جميع أنواع PC و PE و LPC التي تزيد من السيسبلاتين في القشرة والنخاع تم استعادتها بواسطة السيلاستاتين ، في حين أن معظم الأنواع التي انخفض فيها السيسبلاتين في القشرة كانت لا تزال تتغير أثناء العلاج المشترك مع السيلاستاتين. قد يشير هذا إلى درجة أعلى من الضرر المباشر الناجم عن تراكم السيسبلاتين في القشرة ، ويبقى غير محمي بواسطة السيلاستاتين ، ويؤدي إلى موت الخلايا والكمبيوتر المرتبط به ، PE (المكونات الرئيسية لغشاء الخلية) ، وإطلاق LPC في أجسام موت الخلايا المبرمج و ، لذلك ، الانخفاض في مستوياتها. في المقابل ، يمكن حماية الضرر الثانوي المرتبط بالاستماتة الخارجية وما يترتب على ذلك من تراكم البروتين المصبوب في الأنابيب القريبة بواسطة سيلاستاتين. قد يعني هذا أن أنواع PC و PE و LPC انخفضت في النخاع وترتبط بشكل أكبر بتلف الخلايا الثانوي الذي يحركه السيسبلاتين. من ناحية أخرى ، قد تترافق زيادة أنواع PC و PE و LPC إما مع تجديد غشاء الخلية أو عمليات الإشارة ، والتي ، وفقًا لهذه النتائج ، قد تكون أكثر ارتباطًا بالضرر الناتج عن موت الخلايا المبرمج الخارجي الثانوي الذي يسببه السيسبلاتين المحمي بواسطة السيلاستاتين.

بالإضافة إلى ذلك ، لوحظ أيضًا انخفاض ناتج عن السيسبلاتين في النسبة المئوية لأنواع PC و PE ذات السلاسل الدهنية غير المشبعة بدرجة عالية ، والتي يمكن أن تكون مرتبطة بعمليات بيروكسيد الدهون ، ويمكن تقليلها بواسطة السيلاستاتين [4،10،11].

عالميًا ، ضمن الأنواع الدهنية التي تم تحديدها كميًا ، لوحظ تأثير استرداد السيلاستاتين في 26 من 56 دهون معدلة بالسيسبلاتين في القشرة ، وفي 50 من أصل 63 دهون معدلة بالسيسبلاتين في النخاع. ربما يعكس هذا درجة عالية من التغيرات الدهنية المرتبطة بأضرار الميتوكوندريا المباشرة غير المحمية التي يسببها سيسبلاتين بشكل رئيسي في القشرة مقارنةً بالنخاع ، مع المزيد من التغيرات الدهنية المرتبطة بالحماية الثانوية للضرر المكتشفة في النخاع الكامل. علاوة على ذلك ، سمح التحليل متعدد المتغيرات بتحديد المؤشرات الحيوية للدهون الجديدة المحتملة لكل من AKI و cilastatin الناجم عن سيسبلاتين.حماية الكلية، بما في ذلك أنواع CE أو Sulf أو PE أو PC أو Cer أو HexCer ، كما هو موضح في القسمين 2.5 و 2.6. من فايندنجنا ، CE 18: 2 و PE 36: 5 هي مؤشرات حيوية مرشحة محتملة قادرة على تمييز تلف السيسبلاتين والسيلاستاتين في نفس الوقتحماية الكليةفي كل من اللحاء والقشرة. ومع ذلك ، نظرًا لأن استعادة هذين النوعين باستخدام السيلاستاتين جزئي ، فإن الأنواع الأكثر ملاءمة كمؤشرات حيوية ستكون dhHexCer 34: 0 في القشرة والكبريت 42: 0 في النخاع ، والقدرة على التمييز بين كليهماتلف كلويوالحماية ، حيث يستعيد السيلاستاتين تمامًا مستوياته المعدلة من السيسبلاتين إلى تلك الموجودة في المجموعة الضابطة. يمكن استقراء هذا لأي إصابة كلوية بوساطة Fas / Fas ، ولكن يجب تأكيدها في الدراسات المستقبلية. تم اقتراح العديد من المؤشرات الحيوية الجديدة لـ AKI في السنوات الأخيرة ، بشكل أساسي البروتينات (على سبيل المثال ، KIM -1 [45] أو NGAL [46]). حقيقة أننا وجدنا مؤشرات حيوية جديدة محتملة للـ AKI الناجم عن السيسبلاتين والحماية المرتبطة بالسيلاستاتين ، ذات الطبيعة الدهنية فيالكلىالأنسجة ، يوسع المعرفة الموجودة ويوفر خيارات تكميلية لتحسين التشخيص والتشخيص والمتابعة. في الواقع ، قد يتم استخدام مزيج من اكتشاف المؤشرات الحيوية كمؤشر على AKI محدد ناتج إما عن مادة سامة كلوية معينة (مثل سيسبلاتين) أو سبب آخر ، وحتى التمييز بين حالة المرض / تقدمه. خطوة أخرى إلى الأمام هي تحديد ما إذا كانت نتائجنا متغيرةكلويتنعكس أنماط الدهون أيضًا في تداول الدهون في الدم أو في البول. هذا من شأنه أن يجعل اكتشاف العلامات الحيوية لـ AKI و cilastatin الناجم عن سيسبلاتينحماية الكليةأكثر جدوى في المرضى.

التغييرات المرتبطة بالـ AKI التي يسببها سيسبلاتين في مستويات الدهون عديدة ومتنوعة ، وتشمل الدهون الهيكلية الهامة على أكمل وجهكلويالهيكل: القشرة والنخاع. يُظهر توهين العديد من هذه التغييرات بواسطة سيلاستاتين قدرته الكبيرة على التحسنوظيفة الكلىوتقليل التغيرات الهيكلية المرتبطة بالدهون ، في ارتباط مع تطبيعكلويعلم التشكل المورفولوجيا. مرة أخرى ، أثبت السيلاستاتين أنه مفيد في تمييز تلف الخلايا المباشر غير المحمي الناجم عن سيسبلاتين والتغيرات الثانوية المتعلقة بالضرر الأولي ، والتي يمكن أن تتضرر في الأنابيب القريبة بسبب انسداد السيلاستاتين من مسار موت الخلايا المبرمج بوساطة فاس.

المواد والأساليب

الكواشفتم استخدام Cilastatin (تم توفيره من قِبل Merck Sharp and Dohme SA ، مدريد ، إسبانيا) وسيسبلاتين (Pharmacia Nostrum (مدريد ، إسبانيا). {0}. محلول كلوريد الصوديوم بنسبة 9 بالمائة (Braun Medical SA ، برشلونة ، إسبانيا) لتحضير المحاليل الدوائية للإعطاء. N-dodecanoyl-D-erythro-sphingosylphosphorylcholine [SM 3 0: 1 (d18: 1/12: 0)] ، D-glucosyl- ß -1 ، 10- N-dodecanoyl-D-erythro-sphingosine [HexCer 3 0: 1 (d18: 1/12: 0)] ، N-dodecanoyl D -erythro sphinganylphosphorylcholine [dhSM 3 {{5 0}}: 0 (d18: 0/12: 0)] ، 1 ، 2- dimyristoleoyl-sn glycero -3- phosphocholine [PC 28: 2 (14: 1/14: 1)] ، 1- heptadecanoyl -2- hydroxy-sn-glycero -3- phosphocholine [LPC (17: 0)] ، و 1 ، تم شراء 2- dipalmitoleoil-sn-glycero -3- phosphoethanolamine [PE 32: 2 (16: 1/16: 1)] من Avanti Polar Lipids (Alabaster ، ألاباما ، الولايات المتحدة الأمريكية). D-erythro-sphingosine [Cer 42: 1- d7 (d18: 1/24: 0)]، N-stearoyl D-erythro-dihydrosphingosine [dhCer (36: 0- d3)] ، و C 16-30- sulfogalactosylceramide [Sulf 34: 1 (d18: 1/16: 0)] تم الحصول عليها من Matreya LLC (State College ، PA ، الولايات المتحدة الأمريكية). الكوليسترول- d7 (FC-d7) والكوليسترول- d7 بالميتات [CE (16: 0- d7)] كانتا من سيجما-الدريتش.

تم استخدام مذيبات وكواشف HPLC أو LC-MS حصريًا ، بما في ذلك الميثانول (MeOH) والأسيتونيتريل (ACN) والأيزوبروبانول (iPrOH) (VWR International Eurolab ، برشلونة ، إسبانيا) ، وكذلك الكلوروفورم وثاني كلورو ميثان والأمونيوم للتزاوج. (NH4COOH) (Sigma-Aldrich، Merck Life Science SL ، مدريد ، إسبانيا). تم الحصول على المياه عالية النقاء من نظام تنقية Milli-Q (Millipore ، Merck Life Science SL ، مدريد ، إسبانيا).

نموذج حيوانيتم تربية فئران ويستار البالغة (WKY ، Criffa ، برشلونة ، إسبانيا) في Instituto de Investigación Sanitaria Gregorio Marañón (IiSGM ، مدريد ، إسبانيا). تم الاحتفاظ بها تحت ظروف درجة حرارة وضوء ورطوبة مضبوطة مع حرية الوصول إلى الطعام والماء. تم إعطاء العلاجات داخل الصفاق كما هو موضح سابقًا [4،11] إلى أربع مجموعات من الفئران (عدد=6 حيوانات لكل مجموعة): المجموعة 1: التحكم (CNT) - 0. تم ​​حقن 9 بالمائة من كلوريد الصوديوم في الفئران بنفس طريقة العلاجات للمجموعتين 3 و 4 ؛ المجموعة 2: سيلاستاتين (CIL) - حقنها (15 0 مجم / كجم من وزن الجسم يومياً) ؛ المجموعة 3: حقن سيسبلاتين (CISPL) (جرعة فريدة من 5 مجم / كجم من وزن الجسم في اليوم 0) ؛ والمجموعة 4: سيسبلاتين زائد سيلاستاتين (CISCIL) - يحقن 5 مجم / كجم من وزن الجسم في اليوم 0 ويحقن سيلاستاتين (150 مجم / كجم 1 وزن / يوم). تم التضحية بالحيوانات بعد خمسة أيام من بدء العلاج. قبل ذلك ، تم جمع بول لمدة 24 ساعة في أقفاص أيضية من كل جرذ. كما تم عزل مصل الدم بالطرد المركزي. تمت إزالة الكلى بعد التروية بمحلول ملحي بنسبة 0.9 في المائة عند 4 درجات مئوية ، متبوعًا بفك الكبسولة. القشرة والنخاع الأيسرالكلىوالنصف الأيمن المقطع عرضيًاالكلىتم استئصالها وتجميدها في سائل N2 وتخزينها أخيرًا عند درجة حرارة 80 درجة مئوية. النصف الآخر من اليمينالكلىتم تخليصه بنسبة 4 في المائة من بارافورمالدهيد وبرافيفين مضمن للدراسات النسيجية.

الدراسات النسيجيةتم إجراء تلطيخ Hematoxilin / eosin (Sigma-Aldrich ، Steinhem ، ألمانيا) على 5 ميكرومتر من الجرذ السهميالكلىأقسام. تم استخدام مجهر IX70 معكوس (أوليمبوس ، هامبورغ ، ألمانيا) لأخذ الصور المجهرية بتكبير 20 × و 60 × للفحص النسيجي.

مؤشرات وظائف الكلىتم استخدام محلل AutoAnalyzer Cobas 711 (روش ، بازل ، سويسرا) في تحديد BUN والكرياتينين والصوديوم والبوتاسيوم في عينات المصل. تم استخدام معدل تصفية الكرياتينين لحساب GFR. تم تحديد البروتين الكلي في البول باستخدام طريقة حمض السلفوساليسيليك [47].

تجانس الأنسجة  الكلىتمت إضافة أنسجة القشرة والنخاع (حوالي 50 مجم لكل منهما) إلى أنابيب بلاستيكية ذات غطاء لولبي سعة 1.5 مل تحتوي على 800 ميكرولتر من محلول عازلة التحلل: 50 ملي مولار من Tris – HCl pH 7.5 ، 125 ملي كلوريد الصوديوم ، 5 ملي مولار NaF ، 1.4 ملي مولار Na4O7P2 ، 1 ملي مولار Na3VO4 ، ومثبط البروتياز (Pierce Biotechnology ، Inc. ، Rockford ، IL ، USA) ، وحبات الزركونيوم 1.5 مم. تم تقسيم الأنسجة على جهاز تجانس BeadBug -6 (Benchmark D 1036- E ، Bechmark Scientifific ، Sayreville ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية) عند 4500 دورة في الدقيقة ، في ثلاث دورات من 90 ثانية. تم صوتنة المجانسة أيضًا لمدة 40 ثانية عند 10 بالمائة من السعة وطردها عند 600 × جم لمدة دقيقة واحدة عند 4 درجات مئوية. تم تخفيف جزء من المادة الطافية الناتجة بنسبة 1:10 لتحديد البروتين الكلي عن طريق فحص بروتين حمض البيسينشونينيك (BCA) (شركة بيرس للتكنولوجيا الحيوية ، روكفورد ، إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تخزين بقية مستخلص البروتين عند درجة حرارة 80 درجة مئوية حتى تحليل الدهون.

التحليل الدهني بواسطة LC-MS / MSتم استخلاص الدهون من الأنسجة (ما يعادل 25 0 ميكروغرام من البروتين الكلي) باتباع طريقة فولش [48]. تمت إضافة عشرة ميكرولتر من مزيج معياري داخلي (IS) قبل استخلاص الدهون للحصول على القياس الكمي النسبي لأنواع الدهون ، كما هو موضح سابقًا [49]. يتكون خليط IS مما يلي: CE (16: 0- d7) ، FC-d7 ، Cer (42: {{1 0} d7) ، HexCer (3 0 : 1) ، LPC (17: 0) ، PC (28: 2) ، PE (32: 2) ، SM (30: 1) ، درهم إماراتي (30: 0) ، درهم (35: 0) ، وكبريت (34) : 1) بالتركيزات الواردة في الجدول S4. تم تجفيف مستخلصات الدهون تحت تيار من النيتروجين وإعادة تكوينها في 250 ميكرولتر من الأسيتونيتريل / الأيزوبروبانول (1: 1 ، المجلد: المجلد) ، صوتنة لمدة 10 دقائق ، ثم نقلها إلى قنينة الحقن.

تم حقن خمسة ميكرولتر من مستخلص الدهون في نظام LC Eksigent UltraLC {0}} (AB-Sciex LLP ، Framingham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم فصل الأنواع على عمود Kinetex C18 (100 × 2.1 مم ، 1.7 ميكرومتر ؛ Phenomenex ، Macclesfifield ، المملكة المتحدة) تعمل عند 55 درجة مئوية. تم تطبيق الشطف باستخدام خليط ثنائي من المذيب أ (60 بالمائة أسيتونيتريل في الماء ، 10 ملي مولار NH4COOH) والمذيب ب (90 بالمائة كحول أيزوبروبيل في أسيتونيتريل ، 10 ملي مولار NH4COOH) وتدرج خطي من 60 بالمائة أ إلى 100 بالمائة ب في 12 دقيقة و 100 بالمائة ب إلى 60 بالمائة أ في 8 دقائق ، بمعدل تدفق 0.4 مل دقيقة 悆 1. تم استخدام أداة QTrap 4000 (AB-Sciex LLP ، Framingham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) للكشف عن الدهون ، مع برنامج Analyst 1.6.2. تم استخدام النيتروجين كغاز تجفيف (T: 500 ْم ، الضغط: 30 رطل / بوصة مربعة) وكغاز إرذاذ (50 رطل / بوصة مربعة). تم ضبط الاكتشاف في الوضع الإيجابي للرش الكهربائي (ESI) لجميع فئات الدهون باستثناء الكبريت ، الذي تم تحليله في الوضع السلبي ESI. تم تحليل CE و FC باستخدام مصدر التأين الكيميائي للضغط الجوي (APCI) في وضع الأيونات الموجبة. تم استخدام نهج مستهدف للكشف عن الدهون في عمليات مراقبة التفاعل المتعدد (MRM) لكل نوع من أنواع الدهون في أوقات الاحتفاظ بها (الجدول S5). تمت معالجة مخططات كروماتوجرام الذروة LC-MS / MS باستخدام برنامج Skyline الإصدار 4.1 (MacCoss Lab ، سياتل ، واشنطن ، الولايات المتحدة الأمريكية) [50]. تم تحديد كمية أنواع الدهون من خلال المقارنة المباشرة للمنطقة لكل نوع مع منطقة IS لفئة الدهون الخاصة بهم ، كما هو موضح سابقًا [49]. تم التعبير عن النتائج في صورة nmol / mg بروتين. تم تحديد إجمالي مستويات فئة الدهون كمجموع أنواع فئة الدهون الفردية التي تم تحديدها كمياً. تم تصنيف الأنواع الدهنية وفقًا للترميز الموصى به [51].

تحليل احصائيتم التعبير عن القيم على أنها تعني ± الانحراف المعياري. تم استخدام SPSS 11.5 (SPSS ، شيكاغو ، إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكية) للإحصاء الوصفي وتقييم الفروق الإحصائية في المتغيرات بين المجموعات عن طريق تحليل التباين. بالنسبة لمقارنة مجموعتين غير متزاوجتين من المتغيرات الدهنية ، تم إجراء اختبارات حدودية (اختبار t للطالب غير مزدوج الذيل) أو اختبارات غير بارامترية (مان ويتني) بعد اختبار الحالة الطبيعية (شابيرو ويلك). تم استخدام طريقة Benjamini-Hochberg لتصحيح معدل الاكتشاف الخاطئ (FDR) لقيم p عند مقارنة العديد من الأنواع الفردية للدهون. تم أخذ قيمة p ثنائية الوجه <0. 0="" 5="" و="" fdr=""><0.1 في="" الاعتبار="" لتحديد="" الفروق="" ذات="" الدلالة="" الإحصائية="" لتجنب="" فقد="" المرشحين="" المحتملين="" للواسمات="" الحيوية.="" تم="" حساب="" تغيير="" الطية="" للمجموعة="" x="" مقابل="" المجموعة="" y="" كنسبة="" من="" القيم="" المتوسطة="" لمتغيرات="" المجموعات="" المعنية="" x:="">

تم إجراء تحليل البيانات متعدد المتغيرات (MVDA) باستخدام SIMCA الإصدار 14.1 (MKS Umetrics ، أوبسالا ، السويد) و MetaboAnalyst 5. 0 (https://www.metaboanalyst.ca (تم الوصول إليه في 3 0 2 سبتمبر {{2 0} 21)) [52] ، بما في ذلك PCA غير الخاضعة للإشراف و OPLSDA الخاضعة للإشراف. تم استبدال القيم المفقودة باستخدام طريقة k-الأقرب. تم تحويل المتغيرات إلى لوغاريتمي وقياس باريتو قبل MVDA. تم تقييم النماذج وفقًا لقيم R2 و Q2. تم التحقق من صحة OPLS-DA عن طريق اختبار التقليب (100 دورة). تم استخدام درجات VIP و S-plots من نماذج OPLS-DA لتحديد المتغيرات ذات الصلة في CISPL مقابل CNT و CISCIL مقابل CNT و CISCIL مقابل تمييز مجموعة CISPL. الامتثال المتزامن لـ VIP> 1 ، تم قياس الشحنات كمعامل ارتباط|p (corr)|> 0.5 ، وقيمة p ثنائية الجانب <0.05 و="" fdr=""><0.1 للمقارنة="" بين="" مجموعتين="" كانت="" المعايير="" المستخدمة="" لاختيار="" المرقم="" الحيوي="" المحتمل.="" تم="" الحصول="" على="" قيم="" auc="" من="" مخططات="" منحنى="">

براءات الاختراعترتبط براءات الاختراع التالية جزئيًا بالعمل المقدم في هذه المخطوطة: "استخدام السيلاستاتين لتقليل السمية الكلوية للمركبات المختلفة" (رقم براءة الاختراع EP2،143،429 B1 ؛ الولايات المتحدة 9،216،185 B2 ؛ الولايات المتحدة 9،522،128 B2 ؛ و US9،757،349 B2). تم تعيين هذه إلى Fundación para la Investigación Biomédica Hospital Gregorio Marañón (FIBHGM) ومرخصة من FIBHGM إلى Telara Pharma SL دخلت Telara Pharma SL حاليًا في اتفاقية ترخيص مع Arch Biopartners.