الجزء 2: Acteoside يثبط تكوّن الخلايا العظمية بوساطة RANKL عن طريق تثبيط تحريض C-Fos ومسار NF- KB وتخفيف إنتاج ROS

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

Seung-Youp Lee1،2.، Keun-Soo Lee3.¤، Sea Hyun Yi2.، Sung-Ho Kook، Jeong-Chae Lee22،3 *

الرجاء النقر هنا مرة أخرى إلى الجزء 1

أكتوسيديمنع ارتشاف العظام بواسطة البلاعم Acteoside أيضًا منع ارتشاف العظام بوساطة RANKL بطريقة تعتمد على الجرعة ، كما تم قياسها بواسطة نظام نموذج في المختبر (الشكل 3 أ). تم تثبيط ارتشاف العظم بشكل كبير عندما تم تحضين BMMs مع 1 ملي أكتيوزيد (الشكل 3 ب). خففت معالجة 10 ملي أكتيوزيد بشكل كامل تقريبًا من تكوين حفرة مستحثة بـ RANKL بواسطة BMMs. وبالمثل ، قلل أكتيوسيد من ارتشاف العظم في خلايا RAW264.7 المحفزة بـ RANKL (الشكلان S2A و B). تعتمد قدرة الأكتيوسايد على تثبيط ارتشاف العظام على توقيت العلاج بالنسبة لتحفيز RANKL. تمت إضافة Acteoside (10 ملي مولار) بعد 4 أيام من تحفيز RANKL الذي لم يقلل من تكوين الحفرة في BMMs ، في حين أنه قمع عدد الخلايا الآكلة للعظم (الشكل 3C). كانت هذه النتيجة المختلفة جزئيًا بسبب منطقة الحفرة التي تشكلت بالفعل بعد 4 أيام من تكوين تحفيز RANKL (الشكل ثلاثي الأبعاد).

مستخلص من السيستان

أكتوسيدينظم أسفل مسارات إشارات RANKL المبكرة

يحث RANKL على تنشيط 3 MAPKs المشهورة و NF-kB في سلائف ناقضات العظم ، وهذا التنشيط مطلوب للتمايز المبكر لخلايا العظم. لفهم الآليات الممكنة التيأكتيوسيديثبط تكوّن الخلايا العظمية ، قمنا بدراسة تأثيرأكتيوسيدعلى MAPKs وتنشيط NF-kB في الضامة. تمت معالجة خلايا BMMs و RAW264.7 مسبقًا بـ 10 ملي أكتيوزيد لمدة ساعتين ثم تم تحفيزها بـ 100 نانوغرام / مل من RANKL لمدة 30 دقيقة. تم فحص فسفرة MAPK عن طريق النشاف الغربي والتحليل المناعي. الفسفرة المستحثة بـ RANKL لـ p38 و ERK و JNK في خلايا BMMs (الشكل 4 أ) وخلايا RAW264.7 (الشكل 4 ب). منع Acteoside هذه الزيادات التي يسببها RANKL في p-p38 و p-ERK و p-JNK. تم دعم هذه النتيجة من خلال التحليل المناعي ، والذي أدى إلى تثبيط هذه المعالجة باستخدام 10 ملي أكتيوسيد بشكل كبير مستويات MAPK الفسفرة في هذه العاثيات الكبيرة (الشكل 4C). زاد علاج RANKL من ارتباط الحمض النووي لـ NF-kB ، بينما منع الأكتوزيد التنشيط الناجم عن RANKL لربط NF-kB-DNA (الشكل 5 أ). كان هذا التثبيط أكثر وضوحًا في BMMs منه في خلايا RAW264.7. قلل الأكتوزيد أيضًا من الفسفرة المحفزة بـ RANKL p65 و IkBa في خلايا BMMs و RAW264.7 (الشكلان 5 ب و ج). أدت إضافة 10 ملي أكتيوسيد تقريبًا إلى تثبيط كل من تدهور وتفعيل IkBa في BMMs (الشكل 5 ب). لتأكيد أن تنشيط NF- kB متورط في عمل acteoside ، تم نقل بنيات kB المروج-luciferase بشكل عابر إلى خلايا RAW264.7. كانت الخلايا المحتضنة بـ 100 نانوغرام / مل من RANKL 3- ضعف نشاط محفز أعلى كيلو بايت ، والذي تم تخفيفه بشكل كبير بواسطة 10 ملي مولار من Acteoside (الشكل 5 د).

أكتوسيديمنع إنتاج السيتوكينات الالتهابية والتعبير عن TNF-a و c-Fos و NFATc1 في الضامة المستحثة RANKL TNF-a و IL -1 b و IL -6 وهي عوامل مهمة في تكوين ناقضات العظم و وظيفة ، والتي تتوسطها إشارات NF-kB في الضامة المحفزة بـ RANKL. حفز RANKL إنتاج هذه السيتوكينات ، وانخفض هذا الإنتاج بشكل ملحوظ بمقدار 10 ملي مولار من المعالجة المسبقة للأكتيوزيد في BMMs (الشكل 6 أ). وبالمثل ، خفف أكتيوسيد إنتاج السيتوكينات الناجم عن RANKL ، باستثناء IL -6 ، في RAW264.7 الضامة (الشكل S3). لفهم الآليات الجزيئية لعمل أكتيوزيد في تكوين الخلايا العظمية ، قمنا بفحص تأثير أكتيوسيد على تعبير TNF-a و c-Fos و NFATc1. قام RANKL بتنظيم ما يصل إلى تعبير mRNA لهذه العوامل في خلايا BMM و RAW264.7 (الشكلان 6 ب و ج). أدت المعالجة المسبقة باستخدام 10 ملي أكتيوسيد إلى تثبيط التعبير الناجم عن RANKL لهذه العوامل في كليهما.

BMMs و RAW264.7 خلية. كما أدت المعالجة المسبقة بالأكتيوزيد إلى خفض مستويات البروتين لـ c-Fos و NFATc1 في BMMs المحفزة لـ RANKL (الشكل 6 د). تشير هذه النتائج إلى أن الأكتوزيد ينظم الوسطاء المحرضين لـ RANKL لتكوين ناقضات العظم على مستويات الجينات والبروتين.

مستخلص من السيستان: أكتوسايد

يقلل Acteoside من توليد ROS داخل الخلايا في BMMs بطريقة تعتمد على الجرعة

نظرًا لأنه من المعروف أن إنتاج ROS داخل الخلايا مرتبط بتكوين عظمية محفز من RANKL ، فقد بحثنا فيما إذا كان الأكتوزيد يثبط إنتاج ROS أثناء تمايز ناقضات العظم بوساطة RANKL باستخدام صبغة قابلة للنفاذ للخلايا وحساسة للأكسدة ، DCFH-DA. أظهر تحليل التدفق الخلوي أن إشارة الفلورة المتوسطة الخاصة بـ DCF في BMMs قد تحولت على ما يبدو إلى اليمين بعد التحفيز باستخدام RANKL ، مقارنة بخلايا التحكم غير المعالجة (الشكل 7 أ). كان هذا التحول مشابهًا للحالة التي لوحظت فيها RAW264.7 الضامة بعد تحفيز RANKL (البيانات غير معروضة). خفضت معالجة BMMs مع أكتيوسيد من شدة إشارة DCF بطريقة تعتمد على الجرعة. أدت المعالجة المسبقة بـ 10 ملي مولار من أكتيوسيد إلى خفض مستويات ROS داخل الخلايا التي تنتج أثناء تمايز ناقضات العظم إلى مستويات التحكم غير المعالجة (الشكل 7 ب).

تمنع إدارة Acteoside عن طريق الفم تغيير العلامات البيوكيميائية لهشاشة العظام وفقدان العظام في الفئران المبيضة

لاستكشاف تأثير أكتيوسيد على فقدان العظام ، قمنا بإعداد نموذج حيواني هشاشة العظام عن طريق استئصال المبيض. لم يكن هناك فرق معنوي في وزن الجسم بين الفئران OVX و Sham خلال فترة التجربة (البيانات غير معروضة). كان لدى مجموعة OVX مستويات مصل أعلى بكثير من IL -1 b و IL -6 من مجموعة Sham (الشكل 8). تم تخفيف الزيادات التي يسببها استئصال المبيض في هذه السيتوكينات الالتهابية عن طريق إعطاء أكتيوزيد عن طريق الفم (مجموعة AC). تم زيادة مستويات مصل الدم لعلامات دوران العظام مثل ALP والكالسيوم و TRAP5b و OC بشكل ملحوظ في مجموعة OVX. من بين علامات هشاشة العظام هذه ، يبدو أن المستويات المتزايدة من الكالسيوم ، TRAP5b ، و OC في فئران OVX قد تم تثبيطها على ما يبدو عن طريق العلاج بالأكتيوسايد ، بينما لم يتغير مستوى ALP في المصل من خلال العلاج. كان متوسط ​​حمل الكسر الأقصى إلى منتصف عظم الفخذ الأيمن أقل بكثير في مجموعة OVX منه في مجموعة شام (الشكل 9 أ). رفعت معالجة Acteoside الحد الأقصى للكسر مرة أخرى إلى مستوى مجموعة Sham. عندما تم تشريح العظم القشري لعظم الفخذ وملاحظته بواسطة الفحص المجهري البصري ، اختفت مظاهر هشاشة العظام الموضحة في مجموعة OVX تمامًا في الفئران AC (الشكل 9 ب). للتحقق من تأثير الأكتوزيد على نموذج هشاشة العظام الناجم عن OVX ، تم تحليل كثافة المعادن بالعظام ومعايير شكل العظام في التربيق لعظم الفخذ القريب الخفيف بواسطة التصوير المقطعي المحوسب. كما هو مبين في الشكل 9 ج ، تم العثور على تغيير في بنية التربيق الفخذي في فئران OVX ، في حين أن هذا التغيير قد تضاءل من خلال العلاج باستخدام الأكتوزيد. كشفت نتائج تحليل التصوير المقطعي المحوسب الصغير أن كثافة العظام ، وهي مقياس لقوة العظام ، قد انخفضت بشكل كبير في الفئران OVX (الشكل 9 د). مقارنة بمجموعة Sham ، أظهرت فئران OVX أيضًا تغيرات كبيرة في BV / TV ، Tb. Sp و Tb. N ، ولكن ليس في Tb.Th. منع علاج أكتيوزيد الفم لفئران OVX بشكل كبير التغيير في كثافة المعادن بالعظام وكذلك BV / TV و Tb.N.

لا يؤثر Acteoside على تكون الأرومة العظمية في خلايا نخاع العظام

تم إجراء مزيد من التحقيق في دور الأكتوزيد في التمايز العظمي العظمي باستخدام خلايا نخاع العظم. كما هو مبين في الشكل 10 أ ، أدى علاج DAG إلى زيادة عدد خلايا الإيزارين الملطخة باللون الأحمر ولم يتم تغيير هذا عن طريق المعالجة المسبقة لأكتيوزيد 10 ملي مولار. أشارت كمية الصبغة الموجودة إلى أن مركب الأكتوزيد المشترك ولم يغير علاج DAG التمعدن (الشكل 10 ب). وبالمثل ، فإن الزيادات التي يسببها DAG في محتوى الكالسيوم داخل الخلايا (الشكل 10C) ومستويات الرنا المرسال (الشكل 10D) للواسمات الخاصة بالعظام ، مثل Runx2 و osterix و BSP و OC ، لم تتأثر بالمعالجة المسبقة باستخدام الأكتوزيد.

تأثير cistanche acteoside

مناقشة

يتم تنظيم عملية إعادة تشكيل العظام بإحكام من خلال التوازن بين تكوين العظام بواسطة بانيات العظم وارتشاف العظم بواسطة ناقضات العظم. يتسبب ارتشاف العظم المفرط لفترات طويلة في اختلال توازن دوران الهيكل العظمي ، مما يؤدي إلى أمراض ارتشاف العظام. لاستكشاف تأثيرات الأكتوزيد على تكون الخلايا العظمية ، استخدمنا اثنين من الضامة ، BMMs الأولية المستزرعة وخلايا RAW264.7.

تم تحفيز هذه الخلايا باستخدام RANKL للتمايز إلى ناقضات العظم في وجود وغياب الأكتوزيد. أظهرنا لأول مرة أن الأكتوزيد يثبط تمايز وتشكيل ناقضات العظم. لم يتسبب Acteoside نفسه عند التركيزات التي تم فحصها في انخفاض صلاحية الضامة المستزرعة الأولية في كل من ظروف النمو والتمايز.

قلل العلاج بالأكتوزيد أيضًا من نشاط ارتشاف ناقضات العظم الناضجة. تشير هذه النتائج إلى أن أكتيوسيد يثبط تكوين ترقق العظم من الضامة ونشاط ارتشاف ناقضات العظم. تشير نتائج نظام الاستزراع لدينا ، الذي لم يتضمن بانيات العظم أو الخلايا اللحمية ، إلى أن الأكتوزيد يمنع تكوين ناقضات العظم من خلال العمل مباشرة على سلائف ناقضات العظم.

يقوم RANKL بتنشيط MAPKs بما في ذلك p38 و ERK و JNK. تشارك هذه الكينازات الثلاثة في التمايز المبكر للعظم وبالتالي تثبيطها دوائيًا أو مع انتقال JNK السالب السالب يثبط تكوّن العظم الناجم عن RANKL [29]. كشفت نتائجنا أن المعالجة المسبقة للأكتيوزيد حالت دون كل هذه الكينازات ، مما يشير إلى تنظيم سفلي غير محدد لـ MAPKs. اختلفت هذه النتيجة جزئيًا عن التقرير السابق بأن EGCG ، المركب الرئيسي المضاد للالتهابات في نقطة الإنطلاق الخضراء ، يخفف على وجه التحديد تنشيط JNK دون التأثير على تنشيط ERK أو p38 في BMMs المحفزة بـ RANKL [7]. تم الإبلاغ أيضًا عن Paeonol ، وهو مركب مضاد للالتهابات مشتق من عشب صيني ، لمنع الفسفرة ERK و p38 ، ولكن ليس JNK ، في خلايا RAW264.7 المحفزة بـ RANKL [30]. في المقابل ، خفف السيليبينين ، وهو مثبط جديد في العظام ، التنشيط الناجم عن RANKL لـ p38 و ERK و JNK [31]. تشير هذه النتائج إلى أن تأثيرات المركبات المضادة للارتشاف على تنشيط MAPK بواسطة RANKL تعتمد على المركب ، على الرغم من أن جميع MAPKs الثلاثة متورطة في تكوين الخلايا العظمية المبكرة.

مع الأخذ في الاعتبار الملاحظة التي تفيد بأن الأكتوزيد الموهن لـ p-JNK

المستويات في BMM المحفزة بـ RANKL ، حتى عند 1 ملي مولار ، يبدو أن انسداد JNK بدلاً من p38 MAPK أو ERK حدث أكثر تحديدًا في تكوين الخلايا العظمية بوساطة أكتيوسيد. على الرغم من أن أكتيوسيد بنفس التركيز لم يقلل من عدد الخلايا الآكلة للعظم في BMMs ، كان هناك انخفاض كبير في تكوين الحفرة عن طريق العلاج بالأكتيوزيد. وجدنا أيضًا أن المعالجة المسبقة باستخدام SP600125 ، وهو مثبط دوائي خاص بـ JNK ، منعت بشكل كبير تكوين ناقضات العظم (البيانات غير معروضة). بشكل جماعي ، تشير هذه النتائج إلى أن الإشارات التي تتم بوساطة JNK ترتبط ارتباطًا وثيقًا بقمع تكوّن الخلايا العظمية بوساطة الأكتوزيد الذي يحفزه RANKL.

تنظم إشارات NF-kB الأحداث الخلوية ، بما في ذلك موت الخلايا المبرمج ، وتطور دورة الخلية ، والتصاق الخلية ، وإنتاج السيتوكين ، والبقاء في الضامة [32]. تشوير NF-kB مطلوب أيضًا لتطوير ناقضات العظم ، والذي تم إثباته من خلال ظهور ترقق العظام في فئران NF-kB-knockout [33،34]. لذلك ، يُقترح تثبيط NF-kB ليكون هدفًا فعالًا للعوامل المضادة للارتشاف لتقليل نشاط ناقضات العظم وعلاج هشاشة العظام. يعد التعديل اللاحق للترجمة لبروتينات الفصيلة الفرعية NF-kB أمرًا بالغ الأهمية في تعديل نشاط NF-kB. على وجه الخصوص ، تعتبر الفسفرة للوحدة الفرعية p65 و IkB kinase أمرًا بالغ الأهمية لـ NF-kB للحث على تكون الخلايا العظمية [7]. أظهرت نتائجنا الحالية أن تحفيز RANKL زاد من نشاط ربط الحمض النووي لـ NF-kB والفسفرة للوحدة الفرعية p65 و IkBa في كل من خلايا BMM و RAW264.7. أدت المعالجة المسبقة باستخدام الأكتوزيد إلى تثبيط هذه الزيادات التي يسببها RANKL ، مما أدى إلى نشاط NF-kB الخاضع للتنظيم. وبالتالي ، تشير هذه النتائج إلى أنه بالإضافة إلى MAPKs ، فإن إشارات NF-kB هي الهدف الرئيسي للأكتيوزيد في تثبيط تمايز ناقضات العظم وتشكيله من الضامة المحفزة بـ RANKL.

بالإضافة إلى إشارات NF-kB ، يلعب مسار c-Fos / c-Jun / NFATc1 أدوارًا رئيسية في تطور ناقضات العظم ، وبالتالي فإن نقص أي من هذه البروتينات يمكن أن يوقف تكون الخلايا العظمية [35 ، 36]. في هذه الدراسة ، وجدنا أن أكتيوسيد يمنع التعبير عن C-Fos و NFATc1 الناجم عن RANKL على مستويات الرنا المرسال والبروتين. JNK هو كيناز منبع لـ c-Jun ، وهو مطلوب للتعبير عن NFATc1 وتكوين الخلايا العظمية استجابة لـ RANKL [29].

أدى سد مسار JNK / c-Jun باستخدام مثبط للخردة إلى تقليل تكوين ناقضة العظم الناجم عن RANKL وتعبير c-Fos و NFATc1 [7]. تشير نتائجنا ونتائجنا السابقة إلى أن تثبيط إشارات JNK بوساطة الأكتيوسايد يرتبط ارتباطًا وثيقًا بمنع c-Fos و NFATc1 بوساطة RANKLالتعبير ، الذي يمنع تمايز ناقضات العظم في العاثيات الكبيرة. الاختلافات في تأثيرات الأكتوزيد على خلايا BMM و RAW264.7 ترجع جزئيًا على الأقل إلى الاختلافات في الحساسية لتثبيط JNK.

يمكن لعامل TNF-a أن يحفز تكوين الخلايا العظمية بشكل مستقل عن إشارات RANKL- RANK [37]. IL -1 هو وسيط قوي لتدمير العظام المرضي الناجم عن نقص هرمون الاستروجين أو الالتهاب [7]. يمكن أن يؤدي تعطيل إشارات مستقبلات النوع I IL -1 أو إشارات IL -1 إلى عكس فقدان العظام الناجم عن استئصال المبيض [38] أو التهاب المفاصل الروماتويدي [39]. أظهرت هذه الدراسة قدرة أكتيوسيد على تقليل إنتاج السيتوكينات الالتهابية مثل TNF-a و IL - 1 b و IL -6 في الضامة. يُعتقد أن Acteoside يثبط إنتاج السيتوكينات الالتهابية عن طريق تثبيط إشارات p38 kinase و ERK ، لأن تنشيط ERK1 / 2 ، p38 MAPK ، أو كليهما مطلوب لإنتاج السيتوكينات الناجم عن عديد السكاريد الدهني في البلاعم [40 ، 41]. تم الإبلاغ أيضًا عن Luteolin ، وهو مركب التهابي ، لقمع إنتاج الوسائط الالتهابية عن طريق تثبيط تنشيط p38 MAPK [42]. في هذه الدراسة ، وجدنا أيضًا أن الأكتوزيد يضعف فقدان العظام في الفئران المبيضية ، كما يتضح من قوة الكسر القصوى المستعادة في العمود الأوسط لعظم الفخذ الأيمن واختفاء العظم القشري الناجم عن هشاشة العظام. قللت إدارة أكتيوزيد الفموي من التجاعيد التي يسببها استئصال المبيض في مستويات IL -1 b و IL -6 في الدم ، ولكن ليس ALP. تم أيضًا تثبيط زيادة مستويات الكالسيوم في الدم و TRAP و OC في OVX عن طريق العلاج عن طريق الفم باستخدام أكتيوسيد ، مما يشير إلى أن الأكتوزيد يخفف من تغيير المؤشرات الحيوية الخاصة بتكوين العظام وكذلك الارتشاف. نظرًا لأن هشاشة العظام تتميز بانخفاض كثافة الكتلة وتدهور البنية الدقيقة للعظم التربيقي ، فقد تم تثبيط فقدان العظام التربيقي الناجم عن OVX وتغيير المعلمة الشكلية بشكل كبير عن طريق إعطاء الأكتوزيد عن طريق الفم. تشير هذه النتائج إلى أنه يمكن استخدام أكتيوسيد كعامل مضاد للارتشاف لعلاج هشاشة العظام عن طريق عكس تنشيط ناقضة العظم غير المتوازن. ومع ذلك ، فإن بانيات العظم هي العامل الأساسي المسؤول عن تكوين العظام الجديدة. وبالتالي هناك حاجة إلى عامل قادر على زيادة تكاثر أو تمايز بانيات العظم لتعزيز تكوين العظام [30]. في المقابل ، وجدنا أن أكتيوسيد لم يؤثر على تمايز أو تمعدن بانيات العظم في خلايا نخاع العظم المعالجة بـ DAG. مجتمعة ، تشير نتائجنا إلى أن الأكتوزيد له تأثير مضاد للارتشاف ولكنه لا يؤثر بشكل مباشر على تكوين العظام. هناك حاجة إلى مزيد من التجارب التفصيلية التي تحلل المعلمات الخاصة بالعظام في الجسم الحي وفي المختبر لتوضيح ما إذا كان الأكتوزيد يفيد تكوين الخلايا العظمية أم لا.

تسلط الدراسة الحالية الضوء على التأثير المثبط للأكتيوسيد على تمايز ناقضات العظم وارتشاف العظام عن طريق قمع MAPKs والعديد من العوامل النسخية مثل NF-kB و c-Fos و NFATc1. تشير البيانات إلى آليتين محتملتين يتمتع بهما الإكتيوسيد بهذه الفوائد.

يمكن أن يعالج ECHINACOSIDE CISTANCHE و ACTEOSIDE هشاشة العظام

مراجع

1. RhoJ ، Takami M ، Choi Y (2004) Osteoimmunology: تفاعلات الجهاز المناعي والهيكل العظمي. الجزيئات والخلايا 17: 1-9.

2. Del Fattore A ، Capannolo M ، Rucci N (2010) العظام ونخاع العظام: نفس العضو. محفوظات الكيمياء الحيوية الفيزياء الحيوية 503: 28-34.

3. Rachner TD، Khosla S، Hofbauer LC (2011) هشاشة العظام: الآن والمستقبل. لانسيت 377: 1276-1287.

4. Sturge J ، Caley MP ، Waxman J (2011) النقائل العظمية في سرطان البروستاتا: استراتيجيات علاجية ناشئة. مراجعات الطبيعة علم الأورام السريري 8: 357-368.

5. Goltzman D (2002) الاكتشافات والعقاقير واضطرابات الهيكل العظمي. مراجعات الطبيعة اكتشاف الأدوية 1: 784-796.

6. رودان جي إيه ، مارتن تي جيه (2002) الأساليب العلاجية لأمراض العظام. Science 289: 1508-1514.

7. Lee JH و Jin H و Shim HE و Kim HN و Ha H وآخرون. (2010) Epigallocatechin -3- gallate يثبط تكوّن الخلايا العظمية عن طريق خفض تنظيم التعبير c-Fos وقمع إشارة العامل النووي kappaB. علم الأدوية الجزيئي 77: 17-25.

8. Kim HN و Lee JH و Jin WJ و Ko S و Jung K وآخرون. (2012) MS -275 ، مثبط بنزاميد هيستون ديسيتيلاز ، يمنع تكوّن الخلايا العظمية عن طريق تنظيم تعبير c-Fos ويثبط فقدان العظام في الفئران. المجلة الأوروبية لعلم الأدوية 691: 69-76.

9. Kim T، Ha H، Shim KS، Cho WK، MaJY (2013) التأثير المضاد لهشاشة العظام لـ Yijung-tang في نموذج الفئران المبيض المستأصل بوساطة تثبيط تمايز ناقضات العظم. مجلة علم الادوية الاثنية 146: 83-89.

10. Nakanishi A ، Litsuka N ، Tsukamoto J (2013) يمنع زيت السمك ارتشاف العظم عن طريق تثبيط تكوّن الخلايا العظمية من خلال انخفاض التعبير عن M-CSF و PU.1 و MITF و RANK في الفئران التي تم استئصال المبايض. تقارير الطب الجزيئي 7: 1896-1903.

11. Bar-Shavit Z (2007) ناقضة العظم: خلية مناعية عظمية متعددة النوى ، مكونة للدم ، ممتصة للعظم. مجلة الكيمياء الحيوية الخلوية 102: 1130-1139.

12. Takahashi N ، Maeda K ، Ishihara A ، Uehara S ، Kobayashi Y (2011) الآلية التنظيمية لتكوين الخلايا العظمية بواسطة إشارات RANKL و Wnt. الحدود في العلوم البيولوجية 16: 21-30.