Beta Vulgaris Rubra L. (الشمندر) مستخلص قشر الميثانول يقلل من الإجهاد التأكسدي ويحفز تكاثر الخلايا عن طريق زيادة تعبير VEGF في H2O2 المستحث بأكسدة الخلايا البطانية للوريد السري البشري المجهد

الرجاء التواصلoscar.xiao@wecistanche.comلمعرفة المزيد

ليلى نايف الحربي 1 * ، سوبش بابو باندورانجان 1 ، الهنوف محمد الدوسري 1 ، غالية شملان 1 ، احمد محمد سلمة الله 1 ، علي عبد الشطوي 1 ، آمنة عبد الله العتيبي 2

الملخص:القدرة المضادة للأكسدة من مادة البوليفينول ومركبات الفلافونويدالموجود في العوامل الغذائية يساعد في وقف تطور أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) وحماية خلايا العضلات الملساء البطانية من الإجهاد التأكسدي / النخر المستحث. الشمندر (Beta vulgaris var. Rubra L .؛ BVr) هو نبات شائع الاستهلاك ويمثل مصدرًا غنيًامضادات الأكسدة. لا تزال المركبات النشطة بيولوجيًا لقشر الشمندر ودورها في الخلايا البطانية للوريد السري البشري (HUVECs) قيد البحث. في هذه الدراسة ، تم تحضير مستخلص الميثانول لقشر الشمندر (BPME) ، وتأثيره على الفعالية الحيوية ، والسلامة النووية ، وإمكانات غشاء الميتوكوندريا ، ونمو الخلايا الوعائية ، ومستويات التعبير الجيني المرتبطة بالتنظيم المناعي في HUVECs مع المستحثة.مؤكسدتم تحليل الضغط. أكدت نتائج التحليل الطيفي للكتلة اللونية للغاز (GC-MS) أن BPME يحتوي على 5- hydroxymethylfurfural (32.6 بالمائة) ، و methyl pyruvate (15.13 بالمائة) ، و furfural (9.98 بالمائة) ، و 2 ، 3- dihydro {11} } ، 5- ثنائي هيدروكسي -6- ميثيل -4 H-Pyran -4- واحد (12.4 بالمائة). عزز مستخلص BPM تكاثر الخلايا بشكل فعال وتم تأكيده بواسطة فحص MTT ؛ تم تأكيد السلامة النووية بواسطة مقايسة تلطيخ بروبيديوم يوديد (PI) ؛ تم تأكيد إمكانات غشاء الميتوكوندريا (m) بواسطة مقايسة تلطيخ JC -1. أكد اختبار Annexin V أن HUVECs المعالج بـ BPME أظهر 99 في المائة من الخلايا القابلة للحياة ، ولكن تم إظهار 39.8 في المائة فقط من الصلاحية في HUVECs المعالجة بـ H2O2 وحده. بالإضافة إلى ذلك ، أدت معالجة BPME لـ HUVECs لمدة 48 ساعة إلى تقليل تعبير mRNA من بيروكسيد الدهون (LPO) وزيادة NOS -3 ، Nrf -2 ، GSK -3 ، GPX ، سينثاز أكسيد النيتريك البطاني (eNOS ) ، ومستويات التعبير مرنا لعامل نمو الخلايا الوعائية (VEGF). وجدنا أن علاج BPME يقلل من الالتهابات (العامل النووي κ (F-κ) ، عامل نخر الأنسجة (TNF-) ، المستقبلات الشبيهة بالحصيلة -4 (TLR -4) ، الإنترلوكين {{37} } (IL -1)) والأوعية الدمويةاشتعال(جزيء الالتصاق داخل الخلايا (ICAM) ، وجزيء التصاق الخلايا الوعائية (VCAM) ، و EDN1 ، و IL -1) ذات الصلة بتعبيرات الرنا المرسال. في الختام ، أدى علاج قشر الشمندر بشكل فعال إلى زيادة عوامل نمو الخلايا الملساء للأوعية الدموية وتطور الأنابيب الدقيقة ، بينما قلل من منظمات الالتهابات الوعائية. قد يكون BPM مفيدًا لتجديد الخلايا الملساء للأوعية الدموية ، وإصلاح الأنسجة ، ومكافحة الشيخوخة المحتملة.

الكلمات الدالة:جذور الشمندر؛ الاكسدة؛ الميتوكوندريا؛ تولد الأوعية. اشتعال

الرجاء الضغط هنا لمعرفة المزيد

1 المقدمة

تولد الأوعية هو العملية الفسيولوجية لتكوين الأوعية الدموية من الأوعية الدموية الموجودة في الجسم [1]. إنه ضروري ليس فقط للتطور الجنيني والتكاثر ولكن أيضًا لدورة الخلية وإصلاح الأنسجة [2،3]. ومع ذلك ، فهو يرتبط بإمراضية أمراض مختلفة ، مثل نمو الورم والتهاب المفاصل الروماتويدي وأمراض نقص تروية والتهابات مختلفة [3-5]. تلعب البطانة الوعائية دورًا مهمًا في الحفاظ على الإرقاء الوعائي من خلال تنظيم توتر الأوعية الدموية والتفاعلات المناعية والالتهابية [6،7]. الخلايا البطانية (ECs) هي طبقات رقيقة أحادية الخلية تبطن جميع الأسطح الداخلية للأوعية الدموية وتنتج مجموعة متنوعة من الجزيئات التي تعمل محليًا أو في مواقع بعيدة [7]. البطانة أمر أساسي لاستتباب الجسم ، وأي تغيير في استجابة خلايا البطانة يؤدي إلى الأحداث الأولية لعمليات الأمراض الالتهابية والأوعية الدموية ، مثل تصلب الشرايين وارتفاع ضغط الدم [6،8،9]. تسبب هذه الأمراض الإجهاد التأكسدي ، مما يغير بنية المفوضية الأوروبية وسلامة وظائفها ويؤدي إلى خلل وظيفي في البطانة [9]. تم استخدام الوريد السري البشري (HUVECs) على نطاق واسع كنموذج للدراسات المتعلقة ببطانة الأوعية الدموية البشرية. علاوة على ذلك ، فهي تمثل نموذجًا مفيدًا لدراسة المسارات البيولوجية الرئيسية المشاركة في وظيفة البطانة [10]. توجد المركبات النشطة بيولوجيًا والمواد الكيميائية النباتية بكثرة في الفاكهة ، والخضروات ، والأعشاب الخضراء ، والعديد من النباتات ، والتي تُظهر العديد من الفوائد الصحية ، مثل الخصائص المضادة للالتهابات ومضادات الأكسدة والمضادة للسرطان وتولد الأوعية [11-13]. في هذا الصدد ، ينتمي جذر الشمندر الأحمر (Beta vulgaris var. Rubra L .؛ BVr) إلى عائلة Amaranthaceae ويصنف كأحد أفضل المصادر لمستويات عالية من مضادات الأكسدة [14 ، 15]. على وجه التحديد ، يحتوي على العديد من المواد الكيميائية النباتية النشطة بيولوجيًا ، بما في ذلكbetalainsالفلافونويدالبوليفينول، والإنزيمات العلاجية ، وحمض الأسكوربيك ، وحمض ديهيدرو أسكوربيك (DHAA) ، ونترات غير عضوية (NO3) [16-18]. علاوة على ذلك ، فإنه يوفر العناصر الغذائية الأساسية القيمة ، مثل البوتاسيوم والكالسيوم والمغنيسيوم والصوديوم والحديد والزنك والفوسفور والنحاس والمنغنيز [19]. أفادت العديد من الدراسات أن مستخلص جذر الشمندر الأحمر (الجذر) له العديد من الآثار المفيدة بسبب خواصه الخافضة لسكر الدم ، وخفض الدهون ، ومضادة للالتهابات ، وخافضة للضغط ، ومضادة للتكاثر [20-22]. يمكن ربط كل هذه الخصائص المفيدة بقدرات المركبات النشطة بيولوجيًا على إزالة الجذور الحرة. وبالتالي ، فقد تم ربط استهلاك الشمندر الأحمر بالعديد من الفوائد الغذائية والصحية. نظرًا لقيمته الغذائية ، يمكن استخدامه كمصدر غذائي وظيفي ضد الضغوط المؤكسدة التي تسبب الأمراض الأيضية المزمنة ، مثل مرض السكري من النوع 2 وأمراض القلب والأوعية الدموية [23]. بناءً على مراجعة الأدبيات ، تمتلك Beta vulgaris خصائص قوية مضادة للأكسدة وتنظيم مناعي ووعائي. تم العثور على Apigenin في أوراق البنجر. له تأثيرات مضادة للتكاثر في خلايا الكبد والأمعاء ، ويمكن أن يحسن الأمراض المصاحبة للسمنة التي يسببها النظام الغذائي عالي الدهون عن طريق تنشيط AMPK [24،25]. حدد De Silva وآخرون (2020) [26] أن Beta vulgaris يحمي الأوعية الدموية من الإجهاد التأكسدي المستحث خارجيًا ، والذي قد يكون بسبب التأثير المشترك للعديد من المركبات النشطة بيولوجيًا الموجودة في هذا النبات. حتى الآن ، كان الإجراء الميكانيكي لانتشار EC وتأثير تولد الأوعية لقشر جذر Beta vulgaris قيد البحث. ومن ثم ، فإننا نهدف إلى إجراء الدراسة الحالية لفحص تكاثر الخلايا الوعائية ، وتطوير الأنابيب الدقيقة ، والإجهاد التأكسدي ، وقدرة تكوين الأوعية المرتبطة بقشر جذر Beta vulgaris باستخدام التشكل الخلوي وتحليل التعبير الجيني في HUVECs. يتم استكشاف التأثيرات الوعائية لمستخلص الميثانول من قشر الشمندر الأحمر المرتبطة بالسلامة النووية ، وتطوير الأنابيب الدقيقة ، وكفاءة الميتوكوندريا ، وتحفيز دورة الخلية في الأوعية الدموية البشرية.

2. المواد والأساليب

2.1. تحضير الشمندر(Beta vulgaris rubra L.) مستخلص الميثانول تم الحصول على عينات من جذر الشمندر الطازج (Beta vulgaris var. Rubra L .؛ BVr.) في البداية من متاجر الخضار ، الرياض ، المملكة العربية السعودية (المملكة العربية السعودية). تم غسل البنجر الطازج بالماء المقطر للتخلص من السيقان والملوثات. تم تقشير الجلد الخارجي لإزالته وتقطيعه إلى قطع صغيرة. تم تجفيف العينات في فرن يعمل بالهواء الساخن عند درجة حرارة 4 0 ◦ ثم طحنها إلى مسحوق باستخدام خلاط إلكتروني. بعد ذلك ، تم استخلاص 5 {{1 0} 0 جرام من المسحوق في زجاجة معقمة تحتوي على لتر واحد من الميثانول (سيجما ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية) لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة يوم شاكر وكرر ثلاث مرات. بعد ذلك ، تم استخدام Whatmanfifilter (Whatman ، Clifton ، NJ ، الولايات المتحدة الأمريكية) لتصفية المستخلص. أخيرًا ، عن طريق تقليل الضغط ، تم فصل المذيب عن المستخلص ، وتم جمع المستخلص كمادة جافة صلبة بعد تبخر الميثانول. تم تخزين العينة المستخلصة في الثلاجة عند 4 درجات مئوية لحين استخدامها مرة أخرى. 2.2. تحليل كروماتوغرافيا الغاز والتحليل الطيفي الكتلي تم حقن مستخلص الميثانول لقشر الشمندر (BPME) في عمود شعيرات السيليكا (3 0 م × {{6 {62}}}. 25 ملم معرف × 0 .25 ميكرون سمك الفيلم) من جهاز GC-MS (Agilent 689 0 N / 5973I ، كاليفورنيا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) مع كاشف انتقائي جماعي لاكتشاف التراكيب الكيميائية. تم ضبط درجة حرارة الجهاز على 7 {{9 0} درجة مئوية مبدئية ، مع الاحتفاظ بدقيقتين ، إلى 3 0 5 درجات مئوية عند 20 درجة مئوية / دقيقة ، متبوعًا بالضغط لمدة دقيقة واحدة. تم ضبط إجمالي وقت تشغيل GC على 45 دقيقة بغاز الهليوم (99.999 بالمائة) كغاز حامل (معدل زميل ثابت يبلغ 1.2 مل / دقيقة) ، و 250 درجة مئوية كدرجة حرارة الحاقن ، و 230 درجة مئوية كمصدر أيوني درجة الحرارة. بناءً على طيف GC-MS ، تم حساب النسبة المئوية النسبية للمكوِّن المقابل ، وتم تحديد أطياف الكتلة للمكوِّن غير المعروف من خلال المقارنة مع الأنماط المعروفة البالغ عددها 62 ، 000 والمتوفرة في المعهد الوطني للمعايير والتكنولوجيا مكتبة الكمبيوتر (NIST08). 2.3 تم شراء مواد استنبات الخلايا والمواد الكيميائية HUVECs من مجموعة الثقافة الأمريكية (ATCC ، Manassas ، VA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم الحصول على مواد استزراع الخلايا مثل Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) و EDTA و trypsin وغيرها من Gibco (بيزلي ، المملكة المتحدة). تم شراء البنسلين - الستربتومايسين (PS) ومصل الأبقار الجنيني (FBS) من مختبرات Hyclone ، الولايات المتحدة الأمريكية. تم الحصول على المواد الكيميائية المستخدمة في تجربة البيولوجيا الجزيئية من Sigma-Aldrich ، وخاصة MTT [3- (4 ، 5- ثنائي ميثيلثيازول -2- yl) -2 ، 5- diphenyltetrazolium bromide] و PI و JC -1 صبغة. تم الحصول على SYBR Green PCR Master Mix ومجموعة التوليف (كدنا) من Qiagen (هيلدن ، ألمانيا). 2.4 HUVECs HUVECs تم تربيتها في DMEM واستكملت بنسبة 1 في المائة PS و 10 في المائة من مجمع FBS. تم تحضين الخلايا في جو رطب عند 37 درجة مئوية ، و 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون ، وتم تربيتها مرة كل 3 أيام تقريبًا. 2.5 تمت تربية قابلية بقاء الخلية وتكاثر الخلايا بواسطة MTT Assay HUVECs (1 × 104 خلية / بئر) باستخدام وسط صيانة وسمح لها بالالتصاق طوال الليل في 96- لوحة استنبات جيد. بعد ذلك ، تم استبدال الوسط بوسط استزراع جديد يحتوي على تركيزات متزايدة من BPME (0 ، 0.05 ، 0.1 ، 0.2 ، 0.4 ، 0.8 ، 1.6 ، 3.2 ميكروغرام / مل) وفقًا لخريطة لوحة اختبار MTT واحتضانها لمدة 24 و 48. ح ؛ تم استخدام الخلايا غير المعالجة كعناصر تحكم. بعد فترة الحضانة ، تمت معالجة الخلايا التجريبية بـ 20 ميكرولتر / بئر من 5 مجم / مل من MTT (3- [4 ، 5- ثنائي ميثيل ثيازول -2- yl] -2 ، 5- بروميد ثنائي فينيل تيترازوليوم الذي تمت إذابته في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)) بالإضافة إلى حضنه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، تم التخلص من الوسط ، وتم إذابة الفورمازان الأرجواني المنتج في 100 ميكرولتر من 100 ٪ DMSO. تم قياس امتصاص المحلول باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية (Thermo Scientific ، Waltham ، MA ، USA) بطول موجة 570 نانومتر. تم حساب النسبة المئوية (النسبة المئوية) لتكاثر الخلايا بالمعادلة التالية: (امتصاص العينة / متوسط ​​الامتصاص لعنصر التحكم) × 100. 2.6. التصميم التجريبي وفقًا لاختبار تكاثر الخلايا الحالي ، أظهر التركيز المنخفض المختبر لـ BPME (0.1 و 0.2 ميكروغرام / مل) انتشار HUVECs ومورفولوجيا الأنابيب الدقيقة دون سمية. تم اختيار أحجام 0.1 و 0.2 ميكروغرام / مل من BPME ومعالجتها باستخدام HUVECs العادي و 10 ملي مولار من H2O 2- المستحث بالأكسدة المجهدة HUVEC لمدة 48 ساعة لتحديد تكاثر الخلايا وإمكانات مضادة للالتهابات وتولد الأوعية وموت الخلايا المبرمج (شكل 1). كما تم الحفاظ على التحكم في السيارة لمدة 48 ساعة في كلا المجموعتين. تم استخدام كيرسيتين (10 ميكرومتر) كعنصر تحكم مرجعي في كلتا المجموعتين التجريبيتين. بعد الحضانة ، تم تحليل الخلايا غير المعالجة والتجريبية من أجل التشكل الخلوي والنووي وإمكانات غشاء الميتوكوندريا باستخدام مجموعة BDTM MitoScreen (JC -1) ؛ تم تحديد موت الخلايا المبرمج بواسطة طريقة فرز الخلايا المستندة إلى Annexin V / في قياس الخلايا الزميل. تم التحقيق في مستويات التعبير الجيني المرتبطة بالإجهاد التأكسدي والالتهاب وتكوين الأوعية.

2.7. مقايسة تلطيخ بروبيديوم يوديد للضرر النووي الأشكال الخلوية للضرر النووي المميز ، والتضخم أو التغيرات المورفولوجية الأبوطوزية بعد المعالجة بـ 0. 1 و 0. 2 ميكروغرام / مل من BPME (مع أو بدون H2O2) في HUVECs تم تحديده باستخدام تحليل تلطيخ PI تحت الفحص المجهري الفلوري المقلوب ، كما وصفه Leite et al. [27].

2.8. فحص إمكانات غشاء الميتوكوندريا (ميكرومتر) بواسطة JC -1 تلطيخ الصبغة تم تحديد إمكانات غشاء الميتوكوندريا (ميكرومتر) بواسطة مقايسة JC -1 لتقييم كفاءة الميتوكوندريا في التحكم في السيارة و {{4} } .1 و 0. 2 ميكروغرام / مل من HUVECs المعالجة بـ BPME (مع أو بدون H2O2). باختصار ، تم خلط محلول تلطيخ JC -1 مع حجم مماثل من وسط الثقافة ثم تمت إضافته إلى HUVECs التجريبية واحتضانه في الظلام لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، تم غسل صبغة JC -1 غير المربوطة برفق مرتين باستخدام 200 ميكرولتر من محلول تلطيخ عازل JC -1 عند 4 درجات مئوية. بعد ذلك ، لوحظ تراكم j- تجميع ضد تلطيخ JC -1 تحت المجهر الفلوري باستخدام مجهر مضان ، وتم التقاط الصور. بالإضافة إلى ذلك ، تم قياس إمكانات غشاء الميتوكوندريا في قياس التدفق الخلوي باستخدام مجموعة BDTM MitoScreen (JC -1).

2.9 أنكسين V / تحليل موت الخلايا المبرمج باستخدام قياس التدفق الخلوي. تم طلاء HUVECs الناجم عن الإجهاد التأكسدي (1 × 1 0 5 / بئر) في 24- أطباق جيدة واحتضانها باستخدام BPME (0. 1 و 0.2 ميكروغرام / مل) أو التحكم في السيارة من أجل 48 ساعة بعد الحضانة ، تم تحضين الخلايا في 400 ميكرولتر من 5 ميكرولتر من 5 ميكرولتر من ايزوثيوسيانات الملحق V-fluorescein (FITC) و 5 ميكرولتر من PI المحتوي على عازلة ملزمة ؛ بعد ذلك ، تم الاحتفاظ بالخلايا لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT) في الظلام. تم تحليل الخلايا بواسطة زميل قياس الخلايا (BD Biosciences ، سان خوسيه ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) لتحديد موت الخلايا المبرمج (PI سلبي و Annexin V إيجابي) وخلايا موت الخلايا المبرمج المتأخرة (PI-positive و Annexin V الإيجابية) [28].

2.10. تحليل PCR الكمي في الوقت الحقيقي ، تم استخدام Fastlane® Cell to cDNA kit (Qiagen ، Hilden ، ألمانيا) لاستخراج مجموع الحمض النووي الريبي (RNA) والتوليف (كدنا) من التحكم في السيارة ، و HUVECs المعالجة بـ BPME (مع وبدون H2O2) باستخدام PCR الكمي (qPCR) شبه آلي أداة (Applied Biosystems ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). مستويات التعبير عن الإجهاد التأكسدي بما في ذلك (بيروكسيد الدهون ، NOS -3) ، ومضادات الأكسدة (Nrf -2 ، و GSK -3 ، و GPx) ، والالتهابات (العامل النووي- κ (NF- κ) ، عامل نخر الورم- (TNF-) ، إنترلوكين -1 (IL -1) ، عامل نمو خلايا الأوعية الدموية (VEGF) ، مستقبلات تشبه الرسوم -4 (TLR -4)) ، والتهاب الأوعية الدموية (جزيء الالتصاق داخل الخلايا (ICAM) ، وجزيء التصاق الخلايا الوعائية (VCAM) ، و EDN1 وسينثاز أكسيد النيتريك البطاني (eNOS)) - تم تحليل الجينات ذات الصلة والجين المرجعي ، -actin ، في HUVECs وقياسها بالطريقة من يوان وآخرون. [29]. تم حساب قيم التضخيم (∆Ct) بالفرق بين Ct (المعالج) و Ct (التحكم). تم رسم التعبير الجيني باستخدام التعبير عن قيمة 2 − Ct.

2.11. التحليل الإحصائي تم تضاعف جميع التجارب ثلاث مرات ، وتم التعبير عن البيانات الناتجة على أنها قيم متوسطة ± الانحراف المعياري (SD). تم إجراء التحليل الإحصائي للفروق بين المجموعات عن طريق تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) باستخدام برنامج SPSS (الإصدار 28.5 ، SAS Institute Inc. ، كاري ، نورث كارولاينا ، الولايات المتحدة الأمريكية). بعد ذلك ، تم إجراء اختبار المقارنة المتعددة لـ Tukey إذا تم العثور على اختلافات كبيرة. تم عرض جميع النتائج على أنها متوسط ​​± SD لست مكررات في كل مجموعة. القيمة الاحتمالية <0. 05="" اعتبرت="" دالة="">

cistanche لتحسين المناعة

3. النتائج

3.1. الجزيئات النشطة بيولوجيًا في BPME تم تأكيد المكونات الكيميائية لـ BPME باستخدام GC-MS (Turbomass ، PerkinElmer). تم تحديد التركيب الكيميائي لمستخلص قشر الشمندر من خلال مقارنة أطياف الكتلة المتاحة مع قاعدة البيانات الطيفية للمعهد الوطني للمعايير والتكنولوجيا (NIST). أكدت نتائج GC-MS أن BPME يحتوي على هيدروكسي أسيتون (8.18 بالمائة) ، 5- هيدروكسي ميثيل فورفورال (32.6 بالمائة) ، ميثيل بيروفات (15.13 بالمائة) ، بيتا د ألوبيرانوز (1.48 بالمائة) ، فورفورال (9.98 بالمائة) ، 2- hydroxy-gamma-butyrolactone (1.32٪) ، و 2 ، 3- dihydro -3 ، 5- dihydroxy - 6- methyl -4 H-Pyran -4- واحد (12.4 بالمائة ؛ الشكل 2 أ ، الجدول 1). 3.2 تكاثر الخلايا ويرد في الشكل 2 ب إمكانية تكاثر الخلايا في المختبر من BPME ضد HUVECs. لم يلاحظ أي تثبيط كبير لنمو الخلايا في المجموعات التجريبية مقارنة مع مجموعة التحكم. أكدت الدراسة الحالية أن زيادة تركيز BPME المعالج باستخدام HUVEC أدى إلى زيادة تكاثر الخلايا وصلاحيتها بعد 48 ساعة (112 بالمائة) مقارنة بـ 24 ساعة (1 0 3 بالمائة) من العلاج. بالإضافة إلى ذلك ، أكدت الصور المجهرية الخفيفة لـ HUVECs المعالجة بـ BPME بعد 48 ساعة الخلايا الطبيعية ذات الشكل الموحد لمورفولوجيا الخلية الملتصقة ، وكان من الواضح زيادة عدد الخلايا المتكاثرة (النسخ المتماثل) دون أي ضرر (الشكل 2 ج). 3.3 يُظهر تحليل التشكل الخلوي والنووي ، وتشكيل الأنابيب الدقيقة ، و JC -1 تلطيخ في HUVECs الشكل 3 مورفولوجيا تطور الأنابيب الدقيقة في الصور المجهرية الفلورية الفلورية. أظهر H2O 2- المستحث بالأكسدة المجهدة انتشارًا ضعيفًا وتشكلًا غير منتظم للخلايا الملتصقة مقارنةً بالتحكم HUVECs. عولجت HUVECs العادية بـ 0. أظهر 2 ميكروغرام / مل من BPME تكاثر الخلايا عن طريق النسخ المتماثل أو التولد الجديد باستخدام مورفولوجيا الأنابيب الدقيقة. في غضون ذلك ، أظهرت جرعة 0. 1 ميكروغرام / مل من الخلايا المعالجة بـ BPME 1 {59}} 0 بالمائة من الخلايا الملتصقة مع المراحل المبكرة من الأنابيب الدقيقة. حددت HUVECs المؤكسدة المجهدة والتي عولجت بـ 0.2 ميكروغرام / مل من BPME خلايا جديدة متكاثرة مع مورفولوجيا الأنابيب الدقيقة وتقلل من الأضرار الخلوية المؤكسدة. بالإضافة إلى ذلك ، أدى 0.1 ميكروغرام / مل من BPME أيضًا إلى زيادة التشكل الطبيعي لخلايا الأوعية الدموية مع تكاثر الخلايا.

يوضح الشكل 4 أ الشكل الطبيعي للهيكل النووي ، بشكل كروي ، في وحدة التحكم و BPME (0. 1 أو 0. 2 ميكروغرام / مل) HUVECs المعالجة. يوضح الشكل 4 ب صور تلطيخ PI للطبيعي و HUVECs مع الإجهاد التأكسدي الناجم عن H O. تُظهر H2O {{1 {12}}} المعالجة HUVEC نوى ذات أشكال غير منتظمة ، تظهر التكثف والتهاب الغدة بعد 3 0 دقائق. ومع ذلك ، 0. أظهر 2 ميكروغرام / مل من علاج BPME لـ HUVECs تحت الإجهاد التأكسدي نوى دائرية ذات شكل طبيعي. مقارنة بـ 0.2 ميكروغرام / مل من مستخلص BPME ، كان لـ 0.1 ميكروغرام / مل من BPME تأثير وقائي أقل ضد الإجهاد التأكسدي المستحث H2O 2- في HUVECs.

الشكل 2. نتائج التحليل الكروماتوجرافي GC-MS لمستخلص الميثانول من قشر الشمندر (أ) ، تكاثر الخلايا المختبرية (ب) ، وصور الفحص المجهري للضوء لتشكل الخلايا (ج) في HUVECs ، المعالجة بتركيز متزايد من مستخلص الميثانول من قشر الشمندر (BPME) ) (الشكل الموحد للخلايا الملتصقة والمتكاثرة المذكورة برأس السهم الأحمر). جميع القيم تعني ± SD (ن=6). * p أقل من أو يساوي 0. 05 بالمقارنة مع التحكم في السيارة.

الشكل 3. تحليل تكوين الأنابيب الدقيقة على أساس الإسفار المجهري في التحكم في السيارة ، 0. 1 و 0. جرعة 2 ميكروغرام / مل من مستخلص ميثانول قشر الشمندر (BPME) تمت معالجته بشكل طبيعي و H2O {{6} } المستحثة HUVECs المؤكسدة بعد 48 ساعة. بعد 48 ساعة ، أظهر H2O 2- المستحث بأكسدة الإجهاد HUVECs شكلًا متغيرًا عند مقارنته بالتحكم في السيارة. أظهرت أحجام من 0. 1 و {15}}. 2 ميكروغرام / مل من مستخلص الميثانول المعالج بقشر الشمندر (BPME) ، التشكل الطبيعي للأنابيب الدقيقة الوعائية مع الخلايا المتكاثرة التي تشبه التشكل الشائع لسلوك خلايا العضلات الملساء.

الشكل 4. تحليل تلطيخ بروبيديوم يوديد (PI) للتشكل النووي في التحكم في المركبات ، 0. 1 و 0. 2 ميكروغرام / مل من مستخلص الميثانول لقشر الشمندر (BPME) - معالج بشكل طبيعي (3 أ) و H2O 2- المستحث بأكسدة الإجهاد (3 ب) HUVECs بعد 48 ساعة. في PIstaining ، أظهر التحكم في السيارة أن النواة بدت طبيعية مع عدم وجود علامات على تقلص النواة أو تضخمها أو موت الخلايا المبرمج. في H2O2 وحده ، أظهرت الخلايا المعالجة غشاء نووي مستقطب بعد 48 ساعة. أدى العلاج بـ 0. 2 ميكروغرام / مل من BPME إلى تطبيع استقطاب الغشاء النووي الناتج عن H2O 2- عند مقارنته بـ 0. 1 ميكروغرام / مل من BPME أو Quercetin 10 ميكرومتر.

يوضح الشكل 5 أ نتائج تلطيخ JC -1 لـ HUVECs ، بما في ذلك خلايا التحكم وخلايا BPME المعالجة ؛ يوضح الشكل الخلايا السليمة ذات الميتوكوندريا النشطة ، كما هو مؤكد من خلال امتصاص الميتوكوندريا سالبة الشحنة من خارج الخلية الكاتيونية المحبة للدهن JC -1 (اللون الأخضر) والتجمعات J المحولة باللون الأحمر intramitochon-drially. يوضح الشكل 5 ب نتائج تلطيخ JC -1 لـ 0. 2 ميكروغرام / مل من BPME تدار إلى HUVECs مع الإجهاد التأكسدي الناجم عن H2O2 ؛ أكدت النتائج أن 94 بالمائة تقريبًا من الميتوكوندريا سالبة الشحنة حولت JC الكاتيوني المحب للدسم -1 (اللون الأخضر) إلى مجاميع J ذات اللون الأحمر عند مقارنتها بـ 0. 1 ميكروغرام / مل من BPME (61.4 بالمائة) أو H2O {{2 0}} تسبب في الإجهاد التأكسدي في HUVECs (2 بالمائة). لوحظ أن إمكانات غشاء الميتوكوندريا (MMP) أعلى في الخلايا المعالجة بـ BPME مقارنة بالعقار المرجعي كيرسيتين. 3.4. إمكانات غشاء الميتوكوندريا بمساعدة FACS (ميكرون ؛ BD MitoScan) وتحليل أنكسين V / موت الخلايا المبرمج في HUVECs يوضح الشكل 6 السعة المحتملة لغشاء الميتوكوندريا في تحليل BD MitoScan بعد 0. 2 ميكروغرام / مل من علاج BPME من HUVECs العادي و HUVECs مع الإجهاد التأكسدي الناجم عن H2O2. وجدنا أن 0.2 ميكروغرام / مل من علاج BPME زاد من MMP (ميكرومتر) إلى 92.7 بالمائة ± 3.7 بالمائة بالمقارنة مع HUVECs المعالج بـ H2O2 وحده (27.9 بالمائة ± 7.2 بالمائة). في المقابل ، أظهرت الخلايا المعالجة بالكيرسيتين نسبة 41.4 في المائة ± 1.6 في المائة من زيادة MMP (ميكرومتر) عند مقارنتها بـ HUVECs المعالجة بـ BPME و H2O2 أو H2O2 وحدها.

الشكل 5. تحليل إمكانات غشاء الميتوكوندريا باستخدام تلطيخ JC -1 للتحكم في السيارة ، 0. 1 و 0. 2 ميكروغرام / مل من مستخلص الميثانول لقشر الشمندر (BPME) معالج بشكل طبيعي (أ ) و H2O 2- المستحثة المؤكسدة (ب) HUVECs بعد 48 ساعة. صور JC {{1 0} flfluorescence تعرض صورًا مدمجة للإشارات الحمراء والخضراء للصبغة ، والتي تتوافق مع JC -1 في شكل مجاميع J مقابل شكل أحادي. وجدنا عددًا أقل من المجاميع J- H2O2 المعالجة بمفردها HUVEC. في 0. 2 ميكروغرام / مل من HUVEC المعالج بـ BPME يعرض تراكمات j عالية تمثل مباشرةً (MMP عالية ، ميكرومتر) إمكانات غشاء ميتوكوندريا عالية مقارنة بـ 0.1 ميكروغرام / مل من BPME أو 10 ميكرومتر من Quercetin.

4. مناقشة

عند الإجهاد خارج الخلية أو داخل الخلايا ، يتفوق التوافر البيولوجي لأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) على دفاع مضادات الأكسدة ، ويعطل الإجهاد التأكسدي إشارات الأكسدة والاختزال والتحكم [31]. يرتبط تطور الإجهاد التأكسدي بمسببات الأمراض المزمنة ، مثل الأمراض التنكسية العصبية والسكري وتصلب الشرايين. مثل ، الإجهاد التأكسدي يبدأ الخلل البطاني ويعزز الالتهاب الجهازي وتجنيد الضامة [32]. تهاجر الخلايا المناعية المنشطة إلى الأوعية الدموية وتطلق السيتوكينات والكيموكينات المرتبطة بتضيق الأوعية وإعادة تشكيل الأوعية الدموية لخلايا العضلات الملساء والالتهابات التي تؤثر على خلايا العضلات الملساء الوعائية وجدار الأوعية الدموية [33]. تؤدي زيادة الإجهاد التأكسدي للأوعية الدموية إلى تلف الأوعية الدموية ، وتصلب خلايا العضلات الملساء ، وتشوهات هيكلية من الإيلاستين. بالإضافة إلى ذلك ، تم تحفيز الإجهاد التأكسدي للأوعية الدموية في حالات مرضية أخرى ، مثل السمنة الحشوية أو تصلب الشرايين ، بسبب زيادة نشاط NADPH أوكسيديز (NOX -2) في الأنسجة الدهنية المحيطة بالأوعية الدموية [34]. يسبب الإجهاد التأكسدي الوعائي تغيرات أساسية في الوراثة اللاجينية تحدث أثناء الشيخوخة ، وتنتهي بعملية الشيخوخة المبكرة [35]. يعتمد تطوير إنتاج ROS والإجهاد التأكسدي في النظام البيولوجي إلى حد كبير على الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا ، بالإضافة إلى NOX -2 ، وأكسيداز الزانثين البطاني ، و eNOS غير المقترن ، و lipoxygenase [36]. قد تؤدي الخصائص المضادة للأكسدة للعوامل الغذائية إلى تحييد أنواع الأكسجين التفاعلية من خلال زيادة قدرة مضادات الأكسدة [26]. يحمي مستخلص الجنكة بيلوبا من تطور تصلب الشرايين عن طريق الحد من توليد ROS ونشاط ليبوكسجيناز في الخلل البطاني الناجم عن OxiLDL [37]. بالإضافة إلى ذلك ، هناك العديد من المركبات الفينولية والفلافونويد منتمتلك الحبوب والنباتات الصالحة للأكل خاصية البحث عن أنواع الأكسجين التفاعلية وأكسدة الدهون [38]. قشر الشمندر (Beta vulgaris) يحتوي المستخلص الميثانولي على إمكانات مضادة للأكسدة بسبب توافر الألياف العالية والأنثوسيانين والفلافونويدات مثل الفيتكسين والبيتانين [39]. في هذه الدراسة ، تم اختيار BPME لتحديد النهج الميكانيكي المعتمد على الميتوكوندريا لاكتشاف تأثيره على إمكانات غشاء الميتوكوندريا ، وإخماد LPO ، وتثبيط مستويات التعبير مرنا المرتبطة بالتهاب الأوعية الدموية. أكد اختبار MTT أن BPME زاد بشكل كبير من تكاثر الخلايا ، كما أكد ذلك زيادة السلامة النووية في تلطيخ PI بجرعة فعالة من 0. 2 ميكروغرام / مل من BPME مقابل الاختبار 0. 1 ميكروغرام / مل من BPME. يمكن اعتبار تحديد الجرعة الفعالة ذات التركيز المنخفض والنشاط الأعلى آمنًا من الناحية الفسيولوجية. وجدنا تلطيخًا مجهريًا مضانًا لـ FL لـ JC -1 ، وتمت استعادة إمكانات غشاء الميتوكوندريا في كل من H2O الطبيعي {{1 {12}}} المستحث خارجيًا HUVECs المؤكسد الإجهاد بعد 0.2 ميكروغرام / مل من BPME علاج او معاملة. يؤدي الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا إلى تغيير الفسفرة التأكسدية ، والتي تفشل في تحويل جذور الأكسجين (O2 · -) إلى H2O2 و H2O بواسطة الجلوتاثيون بيروكسيديز. بسبب عدم كفاية إزالة السموم من أنواع الأكسجين التفاعلية أو إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية غير المنضبط ، فإن زيادة الإجهاد التأكسدي للميتوكوندريا مرتبط بتصلب الشرايين [40]. استعادت مستخلصات قشر الشمندر بشكل فعال إمكانات غشاء الميتوكوندريا ، مما أدى بنجاح إلى زيادة إزالة السموم من ROS وتوليد H2O2. أكد تحليل تلطيخ Annexin V / PI أن علاج BPME حافظ على النسبة المئوية للخلايا القابلة للحياة وعزز مرحلة تكاثر الخلايا في كل من HUVECs و HUVECs العاديين مع الإجهاد التأكسدي الناجم عن H2O2. في هذا السياق ، Choo et al. [41] أكد أنه بعد التوليد المفرط لـ ROS أو H2O2 الخارجي في موقع نقص تروية الخلايا الجذعية الوسيطة المزروعة (MSCs) قد تضعف الانتشار الذاتي والقدرة متعددة السلالات. في الطب التجديدي ، خلايا العضلات الملساء الوعائية هي المنظمات الرئيسية للشرايين المتقلصة من خلال الحفاظ على المقاومة الشريانية المحيطية ، منظمات ضغط الدم ، زميل الدم ، وإصلاح الشرايين [42]. بالإضافة إلى ذلك ، يرتبط تعديل النمط الظاهري الناجم عن العمر للـ ECs بانخفاض انقباض الخلايا وزيادة شيخوخة الخلية. عند الإجهاد المستمر أو بسبب انخفاض الحساسية الميكانيكية ، يتم تحديد انخفاض التكيف لإشارات البيئة المكروية في خلايا العضلات الملساء المسنة [43]. أكدت النتائج الحالية أن علاج BPME حافظ على عدد الخلايا القابلة للحياة ، كما يتضح من قدرة تكوين الأوعية. تم دعم قدرة الانتشار المحددة لـ BPME على HUVECs من خلال تقليل تعبير LPO وزيادة التعبيرات الجينية المضادة للأكسدة. يتم إنشاء ROS و LPO مبدئيًا من معقد الميتوكوندريا (الأول والثالث) وأكاسيد النيتروجين -4 أثناء تكاثر الخلايا أو تمايزها [44]. تتفاعل أنواع الأكسجين التفاعلية المفرطة وتتلف الجزيئات الحيوية ، خاصةً تغيير سلامة الحمض النووي الجيني ، وهو أمر بالغ الأهمية للتكاثر الخلوي ووظائفها [45]. ومع ذلك ، فقد تم التأكيد على أن المدخول الغذائي من مادة البوليفينول المضادة للأكسدة ، مثل epigallocatechin و tocopherol ، يحمي الخلايا من الإجهاد التأكسدي ويزيد من القدرة على الانتشار [46]. في دراستنا ، انخفضت مستويات تعبير mRNA لـ LPO ، ووجد أن NOS -3 و Nrf -2 و eNOS زادت مرتين في HUVECs مع الإجهاد التأكسدي الناجم عن H2O2. eNOS هو الشكل الإسوي السائد لـ NOS ، وهو المسؤول عن معظم منتجات NO · في خلايا العضلات الملساء والأنسجة الوعائية. NO · يوسع جميع أنواع الأوعية الدموية ويحمي تراكم الصفائح الدموية والتصاق الكريات البيض في ECs [47]. حتى الآن ، كان هناك العديد من التقارير المتضاربة حول عوامل الخطر القلبية الوعائية ، وقد ارتبط الخلل الوظيفي البطاني بانخفاض أو زيادة تعبير eNOS [48]. لوحظ ارتفاع التعبير عن eNOS عند الإصابة بأمراض الأوعية الدموية ، والتي من المحتمل أن تكون نتيجة لزيادة إنتاج H2O2. O2 · - ، منتج تفكيك ، قد يزيد من تعبير eNOS من خلال آليات النسخ وما بعد النسخ [49]. يترافق التسبب في مرض الأوعية الدموية مع تحلل متسارع لأكسيد النيتروجين بعد التفاعل مع O2 · - ، وأخيراً ، شكل ONOO ، مما يؤدي إلى فك اقتران eNOS وخلل إنزيم NOX [50]. تم قمع الإجهاد التأكسدي بواسطة إنزيمات مضادات الأكسدة ، وزادت مستويات مرنا من GSK -3 و GPX بعد علاج BPME. يحتوي BPME على العديد من المواد الكيميائية النباتية النشطة بيولوجيًا ، بما في ذلك betalains و flavonoids و polyphenols والإنزيمات العلاجية وحمض الأسكوربيك وحمض dehydroascorbic (DHAA) والنترات غير العضوية (NO3) ، وقد تشارك هذه في زيادة قدرة مضادات الأكسدة في HUVECs. في هذا السياق ، تشا وآخرون. (2014) [51] ذكرت أن حمض الكلوروجينيك يحمي بشكل فعال من الأكسدة الناجم عن تلف الحمض النووي في الخلايا الكيراتينية البشرية. Endothelin -1 (Edn -1) ، وهو مضيق للأوعية مشتق من البطانة ، يؤدي إلى هجرة خلايا العضلات الملساء ويعمل كعامل مضاد للخلايا في الخلايا التي تعاني من الإجهاد الناجم عن أكسيد النيتريك [52،53]. تم تحفيز عمليات إعادة تشكيل الأوعية الدموية ، والهجرة ، والتكاثر ، وتراكم المصفوفة خارج الخلية بواسطة كل من Edn -1 و NO [54،55]. لاحظنا زيادة تعبير Edn -1 بعد علاج BPME في HUVECs مع الإجهاد التأكسدي. عند الإجهاد التأكسدي أو تراكم LPO ، فإن المرحلة المبكرة من التهاب الأوعية الدموية هي التصاق الكريات البيض بخلايا العضلات الملساء البطانية ، وهي بارزة في الأحداث الحرجة لنقص التروية وتصلب الشرايين [56]. يتم توسطه بواسطة تعبيرات VCAM و ICAM ؛ تم تحفيزها بواسطة العديد من العوامل الكيميائية وعوامل الانجذاب الكيميائي ، مثل تعبيرات NF-κB و IL -1 و TNF- [57]. تم تحقيق تثبيط تنشيط IL -1 متبوعًا بتعبير جزيء الالتصاق بواسطة مركب الفينول الغذائي حمض إيلاجيك [58]. العلاج باستخدام BPME لتحفيز HUVECs خارجيًا مع الإجهاد التأكسدي ، قلل بشكل كبير من العوامل المسببة للالتهابات الخاصة بخلايا الأوعية الدموية ، مثل VCAM و ICAM و NF-κB و IL -1 ومستويات تعبير TNF. في هذا السياق ، كريسبو وآخرون. [59] ذكر أن kaempferol و quercetin يثبطان الجينات المسببة للالتهابات ، مثل تعبيرات VCAM و ICAM و NF- κB و IL -1 على التوالي. بشكل عام ، فإن تثبيط الإجهاد التأكسدي وإمكانية التعبير الجيني المرتبط بالتهاب الأوعية الدموية في BPME يفضل التعبير عن عوامل نمو الخلايا الوعائية وتكاثر الخلايا الوعائية ونموها.

5. الاستنتاجات

تؤكد النتائج الحالية أن زيادة التعبير عن الجينات المضادة للأكسدة كان مرتبطًا بإخماد الإجهاد التأكسدي ، مما يساعد على التغلب على ضعف انتشار HUVEC وتكوين الأوعية. يعمل الثوم الأسود الذي يحتوي على هيدروكسي ميثيل فورفورورال على تثبيط التأثير الالتهابي لالتصاق خلية أحادية الخلية الناجم عن عامل نخر الورم (HUVEC) ويقمع أيضًا إنتاج ROS وتعبير VCAM -1 وتنشيط NF-κB [60]. بالإضافة إلى ذلك ، هو وآخرون. [61] أكد أن هيدروكسي ميثيل فورفورال لديه القدرة على حماية ECs من نقص الأكسجة. تم تحديد قشر الشمندر أيضًا لاحتوائه على مركبات الفلافونويد والفيوران ومضادات الأكسدة ، مثل 5- hydroxymethylfurfural و methyl pyruvate و furfural و 2 3- dihydro -3 ، 5- ثنائي هيدروكسي -6- methyl -4 H-Pyran -4- واحد ؛ هذه المكونات مسؤولة عن تعزيز قدرة مضادات الأكسدة وقمع جزيئات التصاق خلايا العضلات الملساء الوعائية المسببة للالتهابات. تم استخدام قشر الشمندر كمنشط لأحواض مضادات الأكسدة لإخماد الحافز الخارجي أو التحفيز المرضي الداخلي للإجهاد الخلوي فوق الأكسدة. أثبتت النتائج التي توصلنا إليها أن مكونات جذر الشمندر تساعد في تقليل الإجهاد الأيضي والالتهاب في HUVECs ، مما قد يكون مفيدًا لتكاثر الخلايا الوعائية وتكوين الأوعية.

الكاتب الاشتراكات:

التصور ، LNA-H. و S.-BP. منهجية LNA-H. و S.-BP. البرمجيات ، GS ؛ التحقق من صحة LNA-H. و S.-BP. التحليل الرسمي ، S.-BP ، AMA-D. ، AAA (علي أ الشطوي) و GS ؛ التحقيق ، LNA-H. و S.-BP و AMA-D. ؛ الموارد ، LNA-H. ؛ معالجة البيانات ، S.-BP و LNA-H. ؛ الكتابة - إعداد المسودة الأصلية ، LNA-H. و S.-BP. كتابة - مراجعة وتحرير ، LNA-H. و AMS و GS و AAA (آمنة عبد الله العتيبي) ؛ التصور ، S.-BP و AAA (علي A Alshatwi) ؛ الإشراف ، LNA-H. ، و S.-BP ؛ إدارة المشروع ، LNA-H. اقتناء التمويل ، LNA-H. قرأ جميع المؤلفين النسخة المنشورة من المخطوطة ووافقوا عليها. التمويل: يعرب المؤلفون عن تقديرهم لعمادة البحث العلمي في جامعة الملك سعود لتمويل هذا العمل من خلال مجموعة بحثية رقم RG -1442-432 بيان مجلس المراجعة المؤسسية: لا ينطبق بيان الموافقة المستنيرة: لا ينطبق بيان توافر البيانات : البيانات المقدمة في هذه الدراسة متاحة عند الطلب من المؤلف المقابل. تضارب المصالح: لا يوجد تضارب في المصالح لهذه الدراسة.

مراجع

1 - عبد المالكي ، ز. ؛ عرب ، هـ. أمانبور ، إس. محمد نجاد ، S. التأثيرات المضادة لتولد الأوعية من المستخلص الإيثانولي من Artemisia sieberi مقارنة بمادة فعالة ، مادة الأرتيميسينين. القس براس. فارماكوجن. 2016 ، 26 ، 326-333. [CrossRef]
2. يو ، سي ؛ كوون ، وتولد الأوعية الدموية وفرصها العلاجية. ميديات. التهاب. 2013 ، 2013 ، 127170. [CrossRef] [PubMed]
3. فولكمان ، J. تولد الأوعية في السرطان والأوعية الدموية والروماتويد وأمراض أخرى. نات. ميد. 1995 ، 1 ، 27-31. [CrossRef]
4. Hoeben، A .؛ Landuyt ، ب. هايلي ، مس ؛ Wildiers ، H. ؛ فان أوستروم ، AT ؛ De Bruijn ، عامل نمو بطانة الأوعية الدموية وتكوين الأوعية الدموية. فارماكول. القس 2004، 56، 549-580. [CrossRef]
5 - فيرارا ، إن. Alitalo، K. التطبيقات السريرية لعوامل النمو الوعائية ومثبطاتها. نات. ميد. 1999 ، 5 ، 1359-1364. [CrossRef]
6. جالي ، HF ؛ ويبستر ، NR فسيولوجيا البطانة. Br. أناست. 2004 ، 93 ، 105-113. [CrossRef]
7. أونات ، د. بريلون ، د. كولومبو ، بيسي ؛ شميت ، AM الخلايا البطانية الوعائية البشرية: نظام نموذجي لدراسة التهاب الأوعية الدموية في مرض السكري وتصلب الشرايين. بالعملة. مندوب مرض السكري .2011 ، 11 ، 193-202. [CrossRef] [PubMed]
8. باكارد ، ر. ليبي ، ب.التهاب في تصلب الشرايين: من بيولوجيا الأوعية الدموية إلى اكتشاف المؤشرات الحيوية والتنبؤ بالمخاطر. كلين. تشيم. 2008 ، 54 ، 24-38. [CrossRef]
9. إسبر ، الملكية الأردنية ؛ نوردبي ، را ؛ فيلارينيو ، جو ؛ باراجانو ، أ. كاتشارون ، جيه إل ؛ ماتشادو ، RA الخلل البطاني: تقييم شامل. كارديوفاسك. ديابيتول. 2006 ، 5 ، 4. [CrossRef]
10- بودان ، ب. برونيل ، أ. بوسلوت ، ن. فوبوردول ، م. بروتوكول لعزل وثقافة الخلايا البطانية للوريد السري البشري. نات. بروتوك. 2007 ، 2 ، 481-485. [CrossRef] [PubMed]
11. تساو ، واي. تساو ، ر. تولد الأوعية يمنع عن طريق شرب الشاي. Nature 1999، 398، 381. [CrossRef] [PubMed]
12. الين، G.-C.؛ دوه ، P.-D. ؛ تساي ، هـ. خصائص مضادات الأكسدة المؤيدة للأكسدة لحمض الأسكوربيك وحمض الغاليك. الغذاء تشيم. 2002 ، 79 ، 307-313. [CrossRef]
13. Dhalaria، R.؛ فيرما ، ر. كومار ، د. بوري ، إس. تابوال ، أ. كومار ، ف. نيبوفيموفا ، إي. Kuca، K. المركبات النشطة بيولوجيا من الفواكه الصالحة للأكل مع خصائصها المضادة للشيخوخة: مراجعة شاملة لإطالة عمر الإنسان. مضادات الأكسدة 2020، 9، 1123. [CrossRef] [PubMed]
14. باياو ، DdS ؛ دا سيلفا ، د. ديل أغيلا ، إم ؛ Paschoalin و VMF الخصائص الغذائية والنشطة بيولوجيا والفيزيائية لتركيبات جذر الشمندر المختلفة. مدمن طعام. 2017، 6. [CrossRef]
15. Lalonde، R .؛ Roitberg، B. عن تطور سلوك التزاوج في الأشجار: الافتراس أم الطقس؟ أكون. نات. 1992 ، 139 ، 6. [CrossRef]
16. سيلفا ، د. باياو ، دس ؛ فيريرا ، VF ؛ Paschoalin ، VMF Betanin كإجهاد مؤكسد متعدد المسارات ومعدّل للالتهاب: صبغة جذر الشمندر لها تأثيرات وقائية على التسبب في أمراض القلب والأوعية الدموية. كريت. القس علوم الغذاء. نوتر. 2020، 1-16. [CrossRef]
17. باياو ، DDS ؛ سيلفا ، د. Paschoalin ، VMF نباتي رائع: يمكن تعديل محتوياته من النترات والمواد الكيميائية النباتية في تركيبات جديدة لإفادة الصحة ودعم علاجات أمراض القلب والأوعية الدموية. مضادات الأكسدة 2020 ، 9 ، 960. [CrossRef] 18. عبد الغفار ، EA ؛ حجازي ، نيو مكسيكو ؛ سعد ، سمو ؛ سليمان ، مم. الراعي ، ماجستير ؛ شحاتة ، SM ؛ بركات أ. ياسر أ. Sobeh، M. HPLC-ESI- تحليل MS / MS لأوراق البنجر (Beta vulgaris) وخصائصه المفيدة في الفئران المصابة بداء السكري من النوع الأول. بيوميد. فارماكوثر. 2019، 120، 109541. [CrossRef]
19. سينغ ، ب. ناثان ، BS التركيب الكيميائي ، الخصائص الوظيفية ، ومعالجة جذر الشمندر - مراجعة. كثافة العمليات J. Sci. م. الدقة. 2014 ، 5 ، 679.
20- نينفالي ، ص. Angelino ، D. القدرات التغذوية والوظيفية لبيتا فولغاريس سيكلا وروبرا. فيتوتيرابيا 2013 ، 89 ، 188-199. [CrossRef]