لقاح الإنفلونزا الحي المضعف ثنائي التكافؤ يحمي من الانجراف H1N2 و H3N2 السريرية المعزولة في الخنازير الجزء 2

2.5 مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)

لصنع مستضدات الطلاء ، تم نشر SD435 و SD467 في خلايا MDCK وتنقيتها باستخدام تنبذ فائق متدرج من السكروز. حدث تعطيل للفيروسات عن طريق إضافة 97 في المائة من بروبيولاكتون إلى الفيروس بتركيز 1: 1000 (ت / ت) (Thermo Fisher Scientific ، AAB2319703). تم هز هذا الخليط عند 4 درجات مئوية طوال الليل ، وتم تحضينه عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين لتسهيل التحلل المائي لـ -بروبيولاكتون ، ثم تخزينه عند -80 درجة مئوية حتى الاستخدام.

المستضدات والمناعة لا ينفصلان. يشير المستضد إلى أي مادة يمكن أن يتعرف عليها الجهاز المناعي وتسبب استجابة مناعية ، بما في ذلك البكتيريا والفيروسات وخلايا الورم وما إلى ذلك ، بينما تشير المناعة إلى قدرة الجسم على الاستجابة لهذه المستضدات.

يمكن توضيح العلاقة بين المستضدات والمناعة باستعارة بسيطة: تمامًا مثل التمرين الذي يتطلب تدريبًا كافيًا ومكملات غذائية ، فإن تحسين المناعة يعتمد أيضًا على التلامس المتكرر مع المستضدات والخلايا المناعية والجزيئات المناعية المقابلة. ينتج. عندما يواجه الجهاز المناعي مستضدًا ، فإنه يهاجم عن طريق إنتاج أجسام مضادة معينة ، أو خلايا مناعية ، جنبًا إلى جنب مع خلايا الذاكرة لحمايتنا من الإصابة مرة أخرى.

أكد العلم أن تطوير عادات معيشية وأكل جيدة يمكن أن يساعد في تحسين المناعة. على سبيل المثال ، يمكن أن يساعد الحفاظ على النظافة ، وعدم التدخين ، وممارسة التمارين الرياضية المعتدلة وعادات النوم في الحد من غزو المستضدات مثل البكتيريا والفيروسات. في الوقت نفسه ، يمكن أن يساعد تناول بعض الأطعمة الغنية بمضادات الأكسدة والفيتامينات والمعادن ، مثل الخضروات والفواكه والحبوب الكاملة والأسماك ، في تحسين المناعة.

باختصار ، العلاقة بين المستضد والمناعة قريبة جدًا. فقط من خلال الاتصال المتكرر بالمستضدات والعادات المعيشية السليمة يمكن تحسين المناعة باستمرار ، ويمكن الوقاية من الأمراض المختلفة وعلاجها. لذلك ، يجب أن نحافظ على موقف إيجابي وأن ننمي عادات معيشية جيدة لحماية أنفسنا من الأمراض. يمكن ملاحظة أننا بحاجة إلى تحسين مناعتنا. يمكن أن يساعدنا Cistanche في تحسين مناعتنا ، لأن Cistanche غني بمجموعة متنوعة من المواد المضادة للأكسدة ، مثل فيتامين C ، والكاروتينات ، وما إلى ذلك. يمكن لهذه المكونات أن تزيل الجذور الحرة وتقلل من الإجهاد التأكسدي ، وتحسن مقاومة جهاز المناعة.

انقر فوق الملحق cistanche deserticola

لقياس مستويات IgG الخاصة بـ swIAV الناتجة عن التطعيم والتحدي ، تم أخذ مصل الخنازير بعد التطعيم الأول (اليوم 20) والثاني (اليوم 30) ، وقبل التشريح (اليوم 36).

تم تطبيق الفيروسات المنقاة المعطلة بالبروبيولاكتون SD435 (1 ميكروغرام / مل) و SD467 (2 ميكروغرام / مل) ، المخففة في طبقة عازلة لطلاء الكربونات / البيكربونات (درجة الحموضة 9.6) على لوحات بئر Immulon -2 96- عند 1 {{ 12}} 0 L / بئر (Thermo Labsystems ، أوتاوا ، أونتاريو ، كندا ، 3655) وحضنت طوال الليل عند 4 درجات مئوية. بعد فترة الحضانة طوال الليل ، تم غسل الألواح المطلية أربع مرات باستخدام TBST (0. 1 M Tris ، 0.17 M NaCl ، و 0.05 بالمائة Tween 20) ، والتي تمت إضافة التخفيفات التسلسلية بأربعة أضعاف من المصل أو BALF إلى طبق من نسختين ، متبوعًا بساعتين حضانة في درجة حرارة الغرفة. تمت إضافة المصل بتخفيف ابتدائي قدره 1:10 ، وأضيف BALF غير مخفف. تم تشغيل عينات من مصل التحكم الإيجابي المحدد مسبقًا والضوابط السلبية المناسبة ، والمصل ، و BALF من الخنازير غير المحصنة في دراسة سابقة على كل طبق [14].

تم غسل الألواح أربع مرات باستخدام TBST ، وبعد ذلك الماعز المضاد للخنازير IgG (H plus L) من الفوسفاتيز المسمى بالفوسفاتيز (1: 5000) (Sigma Aldrich ، SAB3700435) أو IgA المضاد للفئران (Serotec ، MCA658) ( تمت إضافة 1: 300) المخفف في TBST وتركها للاحتضان عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. تم تطوير IgA ELISAs عن طريق إضافة الأجسام المضادة IgG (H plus L) المضادة للفأر الماعز الحيوي (CALTAG ، Burlingame ، CA ، USA ، M30015) ومحلول الفوسفاتيز القلوي الستربتافيدين (Jackson ImmunoResearch ، West Grove ، PA) لمدة ساعة واحدة. في درجة حرارة الغرفة.

بعد الحضانة ، تم غسل كل من صفيحي IgG و IgA أربع مرات باستخدام TBST ، حيث كانت ركيزة فوسفات p-nitrophenyl (PNPP) [1 0 ملغم / مل من فوسفات النيتروفينيل ثنائي (تريس) بلوري الملح (سيغما-ألدريتش) تمت إضافة 1 بالمائة من ثنائي إيثانول أمين (Sigma-Aldrich) و 0.5 مجم / مل MgCl2 ودرجة الحموضة 9.8] (1 مجم / مل) واحتضانها عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين.

تم إيقاف التفاعل من خلال إضافة 0 .3 M ethylenediaminetraacetic acid (EDTA) ، وقراءة الصفائح في مقياس طيف ضوئي عند 405 نانومتر بمرجع يبلغ 490 نانومتر. تم تعريف عيار العينة على أنه أعلى تخفيف يكون فيه OD لتلك العينة أعلى من الحد المحدد (متوسط ​​OD لعينة سالبة معروفة بالإضافة إلى ضعف الانحراف المعياري).

2.6. مقايسة تحييد الفيروس (VN)

تم طلاء خلايا MDCK (3.5 × 104) في 96- ألواح جيدة. تم تعطيل حرارة المصل و BALF عند 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. تمت إضافة تخفيفات مضاعفة من المصل و BALF إلى اللوحة الرباعية ، وتم تحضين 60 ميكرولتر من المصل المخفف أو BALF بحجم متساوٍ من SD435 أو SD456 يحتوي على 100 TCID50 عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. تمت إضافة 100 ميكرولتر من الخليط بعد ذلك إلى خلايا MDCK ، وتم توثيق التأثير الممرض للخلايا (CPE) في 48 ساعة و 72 ساعة بعد الإصابة (pi). كان عيار الجسم المضاد المعادل هو أعلى تخفيف لكل عينة مصل يحمي الخلايا تمامًا من CPE في ما لا يقل عن 2 من 4 آبار.

2.7. التحديد الفيروسي

عند الجمع ، تم وضع عينات الرئة على الفور على الجليد وتجميدها عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى المعالجة. للمعالجة ، تم وزن كل نسيج رئوي وتمت إضافة تركيز 10 بالمائة (وزن / حجم) من MEM مع 1 × مضاد حيوي مضاد للفطريات (Thermo Fisher Scientific ، 15240-062). تم تجانس أنسجة الرئة في TissueLyser II (Qiagen ، Hilden ، ألمانيا) عند 30 هرتز لمدة 5 دقائق ، تليها الطرد المركزي عند 5000 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. تم جمع المادة الطافية المتجانس وتخزينها عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى مزيد من التحليل. تم تدوير مسحات الأنف لمدة 15 ثانية وطردها عند 1600 × جم لمدة 25 دقيقة عند 4 درجات مئوية. تم جمع المواد الطافية وتخزينها عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى مزيد من التحليل. تم تحديد التتر الفيروسي بواسطة مقايسة TCID50 للرئة و RT-PCR الكمي لمسحات الأنف.

2.8 استخراج الحمض النووي الريبي والكمي RT-PCR (qRT-PCR)

لتحديد مستويات الحمض النووي الريبي الفيروسي من SD467 و SD435 في مسحات الأنف بعد التحدي ، تم إجراء qRT-PCR. تم عمل منحنى قياسي باستخدام الحمض النووي الريبي المستخرج من SD435 و SD467 من عيار معروف. باختصار ، تم استخدام RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen، Toronto، ON، Canada، 74136) لاستخراج vRNA من 200 ميكرولتر من غسول الأنف. تم تحويل الحمض النووي الريبي إلى [كدنا] باستخدام الإنفلونزا الأولية العالمية Uni12 و SuperScript III Transcriptase (Invitrogen ، Burlington ، ON ، كندا) [19]. تم إجراء qPCR في ثلاث نسخ على نظام StepOnePlus TM Real-Time PCR (Applied Biosystems ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) باستخدام Power SYBR Green PCR Master Mix (النظم الحيوية التطبيقية) ، 5 ميكرولتر cDNA ، و 1 ميكرولتر من 10 ميكرومتر من البادئات الأمامية والخلفية. تم تشغيل تفاعلات PCR عند درجة حرارة التلدين 58 درجة مئوية لمدة 40 دورة. جميع تسلسلات qPCR الاشعال متاحة عند الطلب.

2.9 تحليل احصائي

تم إجراء التحليل الإحصائي باستخدام برنامج GraphPad Prism 8. تم استخدام اختبارات Mann-Whitney و Kruskal-Wallis غير البارامترية. يتم الإشارة إلى الاختلافات الجوهرية بواسطة * (p <0. 0 5) ، ** (p <0. 0 1) ، *** (p <0.001) ، أو **** (p <0.0001). ns=غير مهم.

3. النتيجة

3.1. التطعيم بلقاح ثنائي التكافؤ يوفر حماية ضد العزلات السريرية الجديدة

قمنا بقياس الاستجابة الجسدية لتحدي الفيروسات وكذلك التكاثر الفيروسي في الجهاز التنفسي لتقييم الحماية التي يوفرها اللقاح الثنائي التكافؤ ضد هذه العزلات السريرية الجديدة. تم تسجيل درجة الحرارة يوميا لمدة خمسة أيام بعد التحدي الفيروسي في جميع المجموعات. أظهرت الخنازير التي تم تحصينها بشكل وهمي وتحديها باستخدام SD435 (H3N2) (MEM / SD435) أو SD467 (H1N2) (MEM / SD467) ارتفاعًا نموذجيًا في درجة الحرارة في اليوم الأول من التحدي التالي للفيروس ، بمتوسط ​​درجات حرارة 40.6 درجة مئوية و 41.1 درجة مئوية. C على التوالي. لم يُشاهد هذا الارتفاع المفاجئ في المجموعات الملقحة التي تم تحديها بـ SD435 (ثنائي التكافؤ / SD435) أو SD467 (ثنائي التكافؤ / SD467) ، والتي كان متوسط ​​درجات الحرارة فيها 39.4 درجة مئوية و 39.6 درجة مئوية ، على التوالي. في الأيام 2-5 بعد التحدي ، كانت درجات حرارة كل من المجموعات المحصنة وغير الملقحة حوالي 39 درجة مئوية (الشكل 2 أ).

بعد خمسة أيام من التحدي ، تم تشريح جميع الخنازير ، مع إزالة الرئتين بالكامل وتحليلها لتحديد كمية الآفات الموجودة. أظهرت المجموعة ثنائية التكافؤ / SD435 إصابات طفيفة أو معدومة ، بمتوسط ​​0. 65 بالمائة إجمالي آفات الرئة. كان لدى مجموعة MEM / SD435 آفات أعلى بكثير من نظيرتها المحصنة ، بمتوسط ​​5.1 بالمائة (p {{7}. 0025) (الشكل 2 ب). في المجموعة ثنائية التكافؤ / SD467 ، كان لدى خمسة من أصل سبعة خنازير كميات منخفضة من الآفات (<2%), one had minor lesions (3.75%), and one outlier had high lesions (31%), with a group median of 1.9%. Compared with the vaccinated group, the MEM/SD467 group had a higher degree of lesions with a median of 4.55% (p = 0.0417) (Figure 1C).

في الرئتين ، كان لدى كل من المجموعتين Bivalent / SD435 و Bivalent / SD467 عيارات منخفضة من الفيروس ، بمتوسط ​​8.6 PFU / مل / غرام و 3. 0 PFU / مل / غرام ، على التوالي. على العكس من ذلك ، كان لدى مجموعات MEM / SD435 و MEM / SD467 كميات أعلى من الفيروسات ، بمتوسط ​​656.1 و 9118.2 PFU / مل / غرام ، على التوالي (ص=0. 0 025 لكليهما) (الشكل 3 أ ، ب). شوهدت اتجاهات مماثلة في مسحات الأنف. في المجموعة ثنائية التكافؤ / SD435 ، كانت عيارات الأنف منخفضة في الأيام 1 و 3 و 5 بعد التحدي (dpc) ، بينما في مجموعة MEM / SD435 كانت التتر مرتفعة قليلاً وزادت مع تقدم الأيام (ns) (الشكل 3C). في المجموعة ثنائية التكافؤ / SD467 ، كانت عيارات الأنف منخفضة أيضًا ، بمتوسط ​​أقل من 5 PFU / مل في اليومين 1 و 5 ، و 10.0 PFU / مل في اليوم الثالث بعد التحدي. كانت التتر أعلى في مجموعة MEM / SD467 في كل يوم ، بمتوسط ​​4123.6 PFU / مل / غرام على 1dpc (ص=0. 0278) ، 77233.1 PFU / مل / غرام (ع=0. 0009) على 3dpc و 65.2 PFU / مل / غرام على 5dpc (ns) (الشكل ثلاثي الأبعاد).

بشكل عام ، تشير هذه النتائج إلى أن اللقاح الثنائي التكافؤ يوفر درجة كبيرة من الحماية ضد سلالات التحدي ، مما يقلل من آفات الرئة وتكاثر الفيروس المرتبط بالعدوى بهاتين المعزولين من swIAV في الرئة والممرات الأنفية.

3.2 يحث اللقاح الثنائي التكافؤ على الاستجابات المناعية ضد سلالات التحدي

قمنا بقياس استجابة الجسم المضاد في المصل والرئة لكل من سلالتي التحدي بعد التطعيم المعزز الأولي بلقاح ثنائي التكافؤ. تم جمع المصل من الخنازير بعد اللقاح الأول (اليوم الثاني 0) وبعد اللقاح الثاني (اليوم 30). تم استخدام فيروسات التحدي SD435 (H3N2) و SD467 (H1N2) كمستضدات التقاط لقياس استجابة الأجسام المضادة IgG الخاصة بالفيروس في المصل. مع SD435 ، لم يكن هناك فرق كبير بين عيار الأجسام المضادة في MEM والمجموعات المحصنة ثنائية التكافؤ بعد التطعيم الأول (اليوم 20). ومع ذلك ، كان التتر ضد SD467 أعلى بشكل ملحوظ في المجموعة التي تم تلقيحها في اليوم 20 (ص=0. 0321). بعد اللقاح الثاني (اليوم 31) ، كانت عيارات الأجسام المضادة أعلى بشكل ملحوظ في المجموعة المحصنة ضد كل من SD435 و SD467 مقارنة بمجموعات اللقاح الوهمي MEM (P <0.0001) (الشكل 4 أ ، ب). على وجه التحديد ، مقابل التقاط مستضد SD435 ، بلغ متوسط ​​عيار IgG المصل في المجموعة المحصنة MEM 52 في اليوم 20 و 30 ، بينما كان 311 (اليوم 20) و 4852 (اليوم 30) في مجموعة اللقاح ثنائي التكافؤ (الشكل 3 أ). مقابل SD467 ، كانت عيارات IgG المصل في مجموعة MEM المحصنة بالزجاج 39 (يوم 20) و 38 (يوم 30) ، بينما في مجموعة اللقاح ثنائية التكافؤ ، كانت 219 (يوم 20) و 3509 (يوم 30) (الشكل 3 ب).

شوهدت اتجاهات مماثلة عند قياس عيار الأجسام المضادة في المصل ضد سلالتي التحدي. مرة أخرى ، لم يكن هناك فرق كبير بين عيار الأجسام المضادة المعادلة في MEM والمجموعات المحصنة ثنائية التكافؤ ضد SD435 بعد جرعة واحدة من اللقاح (اليوم 2 0) ​​(الشكل 5 أ ، ب). مقابل SD467 ، كانت مستويات الأجسام المضادة أعلى بشكل ملحوظ في اليوم الثاني 0 ، بعد لقاح واحد (ص=0. 0069). ضد كلا الفيروسين ، كانت هناك زيادة في عيارات الأجسام المضادة في مجموعات اللقاح ثنائية التكافؤ بعد الجرعة الثانية في اليوم 30) (p <0.0001). تم تحدي التتر في المجموعة المحصنة بالـ MEM بـ SD435 المتوفر 1 (اليوم 20) و 3 (اليوم 30) ، في حين بلغ متوسط ​​التتر في المجموعة ثنائية التكافؤ 10 (da20) و 77 (اليوم 30) (الشكل 5A). بلغ متوسط ​​التتر في مجموعة اللقاح الوهمي MEM مع SD467 0 (اليوم 20) و 2 (اليوم 30) ، بينما بلغ متوسط ​​التتر في مجموعة اللقاح ثنائية التكافؤ 10 (اليوم 20) و 54 (اليوم 30) (الشكل 5 ب).

عند التشريح (اليوم 36) ، تم جمع BALF من كل من الخنازير بحيث يمكن قياس مستويات الأجسام المضادة في الرئتين. تم استخدام فيروسات التحدي SD435 و SD467 كمستضدات التقاط لقياس استجابة IgA و IgG الخاصة بالفيروس. مقابل SD435 ، بلغ متوسط ​​مستويات IgA في مجموعات اللقاح الوهمي MEM 17 ، بينما كان التتر في مجموعة اللقاح ثنائي التكافؤ أعلى بكثير ، بمتوسط ​​95 (p=0. 0 0 14) (الشكل 6 أ). بالنسبة إلى SD467 ، بلغ متوسط ​​مستويات IgA 18 في مجموعة اللقاح الوهمي وكانت أعلى بكثير عند 158 في مجموعة اللقاح ثنائي التكافؤ (ص=0. 0185) (الشكل 6 ب). من حيث IgG ، بلغ متوسط ​​التتر مقابل SD435 في مجموعة اللقاح الوهمي MEM 3 ، بينما في المجموعة ثنائية التكافؤ ، كانت أعلى بكثير بمتوسط ​​138 (p <0.0001) (الشكل 6C). بلغ متوسط ​​الأجسام المضادة IgG مقابل SD467 16 في مجموعات اللقاح الوهمي MEM ، بينما في مجموعة اللقاح ثنائي التكافؤ ، كانت أعلى بكثير ، بمتوسط ​​259 (p <0.0001) (الشكل 6D).

فيما يتعلق بتحييد الأجسام المضادة في BALF ، كانت الاتجاهات مماثلة لتلك التي شوهدت في IgA و IgG ELISAs. مقابل SD435 ، لم يكن من الممكن اكتشاف عيار الأجسام المضادة المعادلة في مجموعات اللقاح الوهمي MEM ، وكان متوسطها أعلى بكثير عند 13.2 في مجموعة اللقاح ثنائي التكافؤ (p <0. 0 001) (الشكل 7 أ). وبالمثل ، بلغ متوسط ​​عيار الأجسام المضادة الخاصة بـ SD467 0.7 في مجموعات اللقاح الوهمي MEM وكان أعلى بشكل ملحوظ في مجموعة اللقاح ثنائي التكافؤ بمتوسط ​​عيار 10.9 (p=0 .0002) (الشكل 7 ب). إجمالاً ، تُظهر هذه البيانات أن جرعتين من اللقاح الثنائي التكافؤ تحفزان استجابة خلطية جهازية قوية ، فضلاً عن استجابة مناعية محلية في الرئة ضد هاتين العزلتين السريريتين غير المتماثلتين.

4. مناقشة

لقد أثبتنا سابقًا أن الفيروسات المعتمدة على الإيلاستاز SD 191- R342V و SD69.K345V كانت موهنة تمامًا وغير ضارة في الخنازير وأن التطعيمين باستخدام هذا اللقاح الثنائي التكافؤ أدى إلى استجابة مناعية قوية وتوفير الحماية ضد الإصابة بـ SD191 المتماثل ( سلالات H1N2) و SD69 (H3N2) [14). في هذه الدراسة الحالية ، أردنا اختبار ما إذا كان اللقاح ثنائي التكافؤ سيصمد في الجسم الحي ضد العزلات السريرية الحديثة التي خضعت لانجراف المستضد. SD467 ، مثل SD191 ، هو عضو في مجموعة مستضدات Ho -3 التي ظهرت في كندا ، لكنها اكتسبت طفرات عديدة في مواقع مستضدات رئيسية (12،15]. وبالمثل ، يمثل SD435 مجموعة H3N2 IV-E الموجود في غرب كندا ويمتلك عدة بدائل للأحماض الأمينية في مواقع مستضدات H3 الرئيسية من تلك الموجودة في SD69 (17].

قلل LAlV ثنائي التكافؤ بشكل كبير من الآفات في الخنازير المحصنة عند تحدي SD435 (H3N2) أو SD467 (H1N2) ومنع حدوث ارتفاع في درجة الحرارة الذي شوهد في المجموعات الملقحة MEM (الوهمية) بعد يوم واحد من التحدي. أدى ذلك أيضًا إلى تقليل التكاثر الفيروسي لكل من السلالتين في الرئة وتقليل SD467 (H1N2) في مسحات الأنف. ومن المثير للاهتمام ، أن عيارات الأنف SD435 (H3N2) كانت منخفضة في كل من المجموعات المحصنة وغير المحصنة ، على الرغم من طرق أخذ العينات المتطابقة ، مما يشير إلى أن هذه السلالة قد لا تحتوي على نفس القدر من الانتفاخ في الممرات الأنفية. فيما يتعلق بالخنازير النائية في المجموعة التي حصلت على درجة عالية من آفة الرئة تبلغ 31 ، لم تظهر قياسات درجة الحرارة أي ارتفاع في التحدي ، وكانت عيارات الفيروس في الرئة أقل من 10 PFU / جم / مل. كانت مستويات الأجسام المضادة في المصل واستجابة الرئة المحلية هي نفسها كما في جميع الخنازير الملقحة الأخرى. هذا يقودنا إلى التكهن بأن الآفات لم تكن مرتبطة بالإنفلونزا. كشف التحليل المصلي عن وجود استجابة مناعية قوية ضد كلا السلالتين بعد جرعتين من اللقاح وثبت نفس الشيء فيما يتعلق بالتحليل الموضعي في الرئة. تعتبر البروتينات السكرية السطحية الموجهة بالأجسام المضادة ذات أهمية قصوى في الحماية من عدوى IAV ، لذا فإن المستوى العالي من الأجسام المضادة المعادلة بالإضافة إلى lgG و lgA الموجودة في الخنازير المحصنة تدعم الحماية الموجودة في الجسم الحي [20].

لقاحات الفيروس المعطل بالكامل (WIV) هي الأكثر شيوعًا المتاحة للسوينالتصنيع التقليدي مع المواد المساعدة ، فهي تعتبر نهجًا آمنًا نظرًا لعدم وجود خطر إعادة التصنيف مع السلالات المنتشرة. ومع ذلك ، فهي توفر فعالية محدودة ضد السلالات غير المتطابقة وقد ثبت أنها تؤدي إلى اضطراب الجهاز التنفسي المعزز المرتبط باللقاح (VAERD) عند استخدامها ضد السلالات غير المتطابقة. فعاليتها تتضاءل أيضًا في وجود الأجسام المضادة المشتقة من الأم (MDAs) [4]. تلك المتوفرة تجاريًا في أمريكا الشمالية تشمل FluSure XP® ، والذي يتوفر على شكل تركيبة رباعي التكافؤ في الولايات المتحدة مع مجموعات H1N1 و H1N2 و H3N2 IV-A و IV-B [21]. تتوفر تركيبة قديمة من Flusure XP® في كندا مع سلالتين من H1N1 وسلالة H1N2 معزولة بين عامي 2000 و 2005 [22]. في كل من بلدان أمريكا الشمالية ، يتوفر لقاح FluSure® Pandemic ، وهو لقاح أحادي التكافؤ يتكون من سلالة H1N1pdm09 ، بالإضافة إلى Pneumostar SIV Complete (Elanco ، Greensboro ، North Carolina ، US Inc.) ، والتي تحتوي على H1N1 و H1N2 و H3N2 و Pneumostar SIV ، مع سلالات من النوع الفرعي H1N1 و H3N2 (GOC ، وزارة الزراعة الأمريكية) [23،24]. تمثل هذه اللقاحات المتوفرة تجارياً حوالي 50 بالمائة من لقاحات أنفلونزا الخنازير في أمريكا الشمالية ، و 50 بالمائة الأخرى من اللقاحات ذاتية التولد [4].

فيما يتعلق بمنصات اللقاح البديلة ، تم ترخيص لقاح جسيم متشابك مشتق من فيروسات ألفا في الولايات المتحدة الأمريكية [4]. تستخدم منصة اللقاح هذه فيروسات ألفا ذات جينوم متغير ، حيث يتم استبدال الجينات الهيكلية الفيروسية بجين مختار ، مما يجعل تكاثر الفيروس ألفا معيبًا. هذا الحمض النووي الريبي يتكاثر ذاتيًا ، لذا فإن منصة اللقاح تؤدي إلى التعبير العالي عن الجين محل الاهتمام ، وبالنسبة للأنفلونزا ، تم اختبار كل من HA والبروتين النووي (NP) كمستضدات [25]. أظهرت الدراسات أن استخدام هذه المنصة يحمي من تحديات HA المتطابقة والمتطابقة مع المستضدات ، فضلاً عن السلالات غير المتطابقة NP ، على الرغم من أن النظام الأساسي لم يكن قادرًا على الحماية من وجود MDAs.

تمت الموافقة على أول LAIV لأنفلونزا الخنازير من قبل وزارة الزراعة الأمريكية (USDA) في عام 2017. Ingelvac Provenza ™ هو لقاح ثنائي التكافؤ H3N2 و H1N1 ، مع HA و NA من سلالتين معزولتين في الولايات المتحدة ، معبراً عنه في العمود الفقري TX98 ، تضعف من خلال اقتطاع البروتين غير البنيوي (NS1) [14،26]. تحاكي LAIVs العدوى الطبيعية وتؤدي إلى زيادة مناعة الغشاء المخاطي في الشعب الهوائية العليا عند توصيلها عن طريق الأنف. عندما تؤدي اللقاحات المعطلة بشكل أساسي إلى إنتاج أجسام مضادة IgG جهازية ، يمكن للقاحات الحية المضعفة أن تحفز الغشاء المخاطي IgA في الجهاز التنفسي ، بالإضافة إلى زيادة الاستجابة الخلوية بسبب تعرض الجهاز المناعي لبروتينات الإنفلونزا الداخلية ، والتي تحتوي على المزيد من T حواتم الخلية [27]. هذا يؤدي إلى حماية أفضل ضد السلالات غير المتطابقة.

لقد أظهروا حماية جزئية في وجود MDAs. تكون الأجسام المضادة IgG الكاملة أكثر انتشارًا في الجهاز التنفسي السفلي ، وتكون الأجسام المضادة البوليمرية IgA هي السائدة في الجهاز التنفسي العلوي للخنازير ، وغالبًا ما تكون ثنائيات [28]. يتم إنتاج هذه الأجسام المضادة محليًا ويتم نقلها عبر طبقة الخلايا الظهارية حيث تظل في المخاط ، بمساعدة مكون إفرازي يقاوم التحلل بواسطة البروتياز [28 ، 29]. الأجسام المضادة IgA هي خط الدفاع الأول لنظام المناعة التكيفي ضد مسببات الأمراض القادمة ، وتعمل على منع الارتباط الفيروسي بمستقبلات حمض السياليك [30]. تكون الأجسام المضادة البوليمرية IgA على نطاق واسع أكثر تفاعلية من الأجسام المضادة IgG أحادية التكافؤ ، ويحتمل أن يكون ذلك بسبب الارتباط متعدد التكافؤ [31]. أظهرت الدراسات أيضًا أن هذه الأجسام المضادة يمكن أن تمنع إطلاق IAV المتشكل حديثًا من الخلايا المصابة بكفاءة أكبر بكثير من IgG أو IgA أحادي ، والذي يمكن العثور عليه في مصل الخنازير ، مما يشير إلى أن التركيب البوليمري لـ IgA مفيد لربط ذرية الفيروس. ل HA المعبر عنها على سطح الخلية المصابة [31-33]. لذلك فإن استجابة الجسم المضاد IgA المحلي جزء لا يتجزأ من الحماية من العدوى بـ Ig وقد تم اقتراح أن تكون مرتبطة بالحماية في البشر [34].

ومع ذلك ، فإن الخطر مع LAIV هو احتمال إعادة التجميع مع السلالات المنتشرة. وجدت دراسة في علم الوراثة في الولايات المتحدة الأمريكية سلالات جديدة متداولة أعيد تصنيفها مع سلالات اللقاح المتضمنة في Ingelvac Provenza ™ [26]. تقلل منصة LAIV المعتمدة على الإيلاستاز من هذا الخطر ، حيث إن بروتين الإيلاستاز نادر جدًا في الجهاز التنفسي للخنازير ، لذا فإن تكرار فيروسات اللقاح مقيد للغاية ، كما هو الإطار الزمني لحدوث إعادة التجميع. ستشمل الدراسات المستقبلية تقييم مخاطر إعادة تصنيف هذا اللقاح الثنائي التكافؤ ، وكذلك كيف يصمد هذا اللقاح في وجود MDAs. سيكون من المثير للاهتمام أيضًا اختبار الاستجابة الخلوية لهذا اللقاح ، حيث أن هذا أحد الفوائد الرئيسية لـ LAIV. في الختام ، امتد LAIV المعتمد على الإيلاستاز ثنائي التكافؤ الحماية إلى العزلات السريرية الجديدة الموجودة في غرب كندا ، وسيسد بعض الثغرات في سوق لقاح أنفلونزا الخنازير.

الكاتب الاشتراكات:

التصور ، YZ ؛ المنهجية ، YZ ، و LA ؛ التحليل الرسمي ، LA ؛ التحقيق ، LA و UB-C ؛ الموارد ، التنمية المستدامة ؛ الكتابة - إعداد المسودة الأصلية ، لوس أنجلوس ؛ الكتابة - المراجعة والتحرير ، YZ و UB-C و SD ؛ الإشراف ، YZ ؛ الحصول على التمويل ، YZ قرأ جميع المؤلفين النسخة المنشورة من المخطوطة ووافقوا عليها.

التمويل:

تم تمويل هذا البحث من قبل صندوق التنمية الزراعية (ADF) ، وزارة الزراعة في ساسكاتشوان. يتم دعم LA جزئيًا من خلال منحة علم اللقاحات والعلاج المناعي (V&I) من كلية الصحة العامة بجامعة ساسكاتشوان. تتلقى VIDO تمويلًا تشغيليًا من حكومة ساسكاتشوان من خلال Innovation Saskatchewan ووزارة الزراعة ومن مؤسسة كندا للابتكار من خلال المبادرات العلمية الرئيسية لمنشآتها CL3 (InterVac).

بيان مجلس المراجعة المؤسسية:

غير قابل للتطبيق.

بيان توفر البيانات:

تم الإبلاغ عن جميع بيانات وتحليلات هذه الدراسة في هذه المقالة.

شكر وتقدير:

نود أن نشكر الأطباء البيطريين وفنيي الحيوانات في VIDO لأداء جميع الأعمال الحيوانية لتجاربنا على الحيوانات. نُشر هذا العمل بإذن من مدير VIDO كسلسلة مخطوطات # 1005.

تضارب المصالح:

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

مراجع

Webster ، RG Influenza virus: الانتقال بين الأنواع والأهمية لظهور الجائحة البشرية التالية. قوس. فيرول. ملحق. 1997 ، 13 ، 105-113. [PubMed]

2. Li، Y .؛ روبرتسون ، I. علم أوبئة أنفلونزا الخنازير. الرسوم المتحركة. ديس. 2021، 1، 21. [CrossRef] [PubMed]

3. دونوفان ، ت. دور الإنفلونزا في زيادة أداء الخنازير ؛ جامعة مينيسوتا: مينيابوليس ، مينيسوتا ، الولايات المتحدة الأمريكية ، 2005.

4. جراسيا ، JCM ؛ بيرس ، د. ماسك ، أ. Balasch، M. Influenza A Virus in الخنازير: علم الأوبئة والتحديات واستراتيجيات التطعيم. أمام. طبيب بيطري. 2020، 7، 647. [CrossRef] [PubMed]

5. Ma، W. فيروس أنفلونزا الخنازير: الوضع الحالي والتحدي. دقة الفيروس. 2020، 288، 198118. [CrossRef]

6. سوزوكي ، واي. إيتو ، تي. سوزوكي ، تي. هولندا ، RE ؛ الغرف ، TM ؛ كيسو ، م. إيشيدا ، ح. كاواوكا ، واي.أنواع حمض السياليك كمحدد للمجموعة المضيفة لفيروسات الإنفلونزا أ. J. فيرول. 2000 ، 74 ، 11825-11831. [CrossRef]

7. الشمس ، ح. شياو ، واي. ليو ، ياء ؛ وانغ ، د. لي ، ف. وانغ ، سي. لي ، سي. تشو ، ياء ؛ سونغ ، ياء ؛ الشمس ، ح. وآخرون. فيروس إنفلونزا الخنازير H1N1 الشبيه بالطيور الأوراسي مع جينات فيروسية جائحة عام 2009 تسهل العدوى البشرية. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 2020 ، 117 ، 17204–17210. [CrossRef]

8. Henritzi، D.؛ بيتريك ، ب. لويس ، NS ؛ جراف ، أ. بيسيا ، أ. ستاريك ، إي. بريثوبت ، أ. ستريبيلو ، جي ؛ Luttermann ، سي ؛ باركر ، إل إم كي ؛ وآخرون. تحدد مراقبة مجموعات الخنازير المحلية الأوروبية خزانًا ناشئًا لفيروسات إنفلونزا الخنازير الحيوانية المحتملة. ميكروب مضيف الخلية 2020 ، 28 ، 614-627. [CrossRef]

9. فنسنت ، أل ؛ أماه ، دبليو. الجعة ، كم ؛ يانكي ، البوسنة والهرسك ؛ فيروسات أنفلونزا الخنازير Richt ، JA: منظور أمريكا الشمالية. حال. دقة الفيروس. 2008 ، 72 ، 127-154.

10 - راجاو ، د. أندرسون ، TK ؛ كيتيكون ، ص. ستراتون ، ياء ؛ لويس ، NS ؛ Vincent، AL Antigenic and genetic Evolution of h1 h1 ang فيروسات أنفلونزا الخنازير في الولايات المتحدة. علم الفيروسات 2018 ، 518 ، 45-54. [CrossRef]

11. مينا أنا. أنا نيلسون ، م. كويزادا مونروي ، ف. دوتا ، ياء ؛ كورتيس فرنانديز ، ر. لارا بوينتي ، JH ؛ كاسترو بيرالتا ، ف. كونها ، LF ؛ Trovão ، NS ؛ لوزانو دوبرنارد ، ب. وآخرون. أصول جائحة إنفلونزا H1N1 لعام 2009 في الخنازير في المكسيك. إلييف 2016 ، 5 ، e16777. [CrossRef]

12. نيلسون ، ميشيغان ؛ كولهان ، م. Trovão ، NS ؛ باتناياك ، دى بى ؛ هالبين ، را. لين ، العاشر ؛ Shilts ، MH ؛ داس ، ريال ؛ Detmer، SE ظهور وتطور فيروسات الأنفلونزا A (H1) في الخنازير في كندا والولايات المتحدة. جي الجنرال فيرول. 2017 ، 98 ، 2663-2675. [CrossRef] [PubMed]

13. Chauhan، RP؛ جوردون ، ML A مراجعة منهجية لتحليل انتشار وتداول فيروسات الأنفلونزا في أعداد الخنازير في جميع أنحاء العالم. مسببات الأمراض 2020، 9، 355. [CrossRef]

14. Landreth، S. ديتمير ، إس. غيردتس ، ف. Zhou ، Y. يقي لقاح فيروس الأنفلونزا الحي المضعف ثنائي التكافؤ من العدوى الفيروسية H1N2 و H3N2 في الخنازير. دكتور بيطري. ميكروبيول. 2020، 253، 108968. [CrossRef] [PubMed]

15. ماكورميك ، ك. جيانغ ، زي. تشو ، إل. لوسون ، س. لانجينهورست ، ر. رانسبرغ ، ر. برونيك ، سي ؛ تريسي ، مولودية ؛ Hurtig، HR؛ مابي ، م. وآخرون. تقييم البناء والمناعة لفيروسات الأنفلونزا A المؤتلفة التي تحتوي على جينات Hemagglutinin الكيميرية المشتقة من فيروسات الأنفلونزا A H1N1 المتباينة وراثيًا. بلوس وان 2015 ، 10 ، e0127649. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com