تحفيز المناعة المحيطية المدربة في البنكرياس يحرض نشاطًا مضادًا للورم للسيطرة على تطور سرطان البنكرياس الجزء 1

على الرغم من النجاح الملحوظ للعلاج المناعي في العديد من أنواع السرطان ، إلا أن السرطانة الغدية في أقنية البنكرياس لم تستفد بعد. تعتبر الخلايا المناعية الفطرية ضرورية للمراقبة المناعية المضادة للأورام وقد كشفت الدراسات الحديثة أن هؤلاء السكان يمتلكون شكلاً من أشكال الذاكرة ، يُطلق عليه اسم المناعة الفطرية المدربة ، والتي تحدث من خلال إعادة البرمجة النصية ، والجينية ، والاستقلابية.

نوضح هنا أن الجسيمات المشتقة من الخميرة ، وهي محفز للمناعة المدربة ، تنتقل إلى البنكرياس ، مما يتسبب في 2- تدفق معتمد على الخلايا الأحادية / الضامة إلى البنكرياس والتي تظهر ميزات المناعة المدربة. يمكن تنشيط هذه الخلايا عند التعرض للخلايا السرطانية والعوامل المشتقة من الورم ، وإظهار السمية الخلوية المعززة ضد الخلايا السرطانية في البنكرياس. في النماذج المثلية لسرطان الغدة البنكرياس القنوي ، تظهر الفئران المعالجة بالجلوكان انخفاضًا ملحوظًا في عبء الورم والبقاء على قيد الحياة لفترة طويلة ، والذي يتعزز بشكل أكبر عندما يقترن بالعلاج المناعي. تميز هذه النتائج الآليات الديناميكية وتوطين المناعة المحيطية المدربة وتحديد تطبيق المناعة المدربة على السرطان.

للمناعة العديد من الوظائف ، مثل تطهير الخلايا القديمة والتالفة: يمكن لجهاز المناعة أيضًا إزالة الخلايا القديمة والتالفة ، بما في ذلك الخلايا السرطانية ، لحماية الجسم من الأمراض. يمكن أن يحافظ أيضًا على توازن الجسم: يمكن لجهاز المناعة أيضًا موازنة البيئة الداخلية للجسم ، والحفاظ على التوازن بين الخلايا المناعية ، وتجنب ظهور أمراض مثل فرط رد الفعل أو نقص المناعة ، لذلك فإن المناعة مهمة جدًا لجسم الإنسان.

في الوقت نفسه ، وجدنا أن Cistanche deserticola يمكنه أيضًا تحسين المناعة. Cistanche غني بمجموعة متنوعة من المكونات النشطة بيولوجيًا ، مثل السكريات المتعددة ، والفلافونويد ، والستيرول ، وما إلى ذلك. يمكن لهذه المكونات أن تحفز نشاط الخلايا المناعية في الجسم ، وتعزز المناعة الخلوية والمناعة الخلطية ، وتمنع نمو وتكاثر الفيروسات و بكتيريا. تحسين مناعة الجسم ومقاومة الجسم. بالإضافة إلى ذلك ، يحتوي Cistanche أيضًا على تأثيرات مضادة للأكسدة ومضادة للالتهابات ومهدئة ، والتي يمكن أن تساعد في تخفيف التعب الجسدي والقضاء على الإجهاد لتعزيز المناعة.

انقر لمعرفة ملحق cistanche deserticola

يعد تشخيص سرطان الغدة البنكرياس القنوي (PDAC) مدمرًا ، حيث نجا 10 بالمائة فقط من المرضى خلال السنوات الخمس الماضية 1. على الرغم من أن معدل البقاء على قيد الحياة منذ عام 2014 قد ارتفع من 6 إلى 10 في المائة ، إلا أن سرطان البنكرياس لا يزال مقاومًا لمعظم العلاجات المتاحة حاليًا.

بالإضافة إلى ذلك ، مع تحول التركيبة السكانية للولايات المتحدة ، من المتوقع أن يصبح سرطان البنكرياس ثاني سبب رئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان بحلول عام 2030 ، وبالتالي يمثل تحديًا كبيرًا في المستقبل للأطباء 2. يعتبر سرطان البنكرياس مميتًا بشكل خاص لأنه في المراحل المبكرة نادرًا ما توجد أعراض سريرية ، مما يؤدي إلى تشخيص 75-80 بالمائة من المرضى بمرض متقدم غير قابل للاستئصال 3،4. حتى في المرضى المؤهلين للاستئصال ، فإن معدل البقاء على قيد الحياة لمدة 5- عام هو 20-25 بالمائة فقط 4. علاوة على ذلك ، أظهر سرطان البنكرياس القليل من الاستجابة للعلاجات المناعية التي أظهرت تأثيرات ملحوظة في الأورام الصلبة الأخرى 5-9. اعتُبرت التجارب السريرية للمرحلتين الأولى والثانية باستخدام مثبطات CTLA -4 و PD -1 على حد سواء بمفردها أو مجتمعة غير فعالة في علاج PDAC ، والذي من المحتمل تفسيره بالطبيعة غير المناعية لـ PDAC10- 12.

يتمثل التحدي الرئيسي للتطبيق الناجح للعلاج المناعي في PDAC في التغلب على البيئة المكروية لورم البنكرياس المثبطة للمناعة (TME). يتميز PDAC بسدى كثيف مؤيد للأورام ، ووفرة من مجموعات الخلايا الكابتة للمناعة داخل هذه السدى مثل الضامة المرتبطة بالورم (TAMs) ، والخلايا التائية التنظيمية (T-regs) ، والخلايا الكابحة المشتقة من النخاع الشوكي (MDSCs) ، قلة الخلايا المناعية النشطة المضادة للورم ، وزيادة الأوعية الدموية التي تضفي على بيئة مكروية ناقصة التأكسج. تجعل هذه الظروف معًا من الصعب بشكل استثنائي تقديم العلاجات المناعية للبنكرياس بشكل فعال وأن تنشط هذه العلاجات بنجاح الاستجابات المناعية المضادة للورم إذا وصلت إلى هناك. لذلك ، هناك حاجة ماسة إلى علاجات جديدة لا يمكنها استهداف البنكرياس على وجه التحديد فحسب ، بل يمكنها أيضًا التسلل إلى سدى التورم الكثيف ، وتكون قادرة على تحريض استجابات مناعية قوية مضادة للورم على الرغم من TME المثبط للمناعة.

المناعة الفطرية المُدرَّبة هي برنامج تطوري قديم للذاكرة المناعية تم مؤخرًا إجراء تحقيق علمي متعمق. لقد ثبت أن الخلايا المناعية الفطرية المدربة تخضع لإعادة البرمجة النصية ، والتخلقية ، والاستقلابية عند التعرض لمحفزات أولية محددة ، وعندما يتم إعادة تعريض هذه الخلايا المناعية الفطرية لمحفز ثانوي غير متجانس ، فإنها "مدربة" لتكون أكثر استجابة لهذا المنبه الذي يتجلى في استجابة التهابية محسنة 17-19. يمكن للعديد من المستحضرات الدوائية الحيوية تحفيز المناعة المدربة بما في ذلك لقاح Bacillus Calmette-Guérin (BCG) والمركب الطبيعي -جلوكان. على الرغم من أن معظم الدراسات المتعلقة بالمناعة المدربة تركز على مسببات الأمراض مثل البكتيريا والفيروسات كمحفز ثانوي ، تشير الدراسات الجديدة إلى أن الخلايا السرطانية قد تعيد تنشيط الخلايا المناعية المدربة. استخدمت جميع الأبحاث حتى الآن نماذج سرطانية تحت الجلد ، لذلك من غير المعروف ما إذا كان وجود الخلايا المناعية الفطرية المدربة قد يستدعي تأثيرات مضادة للورم على الأورام داخل الأعضاء الصلبة ، مثل سرطان البنكرياس.

في هذه الدراسة ، اكتشفنا بشكل غير متوقع أن الحقن داخل الصفاق (IP) يتم حقن جزيئات الجلوكان المشتقة من الخميرة بنسبة كبيرة في البنكرياس. يسلط التهريب المباشر للجلوكان إلى البنكرياس الضوء على مسار غير معهود سابقًا لتحريض المناعة المحيطية المدربة. بالإضافة إلى ذلك ، اختبرنا الفرضية القائلة بأن هذا الاتجار قد يؤدي إلى تحريض مناعة مضادة للورم ضد سرطان البنكرياس. نظرًا لفشل غالبية العلاجات والعلاجات المناعية وحدها أو مجتمعة في علاج PDAC وصعوبة استهداف هذه العلاجات للبنكرياس ، فإن النتائج التي توصلنا إليها بشكل جماعي توفر اختراقًا محتملاً ليس فقط في استهداف البنكرياس مباشرة ولكن أيضًا في تجنيد مضادات الأورام ، الخلايا المناعية الفطرية لـ PDAC TME الباردة مناعيًا.

نتائج

الجسيمات المشتقة من الخميرة -جلوكان تنتقل بشكل تفضيلي إلى البنكرياس.

لقد تم توثيقه جيدًا أن إعطاء -جلوكان من البكتيريا والفطريات يزيد من أعداد وتواتر أسلاف المكونة للدم والأسلاف متعددة القدرات المنحازة نحو سلالة النخاع ، والتي تعمل في النهاية كخطوة مهمة في تحريض المناعة المركزية والطرفية المدربة. . ومع ذلك ، لم يتم بعد إثبات مكان حدوث هذه التأثيرات بالضبط بعد عمليات الاتجار بالجلوكان بعد تناوله.

في هذه الدراسات ، تم استخدام جزيئات الجلوكان الكاملة (WGP) المشتقة من Saccharomyces cerevisiae ، والتي تتكون من 2-4 ميكرون من خلايا الخميرة المجوفة المصنوعة من جلوكان عالي التركيز (1،3). تم وصف التوصيف التفصيلي لـ WGP-glucan في إحدى دراساتنا الأخرى. على عكس الأشكال الأخرى من الجلوكان المستخدمة في المناعة المدربة ، فإن هذه الصيغة فريدة من نوعها من حيث أنها جسيمية وتتطلب البلعمة النشطة لممارسة آثارها. لتقييم الاتجار بهذا الجسيم -جلوكان ، تم تمييز WGP بـ (5- (4 ، 6- Dichlorotriazinyl) أمينوفلوريسين) (DTAF) وحقن IP في الفئران من النوع البري (WT) C57BL / 6. بعد ثلاثة أيام من تناول IP (3- يوم WGP) ، تم حصاد الغدد الليمفاوية الرئوية والطحال والمساريقي وخلايا التجويف البريتوني والبنكرياس وغسلها ببرنامج تلفزيوني بارد لغسل DTAFWGP من الصفاق الذي قد تم الالتصاق بسطح العضو ، وتم تقييم وجود DTAF-WGP في كل عضو عن طريق قياس التدفق الخلوي. بينما كان هناك بعض تهريب DTAF-WGP إلى الطحال ، والعقد الليمفاوية المساريقية ، و DTAF-WGP المتبقي في التجويف البريتوني ، أظهر البنكرياس وجودًا مذهلاً وغير متوقع لـ DTAF-WGP (الشكل 1 أ).

لمزيد من تقييم هذا الاتجار وللتأكد من أن ملصق DTAF لم يكن متورطًا في آلية الاتجار ، تم تمييز WGP إشعاعيًا بـ 89Zr وحقن IP (الشكل 1 ب) أو حضنت مع الضامة البريتونية التي تم حقنها بعد ذلك IP (الشكل 1 ج). تم تصوير الفئران لأول مرة باستخدام مسح PET / CT لمدة 48 ساعة بعد الحقن وتستخدم الدوائر الخضراء للإشارة إلى التراكم التفضيلي الملحوظ لـ 89Zr-WGP في البنكرياس. ثم تم إجراء التنظير وقياس التوقيع الإشعاعي لكل عضو. من خلال بيانات قياس التدفق الخلوي ، تم نقل 89Zr-WGP بكميات كبيرة إلى البنكرياس ووجد في مستويات أقل في الطحال والكبد والجهاز المعوي. كانت الضامة البريتونية التي تم تربيتها باستخدام 89Zr-WGP ثم حقنها IP متشابهة وإن كانت أكثر تنوعًا قليلاً من الاتجار النقي 89Zr-WGP ، وتراكمت أيضًا بشكل بارز في البنكرياس (الشكل 1 د). يشير تهريب الضامة البريتونية المحملة بـ WGP إلى البنكرياس إلى أن كلاً من WGP العاري وكذلك الضامة التي تحتوي على WGP الملتهمة تعرض انتفاخًا للبنكرياس.

لتقييم الدور الذي لعبه المستقبل المعروف لـ WGP في تهريب WGP ، تم حقن الفئران التي تفتقر إلى مستقبل محاضرات من النوع C ، Dectin -1 ، (Dectin -1 - / - الفئران) بـ IP باستخدام DTAF-WGP. بالمقارنة مع الفئران WT ، أظهرت الفئران Dectin -1 انخفاضًا بمقدار خمسة أضعاف في كمية WGP التي تم نقلها إلى البنكرياس ، وفقًا لتقدير التدفق الخلوي (الشكل 1 د). 89ZrWGP حقنت أيضًا IP في الفئران WT و Dectin -1 - / - الفئران. بالمقارنة مع حيوانات WT ، كان هناك تهريب أقل بكثير من 89Zr-WGP إلى بنكرياس Dectin -1 - / - الفئران (الشكل 1 هـ). للتأكد من أن هذه العملية كانت محددة بالجلوكان ، تم حقن جسيم فلورسنت قائم على البوليسترين 3 ميكرومتر ، بنفس حجم جسيم WGP ، ولم يتم العثور عليه للتراكم في البنكرياس (الشكل التكميلي 1 أ). تسلط هذه البيانات معًا ، الضوء على التروبيزم المعتمد على الدكتين -1 الذي لم يكن معهودًا سابقًا والذي ينتقل فيه الجلوكان إلى البنكرياس.

التين. 1 الجسيمات-الجلوكان التي تنتقل إلى البنكرياس بطريقة تعتمد على الدكتين -1-. تم حقن DTAF-WGP IP وبعد 3 أيام تم حصاد أنسجة مختلفة (n {5}}) وتقييمها لوجود DTAF-WGP عن طريق قياس التدفق الخلوي. يتم عرض مخططات النقطة التمثيلية والبيانات الملخصة. * ص=0. 0 32 ، ** ص=0. 0 057 ، **** ع <0.0001. ب تم تمييز WGP بـ 89Zr-WGP أو تم تحضين البلاعم البريتونية c بـ 89Zr-WGP وغسلها ، متبوعًا بحقن IP. يعرض التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني / المقطعي المحوسب تهريب 89Zr-WGP بعد 48 ساعة. تم تقييم الأعضاء بشكل فردي للنشاط الإشعاعي بعد التنخر باستخدام عداد جاما. في c ، تم الإبلاغ عن الأهمية بالمقارنة مع البنكرياس (ن=3). **** ف <0.0001. د تم حقن Dectin -1 - / - الفئران أو الفئران WT بـ DTAF-WGP وتم تقييم تراكم DTAF-WGP في البنكرياس عن طريق قياس التدفق الخلوي (WT PBS n=3 ، WT WGP n {{ 27}} ، KO plus PBS n=3 ، KO plus WGP n=4). تم حقن e Dectin -1 - / - الفئران أو الفئران WT (n=4) بـ 89Zr-WGP وبعد 48 ساعة تم استخدام PET / CT لتقييم الكمية في البنكرياس. تم قياس الإشارة من خلال الإبلاغ عن النسبة المئوية للجرعة المحقونة (معرف النسبة المئوية) في البنكرياس. * ص=0. 046. تم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه مع مقارنات Tukey المتعددة في a-d ، وتم استخدام اختبار t غير المزدوج للطالب ثنائي الذيل في e. تم تمثيل البيانات على أنها متوسط ​​± SEM. غير مهم ؛ تمثل كل عينة حيوانًا مستقلاً بيولوجيًا تم الحصول عليه من خلال تجربة مستقلة واحدة والتي تكررت مرتين على الأقل للتحقق من النتائج.

-جلوكان الذي ينتقل إلى البنكرياس يحرض على تدفق الخلايا المناعية الفطرية التي تظهر النمط الظاهري للمناعة المدربة.

بعد اكتشاف أن -جلوكان يظهر انتفاخًا تجاه البنكرياس ، لوحظ أيضًا أن المشهد المناعي للبنكرياس قد تغير بشكل كبير بعد علاج WGP. كان وصول WGP إلى البنكرياس مصحوبًا بتدفق مميز لـ CD11b بالإضافة إلى الخلايا النخاعية إلى البنكرياس بحلول اليوم الثالث ، والتي كان بعضها يحتوي على WGP البلعم (الشكل 2 أ).

قادتنا هذه النتيجة إلى دراسة كيفية تأثر مجموعات المناعة الكلية للبنكرياس بعد علاج IP WGP. كما لوحظ سابقًا أن التغيرات المناعية المرتبطة بالمناعة المدربة في BM هي الأكثر وضوحًا 1- أسبوعًا بعد التعرض لـ -glucan22 ، تم فحص المظهر المناعي للبنكرياس في الفئران التي عولجت بجزيئات دقيقة من البوليسترين بحجم 3 ميكرومتر أو WGP 7 أيام بعد الإدارة. أولاً ، لوحظ أنه كان هناك زيادة بمقدار سبعة أضعاف في العدد الإجمالي المطلق لخلايا CD45 بالإضافة إلى الخلايا المناعية في البنكرياس بعد علاج WGP (الشكل 2 ب). لم يكن للتحكم في الجسيمات الدقيقة من البوليسترين البالغ 3 ميكرومتر مثل هذه التأثيرات (الشكل التكميلي 1 ب) ، مما يشير إلى أن تدفق الخلايا المناعية هذا خاص بـ WGP. بالإضافة إلى ذلك ، كانت هناك زيادة ملحوظة في النسبة المئوية للخلايا المناعية CD45 بالإضافة إلى (الشكل التكميلي 1 ج).

لتصنيف أنواع الخلايا التي كانت مسؤولة عن هذا التوسع في CD45 بالإضافة إلى السكان المناعي ، العدد المطلق (الشكل 2 ب) والنسبة المئوية (الشكل التكميلي 1 ج) للخلايا النخاعية (CD11b plus) ، الخلايا التائية (CD3 plus) تم تقييم الخلايا B (CD19 plus) وخلايا NK (NK1.1 plus). يتم تمثيل التغييرات التراكمية في البنكرياس من خلال المخططات الدائرية التي توضح أن توسع الحيز النخاعي مسؤول عن الانخفاض النسبي في النسبة المئوية لمجموعات الخلايا الأخرى والزيادة الإجمالية في CD45 بالإضافة إلى السكان بعد علاج WGP (الشكل 2 ج) . درسنا بعد ذلك ما إذا كان تدفق CD11b بالإضافة إلى الخلايا المناعية عابرًا ، وبالتالي تم قياس النسبة المئوية لخلايا CD45 plus وخلايا CD11b plus في البنكرياس بعد حقن IP عند 7،10 و 18 و 30 يومًا.

الشكل {0} الجلوكان يحفز تدفق الخلايا النخاعية المدربة إلى البنكرياس. أ نسبة مئوية من CD45 بالإضافة إلى CD11b بالإضافة إلى خلايا DTAF plus في البنكرياس بعد 3 أيام من تلقي الفئران WT IP DTAF-WGP. ب بعد سبعة أيام من إدخال PBS أو WGP ، الأرقام المطلقة لـ CD45 زائد (n=15) ، CD11b زائد (n=18) ​​، CD3 زائد (n {{1 {3 0} }}}) ، CD19 زائد (n=10) ، و NK1.1 زائد (n=14) يتم عرض الخلايا. **** p <0. 0 0 0 1. ج مخططات دائرية تمثل تغيرات التكرار لمجموعات الخلايا المناعية الرئيسية بعد علاج WGP. تم حقن الفئران WT بـ PBS (ن=5) أو WGP (ن=5) وتم قياس النسبة المئوية لخلايا CD45 plus و CD45 plus CD11b plus بعد 7 و 10 و 18 و 30 يومًا بعد ذلك ( ن=3). ** p=0. 0034، **** p <0.0001 (CD45)، ** p=0. 0023 (CD11b). هـ الأعداد المطلقة لـ F4 / 80 زائد (n=10) و Ly6C plus (n=10) و Ly6G plus (n=8) ضمن CD11b بالإضافة إلى السكان. ** ص=0. 003 ، **** ص <0.0001. f بعد سبعة أيام من IP PBS أو WGP ، تمت إعادة تحفيز البنكرياس باستخدام LPS. تم قياس إنتاج TNF في خلايا CD11b plus (n=28) و CD11b plus F4 / 80 plus (n=9) و CD11b plus Ly6C plus (n=8). * p=0. 024، *** p=0. 0001، **** p <0.0001. g بعد سبعة أيام من PBS أو WGP ، تم إثراء CD45 بالإضافة إلى CD11b بالإضافة إلى السكان (n=4). تمت إعادة تنشيط الخلايا مع أو بدون LPS لمدة 24 ساعة. تم قياس إنتاج TNF و IL -6 باستخدام ELISA. **** ف <0.0001. ح تم فرز خلايا البنكرياس CD11b plus من الفئران المدربة من PBS و WGP. تم إجراء RT-qPCR لقياس TNF (n=4) ، IL -6 (n=4) ، iNOS (PBS n=4 ، WGP n=3) و IL -10 (PBS n=4، WGP n=5) مستويات تعبير mRNA. * p=0. 028، ** p=0. 0018، **** p <0.0001. تم فرز خلايا CD11b plus من الفئران المحقونة بـ PBS أو WGP (24 ساعة) (ن=4). تم عزل الهيستونات وتعريضها لتحليل لطخة غربية (أعلى) أو ELISA (أسفل) لـ H3K4me3 و H3K27Ac و H3K27me3 وإجمالي H3. **** ف <0.0001. ي بعد سبعة أيام من IP WGP أو PBS ، تم فرز CD45 بالإضافة إلى CD1b بالإضافة إلى مجموعات البنكرياس. تم إجراء تحليل RNA-Seq (PBS n=3 ، WGP n=3).

يتم تمثيل توزيع قيم p (–log10 (قيمة p)) وتغييرات الطية (log2 FC) للجينات المعبر عنها تفاضليًا. مخططات k t-SNE لـ CD11b بالإضافة إلى السكان في الفئران التي تم تدريبها باستخدام PBS أو WGP قبل 7 أيام وتحليلها باستخدام CyTOF (PBS n=3 ، WGP n=3). تم استخدام اختبارات t للطالب ثنائي الذيل غير المزاوج في b و e و f و h. تم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه مع مقارنات متعددة في d و g و i. يتم تمثيل البيانات على أنها تعني ± SEM. نانوثانية ليست كبيرة. تمثل كل عينة حيوانًا مستقلًا بيولوجيًا تم الحصول عليه من خلال تجربة مستقلة واحدة.

في حين أن النسبة المئوية لخلايا CD11b plus بلغت ذروتها في اليوم السابع ، فإن النسبة المئوية لخلايا CD45 plus بلغت ذروتها في اليوم العاشر مما قد يشير إلى أنه بعد تدفق خلايا CD11b plus إلى البنكرياس ، قد يتبع ذلك تدفق أنواع أخرى من الخلايا المناعية. انخفضت النسبة المئوية للخلايا المناعية في البنكرياس إلى المستويات القاعدية بحلول اليوم 30 ، مما يدل على أن هذا التدفق عابر (الشكل 2 د). داخل المقصورة النخاعية ، لاحظنا العدد المطلق (الشكل 2 هـ) والنسبة المئوية (الشكل التكميلي 1 ج) من الضامة (F4 / 80 plus) ، وحيدات (Ly6C plus) ، والعدلات (Ly6G plus) تمت زيادتها جميعًا. تبين أيضًا أن تدفق الخلايا المناعية إلى البنكرياس يعتمد على جرعة WGP المحقونة ، حيث ارتبطت الجرعات العالية من WGP بزيادة تدفق CD45 بالإضافة إلى CD11b بالإضافة إلى الخلايا النخاعية و CD45 بالإضافة إلى CD11b بالإضافة إلى F4 / 80 بالإضافة إلى البلاعم. (الشكل التكميلي 1 د).

نظرًا لأن التهاب البنكرياس وتدمير جزر البنكرياس مرتبطان بتسلل الخلايا المناعية للبنكرياس ، تم إجراء H زائد E للبنكرياس لتقييم سلامة أسيني بعد 7 أيام من إعطاء WGP (الشكل التكميلي 1 هـ). تم قياس مصل الأميليز ، وهو علامة تشخيصية لالتهاب البنكرياس ، في الفئران المعالجة بـ WGP مقابل PBS بعد 7 أيام من الحقن (الشكل التكميلي 1f). لم تتأثر الجزر ولا الأميليز المصل سلبًا بعلاج WGP والتدفق المناعي الملحوظ ، مما يشير إلى أن تدفق الخلايا المناعية في هذه الآلية لا يسبب تدمير البنكرياس.

لاستكشاف ما إذا كانت الخلايا التي تم العثور عليها تتسلل إلى بنكرياس الفأر بعد علاج WGP قد أظهرت نمطًا ظاهريًا للمناعة المدربة ، استخدمنا بروتوكول تدريب قياسي تم فيه معالجة الفئران باستخدام WGP أو PBS وبعد 7 أيام تم حصاد البنكرياس ثم إعادة تحفيزه باستخدام LPS. تم استخدام TNF- إنتاج كعلامة بديلة لتقييم الاستجابة المدربة. تم عرض كل من CD11b بالإضافة إلى الخلايا النخاعية ، و CD11b بالإضافة إلى F4 / 80 بالإضافة إلى البلاعم ، و CD11b بالإضافة إلى Ly6C plus monocytes لإنتاج المزيد من TNF- بسبب التعرض المسبق لـ WGP ، كما تم تقييمه من خلال النسبة المئوية لخلايا TNF- plus و MFI (الشكل 1 ب). . 2f). لمزيد من تقييم هذه النتائج ، تم فرز خلايا CD11b plus من بنكرياس هذه الفئران وإعادة تنشيطها خارج الجسم الحي باستخدام LPS ، وتم قياس مستويات TNF- و IL -6 في المواد الطافية بواسطة ELISA. بالمقارنة مع خلايا CD11b plus من فئران PBS ، فإن الخلايا المأخوذة من الفئران WGPtrained التي أعيد تنشيطها باستخدام LPS أنتجت عددًا أكبر بكثير من TNF- و IL -6 (الشكل 2g) ، مما يدل على أن خلايا البنكرياس CD11b بالإضافة إلى WGP قد تم تدريبها.

تم تأكيد هذه النتائج أيضًا باستخدام RT-PCR ، حيث تبين أن خلايا البنكرياس CD11b plus المصنفة من الفئران المدربة PBS أو WGP تنتج المزيد من TNF- و IL -6 و iNOS وأقل من IL -10 بسبب علاج WGP (الشكل 2 ح). نظرًا لأن المناعة المدربة مرتبطة بإعادة البرمجة الأيضية والجينية ، قمنا بقياس مستويات اللاكتات لفحص ما إذا كان تحلل السكر متورطًا. في الواقع ، تفرز خلايا WGPtrained CD11b plus المزيد من اللاكتات مقارنة بالخلايا غير المدربة (الشكل التكميلي 1g). قمنا أيضًا بقياس تعديلات هيستون لخلايا CD11b plus المدربة على WGP. كما هو مبين في الشكل 2I ، تم تحسين مستويات التعبير عن H3K4me3 و H3K27Ac بشكل كبير في خلايا CD11b plus المدربة بواسطة WGP. تم الكشف عن هذا من خلال كل من تحليل لطخة غربية (الشكل 2i ، أعلى) والمقايسة الكمي ELISA (الشكل 2i ، أسفل). تشير هذه النتائج مجتمعة إلى أن WGP لا يحرض فقط النمط الظاهري المدربين في الخلايا التي تنتقل إلى البنكرياس ، بل يخضعون أيضًا لإعادة البرمجة الأيضية والتخلقية.

تم بعد ذلك إجراء تسلسل الحمض النووي الريبي (RNA-Seq) على خلايا CD45 المصنفة بواسطة FACS بالإضافة إلى CD11b بالإضافة إلى 7 أيام بعد إدارة PBS أو WGP للحصول على توصيف غير متحيز وشامل لمجموعات الخلايا النخاعية في البنكرياس. تم اكتشاف ما مجموعه 1459 جينًا معبرًا تفاضليًا (DEGs) ، مع 661 جينًا منظمًا و 798 جينًا خاضعًا للتنظيم في إعداد WGPtrained (الشكل 2 ي). أكدت تحليلات تخصيب مجموعة الجينات (GSEA) كذلك التنظيمات التي تم التحقيق فيها مسبقًا في المسارات المتعلقة بإنتاج TNF- و IL -6 (الشكل التكميلي 2 أ). من خلال التدفق الملحوظ للخلايا المناعية ، تم إثراء جميع DEGs المتعلقة بالتجاذب الكيميائي للكرات البيضاء ، وهجرة الكريات البيض (الشكل التكميلي 2 أ) ، والتركيز الكيميائي أحادي الخلية ، وهجرة البلاعم ، وهجرة الكريات البيض النخاعية (الشكل التكميلي 2 ب) بشكل كبير في مجموعة WGP. بالإضافة إلى ذلك ، مسارات Reactome CLEC7A dectin -1 تم إثراء مسارات مستقبلات المحاضرات من النوع C بشكل كبير ، مما يؤكد مشاركة Dectin -1 في هذه العملية (الشكل التكميلي 2 ج).

بالنظر إلى أن السكان النخاعي قد لوحظ أنهم مسؤولون عن توسع CD45 plus وأن الخلايا النخاعية هي مجموعة متنوعة من السكان ، تم إجراء تحليل CyTOF على البنكرياس من الفئران التي عولجت بـ PBS أو WGP قبل 7 أيام. تم تحديد مجموعات الخلايا داخل البنكرياس ومقارنتها بين مجموعات العلاج ؛ أشارت مخططات t-SNE إلى أنه بعد معالجة WGP كان هناك انخفاض نسبي في عدد سكان البلاعم المقيمين والذي يعبر بشكل كبير عن علامات M2 مثل CD206. لاحظنا أيضًا ظهور العديد من مجموعات النخاع الشوكي في البنكرياس والتي تم تعريفها على أنها Ly6C بالإضافة إلى وحيدات مشتقة من البلاعم ، وتسلل حيدات التهابية ، وضامة نشطة ، و CD206 بالإضافة إلى الضامة المنشطة (الشكل 2 ك والشكل التكميلي 2 د). أظهرت مخططات viSNE الموصولة على مجموعة CD11b plus توسعًا واضحًا في الخلايا الأحادية والضامة ، مع زيادات إضافية في الخلايا المتغصنة (DC) ، والعدلات ، ومجموعات NK بعد علاج WGP (الشكل التكميلي 2 هـ).

بالإضافة إلى ذلك ، توضح هذه التحليلات أنه بعد تدريب WGP وتحفيز LPS ، تم إنتاج TNF بشكل أساسي بواسطة الخلايا الضامة والوحيدة ، وتم إنتاج IL -6 و iNOS بشكل أساسي بواسطة الضامة ، وتم إنتاج Granzyme-B بواسطة خلايا NK والضامة ، وكان IFN تنتج بشكل أساسي عن طريق العدلات (الشكل التكميلي 2f). يكشف هذا أنه على الرغم من تغيير العديد من مجموعات الخلايا بسبب علاج WGP ، فإن الخلايا الأولية التي تم تدريبها بواسطة WGP ، وفقًا لتقييم زيادة تعبير TNF ، هي الخلايا الضامة والخلايا الوحيدة ، وأنه لا يوجد نوع خلية واحد مسؤول عن النمط الظاهري للمناعة المدربة التي لوحظ.

لتقييم ما إذا كانت ظاهرة تدفق الخلايا النخاعية وتنشيطها تعتمد على مجموعات مناعية أخرى أو مدفوعة بالكامل بالخلايا النخاعية نفسها ، فقد استنفدنا مجموعات مناعية معينة ولاحظنا النمط الظاهري المدربين. تم استخدام AntiCD4 و Anti-CD8 mAbs بمفردهما وبالاقتران لاستنفاد الخلايا التائية ، وتم تقييم كفاءة الاستنفاد (الشكل التكميلي 3 أ) ، ولوحظ النمط الظاهري المدرب للخلايا النخاعية (الشكل التكميلي 3 ب ، ج). تم أيضًا استنفاد الخلايا القاتلة الطبيعية باستخدام mAb PK136 ، وتم تقييم كفاءة الاستنفاد (الشكل التكميلي ثلاثي الأبعاد) ولوحظ النمط الظاهري المدرب (الشكل التكميلي 3 هـ ، و). في غياب الخلايا التائية والخلايا القاتلة الطبيعية ، لا يزال يُلاحظ أن الخلايا النخاعية يتم تدريبها بواسطة WGP. تم تقييم النمط الظاهري المدرب أيضًا في فئران موردي المواد النووية التي تفتقر إلى الخلايا البائية والخلايا التائية والخلايا القاتلة الطبيعية (الشكل التكميلي 3 ز ، ح). لا تزال هذه الفئران تظهر نمطًا ظاهريًا واضحًا للمناعة المدربة.

أخيرًا ، استنفدنا العدلات باستخدام Ly6G mAb. على الرغم من استنفاد الخلايا المحببة ، ما زلنا نلاحظ التدريب الناجم عن WGP في CD11b بالإضافة إلى المقصورة النخاعية (الشكل التكميلي 3i-k). مجتمعة ، تدعم بياناتنا أن الخلايا النخاعية المتسللة في البنكرياس يتم تدريبها بواسطة -Glucan دون مساعدة أو تأثير مجموعات المناعة التكيفية أو الخلايا القاتلة الطبيعية أو الخلايا المحببة.

يكشف تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية عن مجموعات محددة من البلاعم / الخلايا الوحيدة المسببة للالتهابات والتي تنتقل إلى البنكرياس عند العلاج بالجلوكان.

نظرًا لأن تحليلات CyTOF الخاصة بنا قد كشفت عن ظهور العديد من المجموعات السكانية غير المميزة سابقًا في البنكرياس بعد علاج WGP ، لاكتساب فهم أكثر تعمقًا لمجموعات الخلايا الموجودة في البنكرياس ، تم إجراء تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية (scRNA-Seq) على خلايا CD45 plus المصنفة من الفئران المعالجة بـ PBS والفئران المعالجة بـ WGP ثلاثة (3- يوم WGP) وقبل سبعة أيام (7- يوم WGP). تمثيل UMAP ثنائي الأبعاد لـ 11،132 خلية مجمعة من ثلاث عينات مع مجموعات ناتجة عن أقرب جيران k وخوارزميات Louvain مقسمة إلى 19 مجموعة متميزة (الشكل 3 أ ، ب). تم تقييم التردد النسبي لكل مجموعة داخل كل مجموعة تجريبية.

هنا ، لوحظت زيادات كبيرة في تواتر المجموعات 3،4 و 10 بحلول اليوم 7 بعد علاج WGP ، جنبًا إلى جنب مع الاختفاء القريب للمجموعة 5 (الشكل 3 ج). كما تبين أن الترددات النسبية للعديد من المجموعات السكانية الأخرى تتناقص بمرور الوقت. ومع ذلك ، من المحتمل أن يكون هذا الاتجاه الواضح بسبب الزيادة النسبية في وتيرة السكان الآخرين. بشكل عام ، تظهر المجموعات 3،4،10 و 5 بشكل ملحوظ تم تغييرها بسبب معالجة WGP (الشكل ثلاثي الأبعاد).

كانت المجموعات السكانية التي لوحظ سابقًا أنها تغيرت بشكل كبير بمرور الوقت بسبب علاج WGP جزءًا من المقصورة النخاعية ، كما هو محدد بواسطة تعبير CSF1R (الشكل ثلاثي الأبعاد ، هـ). نظرًا لأن هذه البيانات جنبًا إلى جنب مع النتائج السابقة تشير إلى أن مجموعات النخاع الشوكي تدفع التغيرات المناعية المرتبطة بعلاج WGP ، فقد تم فحص مجموعات CSF1R بالإضافة إلى المجموعات الديناميكية 3،4،10 و 5 بمزيد من التفصيل كما هو موضح في مخططات الكمان (الشكل 3f) والنقطة المؤامرات التي تمثل أفضل 12 جينًا للعلامة بمتوسط ​​درجة Z لكل مجموعة (الشكل 3g). المجموعة 5 ، التي كانت موجودة في فئران PBS ولكنها اختفت فعليًا بعد أن تم تحديد علاج WGP على أنها بلاعم مقيمة. عبرت هذه المجموعة أيضًا بشكل ملحوظ عن MAF و APO اللذين يرتبطان باستقطاب M2 الضامة. لم تتغير المجموعة 19 إلى حد كبير بمرور الوقت ، لذا لم يتم وصفها بمزيد من التفصيل ، ولكنها عرضت ملف تعريف تعبير مشابهًا للمجموعة 5 ، وبالتالي فهي تمثل أيضًا مجموعة فرعية من الضامة المقيمة في الأنسجة. كان للمجموعة 10 ، مجموعة بلاعم Ly6Clo ، أيضًا ملف تعريف تعبير مشابه لمجموعة البلاعم المقيمة 5 ، وتوقيعات تعبير بارزة لـ ARG1 و FABP. نحن نفترض أن هذه المجموعة من الضامة مقيمة معاد الاستقطاب نظرًا لعدم وجود تعبير Ly6C ، والتشابه مع سكان البلاعم المقيمين ، واختفاء السكان المقيمين بعد علاج WGP. تشترك المجموعتان 3 و 4 في التوصيف الظاهري العام مثل Ly6CHi تسلل وحيدات / بلاعم. كان للمجموعة 4 تعبير ملحوظ عن Chil3 و Plac8 ، اللذين تم تحديدهما معًا بواسطة مجموعة أخرى لتحديد الخلايا الضامة المتسللة Ly6Chi.

أخيرًا ، أظهرت المجموعة 3 ، التي كانت غائبة في الفئران الساذجة وأظهرت أكبر زيادة في التردد النسبي بين جميع المجموعات التي أعقبت علاج WGP ، توقيعات كبيرة على TNFAIP2 و IL1B و SOD2 و PRDX5 ، مما يشير إلى النمط الظاهري المؤيد للالتهابات. وبالتالي تم تحديد المجموعة 3 على أنها Ly6CHi التهابات تسلل وحيدات / بلاعم. ومن المثير للاهتمام ، ضمن المجموعة الفرعية النخاعية ، أن السكان الذين يظهرون زيادة بسبب علاج WGP هم السكان الوحيدون الذين يعبرون عن TNFAIP2 ، مما يشير إلى أن الخلايا التي تدخل البنكرياس هي على الأرجح خلايا نخاعية مدربة.

لمزيد من توصيف حالة التنشيط لكل من المجموعات النخاعية الديناميكية الأربعة ، تم إنشاء مخططات نقطية لإظهار التعبير النسبي للجينات المرتبطة بالحالة المؤيدة للالتهابات والحالة المضادة للالتهابات (الشكل 3 ح). أظهرت المجموعتان 3 و 4 ، الخلايا الوحيدة المتسللة / الضامة ، أنها مؤيدة للالتهابات ، وكانت الضامة المقيمة مضادة للالتهابات ، وأظهرت الضامة في المجموعة 10 نمطًا ظاهريًا وسيطًا. بالاتفاق مع البيانات السابقة لـ CyTOF وبيانات التدفق الخلوي ، فإن بيانات scRNA-Seq هذه تميز هذه الخلايا النخاعية التي تم تحديدها حديثًا في البنكرياس لتكون مجموعة غير متجانسة من الخلايا الضامة المحولة والمستقطبة Ly6CLo والضامة المؤيدة للالتهابات Ly6CHi المتسللة المشتقة من الخلايا الأحادية التي تعبر عن التوقيعات. من المناعة المدربة.

يعتمد التدفق الناتج عن WGP وتدريب الخلايا النخاعية في البنكرياس على CCR 2- ويحدث في وقت مبكر من العلاج بعد 24 ساعة من WGP.

درسنا بعد ذلك الآليات المسؤولة عن هذا التدفق للخلايا إلى البنكرياس. تم استخدام بيانات RNA-Seq لتوصيف الكيموكينات والسيتوكينات التي تم تنظيم تعبيرها بشكل كبير عند علاج WGP (الشكل 4 أ). في حين تم تنظيم العديد من الكيميائيات والسيتوكينات ، أثارت ملاحظتنا لتدفق البلاعم والخلايا الأحادية إلى البنكرياس اهتمامًا خاصًا بـ CCR2 نظرًا لتورطها في تجنيد الوحيدات والبلاعم وخروج الخلايا الأحادية من نخاع العظام. أظهرت بيانات CyTOF أيضًا زيادة بارزة في الخلايا الإيجابية لـ CCR 2- بعد علاج WGP (الشكل 4 ب) وأظهرت scRNA-Seq تعبيرًا مميزًا عن CCR2 في المجموعتين 3 و 4 ، وهما المجموعتان اللتان أظهرتا الأكثر تميزًا الأنماط الظاهرية للمناعة المدربة (الشكل 4 ج). بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت معالجة 24 ساعة بعد WGP ، ليسات البنكرياس الكاملة 30- زيادة أضعاف في CCL2 ، وهو يجند لـ CCR2 ويشارك في التوسط الكيميائي أحادي الخلية (الشكل 4 د).

أظهرت بيانات RNA-Seq توقيعًا واضحًا لتوظيف الخلايا المناعية والاتجار بها ، كما أشارت هذه البيانات إلى أن WGP نظم تكاثر الكريات البيض والخلايا أحادية النواة (الشكل 4 هـ). للتحقق مما إذا كانت الخلايا النخاعية CCR2 بالإضافة إلى الخلايا النخاعية تتكاثر بمجرد وصولها إلى البنكرياس ، تم تقييم النسبة المئوية للخلايا CCR2 plus التي تعبر عن Ki67 في الفئران المعالجة بـ PBS و WGP. بعد علاج WGP كانت هناك زيادة في إجمالي الخلايا المتكاثرة (الشكل 4f) وكانت نسبة كبيرة من هذه الخلايا المتكاثرة عبارة عن CD11b بالإضافة إلى CCR2 plus (الشكل 4g). قمنا بعد ذلك بالتحقيق في مساهمة خلايا CCR2 plus في النمط الظاهري المدرب. بعد 7 أيام من العلاج في الجسم الحي باستخدام PBS أو WGP ، تم قياس مجموعات CCR2 plus و CCR2- من أجل استجابة مدربة (الشكل 4 ح). أشارت هذه البيانات إلى أن غالبية الخلايا التي تم تدريبها بعد علاج WGP كانت CCR2 plus.

لمزيد من البحث عن دور CCR2 في الخلايا الوحيدات / الضامة المدربة في جلوكان ، تم تدريب الفئران CCR2 باستخدام WGP-glucan. لم تخضع الفئران CCR2 لتدفق CD45 plus (الشكل 4i) أو CD45 بالإضافة إلى CD11b بالإضافة إلى الخلايا النخاعية (الشكل 4j) إلى البنكرياس ، ولم تُظهر استجابة مدربة كما أظهرها إنتاج TNF (الشكل. 4K). تشير هذه البيانات إلى أن CCR2 يلعب دورًا مهمًا في هجرة الخلايا المناعية الفطرية إلى البنكرياس وتحفيز المناعة المحيطية المدربة في البنكرياس.

كما لوحظ سابقًا ، يعد CCR2 مهمًا للتجنيد المبكر للخلايا الأحادية ، ولكنه أقل أهمية للتجنيد المتأخر. حتى الآن ، لاحظنا أيضًا أنه في 7 أيام بعد تدريب WGP ، كان CCR2 أمرًا بالغ الأهمية لتوظيف الخلايا النخاعية المدربة في البنكرياس. قمنا بعد ذلك بفحص ما إذا كان هذا التدفق قد حدث في وقت مبكر عند تدريب WGP وما إذا تم تجنيد الخلايا النخاعية CCR2 بالإضافة إلى البنكرياس. تحقيقا لهذه الغاية ، عولجت الفئران باستخدام PBS أو WGP ، وتم تحليل أنسجة البنكرياس بعد 24 و 48 ساعة. من المثير للدهشة ، أنه في وقت مبكر من 24 ساعة بعد تدريب WGP ، زيادات في CD45 plus (الشكل التكميلي 4 أ) ، CD11b plus (الشكل التكميلي 4 ب) ، F4 / 80 plus (الشكل التكميلي 4 ج) ، Ly6C plus (الشكل التكميلي 4 د) ، و CD11b بالإضافة إلى CCR2 plus (الشكل التكميلي 4 هـ) لوحظت الخلايا.

بالإضافة إلى ذلك ، تبين أن هذه الخلايا النخاعية قد تم تدريبها منذ 24 ساعة بعد علاج WGP (الشكل التكميلي 4f). تسلط هذه الملاحظة الضوء على الاختلاف بين هذه النتائج والأنماط الظاهرية التي لوحظت سابقًا للمناعة المدربة والتي لا تبدأ عادة إلا بعد 3 أيام على الأقل من التدريب.

الشكل 4 CCR2 مطلوب لتهريب الخلايا المناعية في البنكرياس. خريطة حرارية للكيموكينات والسيتوكينات التي تم تنظيمها في 7- يوم WGPtreated CD11b بالإضافة إلى الخلايا بناءً على بيانات RNA-Seq. ب مؤامرة viSNE لـ CD11b بالإضافة إلى سكان البنكرياس في PBS و 7- الفئران المدربة على WGP يوميًا ، مع تسليط الضوء على التعبير عن CCR2. الصور التي تم إنشاؤها باستخدام بيانات CyTOF. تظهر بيانات c scRNA-Seq UMAP للمجموعات النخاعية التي تعبر عن CCR2. d تعبير CCL2 في محللات البنكرياس بالكامل لمدة 24 ساعة بعد علاج WGP تم قياسه بواسطة RT-PCR (n=6). **** p=0. 0 001. أنتجت GSEA قطعًا تخصيبًا للجينات المتعلقة بتكاثر الكريات البيض في CD11b بالإضافة إلى خلايا البنكرياس من 7- يوم تم تدريبه بواسطة WGP مقارنةً بفئران PBS. تم استخدام PBS كعنصر تحكم ومقارنته بـ WGP. f البيانات الملخصة للنسبة المئوية من CD45 بالإضافة إلى خلايا البنكرياس التي هي Ki67 plus في PBS و 7- يوم من الفئران المدربة على WGP (ن=4). *** ص=0. 0007. تم وضع بوابات g لأول مرة على CD45 بالإضافة إلى Ki67 بالإضافة إلى السكان. تُظهر المخططات النسبة المئوية لـ CD45 بالإضافة إلى Ki67 بالإضافة إلى خلايا البنكرياس المتكاثرة والتي هي CD11b بالإضافة إلى CCR2 plus في PBS و 7- الفئران المدربة على WGP يوميًا (n=4). * ص=0. 0261. h تمت إعادة تنشيط خلايا البنكرياس من PBS و 7- يوم من الفئران المدربة على WGP (ن=5) باستخدام LPS وتم قياس النسبة المئوية للخلايا الإيجابية والسلبية لـ CCR2 التي تنتج TNF في كل حالة. تم بوابات الخلايا لأول مرة على مجموعة فرعية CD45 بالإضافة إلى CD11b plus. تم عرض مخططات نقطة تمثيلية وبيانات ملخصة. * p=0. 022، ** p=0. 0073، *** p=0. 0007. تم علاج الفئران i – k WT و CCR2 باستخدام PBS أو WGP وتم تقييم النسبة المئوية لخلايا I CD45 plus في البنكرياس (**** p <0.0001) و j تم تقييم النسبة المئوية للخلايا CD45 plus التي كانت CD11b plus . ** ص=0. 0013. ك النسبة المئوية للخلايا CD45 plus CD11b plus التي تنتج TNF. يتم عرض مخططات التدفق التمثيلية والبيانات الملخصة. كل نقطة تمثل بيانات من فأر واحد. *** ص=0. 0002. (i – k: WT PBS n=9، WT WGP n=9، CCR2 - / - PBS n=8، CCR2 - / - WGP n=8).

تم استخدام اختبار t للطالب غير ثنائي الذيل في d و f و g ، بينما تم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه مع مقارنات متعددة في h – k. تم تمثيل البيانات على أنها متوسط ​​± SEM. نانوثانية ليست كبيرة. في f - k ، تمثل كل عينة حيوانًا مستقلًا بيولوجيًا تم الحصول عليه من خلال تجربة مستقلة واحدة والتي تكررت مرتين على الأقل للتحقق من النتائج.

تُظهر الخلايا النخاعية المتسللة من البنكرياس المدربة بواسطة WGP استجابات مدربة للعوامل التي تفرز من سرطانات البنكرياس والبلعمة المعززة والسمية الخلوية بوساطة ROS على الخلايا السرطانية.

كما أوضحنا أن استخدام WGP كمحفز أولي ينتج عنه خلايا مناعية فطرية يتم تدريبها على الاستجابة بشكل أقوى للتعرض الثانوي لـ LPS وأن هذه الخلايا تتراكم في البنكرياس بعد العلاج ، أردنا معرفة ما إذا كانت المحفزات الثانوية مرتبطة بأورام البنكرياس قد تثير أيضًا هذه الاستجابة المدربة. تحقيقًا لهذه الغاية ، قمنا أولاً بالتحقيق فيما إذا كانت خلايا سرطان البنكرياس نفسها قادرة على الحصول على الاستجابة المدربة التي يسببها WGP. للتحقيق في هذا السؤال ، تمت زراعة الضامة البريتونية باستخدام PBS أو WGP في المختبر وبعد 7 أيام تمت إعادة تحفيزها باستخدام LPS ، والطاف من الخلايا المستزرعة من بنكرياس فأر ساذج ، والطاف من خلايا KPC المستزرعة ، والتي هي عبارة عن خط خلية من a ورم البنكرياس على خلفية C57BL / 6 مشتق من LSL-KrasG12D / plus ؛ LSL-Trp53R172H / زائد ؛ Pdx 1- فئران Cre (KPC) أو خلايا سرطان البنكرياس Pan02 لمدة 24 ساعة. تم قياس إنتاج عامل نخر الورم في المادة الطافية بواسطة ELISA.

مقارنة بالمادة الطافية من خلايا البنكرياس الطبيعية المستزرعة والتي لم تنشط الضامة المدربة سابقًا ، فإن المادة الطافية من الخلايا السرطانية للبنكرياس و Pan02 KPC المستزرعة حفزت المزيد من TNF - - الإنتاج في الجلوكان الضامة المدربة (الشكل التكميلي 5 أ). بالإضافة إلى ذلك ، للتحكم في احتمال أن تؤدي عملية البلعمة نفسها إلى تنشيط الخلايا ، تمت زراعة الضامة البريتونية بخرز جسيمات بوليسترين 3 ميكرومتر ثم تمت إعادة تحفيزها باستخدام PBS أو LPS (الشكل التكميلي 5 ب). أظهرت النتائج أن الإنتاج المعزز لعامل نخر الورم كان خاصًا بتدريب WGP.

تم اختبار ذلك بعد ذلك في بيئة خارج الجسم الحي حيث عولجت الفئران باستخدام PBS أو WGP وبعد 7 أيام تم حصاد البنكرياس ، وتم إثراء خلايا البنكرياس النخاعية ، ثم إعادة تحفيزها باستخدام طاف من KPC المستزرع (الشكل التكميلي 5 ج) أو Pan02 الخلايا (الشكل التكميلي 5 د). لقد أظهرت أن WGP في خلايا CD11b المدربة في الجسم الحي بالإضافة إلى الخلايا النخاعية في البنكرياس أنتجت عددًا أكبر بكثير من TNF- استجابة للوسائط المكيفة للورم. تفرز الخلايا السرطانية نفسها العديد من العوامل التي قد تعمل على وجه التحديد كمحفز ثانٍ في المناعة المدربة. من المعروف أن الخلايا السرطانية في البنكرياس تعبر عن مستويات عالية من الأنماط الجزيئية المرتبطة بالتلف (DAMPs) والعوامل المؤيدة للالتهابات ، مثل العامل المثبط لهجرة البلاعم (MIF). MIF هو سيتوكين معروف أنه يفرز بتركيزات عالية بواسطة أورام البنكرياس التي يمكن أن تعمل مباشرة على الخلايا النخاعية.

في الواقع ، كان MIF موجودًا في طاف خلايا KPC و Pan02 كما تم تقييمه بواسطة ELISA (الشكل التكميلي 5 هـ). وهكذا افترضنا أن MIF قد يكون عاملاً محتملاً يفرز الورم ويمكن أن يكون بمثابة إشارة ثانية في إعداد المناعة المدربة التي يسببها WGP. للتحقيق في ذلك ، تمت إعادة تنشيط الخلايا النخاعية البنكرياسية من الفئران المدربة على WGP في الجسم الحي بتركيز مماثل من MIF المؤتلف (rMIF) الموجود في الوسائط المكيفة للورم. كما هو مبين في الشكل التكميلي 5f ، أظهرت خلايا البنكرياس النخاعية التي تم تدريبها مسبقًا باستخدام WGP إنتاج TNF محسنًا عند إعادة تنشيط rMIF. بشكل جماعي ، تشير هذه البيانات إلى مفهوم أن الخلايا السرطانية في البنكرياس ، من خلال العوامل القابلة للذوبان التي تطلقها ، يمكن أن تكون بمثابة إشارة ثانية لتنشيط الخلايا النخاعية في البنكرياس التي تم تدريبها بواسطة WGP.

قمنا بعد ذلك بفحص ما إذا كانت هذه الخلايا المناعية الفطرية المدربة بواسطة WGP قد عززت الخصائص الجوهرية المضادة للورم. أشارت بيانات تسلسل الحمض النووي الريبي إلى أن الآليات المرتبطة بالبلعمة قد تم تنظيمها في إعداد WGP (الشكل 5 أ) ، والذي افترضنا أنه يمكن أن يكون آلية واحدة لوظيفة مكافحة الورم. تم إدراج أفضل 20 مسارًا من مسارات KEGG المخصبة والعمليات البيولوجية في علم الجينات (GO) عند تدريب WGP في الجدولين التكميليين 1 و 2. أدى علاج WGP إلى زيادة ملحوظة في إمكانات البلعمة للخلايا المناعية الكلية CD45 بالإضافة إلى الخلايا المناعية (الشكل 5 ب) وفي CD11b بالإضافة إلى الخلايا النخاعية (الشكل 5 ج).

بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت الخلايا النخاعية المدربة في الجسم الحي زيادة في البلعمة لخلايا الورم KPC (الشكل 5 د). قمنا بعد ذلك بتقييم ما إذا كانت الخلايا النخاعية المدربة بواسطة WGP أظهرت زيادة في السمية الخلوية لخلايا KPC. أشارت بيانات RNA-Seq إلى أن DEGs المتعلقة بعمليات التخليق الحيوي لأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) والتنظيم الإيجابي لعمليات التمثيل الغذائي لـ ROS قد تم إثرائها بشكل كبير في الخلايا النخاعية المعالجة بـ WGP (الشكل 5 هـ).

نتيجة لذلك ، افترضنا أن زيادة إنتاج ROS بواسطة WGP من شأنه أن يؤدي إلى زيادة السمية الخلوية لخلايا البنكرياس النخاعية على الخلايا السرطانية KPC. لاستكشاف هذه الفرضية ، تم عزل خلايا CD11b plus من البنكرياس من الفئران المدربة أو غير المدربة على glucan وتم طلاءها بخلايا KPC التي تعبر عن لوسيفيراز (KPCLuc plus) لمدة 24 ساعة. أظهرت الخلايا النخاعية المدربة بواسطة WGP ثلاثة أضعاف السمية الخلوية تجاه خلايا الورم KPC ، وتثبيط إنتاج ROS باستخدام مثبط N-Acetyl Cysteine ​​(NAC) ألغى تمامًا الزيادة التي أحدثها WGP في السمية الخلوية (الشكل 5f). يلعب بيروكسيد الدهون الناجم عن ROS دورًا مهمًا في موت الخلايا المبرمج ، والالتهام الذاتي ، و ferroptosis. لذلك استخدمنا مثبطين إضافيين من أنواع ROS ، وهما Trolox و deferoxamine (DFO) ، لفحص تأثيرهما على السمية الخلوية.أدت إضافة Trolox و DFO إلى تثبيط WGPtrained CD11b بالإضافة إلى السمية الخلوية بوساطة الخلايا (الشكل 5g) ، مما يشير إلىأن بيروكسيديز الشحوم المستحث بـ ROS متورط ، جزئيًا على الأقل ، في السمية الخلوية هذه التي تتوسطها أنواع الأكسجين التفاعلية.

التين .5 تظهر الخلايا النخاعية المتسللة للبنكرياس المدربة من قبل WGP البلعمة المعززة والسمية الخلوية بوساطة ROS. مخططات التخصيب (GSEA) وخريطة الحرارة للجينات ذات الصلة بالتنظيم الإيجابي للبلعمة في خلايا CD11b plus من 7- يوم تم تدريبه بواسطة WGP مقارنة بفئران PBS. ب النسبة المئوية لخلايا CD45 بالإضافة إلى خلايا البنكرياس التي قامت ببلعم جسيم pHrodo Green Staph Aureus في PBS (n=10) و 7- فئران WGP (n=9) جنبًا إلى جنب مع MFI الخاص بـ pHrodo جسيم المكورات العنقودية الذهبية. كل نقطة تمثل بيانات من فأر واحد. * ص {{1 0}. 043 ، **** ص <0.0001. ج النسبة المئوية لخلايا CD11b بالإضافة إلى خلايا البنكرياس النخاعية التي قامت ببلعم جسيم pHrodo Green Staph Aureus في فئران PBS (n=13) و 7- يوم WGP (n=13). تم وضع البوابات لأول مرة على الخلايا CD45 plus. يظهر MFI لجسيم pHrodo Green Staph Aureus. ** p=0. 0021، *** p=0. 0002. د النسبة المئوية لخلايا CD11b بالإضافة إلى خلايا البنكرياس النخاعية التي تبلعم KPCGFP بالإضافة إلى الخلايا السرطانية في فئران PBS (n=5) و 7- يوم WGP (n=5). * ص=0. 0103. تم وضع البوابات لأول مرة على الخلايا CD45 plus. كما يتم عرض MFI الملخص لإشارة GFP plus. * ص=0. 0379. e مخططات التخصيب (GSEA) وخريطة الحرارة للجينات ذات الصلة بعمليات التخليق الحيوي لأنواع الأكسجين التفاعلية والتنظيم الإيجابي لعمليات التمثيل الغذائي لأنواع الأكسجين التفاعلية في خلايا CD11b plus من 7- يوم من تدريب WGP مقارنة بفئران PBS. و النتائج الملخصة من اختبار السمية الخلوية حيث تم فرز وحضانة خلايا CD11b plus من PBS و 7- يوم من الفئران المدربة على WGP بمعدل 1:20 KPCLuc plus: CD11b plus الخلايا لمدة 24 ساعة. تم استخدام NAC لمنع تعبير ROS وتم تقييم السمية الخلوية للورم عن طريق التلألؤ (PBS n=3 ، WGP n=4). g البيانات الملخصة من فحوصات السمية الخلوية حيث تم فرز خلايا CD11b plus من الفئران المدربة على WGP 7- واحتضانها بمعدل 1:20 KPCLuc plus: CD11b plus الخلايا لمدة 24 ساعة. تمت إضافة Trolox أو DFO أو عناصر التحكم الخاصة بالمركبة وتم تحديد السمية الخلوية للورم عن طريق قياس التألق (ن=3). * ص=0. 0255 ، ** ص=0. 0019. تم استخدام اختبار t للطالب غير ثنائي الذيل في b-d ، واستخدم g و ANOVA أحادي الاتجاه مع مقارنات متعددة لـ f. تم تمثيل البيانات على أنها متوسط ​​± SEM. نانوثانية ليست كبيرة. في b-g ، تمثل كل عينة حيوانًا مستقلًا بيولوجيًا تم الحصول عليه من خلال تجربة مستقلة واحدة والتي تكررت مرتين على الأقل للتحقق من النتائج.

في النهاية ، تحدد هذه البيانات أن الخلايا السرطانية في البنكرياس قادرة على إعادة تنشيط الخلايا النخاعية المتسللة WGPtrained في البنكرياس وأن هذه الخلايا تظهر البلعمة المعززة والسمية الخلوية بوساطة ROS.

تقلل المناعة المدربة التي يسببها WGP من نمو الورم وتطيل البقاء على قيد الحياة في النماذج المثلية لسرطان البنكرياس.

قمنا بعد ذلك بالتحقيق فيما إذا كانت الاستجابات المناعية الفطرية المدربة بوساطة الجلوكان في البنكرياس ستؤدي إلى إنشاء بيئة مكروية مضادة للورم قد تكون كافية للتغلب على TME المثبط للمناعة بشكل مميز لـ PDAC. وفقًا لذلك ، تم إعطاء الفئران جرعة واحدة من PBS أو WGP في اليوم 7 ، وفي اليوم 0 ، تم زرع خلايا 1 × 105 KPC أو KPCLuc plus بشكل تقويمي في ذيل البنكرياس (الشكل 6 أ). تم التخلص من الفئران في اليوم الواحد والعشرين وقياس وزن الورم (الشكل 6 ب). في وضع حقن خلايا KPCLuc plus ، حُقنت الفئران بركيزة لوسيفيراز ، وتم تصوير الأورام (الشكل 6 ج).

أظهرت كلتا الدراستين انخفاضًا ملحوظًا في عبء الورم نتيجة علاج WGP ، كما تم إطالة فترة البقاء على قيد الحياة بشكل ملحوظ في الفئران المدربة على WGP (الشكل 6 د). أظهر التنميط المناعي للأورام زيادة مستمرة في CD45 بالإضافة إلى الخلايا المناعية ، و CD11b بالإضافة إلى الخلايا النخاعية ، و F4 / 80 بالإضافة إلى الضامة في الإعداد المدرب بواسطة WGP (الشكل 6 هـ). أظهر CD11b بالإضافة إلى الخلايا النخاعية (الشكل 6f) و CD11b بالإضافة إلى F4 / 80 بالإضافة إلى الضامة (الشكل 6g) داخل الورم زيادة كبيرة في إنتاج TNF- بسبب WGP. يرتبط كل من عدد متزايد من CD11b بالإضافة إلى الخلايا النخاعية (الشكل 6 ح ، يسار) وزيادة في النسبة المئوية للخلايا CD11b بالإضافة إلى إنتاج TNF- (الشكل 6 ح ، يمين) بشكل كبير مع انخفاض عبء الورم. لم تظهر خلايا CD4 plus ولا CD8 plus T زيادة في IFN- ، مما يدعم أيضًا أن انخفاض عبء الورم كان مدفوعًا بالخلايا النخاعية المدربة بواسطة WGP (الشكل 6i). كما لوحظت تأثيرات مماثلة مضادة للورم في الفئران المزروعة بتقويم العظام بأورام Pan02 (الشكل التكميلي 6 أ).

وللتأكيد بشكل أكبر على أن الخلايا المناعية الفطرية هي المسؤولة عن الاستجابات المناعية المضادة للورم المرصودة ، تم زرع أورام KPC المثلي في فئران NSG. على غرار الفئران WT ، أظهرت فئران NSG أيضًا انخفاضًا كبيرًا في حجم الورم بسبب تدريب WGP ، مما يؤكد أن التأثيرات المضادة للورم لـ WGP كانت مدفوعة بخلايا مناعية فطرية وتعمل بشكل مستقل عن الاستجابات التكيفية (الشكل التكميلي 6 ب). كالافاتي وآخرون. قد أظهر أن التدريب المناعي الفطري لتشكيل الحبيبات يعزز المناعة المضادة للورم.

على الرغم من أننا لم نشهد مساهمة مهمة من الخلايا المحببة في النمط الظاهري لدينا من المناعة المدربة ، فقد درسنا ما إذا كانت الخلايا الحبيبية متورطة في التخفيض المعتمد على WGP في أورام البنكرياس عن طريق استنفاد العدلات ومراقبة نمو الورم في الفئران المعالجة بـ PBS و WGP. تم تقييم كفاءة استنفاد العدلات في البنكرياس (الشكل التكميلي 6 ج) جنبًا إلى جنب مع عبء ورم البنكرياس (الشكل التكميلي 6 د). أظهرت نتائجنا انخفاضًا كبيرًا في حجم الورم في مجموعة WGP في غياب العدلات.

التين. 6 إن تحريض المناعة المدربة في البنكرياس له تأثيرات مضادة للأورام. مخطط تجريبي. (ب) تلقت الفئران C57BL / 6 حقنة IP واحدة من WGP أو PBS وزُرعت فئران 7 أيام بتقويم مع خلايا سرطان البنكرياس KPC. يتم عرض الصور التمثيلية للأورام والتحليل الكمي لوزن الورم. تم قياس وزن الورم في اليوم 21 (PBS n=10 ، WGP n=12). *** ص=0. 0004. ج C57BL / 6 الفئران (ن {12}}) تلقت حقنة IP واحدة من WGP أو PBS وبعد 7 أيام تم زرعها لتقويم العظام مع KPC بالإضافة إلى خلايا سرطان البنكرياس Luc. في اليوم 21 من الزرع بعد الورم ، أعطيت الفئران ركيزة IP luciferin bioluminescent ووضعت في مصور فوتون لقياس حجم الورم في الجسم الحي. * ص=0. 0403. د بقاء الفئران في المخطط التجريبي الموضح في أ ، باستخدام خلايا KPC (ن=5). ** ص=0. 0018. التنميط الظاهري للأورام يوضح النسبة المئوية للخلايا القابلة للحياة والتي هي CD45 plus ، ونسبة CD45 بالإضافة إلى السكان التي هي CD11b plus ، والنسبة المئوية للخلايا CD11b بالإضافة إلى F4 / 80 plus (PBS n=10 ، WGP n=9). * p=0. 0165 (CD45) ، *** p=0. 0001 (CD11b) ، ** p=0. 0034 (F4 / 80). f إنتاج TNF في خلايا CD11b plus من PBS و 7- يومًا من تدريب WGP والتي تمت إعادة تنشيطها باستخدام LPS. يتم عرض النسبة المئوية لخلايا TNF plus و MFI لـ TNF (PBS n=10 ، WGP n=9). ** p=0. 007، *** p=0. 0002. g بيانات ملخصة عن إنتاج TNF في خلايا CD11b بالإضافة إلى F4 / 80 plus من PBS و 7- يومًا من تدريب WGP والتي تمت إعادة محفزتها باستخدام LPS. يتم عرض النسبة المئوية لخلايا TNF plus و MFI لـ TNF (PBS n=10 ، WGP n=9). * ص=0. 0155 ، *** ص=0. 0001. تم ربط وزن الورم بنسبة CD45 بالإضافة إلى الخلايا المناعية التي كانت CD11b plus (يسار) ونسبة CD45 بالإضافة إلى CD11b بالإضافة إلى خلايا TNF plus (على اليمين). (PBS n=10 ، WGP n=9). i البيانات الملخصة للنسبة المئوية لخلايا CD4 plus و CD8 بالإضافة إلى T-cells التي تعبر عن IFN (PBS n=10، WGP n=9) تم تمثيل البيانات على أنها متوسط ​​± SEM. تم استخدام معاملات ارتباط بيرسون لقياس قوة الارتباطات الخطية وغير ذلك ، تم استخدام اختبارات t للطالب ثنائي الذيل. نانوثانية ليست كبيرة. تمثل كل عينة حيوانًا مستقلاً بيولوجيًا تم الحصول عليه من خلال تجربة مستقلة واحدة والتي تكررت مرتين على الأقل للتحقق من النتائج.

تعتبر الخلايا النخاعية المدربة CCR2 بالإضافة إلى خلايا مستجيبة أولية في آلية مكافحة الورم.

نظرًا للتثبيط الكامل لتهريب الخلايا المناعية الفطرية في البنكرياس وتدريب خلايا البنكرياس النخاعية بعد علاج WGP في الفئران CCR2 - / - ، فقد استنتجنا أن الفئران CCR2 لن تظهر أيضًا التأثيرات المناعية المفيدة المضادة للورم لتدريب WGP . تمشيا مع هذه الفرضية ، لم تظهر الفئران CCR2 - / - التي تلقت WGP عبء ورم منخفض (الشكل 7 أ) بالمقارنة مع الفئران WT.

أظهر هذا أن CCR2 ضروري لتدفق الخلايا المناعية الفطرية المدربة إلى البنكرياس مدفوعة بـ WGP وأن هذه النتائج لها تأثير مضاد للورم. على الرغم من أن إشارات CCL 2- CCR2 قد تم تحديدها لتكون حاسمة في توظيف الضامة المدربة المشتقة من الخلايا الوحيدة في البنكرياس ، فقد أردنا أيضًا معرفة ما إذا كان وجود الخلايا الجذعية السرطانية المدربة في نخاع العظام وتوليد مناعة مدربة مركزيًا وحدها كافية لإبطاء نمو أورام البنكرياس مثلي.

لتأكيد وظيفة مكافحة الورم المباشرة للخلايا النخاعية المتسللة بالإضافة إلى الخلايا النخاعية ، تم فرز مجموعات CCR2 plus و CCR 2- النخاعية من الفئران المدربة بواسطة WGP ، وخلطها مع خلايا الورم KPC ، وزرعها تقويميًا في الفئران. كانت الأورام الممزوجة بخلايا CCR2 plus أصغر من تلك التي تم خلطها بخلايا CCR2− ، مما يدعم أيضًا أن خلايا CCR2 المدربة بالإضافة إلى الخلايا النخاعية نفسها هي خلية مؤثر أولية في آلية مكافحة الورم (الشكل 7 ب). كشف تحليل CyTOF لهذه الأورام أن أورام CCR2 بالإضافة إلى الأورام المختلطة بها عدد أقل من CD11b بالإضافة إلى الخلايا النخاعية وزيادة كبيرة في CD8 بالإضافة إلى الخلايا التائية الموجودة داخل الورم (الشكل 7 ج ، د). نسبة CD8 بالإضافة إلى الخلايا التائية: تم زيادة CD11b بالإضافة إلى الخلايا النخاعية بشكل ملحوظ في حالة الخلط CCR2 بالإضافة إلى (الشكل 7 هـ).

الشكل 7 آليات المستجيب المضاد للورم لعلاج WGP والنماذج ذات الصلة سريريًا. تم علاج الفئران WT و CCR2 باستخدام PBS أو WGP وبعد 7 أيام تم زرعها بخلايا ورم البنكرياس KPC المثلي. تم الإبلاغ عن وزن الورم في اليوم 21. (WT PBS n=5 ، WT WGP n=6 ، CCR2 PBS n=6 ، CCR2 - / - WGP n=6). ** p=0. 0027 (WT PBS مقابل WT WGP) ، * p=0. 0118 (WT WGP مقابل CCR2 - / - PBS) ، ** p=0. 0034 (WT WGP مقابل CCR2 - / - WGP). (ب) تم خلط الخلايا المصنفة CCR2 plus و CCR2− البنكرياس CD11b plus من الفئران المدربة على WGP بخلايا KPC وزرعها تقويميًا. تم تقييم حجم الورم بعد 21 يومًا (CCR2 زائد n=5 ، CCR2− n=5). * ص=0. 0247. مؤامرات c t-SNE الناتجة عن تحليل CyTOF للأورام المختلطة من ب. تظهر المجموعات التي تظهر اختلافات كبيرة بين المجموعات بواسطة الدوائر. يتم عرض البيانات الإجمالية (على اليسار) ومخططات t-SNE التمثيلية لكل مجموعة. د تلخيص النسبة المئوية للخلايا CD8 plus و CD11b plus في أورام الخلط (PBS n=4 ، WGP n=3). * ص=0. 01 ، ** ص=0. 007. هـ نسبة CD8 plus: CD11b بالإضافة إلى الخلايا في أورام الخلط (PBS n=4 ، WGP n=3). * ص=0. 0474. f التعبير عن PD-L1 على خلايا الورم KPC ، وخلايا CD11b plus و F4 / 80 plus في ورم KPC بعد 21 يومًا من الزرع (KPC n=5 ، CD11b plus n=6 ، F4 / 80 plus n=6). g مخطط تجريبي لـ WGP وعلاج مضاد لـ PD-L1. تم علاج الفئران (ن {61}}) باستخدام PBS أو WGP وبعد 7 أيام تم زرعها بأورام البنكرياس KPC المثلية. في الأيام 3 و 7 و 11 بعد الزرع ، تم إعطاء الفئران تحكمًا مضادًا لـ PD-L1 mAb أو مضاد للفئران IgG2b mAb. تم رصد البقاء على قيد الحياة. ** p=0. 0018 (WGP مقابل PBS أو PD-L1) ، ** p=0. 0021 (WGP مقابل WGP plus PD-L1). ح مخطط تجريبي لـ WGP المستخدم في الإعداد العلاجي. تم زرع الفئران بأورام البنكرياس المثلي KPC وتم إعطاؤهم WGP بمجرد تعافي الفئران من الجراحة في اليوم الرابع ، وبعد أسبوع واحد في اليوم 11. * ص=0. 0163. تم تمثيل البيانات على أنها متوسط ​​± SEM. تم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه مع مقارنات متعددة من أجل اختبار t للطالب غير المزدوج ثنائي الذيل من أجل b و d و e. تم استخدام اختبار ترتيب اللوغاريتمات لـ g و h. نانوثانية ليست كبيرة. تمثل كل عينة حيوانًا مستقلاً بيولوجيًا تم الحصول عليه من خلال تجربة مستقلة واحدة والتي تكررت مرتين على الأقل للتحقق من النتائج.

يتآزر WGP مع العلاج المضاد لـ PD-L1 mAb لإطالة البقاء على قيد الحياة في نماذج PDAC.

على الرغم من حدوث انخفاض كبير في عبء الورم بسبب تدريب WGP ، إلا أن جميع الفئران أصيبت بأورام قاتلة. حددت دراساتنا أن علاج WGP أثر بشكل كبير على النمط الظاهري لمجموعات النخاع الشوكي في البنكرياس.

على الرغم من أننا قد حددنا أن الخلية المؤثرة الأولية المسؤولة عن التأثيرات المضادة للورم لـ WGP هي CCR2 بالإضافة إلى تسلل الخلايا الأحادية / الضامة ، فقد اعتقدنا أن هذه التغييرات المناعية قد تؤثر أيضًا على TME الكلي بطريقة يمكن أن تجعل الخلايا المناعية التكيفية أكثر استجابة لذلك. العلاج بالحصار عند نقاط التفتيش. على وجه التحديد ، لأننا لاحظنا زيادة في نسبة CD8 بالإضافة إلى الخلايا التائية الموجودة داخل CCR2 بالإضافة إلى الأورام المختلطة (الشكل 7 ج) ولاحظنا أيضًا تعبيرًا مهمًا عن PD-L1 على الخلايا النخاعية الموجودة داخل أورام KPC (الشكل 7f) ، افترضنا أن علاج WGP قد يحفز تأثيرات العلاج المضاد لـ PD-L1 mAb.

لتقييم ما إذا كان العلاج المضاد لـ PD-L1 mAb يتآزر مع المناعة المدربة التي يسببها WGP في البنكرياس ، تم بعد ذلك إعطاء الفئران المعالجة بـ PBS أو WGP التي تم زرعها بأورام KCP المثلية إما مضاد PD-L1 mAb أو الفئران IgG2b للتحكم في النمط النظيري mAb. كما هو موضح في العديد من التجارب السريرية ، فشل العلاج بمضادات PD-L1 وحده في إطالة فترة البقاء على قيد الحياة حتى بعد الفئران المعالجة بـ IgG2b isotype control mAb (الشكل 7g). نجت الفئران WGPtrained لفترة أطول بكثير من نظير IgG2b والفئران المعالجة بـ PD-L1. ومع ذلك ، فإن مزيجًا من WGP و anti-PD-L1 معًا يطول فترة البقاء على قيد الحياة بشكل أكثر فاعلية. يوضح هذا أن هناك فائدة سريرية للجمع بين WGP وعلاج الحصار المناعي ضد PD-L1.

حتى الآن ، تم وصف استخدام WGP في بيئة يتم فيها إدارة WGP قبل زرع الخلايا السرطانية. بالنظر إلى انخفاض حجم الورم في هذا النموذج ، اختبرنا أيضًا نموذجًا أكثر صلة سريريًا حيث تم زرع الفئران بأورام KPC المثلي واستخدام WGP لتحريض مناعة مدربة بعد ذلك الشكل 7 ح). في البيئة العلاجية ، تبين أيضًا أن تدفق الخلايا النخاعية المدربة إلى البنكرياس مدفوعًا بـ WGP يؤدي إلى إطالة البقاء على قيد الحياة. تشير هذه البيانات معًا إلى أن بدء المناعة المدربة في البنكرياس باستخدام WGP له تطبيقات سريرية ذات صلة في علاج سرطان البنكرياس والتي تتطلب مزيدًا من البحث والتحقيق المترجمين.

For more information:1950477648nn@gmail.com