تلعب Lanostane Triterpenoids في Poria Cocos أدوارًا مفيدة في نشاط تنظيم المناعة

الرجاء التواصلoscar.xiao@wecistanche.comللمزيد من المعلومات

الملخص:Poria cocos (Schwein) FA Wolf (syn. Wolfiporia cocos) sclerotium المجفف ، المسمى الطي ، هو فطر قابل للأكل يستخدم عادة كعلاج صيني تقليدي منشط ومضاد للشيخوخة. يتم استخدامه تقليديًا مع الأدوية الصينية التقليدية الأخرى لتعزيز المناعة. أظهرت هذه الدراسة أن مستخلص P. cocos (Lipucan⑨) الذي يحتوي على lanostane triterpenoids لا يحتوي على سمية مناعية ويعزز المناعة غير المحددة (الفطرية) من خلال تنشيط الخلايا القاتلة الطبيعية وتعزيز إفراز الإنترفيرون （IFN-y من النوع 1 T-helper （Th1 الخلايا استجابة مناعية. بالإضافة إلى ذلك ، قلل مستخلص P. cocos بشكل ملحوظ من إفراز الإنترلوكين (IL -4 و IL -5) من خلال الاستجابة المناعية للخلايا التائية المساعدة من النوع 2 (Th2) ، والتي ترتبط بالاستجابة للحساسية. تم التعرف على ترايتيربينويدات اللانوستان المنقى لأول مرة كمكونات نشطة لـ P. cocos مع مناعة غير نوعية محسنة من خلال تعزيز إفراز interferon-IFN- في دراسة أولية. تدعم النتائج التي توصلنا إليها أن مستخلص P. cocos يلعب دورًا مفيدًا في نشاط تنظيم المناعة.

الكلمات الدالة:بوريا كوكوس ترايتيربينويدات لانوستان. السمية المناعية. Th1 / Th2: تنظيم المناعة

1 المقدمة

تهدد العدوى الفيروسية مثل فيروسات الجهاز التنفسي (بما في ذلك فيروس الأنفلونزا ، والفيروسات الأنفية ، والفيروسات الغدية ، والفيروس التاجي) ، والهربس ، وفيروس نقص المناعة البشرية (HIV) صحة الإنسان بشكل خطير. تصيب فيروسات الجهاز التنفسي شديدة العدوى سكان العالم وتصبح جائحة وتسبب الكثير من الوفيات. لقد تطور هذا التهديد إلى قضية صحية شخصية وأيضًا إلى قضايا اقتصادية وسلامة واجتماعية دولية [1]. يعد التطعيم حاليًا الوسيلة الأساسية للسيطرة على انتشار عدوى فيروس الأنفلونزا. ومع ذلك ، نظرًا لقدرة الفيروس سيئة السمعة على التحور ، يجب تطوير لقاحات جديدة كل عام. هناك حاجة ملحة لتطوير عقاقير فعالة مضادة للفيروسات أو مناهج علاجية. لسوء الحظ ، فإن سنوات عديدة ومئات الملايين من الدولارات ضرورية لتطوير أدوية جديدة ، وغالبًا ما يكون قد فات الأوان لمكافحة وباء فيروس مفاجئ. أشارت التقارير الأخيرة إلى أن الأشخاص فوق سن الخمسين مصابون بشكل أساسي بفيروسات الجهاز التنفسي [2،3]. الشيخوخة هي أحد الأسباب التي ترتبط ارتباطًا وثيقًا بعيوب الجهاز المناعي ، بما في ذلك وظيفة الخلية وعددها [4-6]. الرعاية الذاتية هي نهج مهم يستخدم في معظم البلدان لتقليل النفقات الطبية الشخصية وعبء الرعاية الصحية الاجتماعية|7،8]. إن تطوير معززات المناعة لزيادة مقاومة العائل للعدوى الفيروسية وتحسين قدرة المضيف على التكيف هو نهج مهم حظي بالكثير من الاهتمام مؤخرًا [9،10].

يشمل خط الدفاع الأول لجسم الإنسان ضد مسببات الأمراض حواجز فسيولوجية مثل الجلد والأنسجة تحت الجلد والغشاء المخاطي. خط الدفاع الثاني هو جهاز المناعة ، ويتكون من أعضاء مناعية وخلايا مناعية وجزيئات مناعية. ينقسم جهاز المناعة إلى مناعة فطرية ومناعة تكيفية [11]. جهاز المناعة الفطري هو جهاز مناعي غير نوعي. يمكنه تمييز نفسه بينه وبين غير الذات دون التعرض المتكرر لمسببات الأمراض مثل البكتيريا والفيروسات. بسبب خصائصه غير المحددة ، لديه قدرة واسعة على محاربة الالتهابات المتعددة [12]. الخلايا القاتلة الطبيعية (NK) والإنترفيرون (IFN هي المكونات الرئيسية المضادة للفيروسات في الجهاز المناعي الفطري في دفاع المضيف ضد العدوى الفيروسية التنفسية [13]. الخلايا القاتلة الطبيعية لديها القدرة على قتل الخلايا المصابة بالفيروسات بسرعة. علاوة على ذلك ، تحفز الخلايا القاتلة الطبيعية أيضًا الخلايا المناعية الأخرى ، النوع الأول من الخلايا T-helper ، Th1 ، من خلال إطلاق IFN- 【14،15. تمتلك الإنترفيرون القدرة على التدخل في تكاثر الفيروس ويمكن تقسيمها إلى ثلاثة أنواع بما في ذلك الإنترفيرون I （IFN- ، IFN-） ، II （IFN-y） و I （IFN-λ） 【16،17. يعد تكاثر الفيروس مرحلة أساسية مهمة في حياة الفيروس. تلعب الخلايا دورًا أساسيًا في الدفاع ضد عدوى الفيروس [18]. ومن ناحية أخرى اليد ، تفرز الخلايا المساعدة من النوع 2 T (Th2) بشكل أساسي الإنترلوكينات (ILs) بما في ذلك IL -4 ، و IL -5 ، وتعزز الخلايا البائية لإفراز الأجسام المضادة للجلوبيولين المناعي E (IgE) لتعزيز المناعة الخلطية و تحفز استجابة الحساسية [19].

الرجاء الضغط هنا لمعرفة المزيد

Filing (sclerotium of Poria cocos (Schwein.) FAWolf (syn. Wolfiporia cocos)) ، وهو دواء صيني تقليدي معروف ومضاد للشيخوخة ، وقد استخدم على نطاق واسع كمهدئ ومدر للبول لأكثر من ألفي عام [ 20]. لقد ثبت أن لدى P. cocos وظائف مضادة للالتهابات ، ومضادة للأورام ، ومضادة لارتفاع السكر في الدم ، ومهدئة ، ومضادة للشيخوخة مع ترايتيربينويدات لانوستان التي تم تحديدها على أنها المكونات النشطة [21-30]. بالإضافة إلى ذلك ، تم إثبات أن جزء خلات الإيثيل وجزء السكاريد الخام من P. cocos يعززان المناعة في النماذج الحيوانية بناءً على اختبار محتوى انحلال الدم في الدم ، والتأثير البلعمي للبلاعم أحادية النواة ، ومستوى التحول اللمفاوي. تم اعتبار لانوستان ترايتيربينويدات مكونات رئيسية في جزء أسيتات الإيثيل وفقًا لتحليل HPLC [31]. ومع ذلك ، لا يزال من غير الواضح ما إذا كانت المناعة الفطرية والتكيفية لها تأثيرات على نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية ، و IFN ، والخلايا المناعية أو السيتوكينات في P.cocos ، وتوضيح المركبات النشطة. بحثت هذه الدراسة في تأثير الجهاز المناعي لمستخلصات P. cocos ، وهو منتج تناسق محتوى lanostane triterpenoids ، باستخدام نماذج حيوانية. تم تحديد المكونات النشطة أولاً.

يمكن للسيستانش مكافحة الشيخوخة

2. المواد والأساليب

2.1.المواد النباتية

تم استخلاص سليروتيوم P. ​​cocos (Schwein.) FAWolf باستخدام 75٪ من الإيثانول للحصول على مستخلص P. cocos (Lipucan). تم تصنيع هذا المستخلص من قبل شركة Sinphar Tian-Li Pharmaceutical Co.، Ltd. ، Hangzhou Sinphar Group ، الصين ، وتم تطويره بواسطة Sinphar R&D Center ، تايوان. يحتوي المستخلص على أربعة أنواع رئيسية من ترايتيربينويدات لانوستان (الشكل 1 ، مركبات 1-4) تم تحليلها باستخدام تحليل كروماتوجرافي سائل فائق الأداء (UPLC) [32]. كان محتوى ترايتيربينويدس الأربعة الرئيسي هو 6.2 في المائة. كبسولة تجارية (FL) تحتوي على 27. 0 ملغ من مستخلص P. cocos تم استخدامها للتحقق من التأثير على النشاط المناعي.

2.2 عزل وتنقية لانوستان ترايتيربينويدات من P. cocos

تم استخراج P.cocos المجفف (1 0 كجم) ثلاث مرات عن طريق إعادة التدفق مع 75 بالمائة من الإيثانول لمدة 3 ساعات [24]. تم تحليل المستخلص المركز بالكروماتوجراف على هلام السيليكا (70-230 شبكة) باستخدام خليط قطبي متزايد من CH2Cl ، و MeOH (CH2Cl: MeOH ، 97: 3 ؛ CH2Cl2: MeOH ، 96: 4 ؛ CH2Cl: MeOH ، 90: 10 ، و 100 بالمائة MeOH). وفقًا لكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC) ، تم جمع أربعة كسور (Fr. 1- Fr.4) لمزيد من الفصل. تعرض الأب 1- الأب. 3 لأداء كروماتوجرافي سائل تحضيري عالي الأداء (HPLC) (Waters Prep 150 LCsystem ، Milford ، MA ، USA) على عمود Waters XBridge RP -18 (250 مم × 19 مم ، 5 أمم ، ميلفورد ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) باستخدام 80 في المائة من الميثانول كنظام طور متحرك. كان معدل التدفق 18 مل / دقيقة. تم جمع أربع قمم رئيسية للاهتمام بشكل انتقائي. تم تكثيف الأجزاء التي تحتوي على المركبات المستهدفة بشكل أكبر في الجفاف وأنتجت حمض التومولوزيك (1) (120.1 مجم) ، وحمض البوليفونيك C (2) (16.0 مجم) ، 3- حمض epi-dehydrotumulosic (3) (12.1 مجم) ، وحمض ديهيدروتومولوزيك (4) (6.8 مجم) ، على التوالي. تم توضيح هياكلها عن طريق التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي النووي (الرنين المغناطيسي النووي) ومقياس الطيف الكتلي للتأين بالرش الكهربائي (ESI-MS) وبالمقارنة مع بيانات الأدبيات [32].

2.3 دراسة أولية على الحيوان بواسطة مركبات لانوستان ترايتيربينويد (1-3) لدراسة تحليل IFN-r

في هذه الدراسة ، تم تحضير مركبات لانوستان ترايتيربينويد المنقى ، بما في ذلك حمض التومولوزيك (1) ، وحمض البوليفونيك C (2) ، و 3- حمض الإبيد هيدروتومولوسيك (3) ، للدراسة الأولية باستخدام BALB / c (سلالة فأر) الفئران البيضاء) ذكور الفئران. بعد 4 أيام من تناول المركبات عن طريق الفم 1-3 والماء المقطر المعقم (مجموعة التحكم) (1 مل / فئران) ، تم التضحية بالفئران في اليوم الخامس ، وتم جمع خلايا الطحال. تم نقل الطحال الطازج إلى لوحة استنبات تحتوي على 10 مل من وسط استزراع معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) -1640. ثم يتم طحن الطحال على شبكة دقيقة لتحرير خلايا الطحال. تم بعد ذلك نقل خلايا الطحال المعلقة في الوسط إلى أنبوب طرد مركزي مخروطي سعة 50 مل وطرده عند 1300 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق. تم التخلص من المادة الطافية وتعليق الحبيبات في 1 مل من محلول خلايا الدم الحمراء الباردة (RBC) الذي يحتوي على EDTA-NH4Cl. تم تحضين الخلايا عند درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق ثم غسلها ثلاث مرات بوسط استنبات بالطرد المركزي. تم بعد ذلك استزراع معلق خلية الطحال في لوحة بئر 24- بكثافة 1 × 10 درجة من الخلايا / مل في وسط يحتوي على RPMl 1640 مكملًا بنسبة 10 بالمائة من مصل بقري جنيني (FBS) ، 2 ملي مولار جلوتامين ، المضادات الحيوية ، و 1 ميكروغرام / مل كونكانافالين أ ، كونا ، عند 37 درجة لمدة 3 أيام. تم جمع طاف خلايا الطحال الثقافة. تم قياس تركيزات IFN باستخدام مجموعة مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) (أنظمة R&D ، مينيابوليس ، مينيسوتا ، الولايات المتحدة الأمريكية).

2.4 نموذج الحيوان والجدول التجريبي

تم شراء الفئران الإناث BALB / c من مركز الحيوانات بجامعة تايوان الوطنية. تم إيواء الحيوانات في أقفاص مهواة بشكل فردي خالية من مسببات الأمراض بدقة 22 ± 2 درجة ، مع درجة حرارة ورطوبة بنسبة 40-60 في المائة مع 12 ساعة / 12 ساعة في دورة الضوء / الظلام والوصول المجاني إلى الطعام والماء. بعد أسبوع واحد من التأقلم ، تم تجميع الفئران بشكل عشوائي وفقًا لوزن الجسم واستخدامها في التجارب. تم إذابة أربع جرعات مختلفة ، 26 مجم / كجم (FL2 0 0) ، 52 مجم / كجم (FL400) ، 104 مجم / كجم (FL800) ، 156 مجم / كجم (FL1200) ، على التوالي في مقطر معقم الماء (0.4 مل) ويتم تناوله عن طريق الفم لمدة خمسة أيام متتالية في الأسبوع لمدة 9 أسابيع. تم تغذية مجموعة التحكم بالماء المقطر المعقم (0.4 مل). تم حقن الفئران بمستضد بيضوي محدد (OVA) داخل الصفاق في الأسبوع الثالث والخامس والسابع. OVA هو مادة مسببة للحساسية من بياض الدجاج توجد بشكل رئيسي في بياض البيض. يستخدم عادة للحث على الحساسية في نماذج الحيوانات التجريبية. تم جمع خلايا الطحال لمزيد من الدراسة. تم التضحية بالفئران باستخدام القتل الرحيم بثاني أكسيد الكربون بعد 9 أسابيع من التجارب. رقم الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسية (IACUC) هو A9647.

2.5 جمع عينات الطحال

تم جمع الطحال ، وهو عضو ممدود أحمر داكن في الجانب الأيسر العلوي من بطن الفئران. بعد إزالة النسيج الضام بعناية باستخدام مقص صغير وملقط ، تم وضع الطحال في وسط مزرعة خلوية (وسط RPMI 1640 مع 10 بالمائة من مصل بقري جنيني (HyClone)). بعد الوزن ، تم طحن عينات الطحال باستخدام حقنة نظيفة ومعقمة سعة 5 مل. تم استنشاق تعليق خلية الطحال في أنبوب طرد مركزي جديد بسعة 15 مل مع قطارة بلاستيكية معقمة أحادية العبوة سعة 3 مل. تم جمع الخلايا المعلقة بعد 5 دقائق من هطول الأمطار. تم طرد الخلايا المعلقة عند 1500 دورة في الدقيقة لمدة 7 دقائق وتم التخلص من المادة الطافية للحصول على ألواح الخلايا. بعد ذلك ، تمت إضافة 1 مل من محلول تحلل كريات الدم الحمراء لإزالة خلايا الدم الحمراء لمدة دقيقة واحدة. تمت إضافة تسعة مل 10 في المائة من مصل الأبقار الجنيني بسرعة إلى وسط الاستزراع ، وتكررت خطوة الطرد المركزي ، وتم التخلص من المادة الطافية. لتجنب تلف سلامة خلايا الطحال بسبب المخزن المؤقت لـ RBClysis ، تم غسل العينة ثلاث مرات بمحلول Hank's Balanced Salt Solution (HBSS) المؤقت. ثم تم تعليق خلايا الطحال باستخدام وسط مزرعة مصل بقري جنيني بنسبة 10 في المائة للتحليل والتجارب.

2.6. استجابة مناعية غير محددة

2.6.1. تحليل علامات سطح خلية الطحال

تم إجراء تحليل الخلايا المناعية باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة الفلورية التي ترتبط على وجه التحديد بأنواع مختلفة من الخلايا المناعية باستخدام مقياس التدفق الخلوي الفلوري. يستخدم قياس التدفق الخلوي (Epics XL-MCL Beckman Coulter ، Brea ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) لحساب نسبة خلية مناعية معينة مثل مجمعات التوافق النسيجي الرئيسية من النوع الأول (MHC I) ، CD4 plus T cell ، CD8 plus T cell ، الخلايا القاتلة الطبيعية والضامة.

2.6.2. تحليل نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية

تم استخدام خط خلية سرطان الغدد الليمفاوية بالماوس (ATCC) -1 (خط خلية حساس لعمل نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية) كهدف الخلايا القاتلة الطبيعية في هذه التجربة. عندما تمت زراعة خلايا طحال إناث الفئران BALB / c مع خلايا YAC -1 في نفس الطبق ، فإن الخلايا القاتلة الطبيعية ستقتل خلايا YAC -1. بعد 3 ساعات من تفاعل السمية الخلوية ، تم تلطيخ خلايا YAC المقتولة -1 بصبغة (مجموعة السمية الخلوية الحية / الميتة ، المجسات الجزيئية ، L -7010). لذلك تم استخدام قياس التدفق الخلوي للكشف عن شدة التألق وتحليلها باستخدام برنامج WinMDI 2.8 (مختبرات جامعة بوردو للقياس الخلوي ، ويست لافاييت ، الولايات المتحدة الأمريكية). نسبة خلية المستجيب (E) إلى الخلية المستهدفة (T) هي 100: 1 و 200: 1 (خلية المستجيب هي خلايا الطحال والخلية المستهدفة هي خلايا YAC -1).

2.6.3. إفراز السيتوكينات باستخدام تحليل خلايا الطحال

بعد تحفيز خلايا الطحال بتركيز ConA 2.5 ميكروغرام / مل لمدة 48 ساعة ، تم جمع المادة الطافية لزراعة الخلايا وتخزينها عند درجة -20 لتحليل السيتوكينات باستخدام مجموعة ELISA للماوس OptEIA Mouse -5 ( Pharmigen ، 555236 ، فرانكلين ليك ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية) وماوس DouSet IFN- ELISA kit （R&D Systems ، DY485 ، مينيابوليس ، مينيسوتا ، الولايات المتحدة الأمريكية）. تم تحضير محلول الطلاء (الأس الهيدروجيني: 9.6) لاحتواء الكمية المناسبة من الأجسام المضادة للسيتوكين المضاد للفئران (L -5 و IFN-y) على صفيحة بئر 96- (لوحة Nunc-Immuno ، MaxiSorp ، Thermo العلمية ، روسكيلد ، الدنمارك). بعد الوقوف عند 4C طوال الليل ، تم شطف الأجسام المضادة غير المقيدة بمحلول ملحي بالفوسفات مع محلول Tween20 （PBST ، ثم تمت إضافة 200 ميكرولتر / بئر من المخزن المؤقت (1 بالمائة BSA في PBS). بعد ساعتين في درجة حرارة الغرفة ، تم شطف العينة بمخزن PBST ، وإضافة 100 ميكرولتر / بئر من معيار طاف أو خلوي مؤتلف من ثقافة الخلية إلى العينة. بعد 4 درجات طوال الليل ، تم شطف العينة بمخزن PBST. تمت إضافة التركيز المناسب من الجسم المضاد الثانوي المضاد للبيوتين (البيوتين) المرتبط (100 ميكرولتر / بئر). بعد ساعتين عند درجة حرارة الغرفة ، تم شطف العينة باستخدام محلول PBST. تمت إضافة Avidin-peroxidase 100 ميكرولتر / بئر） （Sigma ، سانت لويس ، MO ، الولايات المتحدة الأمريكية). بعد ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة ، تمت إضافة ركيزة Tetramethylbenzidine (TMB) (R&D Systems ، Minneapolis ، MN ، الولايات المتحدة الأمريكية) لمدة 5 دقائق من تفاعل اللون ، ثم تمت إضافة 50 ميكرولتر 2.5 بالمائة H2SO4 لإيقاف تفاعل اللون. تم قياس الامتصاصية عند 450 نانومتر.

2.7. استجابة مناعية محددة من الفئران التي يسببها الألبومين (OVA)

تم حقن الفئران الإناث BALB / c داخل الصفاق مع OVA كمستضد و CFA (Complete Freund's Adjuvant) كمساعد. كانت ظروف زراعة خلايا الطحال هي نفسها المذكورة أعلاه. تم تحليل السيتوكينات (L -4) بواسطة ELISA.

2.8 التحليلات الإحصائية

تم الإبلاغ عن البيانات على أنها متوسط ​​(SD) وتحليلها باستخدام ANOVA أحادي الاتجاه. اعتبرت القيم ذات دلالة إحصائية في p<0.05. dunnett's="" test="" was="" used="" to="" identify="" the="" differences="" between="">

3. النتائج

3.1 عزل وتعريف أربعة مركبات لانوستان ترايتيربينويد 1-4 من P.cocos

المجففة P.مكافحة الشيخوخةcocos (10 كجم) ثلاث مرات عن طريق إعادة التدفق مع 75 في المائة من الإيثانول لمدة 3 ساعات. تم إجراء عملية كروماتوجراف على المستخلص المركز على هلام السيليكا وعمود C18 لتزويد أربعة مركبات رئيسية لانوستان ترايتيربينويد: حمض التومولوزيك (1) ، وحمض البوليفونيك C (2) ، 3- وحمض إيبي ديهيدروتومولوسيك (3) ، وحمض ديهيدروتومولوزيك (4) ) ، على التوالي (الشكل 1). تم توضيح هياكلها بواسطة التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي النووي (الجدول S1) وتحليل ESI-MS (الأشكال S2 و S4 و S6 و S8) ومقارنتها مع بيانات الأدب [32،33]. تم عرض كروماتوجرام UPLC لـ 1-4 في الأشكال S1 و S3 و S5 و S7.

3.2 دراسة أولية في ذكور الفئران BALB / c بواسطة مركبات لانوستان ترايتيربينويد 1-3

تمت زراعة خلايا الطحال المعزولة من الفئران المعالجة بمركبات لانوستان ترايتيربينويد (1-3) لمدة خمسة أيام في وجود واحد. تم قياس كمية IFN-y التي تفرزها الخلايا الليمفاوية التائية في الطحال. بعد تغذية الفئران بـ 2.5 مجم / كجم / يوم أو جرعة أعلى من المركب 1،5 و 10 مجم / كجم / يوم من 2 ، و 20 مجم / كجم / يوم من 3 ، على التوالي ، IFN-y يفرزها ConA - تم تحفيز الخلايا التائية الطحالية بشكل ملحوظ (الجدولان 1 و 2). أظهرت الدراسة الأولية أن لانوستان 1-3 زاد إفراز IFN-y بواسطة خلايا الطحال التي يحفزها ConA.

3.3 تقييم السلامة من دراسة حيوانية لمستخلص P. cocos

يشير الجدولان 3 و 4 إلى أن مستخلص P. cocos لم يؤثر على وزن الجسم ووزن الطحال.فوائد القسطيعرض الجدول 5 أيضًا أن الخلايا المناعية مثل الخلايا التائية الكلية ، والخلايا البائية الكلية ، و MHC II (معقد التوافق النسيجي الرئيسي من النوع الثاني ، و CD4 بالإضافة إلى الخلايا التائية ، و CD8 بالإضافة إلى الخلايا التائية ، والخلايا القاتلة الطبيعية ، والضامة في مجموعة مستخلصات P. cocos لا يوجد فرق معنوي مقارنة بالمجموعة الضابطة ، وبناءً على النتائج المذكورة أعلاه ، يجب تقييم أنه لا ينبغي أن يكون هناك خطر السمية المناعية أثناء تجربة التغذية بمستخلص P. cocos.

3.4. اختبار الاستجابة المناعية غير النوعي

تلعب خلايا Nature Killer (خلايا NK) دورًا محوريًا في المناعة غير النوعية. يوضح الجدول 6 أن مجموعة FL400 تسببت بشكل كبير في زيادة نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية مقارنة بمجموعة FL200. وهو اتجاه لزيادة تأثير نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية لمستخلص P.cocos. السيتوكينات هي مواد كيميائية تشمل الإنترلوكينات (IL) والإنترفيرون (IFN) التي تنظم الاستجابة المناعية أو نمو الخلايا 【34】. قمنا بتحليل الاستجابة المناعية IFN- Th1） لتركيز خلايا الطحال المستحثة بـ ConA و LPS وتركيز IL -5 (الاستجابة المناعية Th2) لخلايا الطحال المستحثة بـ ConA المعزولة من الفئران المعالجة بـ FL200 ، FL400 ، FL800 ، و FL1200 (الجدولان 7 و 8). حفزت مجموعات FL800 و FL1200 بشكل كبير إنتاج IFN-y في خلايا طحال الفئران في وجود ConA (الجدول 7). يوضح الجدول 7 أيضًا أن تركيز خلايا الطحال لدى الفئران المعزولة من الفئران المعالجة بـ FL200 و FL400 و FL800 و FL1200 كان له تأثير منخفض بشكل كبير بطريقة تعتمد على الجرعة. بالإضافة إلى ذلك ، حفزت مجموعات FL400 و FL800 و FL1200 بشكل كبير أيضًا إنتاج IFN- في خلايا طحال الفئران في وجود LPS (الجدول 8).

4. مناقشة

جهاز المناعة البشري مسؤول عن محاربة مسببات الأمراض الأجنبية لحماية الصحة.البيوريتان فيتامين جعادة ما تجعل المناعة غير الكافية الجسم عرضة للعدوى وبالتالي تتطلب مناعة كافية ، ولكنها تتطلب أيضًا آليات تنظيمية صارمة لتجنب الأضرار الجانبية المفرطة. يعد الحفاظ على التوازن المناعي من أهم مهام الجهاز المناعي [35]. أشارت الكثير من الأدلة إلى أن التوازن المناعي يرتبط ارتباطًا وثيقًا باستجابة خلايا Th1 / Th2]. قد يتسبب الإجهاد والشيخوخة في فقدان التوازن والميل نحو Th2 ، مما قد يسبب العدوى وأمراض الحساسية [38-40]. هذا البحث عن مناعة فعالة للتوازن هو في حاجة ماسة. بالإضافة إلى ذلك ، من دواعي السرور أن المعرفة المكتسبة من عقود من البحث العلمي المتراكم حول جهاز المناعة البشري واستجابته للأمراض المعدية تساعد في توفير معلومات حول البحث والتطوير العلاجي ، كما أن لديها استراتيجيات وقائية لانتشار تفشي الفيروس [41 ، A42]. تم تحيز العديد من الدراسات السابقة حول الدراسة الدوائية لبروتين P. cocos تجاه بروتين P. cocos [43،44] أو عديد السكاريد [45،46]. هناك العديد من الدراسات حول فعالية لانوستان ترايتيربينويدات من P. cocos مثل نقص السكر في الدم [25] ، ومضادات السرطان [24] ، والوظيفة المهدئة [28].ما هو cistancheأظهرت الدراسات السابقة أن جزء أسيتات الإيثيل من P. cocos يحتوي على المكون الرئيسي triterpenoids وله نشاط معزز للمناعة 31 ومع ذلك ، لم يتم نشر المزيد من الأبحاث المتعمقة للمتابعة. قيمت دراستنا وظيفة مناعة P. cocos في نموذج الفئران الراسخ بما في ذلك دراسة الفحص الأولية لمركب lanostane triterpenoid المنقى. أظهرنا في هذه الدراسة أن مستخلص P.cocos (Lipucan) الذي يحتوي على 6.2 في المائة من أربعة ترايتيربينويدات لانوستان يلعب أدوارًا متعددة الفوائد في نشاط تنظيم المناعة.

أفاد تحقيق سابق أن خلايا CD4 البشرية بالإضافة إلى T-helper (Th) بما في ذلك المجموعات الفرعية Th1 و Th2 يتم تحديدها بواسطة السيتوكينات التي تفرزها [36]. تفرز خلايا Th1 بشكل أساسي IFN- ؛ تنتج خلايا Th2 IL -4 و IL -5 وتحفز إنتاج الأجسام المضادة وتؤدي إلى ردود أفعال تحسسية عن طريق زيادة إنتاج IgE بواسطة الخلايا البائية وتعزيز نمو الخلايا البدينة وتمايز الحمضات. من المعروف أن الخلايا القاتلة الطبيعية و IFN- تلعبان دورًا مهمًا في الدفاع المناعي ضد العدوى الفيروسية. يعد جهاز المناعة الفطري مهمًا جدًا للدفاع ضد الفيروسات التي غزت الجسم في البداية وتنشيط المناعة التكيفية اللاحقة. تصنف الخلايا القاتلة الطبيعية على أنها مناعة غير نوعية (فطرية) مسؤولة عن قتل الخلايا المصابة بالفيروس 【14】. IFN- يثبط دورة حياة الفيروس ويمنع تكاثر الفيروس. IFN- ينظم أيضًا الاستجابة المناعية عن طريق تنشيط المناعة الخلوية غير النوعية وتحفيز مناعة معينة [17]. بناءً على الدراسة الأولية التي أجريت على الحيوانات ، فإن مركبات اللانوستان ترايتيربينويد الرئيسية لمستخلص P. cocos وحمض التومولوزيك (1) وحمض البوليفونيك C （2 و 3- epi-dehydrotumulosic acid （3） ، تحفز بشكل كبير إفراز IFN- بواسطة خلايا الطحال. سيكون تأكيد مكون مستخلص كاكوس بوريا النشط في هذه الدراسة الأولية ذا أهمية كبيرة لمراقبة جودة المنتج والمزيد من دراسات التوافر البيولوجي والآلية. علاوة على ذلك ، أظهرنا في هذه الدراسة أن مستخلص P. cocos يحفز بشكل كبير نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية وإفراز IFN مع عدم وجود خصائص سامة للمناعة. أظهرت هذه النتائج التأثيرات التحفيزية الكبيرة لمستخلص P. cocos و lanostane triterpenoids الرئيسي 1-3 على الاستجابة المناعية.

علاوة على ذلك ، أشارت النتائج التي توصلنا إليها إلى أن مستخلص P. cocos يثبط الاستجابة المناعية Th2 عن طريق تثبيط IL -5 كبير (الجدول 7) في نموذج الاستجابة المناعية غير النوعية ، وتثبيط IL -4 (الجدول 9) في نموذج الاستجابة المناعية المحددة التي يسببها OVA. قد يؤدي IL -4 و IL -5 إلى رد فعل تحسسي.سيستانشتحدث الحساسية ، التي تسمى أيضًا أمراض الحساسية ، بسبب فرط حساسية الجهاز المناعي للمواد الموجودة في البيئة ، مثل الربو التحسسي. تميل الاستجابة المناعية للمريض إلى Th2. إذا كان من الممكن موازنة Th1 / Th2 في الجسم ، فيجب أن يحسن أعراض الحساسية. أثبتت هذه الدراسة أن مستخلص P. cocos يمكن أن ينظم الاستجابة المناعية Th1 / Th2 ، وقد يقلل من حدوث أمراض الحساسية ، ويمكن تطويره ليصبح مرشحًا محتملًا لمرض مضاد للحساسية.

5. الاستنتاجات

هذه الدراسة هي الأولى التي توضح تنظيم المناعة غير النوعي والنوعى لمستخلص P. cocos المحتوي على lanostane triterpenoids في الفئران. تتضمن هذه الاستجابات المناعية تنشيط الخلايا القاتلة الطبيعية ، وزيادة إفراز IFN ، وانخفاض IL -4 و IL -5. تدعم النتائج التي توصلنا إليها أن مستخلص P. cocos بدون أي سمية مناعية مضافة إلى النظام الغذائي أو يستخدم بمفرده سيلعب دورًا مفيدًا في تنظيم المناعة في تحسين نقص المناعة وتحسين القدرة على منع العدوى واستجابات الحساسية. هذا هو أول تأكيد على أن لانوستان ترايتيربينويدات هي مكونات فعالة ويمكن استخدامها كمكونات مراقبة الجودة للحفاظ على اتساق فعالية مستخلص P. cocos.

تم اقتباس هذا المقال من Life 2021، 11، 111. https://doi.org/10.3390/life11020111 https://www.mdpi.com/journal/life