طريقة لتحديد المكونات النشطة الكيميائية للكيستانش

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com

تحديد المكونات الكيميائية لـ Cistanche Deserticola باستخدام نظام X500R QTOF

Li Yuejie ، Cheng Haiyan ، Liu Ting ، Li Lijun ، Jin Wenhai SCIEX ، مركز دعم التطبيقات في آسيا والمحيط الهادئ (شنغهاي) ، الصين

مقدمة

Cistanche Deserticolaتم تسجيله لأول مرة في "Shen Nong Materia Medica" ؛ تُعرف أيضًا باسم "دايون" و "روسونغ رونغ" و "زونغ رونغ". بصفته دواءً عشبيًا تقليديًا ، فإنه يتمتع بخصائص تغذية الكلى ، وتحسين تدفق الدم ، والعمل كملين ، ومحفز للمناعة ، وتأثيرات أخرى [1]. في عام 1983 ، بدأ الباحث الياباني H. Kobayashi وآخرون في دراسة التركيب الكيميائي لـCistanche Deserticola[2] ، ومنذ ذلك الحين أصبح موضوعًا شائعًا في أبحاث الطب الصيني والذي أثار اهتمامًا كبيرًا على الصعيدين المحلي والخارجي على مدار الثلاثين عامًا الماضية.Cistanche Deserticolaينتمي إلى فئة النباتات التي تحتوي على الفينولجليكوسيداتو iridoids و بهمجليكوسيدات، و lignans و بهمجليكوسيدات.

يعد قياس الطيف الكتلي رباعي الأطوار (QTOF) أداة حساسة ومحددة لتحديد مكونات الطب الصيني التي أصبحت تدريجياً لا غنى عنها للبحث. لقد تغلبت هذه التقنية على التحديات التقنية التقليدية من خلال التحليلات بأثر رجعي للحقن المفردة التي تسمح باستخراج البيانات المهمة والحصول على معلومات العينة الأكثر شمولاً. يسمح استخدام بيانات TOF-MS و TOF-MS / MS بالكتلة الدقيقة وعالية الدقة بإجراء تحليل نوعي متزامن ومستهدف للغاية وغير مستهدف. ومع ذلك ، فإن تعقيد تشغيل الأداة واستخدام البرامج قد حد بشكل كبير من انتشار هذه التكنولوجيا وتطويرها. نقدم هنا نظام QTOF الجديد الذي يستخدم مسار TOF الجديد القائم على الهندسة من النوع N ، والبرمجيات البديهية ، وتقنيات الوزن الجزيئي الدقيقة التي يسهل استخدامها في تحديد مكونات الطب الصيني.

فوائد هذه الطريقة كالتالي:

1. يستخدم X500R مصدر أيون Turbo VTM المتين المعتمد من الصناعة وتصميم واجهة غاز ستارة الهواء ، والذي يتميز بميزة قوية لمكافحة التلوث.

2. قامت SCIEX OS Software بدمج وظائف الاستحواذ والمعالجة وإعداد التقارير على منصة واحدة ؛ الواجهة بديهية وسهلة التحكم ولديها تصحيح تلقائي للضبط بلمسة واحدة لضمان حصول المحللين بأي درجة من الخبرة على بيانات عالية الجودة وموثوقة ؛

3. استخدام برنامج SCIEX OS لمعالجة البيانات لتحديد مكونات الطب الصيني بسيط ويسمح بالاستخراج السريع للمعلومات المفيدة ، وبالتالي ؛

4. إنها تستمد نتائج تحديد أكثر دقة وموثوقية من مكتبات الطب الصيني التي تحتوي على أطياف MS / MS.

5. تستند قواعد بيانات الطب الصيني MS / MS عالية الدقة على المكونات النشطة "الأدوية الصينية" الجزء الأول في الطب الصيني التقليدي. بما في ذلك المراجع المكونة في دستور الأدوية والمكونات النشطة في الأعشاب ، هناك ما يقرب من 900 مركب

cistanche الصحراء تحسين الفعالية

عملية تجريبية

1. باستخدام وضع TOF-MS-IDA MS / MS ، حقن عينة والحصول في نفس الوقت على أيونات السلائف الأولية والأطياف الثانوية المقابلة ؛

2. يمكن أن يؤدي استخدام برنامج SCIEX OS Software للفحص المستهدف وتأكيد المركبات المستهدفة والأطياف الثانوية جنبًا إلى جنب مع فحص معايير الطب الصيني وطرق المطابقة إلى زيادة الدقة وإنتاجية العمل.

3. يستخدم سير عمل التعريف غير المستهدف لبرنامج SCIEX OS Software عمليات البحث في المكتبة وعمليات البحث غير المعروفة الكاملة في ChemSpider للتحقق من النتائج ، مما يضمن تحديد المزيد من المكونات بسير عمل أبسط.

العينات وطريقة المعالجة المسبقة

مصدر العينة:

تم شراؤها من صيدليات شنغهاي في شكل شرائح

طريقة المعالجة المسبقة:

1. تم سحق الشرائح لتشكيل مسحوق.

2. 0 تم وزن 9 ملجم وغمرها في 3 مل ميثانول لمدة 40 دقيقة ؛

3. العينة من الخطوة 2) بالموجات فوق الصوتية 1 ساعة ؛

4. تم إجراء الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية لاستخدامها كعينة.

شروط الكروماتوغرافيا السائلة (LC)

العمود الكروماتوغرافي: XSelect HSS T3 ، 2.1 * 150 مم ، 3.5 ميكرومتر ؛

المرحلة المتنقلة: تم استخدام شطف التدرج

المرحلة المتنقلة: أ هي 0. 1٪ ماء حمض الفورميك -2 ملي مولار NH4FA

B عبارة عن 95 بالمائة أسيتونتريل -5 بالمائة ماء -2 ملي مولار NH4FA

معدل التدفق: 0. 5 مل / دقيقة

درجة حرارة العمود: 40 درجة مئوية

كمية الإدخال: 5 مايكرولتر

طريقة قياس الطيف الكتلي:

طريقة المسح: TOF MS-IDA -15 الفحص النوعي MS / MS

معلمات مصدر أيون ESI:

غاز ستارة الهواء CUR: 35psi ؛ جهد IS: 5500V / -4500 فولت

درجة حرارة المصدر: 600 درجة مئوية

غاز التفتيت GAS1: 55psi ؛ الغاز الإضافي GAS2: 60 رطل / بوصة مربعة

البحث عن وضع الأجهزة:

بلمسة واحدة (حدد MS Check في الجزء السفلي الأيمن) ، يضمن وضع التصحيح TOF-MS المؤتمت بالكامل و TOF-MS / MS أن المحللين من أي مستوى خبرة يمكنهم الحصول على بيانات دقيقة وموثوقة وقابلة للتكرار.

وضع الأيونات الموجبة والسالبة BPCs:

إجراء تحديد المركب

1. سير عمل تحديد المكونات المستهدفة

1.1: البحث عن الصيغة الجزيئية

مطلوب فقط اسم المركب الكيميائي والصيغة الجزيئية ؛ يمكن إدخالها مباشرة أو استيرادها باستخدام وظيفة النسخ واللصق في Excel لإنشاء طريقة معالجة

بمجرد إنشاء جدول النتائج ، يمكن عرض النتائج الكمية والنوعية في نفس النافذة. يتم استخدام نظام مؤشر أحمر / أخضر للإشارة إلى دقة الكتلة ووقت الاستبقاء ونوع النظائر والثقة في تحديد الهوية عن طريق مطابقة قاعدة البيانات.

يتيح برنامج SCIEX OS للمستخدمين تصفية النتائج وعرض تلك المركبات التي تلبي معايير القبول وتقع ضمن فترات الثقة التي يحددها المستخدم. يمكنه العثور بسرعة على النتائج المستهدفة في قواعد البيانات الكبيرة.

تسمح قاعدة بيانات TCM لأطياف MS / MS بالمطابقة الثانوية وتنتج نتائج أكثر موثوقية (يشير اللون الرمادي في قاعدة البيانات إلى بيانات MS / MS)

تحتوي الأدبيات على أسماء وصيغ جزيئية للفينولجليكوسيدمكونات نشطة. باستخدام العملية المذكورة أعلاه لتحديد المكونات المستهدفة ، تم تحديد أن العينة تحتوي على 39 نوعًا من جليكوسيدات الفينول:

إلى جانب الفينولجليكوسيدالمكونات النشطة ، يحتوي Cistanche أيضًا على عدد كبير من المركبات مثل iridoids و glycosides و lignans. نتائج التعريف هي كما يلي:

قائمة تعريف iridoids و glycosides و lignans:

1.2: البحث في قاعدة البيانات:

تم الحصول على 53 مركبًا من تحديد المطابقة في قاعدة بيانات الطب الصيني التقليدي: 43 أيونات موجبة ، 22 أيونات سالبة ، و 12 مكررًا ، مذكورة أدناه. إلى جانب الفينول النشطجليكوسيدات، iridoids، glycosides، lignans، Cistanche يحتوي أيضًا على

2. تحليل المكونات غير المستهدفة

يمكن إجراء تحديد المكونات غير المستهدفة باستخدام وظيفة البحث ChemSpider المدمجة لتحديد تصنيف ونوع المجهول. لتحديد المكونات غير المستهدفة ، ما عليك سوى اختيار الوضع "غير المستهدف" وسيطور البحث عن الصيغة الجزيئية طريقة معالجة. سير العمل كما يلي:

بالنسبة للمجهول الكامل ، تظهر نتائج البحث عن الصيغة الجزيئية في نافذة متصفح ذروة في الجزء السفلي من الطيف الكتلي TOF MS ؛ باستخدام البحث في قاعدة بيانات ChemSpider ، يتم سرد النتائج حسب الأولوية ، ويتم تلقائيًا مقارنة المعلومات الهيكلية التي تم الحصول عليها في ChemSpider مع طيف MS / MS الذي تم الحصول عليه ، مما يوفر ردود فعل ثانوية للتعرف السريع.

ملخص

1. سرعة الحصول على البيانات عالية الدقة. أسفرت حقنة واحدة عن بيانات TOF MS و MS / MS عالية الدقة ، مع 39 مكونًا نشطًا يمكن تحديده من غليكوزيد الفينول و 16 إيريديويد ، وليغنان ، وجليكوسيدات ؛

2. توفر قاعدة بيانات TCM للأطياف الثانوية معلومات مطابقة إضافية ، ويوفر البرنامج تلقائيًا نتيجة مطابقة قاعدة البيانات. باستخدام النتيجة ، يمكن للمرء بسهولة وسرعة ودقة تحديد مكونات الطب الصيني ؛

3. الجهاز بسيط وله تصحيح الضبط التلقائي بلمسة واحدة لضمان حصول المحللين بأي درجة من الخبرة على بيانات عالية الجودة وموثوقة ؛

4. يدمج إصدار برنامج SCIEX OS الجديد الحصول على البيانات ومعالجتها (الكمية والنوعية) والعرض وإعداد التقارير وإدارة قواعد البيانات. يحل الصعوبات التي يواجهها العديد من المستخدمين بواجهة بديهية وسهلة الاستخدام ؛

5. إن كلا من سير عمل الفرز المستهدف وغير المستهدف بسيط ، ودليل الطريقة المدمج يساعد المستخدمين على إنشاء الطرق بدقة وسرعة.

مراجع

1. ISBN 978-7-5067-7337-9، PRC Pharmopeia [S]. بكين: اللجنة الوطنية لدستور الأدوية ، 2015

2 - لي ، سونغ زيهونغ ، تو بينغفي ؛ تطورات البحث في التركيب الكيميائي للنباتات من جنس Cistanche ، "Chinese Herbal Medicine" ، المجلد 34 ، العدد 5 ، مايو 2003 ، 473-476.