الجزء: فيروس SARS-CoV -2 تسبب العدوى في نموذج الهامستر السوري التهابًا بالإضافة إلى عدم انتظام الإنترفيرون من النوع الأول في كل من الأنسجة التنفسية وغير التنفسية بما في ذلك القلب والكلى

لمزيد من المعلومات: ali.ma@wecistanche.com

ماجين إلين فرانسيس وأونا جونسين وآخرون.

انقر هنا للجزء Ⅰ

الملخص

COVID -19(مرض فيروس كورونا 2019) الناجم عنSARS-CoV -2(فيروس كورونا 2 المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة) هو مرض يصيب العديد من أجهزة الأعضاء. نموذج يلتقط جميع الأعراض السريرية لـCOVID -19، وكذلك المرض طويل المدى. لقد حققنا في استجابات المضيف المرتبطة بالعدوى في العديد من أجهزة الأعضاء الرئيسية بما في ذلك الجهاز التنفسي والقلب والكلىبعد، بعدماSARS-CoV -2الإصابة في الهامستر السوري. وجدنا زيادات كبيرة في السيتوكينات الالتهابية (IL -6 ، IL -1 بيتا ، و TNF) والنوع الثاني interferons بينما تم تثبيط الانترفيرون من النوع الأول. أشار فحص الأنسجة خارج الرئة إلى وجود التهاب فيالكلىوالكبد والقلب الذي يفتقر أيضًا إلى النوع الأول من الإنترفيرون. من الناحية النسيجية ، كان للقلب دليل على التهاب عضلة القلب و microthrombi بينماالكلىكان لديه التهاب أنبوبي. تعطي هذه النتائج نظرة ثاقبة على المرض متعدد الأعضاء الذي يعاني منه الأشخاص المصابونCOVID -19وربما المرض لفترات طويلة في الأشخاص الذين يعانون من عقابيل ما بعد الحادةSARS-CoV -2(PASC). يمكن أن تؤثر عدوى فيروس كورونا 2) على العديد من أجهزة الأعضاء بما في ذلك الجهاز التنفسي والمسالك البولية والجهاز العصبي ونظام القلب والأوعية الدموية. لدراسة هذا المرض بشكل مناسب وتقييم العلاجات ، وهو نموذج يلتقط جميع الأعراض السريرية لـCOVID -19مطلوب. من المعروف أن الضرر الذي يحدث بعد الإصابة الفيروسية يرجع غالبًا إلى الاستجابات المناعية للمضيف. لذلك ، قمنا هنا بالتحقيق في كيفية تنظيم استجابات المضيف المناعي في العديد من أجهزة الأعضاء الرئيسية بما في ذلك الجهاز التنفسي والقلب والجهاز التنفسي.الكلىبعد، بعدماSARS-CoV -2الإصابة في الهامستر السوري. وجدنا زيادات كبيرة في السيتوكينات الالتهابية (IL -6 ، IL -1 بيتا ، و TNF) ، بالإضافة إلى السيتوكينات المضادة للفيروسات ، المسماة النوع الأول من الإنترفيرون. ومن المثير للاهتمام أن النوع الأول من الإنترفيرون للاستجابة المضادة للفيروسات قد تم تثبيطه في الجهاز التنفسي. أشار فحص الأنسجة خارج الرئة إلى وجود التهاب فيالكلىوالكبد والقلب الذي يفتقر أيضًا إلى النوع الأول من الإنترفيرون. من الناحية النسيجية ، كان للقلب دليل على التهاب عضلة القلب و microthrombi بينماالكلىكان لديه التهاب أنبوبي. تعطي هذه النتائج نظرة ثاقبة على المرض متعدد الأعضاء الذي يعاني منه الأشخاص المصابونCOVID -19وربما المرض لفترات طويلة في الأشخاص الذين يعانون من عقابيل ما بعد الحادةSARS-CoV -2(PASC).

انقر فوق Cistanche يستخدم لوظيفة الكلى

ينتج عن عدوى SARS-CoV -2 التهاب كبير أو تنظيم مناعي في القلب والعقدة الليمفاوية والطحال بالإضافة إلى آثار الحمضات في الأمعاء الغليظة

تم أيضًا تقييم العلامات المناعية للالتهاب والمناعة التكيفية والاستجابات المضادة للفيروسات في الأنسجة غير التنفسية جنبًا إلى جنب مع التشريح المرضي للأنسجة. لقد بحثنا في العقدة الليمفاوية المنصفية والقلبالكلىوالطحال والكبد والأمعاء الغليظة لتنظيم الأهداف المناعية المصنفة على النحو الوارد أعلاه حسب النوع الأول IFN ، والنوع II / استجابة IFN العامة ، والوسطاء الفطريين / المتكيفين (الشكل 6) وكذلك لأمراض المناعة (الشكلان 7 و S4). إذا اقترح التقييم الأولي لعلم التشريح المرضي مشاركة آليات مناعية محددة (S4 الشكل) ، فقد تم إجراء مسح عالي الدقة للحصول على مزيد من المعلومات بعمق (الشكل 7). لم يكن من الممكن استعادة العقد الليمفاوية المنصفية في اليوم 15. يمكن العثور على الدلالات المقابلة للتعبير الجيني في جدول S2. استجابات IFN من النوع الأول والنوع الثاني في جميع الأعضاء خارج الرئة باستثناء الكبد لها ملامح تنظيم مماثلة لتلك الخاصة بالرئتين والقرينات الأنفية (الشكل 6). تميز تنظيم الجينات بانخفاض استجابات النوع الأول وزيادة استجابات النوع الثاني. انخفض STAT2 بشكل ملحوظ في العقدة الليمفاوية المنصفية ،الكلىوالطحال والأمعاء الغليظة. كان للقلب انخفاض كبير ومستمر في IRF1 بينما انخفض الأمعاء الغليظة في IFN-beta (الشكل 6). على العكس من ذلك ، لوحظت زيادات ملحوظة في IFN-gamma في العقدة الليمفاوية المنصفية والكلىوبدرجة أقل في القلب والطحال. تمت زيادة CXCL1 0 ، الجاذب الكيميائي للخلايا التائية ، إلى مستويات عالية في الطحال والكبد والعقد الليمفاوية المنصفية حيث كان التنظيم ثنائي الطور في العقدة الليمفاوية (الشكل 6). شوهد تنظيم الجينات الوسيطة الفطرية / التكيفية في الطحال والعقدة الليمفاوية لجميع الأهداف المناعية التي تم فحصها باستثناء TGF-beta و IL -5 R و CCR3 التي لم يتم تنظيمها بشكل فعال. على وجه التحديد ، تنظيم مهم لـ CD3 و CD4 و CD8A و IL -2 و IL -21 و IL -10 و IL -4 و IL -5 و IL {{13 }} و IL -12 في هذه الأعضاء المناعية الثانوية. كان تنظيم الوسطاء المناعي الفطري / التكيفي مثيرًا للاهتمام بشكل خاص في القلب حيث تم زيادة IL -2 و IL -10 و IL -4 و IL -5 100 مرة عن خط الأساس . تم الكشف عن أعلى معدل انتفاخ في السيتوكينات الالتهابية في القلب ، تليها الكلية ، والكبد ، والعقدة الليمفاوية المنصفية. في القلب ، زاد IL -12 بشكل ملحوظ مبكرًا وظل مرتفعًا مع TNF في اليوم 15 pi. تم إحداث IL -6 و IL -1 بيتا بشكل عابر في أنسجة القلب في اليومين الخامس والثامن (الشكل 6). لوحظت تغيرات كبيرة في القلب من خلال التحليل النسيجي (S4 الشكل). وجد التصوير عالي الدقة دليلاً على وجود ميكروثرومبي (الشكل 7 أ ، أسهم بيضاء) وكذلك التهاب عضلة القلب (الشكل 7 ب ، أسهم بيضاء) في القلب. تم تنظيم كل من CD14 و IL -1 beta و TNF مبكرًا في الكلية ولكنها انخفضت بحلول اليوم 8 إلى 12 pi (الشكل 6) والتي تزامنت مع تسلل الخلايا الالتهابية إلى الكلى وربما إصابة الكلى الحادة أو الإصابة الأنبوبية (المشار إليها بواسطة الأسهم البيضاء ، الشكل 7 ج). تم الحفاظ على تعبير IL -6 في الكبد حيث تمت زيادة IL -1 بيتا أيضًا في نقاط زمنية متأخرة. كان للعقدة الليمفاوية المنصفية زيادة ثنائية الطور في IL -12 مع زيادات عابرة في IL -6 و TNF إلى أضعاف مستويات 12 و 8 و 11 على التوالي. كان للأمعاء الغليظة تنظيم كبير لـ IL -5 و IL -5 R و CCR3 مع تسلل الحمضات (الشكل 7 د) ، ولكن الحد الأدنى من التنظيم لأي وسطاء فطري / متكيف. لمرافقة تحليل الأعضاء خارج الرئة ، قمنا بتحليل كيمياء الدم للحيوانات على مدار الوقت لتقييم اختلال وظائف الأعضاء (الشكل S5). قمنا بتحليل الجلوكوز ، الألبومين ، الفوسفاتيز القلوي ، ألانين ترانسفيراز ، نيتروجين اليوريا في الدم ، إجمالي البيليروبين ، والبروتين الكلي كدلالة على وظائف الكبد [27]. تم تحليل الكالسيوم ، البوتاسيوم ، الألبومين ، الأميليز ، نيتروجين اليوريا في الدم ، والبروتين الكلي لتقييم الكلى [27]. تم تقييم صحة الجهاز الهضمي من خلال الصوديوم والبوتاسيوم والفوسفاتيز القلوي [27]. تم قياس وظيفة القلب باستخدام الصوديوم والبوتاسيوم والألانين ترانسفيراز [27]. تم تقييم زيادة الجلوبيولين كعلامة على تحفيز المستضد [27]. من بين الجزيئات الـ 14 التي تم فحصها ، زادت نسبة الأميليز والجلوكوز فقط بشكل معنوي في الحيوانات المصابة عند مقارنتها بالمجموعة الضابطة ، وبلغت ذروتها عند 1700 وحدة / لتر و 280 مجم / ديسيلتر ، على التوالي ، في اليوم 8 باي. بالإضافة إلى ذلك ، كانت تغيرات تركيز البوتاسيوم ([K plus]) هي الأكثر وضوحًا ويبدو أنها مرتبطة بالوقت في الغالب على مدار فترة الدراسة حيث كان لدى معظم الأفراد زيادة في [K plus] مع أكبر تغيير لوحظ في اليوم الخامس عشر. في الألبومين كان ملحوظًا أيضًا ولكنه معتدل في العديد من الحيوانات. زاد تركيز البروتين الكلي بشكل طفيف في معظم المواد ، ولكن التغيير طفيف نسبيًا ومن المحتمل أن يكون غير مهم سريريًا. بلغت علامات الكبد الأخرى ذروتها في وقت لاحق من الدورة الزمنية ، بما في ذلك الجلوكوز (280 مجم / ديسيلتر) في اليوم الثامن ، والفوسفاتيز القلوي (ALP) في اليوم 12 (3 وحدات / لتر) ، ونيتروجين اليوريا في الدم (BUN) (22 مجم / ديسيلتر) في اليوم الخامس عشر. Alanine transferase (ALT) ، على الرغم من بلوغ ذروته في اليوم الثاني ، كان مرتفعًا في اليوم 12 عند أقل بقليل من 100 U / L مما يشير إلى تلف الكبد المحتمل. وصلت علامات الكلى إلى ذروتها أيضًا في وقت لاحق ، في اليوم الثامن للأميلاز (1700 وحدة / لتر) ، واليوم 15 للبوتاسيوم و BUN (12 و 22 مجم / ديسيلتر ، على التوالي). كان لدى BUN مع استثناءات قليلة زيادة محتملة في التركيز تعتمد على الوقت. على النقيض من ذلك ، بلغ الكالسيوم ذروته في اليوم الثاني عند 2.6 مجم / ديسيلتر ولكنه انخفض في النطاقات المرجعية. أظهرت علامات صحة الجهاز الهضمي والقلب مثل الصوديوم الحد الأدنى من التنظيم ، بينما زاد [K plus] خطيًا نسبيًا طوال فترة العدوى ، وبلغ ذروته في اليوم 15 (12 مجم / ديسيلتر). كان ALP (علامة الجهاز الهضمي) مرتفعًا في الأيام 5 و 8 عند 3u / L وزاد ALT (علامة قلبية) في الهامستر المصاب مقارنة بالهامستر غير المصاب في الأيام 2 و 8 و 12 عند 75-100 وحدة / لتر ولكن لم تكن الاختلافات كبيرة. أخيرًا ، بلغ الجلوبيولين ذروته في اليوم الثاني عند 0.6 جم / ديسيلتر وانخفض نسبيًا على مدار الوقت. مجتمعة ، يشير تحليل الدم إلى حدوث بعض خلل التنظيم في الأعضاء خارج الرئة ، بالإضافة إلى تحفيز المستضد استجابةً لـSARS-CoV -2.

الشكل 6. عدوى السارس - كوف -2 في الهامستر تؤدي إلى زيادات في الجينات المرتبطة بالالتهابات والجينات الوسيطة المناعية في أعضاء منتقاة خارج الرئة مما قد يشير إلى التهاب عضلة القلب ، وتطور المناعة التكيفية ، وتسلل الحمضات إلى الأمعاء الغليظة.تم إجراء qRT-PCR على الحمض النووي الريبي المستخرج من العقدة الليمفاوية المنصفية (M) والقلب والكلى والطحال والكبد والأمعاء الغليظة منSARS-CoV -2تلقيح الهامستر. تم تقييم العينات من النوع الأول المتعلق بالاستجابة للإنترفيرون (IFN-beta و STAT2 و IRF1 و IRF3 و TLR3) ، والنوع الثاني المتعلق بالاستجابة للإنترفيرون (IFN-gamma و IRF2 و STAT1 و CXCL1 0) والفطري / الوسيط التكيفي (CD3 ، CD4 ، CD8 ، CD19 ، IL -2 ، TGF-beta ، IL -21 ، IL -10 ، IL -4 ، IL -5 ، IL -5 R، IL -13، IL -12، CD14، CCR3، PKR، CCL20، CCL22، IL -1 beta، IL -6، TNF) الاستفادة من بادئات PCR الخاصة بتسلسل الهامستر (الجدول 1). تم حساب تغيير الطية عبر ΔΔCt مقابل خط الأساس (اليوم 0) مع BACT باعتباره جين التدبير المنزلي. N هي 3 لجميع النقاط الزمنية.

مناقشة

في الأصلSARS-CoV -2كان يعتقد أن العدوى تسبب بشكل رئيسي أمراض الجهاز التنفسي ، ولكن من الواضح الآن ذلكCOVID -19هو مرض يصيب العديد من الوجوه ويؤثر على العديد من أجهزة الأعضاء [25 ، 26]. لاكتساب فهم أفضل لأصل المرض وعدد لا يحصى من الأعراض السريرية التي يعاني منها البشر ، قمنا بفحص أمراض المناعة عبر الجهاز التنفسي وكذلك الأعضاء غير التنفسية أثناءSARS-CoV -2الإصابة في الهامستر السوري. الإصابة بـ 105 TCID50 منSARS-CoV -2أدى إلى مرض سريري خفيف إلى متوسط. تم احتواء الفيروس المعدي بشكل رئيسي في الجهاز التنفسي على الرغم من وجود الحمض النووي الريبي الفيروسي في جميع الأنسجة التي تم تقييمها. تحديد ملامح استجابة المضيف في الجهاز التنفسي تثبيط استجابة IFN من النوع الأول مع زيادة مصاحبة في النوع الثاني IFNs ، السيتوكينات الالتهابية ، السيتوكينات الفطرية والتكيفية. كما وجد التحقيق في الأعضاء خارج الرئة مظهرًا مشابهًا لإشارات النوع الأول والثاني من الإنترفيرون. ومع ذلك ، تم تحديد التنظيم المناعي الخاص بالأنسجة أيضًا. على وجه التحديد ، تم تحديد تعبير كبير عن الوسطاء الفطريين والتكيفين في القلب والطحال. منذ العلاج المضاد للفيروسات أثناءSARS-CoV -2العدوى تكون فعالة فقط خلال نافذة قصيرة [28] شديدةCOVID -19يُعتقد أنه نتيجة لاستجابة مناعية غير منظمة [29]. يعد فهم إمراض الجهاز المناعي أمرًا ضروريًا لتحديد الأهداف العلاجية وعلاج الأعراض غير التنفسية الحادة المرتبطة بهاCOVID -19بما في ذلك خفقان القلب أو الصداع النصفي والحالات التي تدوم طويلاً في مرحلة الشفاء مثل العواقب الحادة اللاحقةSARS-CoV -2العدوى (PASC) ، ويشار إليها أيضًا باسم COVID الطويل [30].

الشكل 7. بعض الأعضاء خارج الرئة لها أمراض مميزة بعد عدوى السارس -2 بدليل على تخثر الدم والتهاب عضلة القلب في القلب ، وتلف أنبوبي في الكلى ، وتسلل الحمضات في الأمعاء الغليظة.تم جمع القلب والكلى والأمعاء الغليظة من كل حيوان عند التشريح وتثبيته في 10 في المائة من الفورمالين قبل إدخال كتلة البارافين. كانت الأنسجة ملطخة H&E. أظهرت أنسجة القلب ميكروثرومبي (أسهم بيضاء) على مدار عدة أيام (أ) ، وكذلك التهاب عضلة القلب في اليوم الثامن (السهم الأبيض) (ب). أصيبت الكلية بإصابة حادة / إصابة أنبوبية (أسهم بيضاء) (ج). الأمعاء الغليظة لديها تسلل الحمضات (الأسهم البيضاء) (د). تم تصور الأنسجة الملطخة وتصويرها باستخدام الماسح الضوئي للشرائح Aperio ScanScope XT. الصور المعروضة تمثل 3 حيوانات لكل مجموعة ، لكل نقطة زمنية.

الموقع الرئيسي للعدوى التي تؤثر على انتقالSARS-CoV -2في الناس هو الجهاز التنفسي. لذلك ، كان التركيز الأولي لتحقيقنا هو الجهاز التنفسي ، بما في ذلك الاستجابات المناعية وعلم الأمراض المناعي. لقد أظهرنا هنا كلاً من عدوى الجهاز التنفسي العلوي والسفلي والأمراض المصاحبة بعد عدوى السارس -2 في الهامستر السوري. أدت العدوى الفيروسية في الرئة إلى أمراض خطيرة تتميز بتسلل الخلايا الالتهابية مما أدى إلى حدوث التهاب قصبي رئوي بحلول اليوم الخامس ونزيف في اليوم الثامن. وكانت هذه النتائج متوافقة مع عدوى السارس -2 في دراسات الهامستر السورية السابقة [19 ، 20،31،32] ونماذج حيوانية أكبر بما في ذلك قرود المكاك الريسوسية [33] بالإضافة إلى الالتهاب الرئوي الحاد الذي تم تحديده في بعض البشرCOVID -19المرضى [34-36]. اتساق البيانات يدعم استخدام الهامستر للنمذجةSARS-CoV -2عدوى أمراض الجهاز التنفسي البشري وما يرتبط بها من أمراض المناعة. لاحظنا أيضًا أن بعض حيوانات الهامستر تعرضت لخسارة أكبر في الوزن والتي ارتبطت بزيادة الحمل الفيروسي. قد يكون الوزن التفاضلي ناتجًا عن الغريزة الطبيعية للهامستر لإخفاء الطعام داخل خدودهم ، أو التلقيح غير الفعال ، أو أن هناك خصائص مضيفة متأصلة قد تؤدي إلى فقدان الوزن التفاضلي والتكاثر الفيروسي في هذا المخزون الحيواني. نظرًا لأنه تم فحص جميع الحيوانات لتخزين الطعام في أفواههم وكانت جميع الحيوانات إيجابية بالنسبة لـSARS-CoV -2فيروس ، لا نشعر أن هذه النتيجة هي انعكاس إما لأخطاء الوزن أو سوء التلقيح. هناك حاجة إلى مزيد من العمل لتحديد ما إذا كانت هناك اختلافات جينية داخل الهامستر السوري من نهر تشارلز. سيوفر فهم نقاء المخزون الحيواني معلومات مهمة لاستخدام هذه الحيوانات في الدراسات العلاجية لـ SARS-CoV -2 وإذا كان من الممكن الاستفادة من هذه المعرفة لتطوير هامستر أكثر خطورةSARS-CoV -2نموذج. في دراستنا ، حددنا أيضًا زيادة تنظيم الجينات الالتهابية الرئيسية ، مثل IL -6 و TNF في الرئتين والقرينات الأنفية مما يؤكد النمذجة المناعية السابقة في الهامستر [32،37]. هذه النتائج مهمة حيث ثبت أن علامات الالتهاب هذه تنبئ بمرض حاد من خلال تقييم الدم لدى البشر [38-42]. تم إجراء المزيد من التحليل المتعمق لاستجابة المضيف لفيروس السارس {6}} في الأنسجة التنفسية للهامستر باستخدام تحليل تسلسل النسخ [43،44]. قام هوغلاند وزملاؤه بتقييم رئتيSARS-CoV -2الهامستر المصاب لتنظيم الجينات المناعية للمضيف ووجد أن هناك تنظيمًا بارزًا لإنترلوكين -6 و TNF و IL -1 بيتا [43] بما يتوافق مع نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). في دراسة أخرى ، كشف تحليل التسلسل أحادي الخلية عن استجابة بارزة للخلايا التائية بما في ذلك تنظيم IFN-gamma و IL -2 [44] ، وهما علامتان لاحظنا أنهما يتم التعبير عنها بشكل كبير في الرئتين. بالإضافة إلى ذلك ، كشفت تحليلاتنا للرئتين عن انتظام في علامات الخلايا التائية CD3 و CD4 و CD8A. الأهم من ذلك ، أن تحليل qRT-PCR الذي أبلغنا عنه في دراستنا الحالية يتوافق مع هذه الدراسات الأخرى وبالتالي التحقق من صحة استخدام qRT-PCR كطريقة للتقييم السريع لفعالية اللقاحات والعلاجات التي يتم تقييمها في الهامستر SARS-CoV {{ 13}}. توفر ملفاتنا الاحترافية qRT-PCR مؤشرات حيوية مستهدفة يمكن استخدامها بسهولة. كانت دراستنا وتفسيرنا محدودة من خلال وجود تحليل الإمراضية فقط. يجب أن تستخدم الدراسات المستقبلية مجموعة أهدافنا المناعية لاستخدامها في اللقاحات والدراسات العلاجية.

تعتبر الاستجابة المضادة للفيروسات ضرورية للسيطرة الأولية على الفيروس عن طريق التدمير النشط لتكاثر الفيروس وتحفيز المناعة للحد من الانتشار إلى الخلايا الأخرى. بعد التعرف على وجود فيروس أو مستضدات فيروسية ، يعد تحريض الإنترفيرون أمرًا أساسيًا لإنشاء حالة مضادة للميكروبات داخل الخلايا حيث يكون التوازن بين الإنترفيرون والسيتوكينات الفطرية الأخرى أمرًا بالغ الأهمية للعمل الفعال [45]. في الآونة الأخيرة ، ارتبط تثبيط النوع الأول من الإنترفيرون (IFN-alpha و IFN-beta) بمرض شديد فيCOVID -19مما يشير إلى أن الفيروس قادر على منع المناعة المضادة للفيروسات مما يؤدي إلى زيادة الإمراض [14،46،47]. في دراستنا ، وجدنا أن الهامستر مصابSARS-CoV -2لديك استجابة نموذجية من النوع II IFN. في المقابل ، يتم تقليل استجابة النوع IIFN ، كما يتضح من انخفاض التعبير الجيني IFN-beta وزيادة التعبير الجيني IRF2 ، وهو مضاد من النوع الأول. أظهرت العديد من الدراسات ضعف استجابات IFN من النوع الأول بعد عدوى SARS-CoV -2 في المختبر [14 ، 48-51]. لم يتم تحليل خلل التنظيم IFN الذي أبلغنا عنه هنا في النسيج التنفسي للبشر المصابين بشدةCOVID -19، لكن التحليلات المناعية للدم أظهرت نتائج مماثلة [14،46،47،52]. على الرغم من أن الآليات التي تثبط استجابات الانترفيرون من النوع الأول لم يتم توضيحها بشكل كامل ، فقد تورطت العوامل الفيروسية والمضيف في هذا الخلل في التنظيم [53 ، 54].

عدم تنظيم استجابة مضاد للفيروسات هو استراتيجية تستخدمها الفيروسات للتهرب من مناعة المضيف. تشير التحقيقات السابقة لاستجابة المضيف لـ SARS-CoV (فيروس كورونا المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة 1) وعدوى MERS-CoV (فيروس كورونا الشرق الأوسط) إلى أن العديد من فيروسات كورونا تستخدم هذه الإستراتيجية [55-59]. دراسة 2020 التي أجراها Xia et al. حدد أن عدم التنظيم الذي تستخدمه فيروسات كورونا شديدة العدوى يمتد إلىSARS-CoV -2من خلال إثبات أن جميع هذه الفيروسات التاجية بيتا الثلاثة تنظم مسار النوع الأول من الإنترفيرون. على وجه التحديد ، تتداخل NSP1 و NSP6 و NSP13 [50] مع ترجمة IFN-beta ، إما عن طريق منع الريبوسوم المضيف في حالة NSP1 [60] أو استهداف البروتينات الأولية اللازمة لتحريض IFN-beta في حالة NSP13 [61]. آخرSARS-CoV -2بروتينات الفيروس متورطة أيضًا في تقليل تنظيم الإنترفيرون [62]. يستهدف كل من ORF3b و ORF9b على وجه التحديد مركب بروتين إشارة مضاد للفيروسات للميتوكوندريا من أجل تثبيط إشارات IFN من النوع الأول [63،64]. العوامل المضيفة التي تؤثرSARS-CoV -2تشمل نتائج العدوى العمر والجنس ؛ علاوة على ذلك ، فقد تم أيضًا تورط الأمراض المصاحبة في إنترفيرون dysre-gulation [65]. تم فحص دراسة عام 2020 بواسطة Trouillet-Assent et alCOVID -19نتائج المرضى في مجموعة بما في ذلك الأفراد الذين يعبرون بشكل منهجي عن النوع الأول IFN والأفراد الذين لديهم مستويات أقل بكثير من كل من IFN-alpha و beta. ووجدوا أن المرضى الذين يفتقرون إلى تعبير مضاد للفيروسات من النوع الأول كانوا أكبر سنًا ، وأكثر احتمالًا لأن يكونوا ذكورًا مقارنةً بأولئك الذين أعربوا عن النوع الأول من الإنترفيرون [66. في دراسة مماثلة ، تم تحديد مستويات نظامية أعلى بكثير من IFN-alpha2 في الإناث مقارنة بالمستويات عند الذكور|67]. في دراستنا الأخيرة ، وجدنا أن الذكور الأكبر سنًا من القوارض لديهم استجابة متأخرة من النوع الأول للإنترفيرون عند مقارنتها بالإناث البالغات ، مع افتقار الذكور إلى تحفيز الجينات الأساسية المضادة للفيروسات بما في ذلك OASL و MIX1 و IDG15 والتي تزامنت مع زيادة العبء الفيروسي [68] في دراستنا الحالية باستخدام نموذج الهامستر ، كانت جميع حيواناتنا من الذكور مما يشير إلى أن التحقيق في التحيزات الجنسية ضروري لاكتساب فهم كامل لخلل التنظيم الملحوظ من النوع الأول من الإنترفيرون. في هذا الوقت ، من غير المعروف لماذا أو كيف تؤثر العوامل المضيفة على استجابات مضاد للفيروساتSARS-CoV -2. حددت دراسة أجراها باستارد وآخرون وجود أجسام مضادة ذاتية ضد الإنترفيرون من النوع الأول في الذكور المصابين بشدة.COVID -19[69]. يقدم هذا تفسيراً محتملاً لآليات المناعة المشاركة في استجابات الانترفيرون من النوع الأول المنخفض في مجموعة فرعية من المرضى من البشر. تنتظر آلية تقليل استجابات مضاد للفيروسات في دراستنا الحالية ، حيث كانت جميع حيوانات الهامستر حيوانات ذكور بالغة ، في انتظار مزيد من التحقيق. علاوة على ذلك ، إذا أخذنا معًا ، فإن ملف المناعة الذي حددناه جنبًا إلى جنب مع أمراض الجهاز التنفسي يشير إلى أن الهامستر يكون نموذجًا مثاليًا لاستكشاف هذه الآليات واختبار العلاجات مثل النوع Iinterferons [48،49،70] أو الإنترفيرون لامدا [Z1 ، Z2] ، كلاهما أثبت فعاليته في العلاجCOVID -19المرضى [Z 3-75] ولكن هناك حاجة إلى مزيد من البحث.

COVID -19هو مرض ينطوي على التسبب في كل من أعضاء الجهاز التنفسي وغير التنفسي [25،26 ، ولكن لا يُفهم الكثير عن استجابة المضيف خارج الجهاز التنفسي. في دراستنا ، حددنا vRNA في العديد من الأنسجة خارج الجهاز التنفسي بما في ذلك العقدة الليمفاوية المنصفية والقلب والكلى والكبد والطحال والأمعاء الغليظة. يمكن أن يكون وجود الحمض النووي الريبي الفيروسي مؤشرًا على تكاثر الفيروس الحي وعدوى الأنسجة ، ولكنه قد يكون موجودًا أيضًا بدون فيروس حي. لم نعثر على فيروس حي كبير خارج الجهاز التنفسي مما يشير إلى الحد الأدنى في حالة حدوث أي إصابة بالأعضاء خارج الرئة. ومع ذلك ، قد يكون وجود الحمض النووي الريبي الفيروسي مهمًا للأمراض السريرية والآليات المرتبطة بها. يمكن أن يكون وجود الحمض النووي الريبي الفيروسي ناتجًا عن فيروس في الدم ينتقل بشكل نظامي أو مستضد فيروسي تم نقله بواسطة الخلايا العارضة للمستضد إلى الأنسجة المهمة من الناحية المناعية ، مثل العقدة الليمفاوية في الطحال والمنصف. يمكن أن يلعب وجود الحمض النووي الريبي الفيروسي دورًا في الاستجابات المناعية وما يرتبط بها من إمراض داخل هذه الأنسجة. لذلك ، واصلنا التحقيق في استجابات المضيف المرتبطة بالمناعة في الأنسجة التي كانت إيجابية للحمض النووي الريبي الفيروسي. على الرغم من أننا وجدنا زيادة في تنظيم جينات الإنترفيرون الالتهابية والنوع الثاني في جميع الأنسجة غير الرئوية ، كانت الاستجابة الأكثر لفتًا للانتباه هي زيادة السيتوكينات المعدلة للمناعة في القلب. في القلب ، حدد تحليلنا زيادة السيتوكينات بما في ذلك IL -10 ، IL -2 ، IL -4 ، IL -5 ، IL -5 R ، IL { {12}} و CD14 و CCR3 حيث تمت زيادة بعض نسخ السيتوكين mRNA 100- مرة. على الرغم من أنه يمكن إنتاج السيتوكينات المختارة هنا بواسطة مجموعات فرعية مختلفة من الخلايا التائية ، إلا أن غياب TGF-beta يشير إلى أن وجود الخلايا التائية التنظيمية أقل احتمالًا. بالإضافة إلى ذلك ، فإن غياب IL -13 يقلل من احتمالية استجابة TH2. بصرف النظر عن الخلايا اللمفاوية التائية ، يمكن أن تُعزى الزيادة في التعبير الجيني لـ IL -10 و TNF و IL -6 إلى الخلايا الوحيدة أو الضامة [76]. ويدعم ذلك أيضًا الزيادة في CD14 [76]. يشير تعبير IL -5 و IL -5 R و IL -4 و CCR3 أيضًا إلى وجود الحمضات [77]. لقد اكتشف عدد كبير من الدراسات السريرية الآن تورط القلب فيCOVID -19[78-84]. في الواقع ، تشير التقديرات إلى أن ما يقرب من 30 في المائة من الأشخاص الذين تعافوا من المرضCOVID -19لديهم نوع من إصابات القلب 85]. دراسة ألمانية 100COVID -19وجد المرضى أن التهاب عضلة القلب كان شائعًا حتى بعد أشهر من الشفاء منهSARS-CoV -2العدوى [84]. ضمن المجموعة التي تم اختبارها ، عانى 78 بالمائة من المرضى من أعراض مرتبطة بالقلب بغض النظر عن درجتهمCOVID -19شدة [84]. تعد الخلايا الوحيدة من بين أنواع الخلايا المعروفة باختراق القلب في حالة التهاب عضلة القلب ، وتنتج IL -10 و IL -1 beta و IL -6 و TNF [86] ، بالإضافة إلى IL -12 [87،88] ، تم تنظيمها جميعًا في القلب بعد-SARS-CoV -2التلقيح في دراستنا الحالية. بالإضافة إلى ذلك ، ترتبط مجموعة فرعية أخرى من مشاكل القلبCOVID -19يُنسب إلى الحمضات مما يؤدي إلى التهاب عضلة القلب اليوزيني [89]. من المعروف أن الفيروسات الأخرى تسبب التهاب عضلة القلب اليوزيني بعد الإصابة [90-93]. ينتج هذا المرض عادةً عن إصابة الفيروس بأنسجة القلب على سبيل المثال بعدوى فيروس كوكساكي B3 [94]. تم تشخيص التهاب عضلة القلب اليوزيني فيCOVID -19المرضى ، وعند تشريح الجثة أظهر أنسجة القلب تسللًا للخلايا الالتهابية بما في ذلك الخلايا الليمفاوية والضامة ، وبشكل بارز ، الحمضات [89]. في هذه الحالة ، تم العثور على زيادة في الحمضات والالتهابات الكلية في القلب على الرغم من عدم وجود فيروس حي في القلب وقت الوفاة [95]. وجدنا دليلاً في دراستنا على التهاب عضلة القلب اليوزيني في التشريح المرضي وكذلك التوقيع الخلوي الموجود في القلب. من الممكن في دراستنا أن تؤدي الحمضات إلى اعتلال عضلة القلب التهابي عن طريق زيادة تنظيم IL -4 ، والذي زاد من حيث التعبير الجيني في قلوب الهامستر في اليوم الثامن بعد تلقيح SARS-CoV -2. قد تكون زيادة البوتاسيوم والزيادات الطفيفة في ترانسفيراز الألانين في بلازما الهامستر المصابة قد دعمت أيضًا عدم انتظام القلب. مع وضع ذلك في الاعتبار ، لا تزال الآليات المنظمة لإصابة القلب المرتبطة بـ COVID -19 غير معروفة. النظر في انتشار تورط القلب فيCOVID -19المرضى ، هناك حاجة إلى مزيد من البحث لفهم آليات المرض. لقد قدمنا ​​هنا دليلًا على أن الهامستر قد يكون مفيدًا لفهم الآليات المحددة لإصابة القلب أثناءSARS-CoV -2العدوى وتقييم العلاجات لهذا المرض.

من الناحية المناعية ، تشير تحليلاتنا في الغدد الليمفاوية في الطحال والمنصف إلى تحريض المناعة التكيفية. حددت العقدة الليمفاوية المنصفية تنظيمًا ثنائي الطور ملحوظًا في الجينات المرتبطة بالخلايا التائية ، مع زيادة التنظيم في التعبير الجيني لـ CD3 ، CD4 ، IL -2 ، IL -21 ، I -10 ، IL { {6}} و IL -5 و IL -13 في اليومين 2 و 15. يقترح هذا الملف التعريفي عرضًا مبكرًا للمستضد داخل العقدة الليمفاوية النازفة بعد فترة وجيزة من إصابة الرئة بالخلايا المتغصنة ، والتي ستكون مدعومة يومًا بعد يوم 2 ـ تنظيم إنتاج IL -12 في العقدة الليمفاوية [96،97]. يؤدي انتقال الخلايا المتفرعة إلى تنشيط الخلايا التائية إلى ذروته في نهاية المطاف في -2 تحفيز نمو الخلايا التائية وتكاثرها [98]. مستويات الجلوبيولين في الدم في اليوم الثاني بعد الإصابة في الهامستر المصاب تدعم أيضًا التحفيز المبكر للمستضد. يقترح تنظيم IL -4 و IL -5 و IL -13 استجابة TH2 منحرفة [99]. وقد أظهرت الدراسات المبكرة أن الأعراض خفيفة أو بدون أعراضCOVID -19الحالات ذات الانحراف المناعي تجاه TH2 النظامي الذي يتميز بزيادات في IL -4 و IL -10 [100] .IL -10 ، وهو سيتوكين تنظيمي ، تم تنظيمه أيضًا في اليوم الثاني من دراستنا. تشير بياناتنا إلى أن الخلايا التائية المنشطة يتم تجنيدها في الأنسجة المصابة بعدوى فيروسية حية مثل القرينات الأنفية ، حيث لاحظنا زيادة في الجينات المرتبطة بالخلايا التائية في اليوم الخامس بعد التلقيح. يشير التنظيم الثانوي للجينات في العقدة الليمفاوية في اليوم الخامس عشر أيضًا إلى توسع مجموعات فرعية من الخلايا التائية. في حالة عدم وجود فيروسات معدية في هذا الوقت ، يمكن أن يكون هذا زيادة في مجموعات فرعية من الخلايا التائية التي تساهم بشكل مباشر في تطوير استجابة الذاكرة. نظرًا لأن خلايا الذاكرة المركزية T تنتج أيضًا IL -2 [101] فإن بياناتنا التي تظهر زيادة IL -2 في اليوم الخامس عشر بعد التلقيح قد تكون مؤشرًا على ذاكرة الخلايا التائية. كان IL -21 أكثر الجينات المرتبطة بالخلايا التائية تنظيمًا في اليوم الخامس عشر ، حيث يتم إنتاج IIL -21 بشكل أساسي بواسطة الخلايا المساعدة المسامية التائية ، وهي مجموعة فرعية تساعد الخلايا البائية في المركز الجرثومي [102] ، ولا سيما الانحراف B الخلايا نحو النضج التقارب وتنمية الذاكرة. تمت زيادة علامة الخلية B CD19 أيضًا في العقدة الليمفاوية ، مع ظهور ذروة التعبير الجيني في اليوم الخامس عشر.SARS-CoV -2عدوى في قرود المكاك ريسوس ، مما يكشف عن استجابة قوية للخلايا التائية في العقدة الليمفاوية المنصفية مع زيادات محددة في CD4 ، بالإضافة إلى علامات الخلايا المساعدة المسامية التائية CD28 و CXCR5 [103]. من الممكن أن يكون التعبير الجيني للخلايا التائية المتزايد الذي لوحظ في دراستنا مؤشرًا أيضًا على استجابة المركز الجرثومي. كما لوحظ ارتفاع استجابة الخلايا التائية الجهازية في المرضى الذين يعانون من SARS-CoV -2 الذين يتعافون ويطورون ذاكرة طويلة المدى [97104]. سيكون التحليل الأعمق مع العلامات المتزايدة لتفاعلات المركز الجرثومي لتقييم العقدة الليمفاوية مفيدًا لدراسات اللقاح.

يمكن أن يكون نشاط العقدة الليمفاوية المرتفعة مؤشراً على التسبب في المرض. كانت العقدة الليمفاوية العضو الوحيد غير التنفسي الذي تم اكتشاف الفيروس الحي فيه. لوحظت عدوى فيروسية حية في العقدة الليمفاوية ، وكذلك الطحال ، لدى البشر الذين استسلموا لذلك.SARS-CoV -2[105]. في دراسة أجراها كانيكو وآخرون ، عينات من العقدة الليمفاوية البشرية والطحال من المتوفىCOVID -19المرضى يفتقرون إلى الخلايا BCL6 plus B وكذلك المراكز الجرثومية بأكملها بشكل عام. افترض المؤلفون أن هذا كان سبب ضعف الاستجابة الخلطية لـSARS-CoV -2[106]. نظرًا لأننا حددنا استجابة قوية للأجسام المضادة المعادلة التي تم اكتشافها في اليوم الثامن بعد الإصابة والتي تزامنت مع انخفاض في إفراز الفيروس ، فمن المرجح أن الفيروس الحي الموجود في العقد الليمفاوية في دراستنا كان مؤشراً على استجابات الخلايا البائية الوظيفية و تفاعلات المركز الجرثومية.

أظهر الطحال أيضًا استجابات مناعية بارزة تتميز بزيادات في التعبير الجيني خطيًا من اليوم الثامن إلى اليوم الخامس عشر. يرتبط هذا التنظيم المتأخر مع تورط الطحال النموذجي مع الاستجابة المناعية لمسببات الأمراض التي قد تحدث بعد التنشيط في عقد التصريف المحلية [107]. ينشط الطحال ، وهو عضو ليمفاوي ، الخلايا التائية والبائية استجابةً للمستضد الفيروسي. يشير التعبير الجيني العالي لـ CD3 و CD4 و IL -2 و I -21 إلى الخلية التائية المسامية مثل وكذلك نشاط الخلايا البائية المعتمد على المركز الجرثومي ، كما رأينا في العقدة الليمفاوية [108]. بالإضافة إلى ذلك ، قد تكون الاستجابة في الطحال نتيجة لفيروسات الدم ، حيث تشارك الخلايا المتغصنة البلازمية (pDCs) في التعرف على المستضد الفيروسي عبر TLR7 و TLR9 لتفعيل خلايا CD8 + T و Natural Killer T (NKT). كلا النوعين من الخلايا يعملان في تطهير الخلايا المصابة بالفيروس بعد التنشيط في الطحال بواسطة IFN-beta و IL -12 [109] ، والتي زادت في نموذجنا ، جنبًا إلى جنب مع CD8.IL -12 تم تنظيم و IL -10 و CD14 في طحال الهامستر المصاب ، مما قد يشير إلى نشاط البلعمة [110،111]. أيضًا ، تدعم الخلايا اللمفاوية الفطرية (ILCs) في الطحال إصلاح الأنسجة استجابةً للإصابة وتنتج IL -5 و IL -13 [112]. مجتمعة ، تشير هذه الاستجابة اللاحقة في الطحال إلى وظيفة إعادة التدوير للطحال ، بالإضافة إلى تنشيط الخلايا الليمفاوية المحتملة لاستجابات الذاكرة طويلة المدى.

أظهر الأمعاء الغليظة الحد الأدنى من التنظيم للسيتوكينات التي تم تقييمها ، مع استثناء ملحوظ من I -5 و IL -5 R و CCR3. زاد التعبير عن هذه الجينات الثلاثة بشكل ملحوظ في الأيام من 2 إلى 15 مع تغير ذروة بمقدار 74 بالنسبة لـ IL -5 ، بالنسبة إلى خط الأساس في اليوم الثامن. يتم إفراز IL -5 بشكل أساسي بواسطة النوع 2 T - الخلايا المساعدة والحمضات [113]. نظرًا لانخفاض مستويات التعبير الجيني للجينات الأخرى ذات الصلة بـ Th2 ، مثل IL -4 و IL -13 ، والزيادة في علامات الحمضات المعروفة IL -5 R و CCR3 ، فمن المحتمل أن يكون IL { يتم إنتاج {18}} بشكل أساسي بواسطة الحمضات والتي يمكن رؤيتها في تحليلنا النسيجي للأمعاء الغليظة. تلعب الحمضات دورًا مباشرًا في الدفاع المضاد للفيروسات ، كما يتضح من RNases في حبيباتها وقد ارتبطت بإزالة فيروسات الجهاز التنفسي الأخرى [114،115]. كما تم العثور على أعداد كبيرة من الحمضات في الجهاز الهضمي [116]. في دراستنا ، لم تظهر في الأمعاء الغليظة للهامستر المصاب فيروسات حية. ومع ذلك ، كانت الأمعاء الغليظة إيجابيةSARS-CoV -2الحمض النووي الريبي الفيروسي في اليومين الثاني والخامس بعد التلقيح ، وهي نتيجة تتفق مع سيا وآخرين ، الذين لاحظوا أيضًا الحمض النووي الريبي في القولون في غياب الاستجابة الالتهابية [20]. ما يصل إلى 20 في المئة منCOVID -19يبلغ المرضى عن أعراض معدية معوية مثل الإسهال [39117] مع وجود الفيروسات في البراز [118]. يمكن تفسير ذلك من خلال الانخفاض في الحمضات التي تم الإبلاغ عنها في الحالات الشديدةCOVID -19[119-121]. يمكن أن تساهم الزيادة في التعبير الجيني لـ IL -5 بواسطة الحمضات في الحالة المضادة للفيروسات في الأمعاء الغليظة ، وبالتالي منع العدوى. هناك حاجة إلى مزيد من التحقيق لتأكيد نوع الخلية الدقيق الذي يؤدي إلى استجابة IL -5 المتزايدة.

في دراستنا قمنا أيضًا بالتحقيق في كيمياء الدمSARS-CoV -2مصابة الهامستر السوري. حددنا نطاقًا مرجعيًا باستخدام جرذان الهامستر غير المصابة من مصدرنا الحيواني وكذلك قارنا القراءات بالنطاقات المرجعية المنشورة للهامستر ، وتحديدًا الهامستر السوري [122]. تتضمن بعض عوامل ما قبل التحليل التي قد تؤثر على كيمياء الدم لحيواناتنا قبل الإصابة والتي يجب أخذها في الاعتبار للتحليل مستوى الإجهاد الذي قد تتعرض له الحيوانات بالإضافة إلى مخدر الأيزوفلورين المستخدم عند سحب الدم والذي قد يغير كيمياء الدم. لقد ثبت أن مستويات الجلوكوز ، و ALT ، و ALP ، والفوسفور غير العضوي كانت أعلى بشكل ملحوظ في الفئران التي خضعت للأيزوفلورين ومواد التخدير الأخرى غير المشار إليها هنا [123]. في دراستنا للهامستر المصابة بـ SARS-CoV -2 ، ومن أبرز التغيرات التي حدثت بعد الإصابة ، تراكيز البوتاسيوم التي زادت بمرور الوقت. البوتاسيوم ، وهو قاعدة ، يعمل كمخزن لتبادل الهيدروجين (H ') (حمض) عندما يكون المريض في حالة حمضية. نظرًا لأن الحماض الدموي يمكن أن يكون ناتجًا عن تغيرات في وظيفة الجهاز التنفسي ، فليس من المستغرب أن الهامستر الذي أظهر علامات الالتهاب الرئوي / اضطراب الجهاز التنفسي (مما يشير إلى زيادة في ثاني أكسيد الكربون (CO2) يتم الاحتفاظ به (أو يتم طرده أقل) وأكسجين أقل ( O2) التي يتم تناولها بسبب انخفاض وظيفة السنخية) ستدخل في حالة حمضية تؤدي إلى زيادة البوتاسيوم في الدم. فيما يتعلق بمستويات الألبومين المنخفضة بالمقارنة مع النطاق المرجعي لدينا ، كان من المتوقع أن يزيد الألبومين استجابة لتعبير السيتوكين الالتهابي. من المحتمل أن تكون المستويات المنخفضة من الألبومين ناتجة عن استخدام الأيزوفلورين الذي تم عرضه سابقًا [122-124]. فيما يتعلق بالجلوكوز بمرور الوقت ، كان لدى معظم الحيوانات المصابة زيادة في تركيز الجلوكوز مما يشير إلى الإجهاد الناجم عن الكورتيزول ، أو الإثارة التي يسببها الإيبينيفرين ، أو عدم التنظيم في إنتاج الأنسولين أو تفاعل الإفراز / المستقبل. باختصار ، كانت النتيجة الأكثر إثارة للاهتمام في هذا التحليل هي اقتراح انخفاض مستويات الأكسجين المرتبط بزيادة مستويات البوتاسيوم. تشير هذه النتائج إلى أنه يمكن استخدام مراقبة البوتاسيوم لتحديد الالتهاب الرئوي أثناء جزء العمر منCOVID -19دراسات على الحيوانات. من الآن فصاعدًا ، يمكن استخدام هذا العمل أيضًا لبناء قيم مرجعية لنموذج عدوى الهامستر السوري SARS-CoV -2 واستخدامها لفحص العلاجات في الحياة.

تقدم دراستنا رؤى مهمة حولSARS-CoV -2العدوى وCOVID -19تنظيم المرض. النماذج قبل السريرية هي حجر الزاوية في البحوث الطبية الحيوية التي توفر القدرة على عزل آليات المرض تجريبيًا وكذلك تقييم الإجراءات الطبية المضادة المحتملة بما في ذلك الأدوية المعدلة للمناعة والأدوية المضادة للفيروسات واللقاحات. كماSARS-CoV -2ظهر لأول مرة ، كان لدينا فهم محدود لآليات التسبب في المرض ، ولا توجد علاجات أو وقائية محددة ، ولا يوجد نموذج قبل السريري للاستفادة من اكتشاف التدابير الطبية المضادة. منذ ظهور الفيروس ، تم تحقيق قفزات هائلة خاصة في تطوير النماذج قبل السريرية ، ولكن فهمنا لهاCOVID -19ولا تزال مظاهره العديدة محدودة. أكدت دراستنا المدارية الفيروسية وأمراض الجهاز التنفسي التي تم تحديدها مسبقًا في منطقتناSARS-COV -2قام بدراسة الهامستر ولكنه كان قادرًا أيضًا على توسيع فهمنا لتنظيم المناعة والتسبب في المرض داخل الجهاز التنفسي وما بعده.

مراجع

1. Zhuang Pinghui JW. الالتهاب الرئوي في ووهان: كيف تم الكشف عن مصدر المرض الغامض South China Morning Post 2020. متاح من: https://www.scmp.com/news/china/society/article/3046233 / Wuhan-pneumonia-how-search -المصدر-الغموض-المرض-تكشفت.

2. Cucinotta D ، Vanelli M. تعلن منظمة الصحة العالميةCOVID -19جائحة. اكتا بيوميد. 2020 ؛ 91 (1): 157-60. Epub 2020/03/20. https://doi.org/10.23750/abm.v91i1.9397 PMID: 32191675.

3. بيتروسيلو إن ، فيسيكونتي جي ، إرغونول أو ، إيبوليتو جي ، بيترسن إي.COVID -19، السارس ، ومتلازمة الشرق الأوسط التنفسية: هل ترتبط ارتباطا وثيقا؟ كلين ميكروبيول تصيب. 2020 ؛ 26 (6): 729–34. Epub 2020/04/03. https://doi.org/10.1016/j. cmi.2020.03.026 PMID: 32234451 ؛ PubMed Central PMCID: PMC7176926.

4. الطب JHU. مركز موارد Coronavirus 2021. متاح من: https://coronavirus.jhu.edu/.

5. مارشال م البؤس الدائم لراكبي الرحلات الطويلة لفيروس كورونا. طبيعة سجية. 2020 ؛ 585 (7825): 339–41. Epub 2020/09/16. https://doi.org/10.1038/d41586-020-02598-6 PMID: 32929257.

6. Gupta A و Madhavan MV و Sehgal K و Nair N و Mahajan S و Sehrawat TS وآخرون. المظاهر خارج الرئةCOVID -19. نات ميد. 2020 ؛ 26 (7): 1017-1032. Epub 2020/07/12. https://doi.org/10.1038/s41591- 020-0968-3 PMID: 32651579.

7. نيكوليتش-تسوجيتش جي ، نوكس كانساس ، ريوس سي تي ، نات بي ، بهاتاشاريا دي ، فاين إم جي.SARS-CoV -2وCOVID -19عند كبار السن: ما قد نتوقعه فيما يتعلق بالإمراض والاستجابات المناعية والنتائج. علم الشيخوخة. 2020 ؛ 42 (2): 505-14. Epub 2020/04/11. https://doi.org/10.1007/s11357-020-00186-0 PMID: 32274617 ؛ PubMed Central PMCID: PMC7145538.

8. من الذى. معلومات لمقدمي الرعاية الصحية للأطفال لعام 2021. متوفرة من: https://www.cdc.gov/ Coronavirus / 2019- ncov / hcp / pediatric-hcp.html.

9. فو Y ، تشنغ واي ، وو ي. التفاهمSARS-CoV -2- الاستجابات الالتهابية الوسيطة: من الآليات إلى الأدوات العلاجية المحتملة. فيرول سين. 2020 ؛ 35 (3): 266-71. Epub 2020/03/04. https://doi.org/ 10.1007 / s 12250-020-00207-4 PMID: 32125642 ؛ PubMed Central PMCID: PMC7090474.

ملحوظة:ما ورد أعلاه ليس قائمة مرجعية كاملة