إشيناكوسيد يمارس نشاطا مضادا للورم في سرطان الكبد

الاتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

ون لي*، جينغ تشو، ياجي تشانغ، جينغ تشانغ، شيوي لي، تشياو يان، جيابينغ هان، وفانجدي هو*

تجريدي

خلفية:Echinacoside (ECH) هو العنصر النشط الرئيسي في Cistanches Herba ، والذي من المعروف أن له تأثيرات علاجية على الأورام النقيلية. ومع ذلك ، فإن آثار ECH على سرطان الكبد لا تزال غير واضحة. كانت هذه الدراسة ل التحقيق في آثار ECH على عدوان خلايا سرطان الكبد.

أساليب:تم علاج نوعين من خلايا سرطان الكبد Huh7 و HepG2 بجرعات مختلفة من ECH في أوقات مختلفة والتدرجات. تم استخدام اختبارات MTT وتشكيل المستعمرة لتحديد آثار ECH على صلاحية Huh7 وخلايا HepG2. تم استخدام مقايسات Transwell ومقايسات قياس التدفق الخلوي للكشف عن آثار علاج ECH على الغزو والهجرة وموت الخلايا المبرمج ودورة الخلية لخلايا Huh7 و HepG2. تم استخدام تحليل اللطخة الغربية للكشف عن آثار ECH على مستويات التعبير عن TGF-β1 ، smad3 ، smad7 ، البروتينات المرتبطة بموت الخلايا المبرمج (Caspase-3 ، Caspase-8) ، و Cyto C في خلايا سرطان الكبد. تم الكشف عن العلاقة بين miR-503-3p و TGF-β1 باستخدام المعلوماتية الحيوية تحليل وفحص مراسل Luciferase.

النتائج:أظهرت النتائج أن ECH منعت انتشار وغزو وهجرة خلايا Huh7 و HepG2 في طريقة تعتمد على الجرعة والوقت. علاوة على ذلك ، وجدنا أن ECH تسبب في موت الخلايا المبرمج Huh7 و HepG2 عن طريق منع الخلايا في مرحلة S. علاوة على ذلك ، وجد أن التعبير عن miR-503-3p قد انخفض في أنسجة ورم الكبد ، ولكن زاد علاج ECH من التعبير عن miR-503-3p في خلايا Huh7 و HepG2. بالإضافة إلى ذلك ، وجدنا أن TGF-β1 كهدف محتمل للطائرة MIR-503-3p. شجعت ECH على تنشيط مسار إشارات TGF-β1 / Smad وزادت مستويات التعبير عن Bax / Bcl-2. علاوة على ذلك ، يمكن أن يؤدي ECH إلى إطلاق الميتوكوندريا Cyto C ، وتسبب رد فعل درجة كاسباز.

الاستنتاجات:توضح هذه الدراسة أن ECH يمارس نشاطا مضادا للورم عبر محور miR-503-3p / TGF-β1 / Smad في سرطان الكبد، ويوفر عامل آمن وفعال مضاد للأورام لسرطان الكبد.

الكلمات الرئيسيه: إشيناكوسيد، سرطان الكبد، موت الخلايا المبرمج، MiR-503-3p، TGF-β1/smad

Cistanche هو عامل آمن وفعال مضاد للأورام لسرطان الكبد.

مقدمة

سرطان الكبد هو واحد من الأورام الخبيثة الأكثر شيوعا الأورام ذات معدل الإصابة المرتفع ، وحدوث سرطان الكبد ينمو بسرعة [1]. استئصال الكبد هو أفضل طريقة لعلاج سرطان الكبد للمرضى في بدايته مراحل [2]. ومع ذلك ، فإن معظم المرضى لديهم تكرار و ورم خبيث بعد الجراحة. معدل البقاء على قيد الحياة لمدة 5 سنوات هو فقط حوالي 3-5٪ [2]. لذلك ، نهج علاجية جديدة وهناك حاجة ماسة إلى وكلاء.

في السنوات القليلة الماضية ، تطوير أدوية السرطان و بدأت الأبحاث حول المواد الكيميائية النباتية في الاهتمام إلى علم الأدوية العرقية [3 ، 4]. وقد أظهر عدد كبير من الدراسات السريرية والتجريبية أن الطب يمكن للمونومرات أن تمنع الانتشار ، والانبثاث خلايا سرطان الخلايا الكبدية ، تحفز موت الخلايا المبرمج وتمايز الخلايا السرطانية [5]. Cistanches Herba هو نبات ينتمي إلى عائلة النباتات ، وهو تقليدي الطب في الصين ويعرف باسم "الجينسنغ الصحراوي" [6]. Cistanches Herba غني بأنواع المكونات الكيميائية ، وقد عزل الباحثون في الداخل والخارج أكثر من مائة مركب منه ، بما في ذلك جليكوسيدات الفينيل إيثانول ، قشور ، تيربينات حلقي ، السكريات والأحماض الأمينية ، وما إلى ذلك [7]. إشيناكوسايد (ECH) هو المكون الرئيسي ل Cistanches Herba ويعتبر أيضا بشكل عام العنصر النشط الرئيسي [6]. في الآونة الأخيرة سنوات ، أظهرت الدراسات أن ECH قد يكون خيارا علاجيا جديدا للأورام العدوانية أو النقيلية على نطاق واسع [8]. وقد وجدت الدراسات أن ECH يمكن أن تمنع البنكرياس السرطان، وسرطان الدم، وسرطان المعدة، وسرطان بطانة الرحم، و العديد من الأورام الأخرى [9]. ومع ذلك ، لا يوجد تقرير حول تأثير ECH على تطور سرطان الكبد.

تلعب MiRNAs أدوارا محورية في مرحلة ما بعد النسخ تنظيم التعبير الجيني (10). وقد أظهرت دراسات مستفيضة أن الحمض النووي الريبوزي المرسال يرتبط ارتباطا وثيقا بالكبد السرطان [11] والتصلب المتعدد. MiR-503-3p هو الحمض النووي الريبوزي المرسال المكتشف حديثا والذي يشارك في انتشار الخلايا السرطانية وهجرتها وغزوها [12]. ومع ذلك ، فإن وظيفته في سرطان الكبد غير واضحة. حالا البحث عن الجينات المستهدفة miRNA في اتجاه المصب هو في مرحلة ناضجة نسبيا ، ولكن لا يزال هناك العديد من مواقع الجينات المستهدفة غير المكتشفه. Te TGF-β1/Smad3 نقل الإشارة المسار مهم بشكل خاص لتكوين الأورام و التنمية [13]. وقد وجد أن TGF-β1/Smad3 تم تنشيط المسار في نموذج الورم الكبدي ، مما يشير إلى أن مسار TGF-β1/Smad3 لعب دورا هاما في تطور سرطان الكبد [14]. يعتبر التعبير العالي لمسار TGF-β1 / Smad3 واحدا من الأسباب الرئيسية لحدوث سرطان الكبد [15]. من أجل مواصلة التحقيق في الآلية الأساسية التي توسطت في آثار ECH على سرطان الكبد ، فإن miRNA / تم استكشاف مسار TGF-β1 / Smad3.

في هذه الدراسة ، قمنا بتقييم آثار ECH على تطور خلايا سرطان الكبد ووجدنا أن ECH يمارس نشاط مضاد للورم عبر miR-503-3p / TGF-β1 / Smad محور في سرطان الكبد، ويوفر عامل آمن وفعال مضاد للأورام لسرطان الكبد.

سيستانش tcmمضاد للسرطان.

الأساليب والمواد

المواد

كان إشيناكوسيد (ECH) (النقاء>98٪ ، مونوهيدرات) تم الحصول عليها من Hetian Dichen sashing Pharmaceutical التنمية المحدودة (شينجيانغ ، الصين). الهيكلية تم عرض الصيغة في الشكل 1.

زراعة الخلايا ونقلها

كانت خطوط خلايا سرطان الكبد البشرية Huh7 و HepG2 تم شراؤها من FENGHUISHENGWU (هونان ، الصين). تم استزراع الخلايا في وسط DMEM مكمل مع 10٪ مصل البقر الجنيني (FBS ، Gibco ، الولايات المتحدة الأمريكية) عند 37 درجة مئوية في حاضنة خلايا CO2 بنسبة 5٪. MiR-503-3p تقليد و miR-NC تم الحصول عليها من شركة شنغهاي جين للأدوية ، المحدودة (شنغهاي، الصين). تم إجراء جميع عمليات النقل باستخدام كاشف ليبوفيكتامين 2000 (Invitrogen) باتباع تعليمات الشركة المصنعة. بعد 24-48 ساعة إضافية ، تم جمع الخلايا المنقولة ومعالجتها لمزيد من الدراسات.

فحص مراسل لوسيفيراز

تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي من الخلايا ، وكان TGF-β تم تضخيمه باستخدام الاشعال WT و MUT. جزء من TGF-β1 تم إدخاله في pGL3-Bashc luciferase متجه مراسل اسمه TGF-β-WT-Luc. الربط تم تحوير منطقة β1 و miR-503-3p لتشكيل بلازميد متحور يسمى TGF-β1-Mut-Luc. تم نقل TGFβ1-WT-Luc و TGF-β1-Mut-Luc بشكل مشترك في الخلايا مع miR-503-3p تقليد و pRLTK. كانت الزنازين جمعت 6 ساعات بعد النقل. مراسل ثنائي لوسيفيراز تم استخدام مجموعة الفحص (Promega ، ماديسون ، WI ، الولايات المتحدة الأمريكية) ل تحديد نشاط لوسيفيراز.

فحص نمو الخلايا

خلايا Huh7 و HepG2 (2× 105 ) وضعت في 96 بئرا لوحات. ثم عولجت الخلايا ب ECH لمدة 24 و 36 و 48 ساعة. بعد ذلك ، تمت إضافة محلول MTT 10 مل إلى كل حسنا وتم احتضان الخلايا لمدة 4 ساعات. بعد ذلك، 150 تمت إضافة μL من DMSO إلى الآبار. والامتصاص عند 570 نانومتر تم قياسه بواسطة قارئ ELISA (Aoweiya, بكين، الصين).

تشكيل مستعمرة

تم إعداد تعليق خلية واحدة من المنقولات الخلايا وزرعت في حاضنة لمدة 7 أيام. بعد التخلص من الوسط ، كانت الخلايا ملطخة بخلايا رايت وصمة عار لمدة 5 دقائق ثم ملطخة بمحلول صبغة جيمسا ومحلول بوفر الفوسفوموليبديت سورنسن (1:9) لمدة 10 دقائق. بعد الغسيل ، تم حساب المستعمرات تحت المجهر.

فحص ترانسويل

تم إجراء فحوصات الهجرة والغزو في غرف ترانسويل (كوستار ، بادهوفيدورب ، تي هولندا) المغلفة بماريبل أو بدونها (BD Biosciences) على السطح العلوي للغشاء 8-μm (حجم المسام). لفحص الهجرة ، تم نقل خلايا Huh7 و HepG2 أعيد تعليقها في 200 ميكرولتر من DMEM الخالي من المصل متوسطة والبذور في الغرف العليا. لفحص الغزو ، تم طلاء Matrigel (30 ميكروغرام / بئر) مسبقا على كانت أغشية الغرف العلوية والخطوات الأخرى نفس فحص الهجرة. بعد حضانة 24 ساعة ، الخلايا التي هاجرت أو غزت من خلال الغشاء إلى السطح السفلي تم تثبيتها بالإيثانول وملطخة مع 0.2٪ البنفسجي الكريستالي. وأخيرا ، لوحظت الخلايا و تم عدها في خمسة حقول عشوائية باستخدام المجهر.

تحليل دورة الخلية

تم زرع خلايا Huh7 و HepG2 في لوحات 6 آبار في كثافة 1× 105 الخلايا / مل. تم جمع الخلايا بعد معالجتها ب ECH لمدة 0 و 24 و 48 ساعة. كانت خلايا تيسي آنذاك يضاف مع 1 مل من الثلج المبرد مسبقا 75٪ الإيثانول ، مثبت في 20 درجة مئوية لمدة 2 ساعة. بعد ذلك ، تمت إضافة الخلايا بمحلول تلطيخ PI وتحضينها في الظلام لمدة 15 دقيقة. ثم تم تحليل دورة الخلية عن طريق قياس التدفق الخلوي.

تحليل الخلايا الماصة

تم طلاء الخلايا في لوحات 6 آبار بكثافة 5× 105 الخلايا / جيدا. بعد الجمع ، تم طرد الخلايا مركزيا و 195 ميكرولتر من محلول ربط Annexin V-FITC لإعادة تعليق الخلايا. التالي ، 5 ميكرولتر الملحق V-FITC ومحلول تلطيخ يوديد البروبيديوم 10 ميكرولتر أضيفت. تم احتضان الخلايا في الظلام ثم وضعت في حمام الجليد.

Cistanche يحمي الكبد.

النسخ العكسي الكمي PCR (qRT-PCR)

تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي بواسطة كاشف TRIzol (Haigene ، هاربين، الصين). كان نظام Te viiA™ 7 PCR في الوقت الفعلي تستخدم ل qRT-PCR. تم نسخ الحمض النووي الريبي عكسيا إلى cDNA باستخدام توليف الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (cDNA) من BeyoRT™ First Strand كيت (معهد بيوتايمر للتكنولوجيا الحيوية). تم استخدام U6 كتحكم داخلي [16]. تسلسلات التمهيدي كانت على النحو التالي:

miR-503-3p: إلى الأمام: 5′-CTGATGGTTAAGAGA ATGT-3′,

miR-503-3p: عكس: 5′-GTCCTTGGACATCCG GGCCG-3′,

U6: إلى الأمام: 5′-GACAGATTCGGTCTGTGGCAC-3′،

U6: عكس: 5′-GATTACCCGTCGGCCATCGATC-3′.

تحليل اللطخة الغربية

تم جمع الخلايا المنقولة وتم استخراج البروتينات الكلية. كانت تركيزات البروتين يتم تحديدها باستخدام مجموعة فحص بروتين BCA. تم فصل عينات البروتين بنسبة 10٪ SDS-PAGE و نقل على غشاء فلوريد البولي فينيليدين. ثم تم احتضان الغشاء بمضاد TGF-β1 (1:1000، شيفنغ، شنغهاي، الصين)، SMAD3 (1:1000، شيفنغ ، شنغهاي ، الصين) ، SMAD 7 (1:1000 ، شيفنغ ، شنغهاي، الصين)، Bcl-2 (1:1000، شيفنغ، شنغهاي، الصين)، باكس (1:1000، شيفنغ، شنغهاي، الصين)، سيتو سي (1:1000، شيفنغ، شنغهاي، الصين)، كاسباز-3 (1:1000، شيفنغ ، شنغهاي ، الصين) ، caspase-8 (1:1000 ، شيفنغ ، شنغهاي، الصين) والأجسام المضادة المضادة β الأكتين (1:1000، شيفنغ، شنغهاي، الصين) بين عشية وضحاها. تم احتضان عشرة غشاء مع الجسم المضاد الثانوي المضاد للأرانب (1: 1000 ، شيفنغ ، شنغهاي ، الصين) [17].

الأساليب الإحصائية

وقدمت البيانات على أنها الوسط± الانحراف المعياري (SD). تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج SPSS 13.0. تم استخدام اختبار t للطالب للمقارنات. قيمة p< 0.05="" was="" considered="">

النتائج

تأثير ECH على نشاط خلايا سرطان الكبد البشرية والانتشار

للتحقيق في تأثير ECH على وظيفة خلايا سرطان الكبد البشرية ، تم إجراء فحص MTT و أظهرت النتائج أن صلاحية خلية HepG2 (الشكل 2 أ) وانخفض Huh7 (الشكل 2 ب) تدريجيا مع زيادة جرعة ووقت علاج ECH مقارنة مع المجموعة الضابطة (p< 0.01).="" after="" 48="" h="" exposure="" of="" ech,="" the="" cell="" viability="" was="" the="" lowest,="" so="" 48="" h="" exposure="" of="" ech="" was="" selected="" for="" further="" experiment.="" colony="" formation="" assay="" results="" showed="" that="" the="" number="" of="" colonies="" of="" hepg2="" (fig.="" 2c)="" and="" huh7="" (fig.="" 2d)="" cells="" gradually="" decreased="" by="" treatment="" of="" ech="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" compared="" with="" the="" control="" group="" (p="">< 0.01,="" p="">< 0.001).="" these="" results="" indicate="" that="" ech="" plays="" an="" important="" role="" in="" hcc="" cell="" activity="" and="">

آثار ECH على هجرة خلايا سرطان الكبد البشرية والغزو

لمزيد من التحقيق في تأثير ECH على الكبد البشري كانت وظيفة الخلايا السرطانية وهجرة الخلايا والغزو الكشف عن. كما هو مبين في الشكل 3 أ ، ب ، مقارنة مع مجموعة دون علاج ECH ، تم تقليل هجرة وغزو خلايا Huh7 و HepG2 بشكل ملحوظ بعد علاج ECH بطريقة تعتمد على الجرعة (ع)<0.01,><0.001), suggesting="" that="" ech="" inhibited="" the="" migration="" and="" invasion="" of="" huh7="" and="" hepg2="">

ECH ينظم توزيع خلايا سرطان الكبد البشري وموت الخلايا المبرمج

من أجل استكشاف تأثير ECH على موت الخلايا المبرمج لخلايا سرطان الكبد ، تم إجراء قياس التدفق الخلوي. مثل كما هو موضح في الشكل 4 أ ، مقارنة بالمجموعة الضابطة ، النسبة المئوية لخلايا Huh7 و HepG2 في مرحلة G0 / G1 تم تخفيضه بشكل ملحوظ بعد علاج ECH بطريقة تعتمد على الجرعة (p<0.01), and="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" the="" s="" phase="" was="" gradually="" increased="" after="" ech="" treatment="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01), but="" there="" was="" no="" change="" of="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" g2/m="" phase="" after="" ech="" treatment="" (p="">0.05)، مما يشير إلى أن ECH تسبب في المرحلة S القبض على خلايا Huh7 و HepG2. بالإضافة إلى ذلك ، مع زيادة جرعة ECH ، معدل موت الخلايا المبرمج من Huh7 وزادت خلايا HepG2 تدريجيا مقارنة ب المجموعة الضابطة (الشكل 4 ب، ص<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" induced="" the="" apoptosis="" of="" huh7="" and="" hepg2="">

آثار ECH على مسار TGF-β1 / Smad

من المعروف أن مسار إشارات TGF-β1 / Smad جيد تشارك في موت الخلايا المبرمج. من أجل التحقيق في آلية موت الخلايا المبرمج الناجم عن ECH في خلايا HepG2. كان التعبير عن مسار إشارات TGF-β1 / Smad الكشف عن. بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، وجدنا أن علاج ECH يقلل بشكل ملحوظ من التعبير مستويات TGF-β1 و Smad3 في كل من mRNA (الشكل 5 أ) و مستويات البروتين (الشكل 5 ب) ، وتنظيمها بشكل ملحوظ التعبير عن Smad7 بطريقة تعتمد على الجرعة في كل من الحمض النووي الريبوزي المرسال ومستويات البروتين (p<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" inhibited="" the="" activation="" of="" the="" tgf-β1/smad="" signaling="">

كان TGF-β1 هدفا مباشرا ل miR-503-3p

بالإضافة إلى ذلك ، أداة التنبؤ عبر الإنترنت Starbase v2. أظهر أن TGF-β1 كان هدف محتمل من miR-503-3p (الشكل 6 أ). لوسيفيراز أظهرت نتائج فحص الجينات للمراسل أن نشاط luciferase لخلايا HepG2 وخلايا Huh7 شارك في النقل مع miR-503-3p تقليد و TGF-β1-WT تم تخفيضه بشكل ملحوظ ، ولكن ليس الخلايا التي تم نقلها بشكل مشترك مع miR-503-3p تقليد و TGF-β1-MUT (الشكل 6b، p<0.01). similarly,="" the="" luciferase="" activity="" of="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-="" mut="" was="" signifcantly="" increased,="" but="" not="" the="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-wt="" (fig.="" 6c,=""><0.01). furthermore,="" the="" expression="" levels="" of="" tgf-β1="" were="" signifcantly="" reduced="" in="" the="" mir-503-3p="" mimic="" group="" compared="" with="" that="" in="" the="" nc="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.01), but="" signifcantly="" increased="" in="" the="" mir-503-3p="" inhibitor="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.05). these="" results="" suggested="" that="" tgf-β1="" was="" a="" direct="" target="" of="" mir-503-3p.="" to="" further="" investigate="" whether="" mir-503-3p="" mediated="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="" cancer,="" the="" expression="" of="" mir-503-3p="" was="" detected="" in="" liver="" cancer="" tissues="" and="" it="" showed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" were="" decreased="" in="" liver="" cancer="" tissues="" compared="" with="" that="" in="" normal="" liver="" tissues="" (fig.="" 6f,=""><0.01). moreover,="" the="" expression="" levels="" of="" mir503-3p="" were="" further="" decreased="" in="" metastasis="" liver="" cancer="" tissues="" than="" that="" in="" nonmetastatic="" liver="" cancer="" tissues="" (fig.="" 6g,=""><0.01). the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" were="" gradually="" increased="" after="" ech="" exposure="" (fig.="" 6e,=""><0.05,><0.01). taken="" together,="" these="" results="" suggest="" that="" mir-503-3p/tgf-β1="" may="" mediate="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="">

تأثير ECH على أنشطة السيتوكروم C و caspases

كما هو موضح في الشكل 7 أ ، مقارنة بالمجموعة الضابطة ، نحن وجدت أن علاج ECH أدى إلى انخفاض كبير في مستويات التعبير عن Bcl-2 في جرعة تعتمد على الطريقة (ع)<0.01,><0.001), while="" the="" expression="" levels="" of="" bax="" were="" signifcantly="" increased="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01,><0.001). it="" was="" demonstrated="" that="" bcl-2="" and="" bax="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells.="" in="" addition,="" the="" expression="" levels="" of="" cyto="" c,="" caspase-8,="" and="" caspase-3="" were="" signifcantly="" increased="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" (fig.="" 7b,=""><0.01,><0.001), indicating="" that="" the="" release="" of="" cyto="" c="" and="" the="" activation="" of="" caspase-8="" and="" caspase-3="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="">

مناقشة

الاستئصال الجراحي هو طريقة العلاج الرئيسية ل المرضى الذين يعانون من سرطان الكبد ، ومعدل التكرار والانبثاث بعد استئصال الكبد مرتفع [18 ، 19]. في هذا دراسة ، وجدنا أن ECH له تأثير مثبط معين على أورام الكبد ، ويوفر عاملا آمنا وفعالا مضادا للأورام لسرطان الكبد. أثبتت الممارسة السريرية أن الطب الصيني التقليدي يمكن أن يكون فعالا تخفيف الأعراض السريرية لمرضى سرطان الكبد [20]. بالنسبة ل ECH ، أظهرت الدراسات أن ECH له تأثيرات مضادة للأكسدة ومضادة للاكتئاب ومضادة للالتهابات ومضادة للفيروسات ومضادة للأورام ومضادة للبكتيريا [21 ، 22]. في سرطان القولون والمستقيم ، ECH يمكن أن تحفز موت الخلايا المبرمج للخلايا السرطانية عن طريق زيادة التنظيم كاسباز-3 وإنزيمات إصلاح الحمض النووي المنقسم للحث على أكسدة الحمض النووي [23]. في هذه الدراسة ، وجدنا لأول مرة الوقت الذي يمارس فيه ECH نشاطا مضادا للورم عبر محور miR503-3p / TGF-β1 / Smad في سرطان الكبد.

المرحلة بين الخلايا من دورة الخلية من الخلايا حقيقية النواة يمكن تقسيمها إلى G1 و S و G2. نقاط التنظيم من دورة الخلية في فترات مختلفة تنظمها عوامل تنظيمية مختلفة [24]. وجدت هذه الدراسة أن النسبة المئوية لخلايا Huh7 و HepG2 في G0 / G1 و تم تقليل مرحلة G2 / M ، وتم زيادة النسبة المئوية للخلايا في المرحلة S بعد ECH ، مما يشير إلى أن ECH تسبب في القبض على المرحلة S من خلايا Huh7 و HepG2. اختلال توازن موت الخلايا المبرمج هو واحد من الآليات الرئيسية ل الأورام البشرية. وقد أفيد أن المضادة للأورام أدوية العلاج الكيميائي عموما تحفز موت الخلايا المبرمج من الخلايا السرطانية والسيطرة على تطور السرطان. في دراستنا، وجدنا أيضا أن ECH يمكن أن تحفز خلايا سرطان الكبد موت الخلايا المبرمج بطريقة تعتمد على الجرعة، مما يشير إلى أن قد يكون موت الخلايا المبرمج المحرض أحد الآليات الأساسية ل ECH على سرطان الكبد.

تلعب MiRNAs أدوارا رئيسية في تنظيم خلية HCC الانتشار ، الدورة ، موت الخلايا المبرمج ، الهجرة من خلال التفاعلات مع مسارات الإشارات والجزيئات المختلفة [25, 26]. على سبيل المثال ، وجد أن miR-26a مرتفع للغاية. يتم التعبير عنها في خلايا الكبد الطبيعية ، ولكنها ذات دلالة واضحة انخفاض التنظيم في خلايا سرطان الكبد ويمنع الانتشار [27]. الإفراط في التعبير عن miR-503-3p يحفز موت الخلايا المبرمج لخلايا سرطان الرئة ويمنع غزو الخلايا والهجرة [28]. بالإضافة إلى ذلك ، أظهر عدد كبير من الدراسات أن مسار إشارات TGF-β1 / Smad يلعب دورا محوريا في تطور سرطان الكبد [7]. علاوة على ذلك ، عندما يستمر سرطان الكبد في التقدم ، يقال إن التعبير عن TGF-β1 يتم تدريجيا زيادة [29]. في هذه الدراسة ، وجدنا أن ECH خفضت تنظيم TGF-β1 و Smad3 ، و Smad7 المنظم ، مما يدل على أن ECH منعت تفعيل مسار إشارات TGF-β1 / Smad. في هذه الدراسة ، نحن وجدت أن التعبير عن miR-503-3p وجد ل يتم تقليلها في أنسجة ورم الكبد ، ولكن علاج ECH زيادة التعبير عن miR-503-3p في Huh7 و خلايا HepG2. بالإضافة إلى ذلك ، وجدنا أن TGF-β1 كان تم تحديده كهدف محتمل ل miR-503-3p. شجعت ECH على تفعيل إشارات TGF-β1/Smad المسار وزيادة مستويات التعبير من باكس / Bcl-2. تشير هذه النتائج إلى أن miR-503-3p / TGF-β1 / Smad مسار الإشارات قد يتوسط آثار ECH على سرطان الكبد. وقد عرف أن زيادة باكس/ قد تتسبب نسبة Bcl-2 في أن يكون Cyto C في الميتوكوندريا صدر في السيتوبلازم. يتفاعل Cyto C مع Caspase-8 ويشكل جسما مستنفدا يقوم بعد ذلك بتجنيد وينشط Caspase-3 ، الذي يسبب سلسلة Caspases ويعزز موت الخلايا [30]. في هذه الدراسة ، وجدنا أن ECH قلل من التعبير عن Bcl-2 وزاد تعبير باكس ، سيتو سي ، كاسباز-8 ، وكاسباز-3. تشير هذه النتائج إلى أن ECH يمكن أن يصلح الميتوكوندريا الإصابة إلى حد ما.

استنتاج في هذه الدراسة ، وجدنا أن علاج ECH يثبط الانتشار والغزو والهجرة، وحفزت موت الخلايا المبرمج لخلايا سرطان الكبد. الآلية الأساسية من علاج ECH على خلايا سرطان الكبد وجد أن يكون المتعلقة بمسار إشارات miR-503-3p / TGF-β1 / Smad. ستوفر هذه الدراسة أساسا تجريبيا معينا لأبحاث ECH على مكافحة الورم. تجدر الإشارة إلى أن الدراسة الحالية محدودة بسبب نقص الحيوانات التجارب. لذلك ، فإن دراستنا المستقبلية ستؤدي تجارب على الحيوانات لزيادة تأكيد النتائج التي توصلنا إليها.

فوائد سيستانش الصحراءحماية الكبد.

لمزيد من المعلومات، يرجى الضغط هنا.