يمنع الميلاتونين تسلل الخلايا اللمفاوية التائية إلى كلى الفئران المصابة بارتفاع ضغط الدم ، الناجم عن نظام غذائي غني بالملح ، عن طريق منع التعبير عن CXCR3 Ligand Chemokines

لمزيد من المعلومات: ali.ma@wecistanche.com

ارييل بير¹روان الخشاب²يهونتان شرابي^1,2,3ايهود غروسمان^1,2,3و Avshalom Leibowitz^1,2,3,*

¹الطب د ، مركز حاييم شيبا الطبي ، تل هشومير 5262000 ، إسرائيل ؛ arielbier@gmail.com (AB) ؛ Yehonatan.Sharabi@sheba.health.gov.il (YS) ؛ Ehud.Grossman@sheba.health.gov.il (مصر)² Hypertension Unit, the Chaim Sheba Medical Center, Tel-Hashomer 5262000, Israel;rawankhasbab@gmail.com³كلية الطب ساكلر ، جامعة تل أبيب ، تل أبيب 6997801 ، إسرائيل *

الملخص: في دراسة سابقة أوضحنا ذلكالميلاتونينيمنعالكلىالضرر في نموذج ارتفاع ضغط الدم الناجم عن الملح عن طريق تقليل الإجهاد التأكسدي. افترضنا أن هذا التأثير ينطوي على خصائص الميلاتونين المناعية. في الجسم الحي تم تغذية فئران الدراسة الحساسة للملح (DSS) بطعام غير طبيعي ، أو نظام غذائي عالي الملح (HSD) ، أو HSD والميلاتونين(30 مجم / كجم / يوم) في أسابيع الماء قبل الليل.الكلىتم حصادها لعزل الخلايا الليمفاوية الفورية وتوصيفها عن طريق قياس التدفق الخلوي (CD3 بالإضافة إلى CD4 plus و CD3 plus CD8 plus) ولجاذب الخلايا الليمفاوية الكيميائي (بشكل رئيسي CXCLالكيماويات) دراسات التعبير الجيني. في الفئران المختبرية ، تمت زراعة خلايا ميسانجيل (RMC) في وسط عالي الملح بدون ومعالميلاتونين. ارتبط HSD بترشيح كلوي كبير للخلايا اللمفاوية التائية CD4 plus و CD8 بالإضافة إلى مجموعة التحكم. يقلل الميلاتونين بشكل كبير من تسلل الخلايا الليمفاوية في الكلى. زاد HSD بشكل كبير من تعبير mRNA عن CXCLالكيماوياتأدى إضافة الميلاتونين إلى HSD إلى إلغاء هذا التأثير. أدت معالجة خلايا RMC بالملح إلى زيادة تعبير CXCL10 و CXCL11 ولكن ليس CXCL9. مضيفاالميلاتونينلوسائل الإعلام الثقافة حالت دون هذه الزيادة. أدى علاج الجرذان التي تتغذى على HSD بالميلاتونين إلى تقليل الجاذب الكيميائي للخلايا الليمفاوية الكلوية من تعبير الحمض النووي الريبي ، ويرتبط بالحد بشكل كبير من تسلل الخلايا اللمفاوية التائية الكلوية. قد يكون للملح تأثير مباشر على الخلايا الكلوية المنتجة للكيماويات ، والتي يضعفها علاج الميلاتونين.

الكلمات الدالة:الميلاتونين؛ ملح؛ الخلايا اللمفاوية التائية. ارتفاع ضغط الدم.الكلى؛ CXCL 9 ؛ CXCL 10 ؛ CXCL 11

1 المقدمة

ارتفاع ضغط الدم (HTN) هو عامل خطر رئيسي للقلب والأوعية الدموية قابل للتعديل. بسبب شيخوخة السكان ، يزداد انتشار HTN بشكل مطرد ، حيث يصل إلى 30 بالمائة في المراحل المتقدمة [1]. على الرغم من الخيارات العلاجية الطبية المختلفة ، إلا أن السيطرة العالمية على HTN سيئة ، وعواقب HTN غير الخاضعة للرقابة مدمرة ، مما يخلق تأثيرًا سلبيًا هائلاً على الصحة العامة [2].

العوامل السلوكية والبيئية والوراثية المختلفة متورطة في التسبب في HTN. يُعد المحتوى المرتفع من الملح في النظم الغذائية الغربية أحد العوامل الرئيسية المساهمة في HTN ويرتبط بزيادة معدلات المراضة والوفيات. توصي المبادئ التوجيهية والمبادرات العامة بتقليل تناول الملح لعامة السكان. ومع ذلك ، قد لا يستفيد كل فرد من هذا التقييد ، حيث أن الفيزيولوجيا المرضية التي تربط حساسية الملح بـ HTN ليست مفهومة تمامًا وتحتاج إلى فهم ميكانيكي محسن [3]. وبالتالي ، فإن الاستراتيجيات الجديدة ضرورية لفهم HTN والتحكم فيه بشكل أفضل ، مما يجعل نماذج البحث الجديدة حاجة فورية.

تم العثور على الالتهاب والإجهاد التأكسدي متورطين في التسبب في HTN الأساسي. أثناء البحث عن المحفزات لبدء هذه العمليات واستمرارها ، تقترح العديد من نماذج HTN التجريبية مشاركة الاستجابة المناعية التكيفية [4].

انقر لفوائد Cistanche والآثار الجانبية لوظيفة الكلى

توجد بالفعل أدلة تربط المناعة التكيفية بـ HTN منذ الستينيات ، ومع ذلك ، في الآونة الأخيرة فقط ، مع فهم أفضل لجهاز المناعة ، يمكن تحقيق تقدم في هذا الاتجاه. دراسة رائدة من قبل Guzik وآخرون. أظهر أن أنجيوتنسين (Ang) II أو ملح ديوكسي كورتيكوستيرون (DOC) تم إضعافه في الفئران rag1 ، التي تعاني من نقص في الخلايا الليمفاوية T و B ، ويمكن أن يؤدي النقل بالتبني للخلايا T ، ولكن ليس الخلايا B ، إلى استعادة استجابة BP [5]. منذ هذه الورقة ، تم العثور على العديد من مكونات المناعة بالتبني لتكون ذات صلة بإمراضية HTN في معظم النماذج الحيوانية الشائعة. كما تمت دراسة دور الخلايا التائية في نموذج HTN الناجم عن الملح على نطاق واسع. تظهر الدراسات في المختبر أن الملح قد يدفع تمايز الخلايا التائية الساذجة إلى خلايا TH17 [6]. العديد من الأعمال في الجسم الحي في نماذج HTN التي يسببها النظام الغذائي عالي الملح (HSD) ، مثل فئران Dhal الحساسة للملح (DSS) ، تظهر تسللًا واسعًا للخلايا التائية الكلوية [7-9].

من بين العديد من العمليات الفسيولوجية ،الميلاتونينيعد التعامل مع تنظيم ضغط الدم أمرًا بديهيًا إلى حد ما. شجع النمط اليومي لضغط الدم على إجراء بحث مكثف بشأن الميلاتونين و HTN. العديد من الأعمال في الماضي ، في البشر وفي النماذج التجريبية ، ربطت مستويات منخفضة من الميلاتونين إلى HTN [10]. هناك بعض البيانات السريرية التي تشير إلى أن مكملات الميلاتونين قد تعالج HTN ، بشكل رئيسي للمرضى الذين يعانون من HTN الليلي [11]. ومع ذلك ، فإن عدم اتساق هذه البيانات يثير تساؤلات حول ما إذا كانت خصائص الميلاتونين غير اليومية تشارك أيضًا في تنظيم ضغط الدم.

تشير الخصائص المضادة للالتهابات والمضادة للأكسدة للميلاتونين إلى أن الميلاتونين يتفاعل مع جهاز المناعة. لقد أوضحت البيانات الناشئة دور إشارات الميلاتونين في تطوير الخلايا التائية ، والتنشيط ، والتمايز ، والذاكرة. هناك دليل على ذلكالميلاتونينالمستقبلات الغشائية والنووية موجودة على الخلايا التائية [12،13].الميلاتونينيؤثر على إنتاج العديد من السيتوكينات المشاركة في الاستجابة المناعية ، مثل الإنترفيرون (IFN) - وهو منظم محوري لاستجابة Th1 [14].

يعمل الإجهاد التأكسدي واستجابة الخلايا التائية ، وفقًا لبعض الباحثين ، بشكل جماعي على تعزيز تطور HTN وتلف الجهاز الناتج عن ارتفاع ضغط الدم [15]. في عملنا السابق ، أظهرنا ذلكالميلاتونينيقلل الإجهاد التأكسدي المحلي (الكلوي) ويمنع التليف الكلوي الناجم عن الملح والبيلة البروتينية في نموذج الفئران HTN الحساس للملح (نموذج DSS) [16]. نظرًا لأن الإجهاد التأكسدي له دور محوري في الاستجابة المناعية التكيفية المرتبطة بـ HTN ، فقد افترضنا أن خصائص الميلاتونين المناعية مسؤولة عن دورها الوقائي في HTN الناجم عن HSD.

الهدف من هذه الدراسة هو تقييم ما إذا كانالميلاتونينيقلل من استجابة الخلايا T التي يسببها الملح وتوضيح الآليات المسؤولة عن هذا التأثير.

2. المواد والأساليب

2.1. الحيوانات وبروتوكول الدراسة

تمت المصادقة على بروتوكول الدراسة من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان المؤسسية في مركز شيبا الطبي في إسرائيل. تمت مراقبة حالتهم الصحية عن طريق قياس وزن الجسم والملاحظة العامة اليومية للحركة والظروف الصحية لكل حيوان. تم فحص الفئران الذكور داهل الحساسة للملح ، البالغة من العمر أربعة أسابيع (RGD Cat # 1582190 ، RRID: RGD _1582190) موجود في منشأة حيوانية في أقفاص عادية (جرذان لكل قفص) عند 22 درجة مئوية مع دورة مظلمة 14/10 ساعات. تم الحفاظ على الفئران على نظام غذائي ملح طبيعي وتم إعطاؤهم ماء الصنبور لشربه على أساس الشهرة لفترة تأقلم مدتها خمسة أيام. تم بعد ذلك تقسيم الفئران إلى ثلاث مجموعات (ن=8) ، وفقًا للنظام الغذائي ، على مدار 8 أسابيع. وفقًا للجنة الأخلاقيات ، يجب التضحية بالحيوانات التي ظهرت عليها علامات المرض والمعاناة.

تم تغذية المجموعة الضابطة بنظام غذائي قياسي لطعام الفئران (2018 SC ؛ Teklad Envigo ، Madison ، WI ، الولايات المتحدة الأمريكية) ومياه الصنبور ؛ تم تغذية مجموعة النظام الغذائي عالي الملح (HSD) بمحلول مخصب متطابق (4 في المائة) (TD.120485 ؛ Teklad Envigo ، Madison ، WI ، الولايات المتحدة الأمريكية) ومياه الصنبور ، والميلاتونينتم تغذية المجموعة بنفس النظام الغذائي الملح المخصب (4 في المائة) مع الميلاتونين (M5250 ؛ سيجما ، ريهوفوت ، إسرائيل) (30 مجم / كجم / يوم) في مياه الشرب الخاصة بهم. تم قياس وزن الجسم واستهلاك الماء بشكل دوري. تم إذابة كمية الميلاتونين الصحيحة في الاحتياجات المائية المطابقة لكل قفص من أجل توصيل الجرعة الصحيحة لكل حيوان. يتم تحديد اليوم صفر على أنه يوم بدء تناول HSD واستهلاك الميلاتونين. في نهاية الدراسة ، تم التضحية بالفئران عن طريق التخدير العميق بنسبة 3 في المائة من الأيزوفلورين (تم تأكيد عمق التخدير عن طريق الضغط على القدم الخلفية) والكلىتم حصادها. تم استئصال الكليتين وتقطيعهما. تم أخذ الكلى لتحليل التدفق الخلوي باستثناء عدة أجزاء تمت إزالتها بسرعة وتجميدها في سائل N2 وتخزينها عند -80 درجة مئوية. تم استخدام Frozentissues لاستخراج الحمض النووي الريبي.

أعراض مرض الكلى

2.2. في الوقت الحقيقي النسخ العكسي الكمي PCR

تم التأكد من مستويات تعبير mRNA للجينات فيالكلىالأنسجة عن طريق النسخ العكسي الكمي في الوقت الحقيقي- PCR (qRT-PCR). تم استخلاص إجمالي الحمض النووي الريبي من أنسجة الكلى باستخدام مجموعة NucleoSpin RNA Kit (MACHERY-NAGEL ، Düren ، ألمانيا). تم إجراء النسخ العكسي باستخدام مجموعة النسخ العكسي للأنظمة الحيوية التطبيقية عالية السعة (الأنظمة الحيوية التطبيقية ، مدينة فوستر ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم إجراء تفاعلات qRT-PCR باستخدام Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems، Warrington، UK) ونظام Applied Biosystems 75 0 0 في الوقت الفعلي لنظام PCR. كانت ظروف ركوب الدراجات: خطوة واحدة أولى من 95 درجة مئوية لمدة 0. 20 دقيقة ثم 40 دورة من مرحلة الذوبان لمدة 3 ثوان عند 95 درجة مئوية ومرحلة ممتدة من 30 ثانية عند 60 درجة مئوية. في نهاية الأربعين دورة ، تم إجراء تقوس ذوبان. تم استخدام الوحدة الفرعية للساق الجانبي لبروتين الريبوسوم P0 (Rplp0) مرنا كعنصر تحكم داخلي. يتم سرد الاشعال في الجدول 1.

الجدول 1. قائمة بادئات الفئران المستخدمة في هذه الدراسة.

2.3 عزل الخلايا التائية من الكلى

بعد إزالة كبسولة الكلى ، وهماالكلىتم فرمها ومضايقتها بمكبس حقنة 2 مل من خلال مصفاة خلية 1 0 0 ميكرومتر في RPMI 1640 تحتوي على 2 ملي مل-جلوتامين ، 10 بالمائة FBS ، 10 ميكروغرام / مل DNase 1 (تقنيات الخلايا الجذعية ، كامبريدج ، ماساتشوستس) ، الولايات المتحدة الأمريكية) و 0.1 في المائة من النوع الرابع من الكولاجيناز (CLS 4 ، ورثينجتون ديكاتور ، AL ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تحضين المحلول لمدة 25 دقيقة عند 37 ْم. تمت إضافة محلول الغسل (DPBS / 2 في المائة FBS / 2 ملي EDTA) إلى متجانس الكلى للوصول إلى 45 مل وتم ترشيحه من خلال مصفاة خلوية 70 ميكرومتر. تم طرد المحلول عند 400 × جم / 7 دقائق. وتم تعليق الحبيبات في محلول غسيل 5 مل وترشيحها من خلال مصفاة خلية 40 ميكرومتر وطرد حديث عند 400 × جم / 7 دقائق. تم إعادة تعليق الحبيبات في 3 مل FBS (10 ملم EDTA) وطبقات فوق النسيج -1083 (سيجما ، ريهوفوت ، إسرائيل) ، وطردها عند 20 درجة مئوية عند 400 × جم / 30 دقيقة مع إيقاف الفرامل. تمت إزالة طبقة الخلية أحادية النواة الموجودة فوق النسيج ، وغسلها بمحلول غسيل مرتين ، وعلقت في محلول غسيل سعة 5 مل لتحليل قياس التدفق.

2.4 التدفق الخلوي

من كل مجموعة ،الكلىمن 5-7 الفئران تم تحليلها. لكل عينة ، تم أخذ 1 × 106 خلية. تم تحضين الخلايا أحادية النواة المعزولة بعلامات خارج الخلية: anti-CD3 (Thermo Fisher Scientific Cat # 12-0030-82 ، RRID: AB _465493) والتحكم في النمط النظيري (Thermo Fisher Scientific Cat # 12-4742-41 ، RRID : AB _10753770) ، anti-CD4 (Thermo FisherScientific Cat # 17-0040-80 ، RRID: AB _1210581) والتحكم في النمط النظري (Thermo Fisher Scientific Cat # 17-4724-81 ، RRID: AB _470188) ، anti-CD8 (Thermo Fisher Scientific Cat # 25-0084-82 ، RRID: AB _10548361) والتحكم في النمط النظري (Thermo Fisher Scientific Cat # 25-4714-80 ، RRID: AB _657914). تم تحليل جميع الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي (BD FACSCalibur Flow Cytometry System ، RRID: SCR _000401) باستخدام برنامج FlowJo (FlowJo ، RRID: SCR -008520).

وظائف الكلى

2.5 زراعة الخلايا

تم الحصول على خط خلية الفئران ميسانغيل ، RMC (ATCC Cat # CRL {0}} ، RRID: CVCL _0506) من ATCC®. تمت زراعة الخلية في وسط النسر المعدل من Dulbecco (01-055-1 أ ، الصناعات البيولوجية ، بيت هعيمك ، إسرائيل) باستخدام 4 ملي مولار من الجلوتامين المعدل لاحتواء 1.5 جم / لتر من بيكربونات الصوديوم و 4.5 جم / لتر من الجلوكوز وتكميله بـ 0.4 مجم / مل 418 و 15٪ مصل بقري جنيني. تم الحصول على الميلاتونين من سيجما (M5250 رحوفوت ، إسرائيل). 250 ممالميلاتونينتم صنع المخزون في الإيثانول. تمت زراعة الخلايا في ظروف عادية أو عالية الملح (بإضافة 8 0 ملي مولار كلوريد الصوديوم إلى الوسط) بدون أو مع الميلاتونين (0.5 ملي مولار). تم توقيت علاج الميلاتونين 45 دقيقة قبل إضافة NaCl إلى الوسط. كانت Allexperiments في 6 أطباق جيدة مع 3 × 105 خلايا لكل بئر وتم إجراء 6 تجارب مستقلة.

2.6. تحليل احصائي

يتم تقديم البيانات على أنها متوسط ​​تحليل إحصائي ± SEM تم إجراؤه باستخدام إحصائيات IBMSPSS ، RRID: SCR _019096. فحص تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) وطريقة Tukey اللاحقة للعملية الاختلافات بين المجموعات. تم تحليل بيانات qPCR في الوقت الفعلي باستخدام DataAssist ، RRID: SCR _014969.

3. النتائج

3.1. الميلاتونين يحمي الفئران التي تستهلك HSD

تراوح عمر الجرذان خلال هذه الدراسة من 4 إلى 13 أسبوعًا. في هذا العمر ، تمت الإشارة إلى رفاهية الفئران من خلال زيادة الوزن التي أظهرتها المجموعة الضابطة [17]. ومع ذلك ، وصلت HSDgroup إلى هضبة في اليوم 30 وإضافةالميلاتونينلتحسين HSD هذه الظاهرة (الشكل 1A). أظهرت مجموعة HSD معدل وفيات مرتفعًا ، حيث مات 50 بالمائة من الفئران أو كانت لديهم حالة سريرية تتطلب القتل الرحيم وفقًا لقواعد لجنة أخلاقيات الحيوان ، خلال فترة التجربة. مكملات الميلاتونين منعت موت الفئران بشكل كبير ، حيث مات واحد فقط من كل ثمانية فئران في اليوم 58 ، في نهاية الفترة التجريبية (الشكل 1 ب).

شكل 1.الميلاتونينتحسين ضغط الدم والبقاء على قيد الحياة في HSD. عولجت الفئران DSS لمدة 9 أسابيع مع HSD مع وبدون الميلاتونين. أدى اتباع نظام غذائي غني بالملح إلى خفض وزن الجسم اعتبارًا من اليوم 36 وخفف الميلاتونين هذا التأثير (أ). زاد HSD من معدل الوفيات من اليوم الرابع 0. علاج HSD-fedrats بالميلاتونين يحسن بقائهم على قيد الحياة. (ب). (ن=8) * -p أقل من أو يساوي 0. 05 الملح والملح بالإضافة إلى الميلاتونين مقابل التحكم. # -p أقل من أو يساوي 0.05 ملح مقابل السيطرة والملح بالإضافة إلى الميلاتونين. HSD - نظام غذائي عالي الملح.

3.2 الميلاتونين يمنع تسلل الخلايا التائية في الكلى الناجم عن HSD

عزلنا الخلايا منالكلىوبواباتهم إلى علامة الخلية التائية CD3. تم توصيل خلايا CD3 plus بـ CD4 و CD8. كان كل من CD3 plus CD4 plus و CD3 plus CD8 plus أعلى بشكل ملحوظ في HSD (5.18 ± 1.62 و 4.6 ± 0. 75 بالمائة ، على التوالي) مقارنةً بعنصر التحكم (0. 16 ± {{18} }. {{2 0} 2 و 0.95 ± 0.15 بالمائة على التوالي) والميلاتونينمكملات HSD مخفضة لكل من CD3 بالإضافة إلى CD4 plus و CD3 بالإضافة إلى CD8 بالإضافة إلى الخلايا إلى مستويات التحكم (0. 68 ± 0. 21 و 1.37 ± 0. 45 ، على التوالي) (الشكل 2A-D).

الشكل 2. الميلاتونين يمنع تسلل الخلايا التائية إلىالكلى. تم عزل الخلايا التائية من كلى الفئران وتم عزلها من أجل CD3. تم إغلاق الخلايا الإيجابية للقرص المضغوط 3- لـ CD4 و CD8. قلل الميلاتونين (C) كلاً من CD3 بالإضافة إلى CD4 plus و CD3 plus CD8 plus مقارنةً بـ HSD بدون الميلاتونين (B) مع عدم وجود اختلاف عن المجموعة الضابطة (A). يظهر التحليل لجميع الفئران في (د) (ن=7 - 8). HSD - نظام غذائي عالي الملح. * -p أقل من أو يساوي 0. 0 5 مقابل مجموعة التحكم. # -p أقل من أو يساوي 0.05 مقابل الملح بالإضافة إلى الميلاتونين.

3.3 يقلل الميلاتونين من بعض الكيماويات الكلوية التي تم تنظيمها في HSD

يتم تنظيم تجنيد الخلايا التائية في الأنسجة الالتهابية عن طريق التعبير الكيميائي المحلي. لذلك ، قمنا بقياس التعبير عن عائلتين كيماويين في الفئرانالكلى: عائلة chemokine (CXC motif) ligand (CXCL) وعائلة chemokine (C-Cmotif) ligand (CCL).

بالنسبة لعائلة CXCL ، تم تنظيم CXCL 9 و 10 و 11 التي تجذب الخلايا التائية إلى الأنسجة المستهدفة باستخدام مستقبلات CXCR3 على الخلايا التائية ، بشكل كبير في فئران HSD. المكملاتالميلاتونينخفضت إلى HSD تعبيرها مرة أخرى إلى مستويات التحكم. تم الكشف عن نفس النمط لـ CXCL 1 و 16. ومع ذلك ، بالنسبة لـ CXCL12 ، لم يتم الكشف عن upregulation في HSD (الشكل 3A).

بالنسبة لعائلة CCL ، لم يُظهر CCL 2 و 4 و 12 و 17 و 19 و CX3CL1 أي تنظيم في HSD. تم تنظيم CCL3 في HSD ، ولكن لم يتم الكشف عن تغيير كبير مع إضافة الميلاتونين إلى النظام الغذائي. بالنسبة لـ CCL7 ، هناك تنظيم كبير في HSD وتنظيم كبير مع إضافةالميلاتونينتم الكشف عن HSD (الشكل 3 ب).

الشكل 3. upregulation منالكلىالكيماوياتفي HSD مع وبدون الميلاتونين. تم تحديد التعبير عن عائلة يجند chemokine (CXC motif) (CXCL) (A) ، وعائلة ligand chemokine (CC motif) ، و CX3CL1 (B) في الفئران. (ن=7 - 8) * -p أقل من أو يساوي 0. 0 5 مقابل مجموعة التحكم. # -p أقل من أو يساوي 0.05 مقابل الملح بالإضافة إلى الميلاتون. HSD - نظام غذائي عالي الملح.

3.4. التأثير المباشر للميلاتونين على خط الخلايا ميسانجيال RMC

ثم ركزنا بعد ذلك على CXCL9 و 10 و 11 التي تجذب الخلايا التائية من خلال الارتباط بالمستقبل CXCR3. قررنا التعبير عن هؤلاءالكيماوياتفي خلايا RMC التي هي خط خلية مسراق الفئران.

تعاملنا مع الخلايا بـ 8 0 ملي مول كلوريد الصوديوم بدون ومع 0.5 ملي مولارالميلاتونين. زاد تركيز كلوريد الصوديوم هذا بشكل ملحوظ من تعبير CXCR1 0 بمقدار 2.4 ± 0. 26- أضعاف مقارنةً بالتحكم ، وإضافة 0. انخفض 5 ملي مولار من الميلاتونين بشكل ملحوظ هذا التعبير إلى 1.4 ± 0. {{1 0} أضعاف مقارنة بعنصر التحكم (الشكل 4 أ). بالنسبة إلى CXCL11 ، أدى 8 0 ملي مول كلوريد الصوديوم إلى زيادة التعبير بشكل ملحوظ بمقدار 3 ± 0. 48- أضعاف مقارنةً بمجموعة التحكم ، كما أدت إضافة 0.5 ملي مولار من الميلاتونين إلى تقليل هذا التعبير بشكل كبير إلى 1.8 ± 0. {{22 }} أضعاف مقارنة بعنصر التحكم (الشكل 4 ب). لم يتم اكتشاف CXCL9 في خلايا RMC.

الشكل 4. تعبير CXCL1 المنتظم بالملح 0 و CXCL11 في خط خلية ميسانجي حيث قللت معالجة الميلاتون من التعبير عنه. عولجت RMC (خط الخلية ميسانجيل الجرذان) بالملح 80 ملي مع وبدون 0.5 ملي ميلاتونين. تم تنظيم CXCL10 (A) و CXCL11 (B) عن طريق المعالجة الملحية وإضافةالميلاتونينتقليل هذا التنظيم. تقدم الرسوم البيانية 6 محاكمات مستقلة. * -p أقل من أو يساوي 0. 0 0 1 مقابل control # -p أقل من أو يساوي 0. 0 05 مقابل الملح 80 مم والميلاتونين 0.5 مم. $ -p أقل من أو يساوي 0.05 مقابل الملح 80 ملم والميلاتونين 0.5 ملم.

4. مناقشة

التأثير المفيد لـالميلاتونينعلى HTN تم إثباته في دراسات سابقة وتم اقتراحه كمسار عمل محتمل لـ HTN المقاوم للعلاج [18]. في دراستنا الأولى ، ركزنا على الإجهاد التأكسدي وكشفنا أن الميلاتونين يقلل من الإجهاد التأكسدي الناجم عن HSD. في هذه الدراسة ، ركزنا على التأثير المناعي التكيفي وأظهرنا أن الميلاتونين يحسن بقاء الفئران التي تتغذى على HSD. ويرتبط هذا التأثير مع انخفاض في تسلل الخلايا التائية إلى الكلى وتقليل تنظيمالكلىالتعبير الكيميائي.

تظهر البيانات التاريخية أن فئران DSS التي تستهلك HSD تطور HTN شديد وتعرض معدلات وفيات أعلى [19]. أفاد دال نفسه أثناء إنشاء النموذج أنه عندما تم وضع فئران DSS على HSD (8 بالمائة كلوريد الصوديوم) عند الفطام (21-23 يومًا من العمر) ، طوروا HTN بسرعة وتوفوا جميعًا بحلول الأسبوع السادس عشر من التغذية بالملح [20]. لاحقًا ، بعد بعض التعديلات على السلالة ، راب وآخرون. ذكرت أن جميع الفئران ماتت في غضون ثمانية أسابيع من HSD (8 في المئة كلوريد الصوديوم) [21]. كان لدى الفئران في دراستنا معدل وفيات مرتفع ولكنها لم تصل إلى 100 في المائة ، وربما يرجع ذلك إلى انخفاض نسبة الملح (4 في المائة) في نظامها الغذائي. ومع ذلك ، فمن الواضح أنالميلاتونينالمكملات بشكل كبير منعت وفيات الفئران.

يعتبر اكتساب الوزن علامة على صحة الفئران في سن 4-13 أسبوعًا. تنبت فئران DSS من سلالة Sprague Dawley ، وهي سلالة تتميز جيدًا. في عمر الفئران التي استخدمناها في تجاربنا ، من المفترض أن تكتسب الجرذان الوزن باستمرار [22]. في العديد من الدراسات التي أجريت على الحيوانات ، يعتبر إنقاص الوزن أحد "نقاط النهاية" للتجارب [23]. من العديد من الدراسات ، من الواضح أن HSD في فئران DSS يؤدي إلى معدلات اكتساب أقل للوزن مقارنة بالضوابط [24،25]. بالتوافق مع هذه الدراسات ، لاحظنا أيضًا اختلافات الوزن بين المجموعات. هنا ، لم تكتسب الفئران وزنًا بعد أربعة أسابيع من HSD. أوقف الميلاتونين تأثير HSD أيضًا ، حيث استمرت الفئران التي عولجت بالميلاتونين في زيادة الوزن ، وإن كان أقل من الضوابط.

قدرةالميلاتونينلخفض ضغط الدم في النماذج الحيوانية تم اكتشافه في أواخر السبعينيات من القرن العشرين [26-28]. منذ ذلك الحين ، تم الإبلاغ عن ذلك في العديد من النماذج الأخرى ، مثل أن اتباع نظام غذائي عالي الفركتوز يؤدي إلى متلازمة التمثيل الغذائي في الفئران التي تعاني من ارتفاع ضغط الدم تلقائيًا [29،30]. دراساتنا في هذا المجال هي الأولى التي تظهر أن الميلاتونين يلعب دورًا في HTN الناجم عن الملح عن طريق منع تلف الأعضاء وتقليل الوفيات.

في هذه الدراسة ، أظهرنا أن HSD يستحث تسلل الخلايا اللمفاوية التائية إلىالكلى، وهي عملية تم وصفها في فئران DSS بشكل رئيسي من قبل مجموعة ماتسون [31-33]. وقد تم توضيح الدور المحوري لعملية التسلل هذه في نموذج DSS من خلال دراسة حديثة لاحظت أن فئران DSS التي تعاني من نقص الخلايا التائية محمية من يؤدي HTN الناجم عن HSD ونقل الخلايا الطحالية إلى تفاقم HTN الحساس للملح [34].

يمكن أن يؤثر الميلاتونين على الخلايا التائية في جوانب مختلفة (للمراجعة ، انظر [35]). وقد أظهرت هذه الدراسة لأول مرة ذلكالميلاتونينيقلل من جاذبية كل من CD4 plus و CD8 plus Tcells إلىالكلىفي HSD. قد يكون تأثير الميلاتونين هو الآلية التي تبرز تأثيره المفيد في هذا النموذج.

تم وصف قدرة الميلاتونين على الحد من تسلل الخلايا التائية في نموذج الفئران التجريبي الخاص بالتهاب الدماغ والنخاع (EAE). في EAE ، تبين أن الميلاتونين يقلل من تسلل خلايا CD4 بالإضافة إلى الخلايا التائية وخلايا Th17 في الجهاز العصبي المركزي [36 ، 37].

يتم تنظيم انجذاب الخلايا التائية إلى نسيج معين بشكل أساسي من خلال التركيزات العالية الموضعيةالكيماوياتوهي السيتوكينات الكيماوية التي تتحكم في أنماط الهجرة ووضع الخلايا المناعية. عائلتان كبيرتان من الكيماويات اللتان تحفزان تسلل الخلايا التائية هما يجند CXC (CXCL) وعائلات chemokine لعنصر CC (CCL) [38].

علاج لعلاج ضعف الكلى

في دراستنا ، لم نجد نمطًا ثابتًا في استجابة عائلة CCL لـ HSD والميلاتونين. من أصل تسعةالكيماوياتفي هذه العائلة ، تمت ملاحظة CCL7 و CLL21 فقط لزيادة تعبيرهم بسبب HSD ، وتقليل مكملات الميلاتونين. زاد HSD من تعبير CCL3 ، ولكن لم يتم الكشف عن أي انخفاض في الفئران المعالجة بالميلاتونين. أظهرت دراسة حديثة في نفس النموذج أن HSD ينظم CCL2 فيالكلىباستخدام طريقة RNA-Seq [39]. ومع ذلك ، اختبرت هذه الدراسة المستويات في يومي 3 و 21 بعد بدء النظام الغذائي. في دراستنا ، اختبرنا المستويات بعد ثمانية أسابيع. من الممكن أن يتغير التعبير الكيميائي خلال فترة HSD.

على العكس من ذلك ، زادت مستويات معظم عائلة CXCL ، بما في ذلك CXCL 1 و 9 و 10 و 11 و 16 ، في الفئران المعالجة بـ HSD والميلاتونينالمكملات الغذائية ألغت هذه الزيادة. أظهر CXCL12 فقط عدم وجود زيادة في الاستجابة لـ HSD.

يتم تحفيز CXCL9 و CXCL10 و CXCL11 ، المسماة "روابط مستقبلات CXC الكيميائية المحفزة للإنترفيرون 3" ، بواسطة IFN- وهي الروابط الخاصة بمستقبل CXC الكيميائي 3 (CXCR3). أظهرت الدراسات التي أجريت في الجسم الحي أهميتها في تنشيط وتوظيف الخلايا اللمفاوية التائية للعضو المستهدف [40-42]. يون وآخرون أظهر ، في مرضى ارتفاع ضغط الدم البشري ، كل من التسلل الكلوي للخلايا التائية وارتفاع مستويات الدورة الدموية لجميع CXCR3 الثلاثةالكيماويات، مما يشير إلى أن CXCR3 وروابطه هي خلايا forT ذات صلة متورطة في HTN البشري [43]. أظهرت دراسة أخرى أن CXCL10 يرتفع في مرضى ارتفاع ضغط الدم ، وترتبط مستوياته بقيم ضغط الدم لديهم [44].

نتيجة لهذه الدراسات ، ركزنا على CXCL9 و CXCL1 0 و CXCL11. قمنا بتربية خط خلايا الفئران ميسانجيل وعالجناها بـ 80 ملي كلوريد الصوديوم و 0.5 ملي مولار من الميلاتونين ، ووجدنا أن CXCL 10 و 11 يتم تنظيمهما في الخلايا وأن الميلاتونين يلغي هذا الارتفاع. تشير نتائجنا إلى أن تأثير الملح في رفع CXCL 10 و 11 ، والتأثير المقابل لـالميلاتونين، تم اكتشافهما مباشرة في خلايا ميسانجيل. في المقابل ، لم يتم اكتشاف CXCL9 في هذه الخلايا.

دراستنا لها حدود. في نتائج FACS الخاصة بنا ، كان العديد من CD3 plus مضاعفًا لكل من CD4 و CD8. شوهدت النتائج نفسها في دراسة ماتسون من 2010 [31]. ومع ذلك ، في الدراسات الحديثة من مجموعة ماتسون ، كانت خلايا CD3 بالإضافة إلى CD 4- CD 8- قليلة جدًا [32،33،45،46]. يمكن أن يكون الانخفاض الكبير في خلايا CD3 السلبية المزدوجة نتيجة لإضافة علامة CD45 وتحليل الخلايا التي كانت CD45 إيجابية فقط ، وهو ما تم إجراؤه في الدراسات اللاحقة لـ Mattson. من الممكن أن يكون العدد الكبير من CD3 بالإضافة إلى القرص المضغوط 4- القرص المضغوط 8- أحد العناصر. ومع ذلك ، لا تُعرف أي قطعة أثرية لـ CD3 بالإضافة إلى CD4 plus و CD3 بالإضافة إلى CD8 بالإضافة إلى مجتمع الخلايا.

5. الاستنتاجات

في الختام ، يرتبط النظام الغذائي الغني بالملح بتسلل الخلايا التائية إلىالكلىمن فئران DSS. زاد الملح أيضًا من التعبير عن عوامل الجذب الكيميائية للخلايا التائية المحددة في الكلى. العلاج بالميلاتونين(30 مجم / كجم / يوم) ألغت هذه التأثيرات (الميلاتونينيقلل من التسلل الناجم عن HSD للخلايا التائية في الكلى إلى جانب تقليل التعبير الكيميائي المركب في CXCL3).

توضح دراستنا في المختبر أن الملح والميلاتونين قد ينظمان التعبير الجذاب الكيميائي عن طريق التأثير المباشرالكلىالخلايا.

مساهمات المؤلف: Conceptualization، AL؛ التحليل الرسمي ، AB و RK ؛ التحقيق ، RK ؛ المنهجية ، AB و AL ؛ الكتابة - المسودة الأصلية ، AB و AL ؛ كتابة - مراجعة وتحرير ، YSand EG قرأ جميع المؤلفين النسخة المنشورة من المخطوطة ووافقوا عليها.

التمويل: لم يتلق هذا البحث أي تمويل خارجي.

بيان مجلس المراجعة المؤسسية: تمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان المؤسسية في مركز شيبا الطبي ، البروتوكول رقم 1219/19 / ANIM وبروتوكول وزارة الصحة رقم 16418.

بيان الموافقة المستنيرة: لا ينطبق.

بيان توافر البيانات: البيانات المقدمة في هذه الدراسة متاحة عند الطلب من المؤلف المراسل.

شكر وتقدير: يشكر المؤلفون زهافا شبتاي على دعمها الفني الممتاز ومايكل كانوفسكي على خدماته التحريرية.

تضارب المصالح: يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح.

مراجع

1. أولسن ، إم إتش ؛ أنجيل ، سي ؛ أسماء ، س. Boutouyrie، P.؛ برجر ، د. شيرينوس ، جا. الدمشقية ، أ. ديليس ، سي. Gimenez-Roqueplo ، AP ؛ Hering ، D. ؛ وآخرون. دعوة للعمل واستراتيجية دورة الحياة لمعالجة العبء العالمي لارتفاع ضغط الدم على الأجيال الحالية والمستقبلية: لجنة لانسيت لارتفاع ضغط الدم. لانسيت 2016 ، 388 ، 2665-2712. [CrossRef]

2. أوبراين ، إي. لجنة لانسيت لارتفاع ضغط الدم: معالجة العبء العالمي لارتفاع ضغط الدم على الأجيال الحالية والمستقبلية. J. كلين. هايبرتنس 2017 ، 19 ، 564-568. [CrossRef]

3 - أودونيل ، م. مينتي ، أ. يوسف ، S. تناول الصوديوم وصحة القلب والأوعية الدموية. سيرك. الدقة. 2015 ، 116 ، 1046-1057. [CrossRef]

4. شيفرين ، آليات إعادة تشكيل الشرايين الصغيرة ، العلاج الخافض للضغط والجهاز المناعي في ارتفاع ضغط الدم. التحقيق. ميد. 2015 ، 38 ، E394-E402. [CrossRef]

5. جوزيك ، تي جيه ؛ هوخ ، نبراسكا ؛ براون ، كا ؛ ماكان ، لوس أنجلوس ؛ عبد الرحمن أ. ديكالوف ، إس. جورونزي ، ياء ؛ وياند ، سي. هاريسون ، دي جي دور الخلايا التائية في نشأة ارتفاع ضغط الدم الناجم عن الأنجيوتنسين الثاني واختلال الأوعية الدموية. ياء إكسب. ميد. 2007 ، 204 ، 2449-2460. [CrossRef] [PubMed]

6. Kleinewietfeld، M .؛ منزل ، أ. تيتز ، ياء ؛ كفاكان ، ح. يوسف ، ن. الرابط ، RA ؛ مولر ، دي إن ؛ هافلر ، DA كلوريد الصوديوم يؤدي إلى أمراض المناعة الذاتية عن طريق تحريض خلايا TH17 المسببة للأمراض. Nature 2013، 496، 518-522. [CrossRef]

7. ماتسون ، DL ؛ لوند ، هـ. قوه ، سي. Rudemiller ، N. ؛ Geurts ، صباحا ؛ جاكوب ، هـ. الطفرة الجينية لإعادة التركيب الجيني المنشط للجين 1 في الفئران الحساسة للملح داهل يخفف من ارتفاع ضغط الدم والأضرار الكلوية. أكون. J. Physiol. ريجول. عدد صحيح. شركات فيسيول. 2013، 304، 407–414. [CrossRef]

8. ماتسون ، DL تتسلل الخلايا المناعية فيالكلىفي ارتفاع ضغط الدم الحساس للملح وإصابة الكلى. أكون. J. Physiol. رن. Physiol.2014، 307. [CrossRef] [PubMed]

9. لو ، العاشر ؛ كراولي ، التهاب SD في ارتفاع ضغط الدم الحساس للملح والأضرار الكلوية. بالعملة. ممثل هايبرتنز. 2018، 20. [CrossRef] [PubMed]

10. بيكر ، ج. كمبينسكي ، ك. دورالميلاتونينفي تنظيم ضغط الدم: عامل مساعد مضاد لارتفاع ضغط الدم. كلين. إكسب. فارم فيزيول. 2018 ، 45 ، 755-766. [CrossRef] [PubMed]

11. غروسمان ، إي. لودون ، م. Zisapel ، N. تأثير الميلاتونين على ضغط الدم الليلي: التحليل التلوي للتجارب العشوائية ذات الشواهد. فاسك. إدارة المخاطر الصحية. 2011 ، 7 ، 577-584. [CrossRef] [PubMed]

12- بوزو ، د. ديلجادو ، م. فرنانديز سانتوس ، JM ؛ كالفو ، جيه آر ؛ جوماريز ، ر. مارتن لاكاف ، أنا ؛ أورتيز ، جي جي ؛ Guerrero ، JM Expression لمستقبل Mel1a-melatonin mRNA في مجموعات فرعية T و B من الخلايا الليمفاوية من الغدة الصعترية والطحال. Faseb J. Off. سنة النشر. بنك الاحتياطي الفيدرالي. شركة إكسب. بيول. 1997 ، 11 ، 466-473. [CrossRef]

13. Guerrero، JM؛ بوزو ، د. García-Mauriño، S.؛ أوسونا ، سي. مولينيرو ، ب. Calvo، JR إشراك المستقبلات النووية في إنتاج الميلاتونين المحسن -2 في خلايا Jurkat. آن. نيويورك أكاد. علوم. 2000 ، 917 ، 397-403. [CrossRef] [PubMed]

14 - فريز، MF؛ ماسكانفروني ، أيداهو ؛ Méndez-Huergo، SP؛ يستي ، أ. موروجيان ، ج. جارو ، ل. Balbuena Aguirre، ME ؛ باتل ، ب. Ysrraelit ، MC ؛ تشو ، سي ؛ وآخرون.الميلاتونينيساهم في موسمية انتكاسات التصلب المتعدد. الخلية 2015، 162، 1338–1352. [CrossRef] [PubMed]

15- كيرابو ، أ. فونتانا ، ف. دي فاريا ، APC ؛ لوبرينا ، ر. جاليندو ، سي إل ؛ وو ، ياء ؛ بيكينييفا ، أت ؛ ديكالوف ، إس. شياو ، إل. تشين ، دبليو وآخرون. تنشط البروتينات المعدلة بإيزوكيتال DC الخلايا التائية وتعزز ارتفاع ضغط الدم. J. كلين. التحقيق. 2014 ، 124 ، 4642-4656. [CrossRef] [PubMed]

16. ليبوفيتز ، أ. فولكوف ، أ. فولوشين ، ك. شيمش ، سي. بارشاك ، أنا. غروسمان ، E. الميلاتونين يمنعالكلىالإصابة في نموذج ارتفاع ضغط الدم الناجم عن ارتفاع الملح عن طريق تقليل الإجهاد التأكسدي. J. Pineal Res. 2016 ، 60 ، 48-54. [CrossRef] [PubMed]

17. هوكينز ، ب. مورتون ، دي بي ؛ بورمان ، أو. دينيسون ، ن. هونيس ، ب. جينينغز ، م. لين ، إس. ميدلتون ، ف. Roughan ، JV ؛ ويلز ، س.وآخرون. دليل لتحديد وتنفيذ البروتوكولات لتقييم رفاهية حيوانات المختبر: التقرير الحادي عشر لمجموعة العمل المشتركة BVAAWF / FRAME / RSPCA / UFAW حول الصقل. مختبر. الرسوم المتحركة. 2011 ، 45 ، 1-13. [CrossRef]

18- سمكو ف. رايتر ، RJ ؛ بوليس ، ل.الميلاتونينكبديل منطقي في العلاج المحافظ لارتفاع ضغط الدم المقاوم. 2019 ، 42 ، 1828-1831. [CrossRef] [PubMed]

19. راب ، فئران جي بي دال للملح حساسة للملح. ارتفاع ضغط الدم 1982 ، 4 ، 753-763. [CrossRef]

20. Dahl، LK؛ كنودسن ، دينار كويتي ؛ هاينه ، ماجستير ؛ Leitl، GJ آثار تناول الملح الزائد المزمن. تعديل ارتفاع ضغط الدم التجريبي في الجرذان من خلال التغيرات في النظام الغذائي. سيرك. الدقة. 1968 ، 22 ، 11-18. [CrossRef] [PubMed]

21. راب ، جي بي ؛ Dene، H. تطوير وخصائص السلالات الفطرية لفئران دحل الحساسة للملح والمقاومة للملح. هايبرتنس 1985،7 ، 340-349. [CrossRef]

22. بروير ، م. جريس ، م. كوتز ، سم ؛ Koya ، V. تحليل مقارن لخصائص نمو فئران Sprague Dawley التي تم الحصول عليها من مصادر مختلفة. مختبر. الدقة المتحركة. 2015 ، 31 ، 166-173. [CrossRef]

23. Talbot، SR؛ بيرنات ، إس. بليش ، أ. فان ديك ، RM ؛ إرنست ، إل. هاجر ، سي. هيلجرز ، الخدمية ؛ كوجل ، ب. كوسكا ، أنا. كوهلا ، أ. وآخرون: تعريف إنقاص وزن الجسم كنقطة نهاية إنسانية: تقييم نقدي. مختبر. الرسوم المتحركة 2020 ، 54 ، 99-110. [CrossRef] [PubMed]

24. Geschka، S. كريتشمر ، أ. شاركوفسكا ، واي. Evgenov ، OV. لورنز ، ب. Hucke ، A. ؛ هوشر ، ب. ستاش ، ج. يمنع التحفيز القابل للذوبان guanylatecyclase إعادة تشكيل الأنسجة الليفية ويحسن البقاء على قيد الحياة في فئران Dahl الحساسة للملح. بلوس وان 2011 ، 6 ، e21853. [CrossRef] [PubMed]

25. Wang، Y .؛ مو ، جي. ليو ، فق ؛ رن ، كنتاكي شياو ، HY ؛ يانغ ، زي. اليوان ، ZY الانتقال من الظهارة إلى اللحمة المتوسطة الناجم عن الملح في الفئران الحساسة لدالسالت يعتمد على ارتفاع ضغط الدم. براز. جيه ميد. بيول. الدقة. القس براس. Pesquisa ميد. إي بيول. 2014 ، 47 ، 223-230. [CrossRef]

26. هولمز ، جنوب غرب ؛ Sugden ، D. الإجراءات: تأثير الميلاتونين على ارتفاع ضغط الدم الناجم عن استئصال الصنوبر في الفئران. Br. جي فارم 1976، 56، 360P – 361P.

27. Zanoboni، A .؛ Zanoboni-Muciaccia، W. ارتفاع ضغط الدم التجريبي في فئران الأناناس. علوم الحياة. 1967 ، 6 ، 2327-2331. [CrossRef]

28. Zanoboni، A. فورني ، أ. Zanoboni-Muciaccia، W. ؛ Zanussi، C. تأثير استئصال الأناناس على ضغط الدم الشرياني وتناول الطعام والماء في الفئران. J. إندوكرينول. التحقيق. 1978 ، 1 ، 125-130. [CrossRef] [PubMed]

29- بيشانوفا ، أو. زيشا ، ياء ؛ بوليس ، إل. زينبي ، دبليو. Dobesová، Z .؛ كوجسوفا ، إس. جينديكوفا ، إل. Sládková، M.؛ دوفينوفا ، أنا ؛ سمكو ، ف.وآخرون. تأثير N-acetylcysteine ​​والميلاتونين في الجرذان البالغة المصابة بارتفاع ضغط الدم بشكل تلقائي. يورو. جي فارمكول. 2007 ، 561 ، 129-136. [CrossRef] [PubMed]

30. Leibowitz، A.؛ فالج ، إي. شرابي ، واي. شبتاي ، زي. شاميس ، أ. غروسمان ، إي دورالميلاتونينفي التسبب في ارتفاع ضغط الدم في الفئران مع متلازمة التمثيل الغذائي. أكون. J. Hypertens 2008، 21. [CrossRef] [PubMed]

31. De Miguel، C.؛ داس ، إس. لوند ، هـ. Mattson، DL T lymphocytes تتوسط ارتفاع ضغط الدم والكلىالضرر في دحل حساسية الملح. أكون. J. Physiol. ريجول. عدد صحيح. شركات فيسيول. 2010 ، 298 ، R1136-R1142. [CrossRef] [PubMed]

32. Evans، LC؛ بيتروفا ، جي. كورت ، تي. يانغ ، سي. بوكوي ، دينار ؛ ماتسون ، دل ؛ كاولي ، AW محركات ضغط التروية المتزايدة تسلل الخلايا التائية الكلوية في جرذ دال الحساس للملح. ارتفاع ضغط الدم 2017 ، 70 ، 543-551. [CrossRef]

33. Abais-Battad، JM؛ Alsheikh، AJ؛ عموم ، X. ؛ فيرينباخ ، دي جي ؛ داسنجر ، JH ؛ لوند ، هـ. روبرتس ، مل ؛ كريجل ، AJ ؛ كاولي ، AWJ ؛ كيدامبي ، إس. وآخرون. التأثيرات الغذائية على ارتفاع ضغط الدم الحساس للملح ، والأضرار الكلوية ، ونسخة الخلايا اللمفاوية التائية. هايبرتنز 2019 ، 74 ، 854 - 863. [CrossRef] [PubMed]

34. Fehrenbach، DJ؛ داسنجر ، JH ؛ لوند ، هـ. Zmaj ، J. ؛ Mattson، DL نقل الخلايا الطحالية يؤدي إلى تفاقم ارتفاع ضغط الدم الحساس للملح. إكسب. فيسيول. 2020 ، 105 ، 864 - 875. [CrossRef] [PubMed]

35. Ren، W. ليو ، جي. تشين ، إس. يين ، ياء ؛ وانغ ، ياء ؛ تان ، ب. وو ، جي ؛ بازر ، مهاجم ؛ بينغ ، واي. أشعل.؛ وآخرون. إشارات الميلاتونين في الخلايا التائية: الوظائف والتطبيقات. J. Pineal Res. 2017 ، 62. [CrossRef]

36. Alvarez-Sánchez، N .؛ كروز تشامورو ، أنا ؛ López-González، A .؛ أوتريلا ، جي سي ؛ فرنانديز سانتوس ، JM ؛ Martínez-López، A .؛ لاردون ، PJ ؛ غيريرو ، جم ؛ يتحكم Carrillo-Vico، A. Melatonin في التهاب الدماغ والنخاع المناعي التجريبي الذاتي عن طريق تغيير المستجيب T / التوازن التنظيمي. سلوك الدماغ. مناعة. 2015 ، 50 ، 101-114. [CrossRef]

37. Chen، S.-J.؛ هوانغ ، S.-H. ؛ تشين ، جيه دبليو ؛ وانغ ، ك. يانغ ، واي.ر. ليو ، ف. لين ، جي جي. سيتوو ، H.-K.الميلاتونينيعزز التعبير عن الإنترلوكين 10 ويثبط الانجذاب الكيميائي لتثبيط الالتهاب في الموقع وتقليل شدة التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي. كثافة العمليات إمونوفارماكول. 2016 ، 31 ، 169-177. [CrossRef] [PubMed]

38. Griffith، JW؛ سوكول ، سي إل ؛ بريق ، مكيموكينيسومستقبلات الكيموكين: تموضع الخلايا للدفاع والحصانة للمضيف. القس إمونول. 2014 ، 32 ، 659-702. [CrossRef] [PubMed]

39. Alsheikh، AJ؛ داسنجر ، JH ؛ Abais-Battad، JM؛ فيرينباخ ، دي جي ؛ يانغ ، سي. كاولي ، AWJ ؛ Mattson ، DL CCL2 يتوسط تسلل الكريات البيض المبكر أثناء ارتفاع ضغط الدم الحساس للملح. أكون. J. Physiol. رن. فيسيول. 2020 ، 318 ، F982-F993. [CrossRef] [PubMed]

40. Liu، L .؛ كالاهان ، عضو الكنيست ؛ هوانغ ، د. Ransohoff ، مستقبل RM Chemokine CXCR3: لغز غير متوقع. بالعملة. قمة. ديف. بيول 2005 ، 68 ، 149 - 181. [CrossRef] [PubMed]

41. العريس، الابن. Luster ، AD CXCR3 ligands: وظائف زائدة وتعاونية ومضادة. إمونول. خلية بيول. 2011 ، 89207-215. [CrossRef] [PubMed]

42. Van Raemdonck، K.؛ فان دن ستين ، PE ؛ ليكينز ، إس. فان دام ، ياء ؛ سترويف ، بروابط S. CXCR3 في المرض والعلاج. عامل النمو الخلوي القس. 2015 ، 26 ، 311–327. [CrossRef] [PubMed]

43. Youn، J.-C.؛ يو ، HT ؛ ليم ، BJ ؛ كوه ، إم جي ؛ لي ، ياء ؛ تشانغ ، دي واي. تشوي ، واي إس ؛ لي ، S.-H. ؛ كانغ ، إس إم. جانغ ، واي. وآخرون. المناعي CD8 بالإضافة إلى الخلايا التائية ونوع مستقبلات CXC الكيميائية 3الكيماوياتتزداد في ارتفاع ضغط الدم البشري. Hypertens 2013، 62، 126–133. [CrossRef] [PubMed]

44. Stumpf، C.؛ أوير ، سي ؛ يلماز ، أ. Lewczuk ، P. ؛ كلينجهامر ، إل. شنايدر ، م. دانيال ، و. شميدر ، ري ؛ Garlichs ، CDSerum مستويات بروتين Th1 chemoattractant interferon-gamma-inducible protein (IP) 10 مرتفعة في المرضى الذين يعانون من ارتفاع ضغط الدم الأساسي. هيبرتنس الدقة. 2011 ، 34 ، 484-488. [CrossRef] [PubMed]

45. Rudemiller، NP؛ لوند ، هـ. بريستلي ، جي آر سي ؛ إندريس ، بريتيش تيليكوم ؛ بروكوب ، جي دبليو ؛ يعقوب ، ه. Geurts ، صباحا ؛ كوهين ، إب ؛ Mattson، DL Mutation of SH2B3 (LNK) ، مرشح دراسة الارتباط على نطاق الجينوم لارتفاع ضغط الدم ، يخفف من ارتفاع ضغط الدم الحساس للملح من خلال التعديل الالتهابي. هيبرتنس 2015 ، 65 ، 1111-1117. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wade، B .؛ بيتروفا ، جي. ماتسون ، DL دور العوامل المناعية في ارتفاع ضغط الدم الناجم عن الأنجيوتنسين 2 والتلف الكلوي في الفئران الحساسة لدالسالت. أكون. J. Physiol. ريجول. عدد صحيح. شركات فيسيول. 2018 ، 314 ، R323 - R333. [CrossRef] [PubMed]