الطب الصيني Cistanche التركيب الكيميائي وتحليل المكونات في الجسم Ⅲ

الفصل 3 التحليل الكمي للمكونات متعددة المكونات لـ Cistanche deserticola على أساس RPLC-HILIC-MS/MS

التركيب الكيميائي للطب الصيني التقليدي معقد ويحتوي على مجموعة متنوعة من المركبات مثل المستقلبات الأولية والثانوية [55-561. لا يزال تحقيق تحليل شامل وموثوق للمكونات الكيميائية للطب الصيني التقليدي (بما في ذلك المكونات المحبة للماء والكارهة للماء) يمثل مشكلة فنية كبيرة. علاوة على ذلك، فإن محتوى كل مكون في الطب الصيني التقليدي يختلف بشكل كبير، ومن الصعب تحديد كمية المكونات الرئيسية والتتبعية بدقة في نفس الوقت. 1571 الفصل التقليدي بعمود واحد ليس كافيًا، وسيكون تحليل المركبات النزرة في الطب الصيني التقليدي مقيدًا بالثوابت. بسبب تداخل المركبات، فإن ظاهرة تداخل الذروة خطيرة. على الرغم من استخدام مجموعة متنوعة من التقنيات الكروماتوغرافية المتقدمة لتحسين فصل المصفوفات المعقدة، مثل أعمدة كروماتوغرافيا الجسيمات ذات القشرة الأساسية ودون الميكرون، وأعمدة كروماتوغرافيا التفاعل المحب للماء، وما إلى ذلك، إلا أنه لا يزال من الصعب تحقيق فصل شامل للمركبات المختلفة باستخدام عمود واحد [58 -59. يعتبر التحليل اللوني متعدد الأعمدة الذي يجمع بين آليتين كروماتوغرافيتين متعامدتين على الأقل، مثل LC ثنائي الأبعاد، و LC بتبديل الأعمدة، و LC ثنائي العمود، أداة مجدية يمكنها توسيع نطاق تغطية المستقلب بشكل كبير. ليس هناك شك في أن كلاً من LC ثنائي الأبعاد وLC تبديل الأعمدة يمكن أن يزيد بشكل كبير من سعة الذروة 160). ومع ذلك، تعتمد كلتا الطريقتين على الصمام، والأجهزة معقدة، وتستغرق وقتًا طويلاً، كما أن أنابيب التوصيل والمنظمين سهلة التركيب. توجد المخلفات، وهاتان الطريقتان معرضتان لإدخال سلسلة من عوامل عدم اليقين التي تؤدي إلى عدم إمكانية التكاثر الكمي. على الرغم من أن كروماتوغرافيا التفاعل المحب للماء ذو ​​الطور العكسي (RPLC-HILIC) لا يمكنه زيادة سعة الذروة بشكل كبير، إلا أن معدات الأداة بسيطة، ولا توجد بقايا في توصيل الأنابيب والمنظمين، ولا يزال بإمكانه تحقيق التغيير من محبة للماء إلى كارهة للماء. الاحتفاظ الشامل بعدد كبير من المركبات القطبية على نطاق واسع [61-66. بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام وضع مراقبة التفاعلات المتعددة (MRM) الفريد من نوعه لمطياف الكتلة الرباعي الثلاثي (QgQ) كبعد فصل آخر لزيادة تحسين قدرة الفصل لـ RPLC-HILIC. باختصار، يدمج RPLC-HILIC-MRM المزايا الكامنة في RPLC وHILIC وMRM ومن المتوقع أن يصبح طريقة تحليلية موثوقة.

ما هي المدة التي يستغرقها عمل سيستانشي؟

يختلف محتوى كل مكون من مكونات الطب الصيني التقليدي بشكل كبير. بالمقارنة مع المكونات الرئيسية، يولي الناس اهتمامًا أكبر لتطوير طرق أكثر حساسية لإكمال الكشف عن هذه المركبات النزرة أو حتى المركبات فائقة النزرة. غالبًا ما يوصى بوضع MRM نظرًا لحساسيته الممتازة ونطاقه الديناميكي الخطي الجيد. ومع ذلك، ونظرًا لتشبع تكاثر الإلكترون الطرفي لغرفة Q3 لمطياف الكتلة QqQ، يتم تضييق النطاق الخطي عادةً، ولا يمكن للحد الأعلى للقياس الكمي (ULOQ) أن يغطي محتوى بعض المركبات الرئيسية بشكل كامل دون مراقبة موثوقة هذه المكونات النزرة. ولذلك، فإن قمع إنتاج أيونات المنتج يمكن أن يؤدي إلى توسيع ULOO. باستخدام المعلمات المركبة الضعيفة مثل أزواج الأيونات،تفويضي(موانئ دبي) وطاقة الاصطدام(CE) يمكنه تقليل عدد أيونات المنتج المستهدفة وبالتالي توسيع ULOQ[68-69]

الطب الصيني التقليديسيستانشس هرباهو الجذع اللحمي المجفف بأوراق متقشرة من نباتنبات السيستانشس. وهو أحد الأدوية الصينية التقليدية شائعة الاستخدام ويعرف باسم "الجينسنغ الصحراوي". لقد كانت جليكوسيدات الفينيليثانويد دائمًا موضوعًا بحثيًا ساخنًا في Cistanche deserticola، ولكن في السنوات الأخيرة، تم أيضًا التعرف على التأثيرات الدوائية للمكونات الأخرى المحبة للماء مثل المانيتول! 70-721. ومع ذلك، في تحليلنا الكمي الروتيني CH، محتويات المكونات الرئيسية مثلcom.echinaceaside,com.verbascoside، وكان المانيتول في بعض الأحيان مرتفعًا جدًا بحيث لا يتجاوز نطاق قياس كاشف الأشعة فوق البنفسجية أو كاشف تشتت الضوء التبخري (ELSD). ولذلك، من منظور تقييم الجودة الشاملة، من المهم إنشاء طريقة تحليلية يمكنها في وقت واحد مراقبة المكونات المحبة للماء والكارهة للماء وتحديد المكونات الرئيسية والتتبع بدقة.

أنشأت التجربة في هذا الفصل طريقة موثوقة مناسبة لتحليل المصفوفات المعقدة - قياس الطيف الكتلي السائل RPLC-HILIC-MS/MS (مقياس الطيف الكتلي للتفاعل العكسي الطور المحب للماء - قياس الطيف الكتلي الترادفي)، والذي حقق اكتشاف 23 قطبية في Cistanche deserticola . الفصل والتحليل وتحديد المحتوى في وقت واحد لمجموعة واسعة من المركبات (التي تغطي المكونات المحبة للماء والكارهة للماء)؛ أثناء استخدام وضع SMRM لضمان إمكانية تكرار نتائج هذه الطريقة، وذلك باستخدام قيم CE المناسبة وأزواج أيونية مختلفة لتوسيع مخروط الصنوبر، يتيح ULOQ للمكونات الرئيسية مثل الإينولين والفيرباسكوسايد القياس الكمي المتزامن للمكونات الرئيسية والمكونات النزرة في Cistanche deserticola، مما يوفر أداة مجدية لتحسين مراقبة جودة Cistanche deserticola والمساعدة في تحقيق التمثيل الغذائي المستهدف على نطاق واسع للنباتات. علم الجينوم.

القسم 1 المواد التجريبية

1. الصك

تم تجهيز مطياف الكتلة السائلة HPLC-Qtap-MS بجهاز Shimadzu HPLC (مجهز بمضختين LC-20ADxR، وجهاز أخذ العينات التلقائي SIL-20ACxR، وكاشف الأشعة فوق البنفسجية SPD-M20A، وCTO-20AC منظم الحرارة DGU-20A3R لتفريغ الغازات عبر الإنترنت ويتكون من جهاز ووحدة تحكم CBM-20A، شركة Shimadzu، اليابان) ومطياف الكتلة SCIEX5500 Qtrap (مصدر أيون ESI، SCIEX، فوستر سيتي، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) . تم الانتهاء من الحصول على البيانات وحسابها بواسطة برنامج Analyst Software1.6.2. نظام تنقية المياه عالي النقاء Mili-Q (شركة ميليبور، الولايات المتحدة الأمريكية)، ميزان التحليل الإلكتروني Mettler ME204 (شركة Mettler Toledo، سويسرا)، مستخرج بالموجات فوق الصوتية (230V، Bransonmodel 5510، Danburry، CT، الولايات المتحدة الأمريكية).

2. المواد والكواشف

عمود Waters Acquity UPLC HSS T3 (2.1 × 100 مم، 1.8 ميكرومتر)، عمود Waters XBridge Amide (4.6 مم × 150 مم، 3.5 ميكرومتر).بولي إيثيركيتون(نظرة خاطفة) خط الأنابيب (شركة اجيلنت، الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء درجة التحليل اللوني ودرجة قياس الطيف الكتلي للميثانول والأسيتونيتريل وحمض الفورميك من درجة قياس الطيف الكتلي من ThermoFisher (بيتسبرغ، بنسلفانيا، الولايات المتحدة الأمريكية)، وكان الماء عبارة عن ماء Milli-Q عالي النقاء (ميليبور، بيدفورد، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكية) المصنوع في المختبر . تم شراء النياسين (حمض النيكوتينيك، cLogP، 0.799)، وحمض السكسينيك (cLogP، -0.526) من شركة Sigma-Aldrich (St. Louis، MO، USA): uridine (cLogP، -2.219)، الغدانية الأدينوزين (cLogP، -2.158)، الإينوزين (cLogP، {{10}}.106) والغوانوزين (cLogP ، -3.326) من شركة Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. Salidroside (cLogP -0.296)، 6- deoxycatalpol (cLogP، -3.071)، فينيل ألانين (cLogP، -1.556)، 8- حمض epi-loganic (cLogP، -2.366)، مانيتول (cLogP، -2.046)، سكروز (cLogP) ، -3.087)، غلوروسيد (cLogP، -1.757)، ألاشانيوزيد A (ألاشانيوسايد A، cLogP -0.971)، إشيناكوسيد (إيشيناكوسيد، cLogP، -1 .811)، وحمض الفيروليك (cLogP، 1.421)، وأكتيوسيد (cLogP، -0.890)، وإيزواكتيوسايد (cLogP، -0.057) وبينوريسينول - - D-جلوكوبيرانوسايد (cLogP، تم توفير -0.384) من قبل المختبر الرئيسي للأدوية الطبيعية والمحاكاة الحيوية بجامعة بكين، cistanoside F (cistanoside F، cLogP، -2.211) تم شراؤها من شركة Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd.، تم شراء cistanoside A (cistanoside A، cLogP، -1.365)، 2'-acetylacteoside (cLogP، -0.040) وliquiritin apioside (cLogP، -0.267) من شنغهاي تم شراء Shidande Biotechnology Co., Ltd.، وtubuloside A (tubulosideA، cLogP، 0.287) من Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd.. تم اختبار نقاء جميع المواد المرجعية بواسطة HPLC-DAD-IT-TOF-MS، وتم اختبار نقاء جميع المواد المرجعية بواسطة HPLC-DAD-IT-TOF-MS. وكانت نسبة النقاء أكبر من 98%. تم حساب جميع قيم cLogP لمادة التحكم بواسطة برنامج ChemBioDraw Ultra14.0 (CambridgeSoftCambridge، MA، USA).