التأثيرات المخففة للديكول على اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم في الفئران التي تعاني من ارتفاع ضغط الدم تلقائيًا
Mar 11, 2022
الملخص: يستحث ارتفاع ضغط الدمكلويتليف أو تليف خلالي أنبوبي ، والذي يؤدي في النهاية إلى المرحلة النهائيةامراض الكلى.يعد الانتقال الظهاري إلى اللحمة المتوسطة (EMT) أحد الآليات الأساسية لـكلويتليف. على الرغم من أن الدراسات السابقة أظهرت أن مستخلصات Ecklonia cava (ECE) والمخرج (DK) كان لهما تأثير مثبط على الإنزيم المحول للأنجيوتنسين (Ang) I ، والذي يحول Angi إلى Ang II. من المعروف أن Ang II متورط في كلويتليف؛ ومع ذلك ، لم يتم تقييم ما إذا كان ECE أو DK يخفف من اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم عن طريق تقليل EMT. في هذه الدراسة ، تأثير ECE و DK على تقليل Angi ومسار الإشارة السفلية لمستقبلات الأنجيوتنسين من النوع 1 (AT1R) / TGF / SMAD ، والتي ترتبط بـ EMT واستعادةوظيفة الكلىفي الفئران التي تعاني من ارتفاع ضغط الدم تلقائيًا (SHRs). أدى إما ECE أو DK إلى انخفاض كبير في مستوى مصل Ang II في SHRs. وعلاوة على ذلك، فإنكلويتم تقليل التعبير عن AT1R / TGF / SMAD عن طريق إدارة ECE أو DK. علامات الخلية الوسيطة في ملفالكلىمن SHRs انخفض بشكل كبير بواسطة ECE أو DK. النسيج الليفي منالكلىمن SHRs انخفض بشكل ملحوظ بواسطة ECE أو DK. انخفضت نسبة الألبومين في البول / الكرياتينين في SHRs بشكل ملحوظ بواسطة ECE أو DK. بشكل عام ، تشير نتائج هذه الدراسة إلى أن ECE و DK قللا من مستويات مصل Ang II والتعبير عن AT1R / TGF / SMAD ، ثم خفضت EMT وكلوي التليف في SHRs. علاوة على ذلك ، فإن الانخفاض في EMT وكلوييمكن أن يؤدي التليف إلى استعادةوظيفة الكلى. يبدو أن ECE أو DK يمكن أن يكون مفيدًا لتقليل اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم عن طريق تقليل EMT وكلويتليف.
الكلمات الدالة:الانتقال الظهاري إلى اللحمة المتوسطة ؛ مستخلصات E. ديكول. عفويا الفئران المصابة بارتفاع ضغط الدم. تليف كلوي أنجيوتنسين الثاني ؛ الكلى؛ كلوي
سيحسن القسطرة من أمراض الكلى / الكلى
مقدمة
الالكلىهو عضو رئيسي يتأثر بتلف العضو المستهدف الناتج عن ارتفاع ضغط الدم: مزمنمرض كلوييحدث بشكل شائع في حوالي 16 بالمائة من مرضى ارتفاع ضغط الدم [1]. تشمل السمات المرضية لاعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم الالتهاب والتصلب الكبيبي والضمور الأنبوبي والتليف الخلالي [2]. يحل النسيج الليفي محل الوظيفة الطبيعيةالكلىالأنسجة ، الأمر الذي يؤدي إلىالفشل الكلوي[3،4]. هكذا،كلويالتليف أو التليف الخلالي الأنبوبي هو الآفة المرضية الرئيسية لاعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم ، والذي يحفز المرحلة النهائيةامراض الكلى(الداء الكلوي بمراحله الأخيرة) [5].كلوييُظهر التليف الخصائص التالية: زيادة إنتاج المصفوفة خارج الخلية الهائل (ECM) ، وزيادة تجنيد الأرومات الليفية في مواقع إصابة الأنسجة ، وزيادة تغيرات النمط الظاهري من الأرومات الليفية إلى - الأكتين العضلي الأملس (-SMA) - التي تعبر عن الأرومات الليفية العضلية [6]. تؤدي زيادة -SMA التي تعبر عن الخلايا الليفية العضلية إلى الترسب المفرط غير الضروري للكولاجين وتعزز خلل تنظيم البروتينات المعدنية المصفوفة ، والتي تدمر الغشاء القاعدي وتزيد من سرعة التليف [6]. في الآونة الأخيرة ، أظهرت العديد من الدراسات أن الانتقال الظهاري إلى اللحمة المتوسطة (EMT) هو أحد الآليات الأساسية لـكلويتليف [7،8]. من خلال الخضوع لـ EMT ، تفقد الخلية الظهارية تدريجياً الواسمات الظهارية ، مثل E-cadherin ، وهو العنصر الرئيسي للوصلات من خلية إلى خلية ويكسب علامات الأنماط الظاهرية اللحمية المتوسطة ، مثل -SMA [9]. من خلال فقدان تقاطعات الخلايا ، تتحرك الخلايا التي خضعت لعملية EMT بسهولة نحو الفضاء الخلالي [9]. علاوة على ذلك ، فإن الخلايا الظهارية التي اكتسبت خصائص الخلايا الليفية العضلية تعبر عن -SMA وتصنع بروتينات ECM ، مثل الكولاجين ، مما يؤدي في النهاية إلى التليف الخلالي الأنبوبي (TIF) [9].
يعمل أنجيوتنسين 2 (أنج 2) كلاعب رئيسي في التليف الناجم عن ارتفاع ضغط الدم. بصفته المنشط الرئيسي لنظام الرينين-أنجيوتنسين-الألدوستيرون (RAAS) ، يتسبب Ang II في إصابات شديدة في الأوعية الدموية ، والكبيبي ، والنُبيب الخلالي ، والتي تصاحبها زيادة في تحويل عامل النمو بيتا (TGF) عبر مستقبلات الأنجيوتنسين من النوع 1 ( AT1R) [10]. مستويات Ang II ومستقبلاته فيالكلىمن الفئران التي تعاني من ارتفاع ضغط الدم تلقائيًا (SHRs) كانت أعلى من تلك الموجودة في فئران Wistar Kyoto (WKY) [11]. من المعروف أن Ang II يستحث EMT عبر مسارات إشارات تعتمد على TGF [12]. يحفز علاج Ang II لخلايا NRK52E (خطوط الخلايا الظهارية الأنبوبية العادية للفئران) التعبير عن مسار إشارات TGF 1 / SMAD ، والذي يؤدي في النهاية إلى زيادة البروتينات الاستباقية والتليفية [13]. عندما يرتبط Ang II بـ AT1R ، يتم تنشيط مسار إشارة SMAD3 ويحفز EMT في خطوط الخلايا NRK52E [12].
تم الإبلاغ عن البوليفينول من الطحالب البحرية للعمل كمثبطات الإنزيم المحول للأنزيم (ACE) [14-17]. يشارك ACE في تحويل Ang I إلى Ang II ، ويزيد Ang II باعتباره مضيقًا قويًا للأوعية ، مما يؤدي إلى ارتفاع ضغط الدم [18]. تظهر العديد من الفلوروتانين ، مثل phlorofucofuroeckol A ، والمخرج (DK) ، و eckol ، الموجودة في مقتطفات من Ecklonia cava أو Ecklonia stolonifera ، أنشطة مثبطة للإنزيم المحول للأنجيوتنسين ؛ وبالتالي ، كان من المتوقع أن تقلل هذه البوليفينول من ضغط الدم (BP) [15،19]. على الرغم من أن مستخلصات E. cava (ECE) و DK تُظهِر أنشطة مثبطة للإنزيم المحول للأنجيوتنسين ، لم يتحقق أي تقرير فيما إذا كان ECE أو المدير متورطًا في EMT لـالكلىأوكلويتليف الناجم عن ارتفاع ضغط الدم. وبالتالي ، فإن تأثير ECE و DK على تقليل Ang II ومسار الإشارة السفلية لـ AT1R / TGF / SMAD2 / 3 ، والذي يرتبط بـ EMT لـالكلىوالاستعادةوظيفة الكلىفي SHRs ، في هذه الدراسة.
2. النتائج
2.1. ECE و DK انخفاض ضغط الدم الانقباضي ومستوى المصل من Ang II في SHRs
كان ضغط الدم الانقباضي لـ SHRs أعلى بكثير من فئران WKY وانخفض بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK. لم تكن التأثيرات المتناقصة لـ 50 و 100 و 150 ملغم / كغم / يوم من إدارة ECE و DK مختلفة بشكل كبير (الشكل 1 أ). كانت BPs الانبساطية والمتوسط لـ SHRs أعلى بكثير من تلك الخاصة بفئران WKY. لم تؤدي إدارة ECE أو DK إلى انخفاض كبير في الضغط الانبساطي ومتوسط BP (الشكل 1 ب ، ج). كان مستوى مصل Ang II في SHRs أعلى بكثير من مستوى فئران WKY وانخفض بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK. علاوة على ذلك ، لوحظ التأثير المتناقص الأبرز في المجموعة المعالجة بـ 150 مجم / كجم / يوم من ECE (الشكل 1 د).
2.2. خففت ECE و DK من التعبير عن AT1R في كلية SHRs
تم تقييم التعبير عن AT1R من خلال qRT-PCR وتلطيخ. تعبير mRNA لـ AT1R في النخاع والقشرة منالكلىكان أعلى بكثير في SHRs من الفئران WKY. تم تقليل هذا التعبير عن طريق إدارة إما ECE أو DK (الشكل 2 أ). في النخاع ، كان التأثير المتناقص أكثر بروزًا في المجموعة التي عولجت بـ DK. في القشرة ، كان لـ 150 مجم / كجم / يوم من ECE التأثير المتناقص الأبرز. تم زيادة مستوى التعبير عن AT1R في القشرة والنخاع من SHRs ، والذي تم تقييمه من خلال التلوين ، بشكل كبير وانخفض بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK. علاوة على ذلك ، لوحظ التأثير المتناقص الأبرز في المجموعة التي عولجت بـ DK (الشكل 2 ب ، ج). للتحقق من صحة توهين ECE و DK لتعبير AT1R بتنسيقالكلىالأنابيب ، خط خلية نبيبي قريب من الفأر (TCMK {0}}) تم تنشيطه بواسطة الأنجيوتنسين 2 في نموذج في المختبر [20]. انخفض مستوى التعبير عن بروتين AT1R في خلايا TCMK المعالجة بالأنجيوتنسين 2 -1 مع ECE (5 ، 25 ، 50 ميكروغرام / مل) ، DK أو المثبط مقارنةً بمعالجة الأنجيوتنسين 2 فقط (الشكل 2 د).
2.3 قلل ECE و DK من تعبير TGF و SMAD2 / 3 و Snail2 في الكلى من SHRs
كانت تعبيرات TGF في اللب والقشرة من SHRs أعلى بكثير من تلك الخاصة بفئران WKY ، والتي تم تقليلها بواسطة إدارة ECE أو DK. في النخاع ، كان التأثير المتناقص أكثر بروزًا في المجموعات المعالجة بـ 150 مجم / كجم / يوم من ECE و DK. في القشرة ، كان التأثير المتناقص أكثر بروزًا في المجموعة التي عولجت بـ DK (الشكل 3 أ). كانت تعبيرات SMAD2 في اللب والقشرة من SHRs أعلى من تلك الموجودة في فئران WKY ، والتي انخفضت بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK. كان التأثير المتناقص في النخاع أكثر بروزًا في المجموعات المعالجة بـ 150 مجم / كجم / يوم من ECE أو DK. في القشرة ، لم تكن التأثيرات المتناقصة لـ 50 و 100 و 150 ملغم / كغم / يوم من ECE أو DK مختلفة بشكل كبير (الشكل 3 ب). كان تعبير SMAD3 في النخاع والقشرة من SHRs أعلى بكثير من فئران WKY ، وانخفض بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK. لوحظ التأثير المتناقص الأبرز في المجموعة المعالجة بـ 150 مجم / كجم / يوم من ECE (الشكل 3 ج). تمت زيادة تعبير Snail2 في النخاع والقشرة من SHRs بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK. لوحظ التأثير المتناقص الأبرز في المجموعة التي عولجت بـ DK (الشكل ثلاثي الأبعاد). في النموذج المختبر ، انخفض مستوى التعبير عن بروتين TGF و pSMAD2 / 3 في خلايا TCMK المعالجة بالأنجيوتنسين 2 -1 مع ECE (5 ، 25 ، 50 ميكروغرام / مل) ، DK أو المثبط مقارنةً بالمستوى الوحيد علاج الأنجيوتنسين الثاني (الشكل 3 هـ ، و).
الشكل 2. تحليل مقارن لإدارة ECE و DK على الحد من التعبير عن AT1R فيالكلىمن SHRs وفي خلايا TCMK المعالجة بالأنجيوتنسين 2 -1. (أ) مستويات AT1R mRNA في منطقة القشرة ، وفي لبالكلىتم قياسها عن طريق تحليل qRT-PCR. (ب) مستويات التعبير البروتيني AT1R في منطقة القشرة ، وفي لبالكلىتم قياسها بواسطة الكيمياء المناعية و (ج) تم قياس مستويات البروتين بواسطة برنامج Image J. تم إعطاء ثلاث جرعات من ECE (50 مجم / كجم / يوم ، و 100 مجم / كجم / يوم و 150 مجم / كجم / يوم) عن طريق الفم لمدة 4 أسابيع ، كما تم تناول 2.5 مجم / كجم / يوم من DK عن طريق الفم لمدة 4 أسابيع. (د) مستويات التعبير البروتيني AT1R في خلايا TCMK المعالجة بالأنجيوتنسين II -1 (كلويتم قياس الخلايا الأنبوبية الظهارية) مع 5 ، 25 ، 5 0 ميكروغرام / مل ECE ، 2.5 ميكروغرام / مل DK أو مثبط بواسطة النشاف الغربي. شريط المقياس=25 ميكرومتر. الوسائل التي يُشار إليها بحرف مختلف تشير إلى فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات (p <0.05). -="" تعني="" نفس="" المجموعة.="" اللجنة="" الاقتصادية="" لأوروبا="" ،="" مستخلص="" إكلونيا="" كافا="" ؛="" dk="" ،="" مدير="" ؛="" مثبط="" ،="" 1="" ميكرو="" مول="" لتر="">
2.4 خفضت ECE و DK من EMT في الكلى من SHRs
كان التعبير عن علامة الخلية الوسيطة ، مثل vimentin و -SMA ، من SHRs أعلى بكثير من فئران WKY وانخفض بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK (الشكل 4). كان التأثير المتناقص على تعبير الفيمنتين في قشرة SHRs الأكثر بروزًا في المجموعة التي عولجت بـ DK ، بينما كان التأثير المتناقص على تعبير الفيمنتين في النخاع من SHRs الأكثر بروزًا في المجموعة التي عولجت بـ 150 مجم / كجم / يوم ECE. علاوة على ذلك ، كان التأثير المتناقص على التعبير عن vimentin في قشرة SHRs هو الأبرز في المجموعة التي عولجت بـ DK (الشكل 4 أ ، ب). انخفض التعبير عن -SMA في القشرة والنخاع من SHRs بشكل ملحوظ في المجموعة التي عولجت بـ 150 مجم / كجم / يوم من ECE (الشكل 4 ج ، د). كان التعبير عن علامة الخلية الظهارية ، مثل E-cadherin ، في القشرة والنخاع من SHRs أقل بكثير من فئران WKY (الشكل S1) وزاد بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK.
الشكل 3. تحليل مقارن لإدارة ECE و DK بشأن الحد من التعبير عن TGF و SMAD2 / 3 و Snail2 فيالكلىمن SHRs. (أ) TGF ، (ب) SMAD2 ، (ج) SMAD3 ، (د) مستويات Snail2 mRNA في منطقة القشرة ، وفي لبالكلىتم قياسها عن طريق تحليل qRT-PCR. تم إعطاء ثلاث جرعات من ECE (50 مجم / كجم / يوم ، 100 مجم / كجم / يوم و 150 مجم / كجم / يوم) عن طريق الفم لمدة 4 أسابيع و 2.5 مجم / كجم / يوم DK تم إعطاؤها أيضًا عن طريق الفم لمدة 4 أسابيع. (هـ) مستويات تعبير البروتين TGF و SMAD2 / 3 و pSMAD2 / 3 في خلايا TCMK المعالجة بالأنجيوتنسين II -1 (كلويتم قياس الخلايا الظهارية الأنبوبية) مع 5 ، 25 ، 5 0 ميكروغرام / مل ECE ، 2.5 ميكروغرام / مل DK أو مثبط بواسطة النشاف الغربي و (و) تم قياس مستويات البروتين بواسطة برنامج Image J. الوسائل التي يُشار إليها بحرف مختلف تشير إلى فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات (P <0.05). -="" تعني="" نفس="" المجموعة.="" اللجنة="" الاقتصادية="" لأوروبا="" ،="" مستخلص="" إكلونيا="" كافا="" ؛="" dk="" ،="" مدير="" ؛="" مثبط="" ،="" 1="" ميكرو="" مول="" لتر="">
الشكل 4. تحليل مقارن لإدارة ECE و DK على الحد من EMT فيالكلىمن SHRs. (أ) مستويات التعبير عن بروتين Vimentin في منطقة القشرة ، وفي لبالكلىتم قياسها بواسطة الكيمياء المناعية و (ب) تم قياس مستويات البروتين بواسطة برنامج Image J. (ج) - تم قياس مستويات التعبير عن بروتين SMA في منطقة القشرة ، وفي قلب الكلى عن طريق الكيمياء المناعية و (د) تم قياس مستويات البروتين بواسطة برنامج Image J. شريط المقياس=25 ميكرومتر. تم تناول ثلاث جرعات من ECE (5 0 مجم / كجم / يوم ، و 100 مجم / كجم / يوم و 150 مجم / كجم / يوم) عن طريق الفم لمدة 4 أسابيع و 2.5 مجم / كجم / يوم DK عن طريق الفم أيضًا لمدة 4 أسابيع. الوسائل التي يُشار إليها بحرف مختلف تشير إلى فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات (P <0.05). -="" تعني="" نفس="" المجموعة.="" اللجنة="" الاقتصادية="" لأوروبا="" ،="" مستخلص="" إكلونيا="" كافا="" ؛="" dk="" ،="">
2.5 يقلل ECE و DK من التليف الكلوي والتصلب الكبيبي في الكلى من SHRs
منطقة التليف في القشرة والنخاع منالكلىمن SHRs أعلى بكثير من الفئران WKY (الشكل 5 أ ، ب) وانخفضت بشكل كبير عن طريق إدارة إما ECE أو DK. لوحظ التأثير المتناقص الأبرز في القشرة في المجموعة المعالجة بـ DK ، بينما في النخاع ، لوحظ التأثير المتناقص الأبرز في المجموعة المعالجة بـ 150 مجم / كجم / يوم من ECE. كانت GSI لـ SHRs أعلى بكثير من الفئران WKY (الشكل 5 ج ، د) وانخفضت بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK. علاوة على ذلك ، لوحظ التأثير المتناقص الأبرز في المجموعة التي عولجت بـ DK.
الشكل 5. تحليل مقارن لإدارة اللجنة الاقتصادية لأوروبا و DK على الحد منكلويالتليف والتصلب الكبيبي فيالكلىمن SHRs. (أ) منطقة قشرة ماسون الملطخة بثلاث ألوان ومنطقة النخاع في أالكلىتظهر منطقة التليف (اللون الأزرق) و (ب) منطقة التليف تم قياسها بواسطة برنامج Image J. (ج) منطقة القشرة الملطخة بـ PAS ومنطقة النخاع في أالكلىيوضح التصلب الكبيبي و (د) تم تقييم التصلب باستخدام طريقة التسجيل شبه الكمي (الدرجات 0 - 4). شريط المقياس=25 ميكرومتر. تم تناول ثلاث جرعات من ECE (5 0 مجم / كجم / يوم ، و 100 مجم / كجم / يوم و 150 مجم / كجم / يوم) عن طريق الفم لمدة 4 أسابيع و 2.5 مجم / كجم / يوم من DK تم إعطاؤه عن طريق الفم أيضًا لمدة 4 أسابيع. الوسائل التي يُشار إليها بحرف مختلف تشير إلى فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات (P <0.05). -="" تعني="" نفس="" المجموعة.="" اللجنة="" الاقتصادية="" لأوروبا="" ،="" مستخلص="" إكلونيا="" كافا="" ؛="" dk="" ،="" مدير="" ؛="" gsi="" ؛="" مؤشر="" تصلب="">
2.6. ECE و DK يضعفان من تفاقم وظائف الكلى في SHRs
لم تكن كمية الماء المتناولة خلال 24 ساعة مختلفة بشكل كبير بين جميع المجموعات (الشكل 6 أ). كان حجم البول من SHRs خلال 24 ساعة أقل بكثير من حجم فئران WKY (الشكل 6 ب). تمت زيادته بشكل كبير عن طريق إعطاء 100 و 150 ملغم / كغم / يوم من ECE و DK. لم تكن نسبة الصوديوم في البول / البوتاسيوم (Na / K) مختلفة بشكل كبير بين جميع المجموعات (الشكل 6 ج). كان مستوى الألبومين في بول SHRs أعلى بكثير من مستوى فئران WKY وانخفض بشكل كبير عن طريق إعطاء ECE أو DK. لم تكن التأثيرات المتناقصة لـ 50 و 100 و 150 ملغم / كغم / يوم من ECE و DK مختلفة بشكل كبير (الشكل 6 د). كانت نسبة الألبومين في البول / الكرياتينين في SHRs أعلى بكثير من نسبة فئران WKY وانخفضت عن طريق إعطاء ECE أو DK. لم تكن التأثيرات المتناقصة لـ 50 و 100 مغ / كغ / يوم من ECE و DK مختلفة بشكل كبير (الشكل 6 هـ).
الشكل 6. تحليل مقارن لإدارة اللجنة الاقتصادية لأوروبا و DK على التوهينوظيفة الكلىتفاقم في SHRs. (أ) استهلاك الماء ، (ب) حجم البول ، (ج) نسبة الصوديوم / البوتاسيوم في البول ، (د) مستوى الألبومين المجهري في البول ، (هـ) تم قياس نسبة الألبومين إلى الكرياتينين في البول (UACR) قبل التضحية. تم تناول ثلاث جرعات من ECE (5 0 مجم / كجم / يوم ، و 100 مجم / كجم / يوم و 150 مجم / كجم / يوم) عن طريق الفم لمدة 4 أسابيع و 2.5 مجم / كجم / يوم من DK تم إعطاؤه أيضًا عن طريق الفم لمدة 4 أسابيع. الوسائل التي يُشار إليها بحرف مختلف تشير إلى فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات (P <0.05). -="" تعني="" نفس="" المجموعة.="" اللجنة="" الاقتصادية="" لأوروبا="" ،="" مستخلص="" إكلونيا="" كافا="" ؛="" dk="" ،="" مدير="" ؛="" ns="" ،="" ليس="">
3. مناقشة
ارتفاع ضغط الدم هو السبب الرئيسي الثاني للداء الكلوي بمراحله الأخيرة بعد مرض السكري [21]. من الصعب توقع شدة ارتفاع ضغط الدمكلويتليف مع BP ، منذ ذلك الحينكلوييمكن أن يتطور التليف بشدة حتى عندما لا يكون ضغط الدم لدى المريض مرتفعًا للغاية [21]. على الرغم من أن العلاجات الخافضة للضغط باستخدام مثبطات الإنزيم المحول للأنجيوتنسين ، مثل حاصرات مستقبلات الأنجيوتنسين ومثبطات الرينين ومضادات الألدوستيرون ، يمكن أن تقلل من شدة ارتفاع ضغط الدممرض كلوي، فهي لا تكفي لمنع تطور اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم [22]. على الرغم من تحقيق هدف BP المستهدف عند أقل من 130/80 مم زئبق ، فإن استراتيجية العلاج لتقليل ضغط الدم لا يمكن أن تؤخر تطور اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم [23]. على الرغم من أن اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم يُوصف عادةً على أنه تصلب الأوعية الكلوية والتضخم الكبيبي [24،25] ، إلا أنه تم الكشف مؤخرًا عن أن خلالي الكلى ، الذي يشارك في TIF ، مرتبط بتطور المرض ، وكذلك الأجزاء الكبيبية والأوعية الدموية [ 26،27]. نظرًا لأن TIF هو الفيزيولوجيا المرضية الرئيسية لاعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم ، فمن الضروري تطوير عوامل جديدة موجهة لتعديل TIF لمنع تطور اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم. في السنوات الأخيرة ، عُرفت EMT كلاعب أساسي فيكلويتليف [28،29].
يسبب Ang II تضيق الأوعية وبالتالي يؤدي إلى ارتفاع ضغط الدم [30]. في ارتفاع ضغط الدم ، يتم تنشيط RAAS بشكل منهجي ، ويصاحب تنظيم RAAS في العديد من الأجهزة ، مثلالكلى[31،32]. يعتبر فرط نشاط RAAS داخل الكلى آلية مهمة لارتفاع ضغط الدم والمزمنمرض كلوي[31،32]. كل من TGF 1 و Ang II يحفزان تنشيط RAAS داخل الكلى ويعززان تعبيرات مولد الأنجيوتنسين ، الرينين ، ACE ، و AT1R ، والتي تحفز EMT [33]. في دراستنا ، انخفض ضغط الدم الانقباضي لـ SHRs بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK. انخفض مستوى مصل Ang II من SHRs بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK. تم تقليل التعبير عن AT1R في القشرة المخية ولب من SHRs بشكل كبير عن طريق إدارة ECE أو DK.
يؤدي تنظيم RAAS ، مثل زيادة التعبير عن AT1R ، إلى تنشيط مسار الإشارة السفلية لـ TGF 1 [34]. تم تنشيطه بواسطة RAAS ، TGF 1 يحفز EMT عبر المسارات المعتمدة على SMAD والمستقلة عن SMAD [33]. كمسار إشارات يعتمد على SMAD ، يتم تحويل إشارات TGF 1 عبر TGF RII و TGF RI وتؤدي إلى تنشيط SMAD2 / 3. [10]. يرتبط SMAD4 بـ SMAD2 / 3 ويعزز انتقال مجمع SMAD إلى النواة [10]. تنظم SMADs المنقولة تعبيرات جينات EMT ، مثل Snail و Twist و ZEB [34]. في دراستنا ، كان التعبير عن AT1R أعلى بشكل ملحوظ في القشرة والنخاع من SHRs من تلك الموجودة في فئران WKY ، وانخفض عن طريق إدارة ECE أو DK. تم تقليل التعبير عن TGF و SMAD2 / 3 في القشرة والنخاع من SHRs عن طريق إدارة ECE أو DK.
سيحسن القسطرة من التهاب الكلى / التهاب الجلد
يتميز EMT بفقدان الواسم الظهاري ، مثل E-cadherin ، والحصول على علامات اللحمة المتوسطة ، مثل -SMA ، والفيمنتين ، والفيبرونيكتين [35]. E-cadherin هو أكثر كادرين معبرًا في الخلايا الظهارية ، وبالتالي ، كثيرًا ما يستخدم كعلامة ظهارية [36]. -SMA هي علامة نمطية لخلايا الأرومة الليفية العضلية ، وتعبيرها هو سمة من سمات المراحل المتقدمة من EMT [37]. - الخلايا الليفية العضلية التي تعبر عن SMA ، والتي تخضع لـ EMT ، تحفز تخليق ECM المفرط وإعادة تشكيل ECM غير الطبيعي وكلويتليف [37]. يؤدي اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم إلى تصلب الكبيبات والتليف الخلالي ، مما يؤدي إلى انخفاض فيوظيفة الكلىوبِيلَة بروتينية كبيرة [6]. في دراستنا ، تم زيادة التعبير عن vimentin و -SMA في النخاع والقشرة من SHRs وانخفض عن طريق إعطاء ECE أو DK. تمت زيادة مساحة التليف في النخاع والقشرة من SHRs ، وتم تقليلها عن طريق إعطاء ECE أو DK. تمت زيادة مؤشر التصلب الكبيبي لـ SHRs ، وانخفض عن طريق إعطاء ECE أو DK.
انخفض حجم البول من SHRs بشكل تدريجي مقارنة مع فئران WKY من نفس العمر [38]. من المعروف أنه كلما زاد إفراز الصوديوم في البول ، قل إفراز البوتاسيوم في البول. علاوة على ذلك ، في الدراسات البشرية ، ترتبط نسبة Na / K في البول بزيادة في BP والضعف السريع لـوظيفة الكلى[39]. في دراستنا ، كان حجم البول من SHRs أقل من حجم فئران WKY ، على الرغم من أن كمية الماء لم تكن مختلفة بين فئران SHR و WKY. كانت نسبة Na / K في البول في SHRs مختلفة بشكل كبير بين فئران WKY و SHRs و ECE- أو DK. تم استخدام نسبة Na / K في البول كعلامة على تناول الصوديوم والبوتاسيوم في الغذاء في الدراسات البشرية [39]. زاد ضغط الدم مع زيادة تناول الصوديوم. ومع ذلك ، أدت زيادة تناول البوتاسيوم إلى انخفاض ضغط الدم عن طريق زيادة إفراز الصوديوم في البول [40]. لذلك ، ترتبط نسبة Na / K في البول مع BP في البشر [40]. في دراستنا ، لم تتغذى جميع الحيوانات بنظام غذائي عالي الصوديوم ، وهو ما يفسر عدم ظهور أي فرق كبير في نسبة الصوديوم / البوتاسيوم في البول بين المجموعات. يميل ارتفاع ضغط الدم إلى زيادة البيلة البروتينية [37]. من المعروف أن نسبة الألبومين في البول إلى الكرياتينين ترتبط بانخفاض معدل الترشيح الكبيبي [41]. أظهرت الدراسات السابقة أن تطور البيلة الألبومينية الزهيدة في SHRs ناتج عن إصابة أنبوبية سائدة ، مما يؤدي إلى فقدان البول للبروتينات ذات الوزن الجزيئي المنخفض [42،43]. في دراستنا ، كانت نسبة الألبومين إلى الكرياتينين في البول أعلى من نسبة فئران WKY ، وانخفضت عن طريق إعطاء ECE أو DK
أظهرت الدراسات السابقة أن العديد من مادة البوليفينول لها تأثير مثبط على نشاط الإنزيم المحول للأنجيوتنسين [14-17]. ومع ذلك ، فإن هذه الدراسات أبلغت فقط عن النشاط المثبط للإنزيم المحول للأنجيوتنسين كقيمة IC50 ، وهو تركيز تثبيط بنسبة 50 في المائة للتحكم الإيجابي ، ولم تظهر تأثيرًا خافضًا للضغط أو تأثيرًا وقائيًا ضد اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم في الحيوانات. أظهرت إحدى الدراسات أن ECE خفضت BP في 2-الكلى1- قص فئران غولدبلات المصابة بارتفاع ضغط الدم [44]. Pyrogallol-phloroglucinol -6 ، 6- bieckol قلل من ضغط الدم في النموذج الحيواني لارتفاع ضغط الدم الناجم عن النظام الغذائي عالي الدهون عن طريق تعديل الخلل في الأوعية الدموية [45]. ومع ذلك ، أظهرت هذه الدراسات انخفاض ضغط الدم فقط ولم تقيِّم ما إذا كانت ECE أظهرت أي تأثير لتوهين اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم. أظهرت دراستنا أن ECE و DK قللت من التعبير عن AT1R / TGF / SMAD2 / 3 فيالكلىوخفض مستوى المصل من Ang II. بالإضافة إلى ذلك ، خفضت ECE و DK EMT ،كلويالتليف والتصلب الكبيبي. يبدو أن ECE و DK قد يكونان مفيدان في تخفيف اعتلال الكلية الناتج عن ارتفاع ضغط الدم
4. المواد والطرق
4.1 إعداد ECE وعزل DK
تم الحصول على شهادة ECE من شركة Aqua Green Technology Co.، Ltd. (جيجو ، كوريا). تم غسل E. cava جيدًا بالماء النقي والتجفيف بالهواء عند درجة حرارة الغرفة لمدة 48 ساعة. تم طحنه ، وأضيف 50 بالمائة من الإيثانول ، متبوعًا بالتسخين عند 85 درجة مئوية لمدة 12 ساعة. تم ترشيح ECE ثم ، عند التركيز ، تعقيمها بالتسخين عند درجة حرارة عالية لمدة 40-60 دقيقة ثم تجفيفها بالرش. بعد ذلك تم عزل المخرج ، وهو أحد الممثلين للفلوروتانين لـ E. cava. باختصار ، تم إجراء كروماتوجرافيا التقسيم بالطرد المركزي باستخدام نظام مذيب ثنائي الطور يخلط الماء النقي ، أسيتات الإيثيل ، n- هكسان ، وخليط ميثانول (نسبة 7: 7: 2: 3). تم تحقيق المرحلة الثابتة العضوية في العمود وتم استيفاء الطور المتحرك في العمود ، باتباع الترتيب التنازلي لمعدل زميل (2 مل في الدقيقة) وتم استخدامه للفصل. اتبعنا أساليب الدكتور سون وآخرون. (2019) [45].
سيحسن الكستانش الفشل الكلوي / الفشل الكلوي
4.2 نموذج حيواني ارتفاع ضغط الدم
تم شراء ذكور SHRs (بعمر 8 أسابيع) وذكور فئران WKY (بعمر 8 أسابيع) من Orient Bio (Sungnam ، كوريا) وتم الاحتفاظ بها في درجة حرارة ثابتة تبلغ حوالي 24 درجة مئوية ، ورطوبة نسبية 50-55٪ ، وضوء / دورة مظلمة 12 ساعة / 12 ساعة. تم إجراء تسامي الفئران لمدة أسبوع واحد. تم تقسيم الفئران بشكل عشوائي إلى ست مجموعات (خمسة فئران لكل مجموعة): (1) مجموعة WKY ، حيث تم تناول الفئران عن طريق الفم بماء الشرب لمدة 4 أسابيع. (2) مجموعة SHR ، حيث تم إعطاء الفئران عن طريق الفم بمياه الشرب لمدة 4 أسابيع ؛ (3 - 5) مجموعة SHR ، حيث تم إعطاء الفئران عن طريق الفم بـ ECE (3) 50 مجم / كجم / يوم ، (4) 100 مجم / كجم / يوم ، و (5) 150 مجم / كجم / يوم لمدة 4 أسابيع. (6) مجموعة SHR ، حيث تم تناول الفئران عن طريق الفم بـ 2.5 مجم / كجم / يوم DK لمدة 4 أسابيع. بعد 4 أسابيع ، تم التحقق من صحة استهلاك الماء وحجم البول والتحليل الكيميائي للبول باستخدام القفص الأيضي لمدة 24 ساعة. بعد الانتهاء من تحليل التمثيل الغذائي ، تم التضحية بجميع الفئران وفقًا للمبادئ الأخلاقية للجنة رعاية الحيوان المؤسسية واستخدامها في جامعة جاتشون (رقم الموافقة: LCDI -2019-0121).
4.3 المناعية
أنسجة الكلىتم قطع كتل البارافين عند 8 ميكرومتر ، ووضعها على شرائح مطلية بالجيلاتين ، وتجفيفها عند 37 درجة مئوية لمدة 3 أيام. الالكلىتمت إزالة الكافيين من شرائح الأنسجة ثم حضنتها بـ 0. 3 في المائة من بيروكسيد الهيدروجين (سيغما ألدريتش ، مو ، الولايات المتحدة الأمريكية) لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، تم شطف الشرائح ثلاث مرات بمحلول ملحي مخزّن بالفوسفات (PBS) ، وحضنت بمصل حيواني لتثبيط الارتباط غير المحدد بالأجسام المضادة. علاوة على ذلك ، تم تحضينهم بالأجسام المضادة الأولية (مضادات AT1R ، ومضاد E-cadherin ، ومضاد - - SMA ، ومضاد الفيمنتين) وشطفهم ببرنامج تلفزيوني ثلاث مرات. تم تحضين شرائح الأنسجة بعد ذلك بالأجسام المضادة الثانوية المعالجة بيوتينيل من مجموعة ABC (Vector Laboratories ، Burlingame ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وحضنت لمدة 3 ساعات بمحلول مانع ، وشطفها بـ PBS ثلاث مرات. تم تطوير شرائح الأنسجة باستخدام 3 ، 3- ديامينوبنزيدين كركيزة لمدة 3 دقائق ، مثبتة بمحلول DPX القائم على الزيلين (Sigma-Aldrich) ، وتم تصورها عبر المجهر الضوئي (شركة أوليمبوس الضوئية ، طوكيو ، اليابان) .
4.4. استخراج الحمض النووي الريبي والتفاعل الكمي في الوقت الحقيقي للبوليميراز المتسلسل (qRT-PCR)
الحمض النووي الريبي من الفئرانالكلىتم عزل الأنسجة باستخدام كاشف RNAiso Plus (TAKARA ، اليابان) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. الالكلىتم تقسيم الأنسجة أولاً إلى قسمين ، وهما جزء القشرة والجزء النخاعي. تم تقطيع أنسجة الكلى جيدًا وسحقها إلى مسحوق ، وتم إعادة تعليق المساحيق بـ 1 مل من كاشف RNAiso Plus ، ممزوجًا بـ 0. 1 مل من الكلوروفورم النقي (Amresco ، Solon ، OH ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، ثم بالطرد المركزي عند 13 ، 000 × جم لمدة 2 0 دقيقة عند 4 درجات مئوية. بعد الطرد المركزي ، تم خلط المادة الطافية مع 0.25 مل من كحول الأيزوبروبيل النقي ، وغسلت كريات الحمض النووي الريبي المستخرجة مع 70 بالمائة من الكحول وطردت عند 7500 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. تم إذابة الكريات المجففة في 10-30 ميكرولتر من الماء النقي المعالج ثنائي إيثيل البيروكربونات ، وتم قياس كمية الحمض النووي الريبي وفحصه باستخدام NanoDrop 2000 (Thermo Fisher Scientific ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تحضير الحمض النووي التكميلي (cDNA) من الحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة توليف (كدنا) (PrimeScript ™ ، TAKARA). حدد تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR) مستويات الحمض النووي الريبي منالكلىمناديل. تم خلط البادئات الأمامية والخلفية بالماء المقطر ، ثم تم وضع 10 ميكرولتر من الخلائط في 384- صفيحة qRT-PCR جيدة. تمت إضافة cDNA و SYBR green (TAKARA) لاحقًا ثم التحقق من صحتها باستخدام آلة qRT-PCR (Bio-Rad ، Hercules ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية). يتم سرد الجينات ذات الأهمية في الجدول التكميلي S1. اتبعنا أساليب الدكتور سون وآخرون. 2019 [45].
4.5 مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)
لتأكيد مستوى Ang II في المصل ، تمت إضافة قسمة من الدم المسحوب (1.5 إلى 1.7 مل) في أنابيب فاصل المصل (Becton Dickinson ، Franklin Lakes ، NJ ، الولايات المتحدة الأمريكية) ثم طردها عند 2000 × جم لمدة 20 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة . بعد ذلك ، تم نقل المصل المنفصل إلى أنبوب جديد وتخزينه في ثلاجة عميقة. تم استخدام مجموعة Ang II ELISA (MyBioSource ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) لتحليل وجود المصل وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تم قياس Ang II في غضون أسبوع واحد بعد جمع الدم من الحيوانات.
4.6 التحليل النسيجي
4.6.1. صبغة ماسون ثلاثية الكروم (MT)
تحقق صبغة ماسون ثلاثية الألوان (MT) من صحة تليفالكلى.كتل من البارافين جزءا لا يتجزأالكلىتم تقطيع الأنسجة إلى سمك 8 ميكرومتر ، ووضعها على شريحة طلاء ، وتجفيفها عند 37 درجة مئوية لمدة 3 أيام. تم إزالة شرائح الأنسجة بالزيلين والكحول وتم إعادة تثبيتها بمحلول بوين لمدة 24 ساعة وشطفها بماء الصنبور الجاري لمدة 3 دقائق. تم غمر الشرائح بمحلول الهيماتوكسيلين الحديدي من Weigert لمدة 10 دقائق ومحلول Biebrich Scarlet-acid fuchsin لمدة 15 دقيقة ثم تم التمييز بينها بمحلول phosphomolybdic-phosphotungstic acid لمدة 10 دقائق. أخيرًا ، تم نقل الشرائح إلى محلول الأنيلين الأزرق لمدة 3 دقائق ثم غسلها بالماء. تم تركيب الشرائح الملطخة بمحلول DPX القائم على الزيلين (Sigma-Aldrich) وتم تصورها عبر الفحص المجهري الضوئي (أوليمبوس). تظهر ألياف الكولاجين باللون الأزرق في منطقة التليف ، في حين أنكلوييبدو أن الظهارة حمراء اللون. تم قياس مناطق التليف الملون MT باستخدام برنامج ImageJ. تم تحويل الصور الأصلية للكلية الملطخة بـ MT إلى صور RGB ، ثم تم تفكيك هذه الصور باستخدام برنامج ImageJ باستخدام المكون الإضافي لفك اللون.
4.6.2. صبغة حمض الدوري - شيف (باس)
أثبتت صبغة حمض-شيف الدورية (PAS) الضرر الكبيبيالكلى. كتل من البارافين جزءا لا يتجزأالكلىتم تقطيع الأنسجة إلى سمك 8 ميكرومتر ، ووضعها على شريحة طلاء ، وتجفيفها عند 37 درجة مئوية لمدة 3 أيام. تمت إزالة الكافيين من شرائح الأنسجة باستخدام زيلين وكحول ، وترطيبها بالماء ، وأكسدتها باستخدام محلول حمض دوري بنسبة 5 في المائة لمدة 5 دقائق ، وغسلها بالماء. تم غمر الشرائح بكاشف شيف لمدة 15 دقيقة ثم غسلها بماء الصنبور الفاتر لمدة 5 دقائق. أخيرًا ، تم نقل الشرائح إلى محلول ماير الهيماتوكسيلين لمدة دقيقة واحدة ثم غسلها بالماء. تم تركيب الشرائح الملطخة بمحلول DPX القائم على الزيلين (Sigma-Aldrich) وتم تصورها عبر الفحص المجهري الضوئي (أوليمبوس).
تم اختيار الكبيبات بشكل عشوائي ، وتم تقييم الضرر الكبيبي باستخدام طريقة التسجيل شبه الكمي (الدرجات 0 - 4) باستخدام ملطخة PASالكلىشرائح الأنسجة.
(1) الدرجة 0: الكبيبات الطبيعية. (2) الدرجة 1: التصلب البسيط (منطقة تصلب تصل إلى 25 في المائة) ؛ (3) الدرجة الثانية: تصلب متوسط (منطقة تصلب الأنسجة 25 في المئة إلى 5 0 في المئة) ؛ (4) الدرجة 3: تصلب متوسط إلى شديد (تصلب المنطقة 50٪ إلى 75٪). (5) الدرجة 4: تصلب شديد (منطقة تصلب 75 في المئة إلى 100 في المئة) ؛ تم حساب مؤشر التصلب الكبيبي (GSI) باستخدام المعادلة التالية: (4 × ن 4) زائد (3 × ن 3) زائد (2 × ن 2) زائد (1 × ن 1) / ن 4 زائد ن 3 زائد ن 2 زائد ن 1 زائد ن 0 ، حيث ن ( x) هو رقمكلويالتصلب الكبيبي في كل درجة [46]. تم إجراء هذا التحليل في مجموعات العلاج بواسطة مراقب مقنع.
4.7 ضغط الدم الانقباضي وضغط الدم الانبساطي وقياسات ضغط الدم الشرياني المتوسط
تم قياس BP الانقباضي ، و BP الانبساطي ، و BP الشرياني المتوسط باستخدام نظام الكفة الذيل غير الغازي CODA (Kent Scientific Corp. ، Torrington ، CT ، USA). تم إجراء تسامي الفئران لمدة 20 دقيقة لمدة 5 أيام ، وتم قياس ضغط الدم في اليوم الأخير.
4.8 النمذجة في المختبر باستخدام خلايا TCMK -1
تم شراء خلايا TCMK -1 ، وهي عبارة عن خط خلية نبيبي قريب من الماوس ، من American Type Culture Collection (واشنطن العاصمة ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم استخدام وسط نسر Dulbecco المعدل عالي الجلوكوز (Gibco ؛ Grand Island ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، 10 في المائة من مصل الأبقار الجنيني (FBS) و 1 في المائة من البنسلين - الستربتومايسين كوسائط استزراع. للتحقق من صحة التأثيرات المثبطة لـ ECE و DK في خلايا TCMK المعالجة بالأنجيوتنسين 2 -1 ، عالجنا ECE (5 ، 25 ، 50 ميكروغرام / مل) و DK (1.8 ميكروغرام / مل) مع 100 نانومول / لتر أنجيوتنسين II (Sigma-Aldrich، St Louis، MO، USA) لمدة 12 ساعة. تم استخدام Telmisartan (1 ميكرو مول / لتر ، Sigma-Aldrich) لمضاد مستقبلات AT1 وتمت معالجته مسبقًا قبل أنجيوتنسين II لمدة 3 ساعات [47].
سيحسن الكستانش من آلام الكلى / الكلى
4.9 تحضير البروتين والنشاف الغربي
لعزل البروتين من خلايا TCMK المعالجة بالأنجيوتنسين 2 -1 ، تم كشط الخلايا باستخدام محلول تحلل RIPA مع مثبطات الفوسفاتاز والبروتيناز (EzRIPA ؛ ATTO ؛ طوكيو ، اليابان) واحتضانها على الجليد لمدة 2 0 دقيقة. بعد الطرد المركزي عند 13 ، 000 × جم لمدة 20 دقيقة ، عند 4 درجات مئوية ، تم نقل المواد الطافية النظيفة إلى أنبوب جديد وتم تحليل تركيز المواد الطافية باستخدام مجموعة فحص حمض البيسينشونين (مجموعة BCA ؛ Thermo Fisher Scientifific ، المؤتمر الوطني العراقي ؛ والثام ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية). للتحقق من صحة تعبير البروتين من خلايا TCMK -1 ، تم إجراء النشاف. تم فصل كمية متساوية من بروتينات المحللة (30 ميكروغرام / ممر) بنسبة 10 في المائة من هلام دوديسيل كبريتات - بولي أكريلاميد باستخدام الرحلان الكهربائي. بعد ذلك ، تم نقل البروتينات الجارية إلى أغشية فلوريد البولي فينيلدين ، والتي تم تحضينها بأجسام مضادة أولية مخففة (مضاد - - أكتين ، AGTR1 ، TGF- ، SMAD2 / 3 و pSMAD2 / 3) عند 4 درجات مئوية. تم غسل الأغشية المحتضنة مع الأجسام المضادة جيدًا باستخدام محلول ملحي مخزّن من Tris مع 0.1 بالمائة من Tween 20 وحضنت بأجسام مضادة ثانوية لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. تم تطوير جميع الأغشية بواسطة التلألؤ الكيميائي المحسن (LAS -4000 s ؛ GE Healthcare ، Chicago ، IL ، USA). يمكن العثور على معلومات الأجسام المضادة المستخدمة في هذه الدراسة في الجدول S2.
4.10. تحليل احصائي
يتم تقديم النتائج على أنها متوسط ± SD ، وقيم p لـ<0.05 mean="" it="" is="" statistically="" significant.="" the="" kruskal–wallis="" test="" was="" used="" to="" validate="" the="" differences="" among="" the="" groups,="" and="" the="" mann–whitney="" u="" test="" was="" used="" in="" the="" spss="" ver.="" 22="" software="" (ibm="" corporation;="" ny,="" armonk,="" usa)="" completed="" post="" hoc="" comparisons.="" means="" denoted="" by="" a="" different="" letter="" indicate="" significant="" differences="" between="">
5. الاستنتاجات
في الختام ، تم تنظيم AT1R في SHRs ، وزاد مسار الإشارة TGF و SMAD2 أو 3 ، مما تسبب في EMT. قام إما ECE أو DK بخفض تنظيم مسار الإشارة وخفض EMT. لذلك ، قلل ECE أو DK من علامات الخلايا اللحمية المتوسطة مثل التعبير عن vimentin و -SMA ، الأنسجة الليفية فيالكلى، ونسبة البول الزلال / الكرياتينين الموهن EMT. بالإضافة إلى،كلويأدى التليف إلى استعادةوظيفة الكلى(الشكل 7).
