ما هي فوائد Cistanche Polysaccharide على وظيفة المناعة

جهة الاتصال: emily.li@wecistanche.com

النشاط المناعي وآلية Cistanche Polysaccharide

تسنغ كونلي ، تشنغ ييفان ، لو تشي ليانغ

[الملخص]الهدف: دراسةمنيعنشاطسيستانشعديد السكاريد(CDPS) وآليةمنيعالتنظيم في المختبر. الطريقة: تم استخدام طريقة القياس اللوني الأزرق الثيازول (MTT) لمراقبة تأثير تنظيم CDPS (سيستانش عديد السكاريد) على IQS DEX TNF الذي يثبط تكاثر الخلايا الليمفاوية الفأرية في المختبر ؛ CDPS (سيستانش عديد السكاريد) لإجراء تحليل دورة الخلية ودورة الخلية باستخدام قياس التدفق الخلوي. تحديد Ca2 داخل الخلايا النتائج: CDPS (سيستانش عديد السكاريد) عند تركيز أعلى يمكن أن تقاوم التأثير المثبط لـ ISQDEX على تكاثر الخلايا الليمفاوية والتأثير المثبط لعامل نخر الورم عالي التركيز على تكاثر الخلايا الليمفاوية ، وتآزر تأثير تعزيز الانتشار للتركيز المنخفض لـ TN F على الخلايا الليمفاوية ؛ 100 ميكروغرام / مل 200 ميكروغرام / مل CDPS (سيستانش عديد السكاريد) يمكن أن يزيد بشكل كبير من الخلايا في مرحلة الانقسام ؛ تركيز أعلى (100 ميكروغرام / مل) CDPS (سيستانش عديد السكاريد) يمكن أن تعزز بشكل كبير تركيز أيون الكالسيوم في الخلايا التوتية في الفأر. الخلاصة: CDPS (سيستانش عديد السكاريد) يمكن أن يعزز دخول الخلايا إلى مرحلة الانقسام ، ويُستنتج أن تأثيره المعزز على تكاثر الخلايا الليمفاوية في الفئران يرتبط بتعزيز إطلاق الكالسيوم في الخلايا الليمفاوية في الفئران.

سيستانش(سيستانشديزيرتيكولاYC Ma) مادة طبية صينية نادرة وثمينة في بلدي. تم إدراجه كأعلى درجة في "Shen Nong's Materia Medica".سيستانشله وظائف تغذية الدم وتغذية الكلى ومساعدة اليانغ وترطيب الأمعاء وتأخير الشيخوخة. تظهر الأبحاث الدوائية الحديثة ذلكسيستانشعديد السكاريديمكن أن يحسن الجسممنيعوظيفة، وتعزيز تركيب الحمض النووي ، وتقوية القوة البدنية ، وتحسين الذكاء ، ولها آثار واضحة لمكافحة الشيخوخة [1]. درس المؤلف تنظيم CDPS(سيستانش عديد السكاريد) ، وهو مكون عديد السكاريدسيستانش، على المنيعوظيفةمن الخلايا الليمفاوية في الماوس.

سيستانش عديد السكاريدتعزيزانتشارالخلايا الليمفاوية

1 المواد والأساليب

1.1 الكواشف والمخدرات.

RPM ، I 1640 متوسط: GIB-CO ؛ حبيس: فاركو ؛ L- الجلوتامين: مصنع Shanghai Dongfeng Reagent ؛ البنسلين والستربتومايسين: مصنع الأدوية بشمال الصين ؛ Concanavalin (ConA) ، MTT: شركة SIGM A ؛ Phytohemagglutinin (PHA): مختبر شنغهاي الطبي ؛ Isoproterenol (ISO): Shanghai Tianfeng Pharmaceutical Factory ؛ Mercaptoethanol: شركة Fluka ؛ مصل العجل حديثي الولادة: شركة Sijiqing Bioengineering ؛ تم تقديم الديكساميثازون (DEX) من قبل الدكتور ما ليانغ ، أول مستشفى تابع لكلية الطب بجامعة تشجيانغ. تم توفير عامل مثبط الورم (TNF) من قبل يو يويهان ، الأستاذ بقسم الخلايا ، كلية علوم الحياة ، جامعة تشجيانغ ؛ باقي الكواشف كلها عبارة عن درجات تحليلية منتجة محليًا.

1.2 الحيوانات التجريبية.

تم شراء فئران ICR ، ذكر ، يبلغ من العمر 68 أسبوعًا ، وتزن 18-20 جم ، 22 ، من مركز Zhejiang Experimental Animal Center.

1.3 استخلاص عديد السكاريد الحديدي [2]:

سيستانشعديد السكاريديتم استخراجه من مختبرنا! بعد سحق الدواء الخامسيستانش، يتم غمره في الإيثانول الساخن ، ويتم استخراجه في الماء المغلي ، ويتم ترسيبه في الإيثانول. إنزيم محايد مدمج مع طريقة Sewag لنزع البروتين ، أنيون DEAE-Sephadex A - 50 تبادل كروماتوجرافي و Sephacry S -200 كروماتوغرافيا ترشيح جل للحصول على مكون واحد من CDPS (سيستانش عديد السكاريد)). احتفظ بالجفاف ، واستخدم RPMI1640 غير مكتمل لعمل تركيز معين قبل الاستخدام ، وقم بالتعقيم عن طريق الترشيح الفائق

1.4 تحضير الخلايا الليمفاوية في الطحال والغدة الصعترية [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93 ، اضبط تركيز خلايا الطحال على × 10 / مل وتركيز الخلايا الزعترية إلى × 10 درجة / مل

1.5 تفاعل تكاثر الخلايا الليمفاوية:وفقًا لطريقة Mosmanmn [4] التحسين: 96- لوحة زراعة خلية البئر ، أضف 1 0 / مل معلق خلية طحال أو ماء 10 / مل معلق خلية thymocyte 100M1 وتركيزات مختلفة من الأدوية 10041 في كل بئر. زراعة في حاضنة CO2.37C لمدة 72 ساعة. قبل 4 ساعات من نهاية الثقافة ، أضف 8μ1 من MTT (5 مجم / مل) لكل بئر. في نهاية الاستزراع ، اسحب 150 "1 من المادة الطافية من كل بئر ، وأضف 0.5 نيوتن من هيدروكلوريد الأيزوبروبانول 150 م 1. رجها برفق على شاكر الجزئي لإذابة البلورات الزرقاء تمامًا. قم بقياس OD570 على قارئ الصفيحة الدقيقة. اضبط كل تجربة تجريبية أشر إلى ثلاث آبار مكررة.

1.6 تحديد التأثير على دورة الخلية [5]:

{0} لوحة مزرعة خلايا البئر ، أضف 4 10 درجة / مل معلق خلية الزعتر 1 مل لكل بئر ، أضف الكواشف المختلفة ومحلول السكاريد إلى 2 مل في ثاني أكسيد الكربون القوي ، 37 حاضنة بعد الزراعة لمدة 72 ساعة ، أجهزة الطرد المركزي عند 15 0 0r / min لمدة 15 دقيقة ، تخلص من المادة الطافية ، أضف 7 إيثانول لإصلاح الخلايا المترسبة ، قم بتخزينها في 4 درجات مئوية للاختبار في وضع الاستعداد ، اغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS ، جهاز طرد مركزي عند 1500 لفة / دقيقة لمدة 15 دقيقة ، تجاهل طاف ، وإضافة بعد 0.5 مل 0.1 تم هضم RNaseA عند 4 درجات مئوية لمدة 30 دقيقة ، وتم تلوين 50 ميكروغرام / مل من برومو أسيتات لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية ، وتم قياس شدة التألق لعينات الخلية على مقياس التدفق الخلوي FACScan. 10 ، 000 نقاط اختبار خلية تم جمعها لكل عينة ، واستخدمت البيانات تحليل برمجيات Mul ثلاثية العجلات.

1.7 تحديد تركيز أيون الكالسيوم داخل الخلايا [6]

خذ خلايا الغدة الصعترية في الماوس بنفس الطريقة المذكورة أعلاه. تعليق في وسط ثقافة RPMIl640 غير مكتمل وضبط تركيز الخلية إلى × 10 '/ مل. أضف 1 مل من تعليق خلية الغدة الصعترية و 1 ميكرومتر لكل أنبوب تجريبي Fluo -3 محلول تلطيخ AM 5μ1 ، 2 بالمائة F -275 μ1 ، بعد الحضانة عند 37 لمدة 30 دقيقة ، اغسل مرتين باستخدام RPM1640 ، 1500r / غير مكتمل دقيقة ، جهاز طرد مركزي لمدة 10 دقائق ، تجاهل المادة الطافية ، وإضافة تركيزات مختلفة من السكريات والسكريات إلى الخلايا المترسبة بعد ConA ، تم قياس شدة التألق على مقياس التدفق الخلوي FACScan. تم جمع بيانات 10 ، 000 نقاط اختبار خلية لكل عينة وتحليلها بواسطة برنامج CELLQUEST. 1.8 تم استخدام الطرق الإحصائية لتحليل التباين ، وتم تحليل دورة الخلية وقياس أيون الكالسيوم بواسطة برنامج مقياس التدفق الخلوي.

Cistanche Polysaccharide من cistanche deserticola

2 النتائج

2.1 Cistanche Polysaccharide في المختبر يمنع تكاثر الخلايا الليمفاوية الفأرية بواسطة ISO DEX TNF

ناهض مستقبلات الأدرينالية أيزوبروتيرينول (ISO) وفئة من هرمون قشرة الغدة الكظرية ديكساميثازون (DEX) تمنع تكاثر الخلايا الليمفاوية CDPS (سيستانش عديد السكاريد) بتركيز أعلى (75 125 ميكروغرام / مل) يمكنه مقاومة التأثير المثبط لـ ISO DEX على تكاثر الخلايا الليمفاوية (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">سيستانش عديد السكاريد) (125 ميكروغرام / مل) بتركيز أعلى يمكن أن يقاوم التأثير المثبط لعامل نخر الورم ، ويعزز تكاثر الخلايا الليمفاوية بتركيز منخفض من عامل نخر الورم (الشكل 2)

2.2 تنظيم Cistanche Polysaccharide لدورة الغدة الصعترية اللمفاوية

CDPS (سيستانشعديد السكاريد) 25ug / ml 1 0 0ug / ml 200 # g / ml تم تفعيل ثلاثة تركيزات على الخلايا الليمفاوية الفأرية لمدة 72 ساعة ، وتم قياس محتوى الحمض النووي في الخلايا بواسطة FACS ، وتم حساب مؤشر الانتشار (PI) حسب الصيغة. أظهرت النتائج أن كلاً من 100ug / ml و 200ug / ml يمكن أن يزيد بشكل كبير من الخلايا في طور الانقسام ، وأن مؤشر التكاثر (68.0 بالمائة ، 56.6) لكليهما أعلى بكثير من المجموعة الضابطة (44.6) ، و 200 ميكروغرام / مل أقل بقليل من مجموعة 100 ميكروغرام / مل لأنه عند تركيز 200 ميكروغرام / مل ، أصبح تأثيرها على تكاثر الخلايا اتجاهاً تنازلياً [7]. لم تكن قيمة PI (47.5 بالمائة) لمجموعة 25ug / ml أعلى بكثير من مجموعة التحكم.

2.3 تأثير عديد السكاريد Cistanche على تركيز أيون الكالسيوم في الخلايا التوتية في الفئران

أظهرت النتائج التجريبية أن تركيزًا أعلى (100 ميكروغرام / مل) من CDPS (Cistanche Polysaccharidه) يمكن أن تعزز بشكل كبير زيادة تركيز أيون الكالسيوم في الخلايا التوتية في الفئران بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، هناك فرق كبير (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 مناقشة

سيستانش، المعروف باسم"الجنسنغ الصحراوي"، هو جذع سمين جاف متقشر منسيستانش.سيستانشله وظائف مغذية الكلى يانغ ، جوهر المغذي والدم والأمعاء. إنه ينتمي إلى نوع من الإثارة في قشرة الغدة النخامية الكظرية أو له تأثير شبيه بالهرمونات مشابه لقشرة الغدة الكظرية. دواء صيني قيم يمكنه تنظيممنيعوظيفةمن الجسم. تظهر نتائج أبحاثنا السابقة أن CDPS (سيستانش عديد السكاريد) في المختبر يمكن أن يعزز تكاثر الخلايا الليمفاوية التائية التي لم يتم تنشيطها أو تنشيطها بواسطة ConA PHA. بالاقتران مع ConA PHA ، هناك نوعان من محفز الخلايا التائية ، نعتقد أن CDPS (سيستانش عديد السكاريد) هو بادجوفانت للخلايا التائية ، ووجدنا أيضًا أن CDPS (سيستانش عديد السكاريد) يمكن أن يزيد بشكل كبير من إفراز الخلايا الليمفاوية الطحالية للفأر بتركيزات أعلى [8]

وجدت بعض الدراسات أن عامل نخر الورم المؤتلف يمكن أن يتسبب في موت الخلايا المبرمج للماوس العادي ومجموعات الخلايا اللمفاوية التائية البشرية في المختبر ، ويمكن منع هذا التأثير بواسطة IIL -2 IL -1 IFN و IIL -4 مع ديكساميثازون (DEX) يمكن أن يمنع تكاثر الخلايا الليمفاوية عن طريق تثبيط تعبير الخلايا الليمفاوية وإفراز IL -2 وخفض تنظيم إنتاج IL -2 R عالي التقارب. وجدت هذه التجربة أن تركيزًا أعلى من CDPS (سيستانشعديد السكاريد) يمكن أن يقاوم آثار التركيز العالي لـ TN F على تكاثر الخلايا الليمفاوية. تثبيط ، تآزري مع تركيز منخفض من عامل نخر الورم لتعزيز تكاثر الخلايا الليمفاوية ، ويمكن أن يقاوم التأثير المثبط لـ ISQ DEX على تكاثر الخلايا الليمفاوية. هذه التأثيرات بالتحديد من خلال CDPS (سيستانشعديد السكاريد) لتعزيز تكاثر الخلايا الليمفاوية التائية وتكون مستبدة بواسطة الخلايا التائية IL -2 والسيتوكينات الأخرى لإكمالها.

في السنوات الأخيرة ، كانت هناك العديد من الدراسات حول التأثيرات المناعية للسكريات النباتية ، ولكن هناك القليل من الدراسات حول التأثيرات المناعية للسكريات النباتية.منيعآلية تنظيم السكريات ، وخاصة مسار تحويل الإشارة للسكريات التي تعمل على الخلايا الليمفاوية مع Ca2 باعتباره المرسل الثاني. لا يوجد تقرير. أجريت هذه التجربة بحثًا أوليًا في هذا المجال. تتضمن جزيئات الإشارات داخل الخلايا cAM R Ca "، IP3 DG cGMP ، وما إلى ذلك ، من بينها Ca" لها تأثير فسيولوجي بالغ الأهمية على الخلايا. تعتبر الزيادة في تركيز Ca² داخل الخلايا ظاهرة مهمة في المرحلة المبكرة من تنشيط الخلايا الليمفاوية وانتشارها. تحدث هذه العملية بشكل رئيسي في أول عشرات من الثواني إلى الدقائق عندما يتم تنشيط الخلايا بواسطة المنشطات. الطريقة الكلاسيكية لتنشيط الخلايا التائية هي فوسفاتيديلينوسيتول (PIB) لاستقلاب عضلات الفوسفاتيديل. يمكن أن يعزز مستقلب الكحول 1.4. 5- إينوزيتول ثلاثي الفوسفات (IP3) إطلاق Ca "المخزنة في الشبكة الداخلية عن طريق الارتباط بمستقبلات الشبكة الداخلية ، مما يزيد من مستوى Ca داخل الخلايا ، وتركيز Ca داخل الخلايا * الزيادات. يمكن أن يعزز المرتفع إنتاج NF-AT (العامل العاري للخلية التائية المنشطة) ، وهذا الأخير له تأثير في تعزيز التعبير عن جين IIL -2. تظهر النتائج التجريبية أن تركيزًا أعلى (100 ميكروغرام / مل ) من CDPS (سيستانشعديد السكاريد) فعال لمدة 5 10 دقيقة للوقت تأثير كبير على زيادة تركيز Ca * في الخلايا التوتية في الماوس ، وله تأثير تآزري مع ConA. لذلك ، نتوقع أن CDPS (سيستانش عديد السكاريد) يعزز إطلاق الكالسيوم في الخلايا الليمفاوية في الفئران لزيادة تركيز أيون الكالسيوم داخل الخلايا. تعمل الزيادة على تعزيز التعبير عن جين IL -2 وتؤدي إلى تكاثر الخلايا التائية ، وهو أحد الأسس النظرية لـسيستانشعديد السكاريدالتأثير التنظيمي على الجسم

سيستانش عديد السكاريد

مراجع

1. في XiuHin ، SU Yuke (الوضع العام لبحوث علم الأدوية حولسيستانشSka 【J】. الأدوية الصينية التقليدية والأعشاب ((طب الأعشاب الصيني). 1993.24 (10. 550-552 (بالصينية))

2. ZHANG Weijiee (التكنولوجيا الكيميائية الحيوية لعديد السكاريد المركب [M]. Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press) ، 1994. 16-17 (بالصينية)

3. ماجستير بو- (ما باولي). جامعة شنغهاي الطبية (مطبعة جامعة شنغهاي الطبية) ، 1984 188-190. (ن صيني))

4. مقايسة Mosmann T. Rapiloloimeric لتسهيل النمو والبقاء على قيد الحياة لتطبيق الانتشار والسمية الخلوية بعيدًا [JJ Immun Meth.1983 ، 6 55- 58.

5. WU is-hi ، WU shailing ، Acai-n ، وآخرون (Wu Jiahui ، Wu Shuibing. Li Carian ، إلخ.) ، تأثير الزنك على تكاثر الخلايا الحلقية فيمنيعتحليل الأعضاء باستخدام قياس التدفق الخلوي [J]. علم المناعة الصيني (المجلة الصينية لعلم المناعة) ، 1994 ، 10x5: 278-281. (في الصين)

6. تاو أكسين. JIYong-yong ، GAO Qi-rong ، وآخرون (Tao Jiaxian ، Ji Yongpu Gao Qirong ، إلخ). تحليل FACS للتغيرات في C2 داخل الخلايا أثناء التنشيط [J] المجلة الصينية لعلم المناعة (مجلة الصين لعلم المناعة) ، 1993 ، 9 (2): 97-10 L. (بالصينية)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao، LU suchiang؛ تنقية د polysacdarideسيستانشديزيرتيكولاYC Mfa وتأثيراته المناعية على Tellfunction [J] .burnal of Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University) ، 1998.27 (3: 108-111. (بالصينية)

8. Sarin A ، Michelle C C. Perre AH Efed السام للخلايا لـ TNF و Lymphotoxin على T Lymphoblak. جي إمونول ، 1995 ، 1553716-3721.