فعالية وسلامة البينوسيمبرين في نموذج الأغنام للتليف الرئوي الناجم عن البليوميسين

اتصال:tina.xiang@wecistanche.com

الملخص

الابتدائيالفلافونويد، بينوسيمبرين ، له العديد من الاستخدامات الطبية التي تتعلق بمضادات الأكسدة التي تم الإبلاغ عنها ،مضاد التهاب، خصائص مضادة للميكروبات ومضادة للسرطان. أفادت بعض الدراسات أن هذا الفلافونويد له أنشطة مضادة للليف. في هذه الدراسة ، قمنا بالتحقق مما إذا كان البينوسيمبرين يعيق التليف ، ويخفف الالتهاب ويحسنرئةتعمل في نموذج حيواني كبير من التليف الرئوي. تم تحريض التليف في جزأين موضعيين من الرئة في كل من الأغنام العشرة المشاركة في الدراسة. تم تحقيق ذلك عن طريق دفعتين من البليوميسين يتم تسليمهما بالمنظار القصبي في فترة أسبوعين. تم ترك جزء آخر من الرئة في نفس الأغنام دون علاج وتم استخدامه كعنصر تحكم صحي. تم الاحتفاظ بالحيوانات لمدة تزيد قليلاً عن 5 أسابيع بعد التسريب النهائي للبليوميسين. تم إعطاء Pino-cembrin ، المعزول من أوراق الأوكالبتوس ، إلى أحد مقطعي الرئة التالفين من البليوميسين بجرعة 7 ملغ. تم إعطاء هذه الجرعة مرة واحدة في الأسبوع على مدار 4- أسبوع ، بدءًا من أسبوع واحد بعد ضخ البليوميسين النهائي. تم تحسين توافق الرئة (كمقياس للصلابة) بشكل كبير بعد أربع إدارات أسبوعية من البينوسيمبرين إلى شرائح الرئة المتضررة من البليوميسين. كان هناك عدد أقل بكثير من العدلات والخلايا الالتهابية في غسل القصبات الهوائية لأجزاء الرئة المليئة بالبليوميسين والتي تم علاجها باستخدام البينوسيمبرين. مقارنة بأجزاء الرئة المتضررة من البليوميسين دون علاج دوائي ، ارتبط إعطاء البينوسيمبرين بأعداد أقل بشكل ملحوظ من CD8t إيجابي المناعة وخلايا CD4 بالإضافة إلى T في حمة الرئة. أظهرت بيانات قياس الأنسجة المرضية أن علاج البينوسيمبرين كان مرتبطًا بتحسن كبير في الالتهاب ودرجات علم الأمراض بشكل عام. أظهر تحليل هيدروكسي برولين أن إعطاء البينوسيمبرين لم يقلل من زيادة محتوى الكولاجين الناتج عن البليوميسين في هذا النموذج. أظهرت تحليلات المقاطع المصبوغة من Masson Trichrome أن علاج البينوسيمبرين قلل بشكل كبير من محتوى النسيج الضام في أجزاء الرئة المعرضة للبليوميسين عند مقارنتها بالرئتين المصبوبة بالبليوميسين والتي لم تستقبل البينوسيمبرين. من المحتمل أن تكون تأثيرات إعادة النمذجة المضادة للالتهابات والمتواضعة المضادة للليف لإعطاء البينوسيمبرين مرتبطة بقدرة المركب على تحسين أمراض الرئة والامتثال الوظيفي في هذا النموذج الحيواني من التليف الرئوي.

انقر لمعرفة المزيد من المعلومات

مقدمة

الابتدائيالفلافونويد، pinocembrin ، تم التعرف عليه وعزله من عدد من الأنواع النباتية. يُعتقد أن هذا الجزيء النشط بيولوجيًا له مجموعة متنوعة من الاستخدامات الطبية التي تتعلق بمضادات الأكسدة المُبلغ عنها ،مضاد التهابوخصائص مضادة للميكروبات ومضادة للسرطان [1-7]. الأهم من ذلك ، لقد ثبت أن بينوسيمبرين له خصائص مضادة للليف في عدد من النماذج الحيوانية المختلفة للأمراض. على سبيل المثال ، يخفض بينوسيمبرين التليف البطيني [8] في نموذج الفئران للاكتئاب ويخفض التليف الأذيني في نموذج الفئران لاحتشاء عضلة القلب [9]. وبالمثل ، في نموذج الفئران التجريبي لتليف الكبد الناجم عن الكلوروفورم ، قلل تناول البينوسيمبرين عن طريق الفم من الكولاجين و alpha-SMA (يستخدم كعلامة لتمايز الأرومة الليفية العضلية) ، كمقاييس للتليف [10]. أظهرت دراسة حديثة

يخفف Pinocembrin من تليف الجلد الناجم عن البليوميسين في الفئران ويمنع تكاثر الخلايا الليفية الجدرة والأرومات الليفية الجلدية الأولية للفأر في المختبر ، والهجرة ، والغزو [11]. تسبب Pinocembrin في إحداث هذه التأثيرات المضادة للليف عن طريق تقليل تنظيم مسارات إشارات NF-x و TGF - 1 / Smad [10،11].

نظرًا للتأثيرات المضادة للليفية المعروفة لبينوسيمبرين ، فقد هدفنا إلى التأكد مما إذا كان البينوسيمبرين سيعيق التليف ويحسنوظيفة الرئةفي نموذج حيواني كبير من التليف الرئوي. تم تطوير النموذج ذي الصلة من الناحية الفسيولوجية والدوائية للتليف الرئوي كوسيلة للتحقيق في آلية (آليات) المرض الكامنة للحالة البشرية للتليف الرئوي مجهول السبب (IPF) [12 ، 13]. كما أنه كان مفيدًا في اختبار علاجات جديدة ضد التليف الرئوي [14-16].

التليف الرئوي مجهول السبب (IPF) هو مرض رئوي مزمن مدمر يتميز بتندب الرئة التدريجي بسبب التراكم المفرط للمصفوفة خارج الخلية (ECM) في حمة الرئة [17]. إن تشخيص مرض التليف الرئوي المزمن ضعيف للغاية مع 3-5 سنوات فقط من متوسط ​​بقاء المرضى بعد التشخيص [18]. تقتصر العلاجات الدوائية المتاحة حاليًا على Pirfenidone و Nintedanib ، وهما عقاقير ثبت أنها تبطئ فقط من تقدم المرض ، دون إيقافه. بالإضافة إلى ذلك ، هناك آثار جانبية ضارة كبيرة مرتبطة بهذين العقارين. لذلك ، هناك حاجة غير ملباة لعلاجات فعالة جديدة لهذه الحالة.

كان الهدف من هذه الدراسة هو تقييم الفعالية العلاجية وسلامة البينوسيمبرين في نموذج الأغنام للتليف الرئوي الناجم عن البليوميسين والذي تم تطويره في مختبرنا (12). على وجه التحديد ، تم إجراء دراسة للتأكد مما إذا كان إعطاء الرئة الموضعي للبينوسيمبرين يخفف بشكل كبير من التليف والالتهاب والتشريح المرضي في قطاعات معينة من الرئة بعد تحريض التليف باستخدام البليوميسين. الأهم من ذلك ، قررنا ما إذا كانت الإدارة المحلية للبينوسيمبرين قد حسنت بشكل كبير الوظيفة الفسيولوجية لقطاعات معينة من الرئة مع التليف الناجم عن البليوميسين.

المواد والأساليب

تحريض التليف في قطاعات رئة الأغنام

في هذه الدراسة ، استخدمنا ما مجموعه 10 أغنام. لقد تسببنا في التليف في جزأين من الرئة لكل خروف بطريقة مماثلة لدراساتنا السابقة [12 ، 13]. باستخدام هذا الإجراء المعمول به (انظر التفاصيل أدناه) اقتصر التليف على مناطق صغيرة ومعزولة في الرئتين تاركًا النسبة المتبقية 90-95 في المائة من الرئتين السليمة غير المصابة للقيام بوظيفة الجهاز التنفسي الطبيعية.

تم تحدي جميع الأغنام في الدراسة بجرعتين منفردتين من البليوميسين (3 وحدات) لكل جزء من الرئة ، بفاصل أسبوعين وتم الاحتفاظ بالحيوانات لمدة تزيد قليلاً عن 5 أسابيع بعد جرعة البليوميسين النهائية. في الرئة اليمنى واليسرى ، ثم نقع البليوميسين ببطء عبر منفذ خزعة منظار القصبات ، إلى جزأين كما هو موضح في الشكل 1.

تم تفصيل توقيت حقن البليوميسين ، وأخذ عينات الدم ، وأخذ عينات غسل القصبات الهوائية ، واختبار وظائف الرئة وتطبيق البينوسيمبرين في Eig2. تمت الموافقة على جميع إجراءات الحيوانات التجريبية من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة ملبورن (رقم تعريف موافقة أخلاقيات الحيوان: 2015209.1). تم تصميم هذه الإجراءات التجريبية والجداول الزمنية المرتبطة بعمل الحيوان لتخفيف وتقليل معاناة الأغنام المستخدمة في الدراسة. على وجه الخصوص ، تم تقليل عدد إجراءات تنظير القصبات إلى الحد الأدنى الذي من شأنه أن يسمح بالتفسير الناجح للبيانات.

العزل والتأكيد الهيكلي لـ pinocembrin

تمت تنقية Pinocembrin من مستخلصات الميثانول من الأوراق التي تم جمعها من Eucalyptus pressiana subsp البالغ من العمر ثلاث سنوات. تمت زراعة شتلات بريسيانا في قطعة أرض تجريبية في حرم جامعة ملبورن دوكي (36 درجة 23'3 "S ، 145 درجة 42'52" E). تم جمع البذور المشتراة من Nindethana Seed Company (King River ، أستراليا) من Woodellup ، غرب أستراليا ، وتم تربية الشتلات وزرعها في قطعة الأرض كما هو موضح في [19]. تم تجفيف الأوراق التي تم أخذ عينات منها في فرن عند درجة 5 {{4 0} لمدة 48 ساعة قبل طحنها إلى مسحوق ناعم باستخدام مطحنة IKA MF10 المزودة بشبكة lmm. تم وضع الأنسجة الأرضية (100 جم) في كشتبانات السليلوز Kinesis XK (Antylia Scientific ، شيكاغو ، الولايات المتحدة الأمريكية) وتعرضت لاستخراج Soxhlet بنسبة 100 بالمائة MeOH (200 مل) لمدة 8 ساعات. تم بعد ذلك تركيز مستخلصات MeOH إلى حوالي 50 مل باستخدام التبخر الدوراني. تعرضت قسامات من المستخلصات المركزة (2 مل) لكروماتوجرافيا الفلاش على نظام Revelers X2 (Buchi AG ، Flawil ، سويسرا) المزود بخرطوشة FlashPure C18 RP-WP 12g (Buchi). كان نظام المذيبات المستخدم عبارة عن تدرج للأسيتونيتريل (MeCN) والماء من 30-100 بالمائة MeCN على مدى 5 دقائق مع زمن موازنة 1 دقيقة (S1 الشكل). تم اكتشاف الجزء المحتوي على pinocembrin عند 283 نانومتر وتم جمعه. تم تجميع الكسور من عدة دورات فلاش ، وإزالة MeCN عن طريق التبخر الدوراني ، وتجفيف pinocembrin باستخدام التجفيد. تم تأكيد بنية البينوسيمبرين عن طريق التحليل الطيفي ESI-LCMS والرنين المغناطيسي النووي كما هو موصوف في [19] بالمقارنة مع معيار تجاري (Sigma-Aldrich ، سانت لويس ، الولايات المتحدة الأمريكية). Pinocembrin: بلورات صفراء شاحبة من MeCN / H ، O.UVλmax MeCN （nm） ∶ band-I325 nm ، band-II289 nm. 'H NMR （600 ميجا هرتز، CDCl） ∶δ5.36 （1H، dd، J13.0،3.0 هرتز، H -2）، δ2.76 （1H، dd، J17.1،3.1 هرتز، H { {51}} a）، δ3.02 （1H، dd، J17.1،13.1 Hz، H -3 b）، δ5.92 （1H، d، 2.2Hz، H -6） ، δ5.94 （1H، d، 2.2Hz، H -8）. ESI-MS （fragmentor 150V، Skimmer 65V) m / z (rel.int. percent): 255.0673 ([MH]، 100)، 213.0565 ([M -42- H] ، 19) ، 151.0037 ([M -104- H] ، 16) ، 257.0811 ([M plus H] ، 100) ، 153.0167 ([M -104 زائد H] ، 2) تم قياس كمية النقاء المعتمد على الكتلة لـ pinocembrin المعزول بحد أدنى 96 بالمائة باستخدام HPLC-PDA مقارنةً بالمعيار التجاري (S2A و S2B الشكل).

إعطاء بينوسيمبرين لقطاعات رئة الأغنام

لكل أسبوع من نظام الجرعات ، تم ضخ 7 ملغ من البينوسيمبرين في قطعة رئة ذيلية واحدة في كل خروف يخضع للتجربة (الشكل 1). استند وزن جرعة البينوسيمبرين إلى دراسة منشورة سابقًا والتي أظهرت أن 50 ملغ من البينوسيمبرين لكل كيلوغرام من وزن الجسم كانت الجرعة الأكثر فعالية لتخفيف أعراض المرض في هذا النموذج الحيواني [20]. سمحت جرعة 7 مجم بينوسيمبرين بحقيقة أن ما يقرب من 150 جم فقط من قطعة الرئة لكل خروف تم علاجها عند حوالي 50 مجم / كجم. تم إذابة المادة النشطة بيولوجيًا في 10 في المائة من DMSO ، وتم إعطاؤها مرة واحدة أسبوعياً على مدى أربعة أسابيع ، كما هو موضح في الشكل 2. لأغراض التحكم ، تم استخدام جزء الرئة في الرئة المقابلة كعامل تحكم إيجابي البليوميسين ، بدون دواء ، ، كما هو مبين في الشكل 1. تم تسليم الجزيئات النشطة بيولوجيًا في السيارة على شكل دفعات 5 مل من خلال منفذ الخزعة في منظار القصبات. لاحظ أنه لإلغاء أي اختلافات صغيرة (على سبيل المثال ، فسيولوجية أو تشريحية ، وما إلى ذلك) بين الرئتين اليمنى واليسرى ، تم اختيار دفعات بينوسيمبرين بشكل عشوائي بين مقاطع الرئة الذيلية اليمنى واليسرى. تلقت نصف الحيوانات (ن =5 من الأغنام) بينوسيمبرين إلى قطاعات الرئة الذيلية اليمنى ، بينما تلقت الأخرى (ن =5 من الأغنام) بينوسيمبرين إلى قطاعات الرئة الذيلية اليسرى. تم ترك جزء الرئة الإنسي الأيمن دون علاج واستخدامه لأنسجة التحكم في الرئة الصحية والتي تم أخذ عينات منها عند تشريح الجثة (الشكل 1).

إجراءات أخذ عينات غسل القصبات الهوائية

لكل من عينات القصبات الهوائية (BAL) في النقاط الزمنية المدرجة في الشكل 2 ، تم التلاعب بالنطاق الداخلي في جزء معين من الرئة لأخذ العينات ، وعادة ما يمر عبر حوالي 3 إلى 4 فروع مجرى الهواء. لأخذ عينات BAL ، تم ضخ 10 مل من المحلول الملحي المعقم من خلال منفذ الخزعة بالمنظار في جزء الرئة المحدد ثم استعادته في حقنة عبر نفس المنفذ. تمت استعادة هذا الإجراء بين 3 و 5 مل من سائل BAL. جمعت طريقة أخذ العينات الخلايا لتحليلها من مجرى الهواء الصغير واللومن السنخي لجزء معين من الرئة حيث تم التنقل إلى منظار القصبات. تم طرد خلايا BAL من كل قطعة على شرائح زجاجية وملطخة بالعد التفاضلي للخلايا الالتهابية باستخدام Hem-Quik ، كما هو موضح سابقًا [13].

اختبارات وظائف الرئة والتحليلات

تم قياس وظيفة الرئة في مقاطع الرئة الموصوفة في النقاط الزمنية الموضحة في الشكل 2. تم تقييم وظيفة الرئة في جميع قطاعات اختبار الرئة (الفصوص الذيلية اليمنى واليسرى ، والفص الإنسي في كل خروف). تم قياس القدرة الوظيفية لأجزاء الرئة من خلال المنظار الداخلي باستخدام إجراء منشور [12 ، 13]. تمت الإشارة إلى معلمة وظائف الرئة التي تم تقييمها في هذه الدراسة بالامتثال في جزء الرئة (والمختصر إلى Cseg). بشكل عام ، الامتثال هو مقياس لمدى سهولة تضخيم الرئة. يشار إلى الرئة غير المتوافقة على أنها رئة متيبسة ، وعادة ما يكون من الصعب تضخيمها.

أخذ عينات الدم

تم جمع الدم الكامل في الأساس قبل تحريض التليف وفي نهاية التجربة قبل القتل الرحيم لحيوانات التجارب كما هو موضح في الشكل 2 عن طريق سحب الدم من الوريد الوداجي إلى أنبوب يحتوي على الهيبارين. تمت معالجة الدم لتحليل عدد خلايا الدم.

عزل وتحليل أنسجة الرئة

تم قتل الأغنام الرحيم لما يزيد قليلاً عن 5 أسابيع بعد آخر جرعة من البليوميسين (أوائل الأسبوع 12) ، كما هو موضح في الشكل 2. تم إحداث القتل الرحيم عن طريق جرعة زائدة من مادة الباربيتورات التي تم إعطاؤها عن طريق الوريد بمعدل مل لكل 2 كجم من وزن الجسم على النحو الموصى به من قبل الشركة المصنعة (Lethabarb، Virbac Animal Health Pty Ltd. تم بعد ذلك نفخ الأجزاء الفردية بمزيج 1: 1 من OCT (درجة حرارة القطع المثلى ، Tissue-Tek) ومحلول PBS معقم ، تحت ضغط حوالي 20 سم / ساعة ، O [13]. تم تثبيت الجزء المتضخم في فورمالين محايد بنسبة 10 في المائة ومعالجته في البارافين للتقييم المرضي للنسيج.تم دمج شرائح الرئة المتبقية في OCT وتم تجميدها في قوالب مبردة على قوارب من الألومنيوم تطفو على النيتروجين السائل.

كانت أقسام الأنسجة المضمنة بالبارافين （5 ميكرومتر ملطخة بالهيماتوكسيلين ويوزين Y (H&E) للأنسجة العامة وبتلطيخ ماسون ثلاثي الألوان لتحديد التغييرات في محتوى الكولاجين داخل حمة الرئة.

المناعية

تم إجراء التوطين المناعي للخلايا الليمفاوية CD4 * و CD8 T على المقاطع المجمدة. تم إصلاح أقسام أنسجة الرئة （5 ميكرومتر） بالإيثانول المثلج ؛ تم حظر البيروكسيدات الداخلية باستخدام محلول H ، O ، ثم تم تحضين المقاطع بالأجسام المضادة الأولية (الماوس أحادي النسيلة المضاد لـ CD4 (أنيق) والفأر أحادي النسيلة المضاد لـ CD8 (أنيق)) في غرفة رطبة لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة. بعد الحضانة بالأجسام المضادة الأولية ،

تم بعد ذلك غسل المقاطع باستخدام برنامج تلفزيوني ثلاث مرات واحتضانها بجسم مضاد ثانوي (مضاد الأرانب IgG (HRP) (ab6728)) (1: 100 ؛ Abcam ، ملبورن ، أستراليا) لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. للتحقق من الخصوصية ، تم تضمين عناصر التحكم في النمط المتماثل أثناء IHCrun باستخدام جسم مضاد لـ SBU -3 من نفس النمط المتماثل. كانت المقاطع ملطخة بمحلول ماير الهيماتوكسيلين لمدة 20 ثانية. تم تصور مجمع الأجسام المضادة للمستضد باستخدام 3،3'-ديامينوبنزيدين. أخيرًا ، تم تجفيف المقاطع من خلال الإيثانول ، وتنظيفها في زيلين ، وتركيبها في DPX.

سجل التشريح المرضي

تم تقييم التشريح المرضي لحمة الرئة باستخدام نظام التسجيل شبه الكمي كما هو موضح سابقًا [12 ، 13]. باختصار ، تم تعمية جميع شرائح الأنسجة بحيث لا يعرف المقيم مجموعات العلاج. لكل قسم ملطخ بـ H & E ، تم تصنيف 10 حقول متتالية غير متداخلة عند تكبير x200 بناءً على معايير تسجيل التليف والالتهاب ودرجات علم الأمراض الكلية كما تم الإبلاغ سابقًا [12 ، 13]. تم اختيار المناطق بعيدًا عن المسالك الهوائية الكبيرة والأوعية الدموية الرئيسية. ثم تم حساب متوسط ​​الدرجات من جميع المجالات العشرة لإعطاء درجات تمثيلية للمعلمات التي تم تقييمها في قطاع الرئة المقطوع.

تم استخدام تحليل تركيز بروتين الكولاجين باستخدام مقايسة الهيدروكسي برولين لاستقراء محتوى الكولاجين وتركيز كل جزء ، كما هو موضح سابقًا (4،5). باختصار ، تم تجميد أنسجة الرئة المجمدة من كل جزء بالتجميد إلى الوزن الجاف ، وتم تحللها في 6 مولار من حمض الهيدروكلوريك ، وتم تقييمها من أجل احتواء الهيدروكسي برولين عن طريق قياس امتصاص العينات المعاد تكوينها (في 0. 1 مليون حمض الهيدروكلوريك) عند 558 نانومتر باستخدام بيكمان مقياس الطيف الضوئي DU -64 (Beckman Coulter Inc ، Brea ، CA). تم تحديد محتوى Hydroxyproline من منحنى قياسي لـ trans-L-hydroxy-L-proline (Sigma-Aldrich). تم استقراء محتوى الكولاجين بضرب قياسات الهيدروكسي برولين في 6.94 (بناءً على الهيدروكسي برولين يمثل 14.4 بالمائة من تركيبة الأحماض الأمينية للكولاجين في معظم الأنسجة [21]) ثم يعبر عنه كنسبة من نسيج الوزن الجاف لإنتاج تركيز الكولاجين (والذي كنسبة مئوية).

تم تحديد كمية تحليل محتوى النسيج الضام لتقييم درجة التليف من خلال تقييم التغيرات في خيم النسيج الضام الكلي داخل النسيج المتني باستخدام طريقة موصوفة مسبقًا [13]. لإجراء هذا التحليل ، تم تلوين أجزاء البارافين من أنسجة رئة الأغنام باستخدام صبغة ماسون ثلاثية الألوان التي تلطخ النسيج الضام باللون الأزرق. بعد ذلك ، تم التقاط صور لقسم الرئة الملون بثلاث ألوان من Masson باستخدام كاميرا رقمية مرتبطة بالمجهر والكمبيوتر. تم التقاط عشرة حقول بشكل عشوائي تحت التكبير x400 باستثناء الأوعية الدموية الكبيرة والشعب الهوائية. تم تحليل الصور بعد ذلك باستخدام Image-Pro Plus (الإصدار 6.3 لنظام التشغيل Windows ، Media Cybernetics ، Bethesda ، ماريلاند ، الولايات المتحدة الأمريكية) باستخدام أداة تحديد الألوان لقياس مساحة الأنسجة المصبوغة باللون الأزرق (الكولاجين والأنسجة الضامة الأخرى) داخل كل حقل. للعرض. ثم تم حساب متوسط ​​قيم كل صورة من الصور العشر لكل شريحة. تم التعبير عن جزء مساحة الأنسجة الملطخة باللون الأزرق كنسبة مئوية لكل مساحة حقل كلية (النسبة المئوية لمساحة الأنسجة المصبوغة باللون الأزرق لكل مساحة حقل كلية). تم إجراء التقاط الصور وتحليلها بطريقة أعمى على الشرائح المشفرة.

تحليل احصائي

تم إجراء التحليل الإحصائي باستخدام GraphPad Prism for Windows الإصدار 5.01 (Graph-Pad Software Inc. ، لا جولا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة). تم تقييم المعلمات ل Gaussian

التوزيع باستخدام اختبار الوضع الطبيعي D'Agostino واختبار Pearson الشامل. بالنسبة للبيانات البارامترية ، تم إجراء اختبارات t ثنائية الذيل للمقارنة بين شرائح الرئة المستلمة بلوميسين فقط مع شرائح التحكم المملحة بالمحلول الملحي وقطاعات الرئة التي تلقت البليوميسين بالإضافة إلى ضخ البينوسيمبرين. بالنسبة للبيانات التي لا تفي بالافتراضات الخاصة بالتوزيع الغاوسي ، تم استخدام اختبار تصنيف موقع ويلكوكسون للأزواج المتطابقة. في جميع الحالات ، تم تعريف القيمة الاحتمالية الأقل من 0. 05 على أنها اختلاف كبير. يتم الإبلاغ عن جميع القيم كوسائل (± SEM).

نتائج

صحة الحيوان وسلامة إدارة بينوسيمبرين

تم إجراء الفحوصات الصحية بشكل روتيني طوال فترات العلاج والمحاكمة حتى القتل الرحيم. كان هذا للتأكد من أن علاج البينوسيمبرين لم يسبب مشاكل صحية غير مرغوب فيها ، أو آثار جانبية ضارة للأغنام التي تخضع للتجربة. ظلت جميع الحيوانات بصحة جيدة طوال فترة العلاج بينوسيمبرين (الأسبوع 8 إلى الأسبوع 12 ، الشكل 2). خلال هذه الفترة ، استمرت الحيوانات في اكتساب الوزن في المعدل الطبيعي المتوقع لهذه الأغنام ، وكان تعداد خلايا الدم البيضاء طبيعيًا ، ولم تكن هناك أي أحداث صحية سلبية.

تحسن إدارة بينوسيمبرين من تدهور وظائف الرئة المرتبط بتطور التليف الرئوي الناجم عن البليوميسين

يوضح الشكل 3 وظيفة الرئة لأجزاء الرئة المختلفة بعد علاجات مرة واحدة في الأسبوع باستخدام البينوكيمبرين لمدة أربعة أسابيع. كانت معلمة وظيفة الرئة المقاسة هي الامتثال في قطاعات الرئة المحلية ويشار إليها بالامتثال القطاعي (Cseg). بشكل عام ، تعني المستويات المنخفضة من الامتثال وظيفة أضعف في قطاع الرئة (أي يصعب النفخ والرئة أكثر صلابة). كما هو متوقع ، كان لقطاعات الرئة التي تلقت العامل الضار البليوميسين وحده ، بدون البينوسيمبرين ، امتثالًا قطعيًا متوسطًا أقل بكثير من شرائح الرئة السليمة غير المعالجة (الشكل 3 أ). قطاعات الرئة ، التي تلقت العامل الضار بليوميسين مع إعطاء البينوكيمبرين ، كان لديها امتثال قطعي متوسط ​​أعلى ، والذي لم يكن مختلفًا بشكل كبير عن قطاعات الرئة الصحية غير المعالجة (الشكل 3 أ). تم استخدام تقييم آخر لوظيفة الرئة هو النسبة المئوية للتغير في الامتثال من خط الأساس (Eig 3C). قام هذا بقياس التغيير في الامتثال من بداية الدراسة (قبل علاجات البليوميسين والبينوسيمبرين) إلى بعد الانتهاء من علاج البينوسيمبرين النهائي. أظهر التقييم أن الامتثال في قطاعات الرئة المعالجة بالـ Pinocembrin قد تحسن بشكل ملحوظ بعد الإدارة مرة واحدة أسبوعيا لـ pinocembrin خلال فترة العلاج 4- (الشكل 3C).

يقلل تناول البينوسيمبرين من تراكم الخلايا الالتهابية التي يسببها البليوميسين في سائل BAL

يوضح الشكل 4 بيانات خلايا BAL بعد علاجات التسريب مرة واحدة أسبوعيًا باستخدام pinocembrin على مدار فترة علاج تبلغ 4- أسبوعًا. تم أخذ عينات من خلايا BAL من أجزاء الرئة خلال الأسبوع 12 من التجربة ، قبل يومين من إعدام الأغنام. كانت أعداد الخلايا التي تم تقييمها في سائل BAL عبارة عن العدلات وحدها ، ومجموع الخلايا الالتهابية الرئيسية ، والتي تضمنت العدلات ، والحمضات ، والخلايا الليمفاوية. كما هو متوقع ، كانت أجزاء الرئة السليمة التي لم يتم علاجها تحتوي على أعداد منخفضة نسبيًا من الخلايا الالتهابية في سائل BAL (الشكل 4).

على النقيض من ذلك ، فإن قطاعات الرئة المصابة بالبليوميسين ، بدون البينوسيمبرين ، تحتوي على أعداد كبيرة بشكل ملحوظ من العدلات والخلايا الالتهابية الأخرى في سائل BAL مقارنة بأجزاء التحكم الصحية (Eig 4). أظهرت أجزاء الرئة التي تلقت العامل الضار بليوميسين ، والتي خضعت لعلاج بينوسيمبرين ، أعدادًا أقل بكثير من العدلات والخلايا الالتهابية عند مقارنتها بأرقام الخلايا المأخوذة من شرائح الرئة ، والتي تلقت البليوميسين بمفرده بدون البينوسيمبرين (الشكل 4).

تأثير بينوسيمبرين على الخلايا التائية متني الرئة

يوضح الشكل 5 بيانات الخلايا التائية بعد أربع علاجات بالتسريب مع البينوسيمبرين ، يتم إعطاؤها مرة واحدة أسبوعياً. تم تقييم الخلايا في حمة قطاعات الرئة المعالجة تفاضليًا ، والتي تم أخذ عينات منها بعد الوفاة (الأسبوع 12). كما هو متوقع ، كانت أجزاء الرئة السليمة ، والتي لم يتم علاجها ، تحتوي على أعداد منخفضة نسبيًا من خلايا CD8t و CD4 * T في حمة الرئة (الشكل 5).

في المقابل ، كانت قطاعات الرئة المصابة بالبليوميسين ، بدون علاج البينوسيمبرين ، تحتوي على أعداد أكبر بكثير من خلايا CD8 و CD4 * T في حمة الرئة مقارنةً بشرائح التحكم الصحية (Eig 5). أظهرت قطاعات الرئة التي تلقت العامل الضار بليوميسين ، والتي خضعت لعلاجات البينوكيمبرين ، أعدادًا أقل بكثير من CD8t و CD4 بالإضافة إلى الخلايا التائية في حمة الرئة مقارنة بأرقام الخلايا المأخوذة من قطاعات الرئة ، والتي تلقت البليوميسين بمفرده بدون البينوسيمبرين (Eig 5 ).

تم اختبار كل معلمة (Eig⑥). الأهم من ذلك ، أن قطاعات الرئة ، التي استقبلت العامل الجرح بليوميسين ، وخضعت لعلاجات البينوسيمبرين ، كان لها متوسط ​​درجات أقل لكل معلمة تم تقييمها (Eig ⑥). قلل علاج Pinocembrin بشكل كبير من الالتهاب وعشرات الأمراض بشكل عام مقارنةً بالمقاطع التي تلقت تسريب البليوميسين فقط (الشكل 6). في حين أن قطاعات الرئة التي تلقت تسريب البليوميسين والبينوسيمبرين كانت لها درجات تليف أقل مقارنة بالمقاطع التي تلقت تسريب البليوميسين فقط ، لم يكن الاختلاف ذا دلالة إحصائية (الشكل 6).

آثار البينوسيمبرين على محتوى النسيج الضام

أظهرت الملاحظات المجهرية لأقسام ماسون الملطخة بالتريكروم أن علاج البينوسيمبرين قلل من كمية النسيج الضام الناتج عن تسريب البليوميسين (الشكل 7 أ). يُظهر EigZB بيانات عن النسبة المئوية لمنطقة النسيج الضام المصبوغة بتريكروم في ماسون بعد أربع علاجات أسبوعية باستخدام البينوسيمبرين. أظهرت البيانات الواردة في الشكل 7 ب أن علاج البينوسيمبرين قلل بشكل كبير من النسبة المئوية للتلوين الأزرق في أجزاء الرئة المعرضة للبليوميسين مقارنةً بالرئة المليئة بالبليوميسين والتي لم تتلق علاج البينوسيمبرين (الشكل 7 ب). يوضح الشكل ZC بيانات اختبار الهيدروكسي برولين لخيمة الكولاجين بعد أربع علاجات أسبوعية باستخدام البينوسيمبرين. تم جمع البيانات الموجودة في الشكل 7 ج من جميع الحيوانات العشرة في التجربة وأظهرت أن تسريب البليوميسين وحده (بدون البينوسيمبرين) زاد بشكل كبير من تركيز بروتين الكولاجين مقارنة بالقياسات ذات الصلة من قطاعات التحكم في الرئة الصحية ، والتي لم تتلق أي من البليوميسين أو البينوسيمبرين. ومع ذلك ، فإن إعطاء البينوسيمبرين لم يقلل من الزيادة التي يسببها البليوميسين في تركيز الكولاجين (الشكل 7 ج).

مناقشة

استفادت هذه الدراسة من نموذج الأغنام ذي الصلة من الناحية الفسيولوجية والدوائية للتليف الرئوي [12،13] للتأكد من فعالية البينوسيمبرين. بشكل عام ، وجدنا أن علاج البينوسيمبرين كان فعالًا في تحسين أمراض الرئة المستحثة تجريبياً ولم يتسبب في آثار صحية غير مرغوب فيها في جميع الأغنام العشرة التي خضعت للتجربة.

تم اختبار كل معلمة (الشكل). الأهم من ذلك ، أن قطاعات الرئة ، التي استقبلت العامل الجرح بليوميسين ، وخضعت لعلاجات البينوسيمبرين ، كان لها متوسط ​​درجات أقل لكل معلمة تم تقييمها (Eig ⑥). قلل علاج Pinocembrin بشكل كبير من الالتهاب وعشرات الأمراض بشكل عام مقارنةً بالمقاطع التي تلقت تسريب البليوميسين فقط (الشكل 6). في حين أن قطاعات الرئة التي تلقت تسريب البليوميسين والبينوسيمبرين كانت لها درجات تليف أقل مقارنة بالمقاطع التي تلقت تسريب البليوميسين فقط ، لم يكن الاختلاف ذا دلالة إحصائية (الشكل 6).

آثار البينوسيمبرين على محتوى النسيج الضام

أظهرت الملاحظات المجهرية لأقسام ماسون الملطخة بالتريكروم أن علاج البينوسيمبرين قلل من كمية النسيج الضام الناتج عن تسريب البليوميسين (الشكل 7 أ). يُظهر EigZB بيانات عن النسبة المئوية لمنطقة النسيج الضام المصبوغة بتريكروم في ماسون بعد أربع علاجات أسبوعية باستخدام البينوسيمبرين. أظهرت البيانات الواردة في الشكل 7 ب أن علاج البينوسيمبرين قلل بشكل كبير من النسبة المئوية للتلوين الأزرق في أجزاء الرئة المعرضة للبليوميسين مقارنةً بالرئة المليئة بالبليوميسين والتي لم تتلق علاج البينوسيمبرين (الشكل 7 ب). يوضح الشكل ZC بيانات اختبار الهيدروكسي برولين لخيمة الكولاجين بعد أربع علاجات أسبوعية باستخدام البينوسيمبرين. تم جمع البيانات الموجودة في الشكل 7 ج من جميع الحيوانات العشرة في التجربة وأظهرت أن تسريب البليوميسين وحده (بدون البينوسيمبرين) زاد بشكل كبير من تركيز بروتين الكولاجين مقارنة بالقياسات ذات الصلة من قطاعات التحكم في الرئة الصحية ، والتي لم تتلق أي من البليوميسين أو البينوسيمبرين. ومع ذلك ، فإن إعطاء البينوسيمبرين لم يقلل من الزيادة التي يسببها البليوميسين في تركيز الكولاجين (الشكل 7 ج).

مناقشة

استفادت هذه الدراسة من نموذج الأغنام ذي الصلة من الناحية الفسيولوجية والدوائية للتليف الرئوي [12،13] للتأكد من فعالية البينوسيمبرين. بشكل عام ، وجدنا أن علاج البينوسيمبرين كان فعالًا في تحسين أمراض الرئة المستحثة تجريبياً ولم يتسبب في آثار صحية غير مرغوب فيها في جميع الأغنام العشرة التي خضعت للتجربة.

آثار البينوسيمبرين على التشريح المرضي

يُظهر Eig6 بيانات تسجيل التشريح المرضي بعد أربع علاجات مرة واحدة في الأسبوع باستخدام البينوكيمبرين. كانت معاملات التشريح المرضي التي تم تسجيلها هي الالتهاب والتليف وعلم الأمراض بشكل عام. كما هو متوقع بالنسبة للرئة السليمة الطبيعية ، فإن أجزاء الرئة التي تُركت دون علاج ، كانت لها درجات منخفضة لكل معلمة مرضية تم تقييمها (الشكل 6). على النقيض من ذلك ، فإن قطاعات الرئة المصابة بالبليوميسين ، دون علاج البينوسيمبرين ، كان لها متوسط ​​درجات عالية بشكل ملحوظ لـ

تم اختبار كل معلمة (Eig⑥). الأهم من ذلك ، أن قطاعات الرئة ، التي استقبلت العامل الجرح بليوميسين ، وخضعت لعلاجات البينوسيمبرين ، كان لها متوسط ​​درجات أقل لكل معلمة تم تقييمها (Eig ⑥). قلل علاج Pinocembrin بشكل كبير من الالتهاب وعشرات الأمراض بشكل عام مقارنةً بالمقاطع التي تلقت تسريب البليوميسين فقط (الشكل 6). في حين أن قطاعات الرئة التي تلقت تسريب البليوميسين والبينوسيمبرين كانت لها درجات تليف أقل مقارنة بالمقاطع التي تلقت تسريب البليوميسين فقط ، لم يكن الاختلاف ذا دلالة إحصائية (الشكل 6).

آثار البينوسيمبرين على محتوى النسيج الضام

أظهرت الملاحظات المجهرية لأقسام ماسون الملطخة بالتريكروم أن علاج البينوسيمبرين قلل من كمية النسيج الضام الناتج عن تسريب البليوميسين (الشكل 7 أ). يُظهر EigZB بيانات عن النسبة المئوية لمنطقة النسيج الضام المصبوغة بتريكروم في ماسون بعد أربع علاجات أسبوعية باستخدام البينوسيمبرين. أظهرت البيانات الواردة في الشكل 7 ب أن علاج البينوسيمبرين قلل بشكل كبير من النسبة المئوية للتلوين الأزرق في أجزاء الرئة المعرضة للبليوميسين مقارنةً بالرئة المليئة بالبليوميسين والتي لم تتلق علاج البينوسيمبرين (الشكل 7 ب). يوضح الشكل ZC بيانات اختبار الهيدروكسي برولين لخيمة الكولاجين بعد أربع علاجات أسبوعية باستخدام البينوسيمبرين. تم جمع البيانات الموجودة في الشكل 7 ج من جميع الحيوانات العشرة في التجربة وأظهرت أن تسريب البليوميسين وحده (بدون البينوسيمبرين) زاد بشكل كبير من تركيز بروتين الكولاجين مقارنة بالقياسات ذات الصلة من قطاعات التحكم في الرئة الصحية ، والتي لم تتلق أي من البليوميسين أو البينوسيمبرين. ومع ذلك ، فإن إعطاء البينوسيمبرين لم يقلل من الزيادة التي يسببها البليوميسين في تركيز الكولاجين (الشكل 7 ج).

فعالية البينوسيمبرين لتحسين العديد من عوامل المرض في نموذج الأغنام لمرض الرئة التجريبي

في الدراسة الحالية ، وجدنا أن البينوسيمبرين كان قادرًا على تحسين العديد من معايير المرض في نموذج الأغنام للتليف الرئوي. كانت النتائج الرئيسية التي توصلنا إليها هي أن إعطاء البينوسيمبرين كان قادرًا على تحسين وظائف الرئة ، وتخفيف التهاب الرئة ، وتقليل النتائج المرضية الشاملة ، والتي نتجت عن إصابة البليوميسين. الأهم من ذلك ، كشفت التحليلات الإحصائية للبيانات أن قراءات المرض هذه قد تحسنت بشكل كبير في قطاعات الرئة المعالجة بالبنوسيمبرين عند مقارنتها بالبيانات المقابلة من قطاعات الرئة المصابة بالبيوميسين وغير المعالجة.

في نموذج الأغنام للتليف الرئوي الناجم عن البليوميسين ، تتسبب إصابة البليوميسين في فقدان التوافق الرئوي الموضعي (مقياس تصلب الرئة) في أجزاء الرئة المليئة بالبليوميسين [12-14 ، 16،22،23]. في الدراسة الحالية ، وجدنا أن علاج البينوسيمبرين أدى إلى تحسن كبير في الامتثال الوظيفي في قطاعات الرئة المصابة بالبليوميسين. أظهر هذا أن علاج بينوسيمبرين في أجزاء الرئة المصابة أدى إلى عمل تلك الأجزاء بمستويات أعلى مما لو تركت دون علاج.

في الدراسة الحالية ، أظهر تحديد الخلايا الالتهابية لغسل الرئة المستردة من أجزاء الرئة أن علاج البينوسيمبرين قلل بشكل كبير من عدد الخلايا الالتهابية التي تشغل المساحات الحدية للحويصلات الهوائية والممرات الهوائية الصغيرة. كان نوع الخلايا الالتهابية الرئيسية الذي تم تقليله في سائل غسيل الرئة هو العدلات ، التي انخفضت من 7.4 في المائة من إجمالي خلايا BAL في البليوميسين بدون شرائح الرئة المعالجة بالعقاقير إلى 3.7 في المائة في شرائح الرئة المصابة بالبليوميسين المعالجة بالبينوسيمبرين. كان التخفيض المرتبط بالـ pinocembrin في خلايا CD4 و CD8 T في حمة الرئة متسقًا تمامًا مع تقليل الخلايا الالتهابية المستردة من سائل غسيل الرئة لقطاعات الرئة المعرضة للبينوسيمبرين والبليوميسين. تعد خلايا CD4 و CD8 plus T مكونات مهمة في الأذرع الخلوية للعديد من الاستجابات المناعية. بشكل عام ، تدعم هذه البيانات فكرة أن بينوسيمبرين له خصائص قوية مضادة للالتهابات في نموذج المرض المدروس.

من حيث درجات التشريح المرضي ، تم تحسين متوسط ​​الالتهاب ودرجات علم الأمراض الشاملة في قطاعات الرئة المصابة بعد علاج البينوسيمبرين. الأهم من ذلك ، أن هذه القراءات كانت أقل إحصائيًا في الرئتين التالفتين المعالجة بالبنوسيمبرين ، مقارنة بالرئتين المصابة تجريبياً دون علاج البينوسيمبرين. في حين أن متوسط ​​درجات أمراض التليف كانت أقل في الرئتين التالفتين المعالجة بالبنوسيمبرين ، مقارنة بالرئة المصابة تجريبياً دون علاج البينوسيمبرين ، فإن هذه لم تصل إلى دلالة إحصائية.

نظرًا لأن بيانات درجة علم أمراض التليف لم تكن نهائية بالنسبة لـ pinocembrin ، فقد تم إجراء اختبار hydroxyproline على عينات الأنسجة من قطاعات الرئة المعالجة تفاضليًا. يقيس اختبار الهيدروكسي برولين مستوى الكولاجين في عينة البروتين وهو مقياس قراءة قياسي ذهبي لقياس مستويات التليف في الأنسجة. أظهر هذا الاختبار أن بينوسيمبرين لم يقلل من ترسب الكولاجين خارج الخلية المرتبط بإصابة البليوميسين. أظهر اختبار Masson ثلاثي الكروم (مقياس قراءة آخر يستخدم بشكل متكرر لتقييم مدى التليف) أن النسبة المئوية للتلوين الأزرق (قياس محتوى النسيج الضام) كانت أقل بشكل ملحوظ في أقسام الرئة المعرضة للبليوميسين والمعالجة بالبينوسيمبرين عند مقارنتها بالبليوميسين المكشوف أقسام الرئة التي لم تتلق علاجات دوائية. مجتمعة ، اقترحت البيانات المأخوذة من فحوصات هيدروكسي برولين وماسون ثلاثية الكروم أن البينوسيمبرين لديه القدرة على تقليل بعض بروتينات المصفوفة خارج الخلية (كما هو موضح في بيانات ماسون ثلاثية الألوان) ، ولكن ليس بالضرورة الكولاجين (كما تؤكده بيانات الهيدروكسي برولين). بشكل عام ، أشارت البيانات المستمدة من درجات التليف ، ومقايسات ماسون ثلاثية الألوان ، وهيدروكسي برولين إلى أن البينوسيمبرين لم يكن له سوى خصائص متواضعة مضادة للليف ومضادة لإعادة التشكيل.

لقد تم إثبات سابقًا أن العديد من المركبات النشطة بيولوجيًا لها خصائص مضادة للالتهابات وكذلك مضادة للتليف من خلال تعديل العديد من المؤشرات الحيوية المسببة للالتهاب مثل TNF و TGF- endothelin -1 و IFN-y و interleukins و VEGF و FGF -2 و PDGF MMP -9 و TIMPs و NF-kB و collagen-I [24]. علاوة على ذلك ، فقد وجد أن إعطاء المركبات المضادة للالتهابات لنماذج الفئران المليئة بالبليوميسين للتليف الرئوي غالبًا ما أدى إلى تقليل أمراض التليف. كان هذا صحيحًا بشكل خاص إذا تم تطبيق الجزيئات المضادة للالتهابات في وقت مبكر بعد التعرض للبليوميسين أثناء المرحلة الالتهابية (المؤيدة للتليف) من علم الأمراض في هذه النماذج [25]. الأهم من ذلك ، عندما تم اختبار العديد من هذه الجزيئات المضادة للالتهابات في العيادة لعلاج حالات التليف ، وجد أنها غير فعالة. كما قام البينوسيمبرين بتثبيط السيتوكينات المؤيدة للالتهابات TNF-c و IL -1 و IL -6 وخفف الاستجابات الالتهابية عن طريق تثبيط مسار إشارات NF-K 9 ، 10. مزيد من الدراسات الميكانيكية مع الفئران LPS والبليوميسين اقترحت النماذج أن TLR4 (المستقبلات الشبيهة بالرسم البياني 4) والأسباب الالتهابية مرتبطة سببيًا بقمع البينوسيمبرين لإشارات NF-K الالتهابية [2]. كما هو الحال مع جميع نماذج التليف الرئوي التي يسببها البليوميسين ، فإن توقيت التدخل الدوائي ضروري لتحديد الإسهامات النسبية المضادة للالتهاب ومضادات الالتهاب في العلاج [25. كان توقيت علاج البينوسيمبرين في الدراسة الحالية بعد 7 أيام من ضخ البليوميسين النهائي والذي كان في بداية المرحلة الليفية في هذا النموذج [12 ، 13]. على الرغم من أن الالتهاب كان أقل بكثير في هذا اليوم -7 ، إلا أنه كان لا يزال موجودًا ، وبالتالي لا يمكننا استبعاد أن بعض التأثيرات المضادة للالتهاب الضعيفة لبينوسيمبرين كانت بسبب أنشطته المضادة للالتهابات.

في السابق ، استخدمنا نموذج الأغنام للتليف الرئوي هذا لتقييم الإمكانات العلاجية لدوائين آخرين ، وقد تكون نتائجهما مفيدة لمقارنة تأثيرات البينوسيمبرين الموجودة في الدراسة الحالية. لقد اختبرنا مثبطًا لقناة أيون KCa3.1 يسمى senicapoc [15،16] ، وقمنا أيضًا بالتحقيق في فعالية عقار pirfenidone المعتمد من قِبل إدارة الأغذية والعقاقير (FDA) في النموذج [14]. كانت تصميمات الدراسة المنشورة مشابهة بشكل أساسي لدراسة pinocembrin الحالية ، حيث استخدمت كل دراسة 10 أغنام لكل مجموعة. كانت فترات العلاج بالعقاقير مماثلة لمدة أربعة إلى خمسة أسابيع لكل عقار. كان الاختلاف الرئيسي هو أنه في دراسات senicapoc و pirfenidone ، تم إعطاء الأدوية عن طريق الفم ، بينما تم إعطاء البينوكيمبرين داخل الرئة إلى قطاعات الرئة المحلية. علاوة على ذلك ، فإن الرئة بأكملها لم تستقبل البينوسيمبرين في الدراسة الحالية ، في حين أن الرئة بأكملها تعرضت للعقاقير في تجارب بيرفينيدون وسينيكابوك. كشفت تحليلات البيانات بين هذه الدراسات أن مستويات التحسينات في علامات المرض لامتثال الرئة ، ودرجات علم الأمراض الشاملة ، والالتهاب كانت على مستوى مماثل لتجربة بينوسيمبرين مقارنة بتجارب الأدوية الأخرى التي أجريت مع نموذج الأغنام. كانت نقطة الاختلاف الرئيسية بين هذه الدراسات هي أنه في الدراسات المنشورة سابقًا ، أدى إعطاء بيرفينيدون أو سينيكابوك إلى انخفاض كبير في تركيز بروتين الكولاجين ، وفقًا لتقييم اختبار الهيدروكسي برولين [14 ، 16] بشكل عام ، المقارنة بين التجارب التي خضعت للتجربة تشير الأدوية إلى أن التحسن الملحوظ في وظائف الرئة وأمراضها يتم في الغالب عن طريق التأثيرات المضادة للالتهابات لبينوسيمبرين ، وبدرجة أقل بسبب أفعاله المضادة للليف.

في الدراسة الحالية ، وُجد أن الجرعات الأربع البالغة 7 ملغ من البينوسيمبرين المعطاة للرئتين على فترات أسبوعية جيدة التحمل ولم تكن خالية من أي آثار جانبية ضارة. يتوافق هذا مع البيانات المأخوذة من تجربة عشوائية مزدوجة التعمية مضبوطة بالغفل مع 58 مريضًا سليمًا والتي أظهرت أن الحقن في الوريد من البينوسيمبرين يمكن تحمله جيدًا حتى 120 مجم يوميًا [26]. قيمت التجربة كلاً من أنظمة الجرعات المفردة والمتعددة ووجدت أنه لا توجد مخاوف كبيرة تتعلق بالسلامة من شأنها أن تمنع أي تطور سريري مستقبلي لإعطاء البينوسيمبرين عن طريق الحقن [26]. أظهرت البيانات في الدراسة الحالية أن توصيل البينوسيمبرين داخل الرئة لم يكن آمنًا وقابلًا للتطبيق فحسب ، بل دعم أيضًا فكرة أن هذا الفلافونويد قد يكون مفيدًا في علاج عدد من الأمراض الالتهابية في الرئة. الربو هو أحد أمراض مجرى الهواء التحسسية الهامة التي يمكن أن تصل إلى الرئتين. تم عرض الأدلة الأولية التي تدعم التأثيرات المضادة للربو لبينوسيمبرين في دراسة حيث أدت الحقن داخل الصفاق من بينوسيمبرين إلى تثبيط أمراض مجرى الهواء التحسسي في الفئران [20]. وبالتالي ، يمكن أن نتوقع بشكل معقول أن يكون التوصيل الموضعي لـ Pinocembrin إلى الرئتين فقط أكثر فعالية في علاج الحالات الشبيهة بالربو في العيادة.

استنتاج

في الختام ، كانت البيانات القوية والهامة المستمدة من هذه الدراسة متوافقة مع أن البينوسيمبرين نشط بيولوجيًا ويحسن معايير المرض الرئيسية في إعداد النموذج الحيواني. من المحتمل أن تكون تأثيرات إعادة النمذجة المضادة للالتهابات والمتواضعة المضادة للليف لإعطاء البينوسيمبرين مرتبطة بقدرتها على تحسين أمراض الرئة والامتثال الوظيفي.