يحمي محلول UW المضاف إليه ثيوكبريتات الصوديوم الطعوم الكلوية ضد الإصابة بنقص التروية الباردة - إعادة التروية في نموذج مورين لزراعة الكلى المسننة

جهة الاتصال: ali.ma@wecistanche.com

ماكس واي تشانغ وآخرون

يمنع Cistanche tubulosaالكلىالمرض ، انقر هنا للحصول علىالمنتجات و Cistanche Nz

نبذة مختصرة

مقدمة:تعد إصابة نقص التروية الباردة - ضخه (IRI) حدثًا لا مفر منه يزيد من مضاعفات ما بعد الزرع. لقد أظهرنا سابقًا أن مكملات محلول جامعة ويسكونسن (UW) بجزيئات مانحة لكبريتيد الهيدروجين (H2S) غير المعتمدة من إدارة الأغذية والعقاقير (FDA) تقلل IRI البارد وتحسن وظيفة الكسب غير المشروع الكلوي بعد الزرع. تبحث الدراسة الحالية في ما إذا كان جزيء H2S الذي تمت الموافقة عليه من قِبل إدارة الأغذية والعقاقير (H2S) ، ثيوسلفات الصوديوم (STS) ، سيكون له نفس التأثير أو التأثير المتفوق في نموذج الفئران ذي الصلة سريريًا من العلاج بالمنظار المصحوب بالدم.الكلىالزرع.

طريقة:خضع ثلاثون فأرًا من فئران لويس لاستئصال كلوي ثنائي متبوعًا بزرع مثلي متناغم في الجانب الأيسرالكلىبعد 24- ساعة من الحفظ في محلول UW أو UW plus STS عند 4 درجات مئوية. تمت مراقبة الفئران حتى اليوم 14 بعد الزرع وتم التضحية بها لتقييم وظائف الكلى (إخراج البول ، والكرياتينين في الدم ، ونتروجين اليوريا في الدم).الكلىكانت المقاطع ملطخة بـ H&E و TUNEL و CD68 و myeloperoxidase (MPO) للكشف عن نخر أنبوبي حاد (ATN) وموت الخلايا المبرمج وتسلل البلاعم وتسلل العدلات.

نتيجة:أظهرت طعوم UW بالإضافة إلى STS تحسنًا ملحوظًا في وظيفة الكسب غير المشروع فور الزرع ، مع تحسن بقاء المستلم مقارنة بطعوم UW (p <{0}. 05).="" كشف="" الفحص="" التشريحي="" المرضي="" عن="" انخفاض="" كبير="" في="" atn="" ،="" موت="" الخلايا="" المبرمج="" ،="" الضامة="" ،="" وتسلل="" العدلات="" وتقليل="" تنظيم="" الجينات="" المؤيدة="" للالتهابات="" والمؤيدة="" للاستماتة="" في="" طعوم="" uw="" بالإضافة="" إلى="" sts="" مقارنة="" بالطعوم="" uw="" (p=""><>

استنتاج:لقد أظهرنا لأول مرة أن الحفاظ على الطعوم الكلوية في محلول UW المضاف إليه STS يحمي من البرودة المطولة عن طريق قمع المسارات الالتهابية والاستماتة ، وبالتالي تحسين وظيفة الكسب غير المشروع وإطالة بقاء المتلقي. يمكن أن يمثل هذا استراتيجية علاجية جديدة قابلة للتطبيق سريريًا لتقليل النتائج السريرية الضارة للباردة المطولة IRI فيالكلىالزرع.

الكلمات الدالة:ثيوسلفات الصوديوم (STS) إصابة نقص التروية وضخه (IRI) التخزين البارد الثابت (SCS)الكلىزرع الكسب غير المشروع وبقاء المتلقي

1 المقدمة

الكلىالزرع هو العلاج الأمثل للمرحلة النهائيةالكلىكلويمرض (الداء الكلوي بمراحله الأخيرة). مقارنة بغسيل الكلى ،الكلىيعتبر الزرع متفوقًا ، لأنه يوفر نوعية حياة أفضل ويمنح ميزة بقاء كبيرة إلى جانب فعاليته من حيث التكلفة [1-3]. ومع ذلك ، فإن شراء كلى المتبرع يرتبط بطبيعته بإصابة نقص التروية - ضخه (IRI) ، وهي نتيجة حتمية للتوقف والاستعادة اللاحقة لتدفق الدم أثناء الزراعة العابرة [4]. تتمثل الإستراتيجية الحالية للتخفيف من IRI الناجم عن الزرع في التخزين البارد الثابت (SCS) للطعوم الكلوية في حلول الحفظ القياسية مثل محلول جامعة ويسكونسن (UW) على الجليد عند 4 درجات مئوية خلال فترة ما قبل الزرع [5]. ومع ذلك ، فقد ثبت أن SCS لفترات طويلة مرتبط بزيادة موت الخلايا ، والالتهاب ، والأحداث الخلوية والجزيئية الضارة الأخرى ، والتي تؤدي في النهاية إلى زيادة حدوث تأخر وظيفة الكسب غير المشروع (DGF) ، والنخر الأنبوبي الحاد (ATN) ، وانخفاض الكسب غير المشروع. البقاء على قيد الحياة [6-10]. بالإضافة إلى ذلك ، لمواكبة الارتفاع العالمي في حدوث الداء الكلوي بمراحله الأخيرة والعدد المتزايد باستمرار من المرضى في قوائم انتظار الزرع ، تقبل العديد من مراكز الزرع الطعوم الكلوية بفترات إقفارية طويلة من البرد ، مما يساهم بشكل أكبر في تلف الأنسجة الكلي. بعد SCS هو ضخه ، عندما يتم استعادة الدم المؤكسج الدافئ في الكسب غير المشروع الإقفاري البارد. يتميز ضخ الدم ، وهو الطور المستجيب للإصابة الدماغية ، بزيادة إصابة الأنسجة [11-13].

استراتيجية علاجية محتملة للحد من البرد IRI أثناءالكلىيتضمن الزرع تكميل محلول الحفظ القياسي بكبريتيد الهيدروجين (H2S) ، وهو ناقل غاز ينتج داخليًا والذي ثبت أنه يلعب أدوارًا فسيولوجية مهمة في توسع الأوعية والإشارات الخلوية [14-16]. لقد أظهرنا سابقًا أن SCS المطول في محلول UW المضاف إليه H2S يقلل من IRI البارد الناجم عن الزرع ويحسن بقاء الكسب غير المشروع في نماذج الفئران من زرع الكلى التخليقي والخيفي [17-19 ، 41 ، 42]. ومع ذلك ، فإن جزيئات H2S المانحة المستخدمة في هذه الدراسات ليست قابلة للتطبيق سريريًا. وقد أدى ذلك إلى التفكير في استخدام ثيوسلفات الصوديوم (STS) ، وهو دواء مانح به كبريتيد الهيدروجين تم اعتماده من قبل إدارة الغذاء والدواء (FDA) لعلاج التكلس في مرضى الداء الكلوي بمراحله الأخيرة ، والسمية التي يسببها سيسبلاتين في علاج السرطان ، وكترياق تسمم السيانيد [20-23]. أظهرت الدراسات الحديثة أن STS تعرض تأثيرات وقائية في النماذج الحيوانية من IRI [24-26]. ومع ذلك ، فإن تأثيره على IRI الكلوي البارد الناجم عن الزرع غير معروف. لذلك ، تبحث الدراسة الحالية في التأثيرات الوقائية للكلية لـ STS في نموذج في المختبر من IRI الكلوي ونموذج الفئران لزرع الكلى المثلي المصاحب.

2. المواد والأساليب

2.1. بروتوكول تجريبي في المختبر

تم استخدام نموذج في المختبر لنقص الأكسجة البارد وإصابة إعادة الأكسجة الدافئة التي تحاكي الظروف الخلوية أثناء IRI البارد في الجسم الحي لتقييم التأثيرات الوقائية لـ STS أثناء IRI الكلوي. تم استخدام الخلايا الظهارية لكلية الفئران (NRK {0} خط الخلايا E ؛ ATCC ، الولايات المتحدة الأمريكية) في التجارب المختبرية لأن هذه الخلايا معرضة للإصابة بنقص تروية الدم [27] ، ويتوافق استخدامها مع الفئران نموذج الزرع المستخدم للهدف الثاني من هذه الدراسة. تمت زراعة الخلايا في Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) التي تحتوي على 1 0 بالمائة من مصل بقري جنيني (FBS) معطل بالحرارة عند 60 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة و 1 بالمائة بنسلين / ستربتومايسين (P / S). تم تحضين الخلايا في ظروف نمو طبيعية تبلغ 37 درجة مئوية ، و 21 في المائة من O2 ، و 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون. كانت خلايا التحكم في ظروف مماثلة لتلك الخاصة بخلايا ما قبل التجربة. عولجت الخلايا التجريبية إما باستخدام وسائط خالية من المصل (SF) ، أو SF بالإضافة إلى 200 نانومتر AP39 ، أو SF بتركيزات مختلفة (50 ميكرومتر ، 150 ميكرومتر ، 500 ميكرومتر ، 1 مم) من ثيوسلفات الصوديوم بنتاهيدراتي (STS) ، والتي تم الحصول عليها من محلول قابل للحقن سعة 250 مجم / مل من STS (Seacalphyx® [Seaford Pharmaceuticals Inc ، ميسيسوجا ، أونتاريو ، كندا]). تم استخدام تركيز 200 نانومتر AP39 لأننا أظهرنا سابقًا أن AP39 عند هذا التركيز هو مضاد للخلايا ضد نفس خط الخلية في نموذج مشابه من IRI البارد [20]. تم تحضين الخلايا بعد ذلك عند 10 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في ظل ظروف نقص الأكسجين (5 بالمائة ثاني أكسيد الكربون ، 0.5 بالمائة O2 ، 95 بالمائة N2) في غرفة نقص الأكسجة H85 HypOxystation (HYPO2YGEN ، الولايات المتحدة الأمريكية) للحث على إصابة نقص تروية البرد. تم استخدام درجة حرارة منخفضة الحرارة بمقدار 10 درجات مئوية لأن هذه كانت أدنى درجة حرارة يمكن تحقيقها تقنيًا مع الحفاظ على مستوى الأكسجين بنسبة 0.5 بالمائة من نقص الأكسجة. بعد نقص الأكسجة ، تم استبدال الوسائط التي تحتوي على خلايا تجريبية بوسائط تحكم ، وأعيد تأكسج الخلايا عن طريق الحضانة في ظل ظروف النمو الطبيعي (37 درجة مئوية ، و 21 في المائة من O2 ، و 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون) لمدة 24 ساعة لمحاكاة ضخه والإصابة المرتبطة به. بعد إعادة الأكسجة لمدة 24 ساعة ، تم تقييم قابلية البقاء الخلوي من خلال تلطيخ الخلايا باستخدام Annexin-V المترافق مع FITC (FITC-Annexin-V ؛ BioLegend ، الولايات المتحدة الأمريكية) و 7- Aminoactinomycin D (7- AAD ؛ BioLegend ، الولايات المتحدة الأمريكية ) ، الذي يقيس موت الخلايا المبرمج والنخر على التوالي. تم تحليل الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام CytoFLEX S (بيكمان كولتر ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم استخدام FlowJo الإصدار 11 (FlowJo LLC ، الولايات المتحدة الأمريكية) لبوابة البيانات بشكل مناسب للتحليل الإحصائي.

2.2. حيوانات تجريبية

تم إيواء ثلاثين ذكرًا من جرذان لويس بوزن 275-300 جرام وتم شراؤها من تشارلز ريفر (سانت كونستانت ، كيو سي ، كندا) في مرفق رعاية الحيوان والخدمات البيطرية في الجامعة الغربية (لندن ، أونتاريو) في ظل ظروف قياسية. تمت الموافقة على الدراسات التي أجريت على الحيوانات من قبل مجلس الجامعة الغربية لرعاية الحيوان واستخدام الحيوان بمعرف بروتوكول 2018-155.

2.3 نموذج زرع الكلى

Syngeneic kidney transplantation in Lewis rats was performed to eliminate any confounding effects of immunosuppression. Rats were randomized into treatment groups of UW solution alone (UW) or UW+STS, anesthetized with ketamine (30 mg/kg) via intraperitoneal administration, and maintained under anesthesia with isoflurane during surgery. The left donor kidneys were procured under aseptic condition and flushed with 10 mL of either cold (4 ◦C) UW solution (UW group, n = 8) in a 28-G Angiocath Becton-Dickinson, or cold UW solution supplemented with sodium thiosulfate pentahydrate (150 µM Seacalphyx® [Seaford Pharmaceuticals Inc, Mississauga, ON, Canada]; UW+STS group, n = 6) until venous effluent was clear. Grafts were then subjected to SCS in UW solution at 4◦C with or without STS for 24 h to mimic prolonged cold ischemic time as previously described [13]. Following 24 h of SCS and bilateral nephrectomy in recipients, renal grafts were transplanted orthotopically into the left renal fossa of syngeneic recipient rats using 11–0 Prolene sutures as we previously described [22]. Sham-operated rats (mid-line incision only; n = 5), were used to establish a baseline for survival, histological analysis, BUN, and serum creatinine. Additionally, another subset of rats in the UW+STS group had grafts removed pre-emptively on a postoperative day (POD) 3 (n = 5) for histological comparison with UW grafts of recipients that were sacrificed at this time point. All surgeries were performed by the same microsurgeon with the length of surgery for the recipient being approximately 2–3 h for both UW and UW+STS groups. Graft failure was presumed in animals that required premature sacrifice (severe visible distress and/or >20 في المائة من فقدان الوزن) أو الموت. تم فحص نقاط النهاية الإنسانية مرتين في اليوم وتم قتل جميع الفئران عن طريق التعرض لثاني أكسيد الكربون في غرفة بمعدل تدفق قدره 40 في المائة. في وقت القتل الرحيم ، لم تكن هناك مضاعفات جراحية يمكن أن تؤدي إلى اختلافات في النتائج.

2.4 تحليل وظائف الكلى

بعد زرع الكلى ، تمت مراقبة الفئران في أقفاص أيضية لمدة 14 يومًا ثم تم التضحية بها. تم جمع عينات الدم والبول على POD 3 و 5 و 7 و 10 و 14 لتحديد معايير وظائف الكلى (كرياتينين الدم ، نيتروجين اليوريا في الدم [BUN] ، الأسمولية في البول ، وإخراج البول). كان BUN وكرياتينين المصل من متلقي زرع الكلى وتم قياس الفئران التي تديرها شام باستخدام جهاز IDEXX Catalyst One Chemistry Analyzer (Markham ، ON). تم تحديد مستويات الأسمولية في البول عن طريق قياس التناضح لدرجة التجمد باستخدام آلة 3320 Osmometer (Advanced Instruments ، Norwood ، MA) ومقارنتها بالمعايير التي توفرها الشركة.

2.5 تحليل الأنسجة والمورفومترية

تم تقطيع أنسجة الكلى المضمنة بالبارافين إلى أقسام بسماكة 4 ميكرون وتركيبها على شرائح مجهرية للأنسجة. كانت المقاطع ملطخة بهيماتوكسيلين ويوزين (H&E) ، وسم نهاية ديوكسينوكليوتيديل ترانسفيراز dUTP (TUNEL) لتحديد درجة ATN وموت الخلايا المبرمج على التوالي. تم منح أقسام H&E درجة لـ ATN بواسطة اختصاصي أمراض الكلى المكفوفين وفقًا للمخطط التالي: 1 =<11%, 2="11–24%," 3="25–45%," 4="46–75%," 5="">75٪ طعم ATN. تم تلطيخ أقسام الكلى أيضًا بالأجسام المضادة الأولية التالية: علامة إصابة الكلى (KIM -1) ، وعلامة سطح البلاعم CD68 ، وإنزيم myeloperoxidase الخاص بالعدلات (MPO ؛ Abcam® ، تورنتو ، كندا) وتصور بأجسام مضادة ثانوية و كروموجين الركيزة DAB باستخدام نظام Dako Envision (داكو ، جلوستروب ، الدنمارك) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة متبوعًا بالتحليل تحت مجهر الضوء الرقمي Eclipse 90i (Nikon® Instruments ، نيويورك) بتكبير 10x وقياسه كميًا بواسطة برنامج ImageJ الإصدار 1.8 (وطني) معاهد الصحة ، بيثيسدا ، دكتوراه في الطب).

2.6. التحليل الكمي PCR

تم عزل إجمالي الحمض النووي الريبي من أنسجة الكسب غير المشروع الكلوية التي تم الحصول عليها في POD 3 باستخدام RNeasy® Mini Kit (Qiagen ، تورنتو ، كندا) وعكس النسخ إلى (كدنا) باستخدام OneScript® Plus cDNA synthesis Kit (ABM ، كندا) بالتزامن مع oligo (dT) 12– 18 بادئة طبقاً لبروتوكول الشركة الصانعة. تم تحليل الحمض النووي الريبي المعزول و (كدنا) عبر nanodrop (DeNovix DS -11 مقياس الطيف الضوئي ، كندا) قبل الاستخدام ، مع تصنيفات A260 / 280 باستمرار> 1.95 و> 1.8 على التوالي. يحتوي خليط التفاعل لكل عينة qPCR على حجم 20 ميكرولتر وتم تصنيعه وفقًا لبروتوكول Blastaq® Green 2X qPCR Master Mix (ABM ، كندا) وتحليله باستخدام جهاز CFX Connect Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad ، كندا) . تم تصميم تسلسلات التمهيدي باستخدام برنامج Primer-BLAST (NCBI) ضد بيتا أكتين ، بولي (ADP-ribose) بوليميريز (PARP) ، إنترفيرون جاما (IFN-) ، عامل نخر الورم ألفا (TNF-) ، إنترلوكين 6 (IL). -6) ، B-cell lymphoma 2 (Bcl -2) ، Bcl -2- بروتين X مرتبط (BAX) ، كاسباس 3 ، BH3 ناهض موت النطاق التفاعلي (BID) ، c-Jun كيناز N-terminal 1/2 (JNK1 / 2) ، Pparg coactivator 1 alpha (PGC -1) ، مجمع الميتوكوندريا I (NDUFB8) ، مركب الميتوكوندريا II (SDHB) ، بروتين كيناز المنشط بالميتوجين 1/2 (ERK1 / 2) وجينات العدلة جيلاتيناز ليبوكالين (NGAL) وجزيء إصابة الكلى -1 (KIM -1). تم تطبيع جميع الجينات ذات الأهمية ضد بيتا أكتين. تمت مقارنة تغييرات أضعاف التعبير الجيني مع الفئران التي تديرها شام وتم حسابها باستخدام طريقة Ct.

2.7. تحليل احصائي

تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام حزمة البرنامج الإحصائي المنشور GraphPad (لا جولا ، كاليفورنيا) ، الإصدار 9. 0. تم تحليل بيانات البقاء على قيد الحياة باستخدام تحليل بقاء Kaplan-Meier واختبار رتبة السجل بينما تم تحليل بيانات التعبير الجيني qPCR باستخدام اختبار t أحادي الاتجاه. تم تحليل جميع البيانات الأخرى باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) متبوعًا باختبار Tukey اللاحق لتحديد الفروق الإحصائية بين المجموعات. تم قبول الدلالة الإحصائية في p<0.05. values="" are="" presented="" as="" mean="" ±="" standard="" error="" of="" mean="">

3. النتائج

3.1. تعمل الوسائط الخالية من المصل المضاف إليها STS على تحسين بقاء الخلايا الطلائية الأنبوبية الكلوية أثناء نقص الأكسجة الباردة / إعادة الأكسجة

أظهر تحليل التدفق الخلوي بعد التلوين من أجل موت الخلايا المبرمج والنخر أن خلايا NRK {0} المعالجة بـ SF أثناء اختبار IRI البارد في المختبر أظهرت انخفاضًا ملحوظًا في قابلية بقاء الخلية مقارنةً بخلايا التحكم (السمية) (الشكل 1A ؛ p < 0.="" 0="" 5).="" في="" حين="" أظهرت="" جميع="" العينات="" التجريبية="" بقاء="" الخلايا="" الظهارية="" الأنبوبية="" الكلوية="" أقل="" بكثير="" من="" الخلايا="" التي="" نمت="" في="" ظل="" ظروف="" سامة="" (p=""><0. مع="" وسائط="" sf="" وحدها="" (الشكل="" 1a="" ؛="" p=""><0.05) ،="" والتي="" تتوافق="" مع="" موت="" الخلايا="" المبرمج="" المنخفض="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنة="" بالخلايا="" المعالجة="" بوسائط="" sf="" وحدها="" (الشكل="" 1b="" ؛="" p=""><0.05). بالإضافة="" إلى="" ذلك="" ،="" يبدو="" أن="" الزيادة="" في="" قابلية="" الخلية="" للنمو="" وانخفاض="" في="" موت="" الخلايا="" المبرمج="" تصل="" إلى="" المستويات="" المثلى="" مع="" 150="" ميكرومتر="" و="" 500="" ميكرومتر="" من="" sts="" ،="" حيث="" أن="" جرعة="" أعلى="" عكست="" هذه="" الاتجاهات="" (الشكل="" 1="" أ="" و="">

3.2 يحسن تكميل محلول UW مع STS بقاء الكسب غير المشروع الكلوي ووظيفته في وقت مبكر

أدى الحفاظ على الطعوم الكلوية في محلول UW المضاف إليه STS إلى تحسن كبير في بقاء المتلقي مع بقاء 83 بالمائة حتى 14 POD (يوم التضحية) مقارنة بمجموعة التحكم دون مكملات STS ، والتي أظهرت بقاء 12.5 بالمائة ، خاصة في الأيام الثلاثة الأولى (الشكل. 2 أ ؛ ف <0. 0="" 5).="" بالإضافة="" إلى="" ذلك="" ،="" أدت="" مكملات="" sts="" إلى="" تحسين="" وظيفة="" الكسب="" غير="" المشروع="" بشكل="" ملحوظ="" خلال="" فترة="" ما="" بعد="" الزرع="" المبكرة="" مقارنةً="" بعلاج="" uw="" وحده.="" زادت="" مستويات="" الكرياتينين="" في="" الدم="" ومستويات="" bun="" بشكل="" ملحوظ="" في="" كل="" من="" مجموعات="" uw="" و="" uw="" بالإضافة="" إلى="" sts="" على="" pod="" 3="" ،="" والتي="" ارتبطت="" بانخفاض="" الأسمولية="" في="" البول="" مقارنةً="" بالشام="" (الأشكال="" 2="" ب="" ،="" ج="" ،="" 3="" أ="" ؛="" ف=""><0. {{25)="" }}="" 5).="" ومع="" ذلك="" ،="" انخفضت="" مستويات="" الكرياتينين="" في="" الدم="" ومستويات="" bun="" في="" مجموعة="" uw="" بالإضافة="" إلى="" sts="" بشكل="" ملحوظ="" على="" pod="" 3="" مع="" زيادة="" مقابلة="" في="" الأسمولية="" في="" البول="" مقارنة="" بمجموعة="" uw="" (الشكل="" 2b="" و="" c="" و="" 3="" a="" ؛="" p=""><0.05). ومن="" المثير="" للاهتمام="" ،="" أن="" مستويات="" الكرياتينين="" في="" الدم="" و="" bun="" في="" مجموعة="" uw="" plus="" sts="" انخفضت="" بشكل="" مطرد="" من="" pod="" 3="" إلى="" pod="" 14="" مع="" زيادة="" الأسمولية="" في="" البول="" وكانت="" مماثلة="" لتلك="" الخاصة="" بشام="" (الأشكال="" 2="" ب="" ،="" ج="" ،="" 3="" أ).="" أيضًا="" ،="" كان="" إخراج="" البول="" في="" مجموعة="" uw="" plus="" sts="" أعلى="" بشكل="" ملحوظ="" خلال="" الأيام="" الأربعة="" الأولى="" بعد="" الجراحة="" مقارنةً="" بمجموعات="" uw="" و="" sham="" (الشكل="" 3b="" ؛="" p=""><0.05). ومع="" ذلك="" ،="" فقد="" انخفض="" بشكل="" مطرد="" نحو="" قيمة="" خط="" الأساس="" (sham)="" وكان="" مشابهًا="" لقيمة="" sham="" على="" pod="" 14="" بينما="" ظل="" إخراج="" البول="" في="" الجرذ="" الباقي="" على="" قيد="" الحياة="" في="" مجموعة="" uw="" أعلى="" من="" القيمة="" الأساسية="" على="" pod="" 14="" (الشكل="" 3="">

3.3 تؤدي إضافة STS إلى محلول UW إلى التخفيف من موت الخلايا الناجم عن الزرع بعد زرع الكلى

تم تلطيخ أقسام الكلى التي تم الحصول عليها في POD 3 و 14 باستخدام TUNEL كمقياس لموت الخلايا المبرمج وسجلها أخصائي أمراض الكلى الأعمى (الشكل 4 أ). أظهرت الطعوم الكلوية من مجموعة UW موت الخلايا المبرمج أعلى بشكل ملحوظ على POD 3 كما هو مبين في درجة TUNNEL أعلى مقارنة بالكلى من مجموعات UW بالإضافة إلى STS و Sham (الشكل 5A و b ؛ p <0. {{11}="" }="" 5).="" لم="" تكن="" الطعوم="" المأخوذة="" من="" مجموعة="" uw="" plus="" sts="" مختلفة="" بشكل="" كبير="" مقارنة="" بتلك="" الخاصة="" بمجموعة="" sham="" في="" نفس="" النقطة="" الزمنية="" وفي="" pod="" 14="" (الشكل="" 4="" ب).="" بالإضافة="" إلى="" ذلك="" ،="" في="" حين="" أظهرت="" الطعوم="" من="" مجموعتي="" uw="" و="" uw="" plus="" sts="" زيادة="" ملحوظة="" في="" درجات="" atn="" على="" pod="" 3="" مقارنة="" بمجموعة="" sham="" (الشكل="" 5="" ؛="" p=""><0. 0="" 5)="" ،="" طعوم="" uw="" بالإضافة="" إلى="" sts="" أظهرت="" انخفاض="" درجات="" atn="" على="" pod="" 3="" مقارنة="" بـ="" uw="" (الشكل="" 5="" ؛="" p=""><0.05). أيضًا="" ،="" في="" حين="" أن="" مستلمي="" طعوم="" uw="" لم="" ينجوا="" حتى="" pod="" 14="" ،="" وبالتالي="" لا="" يمكن="" تحديد="" درجات="" atn="" الخاصة="" بهم="" على="" pod="" 14="" ،="" فإن="" تلك="" الخاصة="" بطعوم="" uw="" plus="" sts="" نجت="" حتى="" pod="" 14="" ولكنها="" أظهرت="" زيادة="" كبيرة="" في="" درجات="" atn="" مقارنة="" بمجموعة="" sham="" (الشكل).="" .5="" ؛="" ف=""><>

3.4. أظهرت الطعوم الكلوية المحفوظة في محلول UW المضاف إليه STS انخفاضًا في علامات الإصابة والتسلل الالتهابي بعد زرع الكلى

تم تلطيخ أقسام الكلى التي تم الحصول عليها في POD 3 و 14 باستخدام KIM -1 للكشف عن الإصابة الأنبوبية القريبة وكذلك CD68 (علامة البلاعم) و MPO (علامة العدلات) وسجلها اختصاصي أمراض الكلى الأعمى (الأشكال 6 أ ، 7 أ ، و ج). كان تعبير الأنسجة الكلوية لـ KIM -1 و CD68 و MPO أعلى بشكل ملحوظ في مجموعة UW على POD 3 مقارنةً بمجموعات UW بالإضافة إلى STS و Sham (الأشكال 6B و 7B و D ؛ p <{{11} }.="" 0="" 5)="" بينما="" لم="" يكن="" التعبير="" عن="" هذه="" العلامات="" في="" طعوم="" uw="" بالإضافة="" إلى="" sts="" مختلفًا="" بشكل="" كبير="" مقارنةً="" بالشام="" على="" pod="" 14="" (الأشكال="" 6="" ب="" ،="" 7="" ب="" ،="" د="" ؛="" ع=""> 0.05).

3.5 مكملات STS لمحلول UW قمعت التعبير الكلوي عن الجينات المؤيدة للالتهابات ، المؤيدة للاستماتة ، والميتوكوندريا

تم تحديد التعبير الجيني للعلامات المؤيدة للالتهابات ، والمؤيدة للاستماتة ، والمستهدفة الميتوكوندريا ، وإصابة الكلى عبر qRT-PCR في الكلى المزروعة التي تم الحصول عليها على POD 3. التعبير عن الجينات المسببة للالتهابات IFN- و TNF- و IL {{8 }} زادت بشكل ملحوظ في الطعوم UW بالنسبة لطعوم UW بالإضافة إلى STS على POD 3 (الشكل 8A ؛ p <0. 0="" 5)="" واتبع="" نفس="" النمط="" مع="" الجينات="" المؤيدة="" للاستماتة="" parp="" ،="" bax="" و="" caspases="" -3="" و="" bid="" و="" jnk1="" و="" jnk2="" (الشكل="" 8="" أ="" ؛="" ف=""><0. 0="" 5)="" بينما="" زاد="" تعبير="" bcl="" المضاد="" للاستماتة="" -2="" بشكل="" طفيف="" في="" uw="" بالإضافة="" إلى="" مجموعة="" sts="" مقارنة="" بمجموعة="" uw="" ،="" على="" الرغم="" من="" أن="" هذه="" الزيادة="" لم="" تصل="" إلى="" دلالة="" إحصائية="" (الشكل="" 8="" أ).="" بالإضافة="" إلى="" ذلك="" ،="" انخفض="" التعبير="" عن="" جينات="" الميتوكوندريا="" pgc="" -1="" و="" ndufb8="" (المركب="" i)="" و="" sdhb="" (المركب="" ii)="" في="" الطعوم="" uw="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنةً="" بالطعوم="" uw="" بالإضافة="" إلى="" sts="" (الشكل="" 8="" ب="" ؛="" ف=""><0 .="" 0="" 5)="" بينما="" لوحظ="" العكس="" مع="" تعبيرات="" erk1="" و="" erk2="" (الشكل="" 8="" ب="" ؛="" ف=""><0.05). علاوة="" على="" ذلك="" ،="" تمت="" زيادة="" التعبير="" الجيني="" لـ="" kim="" -1="" في="" طعوم="" uw="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنة="" بطعوم="" uw="" بالإضافة="" إلى="" sts="" (الشكل="" 8c="" ؛="" p=""><0.05) بينما="" لم="" يصل="" تعبير="" ngal="" المنخفض="" في="" طعوم="" uw="" بالإضافة="" إلى="" sts="" إلى="" دلالة="" إحصائية="" مقارنةً="" بتلك="" الموجودة="" في="" ترقيع="" uw="" (الشكل="" 8c="" ؛="" p=""> 0.05).

4. مناقشة

تؤسس هذه الدراسة مكملات لمحلول الحفظ القياسي مع STS ، وهو متبرع H2S قابل للتطبيق سريريًا ومعتمد من إدارة الغذاء والدواء الأمريكية ، للتخفيف من IRI الكلوي البارد الناجم عن الزرع ، وتحسين جودة الكسب غير المشروع وإطالة بقاء المتلقي. باستخدام نموذج في المختبر من IRI الكلوي ونموذج الفئران لزرع الكلى المثلي المتزامن ، نوضح لأول مرة أن مكملات محلول UW مع STS أثناء SCS لفترات طويلة هو حماية للأعضاء والأعضاء.

الاكتشاف الأساسي في نموذجنا المختبر هو أن مكملات STS للوسائط الخالية من المصل تحمي الخلايا الظهارية الكلوية من نقص الأكسجة البارد وموت الخلايا المبرمج الناجم عن إعادة الأكسجة الدافئة وتزيد من قابلية البقاء ، وهو ما يتوافق مع دراستنا السابقة حيث أظهرنا التأثيرات الوقائية للميتوكوندريا - استهداف عقار H2S المتبرع ، AP39 ، في نموذج في المختبر من IRI الكلوي البارد [20]. ومن المثير للاهتمام ، أن تركيز STS العالي البالغ 1 ملي مولار عكس التأثيرات المفيدة ، مما يعني أن STS تظهر ظاهرة استجابة للجرعة ثنائية الطور يشار إليها بالهرمونات ، حيث يكون التركيز المنخفض واقيًا للخلايا بينما يكون التركيز الأعلى سامًا للخلايا. يعد تلف الميتوكوندريا نتيجة رئيسية للـ IRI الكلوي ، حيث يمكن أن تمنع نفاذية الميتوكوندريا إنتاج الأدينوسين ثلاثي الفوسفات (ATP) وتزيد من تكوين أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ، وهو وسيط مدمر لإصابة الأنسجة [13]. لقد اقترح مؤخرًا أن الميتوكوندريا هي موقع أساسي لنشاط STS. لا يُعرف STS فقط بتوليد H2S في الميتوكوندريا عن طريق الاختزال المعتمد على الجلوتاثيون والعكس من خلال مسار أكسدة الكبريتيد ، ولكنه يحافظ أيضًا على تخليق ATP في الميتوكوندريا ، ويقلل من إنتاج ROS ، ويحسن أنشطة الإنزيم المعقدة في سلسلة نقل الإلكترون (ETC) [24 ، 28-30]. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت الدراسات الحديثة أن STS زاد بشكل ملحوظ من التعبير عن PGC -1 ، وهو منظم إيجابي للتكوين الحيوي للميتوكوندريا وإنتاج ATP [26] ، والذي يتوافق مع ملاحظتنا في الجسم الحي. يمكن أن تفسر هذه الآليات الجزيئية زيادة كبيرة في التعبير عن مجمعات ETC للميتوكوندريا I و II (NDUFB8 و SDHB على التوالي) في نموذج زرع الكلى لدينا مع زيادة البقاء على قيد الحياة والوظيفة كما لوحظ في الطعوم الكلوية المحفوظة في محلول UW المكمّل بـ STS.

بناءً على نتائجنا في المختبر ، قررنا التحقيق فيما إذا كان التأثير الوقائي لـ STS قابل للتطبيق في الجسم الحي باستخدام نموذج زرع حيث يكون IRI البارد مساهماً رئيسياً في اختلال وظيفة الكسب غير المشروع وزيادة مضاعفات ما بعد الزرع. تظهر النتائج التي توصلنا إليها أن SCS المطول (24 ساعة) من الطعوم الكلوية في محلول UW المضاف إليه STS يحسن بشكل كبير من جودة الكسب غير المشروع والوظيفة التي تتميز بانخفاض مستويات الكرياتينين في الدم ومستويات BUN ، وزيادة إنتاج البول ، وإطالة بقاء المستلم مقارنةً بالطعوم المحفوظة في محلول UW وحده . من المهم ملاحظة أن فورية إخراج البول حتى بعد زرع الكلى السريري هي نتيجة حاسمة تحدد ما إذا كان غسيل الكلى مطلوبًا لمعالجة وظيفة الكسب غير المشروع المتأخرة (DGF). لذلك ، فإن ملاحظتنا أن STS تزيد من إنتاج البول مباشرة بعد الزرع ويمكن مقارنتها بمجموعة Sham في POD 14 هي نتيجة واعدة. كما أن التحسن الملحوظ في وظائف الكلى بعد زرع الطعوم المحفوظة في محلول UW المضاف إليه STS منح أيضًا ميزة بقاء كبيرة. من الناحية الكمية ، أدت مكملات STS إلى إطالة عمر الكسب غير المشروع بحيث نجت 83 بالمائة (5/6) من الفئران التي تلقت طعوم UW بالإضافة إلى STS حتى 14 POD (يوم التضحية) مقارنة بـ 12.5 بالمائة فقط (1/8) من الجرذان المتلقية الطعوم المحفوظة في محلول UW بدون مكملات STS. تتوافق هذه النتيجة من الدراسة الحالية أيضًا مع دراستنا السابقة ، حيث تم حفظ 14 بالمائة فقط (1 من 7) من الجرذان المتلقية للطعوم في محلول UW لمدة 24 ساعة بدون مكملات H2S (GYY4137) ، والتي نجت حتى POD 14 [20] .

بالإضافة إلى إظهار التحسن في معلمات وظائف الكلى ، تمنع مكملات STS أيضًا موت الخلايا المبرمج الكلوي والالتهاب عن طريق تقليل تنظيم تعبير الأنسجة عن الجينات المؤيدة للاستماتة والالتهابات مع تنظيم الجينات المضادة للاستماتة في نفس الوقت وتقليل الضامة الإيجابية 68- للقرص المضغوط و العدلات الإيجابية لـ MPO ، والتي أدت إلى تقليل تعبير KIM -1 و ATN والحفاظ في النهاية على مورفولوجيا الكلى. من المعروف أن هذه السيتوكينات الالتهابية هي وسطاء لموت الخلايا أثناء IRI البارد [31] ، ومن المحتمل أن يكون انخفاضها في طعوم UW بالإضافة إلى STS بسبب الخصائص المعروفة لـ STS لتقليل نفاذية البطانة في الطبقة البطانية الوعائية الأحادية ، وتخفيف إنتاج السيتوكين ، واستنباط إنتاج السيتوكينات المضادة للالتهابات [32]. أيضًا ، فإن اكتشافنا أن مكملات STS لمحلول UW تقلل من تنظيم التعبير عن الجينات المؤيدة للالتهابات التي تتطابق مع دراسة سابقة عن النشاط المضاد للالتهابات لـ STS عن طريق تقليل مستويات TNF- و IL -6 في الأمراض العصبية [33 ، 34]. ميكانيكيًا ، يعمل STS على تعطيل الكاسبيز -3 من خلال الارتباط بموقعه النشط عبر روابط هيدروجينية قوية وبالتالي منع وصول الركيزة الطبيعية إلى الموقع النشط ، مما يؤدي في النهاية إلى وقف موت الخلايا المبرمج [35]. يمنع STS أيضًا تنشيط JNK ، وهو بروتين يلعب دورًا مهمًا في تأشير موت الخلايا المبرمج [35] ، والذي يدعم اكتشافنا بشأن التأثير الخافض للتنظيم لـ STS على caspase3 و JNK. ومع ذلك ، لا يمكننا تحديد ما إذا كانت هذه الآليات تعمل في الدراسة الحالية لأننا لم نجري تجارب إضافية لاستكشاف هذه الآليات الجزيئية.

يتمثل أحد القيود الرئيسية لتجربتنا في المختبر في التحدي التقني المتمثل في استخدام درجة حرارة الحفظ القياسية الحالية 4 درجات مئوية [36] ، حيث أن 10 درجات مئوية التي استخدمناها كانت أدنى درجة حرارة يمكن تحقيقها تقنيًا دون تعريض بيئة نقص الأكسجة للخطر. هذا فرق حقيقي فيما يتعلق بالعمليات الفسيولوجية الخلوية وأيضًا في تقنيات الحفظ. الحل المحتمل هو استخدام نقص الأكسجة المستحث كيميائياً في كيس بلاستيكي ووضعه في ثلاجة 4 درجات مئوية من أجل عكس الإعدادات السريرية لـ SCS. ومع ذلك ، تم تصميم أكياس توليد الغلاف الجوي اللاهوائية لاستخدامها في درجات حرارة دافئة (21-37 درجة مئوية) نظرًا لأن المركبات الكيميائية التي تحفز وظيفة بيئة نقص الأكسجين في ظل هذه الظروف. يجب أن تهدف الدراسات المستقبلية إلى تحسين درجة الحرارة في غرفة نقص الأكسجين لتقليد إعدادات SCS السريرية. سيسمح لنا تحقيق درجة حرارة ثابتة تبلغ 4 درجات مئوية دون المساس ببيئة ناقصة التأكسج بتحديد ما إذا كان يتم التعبير عن الأنماط الظاهرية المرصودة في نموذج IRI التجريبي في المختبر بشكل ثابت. بصرف النظر عن التجربة في المختبر ، فإن نموذج زرع الفئران لدينا أيضًا لا يخلو من العيب. لقد أجرينا عملية زرع كلى تآزرية (متبرعون ومتلقون متماثلون وراثيًا مع توافق مناعي) ، والذي ينطبق فقط على التوائم المتطابقة في زراعة الكلى السريرية ، في حين أن معظم عمليات زرع الكلى السريرية خيفي (متبرعون ومتلقون مختلفون وراثيًا). يُجبر الزرع الخيفي متلقي الزرع على الخضوع لاختبارات مناعية قبل الزرع لتحديد مستضدات الكريات البيض البشرية للمتبرع (HLA ؛ الجزيئات التي تحفز الاستجابة المناعية وتنظمها) ، وتحديد التوافق المناعي بين المتبرعين والمتلقين ، وتجنب رفض الأعضاء [37 ، 38]. يجب أن تأخذ الدراسات المستقبلية التي تستخدم STS في الاعتبار زرع الخيفي. نموذج آخر لزراعة الكلى المحدود هو حقيقة أننا ركزنا على المتبرعين الأحياء ، حيث أصبحت الطعوم دون المستوى الأمثل من المتبرعين بعد الموت القلبي (DCD) شائعة بشكل متزايد كمصدر لكلى المتبرعين في العديد من مراكز الزرع على مستوى العالم [39]. يعرض DCD الأعضاء المانحة لفترات مختلفة من نقص التروية الدافئة بالإضافة إلى أوقات نقص تروية البرد أثناء SCS ، ويرتبط بزيادة معدلات DGF وانخفاض بقاء الكسب غير المشروع مقارنةً بالمتبرعين الأحياء [40]. لذلك ، يجب أن تنظر الدراسات المستقبلية في نموذج زرع الكلى DCD لتقييم تأثير STS ضد IRI في هذا النموذج.

في الختام ، توضح دراستنا أن تكميل محلول الحفظ القياسي بدواء متبرع H2S قابل للتطبيق سريريًا خلال SCS المطول من الطعوم الكلوية يحمي من IRI الكلوي البارد الناجم عن الزرع ، ويحسن الجودة الكلية للكسب غير المشروع ووظيفة الكسب غير المشروع ، ويطيل بقاء متلقي الزرع. بالنظر إلى أن خطر DGF يزداد مع الوقت الإقفاري البارد لفترات طويلة في زراعة الكلى السريرية ، مما يثير قلقًا سريريًا كبيرًا ، فإن ملاحظة أن STS تحمي الطعوم الكلوية أثناء SCS لفترة طويلة وتمنع DGF بعد الزرع توفر وعدًا سريريًا كبيرًا يمكن أن يقلل أو يمنع حدوث DGF في زراعة الكلى السريرية في المستقبل القريب. وبالتالي ، فإن الفائدة المستقبلية لإضافة STS إلى حلول الحفظ قد تقدم حلاً محتملاً لهذه المشكلة المستمرة. بشكل عام ، تضيف هذه الدراسة إلى مجموعة الأدبيات المتزايدة التي تدعم التأثيرات الوقائية للخلايا لـ STS والمتبرعين الآخرين بـ H2S ضد IRI للأعضاء ، وخاصة تحسين نتائج الكسب غير المشروع في IRI الكلوي البارد الناجم عن الزرع. يمكن أن تسهل هذه الاستراتيجيات استخدام المزيد من الطعوم المعرضة لأوقات نقص تروية البرد لفترات طويلة ، مما قد يزيد من تجمع الأعضاء القابلة للزراعة.

بيان مساهمة التأليف CRediT

وافق جميع المؤلفين على تقديم هذه المخطوطة. لا يوجد أي تضارب في المصالح.

مراجع

[1] RA Wolfe ، VB Ashby ، EL Milford ، وآخرون ، مقارنة معدل الوفيات في جميع المرضى الذين يخضعون لغسيل الكلى ، والمرضى الذين يخضعون لغسيل الكلى في انتظار الزرع ، ومتلقي أول عملية زرع جثة ، New Engl. جيه ميد. 341 (23) (1999) 1725-1730.

[2] M. Tonelli، N. Wiebe، G. Knoll، et al.، مراجعة منهجية: زراعة الكلى مقارنة بغسيل الكلى في النتائج ذات الصلة سريريًا ، Am. J. ترانسبل. 11 (10) (2011) 2093-2109.

[3] MC Cavallo ، V. Sepe ، F. Conte ، وآخرون ، الفعالية من حيث التكلفة لزرع الكلى من DCD في إيطاليا ، زرع الأعضاء. بروك. 46 (10) (2014) 3289 - 3296.

[4] B. Dorweiler، D. Pruefer، TB Andrasi، SM Maksan، W. Schmiedt، A. Neufang، CF Vahl، Ischemia- reperfusion، Eur. J. صدمة Emerg. سورج. 33 (6) (2007) 600-612.

[5] EE Guibert، AY Petrenko، CL Balaban، AY Somov، JV Rodriguez، BJ Fuller، Organ preservation: المفاهيم الحالية والاستراتيجيات الجديدة للعقد القادم ، ترانسفوس. ميد. هيموثر. 38 (2) (2011) 125–142.

[6] أ.ك.صلاح الدين ، إن حيدر ، و. ماي ، نقص تروية البرد وانخفاض معدل البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل للطعم الخيفي الكلوي ، الكلى. 65 (2) (2004) 713-718.

[7] I. Quiroga ، P. McShane ، DD Koo ، وآخرون ، الآثار الرئيسية لتأخر وظيفة الكسب غير المشروع ووقت نقص التروية الباردة على بقاء الطعم الخيفي الكلوي ، Nephrol. يتصل. زرع اعضاء. 21 (6) (2006) 1689–1696.

[8] LK Kayler ، J. Magliocca ، I. Zendejas ، TR Srinivas ، JD Schold ، تأثير وقت نقص التروية الباردة على بقاء الكسب غير المشروع بين متلقي زراعة ECD: تحليل الكلى المزدوج ، Am. J. زرع. 11 (12) (2011) 2647–2656.

[9] MD Doshi، N. Garg، PP Reese، CR Parikh، عوامل الخطر المرتبطة بتأخر وظيفة الكسب غير المشروع: تحليل الكلى المزدوج ، زرع 91 (6) (2011) 666-671.

[10] أ. ديبوت ، واي.فوتشر ، ك. تربيرين-لوناي ، وآخرون ، كل ساعة إضافية من وقت نقص التروية الباردة تزيد بشكل كبير من خطر فشل الكسب غير المشروع والوفيات بعد زرع الكلى ، الكلى. 87 (2) (2015) 343–349.

[11] A. Kezic ، I. Spasojevic ، V. Lezaic ، M. Bajcetic ، مضادات الأكسدة المستهدفة للميتوكوندريا: وجهات نظر مستقبلية في إصابة نقص التروية الكلوية ، وضخ الدم ، والأكسيد. ميد. خلية لونجيف. 2016 (2016) 2950503.

[12] تي بينغ ، إم جي جو ، الإجهاد التأكسدي الناجم عن الحمل الزائد للكالسيوم في الميتوكوندريا ، آن. نيويورك أكاد. علوم. 1201 (2010) 183 - 188.

[13] دبليو جاسم ، إس في فيغل ، إم ريلا ، دي دي كو ، إن دي هيتون ، دور الميتوكوندريا في إصابة نقص التروية / ضخه ، زرع 73 (4) (2002) 493-499.

[14] PM Snijder ، E. van den Berg ، M. Whiteman ، SJ Bakker ، HG Leuvenink ، H. van Goor ، الدور الناشئ للناقلات الغازية في زراعة الكلى ، Am. J. زرع. 13 (12) (2013) 3067-3075.

[15] جي تي هانكوك ، إم وايتمان ، كبريتيد الهيدروجين وإشارات الخلية: لاعب فريق أم حكم؟ نبات فيزيول. بيوتشيم. 78 (2014) 37-42.

[16] W. Zhao، J. Zhang، Y. Lu، R. Wang، The vasorelaxant effect of H (2) S as a new gaseous K (ATP) channel opener، EMBO J. 20 (21) (2001) 6008-6016.

[17] I. Lobb، M. Davison، D. Carter، et al.، علاج كبريتيد الهيدروجين يخفف من إصابة نقص التروية الكلوية بنقص التروية-ضخه أثناء التخزين البارد ويحسن وظيفة الزرع المبكر والبقاء على قيد الحياة بعد زرع الكلى الخيفي ، J. Urol. 194 (6) (2015) 1806-1815.

[18] آي لوب ، إيه موك ، زد لان ، دبليو ليو ، ب. والالتهاب ، BJU Int. 110 (11 نقطة ج) (2012) E1187-E1195.

[19] I. Lobb، J. Jiang، D. Lian، et al.، Hydrogen Sulfide يحمي الطعوم الكلوية ضد الإصابة طويلة الأمد بإصابات نقص التروية وإعادة التروية من خلال إجراءات محددة للميتوكوندريا ، Am. J. زرع. 17 (2) (2017) 341–352.

[20] C. Renard ، SW Borron ، C. Renaudeau ، FJ Baud ، ثيوسلفات الصوديوم للتسمم الحاد بالسيانيد: دراسة في نموذج الفئران ، آن. فارم. الاب. 63 (2) (2005) 154–161. [21] N. Laplace و V. Kepenekian و A. Friggeri وآخرون ، يحمي ثيوسلفات الصوديوم من القصور الكلوي بعد العلاج الكيميائي عالي الحرارة داخل الصفاق (HIPEC) مع Cisplatin، Int. J. هايبرث. 37 (1) (2020) 897-902.