تعد الاستجابة المستمرة السامة للخلايا لخلايا الدم وحيدة النواة المحيطية من الأفراد غير المحصنين الذين تم إدخالهم إلى وحدة العناية المركزة بسبب حالة خطيرة من فيروس كورونا-19 أمرًا ضروريًا لتجنب النتيجة المميتة

خلاصة: كان الهدف الرئيسي من هذه الدراسة هو تحديد تأثير النشاط السام للخلايا لخلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMCs) على نتائج الأفراد غير المطعمين الذين يعانون من حالة حرجة من فيروس كورونا-19 تم إدخالهم إلى وحدة العناية المركزة. تم جمع عينات دم من 23 فردًا عند القبول ثم كل أسبوعين لمدة 13 أسبوعًا حتى الوفاة (مجموعة الخروج) (ن=13) أو الخروج (مجموعة البقاء) (ن=10). لم نجد فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات في البيانات الاجتماعية والديموغرافية أو السريرية أو البيوكيميائية التي قد تؤثر على النتيجة المميتة. ومع ذلك، تم تقليل السمية الخلوية المباشرة لخلايا PBMCs من أفراد مجموعة Exitus ضد خلايا Vero E6 المصابة بالنمط الكاذب لـ SARS-CoV-2- بشكل ملحوظ عند القبول (−2.69-fold; p=0. 0234) وبعد 4 أسابيع في وحدة العناية المركزة (−5.58-fold; p=0.0290)، مقارنة بالأفراد الذين نجوا، ولم يتحسن أثناء العلاج في المستشفى. في المختبر، لم يقم العلاج باستخدام IL-15 من هذه الخلايا باستعادة السمية الخلوية الفعالة في أي نقطة زمنية حتى النتيجة المميتة، ولوحظ زيادة في التعبير عن علامات الإرهاق المناعي في NKT وCD4+ وCD 8+ الخلايا التائية. ومع ذلك، أدى علاج IL-15 لمركبات PBMCs من أفراد مجموعة البقاء على قيد الحياة إلى زيادة كبيرة في السمية الخلوية في الأسبوع 4 (6.18-fold؛ p=0.0303). وبالتالي، فإن العلاجات المعدلة للمناعة التي قد تتغلب على الإرهاق المناعي وتحفز نشاطًا مستدامًا وفعالًا لسام الخلايا يمكن أن تكون ضرورية للبقاء على قيد الحياة أثناء العلاج في المستشفى بسبب حالة كوفيد الحرجة-19.

الكلمات الرئيسية: السارس-CoV-2; كوفيد-19; استجابة مناعية؛ الاستجابة السامة للخلايا. إيل-15

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

1 المقدمة

تم اكتشاف العديد من حالات الالتهاب الرئوي الفيروسي غير النمطي المرتبطة بتفشي المرض في سوق للمأكولات البحرية في مدينة ووهان (مقاطعة هوبي، الصين) في ديسمبر 2019. فيروس كورونا الجديد يسمى فيروس كورونا المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة 2 (SARS-CoV-2) ينتشر بسرعة انتشر في جميع أنحاء العالم مسببًا جائحة مرض فيروس كورونا 2019 (كوفيد-19) [1]. منذ ذلك الحين، تم الإبلاغ عن حوالي 626 مليون حالة إصابة بفيروس كورونا-19 و6.5 مليون حالة وفاة مرتبطة به حول العالم (تم التحديث في أكتوبر 2022) [2]. قد تؤثر عوامل الخطر والأمراض المصاحبة المختلفة على تطور فيروس كورونا-19 بين الأفراد، مما أثر على مقارنة البيانات السريرية بين البلدان المتضررة منذ بداية الوباء [3]. ومع ذلك، فقد تقرر أن المظاهر السريرية لكوفيد-19 قد تختلف من عدوى بدون أعراض إلى متلازمة الضائقة التنفسية الحادة (ARDS) [4]. من بين عوامل الخطر المختلفة التي ارتبطت باحتمالية أكبر للإصابة بشكل حاد من فيروس كورونا-19 هي الشيخوخة وجنس الذكور والأمراض المصاحبة السابقة مثل مرض السكري وارتفاع ضغط الدم و/أو السمنة [5،6]. ارتبط أيضًا مرض كوفيد-19 الشديد والحرج بقلة الكريات، خاصة الخلايا الليمفاوية CD4+ T، بالإضافة إلى الإرهاق المفرط للخلايا القاتلة الطبيعية (NK) والخلايا CD{22}} T، والتي يؤدي إلى حالة ضعف المناعة التي تكون غير قادرة على إزالة العدوى، بالإضافة إلى تطور مضاعفات خطيرة مثل عاصفة السيتوكين وأحداث التخثر [7]. يعتبر السبب الرئيسي لتطور شكل حاد من المرض والوفاة لدى المرضى المصابين بـCOVID-19 هو الاستجابة الالتهابية المفرطة التي قد تعزز تطور الصدمة و/أو فرط سيتوكين الدم مع خلل وظيفي متعدد الأعضاء [4]. تُعرف هذه المتلازمة باسم عاصفة السيتوكين [8]، وهي تشبه مرض كثرة الكريات اللمفاوية الدموية (sHLH)، والذي يتكون من حالة من الالتهاب المفرط الناجم عن عدوى فيروسية [9،10]. يمكن أن يكون مرتبطًا بحقيقة أن SARS-CoV-2 يستخدم مستقبل الإنزيم المحول للأنجيوتنسين 2 (ACE2) لإصابة الخلايا المستهدفة. يؤدي ارتباط SARS-CoV-2 بمستقبل ACE2، والذي يتم التعبير عنه على نطاق واسع بواسطة خلايا من أنسجة مختلفة [11]، إلى زيادة في أنجيوتنسين II، الذي ينشط العامل النووي κB (NF-κB). تنشيط عامل النسخ الأساسي هذا يحفز التعبير عن السيتوكينات المسببة للالتهابات، والكيموكينات، وجزيئات الالتصاق [12]. على الرغم من هذه الاستجابة الالتهابية المفرطة، يبدو أنها غير فعالة لإزالة العدوى، وبسبب تنشيط الخلايا التائية، قد تنتهي بموت الخلايا المبرمج [13]. يمكن أن تكون عاصفة السيتوكين هذه مسؤولة عن قلة اللمفاويات [12،14] وأيضًا انخفاض مستويات خلايا NK وCD8+ T ذات النمط الظاهري المنهك وزيادة التعبير عن المستقبلات المثبطة مثل NKG2A في خلايا NK وPD{{47 }} في الخلايا التائية 8+ CD [15,16]. علاوة على ذلك، عادةً ما يتم تقليل التعبير عن علامات إزالة الحبيبات مثل CD107a على سطح هذه الخلايا [15]، مما يثبت وجود ضعف في القدرة على القضاء على الخلايا المصابة لدى الأفراد المصابين بكوفيد الشديد والحرج-19 [17 ]. على الرغم من الاستجابة العالمية السريعة لتطوير وإدارة اللقاحات الفعالة، فإن ظهور متغيرات جديدة قد تفلت من الاستجابة المناعية الناجمة عن اللقاح أدى إلى انخفاض سريع في الحماية ضد الأمراض المصحوبة بأعراض [18]. وبالتالي، من الضروري مواصلة البحث عن علاجات فعالة ضد فيروس كورونا-19. تم اختبار العديد من العلاجات لتحسين حالة الأفراد الذين يدخلون المستشفى بسبب مرض شديد وخطير، ولكن لم يثبت حتى الآن أن أيًا منها لم يكن محددًا للقضاء على الخلايا المصابة أو تقليل معدل الإصابة [15،19]. لذلك، لا يزال العلاج الداعم مثل العلاج بالأكسجين والسوائل من بين أهم الاستراتيجيات المطبقة لإدارة هؤلاء الأفراد [2،4،16،20]. كانت العلاجات غير المحددة مثل الكورتيكوستيرويدات مفيدة أيضًا في السيطرة على الاستجابة الالتهابية المفرطة وتقليلها [21،22]. في الآونة الأخيرة، تم ترخيص العديد من الأدوية من قبل إدارة الغذاء والدواء الأمريكية لعلاج الأفراد الذين يعانون من أعراض خفيفة إلى متوسطة من فيروس كورونا-19، مثل مولنوبيرافير ونيرماتريلفير وريتونافير، ولكن فقط في حالة الطوارئ للأفراد المعرضين لمخاطر عالية للتقدم إلى مرض شديد [23-26]. يُظهر Molnupiravir نشاطًا مضادًا للفيروسات واسع النطاق نظرًا لقدرته على تحفيز طفرات الحمض النووي الريبي (RNA) عن طريق التداخل مع العديد من بوليميرات الحمض النووي الريبي (RdRp) الفيروسية المعتمدة على الحمض النووي الريبي (RdRp)، بما في ذلك RdRp الذي يستخدمه SARS-CoV-2 لتكرار ونسخ فيروساته. جينوم الحمض النووي الريبي [27]. ثبت أيضًا أن مزيج نيرماترلفير وريتونافير قادر على وقف انتشار العدوى في النماذج الحيوانية عن طريق تثبيط الأنزيم البروتيني الفيروسي الرئيسي 3CLpro لـ SARS-CoV-2- 2 [28]. ومع ذلك، يجب إعطاء هذه الأدوية المضادة للفيروسات جنبًا إلى جنب مع تدابير أخرى مثل اللقاحات من أجل تحفيز استجابة مناعية قوية سامة للخلايا قادرة على القضاء على الخلايا المصابة. تتطلب معظم الخلايا ذات النشاط السام للخلايا، مثل الخلايا الليمفاوية CD 8+ T والخلايا NK وNKT، وجود إنترلوكين -15 (IL-15) لوظيفتها وتنظيمها الاستتبابي [29]. يقوم IL-15 بإعداد الخلايا التائية CD8+ لتنشيطها بواسطة مستضدات محددة ويحسن أيضًا السمية الخلوية للخلايا القاتلة الطبيعية وانتشارها. لذلك، قد يعزز IL-15 الاستجابات المناعية الخلوية الفطرية والتكيفية ضد الخلايا المصابة [22،25]. يمنع IL -15 أيضًا الخلايا NK وT من موت الخلايا المبرمج عن طريق تنظيم العوامل المضادة لموت الخلايا المبرمج مثل Bcl -2 وتقليل تنظيم العوامل المؤيدة لموت الخلايا المبرمج مثل GSK -3 [26]، وبالتالي تجنب قلة الكريات. وفقًا لذلك، تم اقتراح IL-15 باعتباره السيتوكينات المعدلة للمناعة الجديدة في العلاج المناعي للسرطان ويعتبر مساعدًا في أنظمة اللقاحات [26،30]. أثبتت التجارب السريرية للمرحلة الأولى باستخدام التسريب الوريدي البشري IL-15 (rhIL-15) أو الناهض الفائق IL-15 N-803 أن هذا السيتوكين قد يحفز توسعًا و/أو تنشيطًا كبيرًا من CD4+، وCD8+، والخلايا المؤثرة NK في الجسم الحي، وبالتالي، تم تطبيقه لعلاج السرطان أو الالتهابات الفيروسية مثل فيروس نقص المناعة البشرية [31-35]. ولذلك، فإن استخدام عوامل تعديل المناعة مثل IL-15 التي قد تستعيد النشاط السام للخلايا لدى الأفراد الذين يدخلون المستشفى بسبب حالة حرجة من فيروس كورونا-19 قد يكون مفيدًا للمساعدة في إزالة الفيروس من الكائن الحي. في هذه الدراسة الرصدية الطولية، قمنا بتمييز تطور الاستجابة المناعية السامة للخلايا ضد السارس-CoV-2 في خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMCs) المعزولة من الأفراد الذين تم تشخيص إصابتهم بفيروس كورونا-19 والذين تم إدخالهم إلى غرفة العلاج المكثفة وحدة العناية المركزة (ICU) بسبب المضاعفات الشديدة، بالإضافة إلى تأثير هذه الاستجابة على النتيجة النهائية مقارنة بعوامل الخطر الأساسية الأخرى. قمنا أيضًا بتقييم قدرة هذه الخلايا على الاستجابة للعلاج باستخدام IL-15 وتعزيز استجابتها المضادة للفيروسات السامة للخلايا. قد تساهم النتائج التي تم الحصول عليها في هذه الدراسة في فهم أفضل لدور الاستجابة السامة للخلايا في النتيجة المميتة لـCOVID-19 والتقدم نحو تطوير علاجات مناعية فعالة تعزز إزالة الفيروس.

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

انقر هنا لعرض منتجات Cistanche Enhance Immunity

【اطلب المزيد】 البريد الإلكتروني: cindy.xue@wecistanche.com / تطبيق Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2. المواد والأساليب

2.1. المواد الدراسية

تم تعيين ثلاثة وعشرون شخصًا مصابين بحالة خطيرة من فيروس كورونا-19 تم إدخالهم إلى وحدة العناية المركزة بمستشفى جامعة رامون إي كاخال (مدريد، إسبانيا) في الفترة من أكتوبر 2020 حتى أبريل 2021، في هذه الدراسة. غطت هذه الفترة موجتي الجائحة الثانية والثالثة لفيروس كورونا-19 في إسبانيا (من يونيو إلى ديسمبر 2020 ومن ديسمبر 2020 إلى مارس 2021، على التوالي). تم اختيار المشاركين عشوائيًا عند دخولهم المستشفى وفقًا للمعايير التالية: الحصول على موافقة كتابية أو شفهية مستنيرة للمشاركة في الدراسة، وإدخالهم إلى وحدة العناية المركزة بسبب حالة خطيرة من فيروس كورونا-19، وإيجابية فيروس سارس-كوف-2 يتم إجراء اختبار RT-qPCR في مسحة البلعوم الأنفي عند دخول المستشفى وفقًا لبروتوكولات داخلية تم التحقق منها، وعمر أكبر من 18 عامًا، وغير مُطعم ضد السارس-CoV-2 في وقت الإصابة. تم جمع عينات الدم المحيطية والبيانات السريرية كل أسبوعين لمدة 13 أسبوعًا، وتمت معالجة عينات الدم وحفظها بالتبريد حتى لحظة التحليل. تم حساب هذه الفترة مع الأخذ في الاعتبار أن مدة الإقامة في المستشفى في إسبانيا خلال موجات الوباء الأولى قُدرت بـ 35 يومًا في المتوسط ​​[36]، حتى نتمكن من إجراء جولتين كاملتين على الأقل من التوظيف والمتابعة. بعد 13 أسبوعًا، تم تقسيم المشاركين إلى مجموعتين وفقًا للنتيجة النهائية: النتيجة المميتة (ن=13)، ومن الآن فصاعدا الخروج؛ أو الخروج من المستشفى (ن=10)، ومن الآن فصاعدا البقاء على قيد الحياة.

2.2. بيان أخلاقي

تم تجنيد الأفراد الذين شاركوا في هذه الدراسة من مستشفى Universitario Ramón y Cajal (مدريد، إسبانيا). قدم جميعهم موافقة كتابية مستنيرة للمشاركة في الدراسة أو شهدوا موافقة شفهية بموافقة كتابية من ممثل لتجنب التعامل مع المستندات الملوثة. تضمن قوانين حماية البيانات الإسبانية والأوروبية الحالية سرية جميع المشاركين وعدم الكشف عن هويتهم. تم إعداد بروتوكول هذه الدراسة (CEI PI 32_2020-v2) وفقًا لإعلان هلسنكي وتمت مراجعته واعتماده مسبقًا من قبل لجان الأخلاقيات في معهد الصحة كارلوس الثالث (IRB IORG0006384) والمستشفى المشارك.

2.3. الخلايا

تم جمع خمسة ملليلتر من الدم الكامل في أنابيب EDTA Vacutainer (بيكتون ديكنسون، مدريد، إسبانيا) وتمت معالجتها على الفور لعزل الخلايا PMBCs والبلازما بواسطة Ficoll-Hypaque (Pharmacia Corporation، North Peapack، NJ، USA) بالطرد المركزي المتدرج للكثافة، ثم تم جمعها محفوظة بالتبريد حتى التحليل. تم تقييم بقاء الخلية بعد ذوبان الجليد عن طريق الفحص المجهري البصري وقياس التدفق الخلوي. تم توفير خط خلايا Vero E6 (كلية القرد الأخضر الأفريقي) (ECACC 85020206) من قبل الدكتور أنطونيو ألكامي (CBM سيفيرو أوتشوا، مدريد، إسبانيا)، وتم استزراع هذه الخلايا في DMEM مع 10٪ FCS، 2 مم L- الجلوتامين، و100 وحدة/مل من البنسلين والستربتوميسين (لونزا، بازل، سويسرا).

فوائد سيستانش للرجال - تقوية جهاز المناعة

2.4. فحص عدوى النمط الكاذب لـ SARS-CoV-2

تم تحليل النشاط السام للخلايا ضد SARS-CoV-2 من PBMCs من المشاركين باستخدام خلايا Vero E6 المصابة بفيروس النمط الكاذب أحادي الدورة pNL4-3∆env_SARS CoV-2-S ∆19(G614)_رين. يقوم هذا الفيروس بتشفير بروتين سكري SARS-CoV-2 مع طفرة D614G داخل جينوم فيروس نقص المناعة البشرية -1، بالإضافة إلى جين رينيلا لوسيفيراز الذي تم إنشاؤه كما هو موضح سابقًا [37،38]. بدأت متغيرات فيروس SARS-CoV-2 التي تحتوي على طفرة D614G في بروتين السنبلة (S) في الانتشار في وقت مبكر من الوباء وأصبحت سائدة بسرعة في العديد من المناطق [39،40]. باختصار، أصيبت طبقة أحادية من Vero E6 بـ pNL4-3∆env_ SARS-CoV-2-S∆19(G614)_Ren (100 ng p24 Gag/well) ) لمدة 48 ساعة. بعد ذلك تم غسل الخلايا وزراعتها لمدة ساعة واحدة باستخدام PBMCs من المشاركين (نسبة 1:1)، تمت معالجتها مسبقًا أم لا باستخدام IL-15 (13 نانوغرام/مل) لمدة 48 ساعة. تم اختيار جرعة IL-15 المستخدمة في هذه الدراسة، مع الأخذ في الاعتبار الجرعة الموصوفة مسبقًا والتي تسبب أعلى تأثير على تكاثر NK (10–25 نانوغرام/مل) [41] وأيضًا التوسع التفضيلي للذاكرة السامة للخلايا. CD 8+ الخلايا التائية (أقل من أو يساوي 5 نانوغرام / مل) [42]. تم تحديد النشاط السام للخلايا لـ PBMCs على الطبقة الأحادية من Vero E6 بعد إزالة الطاف مع الخلايا المعلقة وتفكك خلايا Vero E6 من اللوحة بمحلول التربسين-EDTA (Sigma Aldrich-Merck، Darmstadt، Germany) و القياس الكمي اللاحق لنشاط caspase -3 في الخلايا المنفصلة عن طريق التلألؤ باستخدام نظام تحليل Caspase-Glo 3/7 (Promega، Madison، WI، USA). من أجل تحديد أي مجموعات الخلايا السامة للخلايا كانت مسؤولة عن هذا النشاط، تم جمع PBMCs من طاف ومن ثم تحليلها عن طريق التدفق الخلوي.

2.5. تحليل التدفق الخلوي

لتلوين علامات النمط الظاهري لسطح الخلية، تم استخدام الأجسام المضادة المترافقة التالية: CD{{0}}PE، CD8-APC-H7، CD56-FITC، وCD1{{24 }}7a-PE-Cy7، تم شراؤه من BD Biosciences (San Jose، CA، USA). لتلوين علامات الاستنفاد، تم استخدام الأجسام المضادة المترافقة التالية: CD3-BV510، وCD8-APC-H7، وCD56-FITC، وPD1-BV650، تم شراؤها من BD Biosciences، بالإضافة إلى CD4-PE، الذي تم شراؤه من Immunostep SL (سلامانكا، إسبانيا) وTIGIT-AlexaFluor700 الذي تم شراؤه من Thermo Fisher (Waltham، MA، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الحصول على العينات باستخدام مقياس التدفق الخلوي BD LSRFortessa X -20 مع برنامج FACS Diva v 6.0 (BD Biosciences، Franklin Lakes، NJ، USA) ثم تم تحليلها باستخدام برنامج FlowJo v10.0.7 (Tree Star Inc.، Ashland، OR ، الولايات المتحدة الأمريكية).

2.6. الكشف عن SARS-CoV-2 RNAemia

تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي (RNA) من عينات البلازما باستخدام QIAamp MinElute Virus Kit (Qiagen Iberia، Madrid، Spain) في مستخرج آلي QIAcube (Qiagen، Hilden، ألمانيا). تم إجراء اكتشاف الحمض النووي الريبي (RNA) لـ SARS-CoV-2 بواسطة اختبار RT-qPCR مع أهداف في جينات الغلاف (E) والقفيصة النووية (N)، كما هو موضح سابقًا [43]، والذي يعد جزءًا من الإرشادات المؤقتة للصحة العالمية منظمة (WHO) للاختبار التشخيصي لفيروس السارس-CoV- 2 [44]. اعتبرت العينات إيجابية للتحليل عندما كانت قيمة دورة القياس الكمي (Cq) أقل من 45 دورة.

فوائد سيستانش للرجال - تقوية جهاز المناعة

2.7. تحليل احصائي

تم إجراء جميع التحليلات والرسومات الإحصائية باستخدام إصدار برنامج GraphPad Prism 8.4.3 (GraphPad Software Inc.، San Diego، CA، USA). تم إجراء مقارنات المجموعة باستخدام اختبار مان ويتني U، واختبار رتبة موقعة للأزواج المتطابقة من ويلكوكسون، واختبار ANOVA أحادي الاتجاه، واختبار مقارنات توكي المتعددة. تم استخدام اختبار فيشر الدقيق لتقييم الاختلافات في الخصائص السريرية بين المجموعتين. تم اعتبار قيم p < 0.{{10}}5 (ثنائي الذيل) ذات دلالة إحصائية. تم استخدام المتوسط ​​والانحراف المعياري لحساب إحصائية كوهين d باستخدام حاسبة حجم تأثير Excel [45]. كان حجم التأثير 0.2، 0.5، 0.8، أو أكبر من أو يساوي 1.2 مؤشرًا على أحجام التأثير الصغيرة والمتوسطة والكبيرة والكبيرة جدًا، على التوالي [46].

3. النتائج

3.1. خصائص المشاركين

تضمنت هذه الدراسة الرصدية الطولية 23 مريضًا تم تشخيص إصابتهم بفيروس كورونا-19 وتم إدخالهم إلى وحدة العناية المركزة بسبب مضاعفات خطيرة. تم جمع عينات الدم كل أسبوعين لمدة 13 أسبوعًا أو حتى النتيجة النهائية. لم يتم الإبلاغ عن تطعيم أي من المشاركين في هذه الدراسة ضد كوفيد-19 في وقت الإصابة والاستشفاء. يتم تلخيص الخصائص الاجتماعية والديموغرافية والسريرية الرئيسية لجميع المشاركين في الجدول 1.

الجدول 1. البيانات الديموغرافية والسريرية لجميع المشاركين من مجموعة Exitus ومجموعة Survival الذين تم تجنيدهم لهذه الدراسة.

كان متوسط ​​عمر مجموعة الخروج 65.0 سنة (معدل الذكاء 62.0–69.0)، في حين كان متوسط ​​عمر مجموعة البقاء 63.{{7} } سنوات (59.0–68.5). وكان معظم المشاركين (73.9%) من الرجال، وكان 65.2% منهم يعانون من مرض مصاحب واحد على الأقل. وكانت الأمراض المصاحبة الرئيسية هي دسليبيدميا (52.2٪)، وارتفاع ضغط الدم (39.1٪)، ومرض السكري (26.1٪). تلقى معظم المرضى الكورتيكوستيرويدات (82.6%)، والمضادات الحيوية (82.6%)، ومضادات التخثر (82.6%) كعلاج قياسي. كما تلقوا علاجات أخرى مثل توسيليزوماب (17.4%) وريمديسيفير (8.7%). كانت العلامات والأعراض الأكثر شيوعًا هي الالتهاب الرئوي (100%)، والسعال والبلغم (87.0%)، وضيق التنفس (87.0%)، والحمى (87.0%). أثناء إقامتهم في وحدة العناية المركزة، احتاج 12 مريضًا (92.3%) من مجموعة Exitus و10 مرضى (100%) من مجموعة Survival إلى تهوية ميكانيكية غازية. لم نجد فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعتين في البيانات الاجتماعية والديموغرافية والسريرية. قمنا أيضًا بتحليل بيانات الكيمياء الحيوية للدم عند خط الأساس (العينة الأولى) بين المجموعتين، ولم نجد اختلافات كبيرة بين المجموعتين أيضًا. يتم عرض معلومات أكثر تفصيلاً حول البيانات السريرية والاستشفاء وبيانات الكيمياء الحيوية في الدم لكل مشارك في الجدولين التكميليين S1 و S2.

3.2. مدة الإقامة في المستشفى ووحدة العناية المركزة

كان متوسط ​​مدة الإقامة في المستشفى 59.0 (IQR 36.0–100.0) يومًا في مجموعة Exitus و73. 0 (IQR 44.5–9 0. {{2 0}}) أيام في مجموعة البقاء (الشكل 1A). كان متوسط ​​​​طول الإقامة في وحدة العناية المركزة 49.0 (معدل الذكاء 25.5-82.0) يومًا في مجموعة الخروج و 44.0 (معدل الذكاء 25.0-66.5) يومًا في مجموعة البقاء (الشكل 1 ب). لم يتم العثور على اختلافات كبيرة في هذه المعلمات بين المجموعتين.

الشكل 1. مدة الإقامة في المستشفى ووحدة العناية المركزة. مدة الإقامة في المستشفى (أ) ووحدة العناية المركزة (ب) (أيام) لدى الأفراد المصابين بحالة حرجة من فيروس كورونا-19 والذين تم تقسيمهم إلى مجموعتين وفقًا للنتيجة النهائية: النتيجة المميتة، مجموعة الخروج (النقاط المملوءة)؛ أو التعافي والخروج من المستشفى، مجموعة البقاء على قيد الحياة (النقاط الفارغة). تتوافق كل نقطة مع فرد واحد، وتمثل الخطوط العمودية متوسط ​​± الخطأ المعياري للوسط (SEM). تم حساب الأهمية الإحصائية بين المجموعات باستخدام اختبار مان ويتني U.

3.3. مستويات الخلايا الليمفاوية في الدم المحيطي

أظهر الأفراد من مجموعة Exitus قلة اللمفاويات (<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.

الشكل 2. عدد الخلايا الليمفاوية في الدم المحيطي أثناء العلاج في المستشفى بسبب حالة كوفيد الحرجة -19. تم تحديد عدد الخلايا الليمفاوية (الخلايا / مم 3) كل أسبوعين ليصبح المجموع 13 أسبوعًا أو حتى النتيجة النهائية في عينات الدم من المشاركين في مجموعات الخروج (النقاط المملوءة) والبقاء على قيد الحياة (النقاط الفارغة). تظهر عتبة قلة اللمفاويات عند 1000 خلية / مم 3 بخط منقط. كل نقطة تقابل متوسط ​​البيانات، وتمثل الخطوط العمودية SEM. تم حساب الأهمية الإحصائية بين المجموعات باستخدام اختبار مان ويتني U، وداخل المجموعات، تم استخدام اختبار ويلكوكسون U.

3.4. النشاط السام للخلايا لـ PBMCs ضد خلايا Vero E6 المصابة بالنمط الكاذب لـ SARS-CoV-2

قمنا بتقييم النشاط السام للخلايا لـ PBMCs للمرضى في المستشفى في العينات الطولية عن طريق قياس تنشيط الكاسبيز -3 في طبقة أحادية من خلايا Vero E6 المصابة بالنمط الكاذب لـ SARS-CoV-2 بعد الاستزراع المشترك لمدة ساعة واحدة ( نسبة 1:1). لم تتغير القدرة السامة للخلايا في PBMCs المعزولة من أفراد مجموعة Exitus بشكل ملحوظ أثناء العلاج في المستشفى، وظلت منخفضة بشكل مطرد حتى النتيجة المميتة (الشكل 3). لم يزد هذا النشاط السام للخلايا بشكل ملحوظ عندما تم تحفيز هذه الخلايا باستخدام IL-15 لمدة 48 ساعة. في مجموعة البقاء على قيد الحياة، تم زيادة النشاط السام للخلايا لمركبات PBMC بمقدار 2.69- أضعاف (p=0.0234؛ Cohen's d=1.12) في العينة الأساسية (t {{17} }) بالمقارنة مع مجموعة الخروج، وزادت بشكل مطرد حتى الأسبوع 6 من العلاج في المستشفى. أظهرت هذه الزيادة أهمية إحصائية في المقارنة بين المجموعات في الأسبوع 4 (5.58-fold؛ p=0.0290؛ Cohen's d=1.28). من الأسبوع 6 فصاعدًا، انخفض النشاط السام للخلايا في مجموعة البقاء على قيد الحياة حتى الخروج من المستشفى، والذي كان متوافقًا مع انحلال عدد الخلايا الليمفاوية في نفس أسبوع العلاج في المستشفى (انظر الشكل 2). زاد العلاج باستخدام IL-15 بمقدار 2.30- ضعفًا في المتوسط ​​من النشاط السام للخلايا لمركبات PBMC للأفراد من مجموعة البقاء على قيد الحياة في جميع العينات أثناء المتابعة. بعد 4 أسابيع من العلاج في المستشفى، زاد النشاط السام للخلايا الناجم عن IL-15- بمقدار 6.18- أضعاف (ع=0.0303؛ كوهين د=1.05) في PBMCs في أفراد من مجموعة البقاء.

الشكل 3. السمية الخلوية المباشرة لخلايا PBMC المعزولة من المرضى في المستشفى الذين يعانون من حالة حرجة من فيروس كورونا -19. تم قياس القدرة السامة للخلايا لـ PBMCs من أفراد مجموعة Exitus (النقاط المملوءة) و Survival (النقاط الفارغة) عن طريق قياس نشاط caspase -3 في طبقة أحادية من خلايا Vero E6 المصابة بالنمط الكاذب لـ SARS-CoV -2 بعد الاستزراع المشترك (1:1) لمدة ساعة واحدة في الظروف القاعدية (خطوط رمادية) أو بعد العلاج بـ IL-15 لمدة 48 ساعة (خطوط سوداء). كل نقطة تقابل متوسط ​​البيانات، وتمثل الخطوط العمودية SEM. تم حساب الأهمية الإحصائية بين المجموعات باستخدام اختبار مان ويتني U، وداخل المجموعات، تم استخدام اختبار ويلكوكسون U.

3.5. مستويات خلايا NK وNKT

تم تحليل مستويات الخلايا ذات الأنماط الظاهرية السامة للخلايا في PBMCs التي تمت زراعتها بشكل مشترك مع خلايا Vero E6 المصابة بالنمط الكاذب لـ SARS-CoV-2. لم نجد فروق ذات دلالة إحصائية بين مستويات الخلايا ذات النمط الظاهري NK (CD 3- CD 56+) بين كلا المجموعتين من الأفراد، حتى بعد العلاج بـ IL -15 (الشكل 4A). بقي التعبير عن علامة تحلل الحبيبات CD107a على سطح هذه الخلايا دون تغيير لدى الأفراد من مجموعة Exitus. على الرغم من أن هذا التعبير زاد بشكل مطرد من الأسبوع 4 حتى الخروج من المستشفى في مجموعة البقاء على قيد الحياة، إلا أن هذا الاختلاف لم يحقق أهمية إحصائية في المقارنة مع مجموعة الخروج (الشكل 4B). العلاج باستخدام IL-15 لم يعدل بشكل كبير تعبير CD107a في هذه الخلايا. اعتبارًا من الأسبوع الرابع، أظهرت PBMCs من أفراد كلا المجموعتين زيادة في مستويات الخلايا ذات النمط الظاهري NKT (CD3+CD56+) والتي كانت أعلى بمقدار 4.17- أضعاف في PBMCs من الأسبوع الرابع أفراد مجموعة الخروج في الأسبوع 6، على الرغم من أن هذا الاختلاف لم يحقق أهمية (ص=0.0571؛ كوهين د=3.15) (الشكل 5A). وكانت هذه الزيادة أعلى قليلاً عندما عولجت الخلايا بـ IL-15 في كلا المجموعتين، على الرغم من أن البيانات لم تصل إلى دلالة إحصائية أيضًا (الشكل 5A). لم يتغير التعبير عن CD107a بشكل ملحوظ بين المجموعتين أو بعد العلاج بـ IL -15 (الشكل 5B).

الشكل 4. مستويات الخلايا القاتلة الطبيعية في PBMCs من الأفراد الذين تم إدخالهم إلى المستشفى بسبب حالة حرجة من فيروس كورونا -19. (أ) تم تقييم المستويات الإجمالية للخلايا NK (CD3-CD56+) و(B) التعبير عن علامة إزالة الحبيبات CD107a في هذه الخلايا في PBMCs في الظروف القاعدية (الخطوط الرمادية) أو بعد العلاج بـ IL-15 لمدة 48 ساعة (خطوط سوداء) بعد الاستزراع المشترك (1:1) مع خلايا Vero E6 المصابة بالنمط الكاذب لـ SARS-CoV-2 لمدة ساعة واحدة. كل نقطة تقابل متوسط ​​البيانات، وتمثل الخطوط العمودية SEM. تم حساب الأهمية الإحصائية بين المجموعات باستخدام اختبار مان ويتني U، وداخل المجموعات، تم استخدام اختبار ويلكوكسون U.

الشكل 5. مستويات خلايا NKT في PBMCs من الأفراد الذين تم إدخالهم إلى المستشفى بسبب حالة حرجة من فيروس كورونا -19. تم تقييم المستويات الإجمالية لخلايا NKT (CD 3+ CD 56+) (A) والتعبير عن علامة إزالة الحبيبات CD107a في هذه الخلايا (B) في الظروف القاعدية (الخطوط الرمادية) أو بعد العلاج بـ IL{ {5}} لمدة 48 ساعة (خطوط سوداء) بعد الاستزراع المشترك (1:1) لمدة ساعة واحدة مع خلايا Vero E6 المصابة بالنمط الكاذب لـ SARS-CoV-2. كل نقطة تقابل متوسط ​​البيانات، وتمثل الخطوط العمودية SEM. تم حساب الأهمية الإحصائية بين المجموعات باستخدام اختبار مان ويتني U، وداخل المجموعات، تم استخدام اختبار ويلكوكسون U.

3.6. مستويات CD8+ الخلايا التائية

تم تحسين عدد CD8 بمقدار 2.07-fold (p=0.0409; Cohen's d=0.94) في العينة الأساسية (t=0) لمجموعة Exitus في المقارنة مع مجموعة البقاء على قيد الحياة، وظلت هذه المستويات ثابتة حتى النتيجة المميتة (الشكل 6A). لم ينتج IL -15 تأثيرًا مفيدًا كبيرًا على مستويات تعداد هذه الخلية. في مجموعة البقاء على قيد الحياة، تم تخفيض الخلايا التائية CD8+ بمقدار 1.51- أضعاف في المتوسط ​​مقارنةً بمجموعة Exitus (الشكل 6A). انخفض تعبير CD107a بمقدار 1.53-fold (p=0.0313) في الأسبوع الرابع في خلايا CD8+ T من أفراد مجموعة Exitus، وظل دون تغيير حتى الوفاة القاتلة حصيلة. أظهر العلاج بـ IL-15 فائدة طفيفة في التعبير عن علامة إزالة التحبب هذه، لكن هذا الاختلاف لم يكن مهمًا (الشكل 6B). في مجموعة البقاء على قيد الحياة، كان هناك أيضًا انخفاض في تعبير CD107a في خلايا CD8+ T في الأسبوع الرابع، ثم كانت هناك زيادة فصاعدًا، ولكن لم يتم تحقيق أي أهمية قبل أو بعد العلاج بـ IL{{26 }} (الشكل 6ب).

الشكل 6. مستويات الخلايا التائية CD8+ في خلايا PBMC من الأفراد الذين تم إدخالهم إلى المستشفى بسبب حالة حرجة من فيروس كورونا -19. (أ) تم تقييم المستويات الإجمالية للخلايا التائية CD 8+ (CD 3+ CD 8+) و (B) التعبير عن علامة إزالة الحبيبات CD107a في هذه الخلايا في PBMCs في الظروف القاعدية (الرمادي خطوط) أو بعد العلاج بـ IL -15 لمدة 48 ساعة (خطوط سوداء) بعد الاستزراع المشترك (1: 1) مع خلايا Vero E6 المصابة بالنمط الكاذب لـ SARS-CoV -2 لمدة ساعة واحدة. كل نقطة تقابل متوسط ​​البيانات، وتمثل الخطوط العمودية SEM. تم حساب الأهمية الإحصائية بين المجموعات باستخدام اختبار مان ويتني U، وداخل المجموعات، تم استخدام اختبار ويلكوكسون U.

3.7. مستويات علامات الإرهاق

تم تحليل مستويات التعبير عن علامات الإرهاق المناعي PD-1 (بروتين موت الخلية المبرمج) وTIGIT (المستقبل المناعي للخلايا التائية مع نطاقات Ig وITIM) عن طريق قياس التدفق الخلوي في خلايا CD4+ T والخلايا السامة للخلايا من جميع المشاركين. تم تحليل العينات التي تم الحصول عليها عند دخول المستشفى (t=0) حتى الأسبوع السادس من دخول المستشفى، وذلك بسبب عدم توفر العينات بعد هذا الوقت. أظهرت الخلايا CD4+ وCD8+ T من أفراد مجموعة Exitus مستويات PD-1 التي زادت بشكل ملحوظ بمقدار 1.72 (p=0.0095؛ Cohen's d {{ 11}}.87)- و2.92-fold (ص=0.0317؛ كوهين د=2.07) بعد 4 أسابيع من العلاج في المستشفى، على التوالي، بالمقارنة مع أفراد من مجموعة البقاء على قيد الحياة (الشكل 7A، B، الرسوم البيانية اليسرى). في خلايا NKT، زادت مستويات TIGIT بشكل ملحوظ من وقت دخول المستشفى حتى 6 أسابيع من دخول المستشفى لدى الأفراد من مجموعة Exitus، وتمت زيادة هذه المستويات بمقدار 1.76-fold (p=0.0357 ؛ كوهين د=0.33) بعد أسبوعين من العلاج في المستشفى، بالمقارنة مع مجموعة البقاء على قيد الحياة (الشكل 7C، الرسم البياني الأيمن).

لم يلاحظ أي فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات في مستويات التعبير عن علامات الإرهاق هذه في خلايا NK (الشكل 7D).

الشكل 7. مستويات التعبير عن علامات الإرهاق في PBMCs من الأفراد الذين تم إدخالهم إلى المستشفى بسبب حالة حرجة من فيروس كورونا -19. مستويات التعبير عن PD -1 وTIGIT في خلايا CD 4+ T (A)، وخلايا CD 8+ T (B)، وخلايا NKT (C)، وخلايا NK (D). كل نقطة تقابل متوسط ​​البيانات، وتمثل الخطوط العمودية SEM. تم حساب الأهمية الإحصائية بين المجموعات باستخدام اختبار مان ويتني U، وداخل المجموعات، تم استخدام ANOVA.

3.8. القياس الكمي لـ SARS-CoV -2 RNAemia في البلازما

تم تحليل وجود الحمض النووي الريبي (RNA) من SARS-CoV-2 في بلازما جميع الأفراد في العينة الأساسية (t=0)، ولم يتم الحصول على نتائج إيجابية لدى أي مشارك، حيث كانت قيم Cq أقل من الحد الكشف الإيجابي عن 45 دورة.

4. مناقشة

قد تتسبب عدوى SARS-CoV-2 في ظهور العديد من العروض السريرية لـCOVID-19 والتي تتراوح من العدوى بدون أعراض إلى المرض الشديد أو الحرج أو حتى المميت [4]. على الرغم من أن التطعيم العام للسكان قد قلل إلى حد كبير من الأشكال الحادة للمرض، فإن ظهور متغيرات جديدة من فيروس السارس-CoV-2 يؤدي إلى زيادة عدد الأفراد الذين يصابون بمرض كوفيد خطير-19 ويحتاجون إلى العلاج أدخل إلى المستشفى بسبب العدوى الاختراقية [47،48]. لذلك، لا يزال تطوير استراتيجيات وقائية وعلاجية من الأولويات التي قد تتجنب تطور الأشكال الحرجة من فيروس كورونا-19 والنتائج المميتة لدى المرضى في المستشفى. لقد تم وصف أن كبار السن الذين يعانون من أمراض مصاحبة يمثلون خطرًا أكبر للإصابة بمرض كوفيد الشديد والحرج {{1{{30}}}} [49]. في إسبانيا، أهم المتنبئين المستقلين بالوفاة بسبب فيروس كورونا-19 هم الذكور الذين تزيد أعمارهم عن 50 عامًا والذين يعانون من أمراض مصاحبة مرتبطة مثل ارتفاع ضغط الدم والسكري [36]. في دراستنا، أظهر معظم المشاركين من كلا المجموعتين هذه الخصائص، دون وجود اختلافات كبيرة بينهم في البيانات الاجتماعية والديموغرافية أو السريرية أو البيوكيميائية التي قد تؤثر على شدة المرض أو النتيجة المميتة. في الواقع، أظهرت كلا المجموعتين مستويات متزايدة من المعلمات البيوكيميائية التي ارتبطت بزيادة خطر الإصابة بنتائج سيئة لكوفيد-19، مثل بروتين سي التفاعلي (CRP) ونازعة هيدروجين اللاكتات (LDH) [50-56 ]. من ناحية أخرى، على الرغم من أنه تم الإبلاغ عن أن الأفراد المصابين بحالات شديدة من فيروس كورونا-19 قد يكون لديهم فيروس سارس-كوف -2 RNAnemia [54]، والذي يرتبط بزيادة خطر الوفاة [55]، لم يقدم أي من المشاركين في دراستنا الحمض النووي الريبي (RNA) القابل للاكتشاف في المصل، لذلك لم نتمكن من إثبات وجود علاقة بين تفير الدم القابل للاكتشاف والنتيجة المميتة. أخيرًا، يُظهر فيروس كورونا-19 مدة إقامة أعلى في المستشفى ومعدل وفيات أعلى مقارنة بالأمراض المعدية الأخرى التي تتطلب دخول وحدة العناية المركزة، مثل الالتهاب الرئوي المكتسب من المجتمع (CAP) أو تعفن الدم [56]، وقد تم تقديره في 35 أيام في المتوسط ​​للأفراد الذين تم إدخالهم إلى المستشفى في إسبانيا خلال موجات الوباء الأولى [36]. في دراستنا، كان متوسط ​​مدة الإقامة في المستشفى مشابهًا بين مجموعتي الخروج والبقاء على قيد الحياة (59.0 و73.0 يومًا، على التوالي)، وبقي 50% من جميع المشاركين أكثر من 40 يومًا في وحدة العناية المركزة. ولذلك، لا بد من أخذ عوامل تفاضلية أخرى في الاعتبار لتفسير النتيجة المميتة في مجموعة الخروج والتعافي في مجموعة البقاء على قيد الحياة.

فوائد cistanche tubulosa-تقوية جهاز المناعة

تعتبر قلة اللمفاويات أيضًا عامل خطر لشدة المرض الذي يرتبط بطول الإقامة في المستشفى [57]. في دراستنا، أظهر 73.9% من المشاركين في مجموعتي الخروج والبقاء انخفاضًا في عدد الخلايا الليمفاوية. ومع ذلك، كان مستوى الخلايا الليمفاوية الكلية أعلى في المتوسط ​​لدى المشاركين في مجموعة البقاء على قيد الحياة، مقارنة بمجموعة الخروج. يتوافق هذا مع الملاحظة السابقة بأن هؤلاء الأفراد الذين ماتوا بسبب فيروس كورونا-19 يصابون بنقص لمفاويات أكثر شدة بمرور الوقت مقارنة بأولئك الذين بقوا على قيد الحياة [58] وأن هذه الخلايا الليمفاوية تظهر عادةً نمطًا ظاهريًا منهكًا، مما يؤدي إلى نقص المناعة التدريجي [15،16]. نظرًا لأن الاستجابة الفعالة المضادة للفيروسات السامة للخلايا ضرورية للسيطرة على العدوى الفيروسية، بما في ذلك السارس-CoV-2 [17]، فإن إعادة تكوين المناعة أمر بالغ الأهمية للتعافي من كوفيد-19. يعتمد تسريع إعادة تكوين المناعة بشكل كبير على التوسع المحيطي المتوازن للخلايا الليمفاوية، والذي يمكن أن يكون استراتيجية جيدة لتحسين نتائج الأفراد الذين يتم إدخالهم إلى المستشفى بسبب الإصابة الشديدة بكوفيد-19 [58]. IL-15 هو سيتوكين ضروري لوظيفة وتوازن الخلايا التائية CD8+ وخلايا NK وخلايا NKT [29]، وقد تم اقتراحه كعلاج مناعي جديد للعديد من الأمراض مثل السرطان والعدوى بفيروس نقص المناعة البشرية [26،30،35،59]. لذلك، في هذه الدراسة، قمنا بتقييم ما إذا كان العلاج في المختبر باستخدام IL-15 يمكن أن يحسن الاستجابة السامة للخلايا في PBMCs للأفراد في المستشفى المصابين بكوفيد الشديد والحرج-19 مع تقدم العدوى، من أجل تحديد صلاحيتها كمرشح لتحفيز إعادة تكوين المناعة أثناء كوفيد-19. من خلال الجرعة التي تم فحصها، لاحظنا زيادة إجمالية في الاستجابة السامة للخلايا ضد الخلايا المستهدفة المصابة بالنمط الكاذب لـ SARS-CoV-2 في PBMCs لهؤلاء الأفراد الذين نجوا من فيروس كورونا-19 بعد 44 يومًا في المتوسط ​​من دخول المستشفى في وحدة العناية المركزة. تمت زيادة هذه الاستجابة السامة للخلايا بشكل فعال بمقدار 2.3-ضعف في المتوسط ​​عند العلاج بـ IL-15 في جميع العينات التي تم جمعها أثناء المتابعة، حيث كان الأسبوع السادس من العلاج في المستشفى هو نقطة التحول التي يتم من خلالها تعداد الخلايا الليمفاوية وبدأ النشاط السام للخلايا في الانخفاض حتى الخروج من المستشفى. على الرغم من تقاسم الخصائص الاجتماعية والديموغرافية والسريرية والكيميائية الحيوية المماثلة ودخولهم إلى المستشفى لنفس الفترة الزمنية تقريبًا (59 يومًا إجمالاً، منها 49 يومًا في وحدة العناية المركزة)، فإن مجموعة الأفراد الذين لم ينجوا من فيروس كورونا{{34} } أظهر خلايا PBMCs التي لم تكن تستجيب في وجود الخلايا المستهدفة المصابة، حتى عندما تم تحفيزها باستخدام IL-15. كانت المستويات الإجمالية للخلايا الليمفاوية أعلى من عتبة قلة اللمفاويات لدى الأفراد من هذه المجموعة منذ الأسبوع الثاني من العلاج في المستشفى. ومع ذلك، لم تتزايد هذه المستويات بشكل ملحوظ أثناء فترة العلاج في المستشفى، ولم يتم اكتشاف أي استجابة فعالة مضادة للفيروسات، حتى في وجود IL-15 عند الجرعة المقايسة. تم وصف غياب الاستجابة لـ IL-15 في حالات العدوى المزمنة الأخرى مثل فيروس نقص المناعة البشرية (HIV)، وفيروس التهاب الكبد C (HCV)، وفيروس التهاب الكبد B (HBV)، وفيروس T اللمفاوي البشري (HTLV)، حيث قد يؤثر الإرهاق المناعي على التعبير عن المستقبل المحدد لـ IL-15، CD122، في الخلايا التائية CD8+ [60]، مما يجعلها غير مستجيبة لهذا التحفيز الاستتبابي. لم تتم ملاحظة الإرهاق المناعي الذي يميز فيروس كورونا -19 فقط في الخلايا التائية CD8+ ولكن أيضًا في أنواع الخلايا السامة للخلايا الأخرى مثل خلايا NK وNKT [15,16]. لذلك، فإن غياب الاستجابة لـ IL-15 في PBMCs من مجموعة Exitus قد يكون مرتبطًا بزيادة الإرهاق المناعي الذي لا يمكن التغلب عليه عن طريق علاج IL-15 وحده عند الجرعة المقايسة. وقد لوحظ هذا أيضًا في المرحلة الأولى من التجارب السريرية التي كان فيها العلاج الأحادي بـ IL-15 غير فعال على الرغم من التوسع الهائل في الخلايا السامة للخلايا [31,32]. وبالتالي، قد تكون العلاجات التكلفة الأخرى ضرورية للحث على استجابة فعالة لدى هؤلاء الأفراد، مثل مثبطات نقاط التفتيش المناعية أو الأجسام المضادة وحيدة النسيلة التي تستهدف الخلايا المصابة، لتعزيز السمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة (ADCC).

لقد حددنا أيضًا أنواع الخلايا التي شاركت بشكل أساسي في تطوير هذه الاستجابة المعززة السامة للخلايا في مجموعة الأفراد الذين نجوا من فيروس كورونا-19. لقد ثبت أن وجود الخلايا التائية CD8+ الوظيفية ضروري لحماية النماذج الحيوانية من تطور حالات كوفيد شديدة-19 [61,62]. علاوة على ذلك، تم اعتبار غياب الاستجابة الفعالة السامة للخلايا بواسطة القرص المضغوط 8- عاملاً أساسيًا لزيادة قابلية كبار السن للإصابة بكوفيد شديد أو حرج-19 [63]. من المثير للدهشة أن مستويات الخلايا التائية CD8+ كانت أعلى بمقدار 2.07- أضعاف (p=0.0409) في مجموعة Exitus في وقت العلاج في المستشفى (t=0) ، وظلوا معززين حتى النتيجة القاتلة، مقارنة بمجموعة البقاء. على الرغم من أن الأفراد من مجموعة Exitus أظهروا أن تعداد الخلايا الليمفاوية أعلى قليلاً من عتبة قلة اللمفاويات، إلا أن هذه المستويات ظلت دون تغيير تقريبًا طوال فترة دخولهم إلى المستشفى. علاوة على ذلك، فقد تم وصف أن قلة اللمفاويات قد تؤدي إلى نمط من التعايش مع الكبت والتنشيط حيث يكون هناك فقدان محيطي للخلايا التائية بالتزامن مع التكاثر المكثف لتجمع الخلايا التائية CD8+ [64،65]. وهذا من شأنه أن يفسر المستويات المتزايدة قليلاً من الخلايا التائية CD 8+ التي لوحظت في PBMCs للمشاركين من مجموعة Exitus منذ الأسبوع السادس من العلاج في المستشفى فصاعدًا، على الرغم من بقاء المستويات الإجمالية للخلايا الليمفاوية دون تغيير وأعلى من عتبة قلة اللمفاويات، يشير أيضًا إلى انخفاض محتمل في خلايا CD4+ T. ومع ذلك، أظهرت خلايا CD8+ T نشاطًا سامًا للخلايا منخفضًا، كما تم تحديده من خلال التعبير المنخفض لعلامة تحلل الحبيبات CD107a على سطح الخلية، في حين زاد التعبير عن هذه العلامة في خلايا CD8+ T من المشاركون في مجموعة البقاء من الأسبوع الرابع فصاعدًا. يعتبر تعبير CD107a علامة حيوية لتقييم القدرة السامة للخلايا [66]، وقد تم وصفه على أنه ينخفض ​​في سطح الخلايا المعزولة من الأفراد المصابين بـCOVID-19، مقارنة بالمتبرعين الأصحاء غير المصابين [15 ].

لذلك، فإن التعبير المتزايد عن CD107a على سطح الخلايا التائية CD8+ قد يفسر جزئيًا على الأقل مساهمة هذه الخلايا في النشاط السام للخلايا المعزز الذي لوحظ في PBMCs للمشاركين من مجموعة البقاء على قيد الحياة. بالإضافة إلى ذلك، لاحظنا زيادة في التعبير عن علامة الإرهاق PD-1 في كل من الخلايا التائية CD4+ وCD8+ من أفراد مجموعة Exitus، والتي قد تساهم أيضًا في تقليل السمية الخلوية. النشاط والاستجابة لـ IL-15 من هذه الخلايا. قد تشارك مجموعات الخلايا الأخرى في النشاط السام للخلايا ضد الخلايا المصابة بـ SARS-CoV-2- النمط الكاذب، مثل خلايا NK وNKT. كما يحدث مع حالات العدوى الحادة الوخيمة الأخرى، قد يتم تجنيد الخلايا القاتلة الطبيعية في موقع الإصابة بفيروس SARS-CoV-2 [67]، وهو ما يفسر انخفاض أعداد الخلايا القاتلة الطبيعية المنتشرة في جميع المشاركين. علاوة على ذلك، قد تؤدي عاصفة السيتوكين التي تم تطويرها أثناء الإصابة بفيروس كورونا الشديد والحرج-19 إلى حالة خلل وظيفي في خلايا NK التي من شأنها أن تعبر عن مستويات عالية من مستقبلات نقطة التفتيش المثبطة مثل NKG2A أو PD-1 [68]. في دراستنا، كانت مستويات الخلايا القاتلة الطبيعية متشابهة بين المجموعتين حتى الأسبوع السادس، حيث أظهر المشاركون في مجموعة البقاء على قيد الحياة زيادة تدريجية حتى الخروج من المستشفى. يرتبط هذا بزيادة تعبير CD107a، والذي ارتبط في الخلايا القاتلة الطبيعية بإفراز السيتوكينات المعزز وتحسين تحلل الخلايا المستهدفة [7،69]، على الرغم من أن النسبة المئوية للخلايا القاتلة الطبيعية التي تعبر عن علامات التنشيط مثل CD107a قد تم وصفها بأنها أقل لدى الأفراد المصابين بفيروس كورونا-19 مقارنة بالضوابط الصحية [70]. على العكس من ذلك، على الرغم من تعزيز مستويات خلايا NKT بشكل كبير في مجموعة البقاء على قيد الحياة اعتبارًا من الأسبوع السادس فصاعدًا، ظل التعبير عن CD107a دون تغيير تقريبًا، في حين أظهروا مستويات معززة من علامة الإرهاق TIGIT على سطح الخلية والتي زادت بشكل مطرد حتى الأسبوع السادس من العلاج في المستشفى. . كان أحد أهم القيود في دراستنا هو انخفاض حجم العينة. ومع ذلك، تم تحقيق دلالة إحصائية بين المجموعات في العديد من المعالم الأساسية التي أظهرت أيضًا حجم تأثير كبير أو كبير جدًا عند حساب الاختلافات المجمعة بين المجموعات.

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

5. الاستنتاجات

في الختام، فإن أهم مساهمة لهذه الدراسة في مكافحة الأمراض المناعية التي تسببها عدوى SARS-CoV-2 هي التأكيد على أن ضعف القدرة المضادة للفيروسات في PBMCs يبدو أنه عامل حاسم في تطور المرض إلى مرض كوفيد المميت{ {2}}، حتى فوق العوامل الاجتماعية والديموغرافية والسريرية والكيميائية الحيوية الأخرى. لذلك، فإن استخدام العلاجات المعدلة للمناعة التي قد تعزز السمية الخلوية قد يساهم في تحقيق نتيجة إيجابية أثناء العلاج في المستشفى بسبب حالة كوفيد الحرجة-19. من غير المرجح أن يعتمد النشاط السام للخلايا المتزايد بوساطة IL-15 في الأفراد من مجموعة البقاء على مستويات متزايدة من الخلايا السامة للخلايا ولكن على الكفاءة المناعية لهذه الخلايا للاستجابة لمثل هذا التحفيز. لذلك، فإن مراقبة التعبير عن علامات الإرهاق والاستجابة لمحفزات التوازن مثل IL-15 لمجموعات الخلايا هذه لدى الأفراد في المستشفى يمكن أن تكون مفيدة كعلامة تنبؤية لنتيجة مميتة من أجل بدء تدابير إضافية لمنع هو - هي. وبالتالي، تعد هذه الدراسة الرصدية دليلًا على مفهوم أن استخدام IL-15 في الأفراد الذين تم إدخالهم إلى المستشفى بسبب فيروس كورونا-19 يمكن أن يحسن الاستجابة المناعية المضادة للفيروسات، على الرغم من أن هذا التحفيز وحده لن يكون فعالاً في هؤلاء الأفراد الذين يعانون من عدم الاستجابة الخلايا بسبب الإرهاق المناعي أو ضعف مسار إشارات IL-15R، وهو أمر ضروري في الوقاية من الإرهاق [71]، حتى عندما تظهر تعداد الخلايا الليمفاوية أعلى من عتبة قلة اللمفاويات. من الضروري إجراء المزيد من الدراسات على عدد أكبر من السكان لتقييم مجموعات من الجرعات المتزايدة من IL-15 مع عوامل تعديل المناعة الأخرى مثل مثبطات نقاط التفتيش المناعية أو الأجسام المضادة وحيدة النسيلة التي تستهدف الخلايا المصابة للمساعدة في استعادة الاستجابة المضادة للفيروسات وتعزيزها أثناء الأشكال الحرجة من فيروس كورونا. -19.

مراجع

1. أتزرودت، CL؛ ماكنوجيا، أنا؛ مكارثي، RDP. أولدفيلد، TM؛ بو، J.؛ تا، كتل؛ ستيب، سعادة؛ كليمنتس، TP A Guide to COVID-19: جائحة عالمي يسببه فيروس كورونا الجديد SARS-CoV-2. فيبس ج. 2020، 287، 3633–3650. [CrossRef] [مجلات]

2. لوحة تحكم منظمة الصحة العالمية بشأن فيروس كورونا (COVID-19). متاح على الإنترنت: https://covid19.who.int/ (تم الوصول إليه في 18 أكتوبر 2022).

3. كابالبو، سي. أسيتي، أ.؛ سيماكو، م.؛ بونفيني، ر. روكو، م. ريتشي، أ. نابولي، سي. روكو، م. ألفونسي، V.؛ تيجي، أ.؛ وآخرون. المرحلة الأسية لوباء فيروس كورونا-19 في وسط إيطاليا: مسار رعاية متكامل. كثافة العمليات. جي. البيئة. الدقة. 2020، 17، 3792. [CrossRef] [PubMed]

4. هوانغ، سي؛ وانغ، Y.؛ لي، العاشر. رن، L.؛ تشاو، J.؛ هو، Y.؛ تشانغ، L.؛ فان، ج؛ شو، J.؛ قو، العاشر؛ وآخرون. المظاهر السريرية للمرضى المصابين بفيروس كورونا الجديد 2019 في ووهان، الصين. لانسيت 2020، 395، 497-506. [CrossRef] [مجلات]

5. حيبر، هـ. كازيمنيا، ك. رحيم، ف. الأمراض المزمنة الكامنة وعدوى فيروس كورونا-19: مراجعة حديثة. Jundishapur J. ديس المزمن. رعاية 2020, 9, e103452. [CrossRef] 6. حامد، إس إم؛ الخطيب، دبليو. خيرالله، ع. نور الدين، AM الديناميكيات العالمية لمجموعات SARS-CoV-2 وعلاقتها بوبائيات فيروس كورونا-19. الخيال العلمي. النائب 2021، 11، 8435. [المرجع المتقاطع]

7. إردينك، ب.؛ ساهني، س. Gotlieb, V. المظاهر الدموية ومضاعفات فيروس كورونا -19. حال. كلين. إكسب. ميد. 2021، 30، 101-107. [المرجع المتقاطع]

8. هو، ب. هوانغ، S.؛ Yin, L. عاصفة السيتوكين وCOVID-19. جيه ميد. فيرول. 2021, 93, 250-256. [المرجع المتقاطع]

9. راموس كاسالس، م.؛ بريتو زيرون، ب. لوبيز غييرمو، أ؛ خامشتا، MA؛ بوش، X. متلازمة البلعمة لدى البالغين. لانسيت 2014، 383، 1503-1516. [المرجع المتقاطع]

10. ميهتا، ب. ماكولي، مدافع؛ براون، م. سانشيز، E.؛ تاترسال ، جمهورية صربسكا . مانسون، جي جي؛ بالنيابة عن HLH عبر Specialty Collaboration، المملكة المتحدة. عبر التخصص. كوفيد-19: فكر في متلازمات عاصفة السيتوكين وكبت المناعة. لانسيت 2020، 395، 1033-1034. [المرجع المتقاطع]

11. لي، م.-ي.؛ لي، ل. تشانغ، Y.؛ وانغ، X.-S. التعبير عن جين مستقبل الخلايا SARS-CoV-2 ACE2 في مجموعة واسعة من الأنسجة البشرية. تصيب. ديس. الفقر 2020، 9، 45. [المرجع المتقاطع]

12. جيانغ، ي.؛ روبن، ل.؛ بنغ، T.؛ ليو، L.؛ شينغ، X.؛ لازاروفيتشي، ب. تشنغ، دبليو. عاصفة السيتوكين في مرض كوفيد-19: من العدوى الفيروسية إلى الاستجابات المناعية والتشخيص والعلاج. كثافة العمليات. جي بيول. الخيال العلمي. 2022، 18، 459-472. [CrossRef] [مجلات]

13. زان، ي.؛ كارينجتون، م. تشانغ، Y.؛ هينزل، S .؛ Lew، AM حياة وموت الخلايا التائية المنشَّطة: كيف تختلف عن الخلايا التائية الساذجة؟ أمام. إيمونول. 2017، 8، 1809. [CrossRef] [مجلات]

14. هوانغ، آي.؛ براناتا، ر. نقص الغدد الليمفاوية في مرض فيروس كورونا الحاد-2019 (COVID-19): مراجعة منهجية وتحليل تلوي. ي. العناية المركزة 2020، 8، 36. [CrossRef] [PubMed]

15. تشنغ، م. جاو، Y.؛ وانغ، ج.؛ سونغ، ج. ليو، س. الشمس، د.؛ شو، Y.؛ تيان، Z. الإرهاق الوظيفي للخلايا الليمفاوية المضادة للفيروسات لدى مرضى كوفيد-19. خلية. مول. إيمونول. 2020، 17، 533-535. [المرجع المتقاطع]

16. رها، م.-س.؛ جيونج ، الأب. كو، J.-H؛ تشوي، إس جيه؛ سيو، I.-H؛ لي، شبيبة. سا، م. كيم، أر. جو، E.-J؛ اهن، جي. وآخرون. لا يتم استنفاد الخلايا التائية PD-1- التي تعبر عن السارس-CoV-2-المحددة8+، ولكنها فعالة في المرضى الذين يعانون من فيروس كورونا-19. الحصانة 2021, 54, 44-52. [المرجع المتقاطع]

17. فيغون، ل.؛ فويرتس، د.؛ غارسيا بيريز، J .؛ توريس، م. رودريغيز مورا، S .؛ ماتيوس، إي. كورونا، م.؛ سايز مارين، AJ؛ مالو، ر. نافارو، سي. وآخرون. ضعف الاستجابة السامة للخلايا في PBMCs من المرضى المصابين بـCOVID-19 المقبولين في وحدة العناية المركزة: المؤشرات الحيوية للتنبؤ بخطورة المرض. أمام. إيمونول. 2021، 12، 665329. [المرجع المتقاطع]

18. منظمة الصحة العالمية. بيان مؤقت بشأن اعتبارات اتخاذ القرار بشأن استخدام لقاحات فيروس كورونا المتغيرة المحدثة-19. متاح عبر الإنترنت: https://www.who.int/news/item/17-06-2022-interim-statement-on-decision-making-considerations-for-the-use-ofvariant-updated-covid{{15} }vaccines (تم الاطلاع في 15 أغسطس 2022).

19. ميشرا، كورونا؛ تريباثي، تي. تحديث لمدة عام حول جائحة فيروس كورونا-19: أين نحن الآن؟ اكتا تروب. 2021, 214, 105778. [CrossRef] 20. Li, X .; قنغ، م. بنغ، Y.؛ منغ، L.؛ Lu، S. التسبب في المناعة الجزيئية وتشخيص فيروس كورونا -19. جي فارم. شرجي. 2020، 10، 102-108. [المرجع المتقاطع]

21. مجموعة الحقيقة والمصالحة. ديكساميثازون لدى المرضى في المستشفى المصابين بفيروس كورونا-19. ن. إنجل. جيه ميد. 2021، 384، 693-704. [المرجع المتقاطع]

22. تشو، العاشر. يو، J.؛ تشنغ، X.؛ تشاو، ب. مانيام، جي سي؛ تشانغ، L.؛ شلونس، ك. لي، ب. وانغ، J.؛ الشمس، S.-C. يتحكم ديوبيكويتيناز Otub1 في تنشيط الخلايا التائية CD8+ والخلايا NK عن طريق تنظيم التحضير بوساطة IL-15-. نات. إيمونول. 2019، 20، 879-889. [المرجع المتقاطع]

23. Parums, DV الوضع الحالي للعلاجات الدوائية المضادة للفيروسات عن طريق الفم لعدوى السارس-CoV-2 في المرضى غير المقيمين في المستشفى. ميد. الخيال العلمي. مونيت. 2022، 28، هـ935952-1. [CrossRef] [مجلات]

24. Couzin-Frankel، J. الحبوب المضادة للفيروسات يمكن أن تغير مسار الوباء. أكون. مساعد. حال. الخيال العلمي. 2021، 12، 799-800. [CrossRef] [مجلات]

25. منتسل، أ. أوتشوا، MC؛ كورديرو، L.؛ بيراوندو، ب. دي سيريو، AL-D .؛ كابو، م. لوبيز-بوتيت، م.؛ Melero، I. استهداف نقاط تفتيش خلايا NK للعلاج المناعي للسرطان. العملة. رأي. إيمونول. 2017، 45، 73-81. [CrossRef] [مجلات]

26. باتيدار، م.؛ ياداف، ن.؛ الدالاي، إس كيه إنترلوكين 15: السيتوكين الرئيسي للعلاج المناعي. عامل نمو السيتوكين القس. 2016، 31، 49-59. [المرجع المتقاطع]

27. كابينجر، ف.؛ ستيلر، سي. شميتزوفا، J .؛ دينمان، C .؛ كوكيتش، ج.؛ هيلين، HS. هوبارتنر، C.؛ Cramer، P. آلية طفرات السارس- CoV -2 التي يسببها مولنوبيرافير. نات. هيكل. مول. بيول. 2021، 28، 740-746. [CrossRef] [مجلات]

28. هونغ، Y.-P.؛ لي، جي سي؛ تشيو، C.-W. لي، سي.-سي. تساي، P.-J؛ هسو، I.-L.؛ كو، دبليو سي. علاج نيرماتريلفير/ريتونافير عن طريق الفم لمرض كوفيد-19: الفجر في الظلام؟ المضادات الحيوية 2022، 11، 220. [المرجع المتقاطع]

29. قوه، ي.؛ لوان، L.؛ باتيل، NK؛ شيروود، ER علم الأحياء المناعي لمجمع IL-15/IL-15R كعامل مضاد للأورام ومضاد للفيروسات. عامل نمو السيتوكين القس. 2017، 38، 10-21. [المرجع المتقاطع]

30. تشانغ، س.؛ تشاو، J.؛ باي، اكس؛ هاندلي، م. Shan، F. التأثيرات البيولوجية لـ IL-15 على الخلايا المناعية وإمكانية علاج السرطان. كثافة العمليات. إمونوفارماكول. 2021، 91، 107318. [المرجع المتقاطع]

31. والدمان، تا. دوبوا، S .؛ ميليكوفيتش، ماريلاند؛ كونلون، KC IL-15 في العلاج المناعي المختلط للسرطان. أمام. إيمونول. 2020، 11، 868. [المرجع المتقاطع]

32. دوبوا، إس بي؛ ميليكوفيتش، ماريلاند؛ فليشر، تا؛ بيتالوجا، S .؛ هسو ألبرت، J .؛ براينت، ر. بيتروس، مينيسوتا؛ بيريرا، ليرة لبنانية. مولر، JR. شيه، ج.ه. وآخرون. أدى IL-15 قصير الدورة المعطى كتسريب مستمر إلى توسع هائل في خلايا NK الفعالة: الآثار المترتبة على العلاج المركب مع الأجسام المضادة المضادة للورم. J. مناعة. السرطان 2021, 9, e002193. [المرجع المتقاطع]

33. كونلون، كانساس؛ بوتر، إل. بيتالوجا، S .؛ لي، C.-CR؛ ميليكوفيتش، ماريلاند؛ فليشر، تا؛ دوبوا، S .؛ براينت، ر. بيتروس، م.؛ بيريرا، ليرة لبنانية. وآخرون. IL15 عن طريق التسريب الوريدي المستمر للمرضى البالغين المصابين بأورام صلبة في المرحلة الأولى من التجربة المستحثة بمجموعة فرعية من خلايا NK المثيرة. كلين. الدقة السرطان. 2019, 25, 4945–4954. [المرجع المتقاطع]

34. رومي، ر.؛ كولي، س. بيرين إليوت، مم . ويستيرفيلت، P .؛ فيرنيريس، السيد؛ فاغنر، جي. ويسدورف، دي جي؛ بليزار، ر. أوستن، C .؛ ديفور، تي إي؛ وآخرون. أول دراسة سريرية للمرحلة الأولى على الإنسان لمركب الناهض الفائق IL-15 ALT-803 لعلاج الانتكاس بعد عملية الزرع. الدم صباحا. جي هيماتول. 2018، 131، 2515-2527. [CrossRef] [مجلات]

35. ميلر، شبيبة. ديفيس، ZB. هيلجيسون، إي. رايلي، C.؛ ثوركلسون، أ. أندرسون، J.؛ ليما، NS؛ جورستاد، S .؛ هارت، جي تي؛ لي، ج.ه. وآخرون. السلامة والتأثير الفيروسي للناهض الفائق N-803 IL-803 في الأشخاص المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية: تجربة المرحلة الأولى. نات. ميد. 2022، 28، 392-400. [CrossRef] [مجلات]

36. بيرينجر، ج.؛ ريان، ب. رودريغيز-بانيو، J .؛ جارين، أنا. كاراتالا، J.؛ باتشون، J .؛ يليسكاس، م. أريبا، الابن. مونيوز، EA؛ جيل ديفاسون، P.؛ وآخرون. الخصائص والتنبؤات بالوفاة بين 4035 مريضًا تم إدخالهم إلى المستشفى على التوالي بسبب فيروس كورونا-19 في إسبانيا. كلين. ميكروبيول. تصيب. 2020، 26، 1525-1536. [المرجع المتقاطع]

37. جارسيا بيريز، ج.؛ سانشيز بالومينو، S .؛ بيريز أولميدا، م.؛ فرنانديز، ب. Alcami، J. استراتيجية جديدة تعتمد على الفيروسات المؤتلفة كأداة لتقييم مدى حساسية الأدوية لفيروس نقص المناعة البشرية من النوع 1. J. Med. فيرول. 2007، 79، 127-137. [CrossRef] [مجلات]

38. أوو، العاشر؛ ليو، Y.؛ لي، X.؛ لي، ب. مي، د. رن، L.؛ قوه، L.؛ قوه، ر. تشن، T.؛ هو جين تاو، J.؛ وآخرون. توصيف البروتين السكري المرتفع لـ SARS-CoV-2 عند دخول الفيروس وتفاعله المناعي المتبادل مع SARS-CoV. نات. مشترك. 2020, 11, 1-12. [CrossRef] [مجلات]

39. فولز، إي. هيل، V.؛ ماكرون، جي تي؛ السعر، أ؛ يورجنسن، د.؛ أوتول، Á.؛ ساوثجيت، J.؛ جونسون، ر. جاكسون، ب. ناسيمنتو، ف.ف. وآخرون. تقييم تأثيرات طفرة SARS-CoV-2 الشوكية D614G على قابلية الانتقال والتسبب في المرض. خلية 2021، 184، 64-75. [المرجع المتقاطع]

40. كوربر، ب. فيشر، وم. جناناكاران، S .؛ يون، ه.؛ تيلر، J.؛ أبفالتيرر، دبليو؛ هينجارتنر، ن.؛ جيورجي، EE؛ بهاتاشاريا، ت.؛ فولي، ب. وآخرون. تتبع التغييرات في ارتفاع معدل الإصابة بفيروس SARS-CoV-2: دليل على أن D614G يزيد من إمكانية الإصابة بفيروس COVID-19. خلية 2020، 182، 812-827. [المرجع المتقاطع]

41. نانداغوبال، ن.؛ علي، ك. كومال، أيه كيه؛ لي، س.-ه. الدور الحاسم لمسار IL-15 –PI3K-mTOR في وظائف المستجيب للخلايا القاتلة الطبيعية. أمام. إيمونول. 2014، 5، 187. [المرجع المتقاطع]

42. روزنتال، ر.؛ جروبر، C .؛ براتشي، L.؛ أدامينا، م.؛ فيدر مينجوس، سي؛ زاجاك، ب. عزي، ج.؛ بولي، م. ويبر، الفسفور الأبيض. فراي، مارك ألماني؛ وآخرون. الاستجابة التفاضلية لـ IL-2 و IL-7 و IL-15 السيتوكينات ذات سلسلة المستقبلات الشائعة بواسطة خلايا الدم المحيطية الساذجة أو الذاكرة السامة للخلايا 8+ الخاصة بمستضد محدد من متبرعين أصحاء و مرضى الميلانوما. J. مناعة. 2009، 32، 252-261. [المرجع المتقاطع]

43. كورمان، في إم؛ لاندت، O .؛ كايزر، م. مولينكامب، ر. ماير، أ.؛ تشو، دكو؛ بليكر، T.؛ برونينك، S .؛ شنايدر، J.؛ شميدت، ML؛ وآخرون. الكشف عن فيروس كورونا الجديد لعام 2019 (2019-nCoV) بواسطة RT-PCR في الوقت الحقيقي. يوروسورفيلانس 2020، 25، 2000045. [CrossRef] [PubMed]

44. منظمة الصحة العالمية. الاختبار التشخيصي لـ SARS-CoV-2: إرشادات مؤقتة، 11 سبتمبر 2020؛ منظمة الصحة العالمية: جنيف، سويسرا، 2020.

45. بيكر، لوس أنجلوس حجم التأثير (ES)؛ جامعة كولورادو كولورادو سبرينغز: كولورادو سبرينغز، كولورادو، الولايات المتحدة الأمريكية، 2000.

46. ​​كوهين، ج. تحليل القوة الإحصائية للعلوم السلوكية؛ روتليدج: أبينجدون، المملكة المتحدة، 1988. [CrossRef]

47. مورينو بيريز، أو. ريبس، أنا؛ بويكس، V.؛ مارتينيز-غارسيا، م.؛ أوتيرو رودريغيز، إس؛ ريوس، S .؛ سانشيز مارتينيز، ر.؛ راموس، JM. شيكو سانشيز، P .؛ ميرينو، إي. المرضى في المستشفى الذين يعانون من اختراق فيروس كورونا -19: المظاهر السريرية والتنبؤ بالنتائج الضعيفة. كثافة العمليات. J. إصابة. ديس. 2022, 118, 89-94. [CrossRef] [مجلات]

48. لي، سم؛ لي، E.؛ بارك، WB. تشوي، بغ. أغنية، K.-H؛ كيم، إس. بارك، إس.-دبليو. اختراق عدوى فيروس كورونا-19 خلال فترة سيطرة متغير دلتا: هناك حاجة إلى رعاية فردية بناءً على حالة التطعيم. J. الطب الكوري. الخيال العلمي. 2022، 37، هـ252. [CrossRef] [مجلات]

49. إعجاز، ح.؛ السرهاني، ع. ظفر، أ.؛ جافيد، هـ؛ جنيد، ك.؛ عبدالله، الإمارات؛ أبوساليف، كو؛ أحمد، ز.؛ يونس، س. كوفيد-19 والأمراض المصاحبة: تأثير ضار على المرضى المصابين. J. إصابة. الصحة العامة 2020، 13، 1833-1839. [CrossRef] [مجلات]

50. أزيفيدو، آر بي؛ بوتيلو، بي جي؛ دي هولاندا، JVG؛ فيريرا، لاتس. دي أندرادي، LZJ؛ أوي، إس إس إم إل؛ ميلو، TDS؛ Muxfeldt, ES COVID-19 ونظام القلب والأوعية الدموية: مراجعة شاملة. جي هوم. ارتفاع ضغط الدم. 2021, 35, 4–11. [المرجع المتقاطع]

51. تشانغ، جي جي. لي، كانساس؛ أنج، LW. ليو، نعم؛ Young, BE عوامل الخطر للمرض الشديد وفعالية العلاج لدى المرضى المصابين بـ COVID-19: مراجعة منهجية وتحليل تلوي وتحليل الانحدار التلوي. كلين. تصيب. ديس. 2020, 71, 2199-2206. [المرجع المتقاطع]

52. كرمالي، م. خالصة، RK؛ بيلاي، ك. إسماعيل، ز.؛ هاركي، أ. دور المؤشرات الحيوية في تشخيص مرض كوفيد-19 – مراجعة منهجية. علوم الحياة. 2020، 254، 117788. [المرجع المتقاطع]

53. مالك، ص. باتيل، يو. ميهتا، د.؛ باتيل، ن.؛ كيلكار، ر. عكرمة، م.؛ جابريلوف، JL. ساكس، إتش. المؤشرات الحيوية ونتائج دخول المستشفى بسبب فيروس كورونا-19: المراجعة المنهجية والتحليل التلوي. دليل BMJ. مقرها ميد. 2021, 26, 107-108. [المرجع المتقاطع]

54. لي، ي.؛ شنايدر، صباحا؛ ميهتا، أ؛ ساد فيلدمان، م.؛ كايز، KR. جنتيلي، م. تشارلاند، كارولاينا الشمالية؛ جوني، آل؛ غوشتروفا، آي. خانا، هونج كونج؛ وآخرون. يرتبط فيروس السارس-CoV-2 بمسارات بروتينية متميزة ويتنبأ بنتائج فيروس كورونا-19. جيه كلين. تحقيق. 2021، 131، هـ148635. [المرجع المتقاطع]

55. رودريغيز سيرانو، DA؛ روي فاليجو، إي؛ كروز، NDZ؛ راميريز، صباحا؛ رودريغيز-غارسيا، SC؛ أريفاليللو فرنانديز، ن.؛ جالفان رومان، JM؛ غارسيا رودريغو، LF؛ فيجا بيريس، إل؛ لانو، MC؛ وآخرون. يرتبط اكتشاف الحمض النووي الريبي (RNA) لـ SARS-CoV-2 في المصل بزيادة خطر الوفاة لدى مرضى فيروس كورونا-19 الموجودين في المستشفى. الخيال العلمي. النائب 2021، 11، 13134. [المرجع المتقاطع]

56. سيرافيم، ر.ب. بوفوا، ب. سوزا-دانتاس، ف؛ خليل، AC؛ صالح، الدورة السريرية لـ JI ونتائج المرضى المصابين بأمراض خطيرة المصابين بعدوى فيروس كورونا -19: مراجعة منهجية. كلين. ميكروبيول. تصيب. 2021, 27, 47-54. [CrossRef] [مجلات]

57. ليو، إكس؛ تشو، ه.؛ تشو، Y.؛ وو، العاشر. تشاو، Y.؛ لو، Y.؛ تان، دبليو؛ يوان، م.؛ دينغ، X.؛ زو، J.؛ وآخرون. عوامل الخطر المرتبطة بخطورة المرض ومدة الإقامة في المستشفى لدى مرضى فيروس كورونا-19. J. إصابة. 2020, 81, e95–e97. [المرجع المتقاطع]

58. لوه، XH؛ تشو، Y.؛ ماو، J.؛ Du، البيولوجيا المناعية للخلايا RC T وعاصفة السيتوكين لفيروس كورونا -19. سكاند. جي إمونول. 2021، 93، هـ12989. [CrossRef] [مجلات]

59. هاروود، أو. O'Connor، S. الإمكانات العلاجية لـ IL-15 و N-803 في الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية/SIV. الفيروسات 2021، 13، 1750. [CrossRef] [PubMed]

60. شين، ه.؛ Wherry، EJ CD8 T خلل في الخلايا أثناء العدوى الفيروسية المزمنة. العملة. رأي. إيمونول. 2007، 19، 408-415. [المرجع المتقاطع]

61. مكماهان، ك.؛ يو، J.؛ ميركادو ، ملحوظة: لوس، سي؛ توستانوسكي، LH؛ شاندراشيكار، أ.؛ ليو، J.؛ بيتر، ل.؛ أتيو، سي. تشو، أ.؛ وآخرون. ارتباطات الحماية ضد السارس-CoV-2 في قرود المكاك الريسوسي. الطبيعة 2021، 590، 630-634. [المرجع المتقاطع]

62. تشوانغ، Z .؛ لاي، اكس؛ صن، ج. تشن، Z .؛ تشانغ، Z .؛ داي، J.؛ ليو، د.؛ لي، Y.؛ لي، ف؛ وانغ، Y.؛ وآخرون. رسم خرائط ودور استجابة الخلايا التائية في الفئران المصابة بـ SARS-CoV-2. جي إكسب. ميد. 2021، 218، هـ 20202187. [المرجع المتقاطع]

63. ويستماير، J .؛ بانيسكاكي، ك. كاراكوزي، ز.؛ ويرنر، T.؛ سوتر، ك. دولف، S .؛ أوفربيك، م. ليمر، أ.؛ ليو، J.؛ تشنغ، X.؛ وآخرون. ضعف استجابة الخلايا التائية المضغوطة السامة للخلايا 8+ لدى مرضى فيروس كورونا المسنين -19. مبيو 2020، 11، هـ02243-20. [المرجع المتقاطع]

64. لينغ، AG. لورينك، أ. ديل باريو، IDM؛ داس، أ.؛ فيش، م؛ مونين، L.؛ مونيوز رويز، م.؛ ماكنزي، د. هايداي، تي إس؛ فرانكوس كويجورنا، أنا؛ وآخرون. يشتمل التوقيع المناعي الديناميكي لفيروس كورونا-19 على ارتباطات بسوء التشخيص. نات. ميد. 2020، 26، 1623-1635. [المرجع المتقاطع]

65. كوري سرفانتس، ل.؛ بامبينا، ميغابايت. منغ، دبليو؛ روزنفيلد، صباحا؛ إيتنر، كاج؛ وايزمان، أر. أجيكوم، جمهورية صربسكا؛ ماثيو، د.؛ باكستر، الإمارات العربية المتحدة؛ فيلا، لوس أنجلوس؛ وآخرون. رسم خرائط شامل للاضطرابات المناعية المرتبطة بحالات كوفيد الشديدة-19. الخيال العلمي. إيمونول. 2020, 5, eabd7114. [المرجع المتقاطع]

66. أكتاس، إي. كوكوكسيزر، جامعة كاليفورنيا؛ بيلجيك، س. إرتن، ج.؛ Deniz، G. العلاقة بين تعبير CD107a والنشاط السام للخلايا. خلية. إيمونول. 2009، 254، 149-154. [المرجع المتقاطع]

67. بيوركستروم، NK؛ سترونز، ب. لجونجرين، H.-G. الخلايا القاتلة الطبيعية في المناعة المضادة للفيروسات. نات. القس إيمونول. 2022، 22، 112-123. [CrossRef] [مجلات]

68. خلل في خلايا Bi, J. NK لدى المرضى المصابين بـCOVID-19. خلية. مول. إيمونول. 2022، 19، 127-129. [CrossRef] [مجلات]

69. ألتر، ج. مالنفانت، JM. Altfeld، M. CD107a كعلامة وظيفية لتحديد نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية. جي إمونول. طرق 2004، 294، 15-22. [CrossRef] [مجلات]

70. جوستين، جيه إن؛ جونز، د. علم الأمراض المناعية الناتج عن الالتهاب المفرط في مرض كوفيد-19. أكون. جيه كلين. باثول. 2021, 191, 4–17. [CrossRef] [مجلات]

71. هو، سي؛ تشو، Y.؛ لي، Z.؛ فاروق، MA؛ أجمل، أنا. تشانغ، ه.؛ تشانغ، L.؛ تاو، L.؛ ياو، J.؛ دو، ب. وآخرون. يعمل التعبير المشترك عن IL-7 على تحسين علاج خلايا CAR T المستندة إلى NKG2D على سرطان البروستاتا عن طريق تعزيز التوسع ومنع موت الخلايا المبرمج والإرهاق. السرطان 2020، 12، 1969. [CrossRef]