طرق الكشف عن تداول Exosomal PD-L1

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

لا يزال هناك نقص في الأساليب المقبولة والسائدة للكشف عن الجسيمات الخارجية المنتشرة PD-L1. يمكن استخدام طرق الكشف عن الجسيمات الخارجية التقليدية مثل مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) وتحليل التدفق لاكتشاف PD-L1 في exosomes المتداولة ، وتعد ELISA حاليًا الطريقة الأكثر استخدامًا. يمكن لطريقة ELISA الكشف الكمي عن محتوى PD-L1 في exosomes المتداولة وهي سهلة التشغيل. يمكن استخدام قياس التدفق الخلوي للكشف الكمي عن الطفيليات الخارجية المتداولة PD-L1 في العينات الكبيرة ، ولكنها تتطلب معدات كشف عالية. من خلال البحث المتعمق حول exosomes ، يتم أيضًا إثراء وتطوير طرق الكشف عن البروتينات الخارجية والأحماض النووية ، وتم إدخال بعض الطرق الجديدة في مجال اكتشاف PD-L1 في exosomes المتداولة (الشكل).

الكشف عنتعميمخارجيPD-L1

1. رقمي PCR

نظرًا للكمية الصغيرة من الحمض النووي الموجودة في الإكسوسومات ، يصعب على طرق الكشف التقليدية الكشف بدقة عن عدد نسخ الجينات. تقنية PCR الرقمية هي طريقة للكشف عن الحمض النووي بحساسية عالية للغاية وتقدير مطلق. يمكن أن تصل حساسيتها إلى مستوى جزيء الحمض النووي الفردي ، لذلك لها مزايا في اكتشاف محتوى الحمض النووي للإكسوسومات. استخدم الباحثون تقنية PCR الرقمية لتحليل عدد نسخ PD-L1 mRNA كميًا بدقة في exosomes البلازما لمرضى سرطان الجلد وسرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة ، وكشفوا عن العلاقة بين رقم نسخة البلازما الخارجية PD-L1 mRNA والارتباط المضاد لـ PD1 بين آثار العلاج. أدى إدخال تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي إلى تحسين قدرة الكشف عن الطحالب الخارجية PD-L1 mRNA بشكل كبير ، وهو أمر ذو أهمية كبيرة لبحوث الجسم الخارجي PD-L1. ومع ذلك ، قد يكون هناك تناقضات بين محتوى exosomal PD-L1 mRNA والتعبير عن بروتين PD-L1. لذلك ، قد يكون لاكتشاف الحمض النووي الريبي PD-L1 mRNA وحده عيوبًا معينة ، والتي تحتاج إلى مزيد من البحث والتوضيح.

يستفيد قشر الصحراء المضاد للسرطان من خلاصة الكستانش

2. إليسا

ELISA هي طريقة تحليل مناعية تقليدية ، والتي غالبًا ما تستخدم للكشف عن البروتينات الجزيئية الصغيرة في البلازما أو وسط المزرعة. لديها حساسية عالية ويمكن تحليلها كميا. يمكن أيضًا استخدام ELISA للكشف عن بروتين PD-L1 الخارجي ويمكن أن يحقق الكشف الكمي عن مجموعات كبيرة من العينات. تم أيضًا تطبيق مجموعة الكشف عن البروتين PD-L1 استنادًا إلى مبدأ طريقة ELISA للكشف الكمي عن بروتين PD-L1 الخارجي للبلازما. Chen et al. قام ببناء نظام الكشف عن البروتين الخارجي PD-L1 على أساس مبدأ ELISA ، والذي تم استخدامه للكشف عن بروتين PD-L1 الخارجي المشتق من وسط استنبات الخلية أو البلازما. كان نطاق الكشف الخطي {{1 0}}. 2-12. 0 نانوغرام / مل. ELISA هي طريقة جيدة للكشف عن بروتين PD-L1 الخارجي ، والذي يسهل اكتشافه كميًا وله قابلية تكرار جيدة. ومع ذلك ، نظرًا لوجود بروتين PD-L1 الحر في البلازما ، فسوف يتداخل مع دقته. لذلك ، تكتشف هذه الطريقة الدورة الدموية. لا تزال حساسية وخصوصية بروتين PD-L1 الخارجي بحاجة إلى مزيد من الاستكشاف.

جذر Herba cistanche: مضاد للسرطان

3. طريقة تحليل التدفق

غالبًا ما يستخدم قياس التدفق الخلوي لكتابة وعد الخلايا أو الجسيمات البيولوجية الأخرى المعلقة في السائل ، لذلك تم إدخال هذه الطريقة أيضًا في الكشف عن الجسيمات الخارجية وعدها. ثيودوراكيس وآخرون. استخدم أولاً كروماتوجرافيا لفصل exosomes في بلازما مرضى سرطان الرأس والرقبة ثم استخدم تحليل التدفق لاكتشاف وحساب الإكسوسومات الإيجابية لـ PD-L 1-. تم التعبير عن تعبير البروتين PD-L1 على أنه كثافة مضان. أظهرت النتائج أن الطريقة لها قابلية استنساخ جيدة في الكشف عن بروتين PD-L1 الخارجي ، وتباينها داخل الفرد هو 7 بالمائة عند إجراء فحوصات متوازية متعددة على عينة مريض واحد. في الوقت نفسه ، من أجل التحقق من دقة الطريقة ، استخدم الباحثون تحليل التألق متحد البؤر كطريقة مرجعية للكشف عن بروتين PD-L1 الخارجي. تم اختبار ثلاث عينات على التوازي ، وتمت مقارنة النتائج ، ووجد أن نتائج قياس التدفق الخلوي وتحليل التألق متحد البؤر كانت متسقة للغاية ، مما يشير إلى أن قياس التدفق الخلوي كان طريقة دقيقة للتحليل الكمي للطرف الخارجي PD-L1. بالإضافة إلى ذلك ، LUX et al. اكتشف أيضًا بنجاح التعبير عن البروتينات الخارجية PD-L1 و c-Met في مصل مرضى سرطان البنكرياس عن طريق قياس التدفق الخلوي ، ولكن أداء طريقة الكشف يحتاج إلى مزيد من الدراسة. في الوقت الحاضر ، تم أيضًا إطلاق أجهزة تحليل التدفق المستخدمة خصيصًا لاكتشاف الجسيمات الخارجية ، مثل محلل تدفق النانو فائق الحساسية Apogee ، وهو أكثر ملاءمة لاكتشاف بروتينات الجسيمات الخارجية من أجهزة تحليل التدفق التقليدية.

فائدة مكمل مستخلص الكستانش توبولوسا: مضاد للأورام والسرطان

4. تكنولوجيا نثر رامان المحسنة السطح

تشتت رامان المعزز بالسطح (SERS) هي تقنية مطيافية لبصمات الأصابع شديدة الحساسية تستخدم على نطاق واسع في المجالات الطبية الحيوية. في الوقت الحاضر ، استخدم العلماء تقنية SERS للكشف عن بروتين PD-L1 الخارجي. استخدم الباحثون لأول مرة حبات مغناطيسية معدلة TiO 2- لامتصاص exosomes غير محدد في البلازما ، ثم استخدموا مجسات SERS المرتبطة بالأجسام المضادة PD-L1 لتعديل جزيئات الذهب النانوية ، ثم احتضان عينات الجسيمات الخارجية بجسيمات الذهب النانوية. إنه يشكل هيكلًا معقدًا للجسيمات النانوية المغناطيسية بالخرز الخارجي والذهبي ، ويستخدم أخيرًا مجالًا مغناطيسيًا لإثراء المعقد وفصله ، ثم وضعه على مطياف رامان متحد البؤر للكشف ، وذلك لتحقيق اكتشاف الإكسوسومات الإيجابية لـ PD-L1 . الكشف عن محتوى الجسم. تتميز هذه الطريقة بحساسية كشف عالية ، ويمكن أن يصل أدنى حد للكشف إلى 1 PD-L1 بالإضافة إلى بلازما exosome / ميكرولتر. بالإضافة إلى ذلك ، استخدم الباحثون هذه الطريقة للكشف عن مجموعة من العينات بتركيزات مختلفة. أظهرت النتائج أن شدة SERS كانت مرتبطة خطيًا بلوغاريتم تركيز عينات exosome ، مما يشير إلى أن طريقة الكشف تتمتع بثبات جيد ويمكن استخدامها مباشرة في البلازما. الكشف عن exosomes بدون خطوة عزل خارجي إضافي. في الوقت الحالي ، هناك عدد قليل من الدراسات حول التطبيق المباشر لتقنية SERS للكشف عن بروتين PD-L1 الخارجي ، ولكن تم إجراء البحث حول تطبيق تقنية SERS للكشف عن exosomes الأخرى ، والتي لها أيضًا مرجع مهم للكشف عن قيمة البروتين الخارجي PD-L1.

يعيش الصحراء حالة متنامية

5. طريقة HOLMES-ExoPD-L1

طريقة HOLMES-ExoPD-L1 هي طريقة جديدة للكشف عن بروتين PD-L1 الخارجي. في هذه الطريقة ، تم تصميم aptamer MJ5C جديد يستهدف بروتين PD-L1 ، والذي يمكنه ربط بروتين PD-L1 بكفاءة على الغشاء الخارجي ولا يتداخل مع بروتين PD-L1 بالجليكوزيل. في هذه الطريقة ، تم تحضين aptamer MJ5C و exosomes المسمى الفلورسنت لأول مرة في أنبوب شعري رفيع للارتباط ببعضهما البعض ، وتم تركيز ليزر الأشعة تحت الحمراء في الشعيرات الدموية الرقيقة لتشكيل تدرج درجة حرارة على نطاق ميكرون. كانت معدلات الرحلان الحراري لمجمعات أبتامير MJ5C الحرة ومجمعات أبتامير الخارجية MJ5C مختلفة بشكل كبير ، وكان استنفاد الأبتامر الحر أسرع من مركب exosome-aptamer. انفصلوا. لذلك ، تحت تأثير ضوء الإثارة ، يمكن تحديد محتوى البروتين الخارجي PD-L1 من خلال الكشف عن شدة التألق للأبتاميرات ذات العلامات الفلورية. تتميز الطريقة بحساسية عالية وحد اكتشاف يبلغ 17.6 بيكوغرام / مل. بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يتميز أيضًا بمزايا حجم عينة أقل ووقت اكتشاف قصير. إنها طريقة أصلية للغاية للكشف عن بروتين PD-L1 الخارجي ، وهو أمر مهم جدًا لتطوير بروتين جديد. طريقة الكشف عن البروتين الخارجي PD-L1 لها قيمة مفيدة.

مضاد للأورام: ملحق cistanche

يتمتع Exosomal PD-L1 بآفاق تطبيق واسعة في مجال العلاج المناعي للورم الخبيث وأصبح أحد النقاط الساخنة في مجال أبحاث الجسيمات الخارجية. مقارنةً باكتشاف تعبير PD-L1 للأنسجة ، يكون اكتشاف PD-L1 الخارجي المنتشر أسهل للحصول على العينات والقيام بالكشف في الوقت الفعلي ، مع تجنب مشكلة عدم تجانس الأنسجة الناجم عن أخذ العينات المرضية ؛ يؤدي الطرد الخارجي PD-L1 أيضًا إلى مناعة الورم. إنه سبب مهم للهروب ويرتبط بتطور الأورام الخبيثة ، وقد يصبح مؤشرًا مهمًا لتقييم المرض والتنبؤ به. بالإضافة إلى ذلك ، من المتوقع أيضًا استخدام مستويات PD-L1 الخارجية للبلازما لفحص المرضى المناسبين للعلاج المناعي المضاد لـ PD-L1 والتنبؤ باستجابتهم للعلاج. ومع ذلك ، لا يزال هناك نقص في الأساليب المعترف بها والفعالة لاكتشاف exosomes المنتشرة PD-L1. من الضروري إنشاء جسيم خارجي متداول مثالي مع فصل بسيط أو بدون فصل ، وطلب أقل للعينة ، وحساسية عالية ، وتكرار جيد ، وإشارات اكتشاف أقل حساسية. طريقة للكشف عن PD-L1 في الجسم الحي. لا تزال طريقة الكشف عن تعميم PD-L1 الخارجي في حاجة إلى مزيد من البحث المتعمق ، ولكن يُعتقد أنه مع تطوير وتطبيق طرق الكشف الجديدة في المستقبل ، فإن تعميم PD-L1 سيكون قادرًا على توجيه العلاج المناعي المضاد لـ PD1 بشكل أفضل وتستخدم في تشخيص وعلاج الأورام الخبيثة. تلعب دورًا أكثر أهمية.