التأثيرات المضادة للأكسدة للفينيلثانويدس من Cistanche Deserticola

جهة الاتصال: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 البريد الإلكتروني:audrey.hu@wecistanche.com

Quanbo Xiong / Shigetoshi Kadota و "Tadato Tani، 6 and Tsuneo Namba"

أظهر مستخلص الأسيتون- H2O (9: 1) من ساق Cistanche deserticola نشاطًا قويًا في إزالة الجذور الحرة. تم عزل تسعة مركبات رئيسية من الفينيثانويد من هذا المستخلص. تم تحديدها بواسطة الرنين المغناطيسي النووي على أنها أكتيوسيد ، أيزوكتيوسيد ، l ^ أسيتيل لاكتوزيد ، توبولوسيد ب ، إشنكوسايد ، توبولوزيد أ ، سيرينغاليد أ 3 زا رهامنو بيرانوسيد ، سيستانوسيد أ وسيستانوسيد ف. -tocopherol على 1 ، 1 - diphenyI -2- picrylhydrazy 1 (DPPH) جذري و xanthine / xanthine oxidase (XOD) أنتج جذور الأنيون الفائق (Oj). من بين المركبات التسعة ، أظهر أيزوكتيوسيد وتوبولوسيد ب ، الذي توجد فيه جزيئات كافويل في موضع الجلوكوز ، تأثيرًا مثبطًا على XOD. درسنا كذلك آثار هذه الفينيثانويد على بيروكسيد الدهون في ميكروسومات كبد الفئران الناجم عن الميثامفيتامين وغير الأنزيمية. كما هو متوقع ، أظهر كل منهم تثبيطًا كبيرًا لكل من حمض الأسكوربيك / Fe2 plus و ADP / NADPH / Fe3 بالإضافة إلى بيروكسيد الدهون المستحث في ميكروسومات كبد الفئران ، والتي كانت أقوى من حمض التوكوفيرول أو حمض الكافيين. تم العثور على eflFect المضاد للأكسدة لزيادة عدد مجموعات الهيدروكسيل الفينولية في الجزيء.

الكلمات الدالة: Cistanche Deserticola ؛ فينيليثانويدس.مضادات الأكسدة. DPPH (1 ، 1 - diphenyl -2- picrylhydrazyl) جذري ؛ أنيون فوق أكسيد الراديكالي؛ بيروكسيد الدهون

جذع Cistanche deserticola

ساق Cistanche spp. (سيستانش هيربا، family Orobanchaceae) هو منشط في الطب الصيني التقليدي يستخدم لنقص الكلى الذي يتميز بالعجز الجنسي ، والإحساس بالبرودة في الخاصرة والركبتين ، وعقم الإناث ، والإمساك بسبب جفاف الأمعاء في الشيخوخة.تم عزل عدد من المكونات بما في ذلك phenyl- ethmoids (تسمى أحيانًا phenylpropanoids) ، 2) ir idoids 3 * و polysaccharides4) من هذه النباتات. أفاد Sato et al5} أن بعض phenylethanoids من هذا الدواء الخام أظهرت تأثيرًا وقائيًا ضد انخفاض كل من السلوكيات الجنسية والتعليمية في الفئران المعلقة المحملة بالإجهاد. الفينيثانويدس هي المكونات الرئيسية لهذه النباتات وتعتبر من العوامل المساهمة في الإجراءات المختلفة لهذا الدواء.

يتم توزيع Phenylethanoids على نطاق واسع في المملكة النباتية وقد وجد أن بعضها له نشاط مضاد لنقص الأكسجين ، 7) مضاد للأورام ، 8) تثبيط الإنزيم ، 9 * مضاد للالتهاب ، 10) التهاب الكلية ، 1 n مضاد للكائنات الحية الدقيقة ، و تم الإبلاغ أيضًا عن دراسات حول النشاط المضاد للأكسدة لبعض مركبات فينيل إيثانويد من Pedicularis ، 13 -15) ولكن لم يتم العثور على تقرير يتعامل مع النشاط المضاد للأكسدة لمركبات فينيل إيثانويد من أنواع Cistanche.

من المعروف جيدًا أن الجذور الحرة لها دور حاسم في مسببات الأمراض المختلفة مثل السرطان ، واضطراب القلب والأوعية الدموية ، والتهاب المفاصل ، والالتهابات ، وكذلك في العمليات التنكسية المرتبطة بالشيخوخة .16 ™ 18) في فحصنا للعوامل المضادة للشيخوخة من الموارد الطبيعية ، وجدنا أن كل من CHC13 (C) ، EtOAc (E) ، الأسيتون (A) ، الأسيتون- H2O (9: 1) (AH) ، ومستخلص الماء (H) من ساق Cistanche deserticola أظهر قوة DPPH نشاط الكسح الجذري (الشكل 1) ، من بينها أقوى نشاط تم عرضه بواسطة مستخلص الأسيتون (9: 1) (AH). يحتوي مستخلص الأسيتون- H2O (9: 1) على نسبة عالية من فينيل إيثانويدس ، والتي ربما كانت مكونات نشطة لتأثيرات إزالة الجذور الحرة. عزلنا مركبات الفينيلثانويد الرئيسية من هذا المستخلص ودرسنا التأثيرات المضادة للأكسدة من خلال مسحها على جذور DPPH الجذرية و xanthine / XOD التي تولدت جذريًا لأنيون الأكسيد الفائق ، وتثبيطها لحمض الأسكوربيك / Fe2 plus و ADP / NADPH / Fe3 بالإضافة إلى بيروكسيد الدهون المستحث في كبد الفئران الميكروسومات.

Cistanche Deserticola

المواد والأساليب

الكواشف بولي أميد سي -200 (75 150 / zm) وهلام السيليكا (Wakogel C -200 ، 75–150 ^ م) مسحوق لكروماتوجرافيا العمود ، DPPH (1 ، 1 - ثنائي فينيل {{) تم شراء 8}} picrylhydrazyl) و xanthine و XOD (xanthine oxidase) و NBT (nitroblue tetrazolium) و ADP و g-NADPH وحمض الكافيين و a-tocopherol من Wako Pure Chemicals ، أوساكا ، اليابان. Malonaldehyde bis (dimethylacetal) كان من طوكيو كاسي ، طوكيو ، اليابان. BSA (زلال المصل البقري) والألوبورينول كانتا من سيجما ، سانت. Louis ، الولايات المتحدة الأمريكية كانت هناك مواد كيميائية أخرى ذات درجة تحليلية.

تم قياس امتصاص الأشعة فوق البنفسجية للأجهزة على أتم نقل Shimadzu UV -2200 الذي يسجل مقياس الطيف الضوئي ، وأطياف NMR على نظام JEOL GX -400 أو نظام JEOL JNM-LA 400WB FT NMR.

المواد النباتية عقار خام تجاري (تم إنتاجه في Nei Monggol ، تم شراؤه في سوق Bozhou Crude Drug Market ، مقاطعة Anhui ، الصين ، 1995 ؛ قسائم محددة للرجال ، TMPW رقم 15479 تم إيداعه في متحف المواد الطبية ، مركز البحوث التحليلية للطب الإثني ، البحث تم تحديد معهد Wakan-Yaku ، جامعة Toyama الطبية والصيدلانية) على أنها تنبع من Cistanche deserticola YC Ma من خلال مقارنة شخصياتها المورفولوجية والتشريحية بعينة أصلية مقدمة من البروفيسور Dawen Shi ، قسم العقاقير ، Shanghai Medical Uni versity ، الصين.

الاستخراج والعزل تم استخلاص مسحوق الخام المسحوق (5.87 كجم) على التوالي مع CHC13 (12 ، 9 1 x2) و EtOAc (9 1 × 3) عند درجة حرارة الغرفة وتم إعادة تكثيفه باستخدام الأسيتون (9 1 x 3) و acetone- 0 (9: 1،91x3) و H2O (7. 5 1 x4) لإعطاء مقتطفات من CHC13 (C) (28.7 جم) و EtOAc (E) ( 13.4 جم) ، أسيتون (A) (95 جم) ، أسيتون- H2O (9: 1) (AH) (175 جم) و H2O (H) (2.51 كجم) ، على التوالي. تعرض جزء من lOOg من خلاصة الأسيتون- H2O (9: 1) إلى عمود بولي أميد C -200 (4 {{5 0} 0 جم) وتم التصفية منه باستخدام H2O ({{41} }}) ثم MeOH (5 1). تم شحن MeOH eluent (20 جم) إلى عمود هلام السيليكا (600 جم) وتمت التصفية التتابعية باستخدام CHCl 3- MeOH-H2O (8: 3: 0.3) (5 1) لإعطاء 10 كسور. تم تعريض كل جزء لعمود Sephadex LH -20 وتصفية مع نسب مختلفة من MeOH-H2O (0 50 بالمائة) ؛ تسعة مركبات فينيل إيثانويد رئيسية 1 (607 مجم) ، 2 (286 مجم) ، 3 (43 مجم) ، 4 (187 مجم) ، 5 (1.1 جم) ، 6 (100 مجم) ، 7 (208 مجم) ، 8 (168 مجم) ، 9 (75 مجم) تم الحصول عليها.

ذكور الحيوانات المنقولة جنسياً: تم استخدام فئران ويستار (8 أسابيع ، 230 250 جم). تم شراء الحيوانات من مركز حيوانات مختبر Shizuoka وتم إطعامها بمختبر بيليه تشاو (Clea Japan) وتم إعطاؤها الماء حسب الرغبة.

تحضير معلق ميكروسومي كبد الفئران تم تحضير الكسر الميكروسومي لكبد الجرذان بواسطة طريقة Kiso et al. بعد صيام الحيوانات لمدة 24 ساعة ، تم تروية الكبد بمحلول مثلج بارد 0. 9 بالمائة من محلول كلوريد الصوديوم في الموقع ، ثم تقطيعه إلى قطع رقيقة ومتجانسة في محلول بارد 1.15 بالمائة KC1 (1. {9} } مل / غرام من وزن الكبد الرطب). تم تخفيف المتجانسة أربع مرات باستخدام محلول KC1 1.15 بالمائة وطرده عند 8000 جم لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات. تم بعد ذلك جمع الجزء الطاف وطرده فائقًا عند 105000 جم لمدة 60 دقيقة. تم إعادة تعليق الحبيبات التي تم الحصول عليها في نفس الحجم من محلول KC1 1.15 بالمائة. تم تحديد محتوى البروتين بطريقة Lowry et باستخدام الألبومين كمعيار.

تحضير العينة تم إذابة العينات المختبرة في الماء أو الإيثانول وتم تخفيفها بالماء لتركيزات مختلفة. كانت التركيزات النهائية للإيثانول أقل من 1 في المائة في جميع أنظمة الفحص باستثناء مقايسة الكسح الجذري DPPH. لم يظهر الإيثانول بتركيز نهائي أقل من 1 في المائة أي تأثير على أنظمة الفحص هذه.

تأثير الكسح الجذري لـ DPPH تمت إضافة تأثير الكسح مع شدة إخماد جذور DPPH ، كما وصفها Hatano et al.) تمت إضافة خمسمائة / أ من 60 ميكرومتر DPPH في EtOH إلى 500 / zl من محلول العينة والسماح لها بالتفاعل من أجل 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة ، ثم تم قياس الكثافة الضوئية عند 520 نانومتر. بالنسبة للفراغ ، تم استخدام EtOH بدلاً من محلول DPPH ، وللتحكم ، تم استخدام H2O بدلاً من محلول العينة. تم حساب قيم IC50 من خطوط الانحدار حيث يمثل الإحداثي تركيز المركب المختبَر وينسق متوسط ​​انخفاض النسبة المئوية لجذر DPPH من أربعة اختبارات منفصلة.

التأثيرات على التوليد الجذري لأنيون الفائق تم تحديد إنتاج الأنيونات الفائقة في نظام الزانثين / XOD باستخدام نصف حجم طريقة Imanari وآخرون. 22) خليط مكون من 9 0 0 / zl من 0. 05 م Na2CO3 (الرقم الهيدروجيني 10.2) ، 50 / ميليلتر لكل من 3 ملي مولار زانثين ، 3 ملي مولار EDTA ، 1.5 مجم / مل BSA ، 0.75 ملي NBT وتم إضافة العينة المختبرة مع 50 من 0.1 مجم / مل XOD لبدء تفاعل. بعد الحضانة لمدة 30 دقيقة ، توقف التفاعل مع 50 / ميكرولتر من 6 ملي مولار من النحاس وتم قياس الامتصاص عند 560 نانومتر. تم تحضير محلول التحكم بنفس الطريقة ، ولكن تم استخدام 50 / لتر من H2O بدلاً من محلول العينة. في محلول فارغ ، تم استخدام 50 / ميكرول من H2O بدلاً من محلول XOD. تم حساب قيم IC50 من خطوط الانحدار حيث تمثل الإحداثيّة تركيز اللوغاريتمات للمركب المختبر وتنسيق متوسط ​​تثبيط النسبة المئوية لتخفيض NBT لأربعة في الاختبارات التابعة.

تم تقدير التأثيرات المثبطة على نشاط XOD التثبيطي على نشاط XOD بواسطة طريقة Hatano et al. * مع بعض التعديلات. خليط يتكون من 6 0 0 / 11 من المخزن المؤقت (0. 1 م من محلول الفوسفات ، درجة الحموضة 7.5) ، 50 以 من محلول XOD (0.068 وحدة / مل في المخزن المؤقت) و تم تحضين 50 × 1 من محلول العينة لمدة 10 دقائق عند 25 درجة. بعد ذلك ، تمت إضافة 300 لتر من محلول الزانثين (0.1 ملي مولار في المخزن المؤقت) إلى الخليط ، وتم تحضين المحلول الناتج لمدة 30 دقيقة عند 25 درجة. تم إنهاء تفاعل الإنزيم بإضافة 1 n HC1 (100 / zl) ، وتم قياس امتصاص خليط التفاعل عند 295 نانومتر. تم حساب تركيز حمض اليوريك المتكون في الخليط من الامتصاصية ، بعد طرح امتصاص المحلول الفارغ الذي تم تحضيره كما هو موصوف أعلاه ، فيما عدا أنه تم استبدال محلول XOD بـ 50 / zl من المحلول المنظم. تم التعبير عن التأثيرات المثبطة على XOD من خلال النسبة المئوية للتثبيط (النسبة المئوية) لتكوين حمض البوليك مقابل ذلك المتحكم فيه ، حيث تم استخدام الماء بدلاً من محلول العينة. تم استخدام مثبط XOD المعروف ، ألوبيورينول ، كعنصر تحكم إيجابي.

تم قياس التأثيرات المثبطة على بيروكسيد الدهون في ميكروسومات كبد الجرذ بيروكسيد الدهون في ميكروسومات كبد الفئران غير الناجم عن الإنزيم الناجم عن الأسكوربيك / Fe2 plus و enzy المستحث بواسطة ADP / NADPH / Fe3 plus بواسطة طريقة Kiso et al.l9) مع بعض التعديلات .

أ) حمض الأسكوربيك / Fe2 بالإضافة إلى بيروكسيد الدهون المستحث في ميكروسومات كبد الفئران: يتكون خليط التفاعل من 39 0 / 11 من 1 0 0 ملي مولار KC1 / 45 ملي مولار Tris-HCl (pH 8.0) ، 50pl من الكسر الميكروسومي في 1.15 بالمائة KC1 (20 مجم بروتين / مل) و 50 من محلول العينة. بعد إضافة 10/11 من 10 ملي مولار من حمض الأسكوربيك / 0.5 ملي مولار FeSO4 ثم الحضن عند 37 درجة لمدة 20 دقيقة ، يبرد خليط التفاعل في ثلج لإيقاف التفاعل. تم قياس بيروكسيد الدهون بواسطة طريقة حمض الثيوباربيتوريك (24) وتم التعبير عنها على أنها إنتاج MDA (malondialdehyde). الذي - التي

ب) ADP / NADPH / Fe3 بالإضافة إلى بيروكسيد الدهون المستحث في ميكروسومات كبد الفئران: احتوى خليط التفاعل على 29 0 贝 من 100 ملي مولار KC1 / 45him Tris-HCl (pH 8.0) ، 50 / il من المعلق الميكروسومي في 1.15 بالمائة KC1 (20 مجم بروتين / مل) و 50 عينة فى الماء. تمت إضافة خمسين من 20 ملي مولار من ADP و 50 // I من 1 ملي مولار NADPH و 10 من 2 ملي مولار FeCl3 ثم حضنت عند 37 درجة لمدة 30 دقيقة. تم قياس بيروكسيد الدهون وتم حساب IC50 بالطريقة أعلاه.

فوائد cistanche: حماية الكبد

النتائج

تحديد البنية من خلال المقارنة المباشرة لبياناتهم ^ H-NMR و 13 C-NMR مع الأدبيات ، 2 * تم تحديد الفينيليثانويد التسعة على أنها 2 ، أسيتيل لاكتوزيد (1) ، سيستانوسيد A (2) ، توبولوسيد A (3) ، إشيناكوسيد ( 4) ، أكتيوسيد (5) ، سيرينغاليد A 3'-a-rhamnopyranoside (6) ، tubuloside B (7) ، isoacteoside (8) و cistanoside F (9) ، على التوالي (الشكل 2). ومع ذلك ، بالنسبة لـ acteoside ، وهو مركب تمثيلي من phenylethanoids ، وتخصيصات إشارات 13C-NMR لـ C -3 و C -4 في جزء aglycone ، C -3 ، C -4 و C -5 و C -6 في جزء كافيين في التقارير السابقة 25) كانت مربكة. باستخدام طريقة 2D-NMR مثل HMBC و HMQC ، قمنا بتعيين بيانات 13C-NMR الخاصة بـ acteoside على أنها جزء aglycone Cl: 131.49، C -2: 117.14، C -3: 146.07، C { {41}}: 144.62 ، ج -5: 116.34 ، ج -6: 121.29 ، كاليفورنيا: 72.33 ، سي # 36.54 ؛ caffeoyl moiety Cl: 127.63، C -2: 115.26، C -3: 146.79، C -4: 149.78، C -5: 116.55، C -6: 123.24 ، Ca: 168.33، Cg: 114.68، Cy: 148.04؛ جزء الجلوكوز C-l ': 104.16، C -2': 75.97، C -3 ': 81.66، C4: 70.39، C -5': 76.16، C -6 ' : 62.35 ؛ وشق rhamnose: Cl: 102.99 ، C -2: 72.22 ، C -3: 72.05 ، C -4: 73.79 ، C -5: 70.58 ، C -6 : 18.46.

تمت دراسة العلاقات بين البنية والنشاط لهذه المركبات الفينيليثانويدية التسعة بواسطة جذور DPPH و xanthine / XOD التي ولّدت أنشطة الكسح الجذري لأنيون الفائق ، وحمض الأسكوربيك / Fe2 plus و ADP / NADPH / Fe3 بالإضافة إلى بيروكسيد الدهون المستحث في ميكروسومات كبد الفئران. تم استخدام حامض الكافيك والتوكوفيرول وهما من المواد المعروفة لإزالة الجذور الحرة ومضادات الأكسدة كمواد تحكم إيجابية.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>syringalide A S'-a-rhamnopyranoside (6) (IC5O=5. 52 / zm)> cistanoside F (9) (IC 50=6. 29 / im)> a-tocopherol (IC {{10) }}. 2 // م). Tubuloside B ⑺ و echinacoside (4) و 2 / -acetylacetoside (1) و tubuloside A (3) و acteoside (5) و isoacteoside (8) (IC5O=2. 99 一 3.49 / im) ، كل منها يحتوي على أربع مجموعات هيدروكسيل فينولية في الجزيء أظهر نشاطًا أقوى من cistanoside A (2) الذي تمت ميثلة 3- OH من جزء aglycone. أظهر Syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6) الذي يحتوي على مجموعة OH واحدة فقط في جزء aglycone نشاطًا ضعيفًا نسبيًا. أظهر Cistanoside F (9) ، الذي يحتوي فقط على مجموعتين هيدروكسيل موجودتين في جزء كافويل ولكن لا يحتوي على فينيل إيثانول أجليكون ، أضعف نشاط.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>cistanoside A (2) (IC5O=3. 69 jUm)> a-tocopherol (IC50> 10 ميكرومتر).

التأثيرات المثبطة على نشاط XOD فقط isoacteoside (8) و tubuloside B (7) ، التي تكون شظيتها كافويل في موضع 6z من الجلوكوز ، لها تأثيرات مثبطة على نشاط XOD ، و phenylethanoids الأخرى ، التي تحتوي على جزء كافويل في ^ - موضع الجلوكوز ، لم تظهر أي آثار عند التراكيز المختبرة (25 200 م) (الجدول 1). عزل تسعة مركبات فينيلثانويد رئيسية من هذا المستخلص وحدد هياكلها بواسطة الرنين المغناطيسي النووي. نظام مثل tubuloside B (7) M2'-acetylacteoside (1) iso-acteoside (8) echinacoside (4) tubuloside A (3) M acteo side (5)> syringalide A 3'-a-rhamnopyranoside (6)> cistanoside A (2)> سيستانوسيد F (9) ؛ في نظام ADP / NADPH / Fe3 plus مثل tubuloside B (7) 2 ، -acetylacteoside (^^ iso acteoside (8) acteoside (5)> tubuloside A (3)> echinaco side (4)> syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6)> cistanoside A (2)> cistanoside F (9). كانت هاتان الطريقتان متشابهتين مع تلك الموجودة في اختبارات مسح الجذور الحرة أعلاه ، خاصة في اختبار مسح جذور DPPH. ومع ذلك ، فإن عدد مجموعات هيدروكسيل الفينول في الجزيء لعبت الدور الأكثر أهمية في تثبيط بيروكسيد الدهون في ميكروسومات كبد الفئران.

آثار cistanche

نقاش

اختبرنا أنشطة إزالة الجذور الحرة لمستخلصات المذيبات المختلفة لجذع Cistanche deserticola على جذور DPPH ووجدنا أن مستخلص الأسيتون- H2O (9: 1) أظهر أقوى نشاط. للعثور على المكونات النشطة لنشاط إزالة الجذور الحرة ، قمنا بعزل تسعة مركبات رئيسية من الفينيثانويد من هذا المستخلص وحددنا هياكلها بواسطة الرنين المغناطيسي النووي.

تم تقييم التأثيرات المضادة للأكسدة لهذه المركبات الفينيلية من خلال نشاط إزالة الجذور الحرة ونشاط بيروكسيد الدهون المضاد. تم استخدام a-tocopherol المعروف على نطاق واسع كمادة تحكم إيجابية. مثلقد تؤثر محبة الدهون في a-tocopherol على أنشطتها في أنظمة الفحص الحالية باستثناء مقايسة الكسح الجذري DPPH ، فقد أخذنا حمض الكافيك كمادة تحكم إيجابية أخرى.

أولاً ، أجرينا اختبارات على أنشطة إزالة الجذور الحرة. أظهرت جميع مركبات الفينيلثانويد التسعة التي تم اختبارها بلا شك أنشطة تنظيف جذرية لأنيون DPPH وأكسيد الفائق أقوى من التوكوفيرول ، لكن بعضها كان أقوى والبعض الآخر كان أضعف من حمض الكافيين. زاد نشاط الكسح الجذري مع زيادة عدد مجموعات هيدروكسيل الفينول. يُعتقد أن التوازي غير الكامل لأنشطة تنظيف أنيون DPPH الجذري والأكسيد الفائق يرجع إلى الخصائص المختلفة بين الأنواع الراديكالية وبعض العوامل الأخرى المشاركة في نظامي التفاعل هذين ، 21،26) لجذر DPPH وهو جذري مستحث كيميائيًا يتفاعل مع الزبالين الجذريين في عامل كيميائي بسيط ، بينما يتم إنشاء جذور الأنيون الفائق بواسطة الزانثين / XOD ، وهو تفاعل إنزيم.

إذا كانت مركبات فينيل إيثانويد تثبط جذر أنيون أكسيد الزانثين / XOD ، فيمكن اعتبار التثبيط نتيجة لنشاط الكسح الجذري لأنيون الفائق أو (و) تثبيطها للإنزيم XOD ، 23) لذلك أجرينا اختبارًا لها. الآثار المثبطة لأكسيداز الزانثين. من المثير للاهتمام ، بشكل انتقائي ، أن فقط isoacteoside (8) و tubuloside B (7) ، اللذين تكون شظيتهما كافويل عند 6 / -وضع الجلوكوز ، قد أظهرت تثبيطًا. أظهروا تأثيرًا عند تركيز 25-200 جم على 3.4 xlO ^ 3U / ml (10jug / ml) من XOD ، على الرغم من أن الفعالية كانت أضعف من الوبيورينول. لم تظهر المركبات الأخرى ، التي يكون جزء الكافيين فيها عند 《- للجلوكوز ، أي تأثير مثبط. قدمت هذه النتيجة التقرير الأول عن التأثير المثبط للفينيل إيثانويد على إنزيم XOD. ذكر Chan et al) أن حمض الكافيين وبعض نظائره كان لها تأثيرات مثبطة على نشاط XOD ، ومع ذلك ، لم نجد مثل هذا التأثير لحمض الكافيين في ظل ظروف التفاعل الحالية. في هذا الاختبار ، كان تركيز XOD مشابهًا لذلك في اختبار التأثير على توليد جذري أنيون فوق أكسيد (4.3 / زج / مل) ، لكن تركيز المركبات كان أعلى بكثير مما كان عليه في الأخير. لذلك ، فإن تثبيط جيل Oj بواسطة هذه الفينيلثانويد يرجع إلى نشاطها الجذري في الكسح ، ولكن ليس بسبب نشاطها المثبط لإنزيم XOD.

من المعروف جيدًا أن تفاعل الجذور الحرة المتسلسل يؤدي أخيرًا إلى أكسدة الدهون. (28،29) لذلك قمنا بدراسة هذه المركبات من الفينيثانويد لتأثيرها على بيروكسيد الدهون في ميكروسومات كبد الفئران الناجم عن النظام الأنزيمي ADP / NADPH / Fe3 plus والذي يسببه حمض الأسكوربيك غير الأنزيمي / Fe2 plus. أظهرت كل هذه المركبات تأثيرات بيروكسيدية مضادة للدهون أقوى من حمض الكافيين والتوكوفيرول في كلا النظامين. من المقبول عمومًا أن يتم تحفيز كلا النظامين بواسطة أيونات الحديد ، إما Fe2 plus أو Fe3 plus ، المتضمنة مع جذور البيروكسيل الدهنية ، 30،31) وأن هيدروكسيل الجذر OH يلعب الدور الأكثر أهمية في بيروكسيد الدهون ، 32 _34) على الرغم من أن بدء OH قد تم التشكيك فيه في بعض التقارير. رد الفعل الجذري ولا يؤدي إلى بيروكسيد الدهون نفسه. على الرغم من أن مركبات الفينيليثانويد هذه أظهرت نشاطًا أضعف في الكسح على جذور الأنيون الفائق من حمض الكافيين ، إلا أنها أظهرت تأثير بيروكسيد مضاد للدهون أقوى بكثير من الأخير. لذلك ، نعتقد أنها ، مثل بعض مركبات البوليفينول العطرية الأخرى ، التي تكسر السلسلة ، قد تمنع بيروكسيد الدهون أعلاه في ميكروسومات كبد الجرذان عن طريق كلاب Fe2 plus أو Fe3 plus أيونات ، وأيضًا عن طريق تنظيف الأكسيد الفائق الجذري Oj لتحطيم التفاعل المتسلسل الراديكالي .37،38) علاوة على ذلك ، يمكنهم أيضًا البحث عن المزيد من الأنواع الجذرية السامة مثل جذور الهيدروكسيل وجذور البيروكسيل الدهني لمقاطعة بيروكسيد الدهون بشكل مباشر عند فعالية أعلى من حمض الكافيك.

لي وآخرون. درس بعض جليكوسيدات فينيل إيثانويد بما في ذلك أكتيوسيد (فيرباسكوزيد) (5) ، أيزوكتيوسيد (إيزو فيرباسكوزيد) (1) وإكيناكوسيد (4) من بيديكالاريس لتثبيطها الأكسدة التلقائية لحمض اللينوليك في المذيلات ، وهو نظام غير بيولوجي ، 13) لحمايتها من انحلال الدم التأكسدي في المختبر ، 14 بوصة 1 وأيضًا لتأثيرها الكاسح على NBT / PMS / NADH التي تولدت أكسيد الفائق وتثبيط بيروكسيد الدهون الناجم عن حمض الأسكوربيك / Fe2 زائد في ميكروسومات كبد الفئران .15) نشاط مماثل لوحظت العلاقة بالبنية في تقارير Li et al. ونتائجنا. أي أن أنشطة phenylethanoids لتثبيط بيروكسيد الدهون تعتمد بشكل أساسي على عدد مجموعات هيدروكسيل الفينول وموضعها الفاصل. 3) ، و echinacoside (4) ، التي تحتوي على الكافيين عند موضع 4z من الجلوكوز ، من السهل تكوين رابطة هيدروجينية مع مجموعات الهيدروكسيل من rhamnosyl من تلك الموجودة على isoacteoside (8) و tubuloside B (7) ، والتي تناول الكافيين في موضع الجلوكوز 6'-. وهكذا ، احتفظت الأخيرة بمجموعات هيدروكسيل الفينول أكثر حرية من السابقة ، وأظهرت الصدارة نشاط بيروكسيد مضاد للدهون أقوى. لاحظنا أيضًا أن 2z-acetylation لهذه الفينيثانويدز ، على الرغم من أنها عززت تأثيراتها المضادة للأكسدة بشكل طفيف. على سبيل المثال ، أكتيوسيد (5) وإيزوكتيوسيد (8) ، عندما 2'- أسيتيل إلى 2 / -اسيتيل لاكتوزيد (1) وتوبولوسيد ب (7) ، على التوالي ، أظهر أنشطة أقوى في جميع أنظمة الفحص الأربعة. بسبب تفوق الكيمياء المجسمة و 2'-acetylation ، أظهر tubuloside B (7) أقوى نشاط مضاد للأكسدة بين العينات المختبرة. ربما بسبب استبدال جزء ثالث من السكر في موضع 6 '~ ، لم يكن هذا الارتباط مناسبًا في حالة tubuloside A (3) أو echinacoside (4) ؛ ومع ذلك ، في نظام ADP / NADPH / Fe3 plus ، لا يزال tubuloside A يظهر نشاط بيروكسيد مضاد للدهون أقوى من echinacoside (4).

بالإضافة إلى ذلك ، أظهر ترتيب نشاط الكسح الجذري لـ DPPH توازيًا أفضل مع نشاط بيروكسيد مضاد للدهون من ترتيب نشاط الكسح الجذري لأنيون الفائق. أثبت هذا مرة أخرى أن مقايسة الكسح الجذري DPPH هي طريقة ملائمة وموثوقة لمقايسة مضادات الأكسدة ، 26) على الرغم من أن جذور DPPH هي جذرية مستحثة كيميائيًا بينما جذري أنيون فوق أكسيد يمكن أن يكون جذريًا داخليًا بيولوجيًا.

في الختام ، أظهرت جميع مركبات فينيل إيثانويد التسعة أنشطة إزالة الجذور الحرة وتأثيرات بيروكسيد مضاد للدهون في هذه الدراسة. تم تعزيز التأثير المضاد للأكسدة عن طريق زيادة عدد مجموعات الهيدروكسيل الفينولية في الجزيء. كما يمكن أن نتخيل ، قد تلعب التأثيرات المضادة للأكسدة لهذه النواتج الفينيليثا التي تم إثباتها هنا دورًا مهمًا في إجراءات عقار Cistanchis Herba وقد تفسر جزئيًا آليات أنشطة بعض مركبات إيثانويد الفينيل ضد الأورام والتهاب الكلية والتهاب الكلية ، 1 ن الذي تشارك فيه الجذور الحرة بشكل خطير.

Cistanche Echinacoside: مضاد للأكسدة

المراجع

1) Namba T.، "The Encyclopedia of Wakan-Yaku (الأدوية الصينية اليابانية التقليدية) بالصور الملونة ، 5 ، المجلد الثاني ، Hoikusha ، طوكيو ، 1994 ، الصفحات 16-17.

2) أ) كوباياشي ح ، كاراساوا هـ ، مياس ت. ، فوكوشيما س ، تشيم. فام. BulL، 32، 3009-3014 (1984) ؛ ب) المرجع نفسه ، المرجع نفسه ، 32 ، 3880-3885 (1984) ؛ ج) نفسه ، المرجع نفسه ، 33 ، 1452–1457 (1985) ؛ د) Karasawa H.، Kobayashi H.، Takizawa N.، Miyase T.، Fukushima S.، Yakugaku Zasshi، 106، 562-566 (1986) ؛ هـ) المرجع نفسه ، 106 ، 721-724 (1986) ؛ /) كوباياشي هـ ، أوجوتشي هـ ، أو تاكيزاوا ن ، أو مياسي ت ، أوينو أ ، أوسمانغاني ك ، أحمد م ، تشيم. فارم. ثور ، 35 ، 3309 3314 (1987) ؛ ز) Yoshizawa F.، Deyama T.، Takizawa N.، Usmanghani K.، Ahmad M.، ibid.، 38، 1927–1930 (1990).

3) أ) كوباياشي هـ ، كوماتسو ج. ، ياكوجاكو زاشي ، 103 ، 508 一 511 (1983) ؛ ب): كوباياشي هـ ، كاراساوا هـ ، مياسي ت. ، فوكوشيما س. ، كيم. فارم. الثور ، 32 ، 1729-1734 (1984) ؛ ج) نفسه ، المرجع نفسه ، 33 ، 3645-3650 (1985).

4) Naran R.، Ebringerova A.، Hromadkova Z.، Patoprsty V.، Phytochemistry، 40، 709–715 (1995).

5) ساتو ت. ، كوزيما س. ، كوباياشي ك. ، كوباياشي هـ. ، ياكوجاكو زاشي. 105 ، 1131-1144 (1985).

6) Jin XL، Zhang QR، China J. Chinese Materia Medica، 19، 695–697 (1994).

7) Yamahara J.، Kitani T.، Kobayashi H.، Kawahara Y.، Yakugaku Zasshi، 110، 932–935 (1990).

8) أ) Pettit G. R ・ ، Numata A. ، Takemura T. ، Ode RH ، Narula A ، S. ، Schmidt JM ، Cragg GM ، Pase CP ، J. Nat. Prod.، 53، 456-58 (1990) ؛ ب) Saracoglu I. ، Inoue M. ، Calis I. ، Ogihara Y. ، Biol. فارم ، بول ، 18 ، 1396-1400 (1995).

9) Andary C.، '4Caffeic Acid Glycoside Esters and Pharmacology / ed. بواسطة Scalbert A.، Polyphenolic Phenomena، INRA Editions، Paris، 1993، pp.237–245.

10) Murai M.، Tamayama Y.، Nishibe S.، Planta Med .. 61، 479― 80 (1995).

11) Hayashi K.، Nagamatsu T.، Ito M.، Hattori T.، Suzuki Y.، Jpn. فارماكول ، 66 ، 47 52 (1994).

12) أ) مولنار جيه ، جونيكس ج ، موسسي آي ، كولتاي إم ، بيتري إل ، شوياما واي ، ماتسوموتو إم ، نيشيوكا إل ، أكتا ميكروبيول. هونغ .. 36 ، 425― 32 (1989) ؛ ب) Sasaki H.، Nishimura T.، Morota T.، Chin M.، Mitsuhashi H "Komatsu Y.، Maruyama H.، Tu GR، He W.، Xiong YL، Planta Med.، 55، 4582462 (1989).

13) Li J.، Wang PF، Zheng RL، Liu ZM، Jia 乙 J.، Planta Med.، 59، 315–317 (1993).

14) Zheng RL، Wang PF، Li J.، Liu Z.M ،، Jia ZJ، Chem. فيز. الدهون. 65 ، 151-154 (1993).

15) Li J.، Zheng RL، Liu 乙 M.، Jia 乙 J.، Acta Pharmacol. Sinica ، 13 ، 427T30 (1992).

16) Barber DA، Harris SR، American Pharmacy. 34 ، 26 35 (1993).

17) Elstner EF، Klin Wochenschr، 69، 949-956 (1991).

18) مارتن جي آر ، دانر دي بي ، هولبروك نيوجيرسي ، آن. القس ميد ، 44 ، 419 - 29 (1993).

19) Kiso Y.، Tohkino H.، Hattori M.، Sakamoto T.، Namba T.، Planta Med .. 50، 298-302 (1984).

20) Lowry OH، Rosebrough NJ، Farr AL، Randall RJ، J. Biol. علم .193 ، 265–275 (1951).

21) Hatano T.، Edamatsu R.، Hiramatsu M.، Mori A.، Fujita Y.، Yasuhara T "Okuda T.، Chem. Pharm. Bull.، 37، 2016 2021 (1989).

22) Imanari T.، Hirota M.، Miyazaki M.، Igaku No Ayumi، 101، 496-497 (1977).

23) Hatano T.، Yasuhara T، Yoshihara R.، Agata L، Noro T.، Okuda T.، Chem. فارم. الثور ، 38 ، 1224-1229 (1990).

24) Ohkawa H.، Ohishi N.، Yagi K.، Anal. Biochem ، 95 ، 351 一 358 (1979).

25) أ) لهلب م ، ف. ، زغلول ع ، الخياط س. عفيفي ، ستيشر أو. ، بلانتا ميد. 57 ، 481-85 (1991) ؛ ب) نيشيمورا هـ ، ساساكي هـ ، إيناغاكي ن. ، تشين إم (زين 乙 إكس) ، ميتسوهاشي هـ ، كيمياء النبات. 30 ، 965-969 (1991) ؛ ج) Budzianowski J.، Skrzypczak L.، ibid ،، 38، 997–1001 (1995)،

26) مارسدن إس بي ، نيتشر (لندن) ، 181 ، 1199-1200 (1958).

27) Chan WS، Wen PC، Chiang HC، Anticancer Res.، 15، 703 一 708، (1995).

28) Janero DR، Burghardt B.، Biochem، Pharmacol .. 37، 3335 一 3342 (1988).

29) Buettner GR ، القوس. بيوتشيم. Biophys. ، 300 ، 535 543 (1993).

30) Herbert V.، Shaw S.، Jayatilleke E.، Stopler-Kasdan T.، Stem Cells، 12، 289–303 (1994).

31) Aust SD، Miller DM، Samokyszyn VM، Methods Enzymol.، 186، 457–463 (1990).

32) Kubota S.، Ikegami Y.، Kurokawa T.، Sasaki R.، Sugioka K.، Nakano M.، Biochem. بيوفيز. الدقة ، الاتصال ، 108 ، 1025 1031 (1982).

33) ياغي ك. ، إيشيدا ن. ، كومورا س. ، أوهيشي ن. ، كوساي م ، كونو م ، بيوتشيم. بيوفيز. الدقة. كومون ، 183 ، 945 951 (1992).

34) Hockenbery DM، Oltvai ZN، Yin XM، Milliman CL، Korsmeyer SJ، Cell. 75 ، 241-251 (1993).

35) بوشر جي آر ، تيان إم ، أوست إيه دي ، بيوتشيم. بيوفيز. Res، Commun.، Ill، 777–784 (1983).

36) يوشيدا تي ، أوتاكي هـ ، أراماكي واي ، هارا تي ، تسوتشيا إس ، حمادة إيه ، أوتسومي هـ ، بيول. فارم. الثور .. 19 ، 779-782 (1996).

37) Afanas5 EVIB ، Dorozhko A. L ، Brodskii AV ، Kostyuk VA ، Potapovitch L A. ، Biochem. فارماكول ، 38 ، 1763-1769 (1989).

38) Robak J.، Gryglewski RJ، Biochem. فارماكول .. 37 ، 837-841 (1988).

39) Chimi H.، Morel I.، Lescoat G.، Pasdeloup N ・، Cillard P.، Cillard J.، Toxicology in Vitro، 9، 695 一 702 (1995)