الجزء 2 يثبط إشيناكوسايد إطلاق الغلوتامات عن طريق قمع الكالسيوم المعتمد على الجهد بالإضافة إلى دخول وبروتين كيناز سي في أطراف العصب القشري المخي للجرذان

للمزيد من المعلومات أرجو الأتصال:Joanna.jia@wecistanche.com

انقر هنا للجزء 1

3. مناقشة

في هذه الدراسة ، يشيناكوسيد ، مركب نشط فيهيربا سيستانش، يثبط 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين في أطراف عصب القشرة الدماغية للجرذان. يتم إجراء مزيد من التحقيق ومناقشة الآليات الأساسية المحتملة لتثبيط إشيناكوسيد بوساطة إطلاق الغلوتامات هنا.

Cistanche deserticola له العديد من التأثيرات ، انقر هنا لمعرفة المزيد

3.1. الآليات الكامنة وراء تثبيط إشيناكوسايد بوساطة إطلاق الجلوتامات لإطلاق الغلوتامات

يستحضر بواسطة 4- aminopyridine مكونان: مكون Ca2 زائد معتمد من الناحية الفسيولوجية ، والذي يتم إنتاجه من خلال طرد الخلايا للحويصلات المشبكية التي تحتوي على الغلوتامات ؛ ومكوِّن Ca2 بالإضافة إلى مستقل ، والذي ينشأ من إزالة الاستقطاب لفترات طويلة مما يتسبب في حدوث تحول محتمل بوساطة الغشاء لحالة ناقل الغلوتامات نحو الاتجاه الخارجي ، مما يؤثر على تدفق الغلوتامات في العصارة الخلوية [31]. هنا ، لاحظنا ذلكإشنكوسايدلم يثبط بشكل ملحوظ 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين في وجود وسط خالٍ من الكالسيوم + (Ca2 بالإضافة إلى إطلاق مستقل). علاوة على ذلك ، لوحظإشنكوسايدتم منع التثبيط الوسيط 4- لإطلاق الغلوتامات الذي يسببه أمينوبيريدين بشكل فعال بواسطة bafilomycin A1 (الذي يستنفد محتوى الغلوتامات في الحويصلات المشبكية) ، ولكن ليس بواسطة DL-TBOA (الذي يثبط بشكل غير انتقائي جميع الأنواع الفرعية الناقلة للأحماض الأمينية المثيرة). هذه النتائج تشير إلى ذلكإشنكوسايديؤثر على الإفراز المعتمد على Ca2 plus لإطلاق الغلوتامات دون التأثير على التدفق الخلوي المعتمد على Ca2 plus للجلوتامات من خلال عكس ناقل الغلوتامات بغشاء البلازما في العصب. في المحطات المشبكية ، يعمل تثبيط قناة Na plus أو تنشيط قناة K plus على استقرار استثارة الغشاء وبالتالي تقليل دخول Ca2 بالإضافة إلى إطلاق الناقل العصبي [32،33]. لذلك ، فإن الآلية الكامنة الكامنة وراء ذلكإشنكوسايديتضمن تثبيط إطلاق الغلوتامات بوساطة تقليل استثارة المشابك. ومع ذلك ، لا يمكن الدفاع عن هذا الاحتمال على أساس ملاحظتين: (1) 4- إزالة الاستقطاب المحتمل للغشاء الناجم عن أمينوبيريدين ، والذي تم قياسه باستخدام الصبغة الحساسة المحتملة للغشاء ، لم يتأثر DiSC3 (5) بإضافةإشنكوسايد؛ و (2) لم يؤثر إكينكوسايد على 4- إطلاق الكالسيوم الذي يسببه أمينوبيريدين بالإضافة إلى إطلاق الغلوتامات المستقل ، وهو أحد مكونات الإطلاق الذي يعتمد على إمكانات الغشاء فقط [31]. إذا لم يكن التأثير ناتجًا عن تثبيط استثارة المشابك ، فقد يتجلى من خلال تقليل نشاط Cav2.2 (نوع N) و Cav2.1 (P / Q-type) Ca2 plus بالإضافة إلى إفراز الغلوتامات في النهايات العصبية [34 - 36]. باستخدام fura -2 ، نوضح ذلكإشنكوسايديقلل بشكل ملحوظ 4- الزيادة التي يسببها أمينوبيريدين في تركيز الكالسيوم زائد. بالإضافة إلى ذلك ، تظهر بياناتنا أن التأثير المثبط لـإشنكوسايدعلى 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين انخفض من 42.4 بالمائة 2.3 بالمائة إلى 12.1 بالمائة 3.9 بالمائة بعد التعرض لمانع من Cav2.2 (نوع N) و Cav2.1 (نوع P / Q) Ca2 قنوات بلس. علاوة على ذلك ، لاحظنا ذلكإشنكوسايداستمر في تثبيط 4- إطلاق الغلوتامات الذي يثيره أمينوبيريدين في وجود مثبطات إطلاق Ca2 plus داخل الخلايا. تشير هذه النتائج إلى أن القمع المتزامن لـ Cav2.2 (نوع N) و Cav2.1 (نوع P / Q) Ca2 بالإضافة إلى نشاط القناة هو الآلية المحتملة الكامنة وراءإشنكوسايدتثبيط إطلاق الغلوتامات بوساطة. ومع ذلك ، فإن التنشيط المشترك لـ Cav2.2 (نوع N) و Cav2.1 (نوع P / Q) Ca2 بالإضافة إلى نشاط القناة لا يمكن أن يمنع عملإشنكوسايدتماما. وبالتالي ، قد تشارك أنواع أخرى غير محددة من قنوات Ca2 plus أو مسارات ما قبل المشبكية الأخرى في التثبيط. على سبيل المثال ، توجد مستقبلات GABAA في مستوى ما قبل المشبكي ، وقد ثبت أن تنشيطها يمنع Ca2 بالإضافة إلى تدفق وإطلاق الغلوتامات [37]. في هذه الدراسة ، لم تمنع مضادات مستقبلات GABAA SR95531 و bicuculline تثبيط إفراز الغلوتامات بوساطة إشيناكوزيد ، مما يشير إلى أن مستقبلات GABAA لا تشارك في تقليل نشاط قناة Ca2 المعتمد على الجهد وفي تثبيط إطلاق الغلوتامات لاحقًا.

ينشط دخول Ca2 plus من خلال قنوات Ca2 plus المعتمدة على الجهد العديد من كينازات البروتين المرتبطة بإفراز الغلوتامات في الأطراف العصبية بما في ذلك بروتين كيناز المنشط بالميتوجين ، وبروتين كيناز C ، وبروتين كيناز أ.إشنكوسايدتثبيط بوساطة لإطلاق الغلوتامات ؛ ومع ذلك ، فإن مثبط بروتين كينيز PD98059 أو مثبط بروتين كيناز أ H89 كان غير فعال. علاوة على ذلك ، هذا. J. مول. علوم. انخفض عام 2016 ، 17 ، 1006 8 من 13 4- الفسفرة المستحثة بأمينوبيريدين لبروتين كيناز سي في السينابتوسومات بعد المعالجة المسبقة باستخدامإشنكوسايدبتركيز فعال لتثبيط إفراز الغلوتامات. لذلك ، فإن مسار الإشارات الخاص بـإشنكوسايدقد يشمل تثبيط إفراز الغلوتامات بوساطة بروتين كيناز سي. يعتبر بروتين كيناز سي نظام إشارات مهم داخل الخلايا موجود على مستوى ما قبل المشبكي وله دور حاسم في خروج الخلايا بالناقل العصبي. على سبيل المثال ، العديد من البروتينات المشبكية المتورطة في تهريب الحويصلة المشبكية أو التجنيد والإخراج الخلوي ، مثل ركيزة C كيناز الغني بالألانين ، يتم فسفرتها بواسطة بروتين كيناز سي [38 ، 39]. يمكن زيادة عملية الفسفرة هذه عن طريق دخول Ca2 زائد المحفز لإزالة الاستقطاب ، مما يسهل إطلاق الغلوتامات [40]. وبالتالي ، يمكننا التكهن بشكل معقول بأن التأثير المثبط لـإشنكوسايدعند إدخال Ca2 plus الذي تمت ملاحظته هنا قد يقلل نشاط بروتين كيناز C وبالتالي إطلاق الجلوتامات.

3.2 الآثار العلاجية

تعتبر السمية المفرطة ، وهي عملية مرضية ناتجة عن الإفراط في إفراز الغلوتامات وتنشيط مستقبلات الغلوتامات ، السبب الرئيسي لموت الخلايا العصبية في اضطرابات الدماغ الحادة والمزمنة مثل السكتة الدماغية وإصابات الدماغ الرضحية ومرض باركنسون وأمراض الزهايمر [13 ، 41] ، والاستراتيجيات العلاجية التي تنطوي على تثبيط إطلاق الغلوتامات قد تكون واعدة استراتيجيات وقائية للأعصاب لعلاج مثل هذه الأمراض.إشيناكوسايدتم التأكد من اختراق الحاجز الدموي الدماغي (BBB) ​​ويظهر تأثيرات اعصاب في مختلف نماذج السمية العصبية في الجسم الحي [8،10-12،42]. على الرغم من أن آلية هذه التأثيرات الواقية للأعصاب ليست مفهومة تمامًا ، فقد تم الإبلاغ عن العديد من الآليات المحتملة بما في ذلك تثبيط الاستجابة الالتهابية ، وتثبيت وظيفة الميتوكوندريا ، ومضادات الأكسدة ، وكسح الجذور الحرة ، ومحاكاة الوظيفة التغذوية العصبية [5،9،12،42]. في الدراسة الحالية ، قد تفسر قدرة إشنكوسايد على تقليل إفراز الغلوتامات من النهايات العصبية جزئيًا آليتها الوقائية للأعصاب. ومع ذلك ، ما إذا كان هذا التأثير يساهم في الإمكانات العلاجية الواضحة لإشنكوسايد في اضطرابات الدماغ المرتبطة بإثارة الجلوتامات ، فإنه يستدعي مزيدًا من البحث.

4. المواد والطرق

4.1 مواد كيميائية

تم شراء Fura -2- acetoxymethyl ester (Fura -2- AM) و 3 '، 3'، 3'-dipropylthiadicarbocyanine iodide [DiSC3 (5)] من Invitrogen (كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). ω-conotoxin MVIIC، rottlerin، 2- [1- (3- dimethylaminopropyl) indol -3- yl] -3- (indol -3- yl) مالييميد ( GF109203X)، 5،6،7، 13- tetrahydro -13- methyl -5- oxo -12 H-indolo [2، 3- a] pyrrolo [3، { تم شراء {27}} carbazole -12- propanenitrile (Go6976) و N - [2- (p bromocinnamylamino) ethyl] -5- isoquinolinesulfonamide (H89) من TocrisBioscience (بريستول ، المملكة المتحدة). Echinacoside ، dantrolene ، DL-threo-beta-benzyl-oxyaspartate (DL-TBOA) ، 7- كلورو -5- (2- كلوروفيني) -1 ، 5- ثنائي هيدرو -4 ، 1- benzothiazepin -2 (3H) -one (CGP37157) ، 2- (2- amino -3- methoxyphenyl) -4 تم شراء H -1- benzopyran -4- واحد) (PD98059) ، إيثيلين جليكول ثنائي (-aminoethyl ether) -N ، N ، N1 ، N 1- حمض رباعي الخليك (EGTA) وجميع الكواشف الأخرى من شركة سيجما الدريتش (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية).

4.2 الحيوانات

تم استخدام ذكور فئران سبراغ داولي البالغة من العمر شهرين. تم إيواء الحيوانات في ظروف بيئية معيارية (22 درجة مئوية ؛ الرطوبة النسبية 50 في المائة ؛ دورة الضوء / الظلام 12 ساعة) والسماح بالوصول غير المحدود إلى الطعام والماء. تم قتل الحيوانات بقطع الرأس وتمت إزالة القشرة الدماغية بسرعة عند 4 درجات مئوية. تمت الموافقة على الإجراءات التجريبية من قبل لجنة فو جين لرعاية الحيوانات المؤسسية واستخدامها (A10259) ، وفقًا لدليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام حيوانات المختبر. تم بذل كل الجهود لتقليل معاناة الحيوانات واستخدام الحد الأدنى من الحيوانات اللازمة لتحقيق نتائج موثوقة.

4.3 الاستعدادات سينابتوزومال

تمت تنقية Synaptosomes من القشرة الدماغية للفئران على تدرجات بيركول المتقطعة كما هو موضح سابقًا [43،44]. باختصار ، تم تجانس الأنسجة في وسط يحتوي على 0. 32 M سكروز (الرقم الهيدروجيني 7.4) ، تم الطرد المركزي لمدة 1 0 دقيقة عند 3 000 ˆ جم (5 {{25) }} 0 0 دورة في الدقيقة في دوار JA 25.5 ؛ Beckman Coulter، Inc. ، ميامي ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية) و 4 درجات مئوية ، وتم طرد الطاف مرة أخرى لمدة 12 دقيقة عند 14500 جم ( 11 ، 000 دورة في الدقيقة في دوار 25.5 JA). تم تعليق الحبيبات برفق في 0.32 م سكروز (الرقم الهيدروجيني 7.4) ، وتم وضع قسامة من هذا المعلق المتشابك (2 مل) على تدرج متقطع بنسبة 3 مل بيركول يحتوي على 0.32 م سكروز ، 1 مم EDTA ، 0.25 مم DL-dithiothreitol ، و 3 في المائة و 10 في المائة و 23 في المائة بيركول (درجة الحموضة 7.4). بعد الطرد المركزي عند 32500 جم (16500 دورة في الدقيقة في دوار JA 20.5) لمدة 7 دقائق عند 4 درجات مئوية ، تمت استعادة السينابتوسومات من بين 10 في المائة و 23 في المائة من نطاقات بيركول ، وتم تخفيفها في الحجم النهائي 30 مل من وسط المخزن المؤقت HEPES (140 ملي كلوريد الصوديوم ، 5 ملي كلوريد الصوديوم ، 5 ملي مولار NaHCO3 ، 1 ملي MgCl2 6H2O ، 1.2 ملي مولار Na2HPO4 ، 10 ملي جلوكوز ، و 10 ملي مولار HEPES (الرقم الهيدروجيني 7.4)). بعد مزيد من الطرد المركزي عند 27 ، 000 ˆ جم (15000 دورة في الدقيقة في JA 25.5) لمدة 10 دقائق ، تم تعليق بيليه المشبك في 3 مل من وسط منظم HEPES ، وتم تحديد محتوى البروتين باستخدام اختبار برادفورد. أخيرًا ، تم تخفيف 0.5 مجم من تعليق synaptosomes في 10 مل من وسط منظم HEPES وطرده عند 3000 ميكروغرام (5000 دورة في الدقيقة في دوار JA 20.1) لمدة 10 دقائق. تم التخلص من المادة الطافية ، وتم تخزين الكريات المحتوية على المشابك على الجليد واستخدامها في غضون 4-6 ساعات.

4.4. إطلاق الجلوتامات

تم تقييم إطلاق الغلوتامات عن طريق قياس التألق عبر الإنترنت كما هو موضح سابقًا [45،46]. تم تعليق حبيبات المشابك في وسط المخزن المؤقت HEPES (0. 5 مجم / مل) وتم احتضانها مسبقًا عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق في وجود 16 ميكرومتر من الألبومين المصل البقري لربط أي أحماض دهنية حرة تم إطلاقها من المشابك أثناء فترة الحضانة المسبقة. تم نقل قسامة 2- مل من السينابتوسومات إلى كفيت مقلوب يحتوي على 2 ملي مولار من NADP زائد ، و 50 وحدة من نازعة هيدروجين الجلوتامات ، و 1.2 ملي مولار من CaCl2 ، وتم قياس الفلورة FL لـ NADPH في Perkin-Elmer LS {{ 14}} مقياس التألق الطيفي (PerkinElmer Life and Analytical Sciences ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) بأطوال موجية للإثارة والانبعاثات تبلغ 340 و 460 نانومتر ، على التوالي. نظرًا لأن المشابك العصبية ليست قابلة للتحفيز الكهربائي ، فقد تم استخدام أمينوبيريدين مانع قنوات البوتاسيوم 4- لتحفيز إطلاق الجلوتامات. 4- يعمل أمينوبيريدين على زعزعة استقرار إمكانات الغشاء ويُعتقد أنه يتسبب في إزالة الاستقطاب التلقائي المتكرر للصوديوم بالإضافة إلى إزالة الاستقطاب المعتمد على القناة والتي تقترب عن كثب من إزالة الاستقطاب في الجسم الحي للطرف المشبكي الذي يؤدي إلى تنشيط قنوات Ca2 زائد المعتمدة على الجهد وإطلاق ناقل عصبي [47 ]. تم الحصول على البيانات على فترات 2 ثانية. تمت إضافة معيار الجلوتامات الخارجية (5 نانومول) في نهاية كل تجربة. تم استخدام قيمة التغيير الفلوري الفلوري الناتج عن الإضافة القياسية لحساب الجلوتامات المنبعثة على شكل نانومولات من الغلوتامات لكل مليغرام من البروتين المتشابك (nmol / mg). قيم الإطلاق المذكورة في النص هي المستويات التي تم بلوغها في حالة مستقرة بعد 5 دقائق من إزالة الاستقطاب (نانومول / ملغ / 5 دقائق). تم تحليل البيانات التراكمية باستخدام جداول بيانات Lotus 1-2-3 (IBM ، White Plains ، NY ، الولايات المتحدة الأمريكية) و MicroCal Origin (OriginLab Corporation ، Northampton ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية).

4.5 إمكانات غشاء البلازما

تم تحديد إمكانات غشاء البلازما بصبغة حساسة لاحتمال الغشاء ، DiSC3 (5) [48]. تم إعادة تعليق Synaptosomes في وسط عازلة HEPES ، وتم نقل قسامات 2 مل إلى كفيت مقلوب يحتوي على 5 ميكرومتر من DiSC3 (5) عند 37 درجة مئوية في مقياس طيف Perkin-Elmer LS -55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences ، Waltham ، ماجستير ، الولايات المتحدة الأمريكية). بعد السماح للخليط بالتوازن لمدة 3 دقائق ، تم تحديد مضان FL عند أطوال موجية للانبعاث والإثارة تبلغ 646 و 674 نانومتر ، على التوالي. تم جمع البيانات على فترات 2 ثانية. تم تحليل البيانات التراكمية باستخدام MicroCal Origin (OriginLab Corporation ، Northampton ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) وتم التعبير عنها بوحدات FL الفلورية.

4.6 Cytosolic Ca2 بالإضافة إلى تركيز ([Ca2 plus] C)

تم قياس [Ca2 plus] C باستخدام Ca2 plus fura -2. تم تحضين Synaptosomes (0. 5 مجم / مل) مسبقًا في وسط منظم HEPES يحتوي على 5 ميكرومتر فوارة -2 و 0. 1 ملي كلوريد الكالسيوم ، لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في اختبار التحريك الة النفخ. بعد تحميل fura -2 ، تم طرد synaptosomes في جهاز طرد مركزي دقيق لمدة 30 ثانية عند 3000 ميكروجرام (5000 دورة في الدقيقة). تم إعادة تعليق الحبيبات المشبكية في وسط عازل HEPES ، وتم تقليب المعلق المشبكي في كوفيت منظم حراريًا في مقياس طيف Perkin-Elmer LS -55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تمت إضافة CaCl (1 ملي مولار) بعد 3 دقائق وتم إجراء إضافات أخرى بعد 10 دقائق إضافية. تم تجميع بيانات الإسفار عند أطوال موجات إثارة تبلغ 340 و 380 نانومتر (الطول الموجي للانبعاث 505 نانومتر) على فترات 2 ثانية. [Ca2 plus] تم حساب C (نانومتر) باستخدام إجراءات المعايرة [49] والمعادلات الموصوفة سابقًا [50]. تم تحليل البيانات التراكمية باستخدام MicroCal Origin (OriginLab Corporation ، Northampton ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية).

4.7 النشاف الغربي

تم تجانس Synaptosomes في محلول تحلل (10 مم HEPES عازلة ، ودرجة الحموضة 7.4) ، و 1 بالمائة Triton X -100 ، وخليط مثبط البروتياز. تم توضيح Lysates عن طريق الطرد المركزي ، وتم تحديد تركيز البروتين باستخدام مجموعة فحص البروتين (مختبرات Bio-Rad ، هرقل ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم فصل كميات متساوية من البروتينات بواسطة الرحلان الكهربائي لهلام دوديسيل كبريتات-بولي أكريلاميد (SDS-PAGE) ونقلها إلى غشاء النيتروسليلوز. تم حظر الأغشية بمحلول ملحي من نوع Tris يحتوي على 5 في المائة من الحليب قليل الدسم واحتضانه بأجسام مضادة أولية مناسبة (فوسفوكروتين كيناز C (مقلاة) ، 1: 3000 ، NOVUS Biologicals Inc. ، Beverly ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) طوال الليل في 4 درجة مئوية. بعد ثلاث غسلات في محلول ملحي من نوع Tris ، تمت معالجة الغشاء بعد ذلك باستخدام الجسم المضاد المترافق مع بيروكسيداز الفجل الثانوي (1: 3000) لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. تم بعد ذلك غسل الأغشية ثلاث مرات على الأقل بمحلول ملحي مخزّن من تريس وتصور باستخدام نظام التلألؤ الكيميائي المحسن (أميرشام ، باكينجهامشير ، المملكة المتحدة). تم تحميل جزء من العينات وفحصها بجسم مضاد مضاد لـ PKC للكشف عن PKC كعنصر تحكم في التحميل. تم تقييم مستوى التعبير أو الفسفرة بواسطة كثافة النطاق ، والتي تم قياسها بواسطة قياس الكثافة. تم تحليل قياس الكثافة الكمية للنطاقات باستخدام برنامج Syngene (Synoptics ، كامبريدج ، المملكة المتحدة).

4.8 تحليل احصائي

تم الحصول على البيانات من تحضير سينابتوزوم واحد ولم تكن مستقلة عن بعضها البعض. لاختبار أهمية تأثير الدواء مقابل السيطرة ، تم استخدام اختبار الطالب ثنائي الذيل. عندما كانت هناك حاجة إلى مقارنة إضافية (مثل ما إذا كان العلاج الثاني قد أثر على عمل إشنكوسايد) ، تم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه متبوعًا باختبار Tukey. اكتمل التحليل عبر برنامج SPSS (17. 0 ؛ SPSS Inc. ، شيكاغو ، إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكية). يتم التعبير عن البيانات على أنها تعني ˘ SEM ؛ تم تقييم الأهمية عند p <0. 05="" لجميع="" المقاييس="">

5. الاستنتاجات

هذه هي الدراسة الأولى التي تثبت ذلكإشنكوسايديمنع إطلاق الغلوتامات من المشابك القشرية المخية للجرذان عن طريق تقليل تدفق Ca2 بالإضافة إلى قنوات Cav2.2 و Cav2.1 ، ويعتمد تثبيط الإطلاق هذا على الأرجح على قمع مسار البروتين كيناز C ، على الأقل جزئيًا. يعتبر الاكتشاف الحالي ذا قيمة لأنه يوفر نظرة ثاقبة جديدة لآليات عمل إشنكوسايد في الدماغ.

شكر وتقدير:تم دعم هذا العمل بمنحة من وزارة العلوم والتكنولوجيا (معظمها 103-2320- ب -030-001 MY3).

الكاتب الاشتراكات:قام كل من Tzu Yu Lin و Su Jane Wang بوضع تصور للتجارب وصمماها ؛ أجرى تشنغ وي لو التجارب ؛ قام كل من Cheng Wei Lu و Shu Kuei Huang بتحليل البيانات. كتبت سو جين وانغ الورقة.

تضارب المصالح:أعلن المؤلفون أنه لا يوجد اختلاف في الاهتمامات.

تضارب المصالح: يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح.

مراجع

1. Tu، PF؛ وانغ ب. دياما ، ت. تشانغ ، زج ؛ لو ، ZC تحليل جليكوسيدات فينيلثانويد منHerba cistancheبواسطة RP-HPLC. اكتا فارم. الخطيئة. 1997 ، 32 ، 294-300.

2. دالبي براون ، إل. باريت ، هـ. Landbo ، AK ؛ ماير ، أ. Molgaard ، P. التأثيرات المضادة للأكسدة التآزرية للكاميدات ومشتقات حمض الكافيك وكسور السكاريد من إشنسا بوربوريا على الأكسدة في المختبر للبروتينات الدهنية منخفضة الكثافة البشرية. J. أجريك. الغذاء تشيم. 2005 ، 53 ، 9413-9423. [CrossRef] [PubMed]

3. داباس ، ب. ؛ Dall'Acqua، S.؛ بولا ، ر. أجوستينيس ، سي ؛ Perissutti ، B. ؛ Invernizzi، S.؛ جراسي ، جي ؛ Voinovich ، D. المناعة بوساطة شراب عشبي يحتوي على مستخلص جذر إشنسا موحد: دراسة تجريبية في البشر الأصحاء على التعبير الجيني للسيتوكين. طب النبات 2014 ، 21 ، 1406-1410. [CrossRef] [PubMed]

4. هو ، WJ ؛ فانغ ، TH ؛ Tu، PF تقدم البحث في الأنشطة الدوائية لإشنكوسايد. الصين J. تشين. ماطر. ميد. 2009 ، 34 ، 476-479.

5. دنغ ، م. تشاو ، جي. Tu ، PF ؛ جيانغ ، واي ؛ لي ، ZB ؛ وانج ، YH Echinacoside ينقذ الخلايا العصبية SHSY5Y من موت الخلايا المبرمج الناجم عن TNFalpha. يورو. فارماكول. 2004 ، 505 ، 11-18. [CrossRef] [PubMed]

6. كو ، كا ؛ سونغ ، SH ؛ بارك ، JH ؛ كيم ، SH ؛ لي ، كنتاكي Kim ، YC في الأنشطة الوقائية للأعصاب في المختبر من جليكوسيدات الفينيثانويد من Callicarpa dichotoma. بلانتا ميد. 2005 ، 71 ، 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang، YH؛ شوان ، ZH ؛ تيان ، س. Du، GH Echinacoside يحمي من 6- خلل الميتوكوندريا الناجم عن الهيدروكسيدوبامين والاستجابات الالتهابية في خلايا PC12 عن طريق تقليل إنتاج ROS. دليل. تكملة مقرها. بديل. ميد. 2015 ، 2015 ، 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu، M. لو ، سي ؛ إن التعرض العابر لإشنكوسايد كافٍ لتنشيط إشارات Trk وحماية الخلايا العصبية من الروتينون. J. نيوروتشيم. 2013124 ، 571-580. [CrossRef] [PubMed]

9- قنغ X. تيان ، العاشر ؛ تو ، ص ؛ Pu ، X. التأثيرات الوقائية العصبية لإشنكوسايد في نموذج MPTP الفأري لمرض باركنسون. يورو. فارماكول. 2007 ، 564 ، 66-74. [CrossRef] [PubMed]

10. وي ، ل. تشين ، هـ. جيانغ ، واي ؛ Tu ، PF ؛ تشونغ ، م. دو ، ياء ؛ ليو ، ف. وانغ ، إل. Liu ، CY تأثيرات إشنكوسايد على مستويات مركزية النسيج من الكتلة النشطة في الفئران انسداد الشريان الدماغي الأوسط. بيوميد. بيئة. علوم. 2012 ، 25 ، 238-244. [PubMed]

11. وو ، كر ؛ لين ، HC ؛ Su ، MH الانقلاب بواسطة المستخلصات المائية لـCistanche tubulosaمن العجز السلوكي في نموذج الفئران الشبيه بمرض الزهايمر: الصلة بترسب الأميلويد ووظيفة الناقل العصبي المركزي. تكملة BMC. بديل. ميد. 2014، 14، 202. [CrossRef] [PubMed]

12. تشاو ، س. جاو ، ياء ؛ لي ، دبليو. كاي ، د.تأثيرات التغذية العصبية والتأثيرات العصبية لإشيناكوسايد في نموذج الماوس MPTP تحت الحاد لمرض باركنسون. Res الدماغ. 2010 ، 1346 ، 224-236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum ، BS Glutamate كناقل عصبي في الدماغ: مراجعة لعلم وظائف الأعضاء وعلم الأمراض. نوتر. 2000 ، 130 ، 1007 ثانية -1015 جنوبًا. [PubMed]

14. لي ، د. شيم ، MS ؛ كيم ، كنتاكي نوح ، YH ؛ كيم ، هـ. كيم ، سي. وينريب ، RN ؛ يثبط الإنزيم المساعد Q10 Ju ، WK سمية الغلوتامات وتغيير الميتوكوندريا الناتج عن الإجهاد التأكسدي في نموذج الفأر من الجلوكوما. التحقيق. طب العيون. فيس. علوم. 2014 ، 55 ، 993-1005. [CrossRef] [PubMed]

15. تشوي ، دويتشه فيله الكالسيوم وإصابات العصبونات السامة. آن. نيويورك أكاد. علوم. 1994 ، 747 ، 162-171. [CrossRef] [PubMed]

16. لاو ، أ. Tymianski ، M. مستقبلات الجلوتامات ، السمية العصبية ، والتنكس العصبي. بفلوجرز. قوس. 2010 ، 460 ، 525-542. [CrossRef] [PubMed]

17. ساتلر ، ر. Tymianski ، M. الآليات الجزيئية لموت الخلايا العصبية المثيرة للجلوتامات بوساطة مستقبلات الغلوتامات. مول. نيوروبيول. 2001 ، 24 ، 107-129. [CrossRef]

18. Schauwecker، PE Neuroprotection بواسطة مضادات مستقبلات الغلوتامات ضد موت الخلايا السامة الناتجة عن النوبات في الدماغ المتقدم في السن. إكسب. نيورول. 2010 ، 224 ، 207-218. [CrossRef] [PubMed]

19. يجانيه ، ف. نيكباخت ، ف. بهمانبوي. س.؛ راستجار ، ك. Namavar ، R. التأثيرات الوقائية العصبية لـ NMDA والمجموعة الأولى من مضادات مستقبلات الجلوتامات الأيضية ضد التنكس العصبي الناجم عن الهوموسيستين في حصين الفئران: دراسة في الجسم الحي. J. مول. نيوروسسي. 2013 ، 50 ، 551-557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble، A. دور الإثارة في أمراض التنكس العصبي: الآثار المترتبة على العلاج. فارماكول. هناك. 1999 ، 81 ، 163-221. [CrossRef]

21. Muir، KW الأساليب العلاجية القائمة على الغلوتامات: التجارب السريرية مع مضادات NMDA. بالعملة. رأي. فارماكول. 2006 ، 6 ، 53-60. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez، JC؛ إيجيا ، ياء ؛ ديل كارمن جودينو ، م. فرنانديز جوميز ، FJ ؛ سانشيز برييتو ، ياء ؛ جانديا ، إل. جارسيا ، إيه جي ؛ الأردن ، ياء ؛ Hernandez-Guijo ، JM Neuroprotectant minocycline يثبط النقل العصبي الجلوتاماتيرجي و Ca2 بالإضافة إلى الإشارات في الخلايا العصبية الحُصينية. يورو. J. نيوروسسي. 2007 ، 26 ، 2481-2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu، CW؛ لين ، تاي ؛ يقلل وانج ، إس جيه ميمانتين إطلاق الغلوتامات من خلال تثبيط دخول Ca2 بالإضافة إلى دخول البروتين كيناز C المعتمد على الجهد في أطراف أعصاب القشرة الدماغية للجرذان: آلية مستقلة عن مستقبلات NMDA. نيوروتشيم. كثافة العمليات 2010 ، 57 ، 168-176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang، SJ؛ Sihra، TS مضاد مستقبلات الغلوتامات 5 غير التنافسي (E) -2- methyl -6- Styryl-pyridine (SIB1893) يحد من إطلاق الغلوتامات من خلال تثبيط Ca2 المعتمد على الجهد بالإضافة إلى الدخول في أطراف الأعصاب القشرية المخية للجرذان (synaptosomes). فارماكول. إكسب. هناك. 2004 ، 309 ، 951-958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley، PR.؛ جارفي ، بي ؛ هيث ، جي دبليو ؛ كيد ، جي جي ؛ Rostas ، JA طريقة سريعة لعزل المشابك على تدرجات بيركول. Res الدماغ. 1986 ، 372 ، 115-129. [CrossRef]

26. Araque، A. لي ، ن. دويل ، آر تي ؛ Haydon ، إطلاق الغلوتامات المعتمد على البروتين PG SNARE من الخلايا النجمية. J. نيوروسسي. 2000 ، 20 ، 666-673. [PubMed]

27. Dunlop، J. النهج العلاجية القائمة على الغلوتامات: استهداف نظام نقل الغلوتامات. بالعملة. رأي. فارماكول. 2006 ، 6 ، 103-107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi، R.؛ Ronca-Testoni، S. الشبكة الساركوبلازمية Ca2 plus channel / ryanodine receptor: التحوير بواسطة المؤثرات الذاتية والأدوية والحالات المرضية. فارماكول. القس 1997 ، 49 ، 1-51. [PubMed]

29. مروحة ، واي. لي ، ياء ؛ تشانغ ، YQ ؛ جيانغ ، ل. تشانغ ، ي. يان ، CQ بروتين كيناز دلتا C توسط السمية الخلوية 6- هيدروكسيدوبامين عن طريق تنشيط كيناز 1/2 مستمر خارج الخلية منظم بالإشارة في خلايا PC12. نيورول. الدقة. 2014 ، 36 ، 53-64. [CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt، M .؛ مولر ، هج. كيلباسا ، ك. زانغ ، ر. كيتشتاين ، دبليو. رينكي ، جي ؛ ماركس ، F. Rottlerin ، مثبط بروتين كينيز جديد. بيوتشيم. بيوفيز. الدقة. كومون. 1994 ، 199 ، 93-98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls، DG؛ Sihra، TS؛ سانشيز-برييتو ، ج. إطلاق الجلوتامات المعتمد على الكالسيوم والمستقل من السينابتوسومات التي تتم مراقبتها بواسطة قياس التألق المستمر. J. نيوروتشيم. 1987 ، 49 ، 50-57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll، RA اقتران مستقبلات الناقل العصبي بالقنوات الأيونية في الدماغ. علم 1988 ، 241 ، 545-551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu، LG؛ Saggau ، P. تثبيط قبل المشبكي لإطلاق ناقل عصبي. الاتجاهات العصبية. 1997 ، 20 ، 204-212. [CrossRef]

34. Turner، TJ؛ Dunlap ، K. التوصيف الدوائي لقنوات الكالسيوم قبل المشبكي باستخدام قياسات كيميائية حيوية فرعية من الإفراز العصبي المشبكي. علم الأدوية العصبية 1995 ، 34 ، 1469-1478. [CrossRef]

35. ميلان ، سي ؛ Sanchez-Prieto ، J. الاقتران التفاضلي لقنوات الكالسيوم من النوع N و P / Q لإخراج الجلوتامات في القشرة الدماغية للجرذان. نيوروسسي. بادئة رسالة. 2002 ، 330 ، 29-32. [CrossRef]

36. Vazquez، E.؛ يستهدف التعديل قبل المشبكي لإطلاق الغلوتامات قنوات الكالسيوم المختلفة في أطراف الأعصاب القشرية المخية للجرذان. يورو. J. نيوروسسي. 1997 ، 9 ، 2009-2018. [CrossRef] [PubMed]

37. لونغ ، ب. ميرسر ، أ. بيجوم ، ر. ستيفنس ، جي. Sihra، TS؛ Jovanovic ، JN Nerve Terminal GABAA تقوم مستقبلات GABAA بتنشيط الإشارات المعتمدة على Ca2 plus / Calmodulin لتثبيط Ca2 بالإضافة إلى التدفق وإطلاق الجلوتامات. J. بيول. تشيم. 2009 ، 284 ، 8726-8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner، JR؛ زاوية ، جم ؛ أسود ، إد ؛ جويال ، جيه إل ؛ أكياس ، ديسيبل Madara ، تنظيم JL PKC المعتمد على المقاومة بطريق الظهارة: أدوار MLC و MLC كيناز. أكون. J. Physiol. 1999 ، 277 ، ج 554- C562. [PubMed]

39. فوغان، PF؛ ووكر ، ج. بيترز ، سي. تنظيم إفراز الناقل العصبي بواسطة بروتين كيناز سي مول. نيوروبيول. 1998 ، 18 ، 125-155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey، ET؛ Sihra، TS؛ نيكولز ، دي جي ؛ يتم التوسط في فسفرة Pocock و JM لـ synapsin I و MARCKS في النهايات العصبية عن طريق إدخال Ca2 plus عبر قناة Ca2 plus الحساسة لـ Aga-GI والتي تقترن بإخراج الغلوتامات. FEBS ليت. 1994 ، 353 ، 264-268. [CrossRef]

41. Obrenovitch، TP؛ Urenjak، J. تغيير انتقال الجلوتامات في الاضطرابات العصبية: من الغلوتامات المرتفعة خارج الخلية إلى الفعالية المشبكية المفرطة. بروغ. نيوروبيول. 1997 ، 51 ، 39-87. [CrossRef]

42. Zhang، D.؛ لي ، ح. Wang ، JB Echinacoside يثبط الرجفان النشواني لـ HEWL ويحمي من السمية العصبية التي يسببها Ap. كثافة العمليات J. بيول. ماكرومول. 2015 ، 72 ، 243-253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin، TY؛ لو ، CW ؛ وانغ ، CC ؛ لو ، جيه إف ؛ Wang ، SJ Hispidulin يمنع إطلاق الغلوتامات في أطراف العصب القشري المخي للجرذان. توكسيكول. تطبيق فارماكول. 2012 ، 263 ، 233-243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang، CY؛ لين ، تاي ؛ لو ، CW ؛ هوانغ ، SK ؛ وانغ ، واي سي ؛ تشو ، SS ؛ Wang، SJ Hesperidin يثبط إطلاق الغلوتامات ويمارس حماية عصبية ضد الإثارة التي يسببها حمض كينيك في قرن آمون من الفئران. علم السموم العصبية 2015،2015 ، 157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls، DG؛ Sihra ، TS تمتلك Synaptosomes تجمع خارجي للخلايا من الغلوتامات. Nature 1986، 321، 772-773. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang، CC؛ كو ، جيه آر ؛ يمنع وانج ، إس جيه ديميبون ، دواء مضاد للهستامين ، إفراز الغلوتامات في أطراف الأعصاب القشرية المخية للجرذان. يورو. فارماكول. 2014 ، 734 ، 67-76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs، GR؛ باري ، ا ف ب ؛ فان ميغم ، FJ ؛ ماك ماهون ، HT ؛ Nicholls ، DG إمكانات العمل المتكرر في النهايات العصبية المعزولة في وجود 4- aminopyridine: التأثيرات على العصارة الخلوية Ca2 plus وإطلاق الجلوتامات. J. نيوروتشيم. 1989،53 ، 1693-1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman، KE؛ سكوت ، إل جي ؛ هيكيلا ، جي إي ؛ Heinonen ، E. الاعتماد الأيوني على إمكانات الغشاء والاستجابات المرتبطة بمستقبلات الغلوتامات في synaptoneurosomes كما تم قياسها باستخدام صبغة السيانين ، DiSC2 (5). J. نيوروتشيم. 1987 ، 48 ، 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49- Sihra، TS؛ بوغونيز ، إي. يؤثر Nicholls و DG Localized Ca2 بالإضافة إلى الإدخال بشكل تفضيلي على إزالة الفسفرة من البروتين ، الفسفرة ، وإطلاق الغلوتامات. J. بيول. تشيم. 1992 ، 267 ، 1983-1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz، G .؛ بويني ، م. Tsien، RY جيل جديد من مؤشرات Ca2 plus بخصائص مضان محسنة بشكل كبير. J. بيول. تشيم. 1985 ، 260 ، 3440-3450. [PubMed]