الجزء الأول: مضادات الأكسدة والحماية الخلوية لأكتيوسيد ومشتقاته: المقارنة والكيمياء الآلية

Xican Li 1،2 ، * ، † ID ، Yulu Xie 1،2 ، † ، Ke Li 3،4 ، Aichi Wu 1،2 ، * ، Hong Xie 1،2 ، Qian Guo 1،5 ، Penghui Xue 1 ، Yerkingul Maleshibek 1 و Wei Zhao 6 و Jiasong Guo 7 و Dongfeng Chen 3،4

1 مدرسة طب الأعشاب الصينية ، جامعة قوانغتشو للطب الصيني ، قوانغتشو 510006 ، الصين ؛

2 مختبر البحث والتطوير المبتكر في الطب الصيني التقليدي ، جامعة قوانغتشو للطب الصيني ، قوانغتشو 510006 ، الصين

3 كلية العلوم الطبية الأساسية ، جامعة قوانغتشو للطب الصيني ، قوانغتشو 510006 ، الصين ؛

4 مركز أبحاث الطب التكاملي الأساسي ، جامعة قوانغتشو للطب الصيني ، قوانغتشو 510006 ، الصين

5 كلية العلوم الطبية الأساسية ، جامعة قوانغدونغ الصيدلانية ، قوانغتشو 510007 ، الصين

6 مدرسة تشونغشان للطب ، جامعة صن يات صن ، رقم 74 طريق تشونغشان. 2 ، قوانغتشو 510080 ، الصين ؛

7 قسم علم الأنسجة والأجنة ، الجامعة الطبية الجنوبية ، قوانغتشو 510515 ، الصين ؛

تم الاستلام: 24 كانون الثاني (يناير) 2018 ؛ مقبول: 20 فبراير 2018 ؛ تاريخ النشر: 23 فبراير 2018

الملخص:حاولت الدراسة استكشاف دور مخلفات السكر وآليات مضادات الأكسدة الفينولية فينيل بروبانويد.أكتوسيد، جنبًا إلى جنب مع نظيره forsythoside B وجانب rhamnoside podium ، تم فحصه بشكل مقارن باستخدام مقايسات مضادات الأكسدة المختلفة. في ثلاثة فحوصات قائمة على نقل الإلكترون (FRAP ، CUPRAC ، PTIO * - المسح عند الرقم الهيدروجيني 4.5) ، حكمت مستويات مضادات الأكسدة النسبية تقريبًا على أنهاأكتيوسيد>فورسيثوسيد ب> بوليوموسيد. وقد لوحظ هذا الترتيب أيضًا في H^زائد- مقايسة PTIO * المتضمنة في النقل عند درجة الحموضة 7.4 ، وفي ثلاثة فحوصات مسح جذري متعددة المسارات ، مثل ABTS plus • - المسح ، و DPPH • - الكسح ، و • O 2 - - الكسح. في أطياف UV-vis ، أظهر كل منهم تحولًا أحمر عند 335-364 نانومتر وقممتين ضعيفتين (480 و 719 نانومتر) ، عند مزجهما بالحديد.^{2 زائد}؛ ومع ذلك،أكتيوسيدأعطى أضعف امتصاص. في التحليل الكروماتوغرافي السائل فائق الأداء مقترنًا بالتأين بالرش الكهربائي رباعي الأقطاب مع قياس الطيف الكتلي الترادفي لوقت الرحلة (UPLC - ESI - Q-TOF - MS / MS) ، لم يتم العثور على ذروة تشكيل المقربة الجذرية (RAF). كشف اختبار MTT أن البوليوموسيد أظهر أعلى قابلية للحياة للخلايا الجذعية المشتقة من النخاع العظمي المؤكسد. ختاماً،أكتيوسيد، و forsythoside B ، و poliumoside في مسارات متعددة لممارسة عمل مضادات الأكسدة ، بما في ذلك ET ، H^زائد-نقل أو الحديد^{2 زائد}-التشابك ، ولكن ليس سلاح الجو الملكي البريطاني. نقل ET و H plusقد تعوقها شقوق رامنوسيل وأبيوسيل ؛ ومع ذلك ، فإن الحديد^{2 زائد}- يمكن تعزيز إمكانية الخلق بواسطة اثنين من بقايا السكر (خاصة جزء rhamnosyl). التأثير العام لشق الرامنوسيل والأبيوسيل هو تحسين التأثيرات المضادة للأكسدة أو الواقية الخلوية.

الكلمات الدالة:أكتيوسيد؛ أبيوسيل. فورسيثوسيد ب ؛ جليكوسيدات فينيل بروبانويد ؛ بوليوموسيد. رامنوسيل

للمزيد من المعلومات أرجو الأتصال:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola له العديد من التأثيرات ، انقر هنا لمعرفة المزيد

1 المقدمة

حديثاً،أكتيوسيد(تم العثور على فيرباسكوسايد ، الشكل 1 ، جليكوسيد فينيل بروبانويد الفينول الذي يحدث في نباتات نباتية أخرى ، لتحسين كفاءة نقل نواة الخلية الجسدية للكلاب (SCNT) أثناء عملية استنساخ الكلاب. بالإضافة إلى ذلك ،أكتيوسيديمكن أن تحمي خلايا الورم الأرومي العصبي SH-SY5Y البشري من التلف الناجم عن بروتين p-amyloid والأرومات الليفية لجلد الإنسان من التلف الناجم عن الأشعة السينية. يتم أيضًا توزيع فورسيثوسيد ب المناسب (الشكل 1) في النباتات وقد لوحظ أنه يمارس تأثيرات اعصاب قوية مع نافذة زمنية علاجية مواتية. يُعتقد أن هذه التأثيرات المفيدة على الخلايا والأنسجة مرتبطة بحماية بعض الجزيئات الحيوية ، مثل الدهون والحمض النووي. في الواقع،أكتيوسيدوالتناظريةتشيكوسلوفاكياتانوسيدFتم إثبات قدرته على تثبيط بيروكسيد دهون الميتوكوندريل في الفئران. من المعروف أن بيروكسيد الدهون ناتج عن الإجهاد التأكسدي الخلوي وفي النهاية من أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS).

من ناحية حماية الحمض النووي ،أكتيوسيدومشتقاته يمكنها إصلاح جذور الحمض النووي بسرعة ، مثل 2'-deoxyadenosine -5 '- أحادي الفوسفات (dAMP) و 2'-deoxyguanosine -5' - أحادي الفوسفات (dGMP) [8]. يمكن أن تؤدي جذور ديوكسينوكليوتيد الثانوية هذه إلى تدمير الخلايا بشكل مؤكسد مما يؤدي إلى حدوث الطفرات والتسرطن [9]. أشارت الدراسة الفيزيائية الحيوية إلى ذلكأكتيوسيدويمكن لمشتقاته أن تلتحم في أخاديد الحمض النووي الصغيرة وتصلح بسرعة تلف الحمض النووي المؤكسد [10]. يقترح نموذج العصا الكروية القائم على التشكل التفضيلي (الشكل 1,right) أن هذه الجزيئات تتكاثر ويمكنها الوصول بسهولة إلى حلقة الحمض النووي ، وبالتالي فهي قادرة على إصلاح تلف جذور الحمض النووي بسرعة [8].

ومع ذلك ، من وجهة نظر الكيمياء الحيوية ، يتم الإصلاح بشكل أساسي عبر مسار ROS-scavising (أي مضادات الأكسدة). كما ذكرنا سابقًا ، فإن توليد الدول الجذرية للديوكسينوكليوتيد هو في النهاية من هجوم ROS ، بما في ذلك الجذور الحرة (على سبيل المثال ، ・ OH الراديكالي 11) وجزيئات الأكسدة (على سبيل المثال ، H2O2 [12]). يُعتقد أن كسح ROS يقلل بشكل فعال من حالة الأكسدة الخلوية [13 ، 14] ويحسن نوعية الخلايا الجذعية [12 ، 15]. لذلك ، من الضروري دراسة قدرتها المضادة للأكسدة ومناقشة الآليات الممكنة.

في هذه الدراسة ، تم فحص ثلاثة جليكوسيدات فينيل بروبانويد الفينولية (أكتيوسيد ، فورسيثوسيد ب ، وبوليوموسيد) بشكل مقارن باستخدام مقايسات مختلفة من مضادات الأكسدة ، بما في ذلك 2- فينيل -4 ، 4،5 ، 5- رباعي ميثيل أميدازولين { مقايسة الكسح {5}} أكسيد -3- جذور أكسيد (PTIO ・) ، مقايسة تقليل قدرة مضادات الأكسدة (FRAP) لأيون الحديديك ، مقايسة قدرة مضادات الأكسدة المخفضة (CUPRAC) ، 2،2'-casino-bis ({{11 }} ethylbenzene-thiazoline -6- شق حمض السلفونيك (ABTS plus •) مقايسة الكسح ، 1 ، 1- diphenyl -2- picryl-hydrazine (DPPH ・) ، و ・. {{18} } الكسح وكذلك Fe^{2 زائد}- تحليل أطياف الأشعة فوق البنفسجية الخبيثة. بعد ذلك ، تم تحديد منتجات تفاعلهم مع DPPH باستخدام تحليل كروماتوجرافي سائل فائق الأداء مقترنًا بالتأين بالرش الكهربائي رباعي الأضلاع في وقت الطيران بمقياس الطيف الكتلي (UPLC - ESI - Q-TOF - MS / MS). أخيرًا ، تم تقدير تأثيرها الواقي للخلايا تجاه الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من نخاع العظم (bmMSCs) باستخدام 3- (4 ، 5- ثنائي ميثيلثيازول -2- yl) -2 ، {{12} }} مقايسة ثنائي الفينيل (MTT). كما رأينا في الشكل 1,الفرق بين جليكوسيدات فينيل بروبانويد الفينولية الثلاثة (أي أكتيوسيد ، فورسيثوسيد ب ، وبوليوموسيد) هو نوع الجليكوسيد: فورسيثوسيد ب هو بديل من أكتيوسيد ، بينما بوليوموسيد هو رامنوسيد من أكتيوسيد. وبالتالي ، تساعد هذه الدراسة المقارنة أيضًا في فهم دور أبيوسيل ورامنوزيل في التأثيرات المضادة للأكسدة.

2. النتائج

2.1. فحوصات تقليل المعادن (FRAP & CUPRAC)

في الدراسة ، أجرينا فحصين لتقليل المعادن ، أي اختبار FRAP ومقايسة CUPRAC. كما هو موضح في ملحق. في الشكل 1 ، زاد أكتوسيد ومشتقاته من FRAP النسبي (أو Cu^{2 زائد}-خفض الطاقة) النسب المئوية عند 0-10 昭 / لتر بطريقة تعتمد على الجرعة. انخفض ترتيب مستويات الاختزال النسبي للمعادن تقريبًا بترتيب الأكتيوسايد> فورسيثوسيد ب> بوليوموسيد (الجدول 1).

2.2. PTIO・-المقايسة

تم تطوير مقايسة الكسح PTIO * مؤخرًا بواسطة مختبرنا [16]. يمكن استخدامه لتقييم مستويات مضادات الأكسدة واستكشاف مسارات مضادات الأكسدة. كما هو موضح في ملحق. في الشكل 1 ، يمكن أن يقوم أكتوسايد ومشتقاته بكسح PTIO * عند درجة الحموضة 4.5 ودرجة الحموضة 7.4. ومع ذلك ، وفقًا لقيم IC50 في الجدول 1 ، كانت مستويات المسح PTIO * النسبية لها عند نفس قيمة الأس الهيدروجيني مختلفة عن بعضها البعض. أيضًا ، أظهر كل أكتيوسيد ومشتقاته مستويات مختلفة من PTIO • - المسح بين الأس الهيدروجيني 4.5 و الرقم الهيدروجيني 7.4. بشكل عام ، كانت مستويات الكسح PTIO عند 7.4 أعلى من تلك الموجودة عند درجة الحموضة 4.5.

2.3. ABTSزائد9-سكافينgجي و دPPH・- فحوصات الكسب

ABTS^زائديتم الآن استخدام الكسح على نطاق واسع في دراسات مضادات الأكسدة للمركبات أو المستخلصات النقية. كما رأينا في ملحق. في الشكل 1 ، أكتيوسيد ومشتقاته زاد التركيز المعتمد على ABTS بالإضافة إلى نسب الكسح أو DPPH. ومع ذلك ، من حيث قيم IC 50 في الجدول 1 ، تم العثور على مستويات ABTS النسبية الخاصة بهم بالإضافة إلى ^ - الكسح بترتيب acteoside> forsythoside B> poliumoside> Trolox. يمكن أيضًا ملاحظة ترتيب مماثل في DPPH - مقايسة الكسح.

2.4. UPLC-E SI—Q-TOF—مس / مS تحليل DPP H Reacمنتجات نشوئها

تم استكشاف ناتج تفاعل DPPH ・ مع كل من ثلاثة جليكوسيدات فينيل بروبانويد باستخدام تحليل UPLC - ESI - Q-TOF - MS / MS. في التحليل (ملحق 2) ، لم ينتج أي من جليكوسيدات فينيل بروبانويد الثلاثة ذروة منتج RAF. بالمقارنة ، وجد أن حمض الكافيين ينتج عنه منتج ثنائي(m/z359-360 ، ملحق. 2).

2.5. تحليل الأطياف بالأشعة المرئية وفوق البنفسجية لـ Fe^{2 زائد}-تصفيح المنتجات

نظرًا لأن أطياف الأشعة فوق البنفسجية يمكن أن تميز المجمعات المعدنية ، فقد استخدمت الدراسة بالتالي أطياف الأشعة فوق البنفسجية لتحليل Fe^{2 زائد}- تفاعل خلاب مع ثلاثة جليكوسيدات فينيل بروبانويد. كما هو مبين في الشكل 2,يمكن أن ينتج كل منهم تحولًا في اللون الباهت (335 نانومتر 364 نانومتر) في أطياف الأشعة فوق البنفسجية. وفي الوقت نفسه ، يمكن أن يوفر كل منهم قمتين ضعيفتين في الطيف المرئي (480 نانومتر و 719 نانومتر.)ويؤدي إلى مظهر أخضر فاتح. ومع ذلك ، كانت شدة الذروة بترتيب تنازلي من poliumoside> forsythoside B> acteoside.

أكتيوسيدفيcistancheيستطيعتقوية الذاكرة

2.6. فحص بيروجالول للأكسدة التلقائية لأنيون الأكسيد الفائق (•O2~) الكسح

تم تحسين مقايسة الأكسدة الذاتية للبيروجالول بواسطة مختبرنا في عام 2012 [17]. تم استخدامه لتقدير إمكانات الكسح ・ O 2-- في هذه الدراسة. كما رأينا في ملحق. في الشكل 1 ، يمكن لجميع الأكتيوسايد ومشتقاته أن تزيد حسب الجرعة -- من نسب الكسح. ومع ذلك ، انخفض النشاط الحيوي النسبي بترتيب poliumoside> forsythoside B> acteoside ، وفقًا لقيم IC50 في الجدول 1.

cistancheالصحراءأكتيوسيدفوائد

2.7. تأثير الحماية الخلوية تجاه bmMSCs المجهدة بالأكسدة (مقايسة MTT)

لتقييم التأثيرات الوقائية للخلايا للأكتيوسايد ومشتقاته ، أجرينا اختبار MTT. في الفحص ، تضررت bmMSCs بواسطة كاشف مؤكسد H.₂O₂، ثم تمت معالجة bmMSCs التالفة بواسطة أكتيوسيد ومشتقاته. ال_{490 نانومتر}تم استخدام القيم لتقييم التأثيرات النسبية للخلايا. كما هو موضح في الجدول 2 ، زاد كل أكتيوسيد ومشتقاته بالجرعة من A_{490 نانومتر}القيم. ومع ذلك ، عند نفس التركيز ، أعطى poliumoside أعلى قيم A490nm.