يعرض مستخلص بذور Phoenix Dactylifera L. تأثيرات مضادة للأكسدة ويضعف تكوين الميلانين

هيوي تشون هوانغ1 ، Shr-Shiuan Wang2، تسانغ تشي تساي3وانغ بينغ كو3 و Tsong-Min Chang2,*

الملخص:الخلفية: لم يتم استكشاف طريقة عمل مستخلص بذور Phoenix dactylifera في العناية بالبشرة. الطريقة: استخلاص بذور P. dactylifera L. عن طريق الاستخلاص بالموجات فوق الصوتية. تم تحديد خصائص مضادات الأكسدة في المستخلص بواسطة 2 ، 2- ثنائي فينيل -1- بيكريل هيدرازيل (DPPH) و 2،2′-azino-di - (3- ethylbenzthiazoline sulfonic acid) (ABTS plus) المقايسات وطرق الكسح. كما تم فحص المحتوى الفينولي الكلي ، والقدرة المختزلة ، واستخلاب أيونات الحديد (II) ، وأنواع الأكسجين التفاعلي داخل الخلايا (ROS) - قدرات الكسح. تم تقييم تأثير مستخلص بذور P. dactylifera L. على تكوين الميلانين بطريقة طيفية باستخدام مقايسة نشاط التيروزيناز في الفطر ، وتحديد نشاط التيروزيناز داخل الخلايا ، ومحتوى الميلانين. تم تحليل مستويات التعبير عن البروتينات المرتبطة بتكوين الميلانين بواسطة النشاف الغربي. النتائج: أظهرت النتائج أن بكتيريا P.dactylifera L.يبذل مستخلص البذور قدرة واضحة على مضادات الأكسدة ويقلل بشكل ملحوظ محتوى ROS داخل الخلايا بتركيزات {0}. 245 و 0.49 (مجم / مل). علاوة على ذلك ، قلل المستخلص من تعبير مستقبل الميلانوكورتين 1 (MC1R) ، وعامل النسخ المرتبط بالميكروفيلم (MITF) ، والتيروزيناز ، والبروتين المرتبط بالتيروزيناز -1 (TRP1) ، والبروتين المرتبط بالتيروزيناز -2 ( TRP2) ، ومنع تكون الميلانين في خلايا B16F10. الاستنتاجات: أظهرت نتائجنا أن مستخلص بذور P. dactylifera L. يضعف تكوين الميلانين في خلايا B16F10 عن طريق تقليل تنظيم مسارات إشارات بروتين كيناز A (PKA). وبالتالي ، يمكن استخدام المستخلص كنوع من عامل تبييض البشرة في منتجات العناية بالبشرة.

الكلمات المفتاحية: فينيكس داكتيليفيرا ؛التيروزيناز; الميلانين؛ روس ؛ PKA

cistanche pharma Specialهو نوع من عامل تبييض البشرة.

1 المقدمة

تم استخدام مضادات الأكسدة على نطاق واسع لمنع أو علاج الاضطرابات المرتبطة بالإجهاد التأكسدي في مجالات التجميل والأمراض الجلدية. على مدى العقود القليلة الماضية ، تم استخدام مضادات الأكسدة أيضًا في صناعة مستحضرات التجميل لمنع شيخوخة الجلد أو تأخيرها. يُذكر أن الجذور الحرة وأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) مرتبطة بالعديد من الأمراض ، مثل الشيخوخة والأمراض المرتبطة بالشيخوخة [1]. ومن المثير للاهتمام أن ضرر الجذور الحرة على الجلد الناجم عن الإجهاد الإشعاعي فوق البنفسجي و ROS يلعب دورًا مهمًا في عملية شيخوخة الجلد [2،3]. تم الإبلاغ عن أن مضادات الأكسدة تتداخل مع عملية الأكسدة عن طريق تنظيف الجذور الحرة و ROS أو عن طريق مخلب المعادن المحفزة للأكسدة [4]. ومن ثم ، كانت هناك زيادة كبيرة في عدد تطبيقات مضادات الأكسدة أو المكملات الغذائية المضادة للأكسدة لتقليل الإجهاد التأكسدي أو الضرر الناتج عن الإجهاد التأكسدي في الجسم [5،6]. ومع ذلك ، فقد ثبت أن بعض مضادات الأكسدة الكيميائية ، بما في ذلك أسكوربات الصوديوم ، وثالث بيوتيل هيدروكسيانيسول (BHA) ، وإريثوربات الصوديوم ، وثالث بيوتيل هيدروكسي تولين (BHT) ، تعزز التأثيرات المسببة للسرطان على صحة الإنسان [7]. لذلك ، حدث النمو السريع للدراسات حول مضادات الأكسدة الطبيعية المشتقة من النباتات على مدى العقود الماضية. الأهم من ذلك ، وجد أن الزيادات في مستوى أنواع الأكسجين التفاعلية يمكن أن تسرع من تصبغ الجلد. من بين ROS المشتقة من الخلايا الصباغية والخلايا الكيراتينية ، يحفز أكسيد النيتريك ، NO ، تخليق الميلانين عن طريق تعزيز مستويات التعبير البروتيني للتيروزيناز والبروتين المرتبط بالتيروزيناز 1 (TRP1) [8،9]. تمت دراسة تأثير ROS على إنتاج الميلانين باستخدام مضادات الأكسدة المختلفة ، مثل N-acetyl cysteine ​​، لإلغاء عمل الهرمون المنبه للخلايا الصباغية (-MSH) المستحث بالأشعة فوق البنفسجية.

يتم إنتاج الميلانين وإفرازه بواسطة الخلايا الصباغية التي تتوزع في الطبقة القاعدية من البشرة [11]. أول خطوتين لمسار تكون الميلانين في البشر هما التحلل المائي لـ L-tyrosine إلى 3-4- ثنائي هيدروكسي فينيل ألانين (L-DOPA) وأكسدة L-DOPA إلى o-dopaquinone. Tyrosinase (EC 1.14.18.1) هو إنزيم يحد من المعدل الذي يحفز كلا التفاعلين الأولين أثناء تكوين الميلانين [12]. يلعب الميلانين دورًا حيويًا في حماية الجلد من أضرار أشعة الشمس فوق البنفسجية (UV) وهو مسؤول أيضًا عن تلوين الشعر والجلد والعينين. تم الإبلاغ عن اضطرابات جلدية مختلفة ، مثل البقع العمرية ، والكلف ، والميلانوديرما التالي للالتهابات ، والنمش ، ومواقع الضرر الشعاعي ، الناتجة عن تراكم مستوى مفرط من الميلانين في البشرة [13]. تم استخدام مثبطات تخليق الميلانين بشكل متزايد في منتجات العناية بالبشرة لعلاج أو الوقاية من اضطرابات فرط تصبغ الجلد [14 ، 15]. بالإضافة إلى ذلك ، تم استخدام مضادات الأكسدة ، مثل أربوتين أو حمض الكوجيك [16] ، في علاج فرط التصبغ [17]. في الآونة الأخيرة ، شكلت مستحضرات تبييض البشرة نسبة كبيرة من مستحضرات التجميل. ليس فقط النساء ذوات البشرة الداكنة ، ولكن أيضًا أولئك الذين يحاولون التعامل مع البقع الداكنة على بشرتهم الناتجة عن الأشعة فوق البنفسجية أو الحمل أو زيادة العمر يستفيدون على نطاق واسع من منتجات تبييض البشرة هذه.

يتم تنظيم تكوين الميلانين بواسطة عوامل متعددة. على سبيل المثال ، تم الإبلاغ عن البروتين المرتبط بالتيروزيناز -1 (TRP1) وعامل النسخ المرتبط بالميكروفيلم (MITF) والبروتين المرتبط بالتيروزيناز -2 (TRP2) لتنظيم إنتاج الميلانين [18-20 ]. يتميز مستقبل الميلانوكورتين 1 (MC1R) أيضًا بشكل بارز في تخليق الميلانين الذي يسببه MSH [21]. هناك العديد من مسارات الإشارات التي تدخل في إنتاج الميلانين. من بين مسارات الإشارات المختلفة التي تنظم إنتاج الميلانين ، يلعب تنشيط البروتين كيناز أ (PKA) بوساطة AMP (cAMP) دورًا مهمًا في تنظيم تكون الميلانين [22]. في مسار إشارات cAM-PKA ، يحث cAMP على تنشيط PKA [23] ، والذي يتبعه فسفرة بروتين ربط عنصر استجابة cAMP (CREB). CREB هو عامل نسخ داخل الخلايا يحفز التعبير عن جين عامل صغر العين (MITF) ، وهو أمر مهم في تكون الميلانين. MITF هو عامل نسخ يرتبط بالمناطق المحفزة للجينات الصباغية التيروزيناز ، TRP1 ، و TRP2 ، مما يؤدي إلى تنظيم تعبيرها [24 ، 25]. بعد ذلك ، يزيد محتوى الميلانين داخل الخلايا [26]. تم الإبلاغ عن أن -MSH يزيد من مستويات cAMP وعادة ما يتم تطبيقه لتنشيط فسفرة CREB ثم تحسين مستويات بروتين MITF [27].

يتم تنظيم تعبير MITF من خلال العديد من مسارات الإشارات. يشارك c-Jun N-kinase (JNK) و p38 بروتين كيناز المنشط بالميتوجين (MAPK) في تنشيط تعبير MITF وما يترتب على ذلك من زيادة التعبير عن التيروزيناز. تزيد إشارات تنشيط كيناز المستجيب خارج الخلية (ERK) أيضًا من فسفرة CREB وتعبير MITF اللاحق ، والذي يعدل تخليق الميلانين [28 ، 29]. ومن ثم ، تم الإبلاغ عن العديد من عوامل تبييض الجلد لتثبيط نشاط النسخ MITF عن طريق تقليل مستويات التعبير البروتيني للتيروزيناز ، TRP1 ، و TRP2 من خلال تقليل تنظيم فسفرة MITF بوساطة p38MAPK. بالإضافة إلى ذلك ، تم وصف مسار ERK بالمشاركة في تنظيم MITF أثناء تكون الميلانين [30 ، 31]. تفعيل ERK فسفوريلات MITF ، مما يؤدي إلى تدهور MITF ، مما يؤدي إلى تقليل محتوى الميلانين [32،33].

يمكن أن يكون الإجهاد التأكسدي نتيجة إما للإفراط في إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية أو انخفاض دفاع مضادات الأكسدة [1]. يظل البحث عن مضادات الأكسدة الطبيعية وتطبيقاتها في بؤرة اهتمام العديد من فرق البحث في جميع أنحاء العالم. في الآونة الأخيرة ، كان هناك اهتمام متزايد بالبحث والتطوير للمواد الكيميائية النباتية ، مثل مضادات الأكسدة الطبيعية والمركبات الفينولية من مصادر طبيعية مختلفة ، والتي يمكن استخدامها كمغذيات ، ومستحضرات تجميل مضادة للشيخوخة ، ومنتجات طبية [34]. يعتبر Phoenix dactylifera L. أحد محاصيل الفاكهة الرئيسية المنتجة في الشرق الأوسط وشمال إفريقيا [35 ، 36]. أفادت دراسات سابقة أن ثمار P. dactylifera L. تظهر أنشطة مضادة للأكسدة وكسح الجذور الحرة ومضادة للميكروبات ومضادة للالتهابات [37 ، 38]. لا تقتصر التأثيرات الوظيفية لـ P. dactylifera L. على الثمار نفسها فحسب ، بل تقتصر أيضًا على بذورها ، والتي تعد نوعًا من المنتجات الثانوية للفاكهة [39،40]. نظرًا لخصائصها المضادة للأكسدة ، يمكن أن تعمل مستخلصات بذور P. dactylifera L. كمصدر للمواد المضادة للأكسدة التي تعمل ضد الإجهاد التأكسدي [41-43]. ومع ذلك ، فقد أجريت دراسات قليلة حول تطبيقات بذور P. dactylifera L. لتطوير منتجات مستحضرات التجميل. عادة ما يتم التخلص من هذه البذور كنفايات ، ولكن يتم إبراز أهميتها كمكون تجميلي وظيفي هنا. حتى الآن ، لا توجد تقارير حول آلية عمل مستخلص بذور P. dactylifera L. في مجال مستحضرات التجميل للعناية بالبشرة أو تأثير مستخلص البذور على إنتاج الميلانين. تركزت الدراسة الحالية على تحديد إمكانات مستخلص بذور P. dactylifera L. كمثبط لتكوين الميلانين لصناعة مستحضرات التجميل.

لم يتم بعد دراسة الآليات الكامنة وراء التأثيرات المثبطة لمستخلص بذور P. dactylifera L. على تكوين الميلانين. كان الهدف من الدراسة الحالية هو التحقق من الخصائص المضادة للأكسدة والآليات المحتملة لعمل مستخلص بذور P. dactylifera L. على تكوين الميلانين من خلال فحص منظمات النسخ MITF والفسفرة لمنظمي مسارات إشارات MAPK و PKA.

cistanche الطازجة

2. المواد والأساليب

2.1. المواد الكيميائية والكواشف

تم شراء الكواشف الكيميائية المستخدمة في الدراسة من شركة Sigma-Aldrich Chemical Co. (سانت لويس ، إم إس ، الولايات المتحدة الأمريكية). كانت الأجسام المضادة من Santa Cruz Biotech (سانتا كروز ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) وكان كاشف ECL من ميليبور (بيليريكا ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية).

2.2. تحضير واستخلاص مستخلص بذور P. dactylifera

تم حصاد فواكه P. dactylifera L. المجففة في 2 0 19 من المتاجر التقليدية الموجودة في المدينة المنورة ، المملكة العربية السعودية. تم غسل بذور P. dactylifera L. بالكامل ، وتعريضها لأشعة الشمس ، وتجفيفها بالهواء لمدة يوم واحد ، ثم تجفيفها عند 80 درجة مئوية لمدة ساعتين في فرن. تم سحق البذور المجففة إلى مسحوق ناعم (# 50 شبكة) بمطحنة مخصصة (مطحنة وآلة غربلة Retsch Ultra Centrifugal ، النوع ZM1 ، هان ، ألمانيا). تم جمع المسحوق في قنينة زجاجية محكمة الغلق وتخزينها عند 25 درجة مئوية حتى الاستخدام. تم وضع مسحوق بذور P. dactylifera L. المجفف المسحوق (2 جم) في دورق استخلاص يحتوي على 10 مل من الماء المقطر. بعد ذلك ، تم إجراء الاستخراج بالموجات فوق الصوتية باستخدام طراز ULTRAsonikTM 57H (250 واط ، وسي ، ومستلزمات المبيعات الصناعية ، يوكايبا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). كان تردد العمل 45 كيلو هرتز لمدة 30 دقيقة. بعد الاستخراج ، تم طرد العينات عند 4500 دورة في الدقيقة لمدة 50 دقيقة عند 25 درجة مئوية باستخدام جهاز الطرد المركزي Eppendorf 5810 R (هامبورغ ، ألمانيا). تم جمع المواد الطافية وترشيحها باستخدام مرشح نايلون (حجم المسام: 0.45 ميكرومتر) وتم تركيز المادة المرشحة إلى 9.8 مجم / مل.

2.3 تحليل كروماتوجرافيا سائل فائق الأداء (UPLC) لمستخلص بذور P. dactylifera وحمض الفيروليك

تم تحليل مستخلص بذور P. dactylifera باستخدام فئة ACQUITY UPLC H مع كاشف صفيف ثنائي ضوئي (ووترز ، ميلفورد ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية). كان العمود عبارة عن عمود ACQUITY UPLC BEH C18 ، 13 0 Å ، 1.7 ميكرومتر ، 2.1 مم × 1 0 0 مم. كان الطور المتحرك أ 0.5 في المائة من حمض الأسيتيك ، والطور المتحرك ب كان أسيتونيتريل. بالنسبة للنقطتين الزمنيتين 0 و 5 دقائق ، كانت النسبة المئوية لـ A / B 95/5 ؛ لمدة 20 دقيقة ، كانت نسبة A / B 5/95 ؛ بالنسبة للنقطتين الزمنيتين 21 و 25 دقيقة ، كانت النسبة المئوية لـ A / B 95/5. تم استخدام حمض الفيروليك (1 جزء في المليون) كمعيار إيجابي.

2.4 مقايسة نشاط الكسح DPPH

في هذا الاختبار ، تم استخدام فيتامين ج ({0}. 5 مجم / مل) و BHA (0. 1 مجم / مل) كمعايير مضادة للأكسدة. تمت إضافة مستخلص بذور P. dactylifera L. بتركيزات مختلفة (0. 0 049 و 0.0245 و 0.049 مجم / مل) إلى 2.9 مل من محلول DPPH (60 ميكرومتر). يمكن لمكونات مضادات الأكسدة الموجودة في مستخلص البذور التبرع بالهيدروجين لـ DPPH وتحويل DPPH إلى الشكل المصغر. تم تسجيل الانخفاض الناتج في الامتصاصية عند 517 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV-Vis [44].

2.5 ABTS بالإضافة إلى فحص قدرة الكسح

تمت مقارنة ABTS بالإضافة إلى قدرة الكسح لمستخلص بذور P. dactylifera L. مع تلك الموجودة في فيتامين C ({0}. 9 مجم / مل) و BHA ({{1 0}}. 9 مجم / مل). لهذا الاختبار ، تم استخدام ABTS plus. تم إنتاج الكاتيون أولاً عن طريق تفاعل محلول ABTS (7 ملي مولار) مع بيرسلفات البوتاسيوم (2.45 ملي مولار) ، وتم ترك الخليط في الظلام لمدة 6 ساعات على الأقل قبل الاستخدام. تم قياس الامتصاصية عند 734 نانومتر 1 0 دقيقة بعد خلط تركيزات مختلفة من مستخلص البذور (0.0098 ، 0.049 ، و 0.098 مجم / مل) مع 1 مل من محلول ABTS زائد [45].

2.6. تحديد إجمالي محتوى الفينول

تم تحديد إجمالي محتوى الفينول باستخدام كاشف Folin-Ciocalteu [46] ، واستخدم حمض الغال (2 ميكروغرام / مل) كمعيار إيجابي. تم تحضير تركيزات مختلفة من مستخلص بذور P. dactylifera L. (0. 0 196 ، 0. 0 98 ، و 0.196 مجم / مل) في 80٪ ميثانول ؛ تم نقل 100 ميكرولتر من المستخلص إلى أنبوب اختبار وأضيف وخلط 0.5 مل من كاشف Folin-Ciocalteu (المخفف سابقًا 10- مع ماء منزوع الأيونات). تم السماح للخليط بالوقوف عند درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق ؛ تمت إضافة 1.5 مل من 20 بالمائة كربونات الصوديوم. بعد الوقوف في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين ، تمت قراءة الامتصاصية عند 760 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV-Vis.

2.7. تحديد القدرة المخفضة

تم استخدام فيتامين سي ({0}. 0 0 8 مجم / مل) أو BHA (4.8 مجم / مل) كمعايير إيجابية في هذا الاختبار. تم تحديد القدرة المختزلة لمستخلص البذور وفقًا للطريقة التي وصفها Oyaizu [47]. تم خلط تركيزات مختلفة من مستخلص بذور P. dactylifera L. (0. 0 0 73 ، 0.036 ، 0.073 مجم / مل) مع محلول الفوسفات (2.5 مل ، 0.2 مولار ، الرقم الهيدروجيني 6.6 ) وفيريسيانيد البوتاسيوم [K3Fe (CN) 6] (2.5 مل ، 1 في المائة وزن / حجم). تم تحضين الخليط عند 50 ْم لمدة 20 دقيقة. تمت إضافة Trichloroacetic acid (2.5 مل ، 10 بالمائة وزن / حجم) إلى الخليط ، والذي تم بعد ذلك الطرد المركزي عند 1000 × جم لمدة 10 دقائق. تم خلط الطبقة العليا من المحلول (2.5 مل) مع الماء المقطر (2.5 مل) و FeCl3 (0.5 مل ، 0.1 بالمائة وزن / حجم) ، وتم قياس الامتصاصية عند 700 نانومتر.

2.8. قياس قدرة الحديد (II) المخلب للأيونات

لقياس قدرة مخلب Fe2 plus -ion لمستخلص بذور P. dactylifera L. ، EDTA (0. 0 2 ، 0. 0 4 ، و { {1 0}}. تم ​​استخدام 0 8 مجم / مل) كمعيار إيجابي. تمت إضافة تركيزات مختلفة من مستخلص البذور (0. 0196 ، 0.098 ، و 0.196 مجم / مل) إلى محلول FeCl2 (0.05 مل ، 1 ملي مولار). تم تفاعل خليط التفاعل مع ferrozine (0.1 مل ، 1 ملي مولار) ، ثم تم قياس كمية الخليط إلى 1 مل مع ميثانول وحضنت عند 25 ْم لمدة 10 دقائق. تم قياس امتصاص خليط التفاعل عند 562 نانومتر [48].

2.9 فحص جدوى الخلية

تم إجراء فحص صلاحية الخلية باستخدام طريقة MTT [49]. تم تعريض الخلايا لتركيزات مختلفة من مستخلص بذور P. dactylifera L. (0. 0 49 ، 0. 245 ، و 0.49 مجم / مل) لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية. و 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون في حاضنة مرطبة وأضيف محلول MTT إلى الآبار. تمت إذابة المشتق غير القابل للذوبان من MTT باستخدام الإيثانول- DMSO (محلول خليط 1: 1). تم قياس امتصاص الآبار عند 570 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية. تم الحصول على خلايا B16F10 (BCRC60031) من مركز جمع وبحوث المصادر الحيوية (BCRC) ، مدينة هسينشو ، تايوان. تم الحفاظ على الخلايا في DMEM (Hyclone ، Logan ، UT ، الولايات المتحدة الأمريكية) مع 10 بالمائة من مصل بقري جنيني و 1 بالمائة من المضادات الحيوية. بالإضافة إلى ذلك ، تم أيضًا تقييم تأثير بذور P. dactylifera L. على حيوية خلية B16F10 باستخدام طريقة اختبار استبعاد التريبان الأزرق. بعد العلاج بمستخلص البذور ، تم تجريب الخلايا وطردها لتجميع الحبيبات. تم إعادة تعليق بيليه الخلية في 300 ميكرولتر من وسائط ثقافة الخلايا DMEM. تم خلط قسامة صغيرة من تعليق الخلية (20 ميكرولتر) بلطف مع 10 ميكرولتر من التريبان الأزرق (4 بالمائة في برنامج تلفزيوني). تم حساب عدد الخلايا (الخلايا غير القابلة للحياة كانت زرقاء وخلايا قابلة للحياة غير ملطخة) باستخدام مقياس الكريات الدموية تحت المجهر.

2.10. قياس نشاط الفطر التيروزينيز

تمت إضافة محلول تيروسيناز الفطر (1 0 ميكرولتر ، وحدتان 0 0) إلى 96- صفيحة ميكروية جيدة. احتوى خليط التفاعل على 5 ملي مولار من L-DOPA المذاب في محلول ملحي مخزون الفوسفات (PBS) (5 0 ملي مولار ، الرقم الهيدروجيني 6.8) ، ومستخلص بذور P. dactylifera L. (0. 049، 0.245 ، و 0.49 مجم / مل) ، وحمض كوجيك (200 ملي ؛ 0.03 مجم / مل) ، أو أربوتين (2 مم ؛ 0.54 مجم / مل). تم تحضين خليط الفحص عند 37 ْم لمدة 30 دقيقة وتم قياس امتصاص الدوباكروم الناتج عند 490 نانومتر. تم إجراء قياس نشاط فطر التيروزيناز كما هو موصوف سابقًا [50].

2.11. تحديد محتوى الميلانين

تمت معالجة خلايا B16F1 0 بـ -MSH (1 0 0 نانومتر) لمدة 24 ساعة ثم تمت معالجتها باستخدام مستخلص بذور P. dactylifera L. (0.0245–0.147 مجم / مل) أو أربوتين (0.54 مجم / مل) لمدة 24 ساعة إضافية. بعد العلاج ، تمت إذابة كريات الخلية في محلول هيدروكسيد الصوديوم (1 ن) عند 60 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة. تم الكشف عن محتوى الميلانين عند 405 نانومتر ، كما تم وصفه سابقًا بواسطة Tsuboi [51].

يمنع Cistanche إنتاج الميلانين.

2.12. قياس نشاط التيروزيناز داخل الخلايا

تم تحديد نشاط التيروزيناز داخل الخلايا كما هو موضح سابقًا [52]. تمت معالجة الخلايا بـ -MSH (1 0 0 نانومتر) لمدة 24 ساعة ثم باستخدام مستخلص بذور P. dactylifera L. (0. 0 245–0.147 مجم / مل) أو أربوتين (0.54 مجم / مل) لمدة 24 ساعة. بعد العلاج ، تم خلط مستخلصات الخلايا (100 ميكرولتر) بمحلول L-DOPA المحضر حديثًا (0.1 بالمائة في PBS) وحضنت عند 37 درجة مئوية ، وتم قياس الامتصاصية عند 490 نانومتر.

2.13. تجربة النشاف الغربي

تمت معالجة الخلايا بمستخلص بذور P. dactylifera L. ({0}}. 0 245 ، 0. 0 368 ، 0. { {14}} 49 ، و 0. 147 مجم / مل) أو أربوتين (0.54 مجم / مل) ثم تم حله في برنامج تلفزيوني يحتوي على nondiet P-40 (1٪) ، و deoxycholate الصوديوم (0.5٪) ، ودوديسيل الصوديوم كبريتات (SDS ، 0.1 في المائة) ، أبروتينين (5 ميكروغرام / مل) ، فينيل ميثيل سلفونيل فلوريد (100 ميكروغرام / مل) ، بيبستاتين أ (1 ميكروغرام / مل) ، و EDTA (1 ملم) عند 4 درجات مئوية لمدة 20 دقيقة. تم قياس كمية المحلولات الكلية باستخدام مجموعة BCA الدقيقة (Thermo Fisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تحليل البروتينات (30 ميكروغرام) بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام SDS-polyacrylamide ونقلها كهربائياً إلى غشاء فلوريد البولي فينيلدين. تم حظر الغشاء في حليب خالٍ من الدسم بنسبة 5 في المائة في PBST (PBS مع 0.05 بالمائة توين -20) وتم حضنه عند 4 درجات مئوية طوال الليل باستخدام الأجسام المضادة الأولية التالية المخففة في PBST: MITF Ab (1: 1000) ، TRP1 Ab (1: 6000) ، TRP2 Ab (1: 1000) ، MC1R Ab (1: 500) ، GAPDH Ab (1: 1500) ، tyrosinase Ab (1: 2000) ، p-p38 Ab (1: 500) ، p38 Ab (1: 500) ، p-JNK Ab (1: 500) ، JNK Ab (1: 500) ، p-ERK Ab (1: 500) ، ERK Ab (1: 500) ، p-CERB Ab (1: 500) ، و CERB Ab (1: 200) ، وجميعهم من Santa Cruz Biotech (دالاس ، تكساس ، الولايات المتحدة الأمريكية)). تم الكشف عن الأجسام المضادة المرتبطة بواسطة الجسم المضاد الثانوي المترافق مع بيروكسيداز الفجل (Amersham Corp.) متبوعًا بنظام اكتشاف ECL (Amersham) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة.

2.14. فحص مثبط PKA

عولجت الخلايا بـ -MSH (1 0 0 نانومتر) لمدة 24 ساعة متبوعة بإضافة ساعة واحدة بمقدار 10 ميكرومتر من منظم PKA H89. بعد العلاج ، تمت إضافة مستخلص بذور P. dactylifera L. (0.147 مجم / مل) و H89 إلى الخلايا وحضنت لمدة 23 ساعة إضافية. تم تحديد محتوى الميلانين كما هو موضح أعلاه.

2.15. تحليل احصائي

تم إجراء التحليل الإحصائي باستخدام اختبار Tukey اللاحق ، والذي تم استخدامه لمقارنات البيانات المقاسة ، باستخدام الحزمة الإحصائية للعلوم الاجتماعية (SPSS) الإصدار 22. 0 البرنامج الإحصائي (SPSS Inc.، Chicago، IL، الولايات المتحدة الأمريكية). * p <0. 0="" 5="" اعتبرت="" مهمة="" ،="" **="" p=""><0. 01،="" ***="" p=""><>

3. النتائج

3.1. تحليل UPLC لمستخلص بذور P. dactylifera L.

تظهر نتائج تحليل UPLC في الشكل 1A ، B. الشكل 1A يصور الذروة المتداخلة لمستخلص بذور P. dactylifera L. وحمض الفيروليك عند 330 نانومتر. يوضح الشكل 1B أطياف مسح مماثلة بين 220 و 500 نانومتر لمستخلص بذور P. dactylifera L. وحمض الفيروليك.

3.2 الخصائص المضادة للأكسدة لمستخلص بذور P. dactylifera L.

أظهر النشاط المضاد للأكسدة لمستخلص بذور P. dactylifera L. في المختبر وجود إمكانات مضادة للأكسدة. في اختبار DPPH ، فيتامين ج ({0}. 0 5 ملي مول ؛ 0. 53 مجم / مل) وثالث بيوتيل هيدروكسيانيسول (BHA) (0 تم استخدام .1 مجم / مل) كمعايير إيجابية لمضادات الأكسدة. كانت سعة الكسح DPPH للمستخلص 49.97 ± 2.9 بالمائة و 81.36 ± 0. 56 بالمائة و 78.53 ± 3.83 بالمائة من عنصر التحكم لتركيزات مستخلص 0. 0 {{ 31}} 49 و 0.0245 و 0.049 (مجم / مل) على التوالي. بالمقارنة ، كانت قدرات الكسح لفيتامين C و BHA 90.12 ± 0.31 في المائة و 90.44 ± 0.49 في المائة على التوالي (الشكل 2 أ).

الكاتيون الجذري ABTS لونه أزرق وهو يتفاعل مع معظم مضادات الأكسدة. خلال هذا التفاعل ، يتم تحويل الكاتيون الأزرق ABTS الجذري مرة أخرى إلى شكله المحايد عديم اللون. تمت مراقبة التفاعل بطريقة طيفية. كانت سعة الكسح ABTS بالإضافة إلى المستخلص 5.69 ± 1.36 بالمائة و 18.81 ± 0. 68 بالمائة و 66.82 ± 8.51 بالمائة من عنصر التحكم بتركيزات 0. 0 {{16} }} 98 ، 0. {{2 0} 49 ، و 0. 098 مجم / مل على التوالي. في المقابل ، كانت قدرات الكسح ABTS plus لفيتامين C (0.9 مجم / مل) و BHA (0.9 مجم / مل) 95.52 ± 0.12 بالمائة و 40.3 ± 0.83 بالمائة على التوالي. تشير النتائج الواردة في الشكل 2 ب إلى أن مستخلص البذور يقتات على قدر كبير من ABTS بالإضافة إلى الراديكالية.

لتحديد المحتوى الفينولي الكلي لمستخلص بذور P. dactylifera L. ، تم استخدام حمض الجاليك (2 ميكروغرام / مل) كمعيار إيجابي. تشير النتائج في الشكل 2 ج إلى أن إجمالي محتويات الفينول في 0. 0 196 و 0. {{2 0}} 98 و 0. 196 (مجم / مل) من المستخلص كانت 33.43 ± 2.33 بالمائة ، 117.22 ± 7.81 بالمائة ، 195.4 ± 1 0 91 بالمائة ، على التوالي. كانت معادلات حمض الغاليك (GAE) لتركيزات مستخلصات البذور المذكورة أعلاه 0. 0 68 ± 0.01 ، 0.365 ± 0.01 ، و 0.642 ± 0.03 ، على التوالي (الشكل 2C).

3.3 التأثيرات المثبطة لمستخلص بذور P. dactylifera L. على تكوين الميلانين

توضح النتائج الموضحة في الشكل 4 أ أن 0. 049 ملغم / مل من مستخلص بذور P. dactylifera L.لم يكن له تأثير مثبط على نشاط الفطر التيروزينيز. من ناحية أخرى ، كانت نسب تثبيط الإنزيم 8.34 ± 2.67 بالمائة و 33 ± 2.36 بالمائة من عنصر التحكم 0. 245 و 0. 49 مجم / ملمعاملات مستخلص بذور P. dactylifera L. ، على التوالي. بالإضافة إلى ذلك ، نسب تثبيط التيروزيناز لحمض الكوجيك (2 0 0 ميكرومتر ؛ 0. 0 3 مجم / مل) وأربوتين (2 مم ؛ 0.54 مجم / مل ) كانت 56.26 ± 5.06 في المائة و 64.56 ± 2.88 في المائة من عنصر التحكم ، على التوالي (الشكل 4 أ). وبالتالي ، فإن التركيزات الأعلى من مستخلص بذور P. dactylifera L. (0.245 و 0.49 مجم / مل) يمكن أن تمثل مستويات مثبطة لتيروزيناز الفطر.

في الشكل 4 ب ، أشارت النتائج إلى أن فقط 0. 147 ملغ / مل من مستخلص بذور P. dactylifera L. يمكن أن يقلل بشكل ملحوظ محتوى الميلانين في خلايا سرطان الجلد B16F1 0. بعد العلاج ، كان محتوى الميلانين في خلايا B16F1 0 8 0. 66 ± 5.43 بالمائة من محتوى المجموعة الضابطة. بالنسبة للمعيار الإيجابي ، أربوتين (0. 54 مجم / مل) ، كان محتوى الميلانين المتبقي داخل الخلايا 61.19 ± 8.17 بالمائة من محتوى المجموعة الضابطة. أشارت النتائج إلى أن 0.147 ملجم / مل من مستخلص بذور P. dactylifera L. أظهرت تأثيرات أقل من arbutin. كانت قيم نشاط التيروزينات المتبقية داخل الخلايا 85.1 ± 8.1٪ و 73.7 ± 11.9٪ لمستخلص بذور P. dactylifera L. 0.098 و 0.147 مجم / مل على التوالي. كان نشاط التيروزيناز المتبقي داخل الخلايا 64.3 ± 14.9 في المائة من عنصر التحكم بعد أن عولجت الخلايا بأربوتين (الشكل 4 ج). أشارت النتائج إلى أن التركيزات الأعلى من مستخلص بذور P. dactylifera L. لا تزال تظهر تأثير مثبط أقل على نشاط التيروزيناز المستحث ب MSH في خلايا B16F10 مقارنة بالأربوتين.

3.4. يمنع مستخلص بذور P. dactylifera L. مستويات التعبير عن البروتينات المشاركة في تكوين الميلانين

تم استخدام البقع الغربية لفحص مستويات التعبير عن البروتينات المرتبطة بتكوين الميلانين في خلايا B16F1 0 (الشكل 5 أ). أشارت النتائج إلى أن المعاملة بتركيزات مختلفة من مستخلص بذور P. dactylifera L. أدت إلى انخفاض مستويات MC1R و MITF و tyrosinase و TRP1 و TRP2. كانت التأثيرات المثبطة للمستخلص على تعبير البروتين واضحة عند تركيز {{1 0}}. 147 مجم / مل. كان التغير في مستوى تعبير البروتين لـ MC1R 0. 74 ± 0. 0 2 ؛ بالنسبة إلى MITF كان {{2 0}. 51 ± 0. 0 3 ؛ بالنسبة للتيروزينيز كان 0 .54 ± 0.26 ؛ بالنسبة إلى TRP -1 كانت 0.57 ± 0.15 ؛ وبالنسبة إلى TRP -2 كان 0.49 ± 0.1 (الشكل 5 ب).

تم فحص مستويات التعبير عن بروتينات التأشير المتعلقة بتكوين الميلانين باستخدام لطخات غربية (الشكل 5 ج). تشير النتائج إلى أن 0. 147 ملغ / مل من مستخلص بذور P. dactylifera L. أدى على ما يبدو إلى انخفاض مستويات p-p38 و p-JNK و p-ERK و p-CREB. كان تغيير أضعاف مستوى تعبير البروتين لـ p-p38 هو 0. 88 ± 0 .15 ؛ بالنسبة إلى p-JNK كان 0. 68 ± 0. 39 ؛ بالنسبة لـ p-ERK كان 0. 65 ± 0. 23 ؛ وبالنسبة لـ p-CREB كان 0. 44 ± 0. 07 (الشكل 5 د).

3.5 لا يؤثر مستخلص بذور P. dactylifera L. على التعبير الجيني لـ Tyrosinase أو TRP1 أو TRP2 أو MITF

تم فحص مستويات التعبير الجيني للبروتينات المرتبطة بتكوين الميلانين ، مثل التيروزيناز ، و TRP1 ، و TRP2 ، و MITF عن طريق تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-PCR). مستويات التعبير المقيسة النسبية لـ tyrosinase / GAPDH لـ 0. 0 367 ، 0. 0 49 ، 0. 147 مجم / مل من P. كانت معاملات مستخلص بذور dactylifera L. 3.51 ± 0. 52 ، 2.38 ± 0. 24 ، و 1.64 ± 0 .55 على التوالي. بالنسبة إلى TRP -1 / GAPDH ، مستويات التعبير المقيسة النسبية لـ 0. 0 367 ، 0. 0 49 ، {{4 {{43} }}}. 147 مجم / مل من معاملات مستخلص بذور P. dactylifera L. كانت 1.64 ± 0. 2 ، 1.15 ± {0. 0 2 ، 0. 89 ± 0. 0 7 على التوالي. مستويات التعبير المقيسة النسبية لـ TRP -2 / GAPDH لـ 0. 0 367 و 0. 0 49 و 0. 147 مجم / مل من مستخلص بذور P. dactylifera L. كانت 1. 0 8 ± {75}}. 13 ، 0. 85 ± 0.01 ، و 0.7 ± 0.05 على التوالي. بالنسبة لـ MITF / GAPDH ، كانت مستويات التعبير المقيس النسبي لـ 0.0367 و 0.049 و 0.147 مجم / مل من علاجات مستخلص بذور P. dactylifera L. 1.48 ± 0.19 و 1.03 ± 0.02 و 0.74 ± 0.05 على التوالي (الشكل 6).

4. مناقشة

تم الإبلاغ عن أن تكون الميلانين يزيد من الإجهاد التأكسدي الخلوي. بالإضافة إلى ذلك ، العديد من مضادات الأكسدة ، كاسحات ROS ، الكاسحات المثبطة ، والمثبطات قد تمنع تخليق الميلانين بوساطة الأشعة فوق البنفسجية [54]. لذلك ، تم استخدام مضادات الأكسدة ، كاسحات ROS ، ومثبطات تكون الميلانين بشكل متزايد على مستحضرات تبييض البشرة للوقاية من فرط تصبغ الجلد غير المرغوب فيه [14]. وقد وجد أيضًا أن تحفيز الميتالوثيونين ، وهو أحد مضادات الأكسدة الذاتية ، يمكن أن يمنع تكون الميلانين في الخلايا الصباغية [55]. يتعرض جلد الإنسان في كثير من الأحيان لملوثات مؤكسدة بيئية أو للأشعة فوق البنفسجية ويتضرر بسبب عوامل بيئية خارجية. على وجه الخصوص ، تم الإبلاغ عن تشعيع الأشعة فوق البنفسجية للحث على توليد أنواع الأكسجين التفاعلية في الجلد وتعزيز بيروكسيد الدهون في غشاء الخلية [56]. لمواجهة الإجهاد التأكسدي ، تم تجهيز الجلد بأنظمة خاصة مضادة للأكسدة [57].

لتوضيح النشاط المضاد للأكسدة لمستخلص بذور P. dactylifera L. ، تم تحديد DPPH و ABTS بالإضافة إلى نشاط الكسح الجذري ، والمحتوى الفينولي الكلي ، والقدرة المخفضة ، والقدرة على تخلب أيونات المعدن للمستخلص كما هو موصوف سابقًا [47،48]. بذل مستخلص بذور P. dactylifera L. نشاطًا كبيرًا كمضاد للأكسدة في جميع الدراسات التحليلية المذكورة أعلاه. أظهرت النتائج قدرة مستخلص بذور P. dactylifera L كمضاد للأكسدة على نطاقات مختلفة بكفاءات مميزة. تم عرض نشاط مسح DPPH لمستخلص البذور في الشكل 2A كان مختلفًا عن نشاط ABTS بالإضافة إلى الموضح في الشكل 2B ، والذي قد يكون ناتجًا عن آليات مختلفة للتفاعلات الجذرية المضادة للأكسدة. بالإضافة إلى ذلك ، قد يختلف القياس المتكافئ للتفاعلات بين مكونات مضادات الأكسدة في مستخلص البذور ، مما يؤدي إلى اختلاف في قدرة إزالة الجذور الحرة [58]. يمكن لمضادات الأكسدة المحتملة في مستخلص بذور P. dactylifera L. تحويل مركب Fe3 plus / ferricyanide إلى الشكل الحديدي ، وتعمل القدرة المخفضة كمؤشر على نشاط مضادات الأكسدة لمستخلص البذور الموضح في الشكل 2D. وجد أن حمض الكوجيك [59] يعمل كمثبط للتيروزيناز لأن حمض الكوجيك يعمل كمخلب معدني لاستخلاص أيونات النحاس ويمنع دخول تلك الأيونات إلى الموقع النشط للتيروزيناز. ومن ثم ، فإن مضادات الأكسدة الموجودة في مستخلص البذور قد تشكل معقدات معدنية غير قابلة للذوبان مع أيونات حديدية ثم تمنع التفاعل بين أيونات المعادن والدهون. تشير السعة العالية لاستخلاص أيونات المعادن في مستخلص البذور إلى نشاطه المضاد للأكسدة المحتمل والتأثيرات المثبطة المحتملة على نشاط التيروزيناز (الشكل 2E).

مبدأ اختبار ROS داخل الخلايا هو أن DCFH-DA ينتشر عبر غشاء الخلية ويتحلل إنزيميًا إلى DCFH بواسطة الإستريز ؛ ثم يتفاعل DCFH مع ROS (مثل H2O2) لإنتاج DCF. أشارت الزيادات السريعة في DCF إلى أكسدة DCFH بواسطة الجذور داخل الخلايا [60]. تكمن الفكرة وراء البحث عن مضادات الأكسدة الجديدة لأنشطة تبييض البشرة في الفرضية القائلة بأن الإجهاد التأكسدي الناتج عن الإشعاع فوق البنفسجي قد يساهم في تحفيز تخليق الميلانين. تم الإبلاغ عن تشعيع الأشعة فوق البنفسجية لإنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية في الأنسجة الجلدية التي قد تحفز إنتاج الميلانين عن طريق تنشيط التيروزيناز [61]. علاوة على ذلك ، تم الإبلاغ عن أن العديد من عوامل تبييض الجلد يمكن أن تمنع تكون الميلانين من خلال التفاعل مع أيونات النحاس في الموقع النشط للتيروزيناز أو مع o-quinones لمنع بلمرة المركبات الوسيطة في مسار الميلانين الاصطناعي [62]. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن لفيتامين C أو فيتامين E تقليل أكسدة جزيئات الميلانين الموجودة مسبقًا. ومن ثم ، فقد تم استخدام هذه الفيتامينات على نطاق واسع في منتجات تبييض البشرة [63]. ومن المثير للاهتمام أن نتائجنا أظهرت الخصائص المضادة للأكسدة لمستخلص بذور P. dactylifera L. ، مما يشير إلى أن مستخلص بذور P. dactylifera L. يمكن أن يعمل كعنصر مبيض للبشرة في مستحضرات التجميل.

اختبار MTT هو اختبار قياس لوني معروف يقيس نشاط إنزيمات الأكسيدوروكتاز المعتمدة على NADH / NADPH والتي تقلل MTT إلى صبغات فورمازان أرجوانية اللون. يمكن تطبيق هذا الاختبار لفحص السمية الخلوية المحتملة للعوامل الطبية والمواد السامة ، حيث تعزز هذه العوامل أو تمنع بقاء الخلية. كانت النتائج الموضحة في الشكل 3 أ متوافقة مع تلك الخاصة بمقايسة استبعاد التريبان الأزرق في الشكل 3 ب ، مما يشير إلى أن مستخلص بذور P. dactylifera L. لم يكن له تأثير سام للخلايا على قابلية خلايا سرطان الجلد B16F10.

يشيع استخدام الفطر تيروزيناز باعتباره إنزيمًا مستهدفًا لفحص المثبطات المحتملة لتكوين الميلانين. تم اكتشاف أن نطاق الجرعة ({0}. 0 49–0.49 مجم / مل) لمستخلص بذور P. dactylifera L. يمكن أن يثبط نشاط الفطر التيروزيني. تشير النتائج الموضحة في الشكل 4 أ إلى أن مستخلص البذور أظهر تأثيرات مثبطة أقل على نشاط التيروزيناز في الفطر مقارنة بحمض كوجيك. يلعب Tyrosinase دورًا رئيسيًا في أول خطوتين من مسار تكون الميلانين. لتوضيح التأثير المثبط الحقيقي لمستخلص بذور P. dactylifera L. على إنتاج الميلانين ، تم تحديد محتوى الميلانين B16F10 ونشاط التيروزيناز داخل الخلايا. النتائج المعروضة في الشكل 4B تشير إلى أن تركيز أعلى من مستخلص بذور P. dactylifera L. مارس تأثير مثبط واضح على تكوين الميلانين. أظهرت البيانات أن مستخلص بذور P. dactylifera L. يمنع بالفعل تكون الميلانيني في خلايا الورم الميلانيني. مع هذا ، كانت النتائج الواردة في الشكل 4 ج وفقًا للنتائج الموضحة في الشكل 4 ب. في التجارب الخلوية المذكورة أعلاه ، تم استخدام -MSH كمحفز لتحفيز تخليق الميلانين. تم الإبلاغ عن MSH لربط مستقبل الميلانوكورتين 1 (MC1R) وتنشيط محلقة الأدينيلات داخل الخلايا ، والتي بدورها تحفز ATP إلى cAMP وتنشط PKA المعتمد على cAMP. كشفت النتائج في الشكل 5A أن مستخلص بذور P. dactylifera L. منع التعبير عن MC1R ، وبالتالي منع إنتاج الميلانين الناجم عن -MSH بوساطة cAMP داخل الخلايا. علاوة على ذلك ، تم تعطيل مسار إشارات PKA بوساطة cAMP وتم تثبيط تكوين الميلانين. لتأكيد الاستدلال ، أجرينا تجارب مثبط PKA ، وتشير البيانات الموضحة في الشكل 4 د إلى التأثير المثبط لمستخلص بذور P. dactylifera L. (0.147 مجم / مل) على تكوين الميلانين في خلايا B16F10 تم قمعه بواسطة H {{ 24}} العلاج. H89 (N - [2- p-bromocinnamylamino-ethyl] -5- isoquinolinesulphonamide) هو مثبط انتقائي وقوي لـ PKA. تشير النتائج إلى أن إشارات PKA بوساطة cAMP تأثرت بمستخلص بذور P. dactylifera L..

Tyrosinase و TRP1 و TRP2 هي الإنزيمات الرئيسية الثلاثة التي تنظم تخليق الميلانين في خلايا الثدييات [64]. علاوة على ذلك ، MITF هو المنظم النسخي الرئيسي للتيروزيناز ، TRP1 ، و TRP2 ، وهو أهم منظم لتصبغ الخلايا الصباغية [65]. تشير النتائج في الشكل 5 أ إلى أن مستخلص بذور P. dactylifera L. قلل من مستويات التعبير البروتيني لهذه البروتينات المرتبطة بتكوين الميلانين ، وأثبط نشاط التيروزيناز ، وقلل محتوى الميلانين في خلايا B16F10.

في هذه الدراسة ، قام مستخلص بذور P. dactylifera L. بقمع الفسفرة CREB وتنشيط PKA. تشير هذه البيانات إلى أن مسار cAMP-PKA قد يكون مسؤولاً عن مستخلص بذور P. dactylifera L.

تم الإبلاغ عن MAPKs لتعديل تكون الميلانين [66]. تتكون عائلة MAPK من ثلاثة أنواع من كينازات البروتين ، بما في ذلك كيناز المستجيب خارج الخلية (ERK) ، و c-Jun N-terminal kinase (JNK) ، و p38 MAPK. يمكن لـ p38 MAPK تنشيط بروتين ربط عنصر استجابة cAMP (ينشط CREB و CREB تعبير MITF ، والذي يساهم بشكل إيجابي في تخليق الميلانين [67]. تقدم النتائج في الشكل 5 ج دليلًا على أن مستخلص بذور P. dactylifera L. يمكن أن يعطل CREB ، JNK ، و p38 ، بدورهما يثبطان تعبير MITF (الشكل 5 أ). تشير هذه النتائج إلى أن التأثير المضاد لتولد الخلايا dactylifera L. الناجم عن استخراج البذور يمكن توسطه عن طريق تقليل تنظيم مسارات PKA. علاوة على ذلك ، تم الإبلاغ عن تشعيع ضوء الأشعة فوق البنفسجية. تظهر بشكل بارز في بدء العديد من اضطرابات الجلد ، بما في ذلك التقشر والتجاعيد وفرط التصبغ [68] ، وتشير النتائج إلى أن مستخلص بذور P. dactylifera L. قلل من إنتاج الميلانين ، والذي يمكن أن يعزى إلى استنفاد ROS داخل الخلايا.

لتقييم تأثير مستخلص بذور P. dactylifera L. على إنتاج الميلانين الخلوي ، حددنا مستويات mRNA في خلايا B16F10 المعالجة بمستخلص بذور -MSH و P. dactylifera L.. أظهرت الخلايا المعالجة بـ -MSH مستويات متزايدة من MITF و tyrosinase و TRP -1 و TRP -2 ، كما هو متوقع. ومن المثير للاهتمام أن الخلايا المعالجة بمستخلص بذور P. dactylifera L. أظهرت انخفاضًا في تعبير الرنا المرسال لهذه الجينات المرتبطة بتكوين الميلانين. ومع ذلك ، لا توجد فروق ذات دلالة إحصائية بين الأعمدة ، مما يدل على أن مستخلص بذور P. dactylifera L. لا يؤثر على مستويات التعبير الجيني لـ MITF و tyrosinase و TRP1 و TRP2.

هذا هو منتجنا.

لمزيد من المعلومات، يرجى الضغط هنا.

تم الإبلاغ عن أن أهم حمض الفينول الموجود في بذور P. dactylifera L. هو حمض الفيروليك [69]. لقد ثبت أن حمض الفيروليك يثبط بشكل فعال تخليق الميلانين في خلايا سرطان الجلد B16 عن طريق تثبيط الكازين كيناز 2- الناجم عن الفسفرة للتيروزيناز بطريقة تعتمد على الجرعة [70]. تدعم هذه التقارير نتائجنا الموضحة في الشكل 1 - ساهم حمض الفيروليك في المستخلص المائي لبذور P. dactylifera L. في تثبيط تكون الميلانين في خلايا B16F10. بالتأكيد ، يجب فحص المكونات الوظيفية الأخرى في مستخلص البذور في المستقبل القريب.

أشارت نتائجنا إلى أن مستخلص بذور P. dactylifera L. يثبط تكوين الميلانين في خلايا B16F10 عن طريق تقليل تنظيم مسارات إشارات PKA. وبالتالي ، يمكن استخدام مستخلص بذور P. dactylifera L. كعامل فعال لتبييض البشرة.

5. الاستنتاجات

هذا هو التقرير الأول عن آلية عمل مستخلص ماء بذور P. dactylifera L. في تخليق الميلانين. أظهرت الدراسة الحالية تورط مسار cAMP / PKA / CREB في تأثير إزالة الصباغ لمستخلص بذور P. dactylifera L.. أشارت نتائجنا إلى أن مستخلص بذور P. dactylifera L. يثبط تكوين الميلانين في خلايا B16F10 عن طريق تقليل تنظيم مسارات إشارات PKA. وبالتالي ، يمكن استخدام مستخلص بذور P. dactylifera L. كعامل جديد مضاد لتكوين الخلايا الجلدية وعامل فعال لتبييض البشرة.