الجزء الثاني كيف يعالج إشنكوسايد الضرر التأكسدي للحمض النووي ويمنع موت الخلايا المبرمج؟

انقر هنا للجزء الأول

للمزيد من المعلومات أرجو الأتصال:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola له العديد من التأثيرات ، انقر هنا لمعرفة المزيد

3. تجريبي الجزء

3.1. الخلايا و مواد كيميائية

تم شراء خط خلايا سرطان القولون والمستقيم البشري SW480 من ATCC. تمت زراعة الخلايا في وسط Dulbecco المعدّل Eagle's (DMEM) (Gibco ، جراند آيلاند ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية) الذي يحتوي على 10 بالمائة من مصل الأبقار الجنيني (FBS) (Gibco) و 1 بالمائة (v/v) البنسلين-الستربتومايسين (سيغما الدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية) بدرجة 37 في جو رطب يحتوي على 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون.إشيناكوسايدتم شراؤها من Yuanye Biotechnology ، شنغهاي ، الصين (HPLC> 98 بالمائة). تم تحضير حلول المخزون في DMSO (Sigma-Aldrich) ، وتم تحضير حلول العمل في وسط ثقافة الخلية.

3.2. فحص الجدوى MTT

تم زرع الخلايا في 96- أطباق جيدة بمعدل 1 × 104 خلية لكل بئر لمدة 12 ساعة ، ثم تم تحضينها في وجودإشيناكوسايدأو 0. 01 بالمائة DMSO لمدة 24 أو 48 ساعة. في النهاية ، 20 ميكرولتر من MTT (3- (4 ، 5- ثنائي ميثيلثيازول -2- يل) -2 ، 5- ثنائي فينيل رباعي بروميد البروميد) (5 مجم / تمت إضافة مل في PBS ، الرقم الهيدروجيني 7.2) (Invitrogen ، Carlsbad ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) إلى كل بئر ، وتم تحضين الصفائح لمدة 4 ساعات. بعد إزالة الوسط الذي يحتوي على MTT ، تمت إضافة 150 ميكرولتر من DMSO إلى كل بئر. تم تحضين الألواح على شاكر لوح لمدة 10 دقائق ، وتم قياس الامتصاصية عند 570 نانومتر بواسطة قارئ صفيحة ميكروسكوبية BioRad 680 (هرقل ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). أجريت كل تجربة مرتين في ثلاث نسخ. تم تحليل البيانات باستخدام برنامج GraphPad Prism (سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية).

3.3. فحص تكوين المستعمرة

تم زرع الخلايا في 6- ألواح بئر بكثافة 1 × 104 لكل بئر لمدة 12 ساعة ثم تم تحضينها في وجودإشيناكوسايدأو {0}. 01 بالمائة DMSO لمدة 10 أيام. تم غسل الألواح باستخدام برنامج تلفزيوني ، وتم إصلاح الخلايا بميثانول مثلج وبقع ملطخة بمحلول بنفسجي بلوري (Sigma-Aldrich) (0.5 بالمائة في 25 بالمائة ميثانول). تم تصوير الصور بعد تجفيف الأطباق طوال الليل. تم إذابة بلورات الكريستال البنفسجي في 70 بالمائة من الإيثانول ، وتم قياس الامتصاصية عند 595 نانومتر بواسطة قارئ الصفيحة الميكروسكوبية BioRad. تم تحليل البيانات باستخدام برنامج GraphPad Prism.

3.4. تحليل تجزئة الحمض النووي باستخدام مضان DAPI تلطيخ

بعد العلاج بالعقاقير ، تم غسل الخلايا الموجودة في أطباق البئر {0} مرة واحدة في برنامج تلفزيوني ، وتثبيتها في بارافورمالدهيد بارد بنسبة 4 في المائة (PFA) (Sigma-Aldrich) في برنامج تلفزيوني لمدة 20 دقيقة ، ثم تلطيخها بـ 4 ، 6- ديميدينو -2- فينيليندول (DAPI) (سيغما الدريتش) (0.2 ميكروغرام / مل) لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد الغسل باستخدام PBS ، تم إغلاق الخلايا في VECTASHIELD Mounting Medium (Vector Laboratories ، Burlingame ، CA ، USA). تم تصوير علم التشكل النووي باستخدام مجهر أوليمبوس الفلوري.

يمكن أن يعزز Echinacoside في cistanche جهاز المناعة

3.5. تحليل دورة الخلية

تم زرع الخلايا في 96- أطباق جيدة بمعدل 1 × 104 خلية لكل بئر لمدة 12 ساعة ، ثم تم تحضينها في وجودإشيناكوسايدأو {0}. 0 1 بالمائة DMSO لمدة 24 ساعة. في النهاية ، تم حصاد الخلايا باستخدام التربسين (Invitrogen) ، وغسلها في PBS مرتين ، ثم تم تثبيتها بالإيثانول المثلج (70 بالمائة) لمدة ساعتين عند درجة حرارة -20 درجة. تم غسل الخلايا الثابتة مرتين في برنامج تلفزيوني بارد وتم تعليقها في 300 ميكرولتر من PBS المحضر حديثًا مع 0.1 بالمائة Triton X -100 ، 0.2 مجم / مل من RNase A الخالي من DNase (Sigma) ، 10 ميكروغرام / مل بروبيديوم يوديد (PI) (روش ، إنديانابوليس ، إنديانا ، الولايات المتحدة الأمريكية). بعد الحضانة عند 37 درجة في الظلام لمدة 20 دقيقة ، تم ترشيح الخلايا من خلال شبكة نايلون (Falcon ، BD Bioscience ، سان خوسيه ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، محملة على مقياس التدفق الخلوي FACSCalibur (BD Biosciences). تم تحليل البيانات باستخدام برنامج ModFit (Topsham ، ME ، الولايات المتحدة الأمريكية).

3.6. تحليل موت الخلايا المبرمج

تم زرع الخلايا في 96- أطباق جيدة بمعدل 1 × 104 خلية لكل بئر لمدة 12 ساعة ، ثم تم تحضينها في وجودإشيناكوسايدأو 0. 01 بالمائة DMSO لمدة 24 ساعة. في النهاية ، تم فحص الخلايا باستخدام مجموعة أدوات الكشف عن موت الخلايا المبرمج Annexin V-FITC (Best ، شنغهاي ، الصين) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تم غسل الخلايا مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني ثم تعليقها في محلول ملزمة. تمت إضافة 5 ميكرولتر من كل من Annexin V-FITC و Propidium Iodide (PI) (Roche) بالتتابع وحضنت الخلايا لمدة 15 دقيقة في الظلام عند درجة حرارة الغرفة. تم تحميل الخلايا على مقياس التدفق الخلوي FACSCalibur (BD Biosciences). تم تحليل البيانات باستخدام برنامج Cell Quest (BD Biosciences).

3.7. تلطيخ مناعي 53BP1

تم زرع خلايا SW480 على أغطية دائرية في 24- أطباق جيدة. بعد العلاج بإشيناكوسايدأو {0}. 01 بالمائة DMSO لمدة 24 ساعة ، تم إصلاح الخلايا بنسبة 4 بالمائة من PFA لمدة 20 دقيقة وتم حظرها بنسبة 15 بالمائة FBS (0.1 بالمائة Triton X -100) ​​لمدة ساعة واحدة في الغرفة درجة الحرارة. تم تحضين الخلايا الثابتة لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة باستخدام الجسم المضاد BP1 المضاد للأرنب -53 (Bethyl Laboratories ، Montgomery ، TX ، USA) المخفف 1: 1000 في محلول الحجب ، متبوعًا بالتلوين باستخدام Cy 3- المترافق تم تخفيف الجسم المضاد الثانوي للماعز المضاد للأرنب (Jackson ImmunoResearch Laboratories ، West Grove ، PA ، USA) بنسبة 1: 500 في عازل مانع لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. بعد الغسيل في برنامج تلفزيوني لمدة 3 × 5 دقائق ، تم ختم أغطية الأغطية على شرائح زجاجية في وسط تركيب VECTASHIELD مع DAPI. تم التقاط الصور بواسطة مجهر متحد البؤر Zeiss LCM 510 (Carl Zeiss ، Jena ، ألمانيا).

3.8. 8- oxoG Incorporation Assay

تم قياس oxoG داخل الخلايا 8- بالتلوين باستخدام Alexa 488- أفيدين المترافق (Invitrogen) [25]. تم زرع الخلايا على أغطية دائرية في 12- أطباق جيدة. بعد العلاج بإشيناكوسايدأو {0}. 0 1 بالمائة DMSO لمدة 24 ساعة ، تم إصلاح الخلايا بميثانول مثلج لمدة 2 0 دقيقة متبوعة بحضانة في محلول ملحي تريس (TBS) (Fisher Scientific ، Rockford ، IL ، USA) مع 0.1 بالمائة Triton X -100 (Sigma-Aldrich) لمدة 15 دقيقة. تم حظر العينات في TBS بنسبة 0.1 بالمائة Triton X -100 و 15 بالمائة FBS لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة ثم تم تلطيخها بـ Alexa 488- أفيدين المترافق (0.5 ميكروغرام / مل) في محلول منع لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة. بعد الغسيل في برنامج تلفزيوني لمدة 3 × 5 دقائق ، تم ختم أغطية الأغطية على شرائح زجاجية في وسط تركيب VECTASHIELD مع DAPI (مختبرات المتجهات). تم التقاط الصور وتحليلها بواسطة مجهر متحد البؤر Zeiss LCM 510.

3.9. لطخة ويسترن التحليلات

تم كشط الخلايا التي تمت زراعتها ومعالجتها في {0} لوحات بئر في محلول RIPA المؤقت (15 0 ملي مولار كلوريد الصوديوم ، 1. 0 بالمائة IGEPAL CA -630 ، {{12 }} .5 في المائة من ديوكسيكولات الصوديوم ، 0.1 في المائة SDS ، و 50 ملي مولار تريس ، 1 ملي مولار PMSF ، درجة الحموضة 8.0) (سيغما). تم قياس تركيز البروتين الكلي بواسطة مجموعة BCA (Dingguo ، Changchun ، الصين) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. تم تغيير طبيعة العينات عند 95 درجة لمدة 10 دقائق ، وفصلها على 4 في المائة - 12 في المائة من هلام SDS-PAGE ، ثم نقلها إلى أغشية PVDF (ميليبور ، بيليريكا ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم حظر الأغشية في حليب خالٍ من الدهون بنسبة 5 في المائة في TBST لمدة ساعتين واحتضانها بالأجسام المضادة الأولية (Bcl -2 ، sc -492 ، سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية ، سانتا كروز ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية ؛ باكس ، سانتا كروز ، sc -493؛ to c، Santa Cruz، sc -7159؛ p21، ab109520، Abcam، Cambridge، MA، USA؛ caspase 3، Abcam، ab32042؛ PARP، Bioss، bs -2318 R؛ 53BP1، Bethyl Laboratories، A 300-272 A) بين عشية وضحاها بدرجة 4. بعد الغسل باستخدام PBS ، تم تحضين الأغشية بالأجسام المضادة الثانوية المقترنة بـ HRP (مختبرات Jackson ImmunoResearch) وتم تصورها باستخدام مجموعة الكشف عن النشاف الغربي ECL (Transgen Biotech ، Changchun ، الصين). تم التقاط الصور وتحليلها بواسطة مصور (تانون ، شنغهاي ، الصين).

3.10. قياس الخلوي روس

تم قياس ROS داخل الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام مجموعة اختبار ROS المستندة إلى الخلايا (Beyotime Biotechnology ، Haimen ، الصين ؛ S0033). في نهايةإشيناكوسايدالعلاج ، تم غسل الخلايا مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني واحتضانها بـ 10 ميكرومتر من ثنائي كلورو فلورسين ثنائي الأسيتات (DCFH-DA) لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة. ثم تم تجريب الخلايا وتحليلها بواسطة مقياس التدفق الخلوي العيار FACSC (BD Biosciences). تم التعبير عن مستويات ROS داخل الخلايا على أنها متوسط ​​كثافة مضان DCF للخلايا.

3.11. قياس غشاء الميتوكوندريا القدره

تم قياس إمكانات غشاء الميتوكوندريا باستخدام صبغة JC -1 (Beyotime Biotechnology ، C2006) باتباع إرشادات الشركة المصنعة. التحكم وإشيناكوسايدتم تحضين الخلايا المعالجة بـ JC -1 لمدة 20 دقيقة ثم فحصها بمجهر أوليمبوس الفلوري.

3.12. تحليل احصائي

تم إجراء التحليل الإحصائي باستخدام برنامج GraphPad Prism. تم حساب الدلالة باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) وp < 0.05="" was="" considered="" statistically="" significant.="" results="" were="" expressed="" as="" mean="" ±="">

إشيناكوسايدفيcistanche: حماية الأعصابتأثيرات

4. الاستنتاجات

في هذه الدراسة ، اختبرنا تأثيراتإشيناكوسايدعلى مجموعة متنوعة من خطوط الخلايا السرطانية البشرية. والمثير للدهشة أننا وجدنا ذلك

سيستانشللفرشاة العديد من التأثيرات ، انقر هنا لمعرفة المزيد

منع تكاثر ورم الكبد SK-HEP -1 وسرطان الثدي MCF -7 وخلايا سرطان القولون والمستقيم SW480. وجدت تحليلات أخرى أن Echinacoside أوقف خلايا SW480 في المرحلة G1 ، وأدى إلى موت الخلايا المبرمج المعتمد على الكاسباس عن طريق تنشيط مسار موت الخلايا المبرمج الجوهري المرتبط بالميتوكوندريا. كان توقف دورة الخلية مرتبطًا بزيادة تنظيم مانع G1 / S-CDK ومثبط تخليق الحمض النووي CDKN1B (p21) ، وارتبط موت الخلايا المبرمج بتقليل تنظيم البروتين المضاد للاستماتة Bcl -2 وزيادة تنظيم Bax المؤيد للاستماتة ، وكذلك فقدان إمكانات غشاء الميتوكوندريا. تشير الزيادة الكبيرة في الشكل المؤكسد داخل الخلايا من الجوانين ، 8- oxoG ، إلى زيادة أكسدة dNTPs و / أو جزيئات الحمض النووي ، والتي ربما تسببت في توقف دورة الخلية وموت الخلايا المبرمج في الخلايا السرطانية SW480. في حين أن الآليات الكامنةإشيناكوسايدآثار الضرر التأكسدي وموت الخلايا المبرمج لا يزال يتعين توصيفها ، وهذه النتائج تدعم Echinacoside كسقالة كيميائية جديدة لتطوير العقاقير المضادة للسرطان.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسات بمنحة من مقاطعة جيلين (رقم المنحة: 20130101120JC) ومن صندوق أبحاث من جامعة جيلين (رقم المشروع: 450091099029).

الكاتب الاشتراكات

قام Liwei Dong بمعظم الأعمال التجريبية ، وقام بتحليل البيانات ، وكتب المخطوطة ؛ أجرى Debin Yu و Nuoting Wu اختبار MTT وتشكيل المستعمرة ؛ أجرى Hongge Wang و Jiajing Niu تجارب المناعة والبقع الغربية. ساعد يي وانغ في تجارب دورة الخلية وموت الخلايا المبرمج. وقام Zhihua Zou بتطوير المفهوم وتحليل البيانات والإشراف على تنفيذ هذه الدراسة وكتابة المخطوطة. وافق جميع المؤلفين على المخطوطة المقدمة.

تضارب المصالح

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

إشيناكوسايدفيcistancheيستطيعمضاد التهاب

مراجع

1. جيانغ واي. Tu ، PF تحليل المكونات الكيميائية في أنواع Cistanche.تشروماتوجر.2009,

1216, 1970–1979.

2. وانغ ، تي. تشانغ ، العاشر ؛ شي ، و.Cistanche Deserticolaواي سي ما ، "الجينسنغ الصحراوي": مراجعة.أكون. J. تشين. ميد.2012, 40, 1123–1141.

3. فريمان ، سي. سبيلمان ، ك. تقييم نقدي لتفاعلات الأدوية معإشنسا النيابة.

مول. نوتر. الدقة الغذائية.2008, 52, 789–798.

4. Hudson، JB تطبيقات الطب النباتيإشنسا، بيربوريا(القنب الأرجواني) في الأمراض المعدية.J. بيوميد. التكنولوجيا الحيوية.2012, 2012, 769896.

5. تشانغ ، د. لي ، ح. Wang ، JB Echinacoside يمنع الرجفان النشواني لـ HEWL ويحمي من السمية العصبية التي يسببها A.كثافة العمليات J. بيول. ماكرومول.2015, 72, 243–253.

6. وو ، واي. لي ، إل. ذهب.؛ Li ، YQ التأثيرات الوقائية لإشنكوسايد على السمية الكبدية التي يسببها رابع كلوريد الكربون في الفئران.علم السموم2007, 232, 50–56.

7. Li، X .؛ جو ، سي ؛ يانغ ، ح. كيو ، ياء ؛ قو ، تي ؛ Wen ، T. Echinacoside يخفف من D-galactosamine بالإضافة إلى إصابة الكبد الحادة التي يسببها عديد السكاريد الدهني في الفئران عن طريق تثبيط موت الخلايا المبرمج والالتهاب.سكاند. J. جاسترونتيرول.2014, 49, 993–1000.

8. شيه ، ح. Zhu، H. تشنغ ، سي ؛ ليانغ ، واي. Wang، Z. Echinacoside يؤخر شيخوخة الخلايا الليفية البشرية MRC -5.فارمازي2009, 64, 752–754.

9. Wang، S. زينج ، جي ؛ تيان ، س. تشانغ ، واي. شين ، إل. باك ، واي. شين ، واي. Qian، J. Echinacoside يحسن الوظيفة المكونة للدم في 5- الفئران التي يسببها الكبت النخاعي.علوم الحياة.2015, 123, 86–92.

10. جيا ، واي. كوان ، س. قوه ، واي. يحفز Du، C. Echinacoside تكاثر الخلايا ويمنع موت الخلايا المبرمج للخلايا في خلايا MODE-K الظهارية المعوية عن طريق التنظيم المحول لتعبير عامل النمو - 1.فارماكول. علوم.2012, 118, 99–108.

11. موريكاوا ، ت. نينومييا ، ك. إمامورا ، م. أكاكي ، ياء ؛ فوجيكورا ، إس. بان ، واي. يوان ، د. يوشيكاوا ، م. جيا ، العاشر ؛ لي ، زي.وآخرون.جليكوسيدات فينيل إيثانويد أسيلاتيد ، إشنكوسايد و أكتيوسيد منCistanche tubulosa، وتحسين تحمل الجلوكوز في الفئران.ج. نات. ميد.2014, 68, 561–566.

12. يانغ ، العاشر ؛ لي ، ف. يانغ ، واي. شين ، ياء ؛ زو ، ر. تشو ، ب. تشانغ ، سي. يانغ ، زي. Li ، P. فعالية وسلامة إشنكوسايد في نموذج هشاشة الفئران.دليل. تكملة مقرها. بديل. ميد.2013, 2013, 926928.

13. Kuang، R .؛ الشمس ، واي. Zheng، X. قمع أكسيد النيتريك المتورط في التأثير الوقائي لإشنكوسايد على H2O 2- لإصابة خلايا PC12.نات. همز. كومون.2010, 5, 571–574.

14. شيونغ ، س. كادوتا ، س. تاني ، ت. Namba، T. التأثيرات المضادة للأكسدة من الفينيليثانويد من

Cistanche Deserticola. بيول. فارم. ثور.1996, 19, 1580–1585.

15. Zhang، Y .؛ دو ، واي. لو ، دبليو. وانغ ، ك. كيففر ، ن. Zhang ، J.Redox السيطرة على بقاء الخلايا السليمة والمريضة.مضادات الأكسدة. إشارة الأكسدة والاختزال.2011, 15, 2867–2908.

16. روسو ، MT ؛ بلاسي ، إم إف ؛ شييرا ، ف. فورتيني ، ص. ديجان ، ص. ماكفيرسون ، ب. فورويتشي ، م. ناكابيبو ، واي. كاران ، ص. أكويلينا ، جي ؛وآخرون.يعتبر تجمع ديوكسينوكليوزيد ثلاثي الفوسفات المؤكسد مساهماً هاماً في عدم الاستقرار الوراثي في ​​الخلايا التي تعاني من نقص في الإصلاح.مول. خلية. بيول.2004, 24, 465–474.

17. Ventura، I .؛ روسو ، MT ؛ دي لوكا ، ج. نيوكليوتيدات البيورين المؤكسدة وعدم استقرار الجينوم والتنكس العصبي.موتات. الدقة.2010, 703, 59–65.

18. Rajendran، P .؛ نانداكومار ، ن. رينجاراجان ، تي. Palaniswami ، R. ؛ غناناداس ، إنكليزية ؛ لاكشميناراسايا ، يو ؛ جوباس ، ياء ؛ Nishigaki ، I. مضادات الأكسدة ، والأمراض البشرية.كلين. شيم. اكتا2014, 436, 332–347.

19. راي ، ص. Onder ، TT ؛ يونغ ، جي. ماكفالين ، جيه إل ؛ بانج ، ب. ديدون ، بيسي ؛ Weinberg، RA يعد الإزالة المستمرة للنيوكليوتيدات المؤكسدة ضرورية لمنع الظهور السريع للشيخوخة الخلوية.بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية2009, 106, 169–174.

20. دينيكولا ، GM ؛ كاريث ، FA ؛ همبتون ، تي جيه ؛ جوبيناثان ، أ. وي ، سي. فريز ، ك. مانجال ، د. Yu ، KH ؛ يو ، سي جيه ؛ كالهون ، إس ؛وآخرون.يعزز نسخ Nrf2 الناجم عن الجينات الورمية إزالة السموم من أنواع الأكسجين التفاعلية وتكوين الأورام.طبيعة سجية2011, 475, 106–109.

21- سانتوس ، ماساتشوستس ؛ Faryabi، RB؛ Ergen ، AV ؛ اليوم ، صباحا ؛ مالاتشوفسكي ، أ. كانيلا ، أ. أونوزاوا ، م. لي ، جي. كالين ، إي. جوتيريز مارتينيز ، ب.وآخرون.التمايز الناجم عن تلف الحمض النووي لخلايا سرطان الدم كحاجز مضاد للسرطان.طبيعة سجية2014, 514, 107–111.

22 ـ ساين السادس. إبراهيم ، مكس ؛ لارسون ، إي. نيلسون ، جا. ليندال ، ب. تعمل مضادات الأكسدة Bergo، MO على تسريع تطور سرطان الرئة لدى الفئران.علوم. ترجمة. ميد.2014, 6, 221–215.

23. هاريس ، IS ؛ تريلوار ، الإمارات العربية المتحدة ؛ إينو ، إس. ساساكي ، م. غيريني ، سي. لي ، كيه سي ؛ يونغ ، كنتاكي برينر ، د. Knobbe-Thomsen ، سي بي ؛ كوكس ، ماساتشوستسوآخرون.تتآزر مسارات الجلوتاثيون والثيوريدوكسين المضادة للأكسدة لدفع بدء السرطان وتطوره.الخلايا السرطانية2015, 27, 211–222.

24. Wong، HS؛ يحفز Ko ، KM Herba Cistanches دورة الأكسدة والاختزال الجلوتاثيون الخلوية بواسطة أنواع الأكسجين التفاعلية المتولدة من تنفس الميتوكوندريا في خلايا القلب H9c2.فارم. بيول.2013, 51, 64–73.

25. Struthers، L .؛ باتيل ، ر. كلارك ، ياء ؛ S.، S. الاكتشاف المباشر لـ 8- oxo deoxyguanosine و 8- oxoguanine بواسطة avidin ونظائرها.شرجي. بيوتشيم.1998, 255, 20–31.

26. الجسر ، G. ؛ راشد ، س. Martin، SA إصلاح عدم تطابق الحمض النووي وتلف الحمض النووي المؤكسد: الآثار المترتبة على بيولوجيا السرطان وعلاجه.السرطانات2014, 6, 1597–1614.

27. كالديكوت ، KW إصلاح كسر الخيط المفرد والأمراض الوراثية.نات. القس. جينيه. 2008, 9, 619–631.

28. Ward، IM؛ مينيسوتا ، ك. van Deursen، J.؛ Chen، J. p53 بروتين ملزم 53BP1 مطلوب لاستجابات تلف الحمض النووي وقمع الورم في الفئران.مول. خلية. بيول.2003, 23, 2556–2563.

29. Nakabeppu، Y. تلعب المستويات الخلوية من 8- oxo guanine في الحمض النووي أو تجمع النيوكليوتيدات أدوارًا محورية في التسرطن وبقاء الخلايا السرطانية.كثافة العمليات J. مول. علوم.2014, 15, 12543–12557.

30. Colussi، D.؛ براندي ، جي ؛ بازولي ، ف. Ricciardiello، L. المسارات الجزيئية المشاركة في سرطان القولون والمستقيم: الآثار المترتبة على سلوك المرض والوقاية منه.كثافة العملياتJ. مول. علوم.2013, 14, 16365–16385.

31. ساتيلي أ. ميترا ، أ. براونلي ، زي. شيا ، X. ؛ بيلستر ، إس. أوفرمان ، إم جي ؛ Kopetz ، S. إليس ، م. منغ ، QH ؛ لي ، س. تحولت الخلايا السرطانية الظهارية واللحمية الوسيطة إلى التقاط الخلايا السرطانية المتداولة للكشف عن تطور الورم.كلين. الدقة السرطان.2015, 21, 899–906.

32. لياو ، العاشر ؛ Lochhead ، P. ؛ نيشيهارا ، ر. موريكاوا ، ت. كوشيبا ، أ. ياموتشي ، م. إمامورا ، واي. تشيان ، ZR ؛ بابا ، واي. شيما ، ك.وآخرون.استخدام الأسبرين ، طفرة الورم PIK3CA ، بقاء سرطان القولون والمستقيم.إنجل. جيه ميد.2012, 367, 1596–1606.

33- دومينغو إي. الكنيسة ، DN ؛ سيبر ، أو. رامامورثي ، ر. ياناغيساوا ، واي. جونستون ، إي. ديفيدسون ، ب. كير ، دي جي ؛ توملينسون ، IP ؛ ميدجلي ، ر. تقييم طفرة PIK3CA كمؤشر للاستفادة من العلاج بالعقاقير غير الستيرويدية المضادة للالتهابات في سرطان القولون والمستقيم.J. كلين. اونكول.2013, 31, 4297–4305.

34. أحمد د. إيدي ، PW ؛ Eilertsen، IA؛ دانيلسن ، سا ؛ إكنيس ، م. هيكتوين ، م. ليند ، جنرال إلكتريك ؛ لوث ، RA السمات الجينية والجينية لـ 24 خطًا من خلايا سرطان القولون.نشوء الأورام2013, 2، دوى: 10.1038 / oncsis.2013.35.