دراسة عن الفصل والكفاءة المناعية لمستخلص الماء من عديد السكاريد من Cistanche Tubulosa
Mar 03, 2022
لمزيد من المعلومات: ali.ma@wecistanche.com
Ailadan · Maimaitiaili1، LI Yang1، YAO Jun1، YUAN Jie2
（1. كلية الصيدلة ، جامعة شينجيانغ الطبية ، أورومتشي 830011 ، الصين ؛ 2. كلية هوبو ، جامعة شينجيانغ الطبية ، شينجيانغ كلاماى 834000 ، الصين）
الهدف من الملخص:لعزل مستخلص الماء منالسكريات من Cistanche tubulosa، والتحقيق في كفاءتهم المناعية في المختبر. الطريقة: AB {{{3 0}}} راتنج الامتزاز الكبير المسام يستخدم لإزالة لون C. tubulosa polysaccharide. تم تحسين عملية إزالة اللون من خلال اختبار متعامد مع معدل الاحتفاظ ومعدل إزالة اللون لعديد السكاريد كدرجة شاملة ، واستخدام معدل الامتزاز ، ووقت إزالة اللون ، وتركيز العينة كعوامل. تم إجراء اختبارات التحقق. تم استخدام عمود التبادل الأيوني DEAE -650 M لفصل مستخلص الماء من عديد السكاريد الأنبوبي الأنبوبي المزيل اللون. تم استخدام اختبار CCK -8 لاكتشاف تأثيرات التركيزات المختلفة لعديد السكاريد （6. 25-100 ميكروغرام / مل） قبل وبعد العزل على معدل تكاثر الفئران الضامة RAW264.7. تم اعتماد طريقة Griess ومقايسة ELISA للكشف عن تأثيرات التركيز المنخفض والمتوسط والعالي لعديد السكاريد （12.5،25،5 0 ميكروغرام / مل على إطلاق NO و IL -6 و TNF- في خلايا RAW264.7 التي يسببها LPS. النتائج: في عملية إزالة اللون المثلى لراتنج الامتزاز الكبير المسام AB -8 ، كان معدل تدفق الامتزاز 1.2 BV / ساعة ، وكان وقت إزالة اللون 9 ساعات ، وكان تركيز العينة 25 مجم / مل. كانت الدرجات الشاملة لثلاث مرات من اختبارات التحقق 63.43 و 63.29 و 63.34 ％ ، على التوالي ، بمتوسط 63.35 ％ （RSD ＝ 0. 11 ％ ، n ＝ 3）. تم عزل عديد السكاريد المحايد （CTZ） و 5 أحماض عديد السكاريد （CT1 ، CT2 ، CT3 ، CT4 ، CT5） من عديد السكاريد في C. cistanche ، كانت المحتويات 299.2،168. 0 ، 123.2،121.6،54.4 ، 11.2 مجم / جم. مقارنة بمجموعة التحكم ، 6. 25-100 ميكروغرام / مل CTZ （باستثناء 6.25 ميكروغرام / مل و CT2 و CT4 و CT5 و 6.25 ميكروغرام / مل CTC - يمكن أن يزيد السكاريد قبل الفصل） بشكل كبير من معدل الانتشار من RAW264.7 خلية （P ＜ {{8 0}. 05） ، بينما 6. 25-100 ميكروغرام / مل CT1 و CT3 و 50 ميكروغرام / مل CTC يمكن أن تقلل من معدل انتشار RAW264. 7 خلايا （P ＜ 0.05）. بالمقارنة مع مجموعة LPS ، انخفض إطلاق NO بشكل ملحوظ في مجموعات التركيز المنخفض والمتوسط والعالي من CTC و CT2 و CT3 و CT5 ومجموعة CTZ ذات التركيز المنخفض （P 0.05） ، بينما زادت بشكل ملحوظ في مجموعات التركيز العالي من CT1 و CT4 （P ＜ 0.05）. تم تقليل إطلاق IL -6 （باستثناء مجموعة التركيز العالي CT1 ومجموعة التركيز المنخفض CT5） و TNF- （باستثناء مجموعة التركيز المتوسط CT1） بشكل ملحوظ في مجموعات التركيز المنخفض والمتوسط والعالي （P ＜ 0.05 ）. الاستنتاجات: إن تقنية إزالة اللون المحسّنة لراتنج الامتزاز الكبيرة مستقرة وممكنة في الدراسة. يمكن عزل عديد السكاريد المحايد و 5 عديدات السكاريد الحمضية من مستخلص الماء من عديدات السكاريد الأنبوبية ، من بينها عديد السكاريد CT2 الذي يتمتع بقدرة أقوى على مقاومة الالتهاب.
الكلمات الدالة:Cistanche tubulosa عديد السكاريد ؛ إزالة اللون ؛ الانفصال ؛ أهلية المناعة
Cistanche tubulosaهو جذع سمين جاف بأوراق قشريةسيستانش توبولوسا (شينك) وايتمن عائلة Lidanaceae. أظهرت الدراسات الحديثة أن Cistanche Tubula يحتوي على جليكوسيدات كحول فينيل ، جليكوسيدات إيريدويد ، قشور ، عديد السكاريد ، قلويدات ، وغيرها من المواد النشطة بيولوجيًا ، التي لها خصائص كمنشط جنسي ، ملين ، واقية للكبد ومضادة للشيخوخة. ، المناعة المعززة لمكافحة التعب ، وتأثيرات منشط الذهن [1-4] ، يمكن استخدامها في العلاج السريري لنقص الكلى يانغ ، ونقص الجوهر والدم ، والعجز الجنسي والعقم ، وضعف الخصر والركبتين ، وضعف العضلات و العظام والأمعاء الجافة والإمساك [5].
استخراج المياه منCistanche tubulosa عديد السكاريدأصفر مائل للبني. وجدت التجربة السابقة لمجموعتنا البحثية أنه بالإضافة إلىCistanche tubulosa عديد السكاريد، يحتوي مستخلص الماء أيضًا على مكونات غير مستهدفة مثل الأصباغ والبروتينات القابلة للذوبان في الماء. هذا يساهم في فصل وتنقية السكريات. تسبب بحث النشاط البيولوجي في صعوبات كبيرة. العلاج التقليدي بإزالة اللون بالمذيبات العضوية يدمر التركيب الكيميائي للمكون المستهدف في المستخلص الخام ، ويقلل من النشاط الدوائي للشخص ، وإدخال مكونات ضارة لجسم الإنسان [6]. راتنج الامتزاز الكبير هو مادة شائعة لإزالة اللون من السكريات في مقتطفات الطب الصيني. إنها مادة امتصاص بوليمر فعالة من حيث التكلفة مع خصائص فيزيائية وكيميائية مستقرة. يمكن استهدافه من خلال أداء الامتصاص الانتقائي والغربلة لمكونات الصبغة. لإزالة الصبغات من مستخلصات الطب الصيني التقليدي ، بالإضافة إلى ذلك ، يمكن تجديدها عن طريق التخليل والغسيل القلوي ، لذلك فهي تستخدم على نطاق واسع [7]. تهدف هذه الدراسة إلى استخدام راتنج الامتزاز الكبير لإزالة اللون من مستخلص الماء من عديد السكاريد Cistanche Tubula ، واستخدام التجربة المتعامدة لتحسين ظروف إزالة اللون ؛ بعد إزالة لون المستخلص ، وفقًا للطبيعة المختلفة للمجموعة التي يحملها عديد السكاريد ، من المخطط استخدام طريقة كروماتوجرافيا عمود التبادل الأيوني تفصل أيضًا مكونات السكاريد المحايدة والحمضية في عديد السكاريدCistanche tubulosa.
وقد أظهرت الدراسات ذلكمصنع cistancheالسكريات لها تأثيرات مناعية ومعدلات مناعية طبيعية يمكنها تنشيط الجهاز التكميلي والخلايا المناعية مثل الخلايا الليمفاوية T / B ، والضامة ، والخلايا القاتلة الطبيعية (NK) ، ويمكنها أيضًا تعزيز مجموعة متنوعة من إطلاق السيتوكينات ، وتعزيز إنتاج الأجسام المضادة ، إلخ. [8-11]. يمكن لعديد السكاريد الدهني (LPS) تنشيط مسار الإشارات الالتهابية للبلاعم ، وتحفيز أكسيد النيتريك (NO) ، والسيتوكينات المؤيدة للالتهابات مثل إنترلوكين 6 (IL -6) وعامل نخر الورم ألفا (TNF-). التوليف والإفراج ، وبالتالي إطلاق سلسلة من التفاعلات الالتهابية في الجسم [12]. تهدف هذه الدراسة إلى إنشاء نموذج RAW264.7 لالتهاب البلاعم الناجم عن LPS ، بدءًا من تأثيرات Cistanche Tubula polysaccharide على تكاثر البلاعم ، وإفراز العامل الالتهابي ، وإنتاج NO ، والتقييم الأولي لتأثيره على النشاط المناعي للجسم يهدف إلى توفير أساس نظري للدراسة المتعمقة لأساس المادة الفعالة المضادة للالتهاباتCistanche tubulosaعديد السكاريد وتطوير موارده من عديد السكاريد.
لقد وجدت الدراسات الأولية أنه عندما يتم استخلاص السكريات الموجودة في سيستانش بالماء ، سيتم إذابة المزيد من المواد القابلة للذوبان في الماء معًا ، مما يؤثر على نقاءcistanche السكريات cistanche. لذلك ، يمكن لمزيد من الفصل والتنقية وضع الأساس لدراسة الأساس المادي متعدد السكاريد والنشاط البيولوجي. طريقة راتنج الامتزاز الكبيرة هي طريقة شائعة الاستخدام لإزالة اللون [17-19]. نظرًا لأنه لا يزال من غير الواضح بشأن تكوين الصباغ فيCistanche tubulosa، لذلك استخدمت مجموعة البحث تجارب الامتزاز الثابتة لفحص راتنجات الامتزاز الكبيرة المسامية AB -8 من راتنجات الامتزاز الكبيرة المسامية ذات الأقطاب المختلفة. يحتوي عديد السكاريد في Cistanche deserticola على قدرة جيدة على الاحتفاظ. من أجل تحقيق تأثير أفضل لإزالة اللون ، اعتمد هذا البحث على الأبحاث السابقة وتم استخدام التجارب المتعامدة لتحديد عملية إزالة اللون (الغسيل ، معدل تدفق الامتصاص ، وقت إزالة اللون ، وتركيز كتلة العينة). نتيجة لذلك ، كانت طريقة إزالة اللون المثلى لعديد السكاريد في Cistanche tubulosa هي معدل تدفق شطف يبلغ 1.2 BV / ساعة ، ووقت إزالة اللون 9 ساعات ، وتركيز كتلة العينة 25 مجم / مل. تظهر نتائج تجربة التحقق أن طريقة إزالة اللون ممكنة.
يعد نقاء ونوع عديد السكاريد الطبيعي من العوامل المهمة التي تؤثر على نشاطه. لذلك ، لا يزال البحث ذو الصلة حول طرق العزل والتنقية للسكريات المتعددة هو محور العمل البحثي للسكريات الطبيعية النشطة. تشتمل الطرق الشائعة الاستخدام لفصل السكريات على الترسيب ، وكروماتوجرافيا الهلام ، وكروماتوجرافيا تبادل الأنيون ، وكروماتوجرافيا عمود الراتينج الكبيرة المسامية ، والترشيح الفائق [20]. نظرًا للتركيبات المختلفة للسكريات الأحادية ، فإن السكريات لها خصائص شحن مختلفة. يمكن تقسيمها إلى عديدات السكاريد المحايدة والسكريات الحمضية. السكريات المحايدة عبارة عن بوليمرات تتكون من اثنين أو أكثر من المونومرات المختلفة القائمة على السكر والتي لا تحتوي على أحماض عضوية. تعد السكريات الحمضية أكثر تعقيدًا من السكريات المحايدة من حيث التركيب والتركيب ، باستثناء احتوائها على أكثر من اثنين من المونومرات القائمة على السكر. كما يحتوي على حمض اليورونيك أحادي الجسم [21]. يستخدم عمود كروماتوغرافيا تبادل الأنيون الاختلاف المسؤول عن السكريات لفصل السكريات المحايدة عن السكريات الحمضية [22]. لهذا السبب ، استخدمت هذه الدراسة عمود كروماتوغرافيا عمود التبادل الأيوني DEAE -650 M لفصل السكريات Cistanche Tubula ، وتم فصل ما مجموعه 1 عديد السكاريد المحايد و 5 عديدات السكاريد الحمضية. البلاعم هي خلايا ذات كفاءة مناعية يمكنها تنظيم المناعة عن طريق ابتلاع وقتل الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض. أظهرت الدراسات أنه عندما يتم تحفيز جسم الإنسان من خلال التلف المرضي أو الميكانيكي ، يمكن للتدخل الدوائي تنشيط الضامة لتعزيز قدرة البلعمة التي يسببها LPS ، وبالتالي تثبيط إنتاج NO وسلسلة من الخلايا الالتهابية مثل IL {{ 9}} و TNF- إفراز العامل ، وبالتالي حماية العائل من مسببات الأمراض [23]. تحقيقا لهذه الغاية ، اختبرت هذه الدراسة تأثيرات عديد السكاريد Cistanche tubulosa على معدل تكاثر خلايا RAW264.7 ، بالإضافة إلى التأثيرات على البلاعم التي يسببها LPS لإطلاق NO و IL -6 و TNF-. نتيجة لذلك ، ضمن نطاق تركيز الكتلة البالغ 12.5 و 25 و 50 ميكروغرام / مل ، لم يقتصر الأمر على تعزيز تكاثر خلايا RAW264.7 ولكن أيضًا منع بشكل كبير تكاثر خلايا RAW264.7.
العديد السكاريد من Cistanche tubulosaفي خلايا RAW264.7 التي يسببها LPS لإطلاق NO و IL -6 و TNF- هي CT2. أظهرت الدراسات ذات الصلة أن تركيبة السكريات الأحادية والوزن الجزيئي لعديد السكاريد سيؤثران عليهمناعينشاط. ترتبط السكريات الأحادية مثل الجالاكتوز والأرابينوز والمانوز والجلوكوز ارتباطًا إيجابيًا بالنشاط المناعي للسكريات [24]. السكريات ذات الأوزان الجزيئية الأكبر قد تحتوي على هيكل عقدة متعددة عالية التكرار ، يمكن أن تربط مستقبلات سطح غشاء البلازما في اتجاهات متعددة ، وعلى وجه التحديدتعزيز المناعةتأثير [25]. لذلك ، قد تحتوي تركيبة السكاريد الأحادي لعديد السكاريد الحمضي CT2 في هذه الدراسة على السكريات الأحادية الخاصة أو السكريات الأحادية المتعددة التي ترتبط ارتباطًا إيجابيًا بالنشاط المناعي ، وقد يكون الوزن الجزيئي أكبر من عديد السكاريد المحايد وعديد السكاريد الحمضي الآخر ، ولكن هناك حاجة إلى مزيد من البحث لتأكيد . باختصار ، فإن عملية إزالة اللون براتنج الامتزاز الكبيرة المحسنة في هذا البحث مستقرة وممكنة ؛ يمكن فصل 1 عديد السكاريد المحايد و 5 عديدات السكاريد الحمضية من مستخلص الماء من Cistanche cistanche cistanche ، من بينها النشاط المناعي لعديد السكاريد الحمضي CT2 Stronger. يمكن أن تضع هذه الدراسة الأساس التجريبي لتطوير واستخدام عديد السكاريد Cistanche Tubula.
