joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

IL -22- إعادة برمجة التمثيل الغذائي الكلوي عبر PFKFB3 لعلاج إصابة الكلى

وي تشين وآخرون

ملخص رسومي

يضعف IL -22الكلىإصابةعن طريق إعادة البرمجة الأيضية للـ TEC الكلوي ، ينظم وظيفة الميتوكوندريا وتحلل السكر في TECs التالفة ، ويخفف من تراكم ROS للميتوكوندريا والميتوكوندريا المختلة وظيفيًا عن طريق تحريض أنشطة AMPK / AKT و PFBFK3. تحسينالكلىإصابةتم اعتماد ofIL -22 من خلال تنظيم الإشارات ذات الصلة بعملية التمثيل الغذائي في تلف الكلى الناجم عن السيسبلاتين والنماذج الحيوانية لاعتلال الكلية السكري.

الملخص

يؤدي تلف الكلى إلى تدهور حالات التمثيل الغذائي في الخلايا الأنبوبية التي تؤدي إلى تطور مرض الكلى في نهاية المرحلة (ESTD). إنترلوكين -22 (IL - 22) هو ترياق علاجي فعال لـالكلىإصابةعن طريق تعزيز تعافي الكلى ، ولكن لا يُعرف الكثير عن الآليات الجزيئية الأساسية. هنا ، نقدم أولاً دليلًا على أن IL -22 يضعفالكلىإصابةعن طريق إعادة البرمجة الأيضية للخلايا الطلائية الأنبوبية الكلوية (TECs). على وجه التحديد ، تشير بياناتنا إلى أن IL -22 ينظم وظيفة الميتوكوندريا وتحلل السكر في TECs التالفة. تشير الملاحظات الإضافية إلى أن IL -22 يخفف من تراكم أنواع الأكسجين التفاعلي للميتوكوندريا (ROS) والميتوكوندريا المختلة وظيفيًا عن طريق تحريض إشارات AMPK / AKT وأنشطة PFBFK3. في الفئران ، وتحسينالكلىإصابةوالنخر وتحسين وظائف الكلى من خلال تنظيم هذه الإشارات ذات الصلة بالتمثيل الغذائي ولياقة الميتوكوندريا للـ IL المؤتلف -22 في نماذج حيوانية لتلف الكلى الناجم عن السيسبلاتين واعتلال الكلية السكري (DN). مجتمعة ، تكشف النتائج التي توصلنا إليها عن رؤى آلية جديدة للتأثيرات الوقائية لـ IL -22 على الكلى وتسلط الضوء على الفرص العلاجية لـ IL -22 ومنظمات التمثيل الغذائي المعنية في أمراض الكلى المختلفة.

الكلمات الدالةإنترلوكين -22 ،الكلىإصابة، إعادة البرمجة الأيضية ، اختلال وظائف الميتوكوندريا

سيستانشتوبولوسايمنع أمراض الكلى ، انقر هنا للحصول على العينة

1 المقدمة

بَصِيرالكلىإصابة(AKI) ، أحد الشواغل الصحية العامة الشائعة المرتبطة بارتفاع معدل الوفيات والمراضة ، ويؤثر على الملايين من المرضى في المستشفيات في جميع أنحاء العالم ويظهر حدوث زيادة سريعة. الخلايا الظهارية الأنبوبية (TECs) ، خاصة في النبيبات القريبة. مرض الكلى في نهاية المرحلة (ESTD) .8-10 لسوء الحظ ، بخلاف الرعاية الداعمة القائمة على غسيل الكلى ، لا توجد علاجات راسخةالكلىإصابةتتوفر. لذلك ، هناك حاجة ماسة إلى العلاج الاستباقي لتقليل المعاناة التي يسببها للمرضى والأعباء المالية الكبيرةالكلىإصابةللأفراد والمجتمع.

جذب Interleukin -22 (IL -22) ، وهو عضو مهم في السيتوكينات لعائلة IL -10 ، مؤخرًا اهتمامًا هائلاً كعامل بقاء في العديد من الاضطرابات الناجمة عن الضرر الظهاري. -22 يثير حماية الأنسجة والتوازن بشكل أساسي من خلال تنشيط مسار إشارات STAT3 وتعزيز تكاثر الخلايا الظهارية. 14،15 والأهم من ذلك ، أظهرت الدراسات أن التعبير عن IL -22 R1 يقتصر على TECs الكلوية القريبة ، كما أن العلاج بـ IL -22 يمكن أن يحمي من الإصابة الظهارية الكلوية ويسرع من تجديد الأنبوب .16،17 ومع ذلك ، على الرغم من أن الأدلة المتراكمة تشير إلى أن IL - 22 هو ترياق علاجي فعالالكلىإصابة، لا يُعرف سوى القليل عن الآليات الأساسية لاسترداد إجمالي استهلاك الطاقة المستحث بـ IL - 22-. يعد فهم الأساس الجزيئي لـ IL -22 أمرًا مهمًا لاستكشاف كيفية عمل IL -22 لتثبيط AKI أو ESTD ولاكتشاف المعدلات الجزيئية بالإضافة إلى العمليات الحاسمة التي تشارك في منع تلف الكلى.

إصلاح الكلى بعد التلف هو عملية معقدة ومعتمدة على التمثيل الغذائي. تشير الدلائل الحديثة إلى أن بصمات استقلاب الخلية يمكن أن تنظم بقاء الخلايا الكلوية واللدونة ، وبالتالي توفر رؤى آلية مفيدة حول كيفية التحكم في عمليات التمثيل الغذائي لإصلاح الأنسجة. أظهر أن إعادة البرمجة الأيضية بواسطة PGC1 أو نظام اختزال S-nitroso-CoA يحمي منالكلىإصابة. ميكانيكيًا ، يمكن أن تؤدي زيادة تحلل السكر والفسفرة المؤكسدة (OXPHOS) إلى تعزيز النمو ومسارات الإشارات الدفاعية أو يمكن أن توفر متطلبات الطاقة العالية للانقسام والتخليق الحيوي الابتنائي أثناء إصلاح الأعضاء .19،21 مؤخرًا ، أظهرت دراساتنا أن IL -22 يخفف خلل الميتوكوندريا في الكبد ، والذي يتضمن عمليات التمثيل الغذائي الخلوي .22 ، 24 وهكذا ، نسأل ما إذا كان IL -22 يحمي من تلف الكلى وموت الخلايا المبرمج عن طريق تنظيم حالات التمثيل الغذائي. لتحديد آليات إصلاح الكلى بوساطة IL -22 ، نتعامل مع الخلايا الظهارية الأنبوبية القريبة البشرية (PTECs) من خلال تحفيز الإجهاد. نقترح أن IL -22 يحفز إعادة البرمجة الأيضية لتحسين تحلل السكر و OXPHOS ، مما يمنع ضعف TECs. لقد أوضحنا أيضًا أن IL -22 تسبب في هذا البرنامج من خلال تنشيط إشارات AMPK / AKT ومعدلاتها الجزيئية للتخفيف من اختلال وظائف الميتوكوندريا. تسلط ملاحظاتنا الضوء على تنظيم حالات التمثيل الغذائي لعلاج أمراض الكلى والوقاية منها وتقدم رؤى جديدة لتطوير تدخلات جديدة فعالة لإصابة الأعضاء بشكل عام.

يمكن علاج القسطرةالكلىإصابة

2. المواد والأساليب

2.1 الكواشف

تم الحصول على Oligomycin و rotenone و cyanide p-trifluoromethoxy phenyl-hydrazone (FCCP) من Sea horse Biosciences ؛ تم توفير IL المؤتلف -22 بواسطة Novoprotein (الصين) ؛ تم الحصول على سيسبلاتين (كريسب) و MitoTrackerGreen و LY294002 و 5،5 ′ و 6،6′-tetrachloro -1 و 1 و 3،3′-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanineiodide (JC -1) ومركب C من Beyotime Biotechnology (الصين) ؛ تم شراء الأجسام المضادة التي تستهدف Glut1 و -Actin و p-AMPK و AMPK و GAPDH من Abcam ؛ تم شراء الأجسام المضادة لـ STAT3 و p-STAT3 (Y705) و AKT و p-AKT (S473) و PFKFB3 و Caspase -3 من Cell SignalingTechnology ؛ تم الحصول على الراباميسين وحمض البالمتيك (النخلة) و Z-VAD-FMK والجلوكوز من Sigma-Aldrich ؛ تم الحصول على MitoSOX و Hoechst33342 و MitoTracker Red و PKH26 من Invitrogen.

2.2 ثقافة الخلية

تم الحصول على الخلية الظهارية للنبيبات البشرية القريبة (HK {0}) من بنك الخلية التابع لمعهد شنغهاي للكيمياء الحيوية وبيولوجيا الخلية ، والأكاديمية الصينية للعلوم ، وتم الحفاظ عليها وفقًا للبروتوكولات القياسية. تم زرع بذور HK -2 في ستة أطباق (1 × 1 0 6 خلايا / بئر) أو 96- ألواح بئر (1 × 1 0 5 خلايا / بئر) و تمت زراعته في وسط 90٪ من RPMI1640 (Gibco) مع 100 وحدة / مل من البنسلين ، و 100 ميكروغرام / مل من الستربتومايسين ، و 10٪ من مصل الأبقار الجنيني (FBS) (Gibco). قمنا أولاً باحتضان HK -2 بـ IL -22 (0.5 ميكروغرام / مل) لمدة 0.5 ساعة ، ثم 50 ملي مولار من الجلوكوز أو 5 ميكروغرام / مل سيسبلاتين أو 0.2 ملي مولار من حمض النخليك أو 4 ميكرومتر من دوكسوروبيسين (DOX ) لمدة 24 ساعة. في بعض الحالات ، تمت زراعة الخلايا في وجود Z-VAD-FMK (10 ميكرومتر) أو المركب C (5 ميكرومتر) أو LY294002 (20 ميكرومتر) أو الراباميسين (50 نانومتر) للأوقات المحددة.

2.3 تجارب فرس البحر

قمنا بتحليل TECs باستخدام Seahorse XF96 محلل الجريان خارج الخلية للتغيرات في معدل الحمض خارج الخلية (ECAR) ومعدل استهلاك الأكسجين (OCR). باختصار ، نمت HK -2 (1 × 1 0 5) على ألواح فرس البحر 96- بين عشية وضحاها. بعد ذلك ، غسلنا الخلايا باستخدام وسيط اختبار فرس البحر يحتوي على 1 ملي مولار من البيروفات ، و 1 0 ملي مولار من الجلوكوز ، و 2 ملي مولار من الجلوتامين (أو خالي من الجلوكوز لاختبار ECAR) في جو خالٍ من ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية لمدة {{18) }} 5 ساعات. تم تسجيل البيانات التجريبية بعد حقن المثبطات التي لم يتم ذكرها بتركيز مثالي من FCCP (1. 0 ميكرومتر) ، أوليغوميسين (1.0 ميكرومتر) ، روتينون / أنتيميسين A (0.5 ميكرومتر) ، 2- DG (50) مم) ، أو الجلوكوز (10 ملم).

يمكن علاج القسطرةإصابة في الكلى

2.4 نماذج الفئران والحيوانات

تم شراء ذكور الفئران BALB / c (6-8 أسابيع) من شركة Slaccas Experimental Animal Co. (شنغهاي ، الصين). تم توفير Db / db و Db / m الفئران من قبل مركز أبحاث الحيوان النموذجي بجامعة نانجينغ (نانجينغ ، الصين). تم الاحتفاظ بجميع الفئران في مرافق محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF) ونمت باتباع البروتوكولات القياسية. بالنسبة لنموذج AKI ، تلقت الفئران BALB / c سيسبلاتين (2 0 مجم / كجم) أو تحكمًا بالمحلول الملحي عن طريق الحقن داخل الصفاق. تم تغذية الفئران ديسيبل / ديسيبل بنظام غذائي عالي الدهون (HFD) في النقاط الزمنية المحددة للحث على اعتلال الكلية السكري (DN). تم تغذية الفئران ديسيبل / الفئران بنظام تشاو كمجموعة تحكم. في التجارب على الحيوانات AKI ، تم حقن IL -22 داخل الصفاق بجرعة 0.5 مجم / كجم / يوم أو 1.5 مجم / كجم / يوم لمدة 4 أيام متتالية. في التجارب على الحيوانات DN ، تم حقن IL -22 داخل الصفاق بجرعة 2.5 مجم / كجم مرتين أسبوعيًا لمدة ثمانية أسابيع متتالية. تلقت الفئران الضابطة الكمية المناسبة من برنامج تلفزيوني. تم تنفيذ إجراءاتنا التجريبية على الحيوانات باتباع البروتوكولات التي تم تقييمها والموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات رعاية الحيوان والاستخدام التابعة لكلية الصيدلة بجامعة فودان. تم إجراء التلوين الكيميائي المناعي ، وقياس إمكانات غشاء الميتوكوندريا ، وتلطيخ أنواع الأكسجين النسيجي والتفاعل (ROS) لأقسام الكلى كما هو موضح سابقًا.

2.5 PCR في الوقت الحقيقي

حصلنا على مجموع الحمض النووي الريبي بواسطة كواشف TRNzol (Beyotime Biotechnology ، الصين) من عينات الخلايا أو الأنسجة ثم نسخها إلى cDNA باستخدام مجموعة اختبار النسخ العكسي MMLV (Beyotime Biotechnology). تم تحليل مستوى التعبير عن mRNA بواسطة أدوات PCR في الوقت الفعلي (BioRad) باستخدام مجموعة مقايسة SYBR green qPCR-mix (Beyotime Biotechnology) وتوحيدها مع GAPDH.

2.6 قياس التدفق الخلوي

تمت زراعة خلايا الكلى وعلاجها كما هو موضح أعلاه. تم إجراء تلطيخ MitoSOX (Mitochondrial ROS) و MitoTracker Green (الكتلة الكلية للميتوكوندريا) وتلطيخ MitoTracker الأحمر (إمكانات غشاء الميتوكوندريا) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة والأبحاث السابقة. برنامج CytExpert (BD Biosciences).

2.7 امتصاص الجلوكوز

قمنا بقياس تركيزات الجلوكوز في طاف ثقافة الخلية عن طريق اختبار اختبار امتصاص الجلوكوز وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة والبحث السابق (GAHK20 ؛ Sigma). تم إجراء تطبيع النتائج حسب عدد الخلايا.

2.8 ضربة قاضية للجينات

استخدمنا الحمض النووي الريبي المتداخل الصغير (سيرنا ، ريبوبيو ، الصين) للقضاء على الجينات المحددة. أولاً ، تم خلط Lipofectamine RNAiMAX و siRNA (1 0 0 pmol) بلطف عبر الماصات واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 0.5 ساعة. ثم قمنا بتغيير وسط زراعة الخلايا القياسي إلى كوكتيل تعداء واحتضان الخلايا لمدة 6 ساعات لترنسفكأيشن جين سيرنا. بعد ذلك ، قمنا بتغيير كوكتيل تعداء إلى وسط زراعة الخلايا الطازجة. بعد 48 ساعة ، تم تحضين خلايا الكلى بـ IL -22 لمزيد من الدراسات.

يمكن علاج القسطرةإصابة في الكلى

2.9 لطخة غربية

استخرجنا البروتينات الكلية من الخلايا أو الأنسجة بواسطة محلول تحلل RIPA (Beyotime Biotechnology ، الصين). بعد ذلك ، قمنا بجمع المحللات بالطرد المركزي عند 4 درجات مئوية عند 12 000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، تم تسخين المحلول باستخدام المحاليل المنظمة للعينة عند 100 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة ، وتم تعريضها للرحلان الكهربائي لهلام دوديسيل كبريتات بولي أكريلاميد (SDS-PAGE) ، ونقلها كهربائيًا إلى غشاء ثنائي فلوريد البولي فينيلدين (PVDF) (ميليبور ، ألمانيا). ثم تم حظر الأغشية باستخدام 5 في المائة من ألبومين مصل الأبقار (BSA) لمدة ساعتين واحتضانها بالأجسام المضادة الأولية عند 4 درجات مئوية طوال الليل. بعد الغسيل ثلاث مرات ، تم تحضين الأغشية بأجسام مضادة ثانوية مترافقة مع بيروكسيداز الفجل (CST ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تصور بقع البروتين من خلال نظام التصوير المحسن اللمعان الكيميائي.

2.10 المناعي

تم إصلاح خلايا الكلى بنسبة 3 في المائة - 4 في المائة بارافورمالدهيد وتم تخللها باستخدام 0. 1 في المائة تريتون X -100. بعد ذلك ، قمنا بحظر الخلايا بنسبة 5 في المائة من مساحة سطح الجسم لمدة ساعتين. تم تحضين الخلايا طوال الليل باستخدام الجسم المضاد لـ GLUT1 عند 4 درجات مئوية ، وتم غسلها أربع مرات ، ثم تلطيخها بـ PKH26. بعد ذلك ، تم تلطيخ خلايا الكلى بـ Hoechst 33342 وتم تركيبها على الشرائح. تم الحصول على البيانات عن طريق الفحص المجهري متحد البؤر.

2.11 تسلسل الحمض النووي الريبي والمعلوماتية الحيوية

تم تحليل عينات TEC (2 × 1 0 7) وتم استخراج الحمض النووي الريبي الكلي باستخدام مجموعة RNeasy المصغرة ، وفقًا لبروتوكولات الشركة المصنعة (Beyotime ، شنغهاي ، الصين). تم إجراء Eukaryotic RNA-seq باستخدام تقنية تسلسل الجيل التالي (NGS) على نظام تسلسل Illumina HiSeq ، مما يوفر طول قراءة أساسي 50-. تم إجراء محاذاة قراءات التسلسل باستخدام TopHat v2.0.12 مقابل مجموعة UCSC mm10. تم حساب تحليل التعبير التفاضلي باستخدام حزمة DESeq2 (http://www.bioconductor.org/packages/release/ bioc / html / DESeq2.html) وتم إجراء تحليلات الأهمية الإحصائية في R (v3.1.1 ؛ http: // www. .r-project.org /). تم إجراء التمثيل الزائد للمسار باستخدام حزمة R ReactomePA.

2.12 الإحصاء

تم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ​​± الانحراف المعياري (SD) وتم عرضها باستخدام GraphPad Prism 5. 0. لنتائج مقارنة مجموعتين أو أكثر ، تم حساب الفروق باستخدام اختبار الطالب t أو تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA): *** p <0. 0="" 0="" 1="" ،="" **="" ف=""><0.01 ،="" *="" ف=""><>

يمكن علاج القسطرةإصابة في الكلى

3 نتائج

3.1 IL -22 يحافظ على التمثيل الغذائي الخلوي في TECs

نظرًا لأنه تم اقتراح أن تكون الميتوكوندريا عضيات مهمة تكامل الأيض الخلوي وعمليات الاستماتة ، قمنا بتقييم وظيفة الميتوكوندريا في TECs التي تم تحفيزها باستخدامالكلىإصابةالعوامل والمعالجة بـ IL -22. 25 كما هو موضح في الشكل 1A-D ، تم حظر معدل استهلاك الأكسجين القاعدي للميتوكوندريا (OCR) ، والقدرة التنفسية القصوى (MRC) ، والتنفس بشكل كبير في TECs تحت ظروف الإجهاد. والجدير بالذكر أن هذه التشوهات تم منعها إلى حد كبير عن طريق علاج IL - 22. تم أيضًا تقييد تحلل السكر في TECs التالفة ، والذي يتضح من معدل التحمض خارج الخلية (ECAR) ، بشكل ملحوظ ، مقارنةً بـ IL -22 بالإضافة إلى TECs التي تواجه تحفيزًا (الشكل 1B و E). لقد أوضحنا أيضًا أن الفسفرة المؤكسدة المعرضة للخطر (OXPHOS) والتحلل السكري في TECs التالفة لم تكن الآثار الثانوية لموت الخلايا المبرمج عن طريق المعالجة المشتركة لمثبط pan-caspase (الشكل S1). وكانت التأثيرات التعويضية الوسيطة لـ IL -22- على عيوب التمثيل الغذائي خاصة بالـ TECs الكلوية (الشكل S2). بالإضافة إلى ذلك ، عزز IL -22 خلايا HK2 OXPHOS وتحلل السكر في غياب المحفزات ، مما يشير إلى أن تأثيرات IL -22 على المسارات الأيضية لم تكن محددة للتلف TECs (الشكل S3). علاوة على ذلك ، أشارت نتائجنا أيضًا إلى أن IL -22 روج لتعبير IL -22 R1 ونقله. وفي الوقت نفسه ، تم إلغاء تأثير فسفرة STAT3 وإعادة البرمجة الأيضية لـ IL -22 تمامًا بواسطة ضربة قاضية IL -22 R1 (الشكل S4). اقترحت هذه النتائج أن IL -22 استعاد الحالة الأيضية لـ TECs من خلال تنشيط IL -22 R1 مباشرة. نظرًا لأن العديد من الأدلة قد أشارت إلى أن Glut1 قد لعب دورًا رئيسيًا في تحلل الجلوكوز وتوازن الجلوكوز ، فقد سألنا ما إذا كان IL -22 يؤثر على نقل Glut1 أو تعبيره. كما هو متوقع ، أوضحنا أن IL -22 لم يروج فقط لـ Glut1 المنقولة إلى سطح غشاء الخلية (PKH26) وتعبير Glut1 ، ولكن أيضًا عزز امتصاص الجلوكوز (الشكل 1F و G). بشكل عام ، أشارت هذه الملاحظات إلى أن IL -22 يمكن أن يعزز OXPHOS وتحلل السكر في TECs المصابة.

الشكل 1 IL -22 يحافظ على لياقة الميتوكوندريا وتحلل السكر في TECs. (A و B) نستخدم Seahorse XF96 محلل الجريان خارج الخلية لاختبار التغيرات في معدل الحمض خارج الخلية (ECAR) ومعدل استهلاك الأكسجين (OCR) في TECs. OCR و ECAR في TECs المحتضنة مع 5 0 ملي مولار من الجلوكوز ، أو 5 ميكروغرام / مل سيسبلاتين ، أو 0. 2 ملي مولار من حمض البالمتيك ، أو 4 ميكرومتر DOX في وجود أو عدم وجود IL {8} }. (C) القدرة التنفسية القصوى (MRC) من TECs التي تم تقييمها من خلال التغييرات في الوقت الحقيقي في التعرف الضوئي على الحروف. (D و E) المنحنيات في OCR و ECAR لـ TECs بعد احتضانها مع oligomycin و FCCP والجلوكوز والروتينون و {{1 0} DG. (F) توطين والتعبير عن النووي (الأزرق) ، Glut1 (الأخضر) ، وغشاء البلازما (الأحمر) في TECs. (G) استهلاك الجلوكوز في TECs بعد معالجة IL -22 لمدة 24 ساعة. ن=3 ؛ أشرطة مقياس ، 2 0 ميكرومتر ؛ اختبار t للطالب (غير زوجي) ؛ *** ف <0.001 ،="" **="" ف=""><0.01 ،="" *="" ف=""><>

3.2 IL -22 يخفف من تراكم الميتوكوندريا المختلة وظيفيًا في TECs عن طريق تنشيط ميتوفاجي

تشكيل نقط LC3 في TECs بعد التعرض للمنبهات (الشكل 2F). ثم استنفدنا الميتوفاجي لتقييم وظيفته على استقلاب الخلية الأنبوبية عبر siRNA-ATG5 (الشكل S6). أشارت بياناتنا إلى أن استنفاد الميتوفاجي في TECs قد منع بشكل كبير التأثيرات الوقائية لـ IL -22 في لياقة الميتوكوندريا التي يتم تقديمها مسبقًا (الشكل 2E) ، مما يشير إلى أن IL -22 يمنع اختلال وظائف الميتوكوندريا عن طريق تنشيط الميتوفاجي.

الشكل 2 IL -22 يمنع الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا وتراكم ROS في الميتوكوندريا عن طريق تحريض الميتوفاجي. (أ) تم تلوين كتلة الميتوكوندريا وتقييمها بواسطة MitoTracker Green وقياس التدفق الخلوي. تم تقييم Mitochondrial ROS في TECs الملطخة بـ MitoSOX (B). تم تقييم إمكانات غشاء الميتوكوندريا في TECs الملطخة بـ MitoTracker Green و MitoTracker Red (C) ؛ تم تقييم تراكم ROS في الميتوكوندريا بواسطة MitoTracker Green و MitoSOX (D). (هـ) اقترحت نتائج الصورة المتحد البؤر إنتاج الميتوكوندريا ROS المسمى بـ MitoSOX. (و) أشارت الصور المجهرية التمثيلية إلى تكوين نقطي GFP 3- في وجود أو عدم وجود IL -22 TECs التي تم تحفيزها كـ (A) لمدة 24 ساعة. (E) تم تقييم OCR في وجود أو عدم وجود IL -22 و siRNA-ATG5 لمدة 24 ساعة. ن=3 ؛ اختبار t للطالب (غير زوجي) ؛ *** p <0. 0="" 0="" 1="" ،="" **="" p=""><0.01 ،="" *="" p=""><>

3.3 يحافظ IL -22 على تكامل الميتوكوندريا لـ TECs من خلال تنشيط إشارات AMPK / AKT

إشارات AMPK ، كمحور إشارات رئيسي يربط بين بقاء الخلية والتمثيل الغذائي ، واستقلاب الجلوكوز المتحكم فيه ، وتخليق الدهون ، ووظيفة الميتوكوندريا. 28 وفقًا للتأثير الوقائي الكلوي للإنترلوكين -22 بوساطة إعادة البرمجة الأيضية لـ TECs ، قمنا بتقييم ما إذا IL -22 سلامة الميتوكوندريا المنظمة من خلال تنشيط تحويل إشارات AMPK. وجدنا أن IL -22 زاد من نشاط نقل إشارات STAT3 / AMPK / AKT في TECs المصابة ، كما يتضح من فسفرة STAT3 و AMPK و AKT (الشكل 3 أ). بالإضافة إلى ذلك ، تم حظر هذه العمليات في الخلايا الأنبوبية التي تفتقر إلى STAT3 ، مما يدل على أن IL -22 تنظم إشارات AMPK / AKT من خلال STAT3 (الشكل 3B و C ؛ الشكل S7). قمنا أيضًا باحتضان TECs بالمركب C و LY294002 لتثبيط عمليات نقل إشارات AMPK / AKT مباشرة ، ثم تقييم وظائف الميتوكوندريا وحالات التمثيل الغذائي. كشفت النتائج أن العلاج المشترك مع مثبطات الإشارة هذه منع بشكل كبير OXPHOS المحسن وتدفق حال السكر الناجم عن علاج IL -22 (الشكل 3D-I) ، والذي يشير إلى أن IL -22 عزز استقلاب TECs من خلال تنشيط AMPK / مسار إشارات AKT.

الشكل 3 يحافظ تحريض إشارات AMPK / AKT بواسطة IL -22 على لياقة الميتوكوندريا. تم تحفيز TECs 5 0 ملي جلوكوز ، أو 5 ميكروغرام / مل سيسبلاتين ، أو 0. 2 ملي مولار من حمض البالمتيك ، أو 4 ميكرومتر DOX في وجود أو عدم وجود IL -22 ، المركب C ، أو LY294 0 0 2 للأوقات المشار إليها. (A و B) تم تقييم تنشيط مسار إشارات AMPK / AKT في TECs أو STAT 3- WT و STAT3-KD TECs من خلال تحليل اللطخة الغربية. (C و D) تم تحليل التغييرات في OCR و ECAR من TECs. (E) تم تقييم تنشيط مسار إشارات AMPK / AKT في TECs من خلال تحليل اللطخة الغربية. (F – I) تم قياس التغييرات في OCR و ECAR لـ TECs في TECs مقابل المركب C و LY294002 المعالجين. اختبار t للطالب (غير زوجي) ؛ ن=3 ؛ *** ف <0.001 ،="" **="" ف=""><0.01 ،="" *="" ف=""><>

3.4 IL -22 يحافظ على التمثيل الغذائي الخلوي وسلامة الميتوكوندريا لـ TECs عن طريق تحريض PFKFB3

علاوة على ذلك ، لاستكشاف كيفية تحسين لياقة الميتوكوندريا والتمثيل الغذائي في TEC ، استخدمنا تحليل تسلسل الحمض النووي الريبي (RNA-seq) لتقييم التعبير الجيني بعد إصابة المحفزات وعلاج IL -22. أظهرنا أن الجينات المتعددة قد تغيرت بشكل كبير في TECs بعد حضانة IL -22 (الشكل 4 أ). باستخدام قواعد البيانات المتاحة ، تم إجراء تحليل تخصيب مجموعة الجينات لتلك الجينات التي تم تنظيمها ، والذي اقترح إثراءًا ملحوظًا للجينات في مسار إشارات AMPK ومسار إشارات أهداف MYC (الشكل S8). بشكل ملحوظ ، تم تحفيز PFKFB3 بشكل كبير بواسطة IL -22 من بين الجينات أثناءالكلىإصابةتحفيز العوامل (الشكل 4 أ). تمت الإشارة إلى هذه الملاحظات أيضًا من خلال الصور البؤرية و Q-PCR والبقعة الغربية. كان التعبير العالي عن PFKFB3 يعتمد على إشارات AMPK / AKT (الشكل 4B و C ؛ الشكل S9).

اقترحت الدراسات السابقة أنه يمكن تنظيم PFKFB3 من خلال العديد من عمليات نقل الإشارات لتسريع تجديد وإصلاح الظهارة بعد الإصابة .29،30 وهكذا ، فقد توقعنا أن IL -22 تسبب في PFKFB3 للحفاظ على التمثيل الغذائي الخلوي لـ TECs والحفاظ على لياقة الميتوكوندريا. . لاحظنا أن تثبيط إشارات AMPK / AKT قلل من تعبير PFKFB3 (الشكل 4 د). لذلك ، قمنا بإسكات PFKFB3 لمزيد من الدراسة لوظائفه في TECs بعد حضانة IL -22. أشارت النتائج التي توصلنا إليها إلى أن إسكات PFKFB3 خفف من تأثيرات إعادة البرمجة الأيضية لـ IL -22 على استعادة ECAR و OCR (الشكل 4E و F) ، ومنع امتصاص الجلوكوز وكذلك الميتوكوندريا المختلة وظيفيًا (الشكل 4G و H). علاوة على ذلك ، أوضحنا أيضًا أن تأثيرات إعادة البرمجة الأيضية لـ IL -22 تم تعطيلها تمامًا بواسطة ضربة قاضية STAT 3- بينما يمكن أن يكون الإفراط في التعبير عن PFKFB3 قادرًا على إنقاذ هذه الأنماط الظاهرية ، مما يشير إلى أن IL -22 استعاد الحالة الأيضية للخلايا الطلائية الكلوية التالفة عن طريق استهداف إشارات STAT 3- AMPK / AKT-PFKFB3 مباشرة (الشكل S10). مجتمعة ، أشارت هذه النتائج إلى أن تنشيط PFKFB3 لعب دورًا مهمًا في لياقة الميتوكوندريا والقضاء على الميتوكوندريا غير الوظيفية بعدالكلىإصابة.

الشكل 4 IL -22 يحافظ على سلامة الميتوكوندريا والتمثيل الغذائي الخلوي لـ TECs عن طريق تحريض PFKFB3. (أ) مؤامرة البركان للتعبير الجيني في TECs المحفزة بالجلوكوز ، أو السيسبلاتين ، أو حمض البالمتيك ، أو CCl4 في وجود أو عدم وجود IL -22 لمدة 24 ساعة. (ب) أظهرت البيانات المجهرية متحد البؤر فرط التعبير PFKFB3 في TECs بعد علاج IL -22 ، الأمر الذي يتطلب تنشيط إشارات AMPK / AKT. (C) تشير نتائج PCR في الوقت الفعلي إلى أن IL -22 تسبب في زيادة التعبير عن PFKFB3 في TECs ، والذي يمكن تثبيته بواسطة كتلة إشارات AMPK / AKT. (د) تنشيط مسار إشارات AMPK / AKT / PFKFB3 في TECs بعد العلاج بالمركب C و LY294 0 0 2. (E و F) ECAR و OCR في TECs في وجود أو عدم وجود IL -22 ، أو si-PFKFB3 لمدة 24 ساعة. (G) استهلاك الجلوكوز في TECs بعد IL -22 أو si-PFKFB3 لمدة 24 ساعة. (H) تم تقييم الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا في TECs الملطخة بـ MitoTracker Red و MitoTracker Green. اختبار t للطالب (غير زوجي) ؛ ن=3 ؛ *** p <0. 001،="" **="" p=""><0.01، *="" p=""><>

3.5 IL -22 يخفف من إصابة الكلى في AKI الناجم عن سيسبلاتين عن طريق قمع تراكم ROS الكلوي وخلل الميتوكوندريا

لاختبار فرضيتنا القائلة بأن IL -22 ينظم الملامح الأيضية الكلوية لقمع إصابة النبيبات الكلوية في الجسم الحي ، قمنا في البداية بتقييم وظائف الكلى في الفئران المعالجة بـ IL -22- التي تم إعطاؤها سيسبلاتين (الشكل 5 أ). بعد أربعة أيام من حقن السيسبلاتين ، لم يقلل IL -22 بشكل كبير من الضرر الخلوي الأنبوبي والنزيف فحسب ؛ كما تم ضعف وظائف الكلى لديهم بشكل ملحوظ ، والتي تم تقييمها من خلال مستويات المصل من نيتروجين اليوريا في الدم (BUN) والكرياتينين (Cr) (الشكل 5B-D). اقترحنا كذلك منع IL -22الكلىإصابةعن طريق تعزيز تجديد الكلى وتنشيط إشارات AMPK / AKT و PFKFB3 (الشكل 5E و F ؛ الشكل S11). بعد ذلك ، استخدمنا MitoSOX (صبغة ROS الخاصة بالميتوكوندريا) و JC -1 (صبغة تعتمد على غشاء الميتوكوندريا) لتقييم الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا المتضمن في التمثيل الغذائي الخلوي وموت الخلايا المبرمج. في أقسام الكلى بالفئران التي عولجت بسيسبلاتين ، كانت هناك تراكمات مماثلة من أنواع الأكسجين التفاعلية. وتجدر الإشارة إلى أنه بعد أربعة أيام من علاج IL -22 ، انخفضت مستويات ROS بشكل ملحوظ في الكلى المصابة مقارنة بـ ROS من الفئران بعد علاج PBS (الشكل 5G). مجتمعة ، قدمت هذه الملاحظات دليلًا على أن IL -22 لعب دورًا وقائيًا في AKI الناجم عن السيسبلاتين من خلال التحكم في لياقة الميتوكوندريا.

يخفف الشكل 5 IL -22 تلف الكلى في AKI الناجم عن السيسبلاتين عن طريق تثبيط تراكم ROS الكلوي والميتوكوندريا المختلة وظيفيًا. (أ) رسم تخطيطي للبروتوكولات التجريبية لتقييم التأثيرات الوقائية لـ IL -22 في تلف الكلى الناجم عن سيسبلاتين (2 0 مجم / كجم). برنامج تلفزيوني كمجموعة تحكم في السيارة و N-acetyl-l-cysteine ​​(NAC ، 15 0 مجم / كجم) كمجموعة تحكم إيجابية. (B و C) تم تقييم مستويات BUN في المصل ومستويات Cr في الدم وأوزان الكلى وأوزان الجسم. تم تقديم صور الممثل HE (D) و Ki {9}} تلطيخ (E) و MitoSOX (G) و JC {{1 0} (G) لأقسام الكلى. (F) تم تقييم مقارنة تنشيط STAT3 / AMPK / AKT / PFKFB3 في مستخلصات الكلى من الفئران المعالجة بـ IL -22- بواسطة لطخة غربية. اختبار t للطالب (غير زوجي) ؛ ن=3 ؛ *** ف <0.001 ،="" **="" ف=""><0.01 ،="" *="" ف=""><>

3.6 IL -22 يخفف الإصابة الكلوية التي يسببها السكري عن طريق تثبيط الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا من خلال تنشيط إشارات AMPK / AKT و PFKFB3

لقد أوضحنا نحن وآخرون أن IL -22 يمكن أن يمارس فعالية وقائية في اعتلال الكلية السكري (DN) ، والذي كان السبب الرئيسي لـ ESTD.31-33 لمزيد من دراسة الآليات الأساسية ، قمنا بإطعام الفئران ديسيبل / ديسيبل ب- حمية دهنية (HFD) ثم عولجها بـ IL -22 (2.5 مجم / كجم ، IP) لمدة 8 أسابيع (الشكل 6 أ). عندما تم تغذية الفئران بال HFD فقط ، وجدنا تليفًا أنبوبيًا للكلية وتوسعًا ، بالإضافة إلى ضمور. في المقابل ، عندما عولجت الفئران بـ IL -22 ، تحسن التليف الكلوي والتشريح المرضي بشكل ملحوظ ، وكذلك وظائف الكلى. كما تم إظهار وظائف الكلى المحسنة من خلال انخفاض مستويات Cr في الدم ، ومستويات BUN ، ومستويات الألبومين البولي الكلي / 24 ساعة (الإمارات العربية المتحدة) (الشكل 6B-E). لدراسة ما إذا كانت هذه الأنشطة مرتبطة بالميتوكوندريا ، قمنا بتقييم وظيفة الميتوكوندريا المشاركة في التمثيل الغذائي الخلوي والاستماتة. أشارت النتائج إلى أن زيادة مستويات ROS في الميتوكوندريا والميتوكوندريا المختلة الوظيفية المتراكمة قد تم تخفيفها بشكل كبير عن طريق علاج IL -22 (الشكل 6F و G). لمزيد من دراسة ما إذا كانت الوظائف الوقائية لـ IL -22 في الكلى قد تم توسطها من خلال PFKFB3 ، قمنا بحقن الفئران بـ PFKFB3 shRNA adenovirus للقضاء على PFKFB3. أشارت بياناتنا إلى أن التأثيرات المفيدة لـ IL -22 على الإصابة الكلوية التي يسببها HFD ، والنخر ، والتنكس الدهني ، وخلل الميتوكوندريا ، وتراكم ROS وتفعيل مسارات الإشارات ذات الصلة تم حظرها بشكل كبير بواسطة ضربة قاضية PFKFB3 (الشكل 6B-G) . لوحظ أيضًا زيادة التعبير عن إشارات AMPK / AKT بعد العلاج بـ IL -22 (الشكل 6H). إلى جانب التخفيف من ضعف الكلى ، تم أيضًا تحسين تعبيرات PFKFB3 والإنزيمات المهمة في التمثيل الغذائي الخلوي في كليتي الفئران المعالجة بـ IL -22- (الشكل 6H و I). بالإضافة إلى ذلك ، أشار التحليل النسيجي للأعضاء الرئيسية إلى عدم وجود إصابات شكلية بعد حقن IL -22 ، مما يشير إلى أن IL -22 يمكن أن يكون ترياقًا آمنًا بدون آثار جانبية كبيرة أو تفاعلات سامةالكلىإصابةاضطرابات (الشكل 12S). بشكل عام ، اقترحت بياناتنا أن IL - 22 خفف من تلف الكلى من خلال تنشيط نقل إشارات AMPK / AKT ، وتثبيط تراكم ROS ، وتنظيم وظائف الميتوكوندريا من خلال PFKFB3.

يخفف الشكل 6 IL -22 الضرر الكلوي الناجم عن مرض السكري من خلال إشارات AMPK / AKT وتثبيط الميتوكوندريا المختلة وظيفيًا عن طريق تنشيط PFKFB3. (أ) رسم تخطيطي للبروتوكولات التجريبية لتقييم التأثيرات الوقائية لـ IL -22 في التلف الكلوي الناجم عن مرض السكري. ديسيبل / م كمجموعة التحكم في السيارة. (B-D) تم تقييم مستويات BUN في المصل ومستويات Cr في المصل والإمارات العربية المتحدة. تم تقديم صور الممثل HE (E) و MitoSOX (F) و JC -1 (G) لأقسام الكلى. (H و I) تم تقييم مقارنة تنشيط STAT3 / AMPK / AKT / PFKFB3 في مستخلصات الكلى من الفئران المعالجة بـ IL -22- بواسطة لطخة غربية. اختبار t للطالب (غير زوجي) ؛ ن=3 ؛ *** p <0. 0="" 0="" 1="" ،="" **="" p=""><0.01 ،="" *="" p=""><>

4. مناقشة

تفرز الخلايا المناعية IL -22 ، مثل الخلايا القاتلة الطبيعية ، والعدلات ، والخلايا اللمفاوية الفطرية (ILCs) ، والخلايا التائية ، ولكنها لا تؤثر بشكل مباشر على هذه الخلايا. ينظم في الغالب وظائف الخلايا الظهارية بسبب تعبير IL -22 R1 المقيد على الخلايا الظهارية بما في ذلك TECs.15،34 وقد اقترحت الدراسات السابقة أن IL -22 يمكن أن يحمي من الإصابة الظهارية الكلوية ويسرع التجدد الأنبوبي من خلال تثبيط الجسيم الملتهب NLRP3 وتفعيل إشارات STAT3 و AKT. ومع ذلك ، لم يتم توضيح الآليات الأساسية لهذه الحماية بعد. لمزيد من تحديد الأساس الجزيئي لوظيفة IL - 22 فيالكلىإصابة، نحقق أولاً فيما إذا كان IL -22 يمكن أن يخفف من اختلال وظائف خلايا الكلى وما تلاه من موت الخلايا المبرمج من خلال تنظيم حالات التمثيل الغذائي. علاوة على ذلك ، ندرس نموذجين منالكلىإصابةالأمراض (AKI و DN) مع إدارة IL {0}} ومقارنة الملاحظات مع تلك الخاصة بمجموعات التحكم. نشير إلى أن IL -22 يصحح إعادة البرمجة الأيضية للحفاظ على سلامة الميتوكوندريا ، ويقلل تراكم ROS في الميتوكوندريا في TECs المصابة ، ويخفف من تلف الكلى والنخر التدريجي. علاوة على ذلك ، تشير النتائج التي توصلنا إليها إلى أن IL - 22 يمكنه تنشيط مسارات الإشارات المرتبطة بـ AMPK / AKT في TECs والكلى ، وهي وسطاء مهمون في التئام الجروح الظهارية وبقاء الخلية ، لتخفيف الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا وتدهور الملامح الأيضية وفتح رواية مجال لـ IL -22 آلية حماية الكلى بوساطة. بشكل عام ، تشير نتائجنا إلى أن تأثيرات الحماية الكلوية لـ IL -22 يتم توسطها عبر عمليات إعادة البرمجة الأيضية.

تم الكشف عن الدور الحاسم لـ OXPHOS وتحلل السكر في حماية الكلى في دراسات سابقة ، حيث يحمي موازنة استخدام الوقود عن طريق تثبيط S-nitrosylation من بيروفات كيناز M2 (PKM2) منالكلىإصابة.19 النتائج التي توصلنا إليها ، والتي تشير إلى تعزيز OXPHOS وتحلل السكر بواسطة IL -22 من خلال زيادة تعبير منظمات التمثيل الغذائي وامتصاص الجلوكوز ، توضح أن IL -22 يعكس حالات التمثيل الغذائي المتدهورة المرتبطة بـالكلىإصابة. تتوافق هذه الملاحظات مع وظائف الحماية الكلوية للإريسين المؤتلف وأيضًا بما يتماشى مع النتائج المستخلصة من خلايا الكبد ، حيث يكون كل من OXPHOS وانحلال السكر ضروريين للوظائف الخلوية ، ولكن إذا تم تثبيطهما ، فإن الخلايا الأنبوبية الأولية وخلايا الكبد تصبح مختلة. 36

ظهر الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا كأساس جزيئي رئيسي يدمج الملامح الأيضية وموت الخلايا. هنا ، نوضح أنه عند تحفيز عوامل الإصابة ، أدى علاج TECs باستخدام IL -22 إلى تحسين تراكم ROS للميتوكوندريا والميتوكوندريا المختلة وظيفيًا مقارنة بسلامة ووظيفة الميتوكوندريا المنخفضة في مجموعات التحكم. الأهم من ذلك ، أن مسارات إشارات AMPK ، وأجهزة استشعار الطاقة الحرجة ، تعدل عمليات التمثيل الغذائي للحفاظ على التوازن الخلوي ومنع تلف الخلايا أو الأنسجة. إشارات AMPK / AKT لإثبات أن IL -22 يمنع الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا بطريقة مباشرة ، وهو أمر حيوي للحفاظ على قدرة الجهاز التنفسي TECs. علاوة على ذلك ، نوضح أن إشارات IL -22 من خلال STAT3 لها تأثيرات مباشرة على الحفاظ على لياقة الميتوكوندريا ، حيث تم التحقيق في تلك التي تم التحقيق فيها مسبقًا بأن الفسفرة المستحثة STAT3 أمر بالغ الأهمية للحفاظ على سلامة الميتوكوندريا.

أشارت أنواع متعددة من الأدبيات سابقًا إلى أن PFKFB3 يلعب دور المُعدِّل المركزي في عملية التمثيل الغذائي للخلية. {6}} ينظم حالات التمثيل الغذائي من خلال تضمين التحكم في PFKFB3. علاوة على ذلك ، تشير الدراسات السابقة أيضًا إلى أن PFKFB3 مهم للتحكم في OXPHOS المبالغ فيه وتحلل السكر في الكثير من الخلايا أو الأنسجة .42،43 وفقًا لهذه الدراسات ، تشير ملاحظاتنا أيضًا إلى تعزيز OXPHOS وتحلل السكر في IL -22- تمت معالجة TECs عن طريق تنشيط PFKFB3. من بين العديد من المُعدِلات النهائية لـ IL -22 التي تم فحصها ، توضح بياناتنا أن PFKFB3 يتم تنظيمه بشكل كبير بعد معالجة IL -22 أثناء تلف TEC وأن محور STAT3 – AMPK / AKT PFKFB3 حيوي للحفظ من سلامة الميتوكوندريا أثناءالكلىإصابة(الشكل 7). لا يزال يتعين التحقيق فيها إذا كان IL -22 ينظم أيضًا منظمات التمثيل الغذائي الأخرى والعمليات المتعلقة بإصابة الكلى من خلال تنشيط مسار إشارات STAT3 – AMPK / AKT-PFKFB3.

الشكل 7 توضح النتائج التي توصلنا إليها دورًا مهمًا لـ IL -22 في التحكم في استقلاب خلايا الكلى لعلاج تلف الكلى من خلال تنشيط محور STAT 3- AMPK / AKT-PFKFB3. تشير هذه النتائج إلى أن الفرص العلاجية لـ IL -22 واستهداف إشارات التمثيل الغذائي المرتبطة بها يمكن أن تكون مواتية بشكل مباشر للعديد من علاجات تلف الكلى أو الوقاية منها

5. الاستنتاجات

في الختام ، أوضحنا الإمكانات العلاجية والآليات الكامنة وراء IL -22 في تلف الكلى. ينظم IL -22 التمثيل الغذائي للخلايا الكلوية عن طريق إعادة البرمجة الأيضية للحفاظ على سلامة الميتوكوندريا. يمكن أن يؤدي تثبيط منظماتها (مثل AMPK و Akt و PFKFB3) إلى تشكيلات استقلابية غير طبيعية وفقدان لياقة الميتوكوندريا ، كما هو موضح في TECs مع العلاج التلقائي -22 ، والذي أدى إلى زيادة خلل وظيفي في الميتوكوندريا وتراكم ROS في الميتوكوندريا. والأهم من ذلك ، أن الضرر الكلوي الناتج عن الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا وتراكم أنواع الأكسجين التفاعلية في نماذج الفئران قد تم تخفيفه بشكل كبير عن طريق علاج IL -22 من خلال تنشيط إشارات STAT 3- AMPK-AKT-PFKFB3. وبالتالي ، أشارت دراستنا إلى أن استهداف إشارات التمثيل الغذائي المصاحبة يمكن أن يكون مفيدًا بشكل مباشر للعديد من أمراض تلف الكلى وأن IL -22 هو عامل علاجي محتمل للوقاية من هذه الأمراض وعلاجها.

يمكن أن تعالج منتجات Cistancheإصابة في الكلى

من: 'IL -22- بوساطة إعادة برمجة التمثيل الغذائي الكلوي عبر PFKFB3 للعلاجالكلىإصابة' بواسطةوي تشين وآخرون

---كلين. ترجمة. ميد. 2021 ؛ 11: e324.

المراجع

1. Mehta RL ، Burdmann EA ، Cerdá J ، et al. التعرف على وإدارة الحالات الحادةالكلىإصابةفي الجمعية الدولية لأمراض الكلى 0 by25 Global Snapshot: دراسة مقطعية متعددة الجنسيات. لانسيت. 2016 ؛ 387: 2017-2025.

2. Lameire NH ، Bagga A ، Cruz D ، وآخرون. بَصِيرالكلىإصابة: قلق عالمي متزايد. لانسيت. 2013 ؛ 382: 170-179.

3. ميهتا رل ، سيردا جيه ، بوردمان إي إيه وآخرون. مبادرة الجمعية الدولية لأمراض الكلى 0 by25 للحالات الحادةالكلىإصابة(صفر وفيات يمكن الوقاية منها بحلول عام 2025): قضية حقوق الإنسان لأمراض الكلى. لانسيت. 2015 ؛ 385: 2616-2643.

4. ليفي أس ، جيمس إم تي. بَصِيرالكلىإصابة. Ann Intern Med.2017 ؛ 167: ITC 66- ITC80.

5. Jansen MPB، Florquin S، Roelofs JJTH. دور الصفائح الدموية في الحالات الحادةالكلىإصابة. نات ريف نفرول. 2018 ؛ 14: 457-471.

6. Agarwal A ، Dong Z ، Harris R ، et al. الآليات الخلوية والجزيئية لـ AKI. J آم سوك نفرول. 2016 ؛ 27: 1288-1299.

7. Linkermann A ، Chen GC ، Dong G ، Kunzendorf U ، KrautwaldS ، Dong Z. تنظيم موت الخلايا في AKI. J Am Soc Nephrol.2014 ؛ 25: 2689-2701.

8. Ferenbach DA، Bonventre JV. آليات إصلاح سوء التكيف بعد القصور الكلوي الحاد مما يؤدي إلى تسريع شيخوخة الكلى و CKD.Nat Rev Nephrol. 2015 ؛ 11: 264-276.

9. Chawla LS ، Eggers PW ، Star RA ، Kimmel PL. بَصِيرالكلىإصابةوأمراض الكلى المزمنة مثل المتلازمات المترابطة. إن إنجل جي ميد. 2014 ؛ 371: 58-66.

10. He L و Wei QQ و Liu J وآخرون. AKI على CKD: إصابة متزايدة ، وإصلاح مكبوت ، والآليات الأساسية. Kidney Int.2017 ؛ 92: 1071-1083.

11. Forbester JL، Lees EA، Goulding D، et al. يعزز Interleukin -22 الاندماج phagolysosomal للحث على الحماية ضد السالمونيلا المعوية التيفية في الخلايا الظهارية البشرية. Proc Natl Acad Sci USA. 2018 ؛ 115: 10118-10123.

12. Geng H ، Bu HF ، Liu F ، et al. في الأنسجة المعوية الملتهبة والخلايا الظهارية ، تزيد إشارات الإنترلوكين 22 من التعبير عن RNA طويل الأمد غير المشفر H19 ، مما يعزز تجديد الغشاء المخاطي. أمراض الجهاز الهضمي. 2018 ؛ 155: 144-155.

13. Aden K، Tran F، Ito G، et al. يقوم ATG16L1 بتنسيق إشارات الإنترلوكين -22 في ظهارة الأمعاء عبر cGAS-STING. ي اكسب ميد. 2018 ؛ 215: 2868-2886.

14. Huber SN ، Gagliani LA ، Zenewicz FJ ، et al. يتم تنظيم IL -22 BP بواسطة الجسيم الملتهب كما أنه يعدل تكوين الأورام في الأمعاء. طبيعة سجية. 2012 ؛ 491: 259-263.

15. Lindemans CA ، Calafiore M ، Mertelsmann AM ، et al.Interleukin -22 يعزز تجديد الخلايا الجذعية المعوية. طبيعة سجية. 2015 ؛ 528: 560-564.

16. Xu MJ ، Feng D ، Wang H ، Guan Y ، Yan X ، Gao B. IL -22 يخفف من إصابة نقص التروية الكلوية - ضخه عن طريق استهداف ظهارة النبيبات القريبة. J آم سوك نفرول. 2014 ؛ 25: 967-977.

17. Kulkarni OP ، Hartter I ، Mulay SR ، وآخرون. يُسرع المستقبل الشبيه بالرسائل 4- الناجم عن الإنترلوكين -22 من تجديد الكلى. J آم سوك نفرول. 2014 ؛ 25: 978-989.

18. Kang HM ، Ahn SH ، Choi P ، et al. أكسدة الأحماض الدهنية المعيبة في الخلايا الطلائية الأنبوبية الكلوية لها دور رئيسي في تطور التليف الكلوي. نات ميد. 2015 ؛ 21: 37-46.

19. Zhou HL ، Zhang R ، Anand P ، وآخرون. تحمي إعادة البرمجة الأيضية بواسطة نظام اختزال S-nitroso-CoAالكلىإصابة. طبيعة سجية. 2019 ؛ 565: 96-100.

20. Dumesic PA ، Egan DF ، Gut P ، وآخرون. ينظم uORF المحفوظ تطوريًا PGC1 والتمثيل الغذائي التأكسدي في الفئران والذباب والتونة ذات الزعانف الزرقاء. ميتاب الخلية. 2019 ؛ 30: 190-200.

21. Shyh-Chang N ، Zhu H ، Yvanka de Soysa T ، وآخرون. يعزز Lin28 إصلاح الأنسجة عن طريق إعادة برمجة التمثيل الغذائي الخلوي. خلية. 2013 ؛ 155: 778-792.

22. Chen W ، Luan J ، Wei G ، et al. التعبير الخلوي الكبدي في الجسم الحي للإنترلوكين -22 باستخدام الجسيمات النانوية الهجينة القائمة على الاختراق كعلاجات محتملة لمكافحة التهاب الكبد. المواد الحيوية. 2018 ؛ 187: 66- 80.

23. Chen W ، Zhang X ، Fan J ، وآخرون. يؤدي ربط الإنترلوكين -22 إلى صميم البروتين الشحمي AI إلى تحسين الفئران من إصابة الكبد التي يسببها عقار الاسيتامينوفين. ثيرانوستيكس. 2017 ؛ 7: 4135-4148.

24. Zai W، Chen W، Wu Z، et al. توصيل الجينات المستهدفة للإنترلوكين -22 في الكبد عن طريق بوليميتفورمين والجسيمات النانوية الهجينة القائمة على الاختراق لعلاج مرض الكبد الدهني غير الناجم عن شرب الكحول. واجهات ACS Appl Mater. 2019 ؛ 11: 4842-4857.

25. Khacho M، Harris R، Slack RS. الميتوكوندريا كمنظمات مركزية لمصير الخلايا الجذعية العصبية والوظيفة المعرفية. نات ريف نيوروسسي. 2019 ؛ 20: 34-48.

26. Ip WKE ، Hoshi N ، Shouval DS ، Snapper S ، Medzhitov R. التأثير المضاد للالتهابات لـ IL -10 بوساطة إعادة برمجة التمثيل الغذائي للبلاعم. علوم. 2017 ؛ 356: 513-519.

27. Saito Y، Chapple RH، Lin A، Kitano A، Nakada D. AMPK يحمي الخلايا المسببة لسرطان الدم في اللوكيميا النخاعية من الإجهاد الأيضي في نخاع العظم. الخلية الجذعية للخلايا. 2015 ؛ 17: 585- 596.

28. Mihaylova MM، Shaw RJ. ينسق مسار إشارات AMPK نمو الخلايا والالتهام الذاتي والتمثيل الغذائي. نات سيل بيول. 2011 ؛ 13: 1016-1023.

29. Li FL ، Liu JP ، Bao RX ، وآخرون. يتراكم الأسيتيل PFKFB3 في السيتوبلازم لتعزيز تحلل السكر ويحمي الخلايا من موت الخلايا المبرمج الناجم عن السيسبلاتين. نات كومون. 2018 ؛ 9: 508.

30. De Bock K و Georgiadou M و Schoors S et al. دور تحلل السكر الناتج عن PFKFB 3- في إنبات الأوعية الدموية. خلية. 2013 ؛ 154: 651-663.

31. Dudakov JA، Hanash AM، van den Brink MR. إنترلوكين -22: بيولوجيا المناعة وعلم الأمراض. Annu Rev Immunol. 2015 ؛ 33: 747- 785.

32. Wang S ، Li Y ، Fan J ، وآخرون. Interleukin -22 يحسن من إصابة الكلى والتليف في اعتلال الكلية السكري من خلال تثبيط تنشيط NLRP3 الالتهابي. ديس موت الخلية. 2017 ؛ 8: e2937.

33. شين يل ، تشين دبليو ، هان إل ، وآخرون. يعمل الجسم المضاد VEGF-B والبروتين الانصهار الإنترلوكين -22 على تحسين اعتلال الكلية السكري من خلال تثبيط تراكم الدهون والاستجابات الالتهابية. أكتا فارم سين ب. 2020. https://doi.org/10.1016/j. apsb.2020.07.002.

34. Ouyang W، O'Garra A. IL -10 family cytokines IL -10 and IL -22: من العلوم الأساسية إلى الترجمة السريرية. حصانة. 2019 ؛ 50: 871- 891.

35. Xiang X ، Feng D ، Hwang S ، وآخرون. يخفف إنترلوكين -22 الفشل الكبدي الحاد والمزمن من خلال إعادة برمجة مسارات التجدد الضعيفة في الفئران. J هيباتول. 2020 ؛ 72: 736-745.

36. Chen W ، Zai W ، Fan J ، et al. يقود إنترلوكين -22 إعادة البرمجة التكيفية الأيضية للحفاظ على لياقة الميتوكوندريا وعلاج إصابة الكبد. ثيرانوستيكس. 2020 ؛ 10: 5879-5894.

37. Peng H ، Wang Q ، Lou T ، et al. يعمل الحديث المتبادل بين العضلات والكلى من Myokine على تثبيط إعادة البرمجة الأيضية والتليف في الكلى التالفة. نات كومون. 2017 ؛ 8: 1493.

38. Saberi B، Ybanez MD، Johnson HS، Gaarde WA، Han D، Kaplowitz N. Protein kinase c (PKC) يشارك في السمية الكبدية acetaminophen من خلال c-jun-n-terminal kinase (jnk) - مسارات إشارات مستقلة ومستقلة. أمراض الكبد. 2014 ؛ 59: 1543-1554.

39. Mo R ، Lai R ، Lu J ، et al. يساهم الالتهام الذاتي المحسن في التأثيرات الوقائية لـ IL -22 ضد إصابة الكبد التي يسببها عقار الاسيتامينوفين. ثيرانوستيكس. 2018 ؛ 8: 4170-4180.

40. Wegrzyn J ، Potla R ، Chwae YJ ، et al. وظيفة Stat3 الميتوكوندريا في التنفس الخلوي. علوم. 2009 ؛ 323: 793-797.

41. Chen W ، Hu Y ، Ju D. العلاج الجيني لاضطرابات التنكس العصبي: التطورات ، والرؤى ، والتوقعات. أكتا فارم سين بي 2020 ؛ 10: 1347-1359.

42. Cao Y ، Zhang X ، Wang L ، et al. PFKFB 3- تحلل الجلوكوز البطاني بوساطة يعزز ارتفاع ضغط الدم الرئوي. Proc Natl Acad Sci USA. 2019 ؛ 116: 13394-13403.

43. Doménech E، Maestre C، Esteban-Martínez L، et al. يتوسط AMPK و PFKFB3 في تحلل السكر والبقاء على قيد الحياة استجابةً للتفتل أثناء التوقيف الانقسامي. نات سيل بيول. 2015 ؛ 17: 1304- 1316.