الجزء الثاني: مضادات الأكسدة والحماية الخلوية للأكتيوزيد ومشتقاته: المقارنة والكيمياء الميكانيكية

الجزء 2 كيف تحمي مضادات الأكسدة Cistanche Acteoside الخلايا؟

انقر هنا للجزء 1

للمزيد من المعلومات أرجو الأتصال:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola له العديد من التأثيرات ، انقر هنا لمعرفة المزيد

3. مناقشة

من المعروف أن العمل المضاد للأكسدة للمركبات الفينولية الطبيعية له دور في نقل الإلكترون (ET) [18،19]. وبالتالي ، تم استخدام بعض فحوصات تقليل المعادن المستندة إلى ET على نطاق واسع لتقييم مستويات مضادات الأكسدة من الفينولات ، مثل فحوصات FRAP و CUPRAC. يجب أن تتحقق إرشادات اختبار FRAP مع درجة حموضة أقل من 3.6. نجحت هذه البيئة الحمضية في كبت تأين H زائد من الفينولات ؛ وبالتالي ، يعتبر اختبار FRAP مجرد عملية ET [20 ، 21]. فعاليةأكتيوسيدومشتقاته في اختبار FRAP يعني أنه عندما يعمل الأكتيوسايد ومشتقاته كمضادات للأكسدة ، فقد يستخدمون مسار ET لممارسة عملهم المضاد للأكسدة.

إلى جانب ذلك ، أجرينا أيضًا اختبار CUPRAC في محلول مؤقت لدرجة الحموضة 7.4. كما رأينا في ملحق. 1 ،أكتيوسيدوزادت مشتقاته من النحاس بالاعتماد على الجرعة^{2 زائد}-تخفيض نسب الطاقة ، مما يشير إلى أنها يمكن أن تظل محتملة في ET عند درجة الحموضة الفسيولوجية. ومع ذلك ، انخفضت إمكانات ET الخاصة بهم بالترتيب التالي:أكتيوسيد> فورسيتوسيد ب> بوليوموسيد (الجدول 1). تشير هذه الديناميكية بوضوح إلى أن جزء apiosyl في forsythoside B وشق rhamnosyl في poliumoside قلل من احتمال ET.

لاختبار احتمال حدوث ET أثناء عمليات الكسح الجذري ، تم إدخال PTIO الجذور الحرة المتمحورة حول الأكسجين في الدراسة. كشفت أدلة قياس الفولتميتر الدوري أن PTIO ・ - الكسح تحت الرقم الهيدروجيني 5. 0 هو تفاعل واحد للأكسدة والإلكترون. الملاحظة أنأكتيوسيدومشتقاته يمكن أن تزيل جذري PTIO بكفاءة عند درجة الحموضة 4.5 ، مما يشير إلى إمكانية ET أثناء عمليات الكسح الجذري. من الواضح أن هذه النتيجة تدعم النتائج المذكورة أعلاه من فحوصات FRAP و CUPRAC ، والنتائج السابقة التي تفيد بأن الإلكترون المتبرع (هـ) هو سمة من سمات مضادات الأكسدة الفينولية [23].

ومع ذلك ، في درجة الحموضة الفسيولوجية 7.4 ، فإن مقال الكسح PTIO ليس مجرد مسار ET ولكنه يتضمن أيضًا مسار نقل البروتون (H plus). أثناء العملية ، تم اقتراح PTIO لقبول H.^زائدمن الفينولات لإنتاج ذروة المنتج ([PTIO-H]^زائد). لأن H^زائد- يكون النقل دائمًا مصحوبًا بـ ET في آليات متدرجة أو متزامنة [24] ، والمنتج الواقعي (أو النهائي) هو جزيء [PTIO-H] [22]. إن المسح الضوئي PTIO عند الرقم الهيدروجيني 7.4 (ملحق 1) يعني ذلكأكتيوسيدومشتقاته تمتلك إمكانية نقل H plus أيضًا. تشير قيم IC50 (الجدول 1) إلى أن القيمة النسبية H^زائد- كانت إمكانات النقل بترتيب تنازلي منأكتيوسيد>فورسيثوسيد ب> بوليوموسيد. من الواضح أن شقوق apiosyl و rhamnosyl أضعفت أيضًا H^زائد-تحويل القدرة أثناء عملية مضادات الأكسدة.

كما تمت مناقشته سابقًا ، أثناء عملية مضادات الأكسدة في الفينولات ، عادةً ما يكون ET مصحوبًا بالبروتون (H^زائد) النقل لتشكيل العديد من الآليات المضادة للأكسدة [24] ، مثل نقل ذرة الهيدروجين (HAT) [23 ، 25-27] ، النقل المتسلسل للإلكترون-البروتون (SEPT) [26 ، 27] ، فقدان البروتون المتسلسل أحادي الإلكترون النقل (SPLET) [26] ، ونقل الإلكترون المقترن بالبروتونات (PCET) [24-26 ، 28]. على سبيل المثال ، ABTS plus • - المسح ، تفاعل يهيمن عليه نقل إلكترون واحد (SET) [29] ، ثبت أيضًا أنه يتأثر بمستويات H plus مؤخرًا [30]. ولذلك فإن ABTS plus • - المسح هو عبارة عن مقايسة مضادة للأكسدة متعددة المسارات [21،31]. حقيقة انأكتيوسيدومشتقاته يمكن أن تنقب عن جذور ABTS plus تشير إلى أن تأثيرها المضاد للأكسدة يمكن أيضًا التوسط فيه عبر مسارات متعددة. تم تأكيد هذه الفرضية بشكل أكبر من خلال الأدلة المستمدة من مقايسة الكسح DPPH ، وهو رد فعل يشتمل على مسارات متعددة HAT و ET و SEPT و PCET [26 ، 32]. ومع ذلك ، فإن التحليل الكمي القائم على IC₅₀كشفت القيم (الجدول 1) أنه في ABTS القائم على مسارات متعددة بالإضافة إلى جوانب الكسح و DPPH * - جوانب -- المسح ،أكتيوسيدكان متفوقًا على مركب فورسيثوسيد B و rhamnoside poliumoside. وبالتالي ، يمكن استنتاج أن شقوق apiol و rhamnosyl تعيق في النهاية إمكانات المسارات المتعددة (خاصة ET و H^زائد-transfer) أثناء عملية إزالة الجذور الحرة.

كما لاحظ المؤلفون وآخرون [14،26] ، أثناء عملية مضادات الأكسدة ، قد يحدث تفاعل RAF أيضًا. للتحقق من إمكانية RAF ، تمت دراسة ثلاثة جليكوسيدات فينيل بروبانويد جنبًا إلى جنب مع حمض الكافيين باستخدام تحليل UPLC-ESI-Q-TOF-MS / MS. تم العثور على حمض الكافيين لإنتاج منتج ثنائي ، بينما لم ينتج عن ثلاثة جليكوسيدات فينيل بروبانويد أي ذروة لمنتج RAF. تشير هذه النتيجة بوضوح إلى أن ثلاثة جليكوسيدات فينيل بروبانويد لا يمكن أن تخضع لمسار RAF لممارسة تأثيرها المضاد للأكسدة. نظرًا لأنه يمكن اعتبار ثلاثة جليكوسيدات فينيل بروبانويد على أنها استرات حمض الكافيك (الشكل 1) ، فإن هذا الاختلاف بين إسترات حمض الكافيين وحمض الكافيين يشير أيضًا إلى أن الشق الضخم قد يعيق توليد RAF.

مجتمعة ، من ناحية إزالة الجذور الحرة ،أكتيوسيدومشتقاته قد تخضع لمسارات متعددة لممارسة تأثيرها كمضاد للأكسدة. هذه المسارات المضادة للأكسدة تشارك على الأقل في ET و H plus -transfer (ولكن ليس RAF). النتائج التي توصلنا إليها مدعومة جزئيًا بالدراسة النظرية التيأكتيوسيديمكن أن تمارس عمل مضاد للأكسدة عبر مسار SPLET. في هذه العملية ، قد ينفصل Acteoside أولاً (H^زائد-النقل) لإنتاج الأنيون. يُعتقد أن نزع البروتون يحدث في شقوق الكاتيكول ذات الحموضة الضعيفة. بعد ذلك ، تبرع الأنيون بالإلكترونات لإحداث شكل جذري الفينوكسي [33]. ومع ذلك ، فإن جذور الفينوكسي مع اقتران pn مستقرة إلى حد ما. بالطبع ، في هذا الصدد ، هناك حاجة إلى مزيد من العمل التجريبي في المستقبل.

ومن الجدير بالذكر أن الإجهاد التأكسدي الخلوي يمكن أن ينشأ أيضًا من معادن انتقالية (خاصة الحديد^{2 زائد}). الحديد^{2 زائد}ومع ذلك ، يمكن لأيون تحويل H₂O₂الجزيء إلى أكثر الجذور ضررًا من خلال تفاعل فنتون (Fe²زائد زائد H2O2 T Fe³plus plus OH plus OH^-). لذلك ، توهين الحديد²يمكن للمستويات الزائدة أن تمنع بشكل فعال جذور OH لإطلاق الإجهاد التأكسدي الخلوي. في الواقع ، تم الآن تطوير عملية استخلاب الحديد بواسطة مضادات الأكسدة الفينولية الطبيعية إلى علاج فعال لبعض أمراض الإجهاد التأكسدي [34 ، 35].

في هذه الدراسة ، تم اقتراح أكتيوسيد ومشتقاته على أنها Fe فعالة^{2 زائد}-المخلفات عن طريق التغييرات في التحليل الطيفي وألوان الحل (الشكل 2). ومع ذلك ، فإن أكتيوسيد أدنى من الجلوكوزيدات في الحديد المخلب^{2 زائد}و forsythoside B مع جزء apiosyl هو أدنى من poliumoside مع جزء rhamnosyl. بناءً على مقارنة المطابقات التفضيلية الخاصة بهم (الشكل 1 ، على اليمين) ، يُقترح أن جزء apiosyl (أو rhamnosyl) يمكن أن يساعد ligand الرئيسي (مجموعة phenylpropanoid) في مخلب Fe^{2 زائد}. مثل هذا التأثير التآزري يقوي بلا شك الحديد^{2 زائد}- القدرة على التخلب وتزيد من قمم الأشعة فوق البنفسجية. ومع ذلك ، فإن rhamnosyl أكثر فعالية من apiosyl في الحديد الخاص به^{2 زائد}- القدرة على الخلق. يمكن أن يُعزى الاختلاف إلى حقيقة أن rhamnosyl يحدث في شكل خارجي دائري (أي ، aL-rhamnopyranosyl) ، بينما يكون Apiosyl في شكل خماسي حلق (أي ، pD-apiofuransyl). من المعروف أن الشكل الخارجي الدوري يكون أكبر وأكثر استقرارًا. ومن ثم ، فإن رامنوسيل خارج الحلقات يكون أكثر فاعلية بالمقارنة مع الأبوسيل الخماسي الحلقي في الحديد.^{2 زائد}- القدرة على الخلق.

لاختبار ما إذا كان الأكتيوسايد ومشتقاته يمكن أن تزيل ROS ، أجرينا اختبارًا للتأكسد الأوتوماتيكي للبيروجالول. كما رأينا في ملحق. في الشكل 1 ، يمكن للجميع بكفاءة البحث عن - الراديكالي ، وهو ROS نموذجي يحدث في الخلايا. ومع ذلك ، انخفض النشاط الحيوي النسبي بالترتيب poliumoside> forsythoside B>أكتيوسيد. هذا الترتيب موازٍ أيضًا لتأثيرات الحماية الخلوية (الجدول 2). تشير هذه النتيجة إلى أن التأثير العام لشق rhamnosyl أو جزء apiosyl هو تعزيز تأثيرات ROS-scavning أو cytoprotective.

4. المواد والأساليب

4.1. الكيماويات والحيوانات

تم الحصول على Acteoside (رقم CAS: 61276-17-3 ، 97 بالمائة) ، forsythoside B (رقم CAS: 81525-13-5 ، 97 بالمائة) من BioBioPha (كونمينغ ، الصين ، ملحق 3). تم عزل Poliumoside (رقم CAS: 94079-81-9 ، 97 بالمائة) بواسطة فريقنا من الأعشاب الصينية التقليديةCallicarpa periHT Chang (ملحق 3). DPPH ・ ، (±) -6- هيدروكسيل -2 ، 5،7 ، 8- tetramethlychromane -2- حمض الكربوكسيل (ترولوكس) ، 2 ، 9- ثنائي ميثيل {{ تم شراء 9}} و 10- الفينانثرولين (نيوكوبروين) و 2،4 و 6- tripyridyltriazine (TPTZ) و pyrogallol من شركة Sigma-Aldrich Shanghai Trading Co. (شنغهاي ، الصين). (NHq'ABTS [2،2'-azino-bis (3- ethylbenzene-thiazoline -6- ملح حامض السلفونيك ثنائي الأمونيوم)] تم الحصول عليه من Amresco Chemical Co. (Solon ، OH ، الولايات المتحدة الأمريكية). PTIO ・تم شراء جذري من شركة TCI Development Co.، Ltd. (شنغهاي ، الصين). تم شراء حمض الكافيين من المعهد الوطني للتحكم في المنتجات الصيدلانية والبيولوجية (بكين ، الصين). تم شراء (FBS) و trypsin من Gibco (Grand Island ، NY ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء مجموعة فحص AnnexinV / propidium iodide (PI) من Invitrogen (كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وكانت جميع الكواشف الأخرى من الدرجة التحليلية.

تم الحصول على فئران Sprague-Dawley (SD) التي يبلغ عمرها 4 أسابيع من مركز الحيوان بجامعة قوانغتشو للطب الصيني. تم إجراء بروتوكول هذه التجربة تحت إشراف لجنة أخلاقيات الحيوان المؤسسية في جامعة قوانغتشو الصينية (رقم الموافقة 20170306A).

4.2. فحوصات تقليل المعادن (FRAP& كوبراك)

تشمل فحوصات تقليل المعادن الحديد^{3 زائد}- تقليل مقايسة الطاقة والنحاس^{2 زائد}- تقليل مقايسة الطاقة. الحديد^{3 زائد}- تم إنشاء مقايسة التخفيض بواسطة Benzie and Strain وأطلق عليها رسميًا اسم FRAP [20]. تم وصف البروتوكول التجريبي لهذا الاختبار في تقرير سابق [9]. باختصار ، تم تحضير كاشف FRAP طازجًا عن طريق خلط 10 ملي مولار TPTZ ، 20 ملي FeCl_3,و {0}. مخزن مؤقت من الأسيتات سعة 25 مترًا بنسبة 1: 1: 10 عند درجة الحموضة 3.6. تمت إضافة عينة الاختبار (x=4-20 L ، 0.05 مجم / مل) إلى (20 - x) من 95 بالمائة من الإيثانول متبوعًا بـ 80 RL من كاشف FRAP. بعد حضانة 30- دقيقة في درجة الحرارة المحيطة ، تم قياس الامتصاصية عند 595 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة (Multiskan FC ، Thermo Scientific ، شنغهاي ، الصين). تم حساب قوة الاختزال النسبية للعينة باستخدام الصيغة التالية:

اين ا_الأعلىكان أقصى امتصاص لخليط التفاعل مع العينة ، و A_دقيقةهو الحد الأدنى من الامتصاصية في الاختبار. أ هو امتصاص العينة.

النحاس^{2 زائد}- يمكن أن تميز الطاقة المخففة أيضًا مستوى مضادات الأكسدة وبالتالي يطلق عليها CUPRAC. تم إجراء هذا الاختبار وفقًا لطريقة منشورة مسبقًا [36]. باختصار ، 12 RL من محلول CuSOq المائي (10 مليمول / لتر) ، 12 RL من محلول الإيثانول النيوكوبرويني (7.5 مليمول / لتر) و (75 - x) RL من CH₃كونه₄تمت إضافة محلول المخزن المؤقت ({0}. 1 مول / لتر ، درجة الحموضة 7.5) إلى آبار ذات أحجام مختلفة من العينة (0.05 مجم / مل ، 4-20|^ L). تم قياس الامتصاصية عند 450 نانومتر بعد 30 دقيقة باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة المذكورة أعلاه. تم حساب قوة CUPRAC النسبية باستخدام صيغة FRAP. أ_الأعلىكان أقصى امتصاص لخليط التفاعل مع العينة ، و A_دقيقةهو الحد الأدنى من الامتصاصية في الاختبار. أ هو امتصاص العينة.

4.3. PTI 0・-المقايسة

تم إجراء فحوصات المسح PTIO * (عند درجة الحموضة 4.5 أو درجة الحموضة 7.4) بناءً على طريقتنا [16]. باختصار ، تمت إضافة محلول عينة الاختبار (x=0-20 ^ L ، 1 مجم / مل للرقم الهيدروجيني 4.5 و {{1 0}. 5 مجم / مل للرقم الهيدروجيني 7.4) إلى (20 - x) rL من 95 بالمائة من الإيثانول ، متبوعًا بـ 80 RL من محلول PTIO المائي *. تم تحضير محلول PTIO المائي باستخدام محلول زبدة فوسفات (0.1 ملي مولار ، أس هيدروجيني 4.5 أو أس هيدروجيني 7.4). تم الحفاظ على الخليط عند 37 درجة لمدة ساعتين ، ثم تم قياس الامتصاصية عند 560 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة المذكورة أعلاه. تم حساب نسبة تثبيط PTIO * على النحو التالي:

حيث A هي درجة امتصاص عنصر التحكم بدون العينة ، و A هي امتصاص خليط التفاعل مع العينة.

4.4. ABTSزائد*- الكسب و DPPH*- فحوصات الكسب

ABTS *^زائد- تم تقييم نشاط الكسح وفقًا للطريقة [37]. تم إنتاج ABTS plus * عن طريق خلط 0. 2 مل من ملح ثنائي الأمونيوم ABTS (7.4 مليمول / لتر) مع 0. 2 مل من بيرسلفات البوتاسيوم (2.6 مليمول / لتر). تم حفظ الخليط في الظلام عند درجة حرارة الغرفة لمدة 12 ساعة للسماح بإكمال التوليد الجذري قبل تخفيفه بالماء المقطر (بنسبة 1: 2 تقريبًا 0) بحيث تكون امتصاصه عند 734 نانومتر كانت { {16}}. 35 土 0. 01 باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة المذكورة أعلاه. لتحديد نشاط الكسح ، تمت إضافة عينة الاختبار (x {18}} RL ، 0.05 مجم / مل) إلى (20 - x) RL من الماء المقطر متبوعًا بـ 80 RL من كاشف ABTS plus * ، والامتصاص عند 734 تم قياس نانومتر بعد 3 دقائق من الخلط الأولي ، باستخدام الماء المقطر على هيئة الفراغ.

تم تحديد نشاط إزالة الجذور DPPH * كما هو موضح سابقًا [18]. باختصار ، تم خلط 75 RL من محلول DPPH * (0. 1 rM) مع التركيزات المحددة للعينة (0. 025 مجم / مل ، 5-25 RL) مذابة في ميثانول. تم الحفاظ على الخليط عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة ، وتم قياس الامتصاصية عند 519 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة المذكورة أعلاه.

تم حساب النسب المئوية لنشاط الكسح ABTS plus • ونشاط الكسح DPPH * استنادًا إلى الصيغة الواردة في القسم 4.3.

4.5. UPLC—ESI—Q-TOF—MS / MS تحليل PPH* منتجات التفاعل

استندت هذه الطريقة على دراستنا السابقة [25]. تم خلط محلول الميثانول من أكتيوسيد مع محلول جذور DPPH * في ميثانول بنسبة مولارية 1: 2 ، وتم تحضين الخليط الناتج لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة الغرفة. تم بعد ذلك ترشيح خليط المنتج من خلال مرشح 0. 22- Rm وتحليله باستخدام نظام UPLC مجهز بعمود C18 (2. 0 مم معرف × 1 0 0 مم ، 1.6 Rm ، Phenomenex ، تورانس ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم استخدام المرحلة المتنقلة لشطف النظام وتتكون من خليط من الميثانول (المرحلة أ) والماء (المرحلة ب). تمت تصفية العمود بمعدل تدفق قدره 0.3 مل / دقيقة باستخدام برنامج شطف التدرج التالي: 0-10 دقيقة ، 60-100 بالمائة أ ؛ 10-15 دقيقة ، 100 بالمائة أ. تم ضبط حجم حقن العينة عند 1 RL لفصل المكونات المختلفة. تم إجراء تحليل ESI-Q-TOF-MS / MS باستخدام Triple TOF 5600زائدمطياف الكتلة (AB SCIEX ، Framingham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) مزود بمصدر ESI ، والذي تم تشغيله في وضع التأين السالب. تم ضبط نطاق الفحص على 100-2000 Da. تم تشغيل النظام بالمعايير التالية: جهد رش الأيونات ، - 4500 فولت ؛ سخان مصدر أيون ، 550 درجة مئوية ؛ غاز ستارة (CUR ، N2) ، 30 رطل لكل بوصة مربعة ؛ غاز البخاخات (GS1 ، الهواء) ، 50 رطل / بوصة مربعة ؛ غاز Tis (GS2 ، هواء) ، 50 رطل / بوصة مربعة. تم تعيين جهد التفكيك (DP) عند -100 فولت ، بينما تم تعيين طاقة التصادم (CE) عند -40 فولت مع انتشار طاقة التصادم (CES) بمقدار 20 فولت. منتجات RAF

عن طريق استخراج الصيغة الجزيئية المقابلة من الكروماتوجرام الأيوني الكلي (الملحق 2).

تم تكرار التجربة المذكورة أعلاه باستخدام فورسيثوسيد ب ، جانب المنصة ، وحمض الكافيين. المناظرةm/zتم استخراج القمم من الصيغة الجزيئية المقابلة من الكروماتوجرام الأيوني الكلي (ملحق 2).

4.6. تحليل الأطياف بالأشعة المرئية وفوق البنفسجية لـ Fe^{2 زائد}-تصفيح المنتجات

الحديد^{2 زائد}- نواتج التفاعل الخلبية للحديد الأكتيوسايد^{2 زائد}تم تقييمها باستخدام التحليل الطيفي للأشعة المرئية وفوق البنفسجية [13]. للتجربة ، تمت إضافة 3 0 0 من محلول ميثانولي من أكتيوسيد (0.24 ملي مولار) إلى 700 ر لتر من محلول مائي من FeCl؟ 4H2O (168 ملم). ثم تم خلط المحلول بقوة. بعد ذلك ، تم مسح الخليط الناتج باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV-Vis بعد ساعة (Unico 2600A ، شنغهاي ، الصين) من 200-850 نانومتر.

تم تكرار التجربة المذكورة أعلاه باستخدام forsythoside B ، أو جانب المنصة ، بدلاً من acteoside.

4.7. فحص بيروجالول للأكسدة التلقائية لأنيون الأكسيد الفائق (•O2~) الكسح

استند قياس نشاط الكسح لأنيون الأكسيد الفائق (・. {0}) على طريقتنا [17]. باختصار ، تم إذابة العينة في الإيثانول عند 1 مجم / مل. تم خلط محلول العينة (x rL) مع محلول Tris-HCl المؤقت (980 - x rL ، 0.05 M ، الرقم الهيدروجيني 7.4) الذي يحتوي على EDTA (1 مم). عند إضافة 20 RL pyrogallol (60 ملي مولار في 1 ملي هيدروكلوريد) ، يُرج الخليط عند درجة حرارة الغرفة على الفور. تم قياس الامتصاصية عند 325 نانومتر من الخليط (Unico 2100 ، شنغهاي ، الصين) مقابل محلول Tris-HCl العازل كفراغ كل 30 ثانية لمدة 5 دقائق. تم حساب قدرة الكسح على النحو التالي:

4.8. تأثير الحماية الخلوية تجاه bmMSCs المجهدة بالأكسدة (مقايسة MTT)

تمت تربية bmMSCs وفقًا لتقاريرنا السابقة [38] مع بعض التعديلات الطفيفة. باختصار ، تم الحصول على نخاع العظم من عظم الفخذ والساق من الجرذ. تم تخفيف عينات النخاع باستخدام DMEM (انخفاض الجلوكوز) الذي يحتوي على 1 0 في المائة من FBS. تم تحضير bmMSCs عن طريق الطرد المركزي المتدرج عند 900 جم لمدة 30 دقيقة عند 1.073 جم / مل بيركول. تم فصل الخلايا المحضرة عن طريق العلاج بـ 0.25 بالمائة من التربسين وتمريرها إلى قوارير ثقافية عند 1 × 104 / سم². تم تقييم bmMSCs في المقطع 3 من أجل تجانس الخلايا المستزرعة باستخدام الكشف عن CD44 باستخدام مقايسة MTT [39].

تم استخدام اختبار MTT لتقييم تأثير حماية الخلايا للأكتيوسايد ومشتقاته تجاه bmMSCs [40]. تم إنشاء نموذج الإصابة بناءً على الدراسة السابقة [41]. تم توضيح البروتوكول التجريبي بإيجاز في الشكل 3.

4.9. تحليل احصائي

كل تجربة في الأقسام 4. 2-4. تم ​​إجراء 4 و 4.7 في ثلاث نسخ ، وتم إجراء تجربة اختبار MTT في pentaplicate. تم تسجيل البيانات على أنها المتوسط土SD (الانحراف المعياري). تم رسم منحنيات الجرعة والاستجابة باستخدام Origin 6. 0 برنامج احترافي (OriginLab، Northampton، MA، USA). تم تعريف قيمة IC5 0 على أنها التركيز النهائي لتثبيط جذري بنسبة 50 بالمائة (قوة الاختزال النسبية) [42]. تم إجراء مقارنات إحصائية بواسطة ANOVA أحادية الاتجاه لاكتشاف فروق ذات دلالة إحصائية باستخدام SPSS 13.0 (SPSS Inc. ، شيكاغو ، إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكية) لنظام التشغيل Windows.pتم اعتبار <0. 05 ذا دلالة إحصائية.

5. الاستنتاجات

يمكن أن تشارك ثلاثة جليكوسيدات فينيل بروبانويد طبيعية ، وهي أكتيوسيد ، وفورسيثوسيد ب ، وجانب المنصة ، في مسارات متعددة لممارسة عمل مضاد للأكسدة ، بما في ذلك ET ، H plus -transfer ؛ و Fe^{2 زائد}-التشابك ، ولكن ليس سلاح الجو الملكي البريطاني. إن ET و H.^زائد- قد يتم إعاقة مسارات النقل بواسطة مجموعة rhamnosyl أو جزء apiosyl ؛ ومع ذلك ، فإن الحديد^{2 زائد}- يمكن تحسين مسار الخيوط بواسطة مخلفات السكر (خاصة جزء rhamnosyl). يتمثل التأثير العام لشق rhamnosyl أو جزء apiosyl في تعزيز قدرة الكسح ROS ذات المسارات المتعددة. وبالتالي ، فإن فورسيثوسيد ب وبوليوموسيد متفوقان على الأكتيوسايد في التأثيرات الواقية للخلايا.

المواد التكميلية:المواد التكميلية متاحة على الإنترنت. 1. منحنيات الاستجابة للجرعة. 2. أطياف HPLC-MS. 3. شهادات تحليل أكتيوسيد ، فورسيثوسيد ب ، وبوليوموسيد.

شكر وتقدير:تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم في الصين (81573558 ، 81603269) ، ومشروع قوانغدونغ للعلوم والتكنولوجيا (2017A050506043) ، ومؤسسة العلوم الطبيعية في مقاطعة قوانغدونغ (2 017 A030312009 ، 2015A030310491).

الكاتب الاشتراكات:تصور Xian Li و Dongfeng Chen وصمموا التجارب ؛ أعد Aichi Wu poliumoside ؛ أجرى كل من Yulu Xie و Qian Guo و Penghui Xue تجارب مضادات الأكسدة. أجرى Ke Li و Wei Zhao تجارب MTT ؛ قام Hong Xie بتحليل البيانات ؛ أجرى Jiasong Guo التجربة Oi الشكل 2D ؛ كتب Xian Li الورقة. كل الكتاب قراءة وافقت على المخطوط النهائي.

تضارب المصالح:الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

أكتيوسيدفيcistanche

الاختصارات

ABTS plus • 2،2'-azino-bis (3- ethylbenzo-thiazoline -6- حمض السلفونيك)

الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من نخاع العظم bmMSCs

كوبريك CUPRAC يقلل من قدرة مضادات الأكسدة

dAMP 2'-deoxyadenosine -5 '- جذري أحادي الفوسفات

وسيط النسر المعدل DMEM Dulbecco

dGMP 2^/-deoxyguanosine -5 '- جذري أحادي الفوسفات

DPPHe 1 ، 1- ثنائي فينيل -2- بيكريل-هيدرازين راديكالي

نقل الإلكترون ET ؛ FBS: مصل بقري جنيني

FRAP أيون الحديديك تقليل الطاقة المضادة للأكسدة ؛

نقل ذرة الهيدروجين HAT

MTT 3- (4 ، 5- ثنائي ميثيلثيازول -2- يل) -2 ، 5- ثنائي فينيل

نقل الإلكترون المقترن بالبروتون PCET

PTIOe 2- فينيل -4 ، 4،5 ، 5- رباعي ميثيل أميدازولين -1- أكسيد 3- راديكالي

تشكيل المقربة الجذرية لسلاح الجو الملكي

أنواع الأكسجين التفاعلي ROS

نقل نواة الخلية الجسدية SCNT

SEPT النقل المتسلسل للإلكترون والبروتون

SPLET فقدان البروتون المتسلسل نقل إلكترون واحد

TPTZ 2،4 ، 6- ترايبريديل تريازين

ترولوكس (±) -6- هيدروكسيل -2 ، 5،7 ، 8- tetramethlychromane -2- حمض الكربوكسيل

مراجع

1. Kubica، P .؛ سزوبا ، أ. Ekiert، H. إنتاج الفيرباسكوسايد والأحماض الفينولية في الكتلة الحيوية لفيربينا Officinalis L. (نبات عشبي) المستزرع في ظروف مختلفة في المختبر. نات. همز. الدقة. 2017 ، 31 ، 1663-1668.

2. Lee، JH؛ تشون ، جيه إل ؛ كيم ، KJ ؛ كيم ، إي واي كيم ، د. لي ، بي إم ؛ هان ، كو ؛ بارك ، كانساس ؛ لي ، KB ؛ Kim، MK Effect of Acteoside كمحمي خلوي لإنتاج كلب مستنسخ. بلوس وان 2016،11 ، e0159330.

3 - وانغ ، المقر الرئيسي ؛ شو ، YX ؛ يانغ ، ياء ؛ تشاو ، س ص ؛ الشمس ، XB ؛ تشانغ ، يب ؛ قوه ، جي سي ؛ Zhu ، CQ Acteoside يحمي خلايا الورم الأرومي العصبي SH-SY5Y البشرية ضد|3- إصابة الخلايا التي يسببها الأميلويد. Res الدماغ. 20091283 ، 139-147.

4. يانغ ، ج. يان ، واي. ليو ، إيتش بي ؛ وانغ ، ج. Hu ، JP الآثار الوقائية لأكتيوسيد ضد الأضرار التي تسببها الأشعة السينية في الخلايا الليفية لجلد الإنسان. مول. ميد. ممثل عام 2015 ، 12 ، 2301-2306.

5. ليو ، سي إتش ؛ ليو ، تي إس ؛ لو ، CQ ؛ تشانغ ، ياء ؛ تسنغ ، XY ؛ كوي ، إل. Xie ، LJ تقدير فورسيثياسيد ب وبوليوموسيد في منشأ وأجزاء مختلفة من Callicarpa kwangtungensis. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2013 ، 38 ، 3324-3326.

6. جيانغ ، WL ؛ تيان ، جي دبليو ؛ فو ، FH ؛ تشو ، HB ؛ هوى ، ج. فعالية الحماية العصبية والنافذة العلاجية لـ Forsythoside B: نموذج Ina Rat للإقفار الدماغي وإصابة ضخه. يورو. فارماكول. 2010 ، 640 ، 75-81.

7. Pan، N .؛ Hori، H. العمل المضاد للأكسدة من Acteoside ونظائرها على بيروكسيد الدهون. ممثل Redox. 1996 ، 2 ، 149-154.

8. Zheng، RL؛ شي ، يم ؛ جيا ، ZJ ؛ تشاو ، قبرصي ؛ تشانغ ، س. تان ، إصلاح سريع لجذور الحمض النووي. تشيم. شركة القس 2010 ، 39 ، 2827-2834.

9. Li، XC؛ ماي ، دبليو كيو ؛ تشين ، DF دراسة كيميائية حول التأثير الوقائي ضد تلف الحمض النووي الناجم عن الهيدروكسيل وآلية مضادات الأكسدة للميريسترين. J. تشين. تشيم. شركة 2014 ، 61 ، 383-390.

10. شي ، YM ؛ وانغ ، WF ؛ هوانغ ، قبرصي ؛ جيا ، ZJ ؛ ياو ، س. Zheng ، RL Fast Repair of Oxidative DNA Damage بواسطة Phenylpropanoid Glycosides ونظائرها. الطفرات 2008 ، 23 ، 19-26.

11. جيانغ ، س. لي ، XC ؛ تيان ، وايجي ؛ لين ، ف ف ؛ شيه ، ح. لو ، WB ؛ تشي ، وايجي ؛ Chen، DF المستخلصات المائية المجففة بالتجميد من Mori Fructus و Mori Ramulus تحمي الخلايا الجذعية الوسيطة من التلف المعالج بـ eOH: المقايسة الحيوية وآلية مضادات الأكسدة. تكملة BMC. بديل. ميد. 2017 ، 17 ، 242.

12. Wang، TT؛ تسنغ ، جي سي ؛ لي ، XC ؛ Zeng، HP In Vitro Studies حول التأثير الوقائي والمضاد للأكسدة لمشتقات الهيدروكسي كينولين المستبدلة 2- ضد H2O 2- الإجهاد التأكسدي في BMSCs. تشيم. بيول. ديس المخدرات. 2010 ، 75 ، 214-222.

13. Liu، JJ؛ لي ، XC ؛ لين ، ياء ؛ لي ، YR ؛ وانغ ، تي تي ؛ جيانغ ، س. Chen، DF Sarcandra Glabra (Caoshanhu) يحمي الخلايا الجذعية الوسيطة من الإجهاد التأكسدي: التقييم الحيوي والكيمياء الميكانيكية. تكملة BMC. بديل. ميد. 2016 ، 16 ، 423.

14. Li، XC؛ هان ، إل. لي ، YR ؛ تشانغ ، ياء ؛ تشين ، جي إم ؛ لو ، WB ؛ تشاو ، XJ ؛ لاي ، واي تي ؛ تشين ، د. Wei، G. التأثير الوقائي لـ Sinapine ضد الضرر الناجم عن جذور الهيدروكسيل للخلايا الجذعية الوسيطة والآليات الممكنة. تشيم. فارم. ثور. 2016 ، 64 ، 319-325.

15. بيرتولو ، أ. كابوسيلا ، إس. فرانكل ، ج. باور ، م. بوتزيل ، تي. ستويانوف ، ج. حالة الأكسدة تتنبأ بالجودة في الخلايا الجذعية الوسيطة البشرية. الدقة الخلايا الجذعية. هناك. 2017 ، 8 ، 3.

16. Li، XC 2- Phenyl -4، 4،5، 5- Tetramethylimidazoline -1- oxyl 3- Oxide (PTIOe) Radical Scavenger: A New and Simple Antioxidant الفحص في المختبر. J. أجريك. الغذاء تشيم. 2017 ، 65 ، 6288-6297.

17. Li، X. طريقة أكسدة البيروجالول المحسّنة: مقايسة الكسح للأكسدة الفائقة الموثوقة والرخيصة ومناسبة لجميع مضادات الأكسدة. J. أجريك. الغذاء تشيم. 2012 ، 60 ، 6418-6424.

18. Li، XC؛ جيانغ ، س. وانغ ، تي تي ؛ ليو ، جي. Chen، DF مقارنة التأثيرات المضادة للأكسدة من Quercitrin و Isoquercitrin: فهم دور مجموعة 6〃-OH. جزيئات 2016 ، 211246.

19. ليوبولديني ، م. مارينو ، ت. روسو ، ن. توسكانو ، م.خصائص مضادات الأكسدة للمركبات الفينولية: H-atom مقابل آلية نقل الإلكترون. J. فيز. تشيم. 2004108 و 4916 ^ 922.

20. بنزي ، IFF ؛ سلالة ، JJ قدرة الحد من الحديديك للبلازما (FRAP) كمقياس "للقوة المضادة للأكسدة": مقايسة FRAP. شرجي. بيوتشيم. 1996 ، 239 ، 70-76.

21. Gulcin، I. النشاط المضاد للأكسدة لمكونات الغذاء: نظرة عامة. قوس. توكسيكول. 2012 ، 86 ، 345-391.

22. Goldstein، S. روسو ، أ. ساموني ، أ. تفاعلات PTIO و Carboxy-PTIO مع ・ NO و ・ NO2 و O2. J. بيول. تشيم. 2003 ، 278 ، 50949-50955.

23. Li، X .؛ هان ، و. ماي ، دبليو كيو ؛ وانج ، L. نشاط مضادات الأكسدة وآلية تتراهيدروامينتوفلافون في المختبر. نات. همز. كومون. 2013 ، 8 ، 787-789.

24. Zhang، HY؛ وو ، دبليو. دراسة Mo ، YR لنقل الإلكترون المقترن بالبروتونات (PCET) مع أربع حالات سكري صريحة في المستوى الأولي ab. حاسوب. النظرية. تشيم. 2017 ، 1116 ، 50-58.

25. Lin، J .؛ لي ، XC ؛ تشين ، إل. لو ، WZ ؛ تشين ، XW ؛ هان ، إل. Chen ، DF تأثير الحماية ضد تلف الحمض النووي الناجم عن جذور الهيدروكسيل وآلية مضادات الأكسدة لـ [6] -gingerol: دراسة كيميائية. ثور. كيم الكوري. شركة 2014 ، 35 ، 1633-1638.

26 - إيوجا ، سي. ألفاريز إيدابوي ، جونيور ؛ Russo، N. النشاط المضاد للأكسدة لـ Trans-Resveratrol تجاه هيدروكسيل و Hydroperoxyl Radicals: A Quantum Chemical and Computational Kinetics. J. Org. تشيم. 2012 ، 77 ، 3868-3877. [CrossRef] [PubMed]

27. Li، XC؛ هو جين تاو ، قطر للبترول. جيانغ ، إس إكس ؛ لي ، ف. لين ، ياء ؛ هان ، إل. هونغ ، يل ؛ لو ، WB ؛ جاو ، YX ؛ Chen ، DF Flos Chrysanthemi Indici يحمي من الأضرار التي يسببها الهيدروكسيل للحمض النووي و MSCs عن طريق آلية مضادات الأكسدة. كيم السعودية. شركة 2015 ، 19 ، 454-460.

28. Amic، A .؛ ماركوفيتش ، زي. ماركوفيتش ، JMD ؛ ستيبانيك ، ف. لوسيك ، ب. Amic، D. نحو تنبؤ محسّن لقدرة الفلافونويد في إزالة الجذور الحرة: أهمية آليات PCET المزدوجة. الغذاء تشيم. 2014 ، 152 ، 578-585.

29. لي ، سي إتش ؛ Yoon، JY UV Direct Photolysis of 2،2'-and-bis (3- إيثيل بنزوثيازولين -6- سلفونات) (ABTS) في محلول مائي: حركية وآلية. J. فوتوشيم. فوتوبيول. 2008 ، 197 ، 232-238.

30. Aliaga، C.؛ Lissi، EA Reaction of 2،2'-Azinobis (3- Ethylbenzothiazoline -6- Sulfonic Acid (ABTS) المشتق من الجذور مع Hydroperoxides. Kinetics and Mechanism. Int. J. Chem. Kinet. 1998، 30، { {8}}.

31 ـ عثمان ع. وونغ ، KKY ؛ Fernyhough ، A. ABTS أكسدة البوليفينول مدفوعة بالجذور: العزلة والتوضيح الهيكلي للقنوات التساهمية. بيوتشيم. بيوفيز. الدقة. كومون. 2006 ، 346 ، 321-329.

32. عثمان ، AM المسارات المتعددة لتفاعل 2 ، 2- Diphenyl -1- Picrylhydrazyl Radical (DPPHe) مع (plus) -catechin: دليل على تكوين رابطة تساهمية بين DPPHe والنموذج المؤكسد من البوليفينول. بيوتشيم. بيوفيز. الدقة. كومون. 2011 ، 412 ، 473-478.

33. Lopez-Munguia، A .؛ هيرنانديز روميرو ، واي. بيدرازا شافيري ، ياء ؛ ميراندا مولينا ، أ. ريجلا ، أنا. مارتينيز ، أ. Castillo، E. Phenylpropanoid Glycoside نظائرها: التوليف الأنزيمي ، نشاط مضادات الأكسدة والدراسة النظرية لآلية الزبال الجذري الحر. بلوس وان 2011 ، 6 ، e20115.

34. Perron، NR؛ Brumaghim ، JL مراجعة لآليات مضادات الأكسدة لمركبات البوليفينول المتعلقة بربط الحديد. الخلية الحيوية. بيوفيز. 2009 ، 53 ، 75-100.

35. Devos، D.؛ مورو ، سي. ديفدجيان ، جي سي ؛ كلوزا ، ياء ؛ بيرولت ، م. لالوكس ، سي ؛ جونو ، أ. ريكيويرت ، جي. غاركون ، جي ؛ Rouaix ، N. ؛ وآخرون. استهداف الحديد المخلبي كطريقة علاجية في مرض باركنسون. مضادات الأكسدة. إشارة الأكسدة والاختزال. 2014 ، 21 ، 195-210.

36 ـ سكييتش، SD؛ باسكان الطوطم ، إي. Apak، R. تعديل النحاسي لسعة مضادات الأكسدة (CUPRAC) لقياس القدرات المضادة للأكسدة للبروتينات المحتوية على ثيول في الاختلاط مع البوليفينول. تالانتا 2009 ، 79 ، 344-351.

37. Li، XC؛ تشين ، د. ماي ، واي. ون ، ب. ؛ وانغ ، XZ التوافق بين الأنشطة المضادة للأكسدة في المختبر والمكونات الكيميائية من Radix Astragali (Huangqi). نات. همز. الدقة. 2012 ، 26 ، 1050-1053.

38. Chen، DF؛ لي ، XC ؛ شو ، ZW ؛ ليو ، إكس بي ؛ دو ، SH ؛ لي ، ح. تشو ، JH ؛ تسنغ ، إتش بي ؛ Hua ، ZC Hexadecanoic Acid من Buzhong Yiqi Decoction المستحث من تكاثر الخلايا الجذعية المتوسطة لنخاع العظام. جيه ميد. طعام 2010 ، 13 ، 967-975.

39. Li، X .؛ ليو ، جي. لين ، ياء ؛ وانغ ، تي تي ؛ هوانغ ، جي. لين ، YQ ؛ Chen، DF التأثيرات الوقائية للداي هيدروميريستين ضد تلف الخلايا الجذعية الوسيطة المستحثة OH والكيمياء الميكانيكية. جزيئات 2016،21،604.

40. Wang، GR؛ لي ، XC ؛ Zeng ، HP Synthesis ، نشاط مضادات الأكسدة لـ (E) -9- p-Tolyl -3-2- (8- hydroxy-quinol - 2- yl) vinyl-carbazole و (E) {{8 }} (p-Anisyl) -3-2- (8- هيدروكسي كينول -2- yl) فينيل كاربازول وانتشارها الحثي للخلايا الجذعية الوسيطة. اكتا شيم. الخطيئة. 2009 ، 67 ، 974-982.

41. Li، X .؛ وي ، جي. وانغ ، العاشر ؛ ليو ، د. دنغ ، ر. لي ، ح. تشو ، ياء ؛ لي ، واي. تسنغ ، هـ. Chen، D. إن استهداف مسار Shh بواسطة atractylenolides يعزز التمايز الغضروفي للخلايا الجذعية الوسيطة. بيول. فارم. ثور. 2012 ، 35 ، 1328-1335.

42. Li، XC؛ جاو ، YX ؛ لي ، ف. ليانغ ، AF ؛ شو ، ZM ؛ باي ، واي. ماي ، دبليو كيو ؛ هان ، إل. Chen، DF Maclurin يحمي من الأضرار التي يسببها جذر الهيدروكسيل للخلايا الجذعية الوسيطة: تقييم مضادات الأكسدة والبصيرة الميكانيكية. تشيم. بيول. تفاعل. 2014 ، 219 ، 221-228.

توافر العينة: عينة من مركب poliumoside متاحة من المؤلفين.

© 2 0 18 بواسطة المؤلفين. مرخص MDPI ، بازل ، سويسرا. هذه المقالة عبارة عن مقال مفتوح الوصول يتم توزيعه بموجب شروط وأحكام ترخيص Creative Commons Attribution (CC BY) (http: ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z).