الجزء: الملاءمة المحتملة لمستقبلات الهرمون الملوتنة القابلة للذوبان أثناء النمو والبلوغ عند الأولاد والرجال

ملخص بسيط

الهرمونات التناسلية (LH) والغدد التناسلية المشيمية البشرية (hCG) ، وكلاهما منبهات لمستقبل الهرمون اللوتيني (LHCGR) ، ضروريان لتكاثر الذكور أثناء النمو والبلوغ. يتم التعبير عن lHCGR ويحفز إنتاج هرمون التستوستيرون بواسطة خلايا Leydig الخصية. في هذه الدراسة ، نوضح أن LHCGR القابل للذوبان موجود في الدم والبول والسائل المنوي للأولاد والرجال الأصحاء ، وكذلك في المرضى الذين يعانون من انحرافات الكروموسومات الجنسية. نوضح كيف ترتبط المستويات المتداولة من sLHCGR بتطور البلوغ ، ووظيفة الخصية ، ونوعية السائل المنوي ، ونوضح أن LHCGR يتم إطلاقه من أنسجة جنينية بشرية غير تناسلية. يتم إطلاق HCG في المصل عبر الخصيتين والأعضاء الأخرى ، مما يشير إلى دور خارجي محتمل لـ LH أو hCG عند الأولاد والرجال.

خلاصة

الهرمون اللوتيني (LH) والغدد التناسلية المشيمية البشرية (hCG) هما ناهضات لمستقبل الهرمون اللوتيني (LHCGR) ، الذي ينظم الوظيفة التناسلية للذكور. قد يتم إطلاق lHCGR في سوائل الجسم. أردنا تحديد ما إذا كان LHCGR القابل للذوبان هو علامة على وظيفة الغدد التناسلية. تم إجراء دراسات مقطعية وطولية وتدخلية على 195 من الفتيان والرجال الأصحاء و 396 رجلاً يعانون من العقم أو النقص أو متلازمة كلاينفيلتر (KS) لربط LHCGR المقاس في المصل والسائل المنوي والبول وشرايين الكبد / الكلى بوظيفة الغدد التناسلية . تم قياس lHCGR في النماذج المختبرية والحيوية لأنسجة الخصية البشرية وخطوط الخلايا ، ونماذج الفأر xenograft ، وأظهرت نتائج لطخة غربية بشرية أنه تم اكتشاف شظايا LHCGR في أنسجة المصل والغدد التناسلية ذات الحجم المماثل باستخدام ثلاثة أجسام مضادة مختلفة. حتى بعد طعوم xenografts ، لم يُظهر LHCGR-ELISA أي تفاعل متقاطع بين الأنواع أو تفاعلات غير محددة في مصل الفئران. في المقابل ، تم إطلاق sLHCGR في وسط الثقافة بعد زراعة الكلى الجنينية البشرية والغدة الكظرية. كان مصل sLHCGR أقل بشكل ملحوظ في الأولاد الأصحاء عند سن البلوغ (ع=0. 0 0 01). في الذكور الأصحاء ، ارتبط sLHCGR في المصل ارتباطًا سلبيًا بنسبة B / FSH الإنهيبين (-0. 004، p=0. 027). في الرجال المصابين بالعقم ، كان sLHCGR مرتبطًا سلبًا بمصل FSH (0.006 ، p=0. 009) ، تركيز الحيوانات المنوية (-3. 5 ، ص=0. 003) ، وإجمالي عدد الحيوانات المنوية (-3. 2 ، ص=0. 007). أدى حقن قوات حرس السواحل الهايتية إلى خفض مستوى هرمون (sLHCGR) في مصل وبول الرجال الأصحاء (p <0.01). في الختام ، يتم إطلاق sLHCGR في سوائل الجسم ويرتبط بتطور البلوغ ووظيفة الغدد التناسلية. يشير sLHCGR المنتشر في ذكور الأوركيد إلى أن sLHCGR في مصل الدم قد ينشأ في الأنسجة غير التناسلية وقد يعمل في الأنسجة غير التناسلية. (التجارب السريرية: NTC01411527 ، NCT01304927 ، NCT03418896).

الكلمات الدالة

مستقبلات LH بلوغ؛ تطوير؛ العقم.فوائد Cistanche؛ آثار خارج الغدد التناسلية. الجونادوتروبين. كلى جنينية الغدة الكظرية الجنينية TCAM2 ؛ NTera2

انقر هنا للشراءمستخلص الأعشاب

مقدمة

يعتبر كل من الهرمون الملوتن (LH) والغدد التناسلية المشيمية البشرية (hCG) من ناهضات مستقبل الهرمون اللوتيني (LHCGR) ، وهو أمر ضروري لتكاثر الذكور أثناء النمو والبلوغ [1]. قوات حرس السواحل الهايتية هي مستقبلات مقترنة ببروتين G معروف أنه يتم التعبير عنها في Leydig ، وخلايا اللوتين الحبيبية ، وخلايا الغشاء وهو منظم فعال لإنتاج الستيرويد الجنسي [1]. قوات حرس السواحل الهايتية هي ناهض قوي ومستمر ولكنه مهم فقط من الناحية الفسيولوجية أثناء نمو الجنين [2]. باستثناء بعض سرطانات الخلايا الجرثومية وسرطانات البنكرياس ، لا يتم إنتاج قوات حرس السواحل الهايتية في مرحلة البلوغ ، على الرغم من أن دراسة سابقة وجدت إفرازًا منخفضًا من الغدة النخامية - قوات حرس السواحل الهايتية في الذكور والإناث البالغين. تستخدم قوات حرس السواحل الهايتية لعلاج النساء للحث على الإباضة أثناء علاج الخصوبة ، وللرجال لتحفيز تخليق التستوستيرون وإمكانية تكوين الحيوانات المنوية لدى الرجال الذين يعانون من قصور الغدد التناسلية ، أو كاختبار تشخيصي لإنتاج هرمون التستوستيرون الداخلي [4]. يؤدي اجتثاث مستقبل LH الفأر (LHCGR) إلى انخفاض كبير في جودة هرمون التستوستيرون والسائل المنوي [5] ، وقد حددت العديد من المجموعات البحثية الطفرات و SNP في LHCGR ، مما يدل على أهميته لوظيفة الإنجاب البشري [6-8].

يقع جين LHCGR على الكروموسوم 2 ويتكون من 11 إكسونات ، منها exons 1-10 ترمز المجالات الهيكلية خارج الخلية و exon 11 ترميز 7 مجالات هيكلية عبر الغشاء وداخل الخلايا [9]. هناك العديد من الأشكال الإسوية لـ LHCGR ، ويعتقد أن أحدها يفرز لأنه يفتقر إلى مرساة عبر الغشاء [10]. الاحتمال الآخر هو أن إطلاق LHCGR في سوائل الجسم يعتمد على الانقسام الأنزيمي للبروتينات على غشاء الخلية ، مثل ADAMs و MMPs وبروتينات الغشاء المعروفة الأخرى المشقوقة. في الواقع ، لقد ثبت أن قوات حرس السواحل الهايتية تعمل على تنظيم MMP -2 و MMP -9 [11،12] على وجه التحديد ، وقد أظهرت العديد من الدراسات تنظيم ما بعد النسخ لـ LHCGR [13،14]. تم قياس LHCGR القابل للذوبان (LHC) في مصل النساء والسائل الجريبي بواسطة منصة ELISA [15،16]. تم التحقق من صحة خصوصية الأجسام المضادة المستخدمة في مقايسة ELISA من خلال التعبير عن شظايا LHCGR مختلفة في خلايا CHO لتوطين الحاتمة واكتشاف التعبير في المشيمة البشرية [15-17]. تم الكشف عن sLHCGR في المصل بواسطة LC-MS / MS [18]. ارتبطت تركيزات sLHCGR في المصل لدى النساء بعلاج الخصوبة وتسمم الحمل والولادة المبكرة والحمل عند الأطفال الذين يحملون معدلات زرع متلازمة داون [15،16] ، ولكن لم يتم التحقق من صحتها من قبل مجموعات بحثية أخرى حتى الآن. على حد علمنا ، لم يتم وصف sLHCGR أبدًا في سوائل الجسم للذكور الأصحاء أو الأولاد المراهقين أو الذكور الذين يعانون من انحرافات الكروموسومات الجنسية. قد يعمل sLHCGR في الدورة الدموية الذكرية كعلامة لوظيفة الغدد التناسلية من خلال نقل الارتباط عالي التقارب أو تغيير نشاط LH أو hCG.

المواد والأساليب

1. الأفواج

شباب من عامة الشعب

في الدنمارك ، يجب أن يخضع جميع الشباب الأصحاء الذين تزيد أعمارهم عن 18 عامًا لفحص جسدي لتحديد مدى ملاءمتهم للخدمة العسكرية. منذ عام 1996 ، تم فحص ما يقرب من 300 مجند ، يمثلون عامة السكان ، لجودة السائل المنوي كل عام. قدموا جميعًا عينات السائل المنوي ، وأكملوا استبيانًا ، وأجروا فحوصات بالموجات فوق الصوتية لخصيتهم ، وسحبوا عينات من الدم. تم تضمين عينات المصل والسائل المنوي من البنك الحيوي ، بالإضافة إلى تقييمات بالموجات فوق الصوتية ومعلومات عن مؤشر كتلة الجسم والعمر من 148 رجلاً شملهم الاستطلاع في عامي 2013 و 2014 ، في الدراسة الحالية (موافقة لجنة الأخلاقيات: H-KF -289428).

الأولاد الأصحاء قبل وبعد البلوغ

دراسة كوبنهاغن للمراهقة هي دراسة مقطعية وطولية مشتركة للأطفال الدنماركيين الأصحاء [20]. من المدارس العامة التي تم اختيارها عشوائياً ، تمت دعوة 6203 أطفال للمشاركة. بلغ العدد الإجمالي للمشاركين 2020 طفل. أجريت متابعة طولية لـ 209 أطفال (101 فتى) كل 6 أشهر وشملت الفحص البدني وتقييم تانر لمراحل البلوغ وعينات الدم والبول. تم تضمين ستة وثلاثين فتى مع متابعة طولية في هذه الدراسة لتقييم sLHCGR خلال فترة البلوغ (تجربة سريرية: NTC01411527).

الرجال المصابين بالعقم دون أمراض مصاحبة خطيرة

دراسة كوبنهاغن-بون-جوناد هي دراسة جماعية لـ 307 من الرجال المصابين بالعقم دون أمراض مصاحبة شديدة والذين حضروا عيادتنا للذكور من عام 2011 إلى عام 2015 ، بما في ذلك إجمالي 1427 رجلاً [21،22]. تمت إحالة جميع الرجال إلى عيادتنا بسبب انخفاض جودة السائل المنوي والرغبة في الأبوة. خضعوا جميعًا للفحص البدني ، بما في ذلك الموجات فوق الصوتية للخصيتين ، وسحبوا عينات الدم ، وقدموا عينات السائل المنوي. حصل أخصائي على تاريخهم الطبي المفصل. تمت متابعة الرجال لمدة 150 يومًا من قبل الباحثين وتناولوا فيتامين د أو دواء وهمي كما هو موصوف سابقًا. كانت جميع البيانات المقدمة في هذه الدراسة من الزيارة الأولية السابقة للتدخل وجميع المتغيرات المشمولة محددة مسبقًا (تجربة سريرية: NCT01304927).

نظام معياري

الرجال والفتيان المصابون بمتلازمة كلاينفيلتر والمرضى الذين يعانون من أنوركيا

حددنا 64 فتى ورجلًا مصابًا بمتلازمة كلاينفيلتر (KS) ، و 47 بعد البلوغ و 16 قبل البلوغ ، وفقًا لتصنيف تانر ، من عيادتنا للذكور. كان لدينا انحرافات كروموسومية دقيقة ، وتاريخ طبي ، وحالة بداية البلوغ ، ومعلومات مصل متاحة للجميع. خضع 7 أولاد للمتابعة الطولية مع التقييم السريري المنتظم وأخذ عينات الدم قبل وأثناء البلوغ.

قمنا أيضًا بتضمين 8 ذكور لديهم تعداد كروموسوم طبيعي ممن أزيلت خصيتهم الثنائية للحالات السابقة: سرطان الخلايا الجرثومية الخصية (ن=4) ، وسرطان البروستاتا المنتشر (ن=1) ، وخصية الخصية الثنائية ، واستئصال الخصية عند الأطفال ( n=1) ، أورام الخلايا الجرثومية الثنائية في الموقع (ن=1) ، وسرطان الخصية المتقدم بعد إزالة الخصيتين المتبقيتين بسبب الصدمة (ن=1).

البالغون يخضعون لقياس تدفق الطحال

قمنا بتضمين ثلاثة رجال وثلاث نساء بعد سن اليأس مع وظائف الكبد الطبيعية الذين تم قبولهم للاشتباه في إقفار المساريق وإحالتهم لقياس تدفق الدم الحشوي ولكن لم يظهر إقفار المساريق. تم جمع عينات الدم في وقت واحد من الكبد والكلى والوريد الفخذي والشريان المقابل (موافقة لجنة الأخلاقيات: H.18048245)

دراسة التدخل: الرجال الأصحاء المعرضون لموجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية

تم تجنيد أحد عشر رجلاً سليمًا للمشاركة في التدخل السريري من خلال إعلان Rigshospitalet الدنماركي. تم علاج المتطوعين بـ 5000 وحدة دولية من موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية وتم قياس الحد الأقصى لإنتاجهم من هرمون التستوستيرون الداخلي من خلال مقارنة عينات الدم والبول الأساسية مع عينات المتابعة التي تم جمعها بعد 8 و 24 و 72 ساعة من حقن قوات حرس السواحل الهايتية (تجربة سريرية: NCT03418896).

2. الفئران والأنسجة البشرية وخطوط الخلايا

تم استخدام سلالتين من خلايا سرطان الخصية البشرية NTera -2 و TCam -2 ، والتي تمثل سرطان الجنين والورم المنوي ، على التوالي ، كما تم وصفهما سابقًا [23].

تم جمع الأمصال من فئران عارية خالية من الأورام (WT) و TCam -2 فئران عارية xenograft تمت معالجتها بالناقلات ، أو LH ، أو hCG ، على التوالي (Animal Experimentation Inspectorate ، Copenhagen ، Denmark ، رقم الترخيص: 2012-15-2934-00051) .

تم جمع أنسجة الجنين البشري في الثلث الأول من الحمل من أنسجة النساء المتبرعات بعد عمليات الإجهاض المخطط لها. تمت زراعة الكلى وأنسجة الغدة الكظرية الجنينية في نماذج قطرة التعليق كما هو موضح سابقًا وتم جمع الوسيط للتحليل [24،25] (موافقة لجنة الأخلاقيات: H -1-2012-007).

تم الحصول على عينات من الخصية البالغة من الرجال الذين خضعوا لاستئصال المبايض المصابين بسرطان الخصية (موافقة لجنة الأخلاقيات: H {0}}). تم تخزين الأنسجة المحيطة بالورم التي تحتوي على مناطق غير خبيثة عند درجة حرارة - 80 C أو تم تثبيتها طوال الليل عند 4 درجات مئوية في الفورمالين أو مثبت Stieve المعدل (200 مل 37 بالمائة فورمالدهيد ، 40 مل حمض الخليك في 1 لتر 0.05 مولار فوسفات عازلة ، ودرجة الحموضة 7.4).

3. التحليلات البيوكيميائية

تم إجراء الكشف عن إجمالي sLHCGR في المصل والسائل المنوي والبول ووسائط الاستزراع المختلفة في عملية التحقق من الصحة باستخدام مجموعات ELISA من مختبر New Dutch Biomarker Catalyst Laboratory (NBCL) باستخدام الجسم المضاد LHR 0 29 ضد LHCGR البشري وقياس الكل من هؤلاء بشكل متكرر. اختبار ELISA كان له حد اكتشاف يبلغ 0.01 pmol / mL ومستوى أقصى يبلغ 15.55 ستة رجال من عامة السكان بمستويات sLHCGR أعلى من الحد الأعلى للاكتشاف تم تخفيف عيناتهم وإعادة قياسها ، مما يدل على مستويات تصل إلى 30 pmol / mL. تم وصف أداء منصة ELISA بالتفصيل مسبقًا [15-17].

مكملات Cistanche

أنشأنا أيضًا نوعين مختلفين من ELISA داخل الشركة ، أنشأهما فنيو المختبرات لدينا ، وتم توفير جميع الكواشف الإضافية بواسطة Origin Biomarkers Ltd ، المملكة المتحدة ، وفقًا لإعدادهم المقترح [26]. أولاً ، تم الكشف عن انتشار sLHCGR المرتبط بـ hCG باستخدام مجموعات ELISA الشطيرة مع الأجسام المضادة 5A1 0 C9 (ProMab) وأنا 0 {{2 0}} 9 0 4pun ( OriGene) موجه ضد LHCGR و hCG ، على التوالي. ثانيًا ، استخدمنا أيضًا ELISA الداخلي لتحديد عينات الكبد والكلية والشريانية والوريدية الكلية من ستة بالغين sLHCGR ، حيث استخدمنا نفس الجسم المضاد LHR 0 29 (NBCL Holland) ضد sLHCGR. تم اختبار بروتوكولين مختلفين. تم إجراء جميع قياسات sLHCGR الموصوفة في هذه الورقة باستخدام NBCL ELISA ، باستثناء مركب hCG-sLHCGR والعينات الشريانية / الوريدية من الأعضاء الموضحة أعلاه. في الأولاد الأصحاء ، تم تحليل التستوستيرون باستخدام مجموعة DPC-coated RIA (منتجات التشخيص ، لوس أنجلوس ، كاليفورنيا) مع حد اكتشاف (LOD) يبلغ 0.23 نانومول / لتر وسيرة ذاتية 8.6 في المائة باستخدام التألق المناعي الذي تم حله بمرور الوقت (دلفيا ، والاك ، توركو ، فنلندا) ، كان حد الكشف 0.20 نانومول / لتر مع سيرة ذاتية 6.4 بالمائة. في البالغين ، تم تحليل الجلوبيولين المرتبط بهرمون التستوستيرون وهرمون الجنس (SHBG) عن طريق المقايسة المناعية للتألق الكيميائي (Access ، Beckman Coulter ، الولايات المتحدة الأمريكية) مع LODs 0.35 نانومول / لتر و 0.33 نانومول / لتر ، على التوالي. تم قياس مستويات FSH و LH في الدم والبول باستخدام التألق المناعي الذي تم حله بمرور الوقت (Delfia ؛ Wallac ، توركو ، فنلندا) بحدود الكشف 0.06 و 0.05 وحدة دولية / لتر ، على التوالي ، و CV و lt ؛ كلاهما بنسبة 5 في المائة. تم إجراء اختبار Inhibin B باستخدام مقايسة مناعية إنزيم ثنائية محددة (Inhibin B genII ، Beckman Coulter ، الولايات المتحدة الأمريكية) CV <11 بالمائة. بالنسبة لـ AMH ، استخدمنا المقايسة المناعية الإنزيمية Beckman Coulter (Immunotech ، Beckman Coulter ، Marseilles ، فرنسا) وسيرة ذاتية أقل من 8 بالمائة. أخيرًا ، تم تحديد IGF1 و IGF-BP3 باستخدام مقايسة التلألؤ الكيميائي لنظام التشخيص المناعي IDS-iSYS مع السير الذاتية بنسبة 10 في المائة و 9 في المائة على التوالي. تم حساب الإستراديول الحر باستخدام التستوستيرون الثابت والحر من Mazer والذي تم حسابه باستخدام صيغة Vermeulen [27،28].

تحليل السائل المنوي

قدم الشباب الأصحاء والمشاركون البالغين المصابون بالعقم عينات السائل المنوي وحصلوا على معلومات ذاتية الإبلاغ عن مدة الامتناع عن القذف. تم إجراء تحليل السائل المنوي بواسطة فنيين مدربين كما هو موضح سابقًا [19]. تم تقدير حجم السائل المنوي بالوزن. لتقييم صلاحية الحيوانات المنوية ، تم وضع 1 0 ميكرولتر من مكررات السائل المنوي المختلطة جيدًا على الشرائح وفحصها تحت مجهر × 4 0 0x في قسم ساخن من 37 درجة مئوية. قابلة للحياة المتقدمة (منظمة الصحة العالمية الفئة أ زائد ب) ، غير قابلة للحياة التقدمية (الفئة ج) أو غير نشطة (الفئة د). تم استخدام متوسط ​​تقييمي الجدوى. لتقييم تركيز الحيوانات المنوية ، تم تخفيف العينات في محلول ماء مقطر 0.6 ميليلتر / لتر NaHCO3 و 0.4 في المائة (حجم / حجم) فورمالدهايد ثم تقييمها باستخدام مقياس الكريات الدموية Bürker-Türk وتم استخدام متوسط ​​التقييمات. تم حساب الحيوانات المنوية ذات ذيول فقط. أخيرًا ، تم تحضير المسحات وتلطيخها بصبغة عنق الرحم ، وتم تقييم شكل الحيوانات المنوية بدقة وفقًا لمعايير [29].

النشاف الغربي

تم تجانس أنسجة الخصية البشرية في محلول تحلل ، وتم تخفيفها في محلول تحميل SDS ، ثم تم تسخينها عند 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. تم تحميل العينات على 4-20 في المائة من المواد الهلامية سابقة الصب بولي أكريلاميد (BioRad ، القط # 456-8096) وتشغيلها عند 100 فولت لمدة ساعة واحدة لفصل البروتينات. لاكتشاف sLHCGR في المصل ، تمت إزالة الألبومين و IgG باستخدام مجموعة إزالة Pierce albumin / IgG (Thermo Scientific ، Waltham ، MA ، USA ، cat # 89875) قبل تحميل العينات على الجل. بعد الرحلان الكهربائي للهلام ، تم نقل البروتينات إلى أغشية البولي فينيلدين ثنائي فلوريد باستخدام نشاف مبلل (BioRad). تم إغلاق الأغشية في محلول ملحي ومحلول ملحي بنسبة 5 في المائة من الحليب الجاف منزوع الدسم لمدة ساعة واحدة ، ثم تم تحضينها طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية ولمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة باستخدام الأجسام المضادة الثانوية. تم غسل الأغشية بتلألؤ كيميائي محسّن (ركيزة Thermo Scientific Super Signal West Femto Maximum Sensitive Substrate ، Cat # 34095) وكاشف ضوئي باستخدام نظام تصوير chemiDoc MP (BioRad ، Cat # 17001402). تم استخدام ثلاثة أجسام مضادة مختلفة للكشف عن LHCGR في الأنسجة والمصل: Aviva System Biology (OASG04237) ؛ NBCL Holland ، نفس الجسم المضاد الموجود في مجموعة ELISA المصلية (LHR029) و Santa Cruz Biotechnology (دالاس ، تكساس ، الولايات المتحدة الأمريكية ، SC - 26341). تم استخدام -2 ميكروغلوبولين كعنصر تحكم في التحميل.

الكيمياء المناعية

تم إجراء الكيمياء الهيستولوجية المناعية كما هو موضح سابقًا [25]. لفترة وجيزة ، تم إصلاح المقاطع بمثبت صلب معدل ، وإزالة الشمع ، وإعادة الترطيب. تم إجراء استخراج المستضد في الأوتوكلاف الذي يحتوي على محلول استخلاص السترات (1 0 ملي مولار ، الرقم الهيدروجيني 6. 0). تم حظر بيروكسيداز داخلي المنشأ بنسبة 3 في المائة (حجم / حجم) H O في الميثانول لمدة 30 دقيقة. بين كل خطوة ، تم غسل الأقسام في TBS. تم تحضين المقاطع باستخدام 0.5 بالمائة من مصل حصان BSA لمدة 30 دقيقة ، تليها حضانة طوال الليل مع اثنين من الأجسام المضادة الأولية المختلفة لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة (LHR029 لـ WB / ELISA ، Santa Cruz Biotechnology SC - 25828). تم تحضين المقاطع بأجسام مضادة ثانوية لمدة 30 دقيقة. تم تصور الصور باستخدام aminoethyl carbazole (AEC ، Invitrogen ، Life Technologies / Thermo Fisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية). كانت الضوابط السلبية بدون الأجسام المضادة الأولية. لم تكن ملطخة أي من الضوابط السلبية. تم إجراء عملية الطلاء المضاد باستخدام الهيماتوكسيلين من ماير وتم إجراء التركيب باستخدام Aquatex. تم تقييم الأقسام باستخدام مجهر Nikon Microphot-FXA (شركة Nikon ، ملفيل ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم إجراء التحليل النهائي باستخدام برنامج NDPview الإصدار 1.2.36 (Hamamatsu Photonics ، مدينة Iwata ، اليابان.

فوائد استخراج Cistanche للكلى

مراجع

1. Dufau ، ML مستقبل الهرمون الملوتن. Annu. القس فيسيول. 1998، 60، 461–496.

2. Rao ، السيرة الذاتية الخصائص التفاضلية لموجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية وهرمون اللوتين البشري المرتبط بأغشية البلازما في الأبقار الصفراء. اكتا اندوكرينول. 1979 ، 90 ، 696-710.

3. Odell، WD؛ جريفين ، ج. إفراز نابض من موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية في البالغين الطبيعيين. إنجل. جيه ميد. 1987 ، 317 ، 1688–1691.

4. بانغ ، حزب العدالة والتنمية ؛ نوردكاب ، إل. ألمستروب ، ك. بريسكورن ، إل. بيترسن ، JH ؛ Rajpert-De Meyts ، E. ؛ أندرسون ، إيه. إم. جول ، أ. Jørgensen و N. Dynamic GnRH و hCG: إنشاء مستويات مرجعية تشخيصية جديدة. يورو. J. إندوكرينول. 2017 ، 176 ، 379-391.

5. تشانغ ، FP ؛ بوتانين ، م. ويلبيرتز ، ياء ؛ Huhtaniemi ، I. التطور الجنسي الطبيعي قبل الولادة ولكن تم إيقاف التطور الجنسي بعد الولادة من الفئران بالضربة القاضية لمستقبلات هرمون اللوتين (LuRKO). مول. إندوكرينول. 2001 ، 15 ، 172–183.

6. Bruysters، M .؛ كريستين مايتري ، س. Verhoef-Post ، M. ؛ سلطان ، سي. اوجير ، ياء ؛ Faugeron، I.؛ لارو ، إل. لومبروسو ، إس. ثمين ، APN ؛ Bouchard ، P. طفرة لصق جديدة لمستقبل LH هي المسؤولة عن قصور الغدد التناسلية الذكرية مع إنتاج الحيوانات المنوية غير الطبيعي في الجسم ، والعقم مع الدورات المنتظمة في الأخت المصابة. همم. ريبرود. 2008 ، 23 ، 1917-1923.

7. لاترونيكو ، AC ؛ Arnhold، IJP Inactivating mutating of the human luteinizing hormone receptor in كلا الجنسين. سيمين. ريبرود. ميد. 2012 ، 30 ، 382-386.

8. سيموني ، م. توتلمان ، ف. ميشيل ، سي. بوكنفيلد ، واي. Nieschlag ، E. ؛ جرومول ، ي. فارماكوجينيت. جينوم. 2008 ، 18 ، 193-200.

9. أسكولي ، م. فانيلي ، ف. Segaloff ، DL مستقبلات اللوتروبين / choriogonadotropin ، منظور 2002. إندوكر. القس 2002 ، 23 ، 141-174.

10- تينا - سمبير م. تشانغ ، ف. Huhtaniemi ، I. التعبير المستمر عن شكل مبتور من حمض الريبونوكليك لمستقبل الهرمون الملوتن في خصية الجرذان بعد تدمير خلايا Leydig الانتقائي بواسطة سلفونات الإيثيلين الميثان. طب الغدد الصماء 1994 ، 135 ، 1018-1024.

11. فلوهر ، H. بيشوف إسلامي ، د. كرينزر ، إس. ليخت ، ص. بيشوف ، ص. Zygmunt ، M. يحفز موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية المصفوفة metalloproteinases -2 و -9 في الخلايا الأرومية الخلوية ويقلل من مثبطات الأنسجة للبروتينات المعدنية -1 ، -2 ، و -3 في decidualized خلايا انسجة بطانة الرحم. سماد. تعقيم. 2008 ، 90 ، 1390-1395.

12. ليخت ، ص. فلوهر ، H. Neuwinger ، J. ؛ Wallwiener ، د. Wildt، L. هل تشارك الغدد التناسلية المشيمية البشرية بشكل مباشر في تنظيم الانغراس البشري؟ مول. خلية. إندوكرينول. 2007 ، 269 ، 85-92.

13. Li، Y.-X .؛ قوه ، إكس. جولابا ، تي. مينون ، ب. ؛ مينون ، KMJ SREBP يلعب دورًا تنظيميًا في التعبير عن مستقبلات LH / hCG mRNA في خلايا Granulosa-Lutein البشرية. J. كلين. إندوكرينول. متعب. 2019.

14. مينون ، KMJ ؛ مينون ، ب. ؛ وانغ ، إل. جولابا ، تي. Harada ، M. التنظيم الجزيئي لتعبير مستقبلات الغدد التناسلية: العلاقة مع استقلاب الستيرول. مول. خلية. إندوكرينول. 2010 ، 329 ، 26-32.

15. الغرف ، AE ؛ جريفين ، سي ؛ نايف ، سا. ميلز ، أنا. ميلز ، نحن ؛ سينجيلاكي ، أ. Nicolaides ، KH ؛ Banerjee ، S. ELISAs الكمي لمركب LHCGR و hCG-LHCGR القابل للذوبان في المصل: التشخيصات المحتملة في فحص الحمل في الثلث الأول من الحمل للإملاص ، ومتلازمة داون ، والولادة المبكرة ، وتسمم الحمل. ريبرود. بيول. إندوكرينول. 2012 ، 10 ، 113.

16. الدوائر ، AE ؛ ناييني ، كي بي ؛ ميلز ، نحن ؛ لوكوود ، جنرال موتورز ؛ Banerjee، S. قد يحدد مستقبل LH / hCG المتداول (LHCGR) مرضى التلقيح الاصطناعي قبل العلاج المعرضين لخطر الإصابة بمتلازمة فرط تحفيز المبيض وسوء الزراعة. ريبرود. بيول. إندوكرينول. 2011 ، 9 ، 161.

17. الغرف ، AE ؛ ستانلي ، PF ؛ رانديفا ، هـ. Banerjee ، S. إطلاق بوساطة Microvesicle لمستقبلات LH / hCG القابلة للذوبان (LHCGR) من الخلايا المنقولة وإكسبلانتس المشيمة. ريبرود. بيول. إندوكرينول. 2011 ، 9 ، 64.

18. Gao، HJ؛ تشين ، YJ ؛ زو ، د. شياو ، مم ؛ لي ، واي. قوه ، ح. تشانغ ، ن. Chen ، RB التحليل الكمي للبروتينات لفحص الإنتاجية العالية للبروتينات السكرية التفاضلية في مصل سرطان الخلايا الكبدية. بيول السرطان. ميد. 2015 ، 12 ، 246-254.

19. بريسكورن ، إل. نوردكاب ، إل. بانغ ، أيه كيه ؛ كراوس ، م. هولمبو ، سا ؛ إيجيبيرج بالم ، DL ؛ الجناح ، SB ؛ موروب ، إن. كارلسن ، إي. جونسن ، الأمم المتحدة ؛ وآخرون. يظل متوسط ​​عدد الحيوانات المنوية دون تغيير على الرغم من انخفاض تدخين الأم: نتائج دراسة مقطعية كبيرة مع تحقيقات سنوية على مدى 21 عامًا. همم. ريبرود. 2018 ، 33 ، 998-1008.

20. Sørensen، K .؛ Aksglaede ، L. بيترسن ، JH ؛ جول ، أ. التغييرات الأخيرة في توقيت البلوغ لدى الأولاد الدنماركيين الأصحاء: الارتباط بمؤشر كتلة الجسم. J. كلين. إندوكرينول. متعب. 2010 ، 95 ، 263-270.

21. بلومبيرج جنسن ، م. Lawaetz ، JG ؛ بيترسن ، JH ؛ جول ، أ. Jørgensen، N. آثار مكملات فيتامين د على جودة السائل المنوي والهرمونات الإنجابية ومعدل المواليد الحي: تجربة سريرية عشوائية. J. كلين. إندوكرينول. متعب. 2018 ، 103 ، 870-881.

22. بلومبيرج جنسن ، م. جيرنر لويتز ، ياء ؛ أندرسون ، إيه. إم. بيترسن ، JH ؛ نوردكاب ، إل. بانغ ، أيه كيه ؛ اكبوم ، ص. جونسن ، الأمم المتحدة ؛ Prætorius ، L. ؛ Lundstrøm ، P. ؛ وآخرون. يرتبط نقص فيتامين د وانخفاض الكالسيوم المتأين بجودة السائل المنوي ومستويات الستيرويد الجنسي لدى الرجال المصابين بالعقم. همم. ريبرود. 2016 ، 31 ، 1875-1885.

23. Lorenzen، M .؛ نيلسن ، جي. أندريسن ، سي إتش ؛ جول ، أ. توفت ، BG ؛ Rajpert-De Meyts ، E. ؛ دوجارد ، ج. بلومبيرج جنسن ، M. يتم التعبير عن مستقبلات الهرمون اللوتيني في أورام خلايا جرثومة الخصية: الآثار المحتملة لنمو الورم والتنبؤ به. السرطان 2020 ، 12 ، 1358.

24. إلدروب ، إي. Theilade ، S. لورينزن ، م. أندريسن ، سي إتش ؛ بولسن ، KH ؛ نيلسن ، جي. هانسن ، د. الفاسي د. بيرج ، جو ؛ باجي ، ص. وآخرون. فرط كالسيوم الدم بعد حقن الزيوت التجميلية: كشف المسببات ، والتسبب المرضي ، والخطورة. J. بون مينر. الدقة. 2020 ، 36 ، 322-333.

25. Jørgensen، A .؛ ماكدونالد ، ياء ؛ نيلسن ، جي. كيلكوين ، ك. بيرلمان ، إس. لوندفال ، إل. لانغوف ثيسين ، إل. جول هير ، ك. فريدريكسن ، هـ. أندرسون ، إيه. إم. وآخرون. ينظم التشوير العقدي تطور الخلايا الجرثومية وتكوين الحبال المنوية في خصية الجنين البشري. ممثل الخلية .2018، 25، 1924–1937.e4.

26. Chambers، AE؛ فيربيرن ، سي ؛ Gaudoin ، M. ؛ المطاحن ، دبليو. وو ، أنا. بانديان ، ر. ستانزيك ، منطقة حرة ؛ تشونغ ، ك. Banerjee، S. Soluble LH-HCG receptor and oestradiol كمتنبئين للحمل والولادة الحية في التلقيح الاصطناعي. ريبرود. بيوميد. عبر الإنترنت 2019 ، 38 ، 159–168.

27- فيرمولين ، أ. فيردونك ، إل. كوفمان ، جي إم تقييم نقدي للطرق البسيطة لتقدير هرمون التستوستيرون الحر في مصل الدم. J. كلين. إندوكرينول. متعب. 1999، 84، 3666–3672.

28. Mazer، NA طريقة جداول بيانات جديدة لحساب تركيزات المصل الحر من التستوستيرون ، ديهدروتستوستيرون ، استراديول ، الإسترون ، والكورتيزول: مع أمثلة توضيحية من السكان الذكور والإناث. المنشطات 2009 ، 74 ، 512-519.

29- مينكفيلد ، ر. ستاندر ، FS ؛ كوتز ، تي جيه ؛ كروجر ، تي إف ؛ van Zyl، JA تقييم الخصائص المورفولوجية للحيوانات المنوية البشرية وفقًا لمعايير أكثر صرامة. همم. ريبرود. 1990 ، 5 ، 586-592.

لي جويل مورتنسن¹، ميت لورينزن¹، آن يورجنسن²، جاكوب ألبريثسن²، نيلز يورجنسن²، سورين مولر^3,4آنا ماريا أندرسون²، أندرس جول^2,4ومارتن بلومبيرج جنسن^1,5

1. مجموعة أمراض الغدد الصماء الهيكلية والمعدنية والغدد التناسلية ، قسم النمو والتكاثر بالجامعة ، ريجشوسبيتالت ، 2100 كوبنهاغن ، الدنمارك ؛ li.juel.mortensen@regionh.dk (LJM) ، mette.lorenzen.01@regionh.dk (ML)

2. قسم النمو والتكاثر والمركز الدولي للبحوث والتدريب على البحث في اضطراب الغدد الصماء للتكاثر الذكوري وصحة الطفل (EDMaRC) ، ريجشوسبيتالت ، جامعة كوبنهاغن ، بلغدامسفي 9 ، 2100 كوبنهاغن ، الدنمارك ؛ Anne.Joergensen.02@regionh.dk (AJ) ؛ Jakob.Christian.Albrethsen@regionh.dk (JA) ، Niels.Joergensen@regionh.dk (نيوجيرسي) ، آنا - Maria.Andersson@regionh.dk (A.-MA) ؛ Anders.Juul@regionh.dk (AJ)

3. مركز التصوير الوظيفي والتشخيصي والبحث ، قسم الفسيولوجيا السريرية والطب النووي 260 ، مستشفى هفيدوفر ، 2650 كوبنهاغن ، الدنمارك ؛ Soeren.Moeller@regionh.dk

4. قسم الطب السريري ، كلية العلوم الصحية ، جامعة كوبنهاغن ، 2200 كوبنهاغن ، الدنمارك

5. قسم أبحاث العظام والمعادن ، كلية طب الأسنان بجامعة هارفارد / كلية الطب بجامعة هارفارد ، بوسطن ، ماساتشوستس 02115 ، الولايات المتحدة الأمريكية