آثار Phellinus Vaninii المضادة للأكسدة ومضادة للميلانين ومضادة للتجاعيد

جهة الاتصال: ali.ma@wecistanche.com

1 المقدمة

الشوارد الحرةوأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) بشكل عام أنواع كيميائية غير مستقرة وعالية التفاعل. وهي مشتقة بشكل أساسي من المسارات الأيضية الأنزيمية وغير الأنزيمية في خلايا جسم الإنسان من خلال نظام النقل الإلكتروني للميتوكوندريا للتنفس ، البلعمة ، تخليق البروتاجلاندين ، ونظام الشبكة الإندوبلازمية [1]. ومع ذلك ، فإن الجذور الحرة وأنواع الأكسجين التفاعلية تتولد أيضًا من التعرض لمصادر خارجية ، بما في ذلك المعادن الثقيلة ودخان التبغ والمواد الكيميائية والملوثات الصناعية [2]. تم الإبلاغ عن أنها تسبب أمراضًا مختلفة ، مثل الشيخوخة وأمراض القلب والأوعية الدموية واضطرابات الجهاز التنفسي والسكري والروماتيزم وأمراض الكبد [3].

Xanthine oxidase (XO) يحفز أكسدة الهيبوكسانثين إلى الزانثين ويحول الزانثين إلى حمض البوليك. يتميز النقرس بتركيز مكثف من حمض اليوريك (فرط حمض يوريك الدم) في الدم مما يؤدي إلى ترسب بلورات حمض اليوريك في المفاصل مما يسبب التهابًا مؤلمًا ، ويعاني 5-30 في المائة من سكان العالم من النقرس ، وهو ما يعتبر عامل خطر مهم على صحة الإنسان [4،5]. لعلاج النقرس ، يتم استخدام مثبطات XO التي تخفض تركيز حمض اليوريك في البلازما بشكل عام [6]. على الرغم من استخدام الوبيورينول ، وهو أحد مثبطات XO ، لعلاج النقرس ، فقد تم تطوير مثبط جديد لـ XO ، وهو febuxostat ، مؤخرًا. ومع ذلك ، فإن الدواء له العديد من الآثار الجانبية ، بما في ذلك التهاب الكبد ، واعتلال الكلية ، وردود الفعل التحسسية [7]. وبالتالي ، استمر البحث عن مثبطات XO جديدة ذات فعالية علاجية جيدة وآثار جانبية أقل.

Tyrosinase هو إنزيم مؤكسد يحتوي على النحاس يحد من المعدل ويوجد عادة في النباتات والكائنات الحية الدقيقة والحيوانات. يشارك التيروزيناز في المسارات الاصطناعية للميلانين عن طريق هيدروكسيل- أتيون من L-tyrosine إلى 3 ، 4- dihydroxyphenylalanine (DOPA) وتحويل DOPA إلى dopaqui- لا شيء [8]. يتم إنتاج الميلانين بواسطة الخلايا الصباغية في الميلانوزومات ويلعب دورًا مهمًا في حماية البشرة من الآثار الضارة للأشعة فوق البنفسجية من أشعة الشمس. فرط تصبغ الجلد الناتج عن زيادة نشاط إنزيم الميلانين الاصطناعي عن طريق التعرض المفرط للأشعة فوق البنفسجية قد يسبب اضطرابات جلدية ، بما في ذلك الكلف والبهاق والنمل [9،10]. في الآونة الأخيرة ، أصبحت مثبطات التيروزيناز مهمة لمنع مشاكل التصبغ والاضطرابات الطبية الأخرى المرتبطة بالميلانين. نظرًا لأن العديد من النساء يفضلن تفتيح بقع البشرة الداكنة ، فقد ركزت الصناعات الطبية والتجميلية على مثبطات التيروزيناز لعلاج فرط تصبغ الجلد [11]. للتعامل مع هذه المشاكل ، تم تطوير المركبات العضوية الناتجة عن الكائنات الحية الدقيقة والنباتات ، مثل حمض الكوجيك ، والأربوتين ، وحمض الأزيليك ، وحمض الجنتيسيك ، وغيرها كعوامل لتبييض البشرة [12]. يتم تحديد فعالية مركبات التبييض عن طريق تثبيط التيروزيناز في الأنظمة الخالية من الخلايا أو عن طريق تثبيط التيروزيناز الخلوي ويتم فحص المصادر الجديدة لمثبطات التيروزين من النباتات والكائنات الحية الدقيقة [13].

شيخوخة الجلد هي عملية بيولوجية حتمية للكائنات الحية وتحرضها عوامل داخلية وخارجية. شيخوخة الجلد الجوهرية ، والتي تسمى أيضًا الشيخوخة المعتمدة على العمر أو الشيخوخة الزمنية ، ناتجة عن عوامل فسيولوجية داخلية للجسم ، في حين أن الشيخوخة الخارجية ناتجة عن العديد من العوامل الخارجية ، بما في ذلك تعرض الجلد للأشعة فوق البنفسجية ، وتدخين السجائر ، وتلوث الهواء ، إلخ. هذه العوامل يمكن أن تسبب التجاعيد ، والتصبغ ، وتغيرات في سمك الجلد [14]. الجلد هو النسيج الخارجي الرخو الذي يتكون من أنسجة جلدية وتحت الجلد. الجزء الخارجي من الجلد عبارة عن مصفوفة خارج الخلية (ECM) وتتكون من الكولاجين والإيلاستين [15]. يوفر الكولاجين مرونة وقوة ومرونة للجلد. كما أنه يحافظ على الهيكل البنيوي للجلد ويلعب دورًا محوريًا في الحفاظ على الوظائف الخلوية الطبيعية في تشكل الجلد [16]. الإيلاستين هو بروتين رئيسي موجود في النسيج الضام لـ ECM ويوفر مرونة للجلد. Collagenase ، وهو endopeptidase المعتمد على الزنك ، قادر على تحطيم مكونات ECM ، على وجه التحديد ، النوع 1 من الكولاجين. يكسر Elastase ، وهو إنزيم البروتياز ، الإيلاستين والكولاجين ، ويحدد الخصائص الميكانيكية والهيكلية للنسيج الضام في ECM [17]. لذلك ، من المستحسن تطوير مثبطات دوائية لمنع شيخوخة الجلد ، مثل ترهل الجلد والتجاعيد.

تم استخدام الفطر كمصادر غذائية جيدة وطب شعبي تقليدي لآلاف السنين في العديد من البلدان المختلفة. تحتوي أجسامها المثمرة على مستقلبات نشطة بيولوجيًا ذات قيمة طبية عالية ، بما في ذلك ب-جلوكان ، وعديد السكاريد ، والبوليفينول ، والفلافونويد ، والتربينويدات ، والمركبات العضوية الأخرى ، التي توفر تحفيزًا للمناعة ، ومضادًا للأورام ، ومضادًا لفرط سكر الدم ، ومضادًا للفرط. أنشطة الكوليسترول في الدم ، والكبد ، والالتهابات المثبطة [18-20].

ينتمي Phellinus vaninii ، المعروف باسم "sanghuang" ، إلى Basidiomycota و Aphyllophorales و Hymenochaetacae ويتم توزيعه في شرق آسيا وروسيا [21]. تمت دراسة العديد من أنواع الفطر التي تنتمي إلى جنس Phellinus ، بما في ذلك Ph. baumi و Ph. الأنشطة المضادة للميكروبات والأورام [22 ، 23].

على الرغم من أن Ph. vaninii أصبح متاحًا في كوريا ، إلا أنه لا يوجد سوى عدد قليل من التقارير عن آثاره الطبية [24]. لذلك ، كان الغرض من هذه الدراسة هو تقييم مضادات الأكسدة ، ومضاد أوكسيديز الزانثين ، والتأثيرات المضادة للميلانوجين والمضادة للتجاعيد لمقتطفات الميثانول والماء الساخن للأجسام المثمرة لدرجة الدكتوراه.

2. المواد والأساليب

2.1. المواد الكيميائية والكواشف

هيدروكسي تولوين بوتيل (BHT) ، 1 ، 1- ثنائي فينيل -2- بيكريل-هيدرايز (DPPH) ، ثنائي ميثيل سلفوكسيد ، (DMSO) أوكسيديز زانثين ، تيروسيناز ، لام -3 ، 4- ثنائي هيدروكسي فيني ألانين (DOPA) ، زانثين أوكسيديز ، ألوبيورينول ، حمض كوجيك ، أربوتين ، كولاجيناز ، بنكهة الخنازير - تم شراء الإيلاستاز من شركة سيجما الدريش (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وجميع المواد الكيميائية والمذيبات الأخرى المستخدمة في كانت تجارب الدراسة من الدرجة التحليلية.

2.2. مستخلص الفطر

تم الحصول على الأجسام المثمرة للدكتوراه فانيني من معهد أبحاث الفطر التابع لمعهد جيونج جي للتكنولوجيا الزراعية في كوريا. تم تجفيف أجسام الثمار بالهواء (45 درجة لمدة 48 ساعة) وسحقها جيدًا. لتحضير مستخلص الميثانول (ME) ، تم الاحتفاظ بـ 20 جرام من المسحوق في 400 مل من 80 بالمائة من الميثانول في شاكر مداري (125 دورة في الدقيقة) لمدة 24 ساعة عند 25 درجة. تم ترشيح المحلول من خلال ورق الترشيح. للحصول على مستخلص الماء الساخن (HE) ، تم غلي نفس الكمية من المسحوق لمدة 3 ساعات باستخدام 400 مل من الماء المقطر منزوع الأيونات وترشيحه من خلال ورق الترشيح. بعد ذلك ، تم استخلاص المتبقي المتبقي باستخدام 400 مل من 80 بالمائة من الميثانول أو الماء الساخن مرتين ، كما هو موصوف أعلاه ، على التوالي. بعد ذلك ، تم تبخير المستخلصات المركبة حتى تجف عند 40 درجة ، وإزالة الماء المتبقي بمجفف بالتجميد.

مستخلص سيستانش

2.3 إجمالي محتوى الفينول والفلافونويد

تم تحديد إجمالي محتوى الفينول لـ ME و HE باستخدام تعديل طفيف لمقايسة Folin- Ciocalteu [25]. تمت إضافة قسامة 1 مل من ME و HE إلى 1 مل من محلول Folin-Ciocalteu بنسبة 10 بالمائة. تم تدوير المحلول وتركه لمدة 3 دقائق عند 25 درجة. ثم ، 3 مل من 2 في المئة من كربونات الصوديومتمت إضافة محلول (Na2CO3) والاحتفاظ به لمدة ساعتين عند 25 درجة مئوية. تم قياس الامتصاص باستخدام مقياس طيف عند 760 نانومتر. تم التعبير عن إجمالي محتوى الفينول كمكافئات ملغ حمض الجاليك (GAE).

تم قياس محتوى الفلافونويد الكلي بمقايسة لونية لكلوريد الألومنيوم معدلة قليلاً (AlCl3) [26]. تم إذابة قسامة (1 مل) من ME و HE في 1 مل ماء منزوع الأيونات. تمت إضافة هذا المحلول (1 مل) إلى 3. 0 مل من 95 بالمائة كحول ، 0. 2 مل من 1 0 بالمائة من كلوريد الألومنيوم ، 0.2 مل من أسيتات البوتاسيوم (1 م) ، و 5.6 مل من الماء منزوع الأيونات. بعد ذلك ، تم تحضين خليط التفاعل عند 25 درجة لمدة 40 دقيقة ، وتم قياس الامتصاصية بمطياف عند 415 نانومتر. تم التعبير عن محتوى الفلافونويد الكلي كمكافئات ملغ كيرسيتين (QE).

2.4 فحص جدوى الخلية

2.4.1. زراعة الخلايا

تم الحصول على خط الخلايا F10 من سرطان الجلد الفأري B 16- من مصرف Korean Cell Line التابع لمؤسسة Korean Cell Line Research Foundation ، سيول ، كوريا. تمت زراعة الخلايا في Dulbecco's Modified Eagle's Media (DMEM) مع 10 بالمائة من مصل بقري جنيني معطل بالحرارة (FBS) ، و 1 بالمائة بنسلين ستربتومايسين عند 37 درجة في حاضنة مرطبة مع 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون في الغلاف الجوي.

2.4.2. صلاحية الخلية

تم تقدير تأثير ME و HE على قابلية بقاء الخلايا B {0}} F10 بواسطة مقايسة MTT [27]. تمت زراعة الخلايا (5104) في صفيحة بئر 24- وحضنت لمدة 24 ساعة عند 37 درجة. بعد ذلك ، عولجت الخلايا بتركيزات مختلفة من ME و HE (25-750 ملجم / مل) وحضنت لمدة 48 ساعة. بعد ذلك ، تم تكميل كل بئر بـ 200 مل من محلول MTT (0.5 مجم / مل) واحتضانها لمدة 4 ساعات في الظلام. تمت إذابة بلورات فورمازان الملونة الناتجة في 200 مل من DMSO وتم قياس الامتصاص باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية عند 570 نانومتر.

2.5 فحص مضادات الأكسدة

2.5.1. نشاط الكسح DPPH

تم تحديد تأثير الكسح الجذري لـ ME و HE من أجسام ثمر Ph. vaninii باستخدام مقايسة DPPH [28] مع تعديلات طفيفة. باختصار ، تم خلط 1 مل من تركيزات مختلفة من ME و HE (0. 125-2. 0 مجم / مل) مع I مل من DPPH (0. 1 مم) في الميثانول. تم رج الخليط وحفظه لمدة 30 دقيقة عند 25 درجة. تم قياس الامتصاصية بمقياس طيف ضوئي عند 517 نانومتر. تم حساب تأثير الكسح الجذري لـ DPPH باستخدام الصيغة التالية:

نسبة نشاط الكسح الجذري لـ DPPH=[(Absc-Abss) / Absc] × 100,

حيث يمثل Absc امتصاص التحكم في السيارة ويمثل Abss امتصاص العينة. تم استخدام BHT كمعيار مرجعي.

2.5.2. تثبيط بيروكسيد الدهون

تم تقييم النشاط المثبط لتثبيط بيروكسيد الدهون لـ ME و HE من أجسام Ph. vaninii المثمرة باستخدام طريقة موصوفة سابقًا [29] مع تعديل طفيف. باختصار ، تمت إضافة 25 0 مل من متجانس صفار البيض (1 0 بالمائة في الماء المقطر) ، و 5 0 مل من كل من ME و HE ، و 200 مل من الماء المقطر إلى أنبوب اختبار . تمت إضافة خمسة وعشرين مليلترًا من FeSO4 (0.07 م) واحتضانها لمدة 30 دقيقة عند 25 درجة مئوية ، ثم 750 مل من حمض الأسيتيك بنسبة 20 بالمائة (درجة حموضة 3.5) و 750 مل من حمض الثيوباربيتوريك بنسبة 0.8 بالمائة (TB) في 1.1 بالمائة دوديسيل الصوديوم. تمت إضافة كبريتات (SDS) مع 25 مل من 20 في المائة من حامض ثلاثي كلورو أسيتيك (TCA) ودُفع الخليط وحضنته في حمام مائي لمدة 60 دقيقة عند 100 درجة مئوية بعد التبريد إلى 25 درجة مئوية ، 3.0 مل من 1- تمت إضافة البيوتانول إلى كل أنبوب وتم طردهم لمدة 10 دقائق عند 3000 دورة في الدقيقة. تم قياس امتصاص المحلول باستخدام طيف ضوئي عند 532 نانومتر. تم حساب التأثير المثبط لبيروكسيد الدهون باستخدام الصيغة التالية:

تثبيط بيروكسيد الدهون (نسبة مئوية)=[(Absc - Abss) / Absc] × 100،

حيث يمثل Absc امتصاص التحكم في السيارة ويمثل Abss امتصاص عينة الاختبار. تم استخدام BHT كمعيار مرجعي.

2.5.3. نشاط كسح جذور الهيدروكسيل

تم قياس تأثير الكسح الجذري للهيدروكسيل لـ ME و HE من أجسام ثمر Ph. vaninii باستخدام طريقة منشورة [3 0] مع تعديلات طفيفة. باختصار ، 0. تم ​​تحضين 5 مل من تركيز مختلف من ME و HE (0. 125-2. 0 مجم / مل) في محلول يحتوي على 1 0 { {34}} مل من 2.8 ملي مولار 2- deoxy- ribose في المخزن المؤقت للفوسفات (10mM ، pH 7.4) ، 200mL من FeCl3 (200 microM) -EDTA (1.04 microM) (1: 1 v / v) ، 100 مل من H2O2 (1.0 ملم) ، و 100 مل من حمض الأسكوربيك (1.0 ملم). تم قياس كمية تحلل الديوكسيريبوز بعد إضافة 1.0 مل من 1 بالمائة TBA ، متبوعًا بالحضانة عند 100 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. تم قياس الامتصاصية على مقياس طيف ضوئي عند 532 نانومتر. تم حساب التأثير المثبط لكسح جذور الهيدروكسيل باستخدام الصيغة التالية:

كسح جذور الهيدروكسيل (نسبة مئوية)=[(Absc - Abss) / Absc] × 100

حيث يمثل Absc امتصاص التحكم في السيارة ويمثل Abss امتصاص عينة الاختبار. تم استخدام BHT كمعيار مرجعي.

2.6. تثبيط زانثين أوكسيديز

تم قياس النشاط المثبط لأكسيداز الزانثين (XO) لـ ME و HE من الأجسام الثمرية لـ Ph. vaninii باستخدام الزانثين كركيزة بطريقة منشورة مع تعديلات طفيفة [31]. تمت إضافة قسامة 1 مل بتركيزات مختلفة من ME و HE (0. 5-8. 0 مجم / مل) إلى 2.9 مل من محلول الفوسفات (pH 7.5) و 0 .1 مل من محلول إنزيم أوكسيديز الزانثين (0. 1 وحدة / مل في محلول الفوسفات pH 7.5) ومحتضن مسبقًا عند 25 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. بعد ذلك ، بدأ التفاعل بإضافة 2 مل من محلول الركيزة (150 ملي زان في المخزن المؤقت). تم تحضين الخليط لمدة 30 دقيقة عند 25 درجة مئوية وينتهي التفاعل بإضافة 1 مل 1 N HCl. تم قياس الامتصاصية بمقياس طيف ضوئي عند 290 نانومتر. تم استخدام الوبيورينول كمعيار مرجعي. تم حساب تثبيط زانثين أوكسيديز باستخدام الصيغة التالية:

تثبيط أوكسيداز الزانثين (النسبة المئوية)=[(أ – ب) - (ج – د) / (أ – ب)] × 100 ،

حيث A هو نشاط الإنزيم بدون المستخلص ، B هو التحكم في A بدون المستخلص والإنزيم ؛ C هو نشاط المستخلص مع XO ، D هو نشاط المستخلص بدون XO.

2.7. التأثيرات المضادة لتكوين الميلانين

2.7.1. تثبيط التيروزيناز في المختبر

تم تحديد النشاط المثبط للتيروزيناز لمستخلصات الفطر باستخدام طريقة منشورة [32] مع تعديل طفيف. باختصار ، تم تحضير مخاليط التفاعل بإضافة 4 0 مل من التيروزيناز (31 وحدة / مل) إلى 4 0 مل من التركيزات المتفاوتة من ME و HE (0. 125-2.0 مجم / مل) ، 40 مل من 1.5 ملي لتر من التيروزين ، و 80 مل من محلول الفوسفات 0.1 مليون (الرقم الهيدروجيني 6.8). بعد ذلك ، تم تحضين الخليط لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية ، تم قياس الامتصاص باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية عند 475 نانومتر. تم حساب تثبيط التيروزيناز باستخدام الصيغة التالية:

تثبيط التيروزيناز (النسبة المئوية)=[(Absc - Abss) / Absc] × 100 ،

حيث يمثل Absc امتصاص التحكم في السيارة ويمثل Abss امتصاص عينة الاختبار. تم استخدام BHT كمعيار مرجعي.

Cistanche هو مثبط للتيروزيناز.

2.7.2. تثبيط في المختبر لأكسدة DOPA التلقائية

تم تحديد النشاط المثبط للأكسدة التلقائية لمستخلصات الفطر L-DOPA باستخدام طريقة معدلة قليلاً [33]. باختصار ، تم تحضير مخاليط التفاعل بإضافة 4 0 مل من التيروزيناز (31 وحدة / مل) إلى 4 {{1 0} مل من التركيزات المتفاوتة من ME و HE (0.125– 2.0 مجم / مل) ، وتحضينها مسبقًا لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية ، بعد ذلك ، بدأ التفاعل بإضافة 40 مل من محلول L- DOPA 2.5 ملي مولار (في محلول الفوسفات) و 80 مل من محلول الفوسفات (0.1 م ، الرقم الهيدروجيني) 6.8) وحضنت لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية في الظلام. تم قياس الامتصاصية باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية عند 475 نانومتر. تم حساب النسبة المئوية لتثبيط L-DOPA للأكسدة التلقائية باستخدام الصيغة التالية:

تثبيط الأكسدة التلقائية لـ DOPA (نسبة مئوية)=[(Absc - Abss) / Absc] × 100 ،

حيث يمثل Absc امتصاص التحكم في السيارة ويمثل Abss امتصاص عينة الاختبار. تم استخدام حمض كوجيك كمعيار مرجعي.

2.7.3. نشاط التيروزين الخلوي

تم قياس نشاط التيروزيناز الخلوي في الخلايا B {0} F10 باستخدام تعديل طفيف لطريقة منشورة [34]. تم حفر الخلايا (5105 خلية / بئر) في 96- أطباق جيدة. بعد المعالجة بتركيزات مختلفة من العينات (25-500 ملجم / مل) لمدة 24 ساعة ، تم غسل خلايا الورم الميلانيني باستخدام برنامج تلفزيوني ، وتحلل باستخدام محلول فوسفات 0.1 مولار (درجة الحموضة 6.8) يحتوي على 1 بالمائة Triton X -100. تم الاحتفاظ بالخلايا على الجليد لمدة 10 دقائق وتم طرد المحللات عند 10 ، 000 جم لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، تم تحديد محتوى البروتين في المادة الطافية بطريقة برافورد ، باستخدام ألبومين مصل البقر (BSA) كمعيار. لقياس نشاط التيروزيناز ، تمت إضافة 100 مل من محلول محلول الخلية و 100 مل من 2.5 ملي مولار L-DOPA (في نفس المخزن المؤقت للفوسفات) وتمت إضافته إلى كل بئر من 96- لوحة بئر. بعد الحضانة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة ، تم قياس الامتصاصية عند 475 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية. تم حساب نشاط التيروزيناز الخلوي باستخدام الصيغة التالية:

نشاط التيروزينات الخلوية (النسبة المئوية)=(Abss / Absc) × 100 ،

حيث يمثل Abss امتصاص العينة ويمثل Absc امتصاص عنصر التحكم. تم استخدام أربوتين كمعيار مرجعي.

2.7.4. تخليق الميلانين الخلوي

تم إجراء قياس محتوى الميلانين في خلايا الورم الميلانيني B {0} F10 المعالجة بتركيزات مختلفة من مستخلصات الفطر باستخدام الطريقة التي نشرها Hosoi et al. [35]. تمت زراعة الخلايا (4 × 104 خلية / بئر) في لوحة بئر 96- في DMEM. بعد 24 ساعة من الحضانة ، عولجت الخلايا بـ ME و HE (25-500 مجم / مل) لمدة 72 ساعة تحتوي على 0.4 ملي مولار من هرمون تحفيز الخلايا الصباغية (MSH). تم حصاد الخلايا بإضافة 300 مل من Triton 100 (1 بالمائة ، PBS) ، وطردها لمدة 5 دقائق عند 3000 دورة في الدقيقة ، وإزالة المادة الطافية. بعد ذلك ، تمت إضافة 100 مل من 1N NaOH و 200 مل من DMSO (10 بالمائة) إلى كريات الخلية والاحتفاظ بها لمدة ساعة واحدة عند 60 درجة مئوية. تم قياس امتصاص المحلول باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية عند 405 نانومتر. تم تحديد تأثير ME و HE على تخليق الميلانين. تم استخدام أربوتين كمعيار مرجعي.

يمنع Cistanche الميلانين.

2.8. تأثيرات مضادة للتجاعيد

2.8.1. تثبيط الإيلاستاز

تم تقييم التأثير المثبط للإيلاستاز لـ ME و HE بالطرق التي تم الإبلاغ عنها مسبقًا [36]. تمت إذابة الإيلاستاز البنكرياس الخنازير (PE – EC. 3.4.21.36) في ماء معقم لعمل محلول مخزون 3.33 مجم / مل. تم إذابة الركيزة ، N-succinyl-Ala-Ala- Ala-p-nitroanilide (AAAPVN) ، في 0. عازلة 2M Tris-HCl (الرقم الهيدروجيني 8. 0). تم إجراء التفاعل في صفيحة ميكروية للبئر 96-. احتوت كل بئر على 12 0 مل من 0. 2M Tris-HCl buffer ، 5 0 مل من مستخلص الفطر (0.125-2.0 مجم / مل) في محلول Tris-HCl ، 30 مل من البولي إيثيلين ، و 50 مل من 1.6 ملي مولار AAAPVN. تم تحضين مستخلص الاختبار مسبقًا عند 25 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة قبل إضافة الركيزة. تم قياس تعصب الامتصاص باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية عند 402 نانومتر. تم حساب نسبة تثبيط الإستراز على النحو التالي:

تثبيط الإستراز (النسبة المئوية)=[(Absc - Abss) / Absc] × 100 ،

حيث يمثل Absc امتصاص التحكم في السيارة ويمثل Abss امتصاص عينة الاختبار. تم استخدام EGCG كمعيار مرجعي ، بينما تم استخدام الماء المقطر كعنصر تحكم سلبي.

2.8.2. تثبيط كولاجيناز

تم التحقيق في التأثير المثبط للكولاجيناز لكل من ME و HE من أجسام ثمر Ph. vaninii باستخدام الطرق المذكورة سابقًا [37] مع بعض التعديلات. تم إذابة كولاجيناز من كلوستريديوم هيستوليتيك (ChC – EC.3.4.23.3) في 5 0 ملي مولار من 1.44 وحدة / مل من محلول التريسين (الرقم الهيدروجيني 7.8). تم إذابة الركيزة ، 4- phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D- Arg trifluoroacetate (PZ-peptide) ، في محلول Tricine بسعة 2.5 ملي مولار. تم تحضين خمسة وعشرين ميكرولترًا من مستخلصات الفطر (0. 125 إلى 2.0 مجم / مل) باستخدام 20 مل من الإنزيم في 155 مل من المخزن المؤقت لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية قبل إضافة 50 مل من PZ- الببتيد لبدء التفاعل لمدة 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية تم إيقاف التفاعل بإضافة 1 مل من حامض الستريك (3 بالمائة). بعد ذلك ، تمت إضافة 5 مل من أسيتات الإيثيل ويرج المحلول بقوة ويترك لمدة 10 دقائق. تم قياس امتصاص المادة الطافية عند 320 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية. تم استخدام EGCG كمعيار مرجعي. تم حساب تثبيط إنزيم الكولاجيناز باستخدام الصيغة التالية:

تثبيط الكولاجين (بالمائة)=[(Absc - Abss) / Absc] × 100 ،

حيث يمثل Absc امتصاص التحكم في السيارة ويمثل Abss امتصاص عينة الاختبار. تم استخدام EGCG كمعيار مرجعي.

2.9 تحليل احصائي

تم التعبير عن جميع البيانات كوسائل ، تم استخدام الانحرافات المعيارية (SD) و SPSS V.13 (SPSS Inc. ، شيكاغو ، إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكية) للتحليل الإحصائي. تم استخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه متبوعًا باختبارات Duncan المتعددة النطاق لمقارنة الوسائل بين المجموعات. الاختلافات بين الوسائل عند 5 بالمائة (ص<.05) level="" were="" considered="" statistically="">

3. النتائج والمناقشة

3.1. إجمالي محتويات الفينولات والفلافونويد

يتم عرض إجمالي محتويات الفينول والفلافونويد لـ ME و HE في الجدول 1. وأظهرت النتائج أن إجمالي محتويات الفينول والفلافونويد من ME كانت 31.67 مجم GAE / جم و 6.83 مجم QE / جم ، على التوالي ، بينما كانت محتويات HE 16.33 مجم. GAE / g و 4.50 مجم QE / g على التوالي. أفاد فامانو ونيتا [38] أن إجمالي محتويات الفينول من الميثانول ومستخلصات الماء الساخن من أجسام الفاكهة لبوليتوس إيدوليس كانت 18.96 مجم GAE / جم وكانت 17.22 مجم GAE / جم ، على التوالي ، بينما محتوى الفلافونويد من مستخلص الميثانول من Boletus aestivalis. كانت أجسام الثمار Leccinum carpini 1.53 مجم / جم و 1.48 مجم / جم على التوالي [39]. تشير نتائجنا إلى أن إجمالي محتوى الفينول والفلافونويد لمستخلصات الفطر كان أعلى من تلك الموجودة في الفطر المذكور أعلاه ، وربما يكون قد ساهم في تحسين مضادات الأكسدة ذات الصلة بمضادات الأكسدة الزانثين ومضادات الميلانين ومضادات الجلد. - أنشطة التجعيد.

3.2 صلاحية الخلية

لتحديد ما إذا كانت المستخلصات من أجسام Ph. vaninii الثمرية قد أظهرت تأثيرًا سامًا للخلايا على خلايا الورم الميلانيني B 16- F10 الفئران ، تمت معالجة الخلايا بتركيزات مختلفة من ME و HE لمدة 72 ساعة ، وتم تحديد قابلية بقاء الخلية بواسطة MTT فحص. تراوحت صلاحية الخلية للخلايا المعالجة بـ ME و HE من 99.74 إلى 85.33 بالمائة و 100.67 إلى 88.33 بالمائة عند 50 إلى 750 مجم / مل ، على التوالي (الشكل 1). انخفضت حيوية الخلية مع زيادة تركيزات مستخلصات الفطر. نظرًا لأن قابلية الخلايا المعالجة بـ 500mg / mL ME و HE كانت أكثر من 90.33 في المائة و 91 في المائة على التوالي ، وكانت قيم IC50 لـ ME و HE هي 4،410 مجم / مل و 5،385 مجم / مل ، على التوالي ، لم يكن ME و HE سام للخلايا لخلايا الورم الميلانيني B 16- F10 بالتركيزات المختبرة. لذلك ، تم إجراء أنشطة توليف التيروزيناز الخلوي والميلانين لخلايا سرطان الجلد B 16- F10 المعالجة بتركيزات مختلفة من مستخلصات الفطر.

3.3 النشاط المضاد للأكسدة

3.3.1. تأثير الكسح الجذري DPPH

زادت تأثيرات الكسح الجذري لـ DPPH لـ ME و HE من الأجسام الثمرية لـ Ph. vaninii مع زيادة تركيزات المستخلص. أنشطة الكسح الجذري لـ ME و HE في {0}. 125-2. 0 ملغ / مل تراوحت من 75.83 بالمائة إلى 95.17 بالمائة ، و 73.33 بالمائة إلى 94.33 بالمائة على التوالي ، و BHT ، التحكم الإيجابي ، أظهر نشاط تنظيف جيد (96.19-96.97 بالمائة) (الشكل 2 (أ)). على الرغم من أن نشاط تنظيف DPPH لـ ME و HE كان أقل من BHT بتركيزات تتراوح من 0. 125 إلى 0. 5 مجم / مل ، لوحظت النسبة المئوية للتثبيط في ME و HE عند 1. {{ 24}} - كان 2.0 ملغ / مل غير مهم إحصائيًا مقارنة بـ BHT. تشير هذه النتائج إلى أن الميثانول ومستخلصات الماء الساخن تمتلك أنشطة تنظيف جذرية جيدة في التراكيز الأعلى التي تم اختبارها.

تم الإبلاغ عن أنشطة تنظيف DPPH لمستخلص الميثانول من أجسام الفاكهة Pleurotus pulmonarius تتراوح من 25.67 بالمائة إلى 92.73 بالمائة عند 0. 125 إلى 2. 0 مجم / مل [4 0] . ماو وآخرون. [41] وجد أن تأثيرات الكسح الجذري لمستخلصات الميثانول من فطر Tricholoma giganteum و Grifola fron- dosa و Hericium erinaceus تراوحت بين 63.2٪ إلى 67.8٪ بتركيز 6.4 ملغ / مل. لذلك ، تشير نتائجنا التجريبية إلى أن نشاط تنظيف DPPH لـ ME و HE (0. 125-2.0 مجم / مل) من أجسام Ph. vaninii المثمرة يمكن أن يوفر دفاعًا مناسبًا ضد إصابات الجذور الحرة و ROS.

الشكل 2.الأنشطة المضادة للأكسدة للميثانول ومستخلصات الماء الساخن من أجسام الفاكهةفيلينوس فانيني.

3.3.2. تثبيط بيروكسيد الدهون

تراوح النشاط المثبط لبيروكسيد الدهون لكل من ME و HE من أجسام الفاكهة P. vaninii من 44.99 إلى 66. 0 8 بالمائة ومن 41.26 إلى 64. 00 بالمائة في {{1 {{16} }}}. 125-2. 0 مجم / مل ، على التوالي (الشكل 2 (ب)) ، مما يشير إلى أن زيادة تركيزات مستخلصات الفطر تزيد من تثبيط بيروكسيد الدهون. ومع ذلك ، فإن التأثير المثبط لتثبيط بيروكسيد الدهون لـ BHT كان 90.30 في المائة عند 2.0 ملجم / مل ، والذي كان أعلى بشكل ملحوظ (p.<.001) than="" those="" of="" me="" and="" he.="" the="" ic50="" values="" of="" me="" against="" lipid="" peroxidation="" from="" wild="" and="" cultivated="" mushrooms="" including="" pleurotus="" ostreatus,="" termitomyces="" robustus,="" pleurotus="" sajor-caju,="" and="" auricularia="" auricula="" were="" 0.15,="" 0.43,="" 0.75,="" and="" 1.51mg/ml,="" respectively="" [42].="" the="" inhibi-="" tory="" effects="" of="" hot="" water="" extracts="" on="" lipid="" peroxida-="" tion="" of="" 14="" different="" edible="" and="" medicinal="" mushroom="" species="" collected="" from="" malaysia="" ranged="" from="" 33.33%="" to="" 57.18%="" at="" the="" concentration="" of="" 10="" mg/ml="" [43].="" in="" this="" study,="" the="" lipid="" peroxidation="" inhibitory="" activity="" of="" me="" and="" he="" from="" ph.="" vaninii="" ranged="" from="" 65.87%="" to="" 78%="" at="" 2.0mg/ml="" and="" their="" ic50="" values="" were="" 0.19="" mg/ml="" and="" 0.17="" mg/ml,="" respectively.="" these="" results="" suggest="" that="" me="" and="" he="" from="" ph.="" vaninii="" fruiting="" bodies="" possessed="" good="" inhibitory="" activity="" toward="" lipid="" peroxidation="" compared="" to="" the="" mushrooms="" described="" above.="" therefore,="" p.="" vaninii="" fruiting="" bodies="" could="" be="" a="" valuable="" antioxidant="">

3.3.3. تأثير كسح جذور الهيدروكسيل

تراوحت تأثيرات مسح جذور الهيدروكسيل لـ ME و HE من Ph. vaninii من 75.6 0 إلى 98.19 بالمائة و 65.21 إلى 97.55 بالمائة عند 0. 125 إلى 2. 0 ملغم / مل مركز- trations ، على التوالي ، في حين تراوحت تلك الخاصة بـ BHT من 79.89 إلى 92.66 بالمائة (الشكل 2 (ج)). ومع ذلك ، فإن قيم IC5 0 لـ ME و HE من Ph. vaninii كانت 0. 115 مجم / مل و 0. 119 ، على التوالي ، بينما IC5 {{4 {{46} }}} كانت قيمة BHT 0.111mg / mL ، مما يشير إلى أن تأثيرات مسح جذور الهيدروكسيل لـ ME و HE كانت أقل قليلاً من تأثير BHT. وهكذا ، امتلك كل من ME و HE من Ph. vaninii أنشطة تنظيف جذري هيدروكسيل جيدة نسبيًا وقابلة للمقارنة عند التركيزات المختبرة. أشارت أنشطة إزالة جذور الهيدروكسيل الأعلى الموجودة في ME و HE في هذه التجربة إلى أن المستخلصات منعت بشكل فعال تحلل 2- deoxyribose عن طريق إزالة جذور الهيدروكسيل في محلول الاختبار. تم الإبلاغ عن أن مستخلص الميثانول من الأجسام المثمرة لـ Pleurotus pulmonarius له تأثير إزالة جذور الهيدروكسيل بنسبة 95.13 بالمائة عند 2.0 مجم / مل [40] ، وهو أقل من تلك الموجودة في ME (98.18 بالمائة) و ​​HE (97.55 بالمائة) من Ph . vaninii عند التركيز الذي تم اختباره. تم الإبلاغ عن تأثير مسح الهيدروكسيل لمستخلص الميثانول من أجسام فطر Hypsizigus ulmarius بنسبة 76.67 بالمائة عند 1.0 مجم / مل [44] ، بينما كانت تلك الخاصة بـ ME و HE 83. 00 بالمائة و 77.17 بالمائة في 0.25 مجم / مل. مجتمعة ، تشير نتائجنا إلى أن تأثير الكسح الجذري للهيدروكسيل لـ ME و HE من Ph. vaninii كان أفضل من مستخلصات الفطر المذكورة أعلاه. لذلك ، فإن ME و HE من Ph. vaninii عبارة عن كاسحات قوية لجذور الهيدروكسيل والتي يمكن استخدامها لمنع المشكلات المتعلقة بـ ROS.

3.4. تثبيط زانثين أوكسيديز

زادت الأنشطة المثبطة لأكسيداز الزانثين لكل من ME و HE من Ph. vaninii مع زيادة التركيزات. إن تثبيط أوكسيديز الزانثين لـ ME و HE عند {0}. 5 إلى 8. 0 ملغم / مل يتراوح من 61.15 بالمائة إلى 88.99 بالمائة ، و 34.13 بالمائة إلى 84.56 بالمائة على التوالي. ومع ذلك ، أظهر الوبيورينول ، المعيار المرجعي ، أنشطة مثبطة لـ XO ممتازة من 89.73 إلى 97.23 في المائة بنفس التركيزات التي تم اختبارها (الشكل 3). على الرغم من أن ME و HE أظهروا أنشطة مثبطة لـ XO بتركيزات منخفضة ، إلا أن مستخلصات الفطر تمنع XO بشكل كبير عند تركيزات أعلى. تم الإبلاغ عن أن تثبيط XO بواسطة الميثانول ومستخلصات الماء الساخن من أجسام فواكه Ph. gilvus تتراوح من 28.6 0 بالمائة إلى 86. 20 بالمائة ومن 36.53 بالمائة إلى 97.07 بالمائة عند 0.5 إلى 8.0 ملجم / مل ، على التوالي [45] ، مما يشير إلى أن التأثير المثبط لـ ME و HE تجاه XO كان مشابهًا لتأثير Ph. gilvus.

تعتبر مركبات الفلافونويد ، وهي فئة من مركبات البوليفينول ، أكثر المستقلبات الثانوية شيوعًا للنباتات والفطريات ، وقد تم الإبلاغ عن أنها تمتلك نشاطًا مثبطًا لأوكسيديز الزانثين [46]. ومن ثم ، فإن التركيزات العالية من الفينول والفلافونويد المكتشفة في ME و HE ربما تكون قد ساهمت في تثبيط أوكسيديز الزانثين.

3.5 تأثير تبييض البشرة

3.5.1. تثبيط التيروزيناز في المختبر

تراوحت الأنشطة المثبطة للتيروزيناز لـ ME و HE من الأجسام المثمرة لـ Ph. vaninii من 55.83 في المائة إلى 96.16 في المائة ومن 3 0. 29 في المائة إلى 92.74 في المائة في 0. 125-2. {{{0. 17}} ملغم / مل ، على التوالي (الشكل 4 (أ)) ، وتزداد مع زيادة التركيزات. ومع ذلك ، أظهر حمض الكوجيك ، المعيار المرجعي ، أنشطة مثبطة لانزيم التيروزيناز ممتازة بين 98.74 و 99.61 في المائة عند {{2 {{3 0}}}. 125–2.0 مجم / مل. تشير النتائج إلى أن ME أظهر تأثيرًا جيدًا ، بينما أظهر HE تأثيرًا معتدلًا ، عند التراكيز التي تم اختبارها. علم وآخرون [47] ذكرت أن تثبيط التيروزيناز بواسطة الميثانول ومستخلصات الماء الساخن من أجسام الفاكهة P. salmoneostramineus تراوحت من 20.90٪ إلى 63.29٪ ومن 15.25٪ إلى 49.25٪ عند 0.125-1.0 مجم / مل ، على التوالي ، مما يشير إلى أن المثبط كانت فعالية Ph. vaninii على التيروزيناز أعلى من تلك الموجودة في أجسام الفاكهة P. salmoneostramineus.

مركبات الفينول هي مركبات حمض أروماتي تحتوي على حلقات فينولية وحمض الكربوكسيل. مركبات الفلافونويد هي مجموعة من مركبات البوليفينوليك. توجد في العديد من أنواع النباتات والفطر. تعتبر مادة البوليفينول بمثابة ركائز للتيروزيناز وهي أكبر مجموعة من مثبطات التيروزيناز. تم الإبلاغ عن العديد من البوليفينول لتثبيط التيروزيناز من خلال الارتباط بالموقع النشط لإنزيم التيروزيناز ، مما يؤدي إلى تعطيل لا رجعة فيه للإنزيم من خلال تفاعل شبيه بالركيزة [48]. أظهرت بعض مركبات الفلافونويد أيضًا تأثيرًا مثبطًا على التيروزيناز عن طريق إزالة معدن ثقيل من أيونات النحاس في التيروزيناز [49].

لذلك ، قد يكون التأثير المثبط لـ ME و HE تجاه التيروزيناز بسبب مركبات البوليفينوليك والفلافونويد الموجودة في مستخلصات الفطر. قد يساهم التأثير المضاد للأكسدة لـ ME و HE أيضًا في تثبيط نشاط التيروزيناز.

3.5.2. تثبيط الأكسدة الذاتية لـ DOPA

L-DOPA هو أحد سلائف الميلانين أثناء تكون الميلانين. يتم تصنيع L-DOPA من L-tyro- sine بواسطة هيدروكسيلاز التيروزينيز. يمكن للتيروزيناز أيضًا تحويل L-DOPA إلى dopaquinone ، مما يؤدي في النهاية إلى الميلانين. يتم تلخيص الأنشطة المثبطة للأكسدة التلقائية في المختبر ، L-DOPA لـ P. vaninii في الشكل 4 (ب). تراوح تثبيط الأكسدة التلقائية لـ L-DOPA بواسطة ME و HE من 38.25 في المائة إلى 78.46 في المائة ومن 29.68 في المائة إلى 44.77 في المائة عند 0. 125 إلى 2. 0 ملغم / مل ، على التوالي ، بينما أظهر حمض الكوجيك أنشطة مثبطة ممتازة لـ L-DOPA بنسبة 86 .14 إلى 98.72 في المائة عند التركيز الذي تم اختباره. أظهرت النتائج أن ME و HE يثبطان بشكل معتدل أكسدة L-DOPA التلقائية. ومع ذلك ، أظهر ME و HE نشاطًا أقل تثبيطًا على الأكسدة التلقائية L-DOPA عندما تم استخدام L-DOPA كركيزة مما كان عليه عندما تم استخدام L-tyrosinase كركيزة من التيروزيناز. نظرًا لأن التيروزيناز يستخدم موقعين مختلفين للربط لتيروزين هيدروكسيلاز و L-DOPA أوكسيديز ، فإن نتائجنا التجريبية تشير إلى أن الفعالية الانتقائية للتيروزيناز على ركيزتين مختلفتين أثناء تكوين الميلانين.

3.5.3. نشاط التيروزين الخلوي

تم تحديد نشاط التيروزيناز داخل الخلايا بعد معالجة الخلايا بتركيزات متفاوتة من ME و HE من الأجسام الثمرية لـ Ph. vaninii. تراوح تأثير ME و HE على نشاط التيروزيناز لخلايا الورم الميلانيني B 10- F10 من 96.94 بالمائة إلى 61.14 بالمائة ومن 98.12 بالمائة إلى 84.16 بالمائة عند 25-500 ميكروغرام / مل ، على التوالي ، بينما أظهر أربوتين أنشطة التيروزيناز في 98.52 إلى 58.12 في المائة عند التركيز الذي تم اختباره (الشكل 5 (أ)) ، مما يشير إلى أن تثبيط التيروزيناز لأربوتين كان أعلى من مثبطات ME و HE. أظهرت النتائج أيضًا أن نشاط التيروزيناز في ME كان أعلى من نشاط HE وأن زيادة تركيزات ME و HE أدت إلى انخفاض نشاط التيروزيناز داخل الخلايا. على الرغم من أن التأثيرات المثبطة للتيروزيناز في المختبر لـ ME و HE عند 500 ميكروغرام / مل كانت 84.39 في المائة و 45.64 في المائة على التوالي ، فإن تثبيط التيروزيناز الخلوي في خلايا الورم الميلانيني B 16- F10 كان 38. 86 في المائة و 15.24 في المائة ، على التوالي بنفس التركيز الذي تم اختباره ، مما يشير إلى أن عوامل مستخلص الفطر المسؤولة عن تثبيط التيروزيناز لم تكن قادرة على اختراق الخلايا بشكل فعال. هوانغ وآخرون. [50] ذكرت أن نشاط التيروزيناز الخلوي لمستخلص الميثانول من أجسام الثمار لـ Agaricus brasiliensis كان 95.75٪ -67.12٪ عند 100-500 ميكروغرام / مل في خلايا الورم الميلانيني B 16- F10 ، مما يشير إلى نشاط التيروزيناز الخلوي كانت درجة Ph. vaninii أعلى بقليل من A. brasiliensis عند نفس التركيز الذي تم اختباره.

لتقييم ما إذا كان انخفاض نشاط التيروزيناز داخل الخلايا وانخفاض إنتاج الميلانين الذي لوحظ في خلايا الورم الميلانيني B {0}} F10 ناتجًا عن السمية الخلوية لمستخلصات الفطر ، تم إجراء اختبار MTT. في اختبار MTT ، أظهرت خلايا سرطان الجلد B 16- F10 المعالجة بـ ME و HE قابلية حيوية للخلايا تتراوح من 105 بالمائة إلى 90.33 بالمائة ، و 107 بالمائة إلى 91 بالمائة عند 50-500 مجم / مل ، على التوالي ، مما يشير إلى أن مستخلصات الفطر لم تكن سامة لخلايا الورم الميلاني B 16- F10 بالتركيزات التي تم اختبارها (الشكل 1).

3.5.4. نشاط تصنيع الميلانين

لتأكيد ما إذا كانت الأنشطة المثبطة للتيروزيناز الخلوي الجيدة المكتشفة في التجربة السابقة مرتبطة بتثبيط تخليق الميلانين في خلايا الورم الميلانيني B 16- F1 0 ، تم إجراء مزيد من التحقيق في إنتاج الميلانين بواسطة خلايا الورم الميلانيني. تراوح تركيب الميلانين لخلايا سرطان الجلد B 16- F1 0 المعالجة بـ ME و HE من 71.18 بالمائة إلى 27.61 بالمائة ومن 78.54 بالمائة إلى 50.53 بالمائة على التوالي ، عند 25-500 مجم / مل ، بينما تراوح تركيب الميلانين بواسطة أربوتين من 73.50 في المائة إلى 35.16 في المائة عند التركيز الذي تم اختباره (الشكل 5 (ب)). تشير نتائج الدراسة إلى أن تثبيط تكوين الميلانين بواسطة أربوتين كان أعلى من تثبيط HE ولكنه أقل من تثبيط ME. أدت التركيزات المتزايدة لمستخلصات الفطر إلى انخفاض تخليق الميلانين في خلايا سرطان الجلد B 16- F10. أشارت النتائج إلى أن تثبيط تخليق الميلانين في خلايا الورم الميلاني B 16- F10 بواسطة ME كان أعلى بكثير من تثبيط أربوتين ، بينما كان تثبيط إنتاج الميلانين بواسطة HE أقل بكثير من تثبيط أربوتين. أظهر تشا وكيم [51] أن المستخلص المخمر من كورديسيبس ميليتاريس أظهر نشاطًا تخليقيًا للميلانين بنسبة 66-47 في المائة عند 1.0-3.0 مجم / مل في خلايا سرطان الجلد B 16- F10 ، مما يشير إلى أن النشاط المثبط لتخليق الميلانين من مستخلصات الجسم المثمرة للفانيي كانت أعلى من مستخلصات كورديسيبس ميليتاريس. لذلك ، أوضحت نتائج الدراسة أن مستخلصات الفطر لم تثبط نشاط التيروزيناز في المختبر وأكسدة L-DOPA فحسب ، بل قللت أيضًا نشاط التيروزيناز وإنتاج الميلانين في خلايا الورم الميلانيني B 16- F10. مجتمعة ، تشير النتائج التي توصلنا إليها إلى أن ME و HE من أجسام Ph. vaninii المثمرة يمكن اعتبارهما مصادر جديدة محتملة مضادة للميلانوجين للحماية من تصبغ الجلد من الأشعة فوق البنفسجية لأشعة الشمس.

3.6 نشاط مضاد للتجاعيد الجلد

3.6.1. تثبيط الإيلاستاز

Elastase ، بروتياز ، مسؤول عن تكسير الإيلاستين الموجود في ECM.

يمكن للإيلاستازات أن تشق الإيلاستين ، بالإضافة إلى ركائز أخرى ، مثل بروتينات الكولاجين والفيبرونكتين والـ ECM. ومع ذلك ، في ظل الظروف الطبيعية ، يكون نشاط الإيلاستاز ضروريًا لتفكيك البروتينات الأجنبية بعد الإصابة [52]. لتأخير شيخوخة الجلد ، مثل التجاعيد ، والترهل ، والنمش ، من الضروري منع تدهور البروتينات المرتبطة بـ ECM وبالتالي حماية فقدان مرونة الجلد. تراوح معدل تثبيط الإستراز لـ ME و HE من أجسام ثمر Ph. vaninii من 37.23 في المائة إلى 71.24 في المائة ومن 28.99 في المائة إلى 64.65 في المائة عند 0. 125-2. 0 ملغم / مل ، على التوالي ، في حين أظهر EGCG مثبطات استريز من 17.93 إلى 45.31 في المائة عند التركيز الذي تم اختباره (الشكل 6 (أ)). يمكن اعتبار معدل تثبيط الإيلاستاز لـ ME و HE ممتازًا مقارنة بـ EGCG. كيم وآخرون. [53] أفاد أن مستخلص الميسليا من Tricholoma matsu- take أظهر أن النشاط المثبط للإيلاستاز بنسبة 81.4 بالمائة عند 1 0 0 ملجم / مل ، مما يشير إلى أن التأثيرات المثبطة لـ ME و HE من Ph. vaninii على كان الإيلاستاز أقل من مستخلص T. matsutake. أظهر Choi and Lee [54] تثبيط الإيلاستاز بواسطة الميثانول ومستخلصات الماء الساخن من أجسام الفاكهة Coriolus متعددة الألوان التي تراوحت من 21.5 بالمائة إلى 35.47 بالمائة ومن 17.57 بالمائة إلى 25. 86 بالمائة عند 1.0 إلى 3.0 ملجم / مل ، على التوالي ، مما يشير إلى أن تثبيط الإيلاستاز لـ ME و HE كان أعلى من مثبطات C. تشير النتائج إلى أن مستخلصات الفطر تمتلك إمكانات مضادة للتجاعيد لمنع الإيلاستين والكولاجين من التدهور.

3.6.2. تثبيط كولاجيناز

الكولاجينازات هي بروتينات معدنية قادرة على شق الجزيئات المختلفة الموجودة داخل الخلايا و ECM ، مثل الكولاجين ، والإيلاستين ، والفيبرونيكتين ، والجيلاتين ، واللامينين. إن إنزيم الكولاجيناز المستخدم في هذه التجربة ، وهو كولاجيناز البكتيري (Clostridium histolyticum ، ChC) ، يعمل أيضًا على تحطيم ECM [55]. لذلك ، تم استخدام كولاجيناز البكتيري لاختبار النشاط المضاد للكولاجيناز لمستخلصات الفطر. تراوحت الأنشطة المثبطة للكولاجيناز لـ ME و HE من الأجسام المثمرة لـ Ph. vaninii من 41. 0 4 بالمائة إلى 63. 0 2 بالمائة ومن 26.4 0 بالمائة إلى 47.33 النسبة المئوية 0. 125-2.0 مجم / مل على التوالي (الشكل 6 (ب)) ، بينما يثبط EGCG الكولاجيناز 17.93 إلى 45.31 بالمائة عند التركيز الذي تم اختباره. تشير النتائج إلى أن ME كان مثبطًا ممتازًا ، بينما أظهر HE له تأثيرات مثبطة معتدلة عند التراكيز التي تم اختبارها. تشيون وآخرون. [56] ذكرت أن تثبيط الكولاجين بواسطة الإيثانول ومستخلصات الماء الساخن من أجسام الفاكهة في Phellinus linteus تراوحت بين 3.4٪ إلى 6.8٪ ومن 33.4٪ إلى 89.6٪ عند 0.05-1.0 مجم / مل ، على التوالي ، مما يشير إلى أن تثبيط الكولاجين بواسطة كان ME من Ph. vaninii أعلى من مستخلص الماء الساخن من أجسام فاكهة Ph. على الرغم من أن معظم الأنشطة المثبطة للإيلاستاز والكولاجيناز قد تم إثباتها في النباتات ، بما في ذلك الشاي الأبيض ، والشاي الأخضر ، ولحاء التوت ، وفاكهة الجنكة [57،58] ، فإن هذا هو التقرير الأول عن النشاطات المثبطة للإيلاستاز والكولاجيناز من مستخلصات الجسم المثمرة. من Ph. vaninii ، وقد يمثل مصدرًا جديدًا لعامل مضاد للتجاعيد.

في الختام ، أظهرت مستخلصات الجسم الثمرية من Ph. vaninii نشاطًا جيدًا مضادًا للأكسدة ومضادًا لأكسيداز الزانثين والتيروزيناز وتخليق الميلانين والإيلاستاز وكولاجيناز. يمكن استخدام الأنشطة المثبطة لتخليق الزانثين أوكسيديز والتيروزيناز والميلانين للمصادر الطبيعية للتحكم في النقرس وعوامل تصبغ الجلد ، وقد يكون تثبيط الإيلاستاز والكولاجيناز مصادر جيدة لعلاج الاضطرابات المرتبطة بتجاعيد الجلد. من الضروري إجراء مزيد من البحث لتحديد العوامل التي توفر أنشطة مضادات الزانثين أوكسيديز ، ومضاد التيروزيناز ، والأنشطة المضادة للتجاعيد في المستخلصات من أجسام دكتوراه الفانيني.

Cistanche هو أحد مكونات تبييض البشرة.

لمزيد من المعلومات ، الرجاء الضغط على الصورة.