علامات الجودة في Cistanches Herba بناءً على العلاقة بين تأثير الطيف ومضادات الأكسدة Ⅱ
Mar 19, 2024
3 نتائج
3.1 إنشاء خريطة بصمات الأصابع
إعداد 10 دفعات من حلول الاختبار وفقا للطريقة تحت 2.1، واستخدام الشروط الكروماتوغرافية تحت 2.2 للكشف، والحصول على بصمات كل دفعة من العينات (الشكل 1)، وحدد الذروة رقم 11 (C11) باعتبارها الذروة المرجعية لل بصمة. استيراد بيانات المرحلة السائلة. ملف AIA لبصمة منتج اختبار Cistanche deserticola في برنامج "نظام تقييم تشابه بصمات الأصابع الكروماتوغرافي للطب الصيني التقليدي" (إصدار 2012). وتمت معايرة سبعة عشر قمم كروماتوغرافية مشتركة في الوضع المشترك، ومقارنتها مع الطيف القياسي المرجعي المختلط (الشكل 2)، وتم تحديد ما مجموعه 10 قمم مشتركة.
3.2 بحث عن تأثير مضادات الأكسدة في Cistanche deserticola
3.2.1 تأثير Cistanche deserticola على صلاحية خلايا HEK 293.
بالمقارنة مع الخلايا في المجموعة الطبيعية، لم ينتج Cistanche deserticola سمية للخلايا عند تركيز كتلة من 50 إلى 100 ميكروغرام · مل – 1، وكانت معدلات بقاء الخلية أكبر من 90٪. ومع زيادة تركيز Cistanche deserticola، انخفضت صلاحية الخلية. ولذلك، تم اختيار Cistanche deserticola بتركيز كتلة 100 ميكروجرام · مل–1 للإعطاء اللاحق.
3.2.2 تأثير Cistanche deserticola على ROS الناجم عن H2O2 في خلايا HEK 293
تم حساب ROS IC50 لـ Cistanche deserticola بتركيزات مختلفة باستخدام برنامج GraphPad Prism 8. وتظهر النتائج في الشكل 3 والجدول 2.
لمزيد من المعرفة حول السيستانش، دعونا نلقي نظرة على كيفية التمييز بين جودة السيستانش. تعتمد جودة Cistanche على محتوى المكونات النشطة Echinacoside وActeoside، والمحتوى الأعلى يعني وظيفة أقوى، واليوم نأخذ 30% Echinacoside و12% Acteoside Cistanche كمثال لإعطائنا شرحًا، نسميه عمومًا cistanche في هذه المقالة.
ما هي المدة التي يستغرقها عمل سيستانشي؟
3.2.3 تأثير Cistanche deserticola على H2O 2- الناتج عن SOD لخلايا HEK 293
كما هو مبين في الشكل 4، بالمقارنة مع المجموعة الطبيعية، انخفض نشاط SOD في خلايا المجموعة النموذجية بشكل كبير، وزاد نشاط SOD لمجموعة إدارة Cistanche deserticola بدرجات متفاوتة (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.
3.2.4 تأثير Cistanche deserticola على H2O 2- الناجم عن CAT في خلايا HEK 293
كما هو مبين في الشكل 5، يمكن أن يسبب H2O2 انخفاضًا كبيرًا في نشاط إنزيم CAT داخل الخلايا (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).
3.3 فحص علامة Cistanche deserticola Q-marker بناءً على تحليل ارتباط الكفاءة الطيفية
3.3.1 يستخدم PCA القيمة الذاتية > 1 ومعدل مساهمة التباين التراكمي > 85% كمعيار لاستخراج 4 مكونات رئيسية. تحتوي قطعة الأرض الحصاة (الشكل 6) للمكونات الرئيسية الثلاثة الأولى على منحنى أكثر حدة، مما يعني أن معدل مساهمتها أعلى. كبير. ويبلغ معدل مساهمة التباين التراكمي للمكونات الرئيسية الأربعة 87.640%، مما يشير إلى أن هذه المكونات الرئيسية الأربعة يمكن أن تمثل 87.640% من معلومات المتغيرات الأصلية. يظهر الجدول 3 القيم الذاتية الأولية ومعدلات مساهمة التباين. يتم الحصول على مصفوفة المكونات المدورة بواسطة طريقة التباين الأقصى لتطبيع كايزر، انظر الجدول 4. وفقًا لقيمة التحميل لكل ذروة كروماتوغرافية على المكونات الرئيسية الأربعة، فإن المعلومات التي تعكسها كل منها يمكن استخراج المكون الرئيسي. أي أنه كلما زادت قيمة الحمل، زاد تأثير الذروة الكروماتوغرافية على المكون الرئيسي. في المكون الرئيسي 1، تتمتع القمم من 1 إلى 3 و5 و7 و11 ومن 13 إلى 15 بأكبر الأحمال المطلقة؛ في المكون الرئيسي 2، تتمتع القمم 6 و16 بأكبر الأحمال المطلقة؛ تشرح الذروة 17 معلومات المكون الرئيسي 3، الذروة 8 لها التأثير الأكبر على المكون الرئيسي 4، لذلك تم اختيار المكونات الكيميائية الـ 13 للقمم 1~3، 5~8، 11، 13~17 كأساس مادي رئيسي لـ Cistanche deserticola لتحليل الكفاءة الطيفية اللاحقة.
3.3.2 PCC
يعد ROS IC50 مؤشرًا سلبيًا لفعالية الدواء، لذا فإن معامل الارتباط السلبي يعني أن المتغير التابع يرتبط بشكل إيجابي بفعالية الدواء. معاملات الارتباط للقمم الكروماتوغرافية الـ 13 لـ Cistanche deserticola كلها سلبية، مما يشير إلى أنها جميعها مرتبطة بشكل إيجابي بإزالة ROS IC50، ومن بينها القمم 14 و3 و7 و11 و1 و13 كانت مرتبطة بقوة شديدة بـ ROSIC50. (ص<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.
من خلال الجمع بين نتائج PCC لـ ROS IC50 وSOD وCAT، تم اختيار القمم 1 ~ 3 و5 و7 و11 و13 ~ 15 كمجموعة المكونات النشطة لـ Cistanche deserticola لممارسة تأثيرات مضادة للأكسدة.
3.3.3 الثابتة والمتنقلة
In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 هي: 5، 13، 14، 11، 7 (الشكل 7ج). تم فحص المركبات الممثلة بالقمم 1 ~ 3 و 5 و 7 و 11 و 13 ~ 15 كمكونات نشطة محتملة مضادة للأكسدة في نموذج PLS.
3.4 التحقق من نشاط Cistanche deserticola Q-marker
3.4.1 تأثير المكونات النشطة على السمية الخلوية لـ HEK 293
بناءً على نتائج تحليل ارتباط تأثير الطيف، تم اختيار 6 مكونات بما في ذلك حمض الجينيبينيك، 8- حمض إبستريشنويك، إشيناسيوسايد، فيرباسكوسيد، أنثوسينوسيد A، وإيزورباسكوسيد للتحقق من النشاط. لم تظهر المكونات النشطة الستة لـ Cistanche deserticola أي سمية للخلايا بتركيزات تتراوح من 0.781 إلى 3.125 ميكرومول·مل-1، وكانت معدلات بقاء الخلية كلها أكبر من 90%. مع زيادة التركيز، يتم منع بقاء الخلية. لذلك، تم اختيار تركيزات الجرعات اللاحقة على أنها 0.781 و1.563 و3.125 ميكرومول · مل-1.
3.4.2 أزواج المكونات النشطة
تم التحقق من تأثير مضادات الأكسدة لخلايا HEK 293 المستحثة بـ H2O 2- من خلال اكتشاف تأثير الكسح لكل مكون نشط على ROS داخل الخلايا والقدرة على تنظيم نشاط إنزيمات SOD وCAT للتحقق مما إذا كان له تأثير مضاد للأكسدة. في تجربة الكسح ROS، كانت الاختلافات بين مجموعات حمض الجينيبينيك المتوسطة والعالية الجرعة والمجموعة النموذجية ذات دلالة إحصائية (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.
