تأثير تصبغ مضاد للجلد التآزري من جليكوسيدات فينايثانويد سيستانش والجلابريدين

مجردة للتحقيق في التآزرتأثير cistancheجانب فينيل الإيثانول (PHGs) و glabridin (GLA) ضد تصبغ الجلد ، تم فحص نسبة الكتلة من PHGs و GLA بواسطة تجربة تثبيط التيروزيناز في المختبر ، 1 ، 1- diphenyl -2- trinitrophenylhylhylhyly (DPPH) و 2 ، 2- diazo-bis (3- ethyl-benzothiazole -6- cation diammonium acation sulfonic (ABTS+) تم تأسيس تجارب الجذور الحرة وتجارب الميلانين. الفهارس.

الالالتهاباتتم إنشاء نموذج لخلايا HACAT الناجمة عن عديد السكاريد الدهني (LPS) ، وتم تقييم التأثير المضاد للالتهابات للدواء عن طريق تثبيط إطلاق Interleukin -6 (IL -6) وعامل نخر الورم- (TNF-). تم تأسيس نموذج الإجهاد التأكسدي لخلايا HACAT الناجم عن Azodiisobuamidine Hydrochloride (AAPH) ، وتم استخدام النشاط المعزز للديسموتاز الفائق أكسيد (SOD) والكاتالاز (CAT) كمؤشرات لتقييم تأثير مضادات الأكسدة للدواء. تم تحديد نسبة الكتلة المثلى من PHGs و GLA من قبل نماذج الخلايا الثلاثة أعلاه. أظهرت النتائج أن المحاليل المائية لـ PHGS/GLA (1∶1) ، PHGS/GLA (5∶1) ، و PHGS/GLA (10∶1) تم إعدادها مع M (phgs) ∶M (gla) =1 ∶1 ، 5∶1 ، 10∶1 inferation and synergistic activity antiptive and anioxidant. معدلات تثبيط phgs/gla (1∶1) ،
PHGS/GLA (5∶1) و PHGS/GLA (1 0 ∶1) كانت المحاليل المائية مع تركيز الكتلة 0.4 جم/لتر 94.37 ٪ ، 92.93 ٪ و 88.06 ٪ ، على التوالي. وكانت معدلات الكسح من الجذور الحرة DPPH 89.44 ٪ ، 88.72 ، ٪ و 88.10 ٪ ، على التوالي.
كانت معدلات الكسح من الجذور ABTS+ الحرة 1 0 0.13 ٪ ، 100.0،1 ٪ ، و 99.87 ٪ ، على التوالي. عندما كان تركيز الكتلة من PHGs/GLA 25 ميكروغرام/مل ، phgs/gla (1∶1) ، phgs/gla (5∶1) ، و phgs/gla (10∶1) لم تكن المحاليل المائية لا تسمم الخلايا لخلايا B16F10 و HaCat. كان تثبيط نشاط التيروزيناز في PHGS/GLA (1 ∶1) محلول مائي أقوى (نشاط التيروزيناز 23.80 ٪) ، وانخفض محتوى الميلانين (30.90 ٪) بشكل كبير. أظهر PHGS/GLA (1∶1) الحل المائي أفضل تأثير تثبيط على IL -6 وإطلاق TNF ، والقدرة على تعزيز نشاط SOD و CAT. أظهر مزيج من PHGs و GLA أداء تآزري جيد ، متفوقة على دواء واحد وأعلى من PHGS/ GLA (5∶1) وحل PHGS/ GLA (10∶1) المائي. لعب الجمع بين PHGs و GLA دورًا تآزريًا في تحسين تصبغ الجلد عن طريق تثبيط إنتاج الميلانين ، والآثار المضادة للالتهابات ومضادات الأكسدة.

 

الكلمات الرئيسية cistanche فينيل إيثانويد جليكوسيدات؛ glabridin الآثار التآزرية ؛ تصبغ مضاد للجلد. مكافحة الأكسدة مضاد التهاب؛ مواد المخدرات

 

 

 

Cistanche فينيل إيثانول جانب للتبييض

اتصل بنا الآن

خدمة داعمة لـ Wecistanche-أكبر مصدر Cistanche في الصين:
البريد الإلكتروني: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950

 

لمزيد من المعلومات حول الخصومات المحتملة ، يرجى عدم التردد في الاتصال بفريق خدمة العملاء لدينا. سيكونون سعداء بمساعدتك!

 

تصبغ الجلد هو مرض جلدي ناتج عن عوامل مثل الإصابة ، التهاب الجلد ، والإشعاع فوق البنفسجي [1-2]. قد تؤدي هذه العوامل إلى زيادة غير طبيعية في الميلانين ، والتي تسبب بدورها مشاكل مثل كلوسما ، النمش ، وفرط تصبغ ما بعد الالتهاب (PIH) [3-4] ، مما يؤثر على الحالة العقلية للناس وجودة الحياة. في الوقت الحاضر ، يركز علاج تصبغ الجلد بشكل أساسي على تثبيط التيروزيناز ، وهو إنزيم رئيسي في تكوين الميلانين [5-6].
يوضح أحدث بحث [7-8] أن تصبغ الجلد يعتمد على العلاقة الوثيقة بين الخلايا الكيراتينية والخلايا الميلانوسيتي في البشرة. بمجرد أن تتلامس الجذور الحرة والعوامل الالتهابية التي تصدرها الخلايا الكيراتينية مع الخلايا الصباغية ، فإنها ستؤدي إلى زيادة في نشاط التيروزيناز ، مما يؤدي إلى زيادة محتوى الميلانين. كما أنها ستسارع نقل الميلانين ويتسببون في إيداع الميلانين على سطح الجلد. لذلك ، يتطلب علاج تصبغ الجلد مجموعة متنوعة من التدابير مثل تثبيط إنتاج الميلانين ، ومضاد للالتهابات ، ومضادات الأكسدة.

في الوقت الحاضر ، على الرغم من أن الاستعدادات التقليدية للعقاقير ، مثل الهيدروكينون والهيدروكينون ، لها تأثيرات معينة في علاج تصبغ الجلد ، فإن أنماط عملها واحدة نسبيًا وقد تنتج ردود فعل سلبية [9-10]. بالمقارنة ، فإن الأدوية الطبيعية طبيعية وخفيفة في الواقع ويتم التعرف عليها بشكل متزايد ودعمها المستهلكين [11-12]. على وجه الخصوص ، لا يمكن أن يمنع مزيج من مستخلصات النبات المتعددة [13-14] فقط إنتاج الميلانين ولكن أيضًا له تأثيرات متعددة مثل التأثيرات المضادة للالتهابات ومضادات الأكسدة ، مما يوفر أفكارًا وطرقًا جديدة لعلاج تصبغ الجلد.
تتمتع Cistanche Deserticola MA بالقيمة الطبية الفريدة والمعروفة باسم "Ginseng الصحراوية". لقد وجدت الدراسات أن المكون المميز للفينيل إيثانويد جليكوسيد الموجود في cistanche له نشاط مضاد للأكسدة جيد [15] والآثار المضادة للالتهابات [16] ، وله أيضًا تأثير معين من التيروزيناز [17]. Glycyrrhizin هو مكون فلافونويد في Glycyrrhiza Glabra L. ، الذي له تأثير تبييض قوي ويعرف باسم "تبييض الذهب" [18]. عادةً ما يبدأ علاج الطب الصيني التقليدي لتصبغ الجلد في تقوية الطحال والكلى ، وإزالة الحرارة وإزالة السموم ، وتجديد Qi والدم [19].
يمكن للجليكوسيدات في فينيل إيثانول من ديستيرتيكولا cistanche تجديد الكلى يانغ والاستفادة من الجوهر والدم ، في حين أن جليسيرريزا غلابرا يمكنه تجديد الطحال و QI ، ومسح الحرارة بعيدًا ، وإزالة السموم. يمكن أن يعمل الاثنان معًا لمقاومة التصبغ. قد يقاوم مزيج من جليكوسيدات فينيل إيثانويد من ديستيرتيكولا cistanche و glabridin تصبغ الجلد من أبعاد وأهداف متعددة ، ويحمي من أشعة الأشعة فوق البنفسجية في النطاق بأكمله ، ويؤدي إلى تقليل النقل التآزري وتنقل الميلاناز وتنسيقه وتنسيقه. ومع ذلك ، هناك القليل من التقارير في الأدبيات حول تثبيط التآزر لتصبغ الجلد بواسطة جليكوسيدات فينيل إيثانويد من ديستيرتيكولا cistanche و glabridin.
تعتزم هذه الورقة استكشاف ما إذا كان هناك تأثير تآزري بين بفينيلي إيثانويدجليكوسيدات من ديستيرتيكولا سيستانش (PHGs) و glabridin (GLA) من خلال التجارب الكيميائية الحيوية المختبرية وإنشاء 3 نماذج من الخلايا ، ND الحصول على نسبة الكتلة المركب المثالية لتأثير مخطط. من المتوقع أن يوفر الدعم النظري والتوجيه العملي لتطوير منتجات العناية بالبشرة النباتية الطبيعية والمساعدة في تعزيز صناعة العناية بالبشرة للتطور في اتجاه أكثر طبيعية وصحية وفعالية.

 

 

حيث: التفاعل هو امتصاص محلول العينة ، حل L-tyrosine ، PBS ، ومحلول التيروزينز ؛ التحكم في التفاعل هو امتصاص محلول العينة ، ومحلول L-tyrosine ، ومحلول N و PBS ؛ الفراغ هو امتصاص محلول L-tyrosine ، ومحلول PBS ومحلول التيروزيناز ؛ التحكم الفارغ هو امتصاص حلول L-tyrosine و PBS.

'

1.3.2 تحديد قدرة الكسح الجذرية الحرة DPPH

أولاً ، قم بالوزن بدقة {0}}. 0 197 g ({7}}. Mmol/L. بعد ذلك ، تم تحضير PHGs و GLA في محلول الإيثانول PHGS ومحلول الإيثانول GLA مع تركيزات الكتلة من {15}}. بعد ذلك ، تم خلط محلول الإيثانول PHGS ومحلول الإيثانول GLA بالتساوي في M (phgs solution) ∶ m (gla solution)=40 ∶1 ، 20∶1 ، 10∶1 ، 5∶1 ، 1∶1 ، 1∶5 ، 1∶10 ، 1∶20 ، 1∶40 للحصول (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) حلول الإيثانول. أخيرًا ، أضف 100 ميكرولتر من حلول العينة المختلفة و 100 ميكرولتر من حل العمل DPPH إلى لوحة 96- جيدًا ، واخلطها جيدًا ، وابتعاد عن الضوء في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. قياس الامتصاص في 517 نانومتر مع علامة إنزيم. تم استخدام VC كعنصر تحكم إيجابي ، وتكرار كل تجربة 3 مرات. حساب معدل الكسح الجذري الحرة DPPH (٪) وفقا للصيغة (2).
DPPH Free Radical Scavenging Rate/٪=(1 −𝐴1−𝐴3𝐴2) × 100 (2) حيث: A1 هو امتصاص حل العينة + حل العمل DPPH ؛ A2 هو امتصاص 50 ٪ من الإيثانول بواسطة حجم العمل + DPPH. A3 هو امتصاص حل العينة + 50 ٪ الإيثانول حسب الحجم.

1.3.3 تحديد ABTS+ القدرة على الكسح الجذرية الحرة

أولاً ، تزن 1 غرام (1.82 مليمول) من ABTs وحلها في ماء منزوع الأيونات لإعداد محلول عمل ABTS مع تركيز نهائي قدره 7.4 مليمول/لتر ؛ وزن 0. امزج محلول عمل ABTS ومحلول عمل الكبريت البوتاسيوم في أحجام متساوية ، وتفاعل لمدة 12 ساعة في الظلام لإعداد محلول العمل ABTS+. ثم ، وفقًا للطريقة الواردة في القسم 1.3.2 ، قم بإعداد محلول الإيثانول PHGS ، ومحلول الإيثانول GLA ، ومحلول الإيثانول N و VC ، وكذلك PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) محلول الإيثانول.
أخيرًا ، أضف 40 ميكرولتر من حلول العينة المختلفة و 160 ميكرولتر من محلول ABTS+ العمل إلى لوحة 96- جيدًا ، تخلط جيدًا ، تتفاعل في درجة حرارة الغرفة في الظلام لمدة 6 دقائق ، وقياس امتصاص المحلول عند 734 نانومتر باستخدام قارئ ELISA. احسب معدل الكسح الجذري ABTS+ الحرة (٪) وفقًا للصيغة (3).

 

حيث: A1 هو امتصاص محلول العينة + ABTS + حل العمل ؛ A2 هو امتصاص الماء منزوع الأيونات + ABTS + محلول العمل ؛ A3 هو امتصاص محلول العينة + الماء منزوع الأيونات.

 

1.4 تجربة الخلية

1.4.1 ثقافة الخلية

بعد إحياء خلايا B16F10 و HACAT ، يتم تلقيحها في وسيط DMEM عالي الجلوكوز (يحتوي على خليط من 10 ٪ من مصل الأبقار الجنينية و 1 ٪ من البنسلين-الستربتومايسين من خلال جزء كبير) وزراعة في حاضنة في 37 درجة ، و 5 ٪ من الكلب من حجم ثاني أكسيد الكربون ، و 70 ٪ من الرطوبة لمدة 24 ساعة. لوحظ حالة نمو الخلية تحت المجهر ، ويتم استبدال الوسيلة أو الاستزراع عليها وفقًا لحالة نمو الخلية.

 

1.4.2 التجميع التجريبي

يتم تلقيح خلايا B16F10 و HACAT في مرحلة النمو اللوغاريتمي في ألواح 96- مع أرقام الخلايا المناسبة وزراعتها لمدة 24 ساعة للسماح للخلايا بالالتزام بالجدار. يتم تحضير حلول عينة من تركيزات الكتلة المختلفة باستخدام وسط ثقافة DMEM. المجموعة العادية ، المجموعة النموذجية ، مجموعة PHGs منخفضة الجرعة (125 ميكروغرام/مل) ، مجموعة PHGs متوسطة الجرعة (250 ميكروغرام/مل) ، مجموعة عالية الجرعة (500 ميكروغرام/مل) ، مجموعة GLA منخفضة الجرعة (25 ug/ml) ، مجموعة GLA متوسطة (12.5 ug/ml) ، GLA عالية الجرعة (25 ug/ml) ، و phgs ، phgs ، تم إعداد مجموعة PHGS/GLA (5∶1) ، و PHGS/GLA (10∶1) مجموعة متوسطة الثقافة.

في نموذج تصبغ B16F10 الناجم عن UVB ، تمت إضافة خلايا المجموعة النموذجية مع 30 ميكرولتر من PBS (ph {4}}. تمت معالجة المجموعة التجريبية مع 100 ميكرولتر من حلول عينة من تركيزات الكتلة المختلفة لمدة 1 ساعة ، ثم تمت إضافتها مع 30 ميكرولتر من PBS ووضع 3 سم تحت IVB Irradiator مباشرة لمدة 110 ثانية ؛ تستخدم المجموعة العادية دائمًا وسط ثقافة DMEM عالية الجلوكوز ؛ لم يتم تلقيح المجموعة الفارغة بالخلايا ، ولكن مع وجود كمية متساوية من الثقافة بدلاً من ذلك.

في نموذج التهاب خلية HACAT الناجم عن LPS ، تم تربيتها المجموعة النموذجية بمحلول PBS من LPS بتركيز 20 ميكروغرام/مل لمدة 24 ساعة ؛ تمت معالجة المجموعة التجريبية مع 100 ميكرولتر حلول عينة من تركيزات الكتلة المختلفة لمدة 24 ساعة ثم إضافتها مع محلول LPS 20 ميكروغرام/مل لمدة 24 ساعة ؛ تستخدم المجموعة العادية دائمًا وسيط DMEM عالي الجلوكوز ؛ لم يتم تلقيح المجموعة الفارغة بالخلايا ، ولكن مع وجود كمية متساوية من الثقافة.

في نموذج الإجهاد التأكسدي لخلايا HACAT الناجم عن AAPH ، تم تربيتها بمجموعة MODER مع محلول 100 مل (2.5 مليمول) بتركيز 25 مليمول/لتر لمدة 24 ساعة ؛ تمت معالجة المجموعة التجريبية مع 100 ميكرولتر حلول عينة من تركيزات الكتلة المختلفة لمدة 24 ساعة ثم إضافتها مع محلول AAPH بتركيز 25 ملم/لتر لمدة 24 ساعة ؛ تستخدم المجموعة العادية دائمًا وسيط DMEM عالي الجلوكوز ؛ لم يتم تلقيح المجموعة الفارغة بالخلايا ، ولكن مع وجود كمية متساوية من الثقافة.

تم إنشاء كل مجموعة مع 3 آبار متكررة وزراعتها في حاضنة في 37 درجة ، وكسر حجم ثاني أكسيد الكربون 5 ٪ ، والرطوبة 70 ٪.

1.4.3 اختبار السمية الخلوية

تم استخدام طريقة CCK8 لتحديد السمية الخلوية. تم هضم B16F1 0 وخلايا HACAT في مرحلة النمو اللوغاريتمي مع 0.25 ٪ التربسين لمدة 3 دقائق. بعد إنهاء الهضم ، تم تفجير وسيط الثقافة مرارًا وتكرارًا لإجراء تعليق خلية بكثافة 1 × 104 خلايا/مل. تم تلقيح الخلايا بالتساوي في لوحة بئر 96- ، 100 ميكرولتر لكل بئر ، وتم إضافة PBS إلى الآبار حول الخلايا. بعد الالتزام بالخلايا على الحائط ، تمت إضافة تركيزات كتلة مختلفة من محلول العينة ، و 3 آبار تكرار لكل مجموعة ، وزراعتها في حاضنة في 37 درجة ، و 5 ٪ من كسر حجم ثاني أكسيد الكربون ، و 70 ٪ من الرطوبة لمدة 24 و 48 و 72 ساعة ، ثم تم تجاهل المحلول. تمت إضافة جميع المجموعات مع 100 ميكرولتر من وسط الثقافة الكاملة التي تحتوي على جزء حجم CCK8 10 ٪ وحضنت لمدة 60 دقيقة. تم قياس امتصاص المحلول عند 450 نانومتر باستخدام قارئ ELISA. تم حساب صلاحية الخلية (٪) وفقا للصيغة (4).

 

 

حيث: المجموعة التجريبية هي امتصاص الآبار التي تحتوي على الخلايا ومحلول العينة تحت تشعيع UVB ؛ المجموعة العادية هي امتصاص الآبار التي تحتوي على الخلايا ومحلول العينة دون تشعيع UVB ؛ المجموعة الفارغة هي امتصاص الآبار التي تحتوي على وسط الثقافة ولكن لا توجد خلايا.

 

1.4.5 تحديد محتوى الميلانين

تم تحديد محتوى الميلانين بواسطة طريقة تحلل NAOH. بعد علاج الخلايا لمدة 72 ساعة وفقًا للطريقة الواردة في القسم 1.4.2 ، تم تجاهل طاف ، وتم غسله مرتين مع PBS ، وتم إضافة 100 ميكرولتر من محلول مائي NaOH الذي يحتوي على 10 ٪ DMSO بواسطة الحجم (تركيز Mol/L). بعد وضعه في فرن 90 درجة لمدة ساعة واحدة ، تم تحديد امتصاص المحلول عند 490 نانومتر بواسطة علامة إنزيم. تم تكرار التجربة 3 مرات. تم حساب محتوى الميلانين (٪) وفقا للصيغة (5).

 

1.5 تحديد محتوى عامل الالتهاب ومؤشر الإجهاد التأكسدي

بعد علاج الخلايا لمدة 48 ساعة وفقًا للطريقة الواردة في القسم 1.4.2 ، تم جمع خلايا HACAT في كل مجموعة باستخدام مكشطة الخلية ، وطردها المركزي ، وتم جمع طاف. تم تحديد محتوى IL -6 و TNF- وفقًا لتعليمات مجموعة ELISA.
بعد معالجة الخلايا لمدة 48 ساعة وفقًا للطريقة الواردة في القسم 1.4.2 ، تم جمع خلايا HACAT في كل مجموعة باستخدام مكشطة الخلية ، وكسرت الخلايا من خلال التجمد والذوبان المتكرر. تم الطرد المركزي للخلايا عند 12000 ص/دقيقة في 4 درجة لمدة 10 دقائق ، وتم جمع طاف. تم تحديد نشاط SOD ومحتوى CAT وفقًا لتعليمات مجموعة ELISA.

1.6 تحديد الفهرس المشترك
تم استخدام طريقة الفهرس المدمج (CI) [20] لتحديد ما إذا كان PHGs و GLA في نسب الكتلة المختلفة كان له تأثير تآزري في تثبيط نشاط التيروزيناز ومضادة الأكسدة. تم حساب مؤشر المركب وفقًا للصيغة (6):

Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 يشير إلى تأثير مضاد ، يشير CI =1 إلى تأثير إضافي ، و CI<1 indicates a synergistic effect.

 

1.7 تحليل البيانات

يتم التعبير عن جميع البيانات على أنها "متوسط ​​الحساب ± الانحراف المعياري (𝑥̅ ± 𝑠)". تم استخدام برنامج Graph Prism 9.5. 0 للتحليل الإحصائي. تم استخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه للمقارنة بين مجموعات متعددة. ص<0.05 was considered statistically significant.