إشيناكوسيد يحسن إصابة الكبد السكري

الاتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

لوه يانغ ، شيانغ تشانغ ، مين لياو ، يارونغ هاو *

تجريدي

يهدف:إشيناكوسيد (ECH) هو مركب طبيعي مستخرج من جذع نبات سيستانش ديزرتيكولا ، وقد خصائص بيولوجية مهمة ، بما في ذلك مضادات الأكسدة ، المضادة للالتهابات ، الواقية العصبية ، المضادة للأورام ، الكبد الواقي ، والخصائص المناعية. في هذه الدراسة ، كنا نهدف إلى استكشاف الآثار الوقائية و آليات ECH على إصابة الكبد السكري في الفئران DB / DB.

الطرق الرئيسية:بشكل عام ، تم تخصيص الفئران DB / DB البالغة من العمر 6 أسابيع (n = 20) بشكل عشوائي لمجموعتين: نموذج السكري المجموعة (مجموعة DB / DB ، الإدارة داخل المعدة للمحلول الملحي الطبيعي ، n = 10) والمجموعة المعالجة ب ECH (DB / DB + ECH المجموعة، ن = 10). بالإضافة إلى ذلك ، تتكون مجموعة التحكم العادية من فئران ديسيبل / م عمرها 6 أسابيع (مجموعة ديسيبل / م ، عادية الإدارة المالحة داخل المعدة ، n = 10). تم إعطاء ECH مرة واحدة في اليوم لمدة 10 أسابيع. الوزن والصيام تم قياس نسبة الجلوكوز في الدم (FBG) كل أسبوعين. تم استخدام تلطيخ HE وتلطيخ الزيت O لتقييم أنسجة الكبد التغيرات المرضية وتراكم الدهون على التوالي. تم استخدام تلطيخ التألق المناعي ، واللطخة الغربية ، وتحليل RT-PCR للكشف عن التعبير عن مكونات محور إشارات AMPK / SIRT1.

النتائج الرئيسية:أظهرت النتائج أن إدارة إشيناكوسيد لمدة 10 أسابيع يمكن أن تتحسن بشكل كبير إصابة الكبد ومقاومة الأنسولين في الفئران DB / DB (p< 0.01).="" also,="" echinacoside="" treatment="" helped="" to="" reduce="" blood="" lipids="" and="" blood="" glucose="" (p="">< 0.01).="" moreover,="" ech="" activated="" ampk/sirt1="" signaling,="" upregulated="" peroxisome="" proliferator-activated="" receptor="" gamma="" co-activator="" 1="" alpha="" (pgc-1α),="" proliferator-activated="" receptor-α="" (pparα),="" carnitine="" palmitoyltransferase-1a="" (cpt1a)="" in="" db/db="" mice="" (p=""><>

اهميه:يمكن استثارة تأثير ECH عن طريق تنشيط مسار الكبد AMPK / SIRT1 و العوامل النهائية لتحسين السمنة ومقاومة الأنسولين وخلل شحوم الدم.

cistanche redditيحسنالسمنة ، مقاومة الأنسولين ، وخلل شحوم الدم.

1. مقدمة

داء السكري من النوع 2 (T2DM) هو مرض استقلابي مزمن و تهديد خطير للصحة البدنية والعقلية للإنسان. يمكن أن يسبب تلف أعضاء متعددة، بما في ذلك إصابة الكبد. الكبد الدهني غير الكحولي المرض (NAFLD) هو إصابة الكبد الأكثر شيوعا [1,2]. مفرط تراكم الدهون في خلايا الكبد يعطل عملية التمثيل الغذائي و يسبب الالتهاب وتليف الكبد وحتى سرطان الكبد [3,4]. ال لا يزال التسبب في المرض غير واضح. على الرغم من وجود انتشار كبير لمضاعفات الكبد المهمة سريريا في المرضى الذين يعانون من T2DM ، غالبا ما يتم تجاهلها في إعداد العلاج. المستخدمة حاليا تشمل عوامل علاج مرض السكري الميتفورمين والسلفونيل يوريا والثيازوليدينديون (TZDs) ومثبطات ثنائي ببتيديل ببتيداز-4 (DPP-4). ومع ذلك ، فإن معظم هذه العوامل تسبب اختلال وظائف الكبد وليست كذلك. موصى به في المرضى الذين يعانون من قصور الكبد ، مما يعني الحاجة إلى التحقيق في العوامل ذات الكفاءة العلاجية والحدث السلبي المنخفض ملف تعريف. أظهرت الدراسات خصائص مضادة للأكسدة ومضادة للالتهابات ومضادة للأورام وواقية من الكبد ومناعية للإشنكوسيد (ECH) ، المكون الرئيسي ل Cistanche deserticola [5]. علاوة على ذلك ، تم تنشيط مسار كيناز البروتين المنشط AMP (AMPK) معترف بها باعتبارها مفتاح استقلاب الطاقة الخلوية الرئيسي المرتبط مع تنظيم الدهون في الكبد وهدف علاجي ل NAFLD. AMPK يعزز البروتين التنظيمي لإسكات الثدييات-1 (SIRT1) النشاط عن طريق زيادة مستويات NAD+ الخلوية ، مما يؤدي إلى إزالة الأسيتيلات وتعديل نشاط أهداف SIRT1 النهائية التي تشمل منشط مستقبلات البيروكسيسوم المنشط γ 1α (PGC-1α) [6]. بسبب العديد من الوظائف الإيجابية في كل من الدهون الكحولية أمراض الكبد (AFLD) و NAFLD ، تمت دراسة SIRT1 على نطاق واسع بين عائلة سيرت. البروتين هو منظم رئيسي للدهون والجلوكوز التمثيل الغذائي ويمكن أن يحسن حساسية الأنسولين في الكبد والأنسجة الأخرى ويقلل من التنكس الدهني الكبدي [7]. ينتمي α PPAR إلى PPARs ، وهي فصيلة فرعية من مستقبلات الهرمونات النووية ، تحسن PPAR-α استقلاب الدهون من خلال الميتوكوندريا والبيروكسيديز الأحماض الدهنية بيتا الأكسدة، بوساطة CPT1A. الفئران ديسيبل / ديسيبل هي السمنة التلقائية النوع 2 الفئران السكرية. مع تقدم هذه الفئران في العمر ، قد يكون هناك تدريجي مظهر من مظاهر حالات مرض السكري مثل الشره المرضي والسمنة ، واضحة ارتفاع السكر في الدم ، فرط شحميات الدم ، ومقاومة الأنسولين [8]. التسبب في المرض مشابه لتلك التي لوحظت في المرضى الذين يعانون من T2DM. هذه الدراسة افترض التأثير العلاجي ل ECH على إصابة الكبد الناجمة عن T2DM والوساطة في هذا التأثير من خلال تفعيل مسار AMPK / SIRT1 ومؤثراتها النهائية. تم استخدام الفئران DB / DB ك T2DM نموذج إصابة الكبد ، وتم إعطاء ECH داخل المعدة.

2. المواد والأساليب

2.1. التجارب

تم اعتبار كبد الفئران المصابة بالسكري من النوع 2 DB / DB كنموذج لإصابة الكبد T2DM التلقائية ، تم استخدام الفئران ديسيبل / م كعنصر تحكم تم استخدام المجموعة ، والفئران المصابة بالسكري db / db كمجموعة نموذجية ومجموعة ECHtreated (ذكر ، 6 أسابيع من العمر ، درجة SPF) مع 10 فئران في كل منها مجموعة. تم شراء جميع الفئران من جامعة نانجينغ (نانجينغ) معهد الطب الحيوي، الصين؛ شهادة الإنتاج الحيواني رقم: SCKK (Su) 2015–0001). تم إيواء الحيوانات (n = 5 لكل قفص) في غرفة المختبر المركزي في مستشفى رنمين بجامعة ووهان (SPF) في ظل الظروف القياسية لدرجة الحرارة (22 ◦C ± 2 ◦C) ، الرطوبة النسبية (60٪)، ودورة الضوء/الظلام (12 ساعة/12 ساعة)، مع الإعلان الوصول إلى مياه الشرب والأعلاف أثناء التجربة فترة 10 أسابيع. تم إجراء التجارب وفقا ل المبادئ التوجيهية لأخلاقيات التجارب الموصى بها من قبل مستشفى رنمين بجامعة ووهان.

2.2. الأدوات الرئيسية والكواشف

ون تاتش الترا الجلوكوز في الدم وشرائط اختبار الجلوكوز في الدم (LifeScan Inc. ، Johnson & Johnson) ؛ أرنب مضاد للإنسان وحيد النسيلة الأجسام المضادة SIRT-1 (#9475; شركة CST في الولايات المتحدة)؛ أمبك (Ab80039) ، p-AMPK (Ab23875) ، PGC-1α (Ab54481) ، PPAR-α (Ab8934) ، و GAPDH (Ab37168 ؛ وكلها من شركة Abcam) ؛ CPT1A (15184-1-AP; ووهان Sanying التكنولوجيا الحيوية المحدودة) ؛ تركيز بروتين BCA مجموعة أدوات الكشف (Biyuntian التكنولوجيا الحيوية المحدودة) ؛ SDS-PAGE هلام إعداد عدة (جوجل التكنولوجيا الحيوية المحدودة )؛ وتم استخدام مجموعة النسخ العكسي RT-PCR (تاكارا ، اليابان) للتجارب.

2.3. تجميع الحيوانات وإدارتها

قبل بدء التجربة ، تم عزل الفئران البالغة من العمر 6 أسابيع لمدة 1 أسبوع وتغذيتها بشكل تكيفي لمدة 1 أسبوع. كانت الفئران ديسيبل / ديسيبل بشكل عشوائي مرقمة ومخصصة إما لمجموعة نماذج مرضى السكري (db/db المجموعة ، n = 10) أو المجموعة المعالجة ب echinacoside (db / db + مجموعة ECH ، n = 10)، وتم تخصيص 10 ديسيبل/م من الفئران لمجموعة التحكم العادية (DB/ م المجموعة ، ن = 10). في عمر 8 أسابيع ، والسيطرة الطبيعية ومرض السكري تم إدارة الفئران النموذجية داخل المعدة المالحة العادية (0.05 مل / 10 جم) ، وكانت الفئران الجماعية المعالجة ب ECH داخل المعدة تدار 300 مغ / كغ / يوم ECH. خلال هذه الفترة ، كانت الفئران السماح بالوصول إلى الطعام والماء لمدة 10 أسابيع.

2.4. الحالة العامة والجلوكوز في الدم الصائم

الظروف الصحية، وتناول الطعام ومياه الشرب، واللمعان من المعطف لوحظ خلال التجربة. بدءا من في الأسبوع الأول من التجربة ، تم قياس وزن جسم الفئران كل 2 أسابيع. عينات الدم لاختبار نسبة الجلوكوز في الدم الصيام كانت تم الحصول عليها من الوريد الذيل. بعد علاج ECH لمدة 10 أسابيع ، اختبار تحمل الجلوكوز عن طريق الفم (OGTT) تم تنفيذها. بعد الصيام بين عشية وضحاها ، أعطيت الفئران الجلوكوز (2 جم / كجم من وزن الجسم) ، وكانت تركيزات الجلوكوز في الدم تم تقييمه قبل (0 دقيقة) و 15 و 30 و 60 و 120 دقيقة بعد تناول الجلوكوز. تم تحديد المساحة تحت المنحنى (AUC) باستخدام GraphPad بريزم 7.0.

2.5. جمع العينات

بعد 10 أسابيع من التدخل، تم حجب الطعام ولكن ليس الماء لمدة 12 ساعة ، تم تخدير الحيوانات للحصول على عينات دم من الضفيرة المدارية الرجعية. تم فصل المصل من الدم الذي تم جمعه بسرعة وتخزينه عند -80 ◦C لتحديد المؤشر الكيميائي الحيوي. بعد الحصول على عينات الدم ، تم قتل الفئران وتطويقها بشكل طبيعي ملح. تم تشريح الكبد ووزنه. كان مؤشر الكبد (LI) محسوبة باستخدام الصيغة التالية: LI = [وزن الكبد (ز)/الجسم الوزن (ز)] × 100٪. تم الاحتفاظ بجزء من أنسجة الكبد الطازجة ل التحليل المرضي ، وتم وضع ما تبقى من أنسجة الكبد في النيتروجين السائل لمدة 1 ساعة ثم تخزينها في − 80 ◦C لبروتين المتابعة الكشف وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (PCR).

تجربة سيستانشاستخرج

2.6. الفحص النسيجي المرضي للكبد

تم فصل أنسجة الكبد الطازجة بسرعة ، وتم إصلاح قسم في 4 ٪ من بارافورمالديهايد لمدة 24 ساعة ، تليها الجفاف و التضمين في البارافين. تم إزالة الشمع من الأقسام بالزيلين و إعادة ترطيبها من خلال الإيثانول المتدرج في الماء. كانت النواة والسيتوبلازم ملطخة بالهيماتوكسيلين والإيوسين (HE) ومختومة ب اللثة المحايدة بعد الجفاف. جزء آخر من الأنسجة المستخدمة الأمثل قطع مركب درجة الحرارة (OTC) شرائح مضمنة ل Oil Red-O تلطيخ.

2.7. الكشف عن المؤشرات البيوكيميائية لأنسجة المصل والكبد

تم إرسال عينات مصل الدم إلى قسم مختبر رنمين مستشفى جامعة ووهان للتحليل الكيميائي الحيوي الآلي. ال وشملت مؤشرات الدهون في الدم الدهون الثلاثية (TG) ، والكوليسترول الكلي (TC) ، كوليسترول البروتين الدهني عالي الكثافة (HDL–C)، بروتين دهني منخفض الكثافة الكوليسترول (LDL-C). وشملت مؤشرات وظائف الكبد بيروفيك الجلوتاميك الترانساميناس (ALT) والترانساميناس الأكسالوسيتيك الجلوتاميك (AST). تم تحديد مستويات الأنسولين الصائم (FINS) باستخدام مجموعة ELISA (شركة ميميان البيولوجية الصين). تم بناء منحنى قياسي استنادا إلى تركيز العينة القياسية وكثافتها البصرية (OD) ؛ ثم تم حساب تركيز العينة من المنحنى القياسي. وأخيرا، مؤشر حساسية الأنسولين (ISI) ومؤشر مقاومة الأنسولين (HOMA-IR) تم حسابه على النحو التالي: ISI = 1/(FPG × FINS)؛ هوما-IR = FPG × FINS/22.5.

2.8. تعبيرات AMPK و p-AMPK و SIRT-1 و PGC-1 α و PPAR-α و CPT1A في أنسجة الكبد تم الكشف عنها باستخدام لطخة غربية

تم تقطيع أنسجة الكبد المجمدة إلى أقسام. للبروتين الكلي استخراج ، تمت إضافة 1 مل RIPA lysate إلى قسم 50 جم وتقديمه إلى جهاز الطرد المركزي عند 13000 دورة في الدقيقة عند 4 ◦C لمدة 5 دقائق، متبوعا ب جمع من supernatant. تم تحديد تركيز البروتين باستخدام مجموعة تحديد تركيز البروتين BCA. حوالي 40 ميكروغرام من تم أخذ عينات من البروتين من كل مجموعة ونقلها إلى غشاء فلوريد البولي فينيلدين (PVDF). تم تصنيف الأغشية مع الأجسام المضادة الثانوية المشار إليها في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة و المتقدمه النمو. تم تحليل القيم الرمادية لكل نطاق بروتين ، و GAPDH كمرجع داخلي للتحليل شبه الكمي.

2.9. تم الكشف عن تعبيرات p-AMPK و SIRT1 في أنسجة الكبد بواسطة تلطيخ التألق المناعي

تم إصلاح أنسجة الكبد في 4 ٪ من بارافورمالدهيد ، جزءا لا يتجزأ من البارافين ، ثم تقسيمها إلى شرائح كبد سميكة 10 ميكرومتر. إضافة 3٪ BSA لمدة 30 دقيقة. احتضان الشرائح مع الأجسام المضادة الأولية بين عشية وضحاها في 4 ◦ درجة مئوية. قم بتغطية الأنسجة الموضوعية بالأجسام المضادة الثانوية ، واحتضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 50 دقيقة في حالة داكنة. ثم احتضان مع حل DAPI في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق ، تبقى في مكان مظلم. أضف عفوية كاشف التبريد الفلوري لاحتضان لمدة 5 دقائق. مجهريه الكشف عن الصور وجمعها بواسطة المجهر الفلوري.

2.10. تعبيرات α SIRT-1 و PGC-1 و PPAR-α و CPT1A mRNA في تم الكشف عن أنسجة الكبد بواسطة RT-PCR

حوالي 100 ملغ من أنسجة الكبد المخزنة في − 80 ◦C من كل مجموعة تم استخدامه. تم استخراج الحمض النووي الريبي الكلي باستخدام مجموعة Trizol. الأشعة فوق البنفسجية تم استخدام طريقة امتصاص (UV) لتحديد جودة الحمض النووي الريبي ، و ثم تم نسخ هذا الحمض النووي الريبي عكسيا إلى cDNA. SYBR الأخضر qPCR تم تشغيله على نظام الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي Bio-Rad CFX96 Touch (مختبرات بيو راد، هرقل، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية). تسلسل التمهيدي ل تم تصميم SIRT-1 و PGC-1 α و PPAR-α و CPT1A بواسطة التمهيدي برنامج Premier5.0 وتوليفه بواسطة Wuhan Seville Biotechnology المحدودة ، مع جين مدبرة المنزل GAPDH بمثابة الداخلية مرجع. كانت ظروف التضخيم على النحو التالي: ما قبل التمسخ عند 95 درجة مئوية ، وتمسخ عند 95 درجة مئوية ، والتلدين عند 60 درجة مئوية (30 ثانية)، بإجمالي 40 دورة. في نهاية التفاعل ، فإن الخصوصية من تضخيم PCR تم تحديده من خلال تحليل منحنى الذوبان ، تمت قراءة قيمة Ct ، وكان التعبير النسبي للجين المستهدف mRNA محسوبة بطريقة 2-ΔΔCt. يتم عرض تسلسلات التمهيدي في الجدول 1.

2.11. الأساليب الإحصائية

تم استخدام البرنامج الإحصائي SPSS22.0 لمعالجة البيانات و التحليل الإحصائي و GraphPad Prism7.0 للرسم. عاده يتم عرض البيانات الموزعة كمتوسط ± الانحراف المعياري (التباين x ± ق). تم إجراء المقارنة الزوجية بين المجموعات بواسطة عامل واحد تحليل التباين. كانت أهمية الاختلافات بين المجموعات تم تحديدها إما مع اختبار الاختلافات الأقل أهمية (LSD) (تجانس التباينات) أو اختبار تو-اختبار دونيت (غير متجانس) ل مقارنات متعددة. إذا لم تتوافق البيانات مع التوزيع الطبيعي ، فإن الفرق الوسيط والربعي ، وكذلك الفرق غير البارامتري تم استخدام الاختبار (اختبار Kruskal-Wallis). قيمة P ل<0.05 was="" considered="" statistically="">

فوائد الذكور cistancheمن أجلكلية

3. النتائج

3.1. ECH يحسن الحالة الصحية العامة و LI من الفئران ديسيبل / ديسيبل

طوال التجربة ، كانت الفئران مجموعة ديسيبل / م بصحة جيدة و لمعان معطف نشط ومعروض. أظهرت الفئران مجموعة ديسيبل / ديسيبل الإفراط في تناول الماء والأعلاف ، والسمنة ، والخمول ، والانحناء ، والشعر الخشن الداكن. بالمقارنة مع الفئران مجموعة ديسيبل / ديسيبل ، ديسيبل / ديسيبل + أظهرت الفئران مجموعة ECH ظروفا محسنة في جميع الدراسات. علاوة على ذلك ، كان وزن الجسم ومؤشر الكبد أقل من مؤشر الفئران مجموعة نموذج السكري (P< 0.05)="" (table="">

الجدول 1 RT الفلورية الكمية PCR الاشعاج.

الجدول 2 وزن الجسم ووزن الكبد الرطب ومؤشر الكبد في الفئران من كل مجموعة.

3.2. ECH يقلل من نسبة الجلوكوز في الدم الصيام ومقاومة الأنسولين و يزيد من تحمل الجلوكوز وحساسية الأنسولين في الفئران ديسيبل / ديسيبل

مع تقدم التجربة ، مقارنة بمجموعة db / m ، زيادة نسبة الجلوكوز في الدم الصائم في مجموعة db / db بشكل كبير (P< 0.01)="" (fig.="" 1a).="" in="" contrast,="" blood="" glucose="" decreased,="" and="" glucose="" tolerance="" and="" insulin="" sensitivity="" improved="" in="" the="" db/db="" +="" ech="" group="" (p="">< 0.01)="" (fig.="" 1b,="">

3.3. ECH يخفف من الاضطراب الهيكلي في الكبد ويخفف من الأمراض تغييرات مثل تراكم الدهون في الفئران ديسيبل / ديسيبل

كشف تلطيخ HE أن حجم خلايا الكبد ومورفولوجيتها في ديسيبل / م كانت المجموعة طبيعية ، وهياكل الفصيصات الكبدية والجيوب الأنفية كانت واضحة. كان هناك تنكس خلايا الكبد واسعة النطاق في ديسيبل / ديسيبل المجموعة, زيادة حجم خلايا الكبد, حجم نووي متفاوت, خلية بؤرية النخر ، وتسلل الخلايا الالتهابية في منطقة البوابة. في ديسيبل / ديسيبل + مجموعة ECH ، كان هناك انخفاض كبير في قطرات الدهون والخلايا الالتهابية ، وتم تخفيف إصابة الخلايا الميتة (الشكل 2A). كشف التحليل المجهري للزيت الأحمر O تلطيخ أنسجة الكبد عن وجود نسيج أنيق ترتيب الخلايا ، مع عدم وجود قطرات دهنية أو تغيرات مرضية ، في المجموعة ديسيبل/م. في مجموعة db / db ، كان للخلايا ترتيب غير منظم ، وكان هناك عدد كبير من جزيئات الدهون ذات الأحجام المختلفة في السيتوبلازم. بالمقارنة مع مجموعة ديسيبل / ديسيبل ، فإن عدد قطرات الدهون في كانت مجموعة db / db + ECH أقل بكثير ، مما يشير إلى إمكانية التأثير الوقائي ل ECH على الكبد (الشكل 2B ، C).

الشكل 1. تحسين ECH تحمل الجلوكوز وتخفيف مقاومة الأنسولين للفئران ديسيبل / ديسيبل.

3.4. ECH يحسن استقلاب الدهون ووظائف الكبد في الفئران ديسيبل / ديسيبل

مقارنة مع مجموعة ديسيبل / م ، مستويات الدهون في الدم من TC ، TG ، و تم زيادة LDL بشكل كبير ، وتم تقليل HDL بشكل كبير في المجموعة ديسيبل/ديسيبل (P< 0.01).="" however,="" tc,="" tg,="" and="" ldl="" levels="" were="" decreased,="" and="" the="" hdl="" level="" was="" increased="" in="" the="" db/db="" +="" ech="" group="" compared="" with="" the="" db/db="" group="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01)="" (fig.="" 3a).="" compared="" with="" the="" db/m="" group,="" alt="" and="" ast="" levels="" were="" significantly="" increased="" in="" the="" db/db="" group="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01).="" the="" ast="" and="" alt="" levels="" were="" significantly="" lower="" in="" the="" db/db="" +="" ech="" group="" than="" in="" the="" db/="" db="" group="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01)="" (fig.="" 3b,="">

الشكل 2. ECH الموهن اضطراب هيكلي في أنسجة الكبد وتراكم الدهون في الفئران مع NAFLD.

3.5. تأثير ECH على تنشيط مسار AMPK / SIRT1 في مجموعات مختلفة من الفئران

وفقا لنتائج اللطخة الغربية ، مقارنة بمجموعة db / m ، p-AMPK / AMPK ، SIRT1 ، PGC-1α ، PPAR-α ، و CPT1A مستويات البروتين في كانت أنسجة الكبد أقل بكثير في مجموعة ديسيبل / ديسيبل (P< 0.01).="" however,="" the="" protein="" levels="" were="" significantly="" higher="" in="" db/db="" +="" ech="" group="" than="" in="" db/db="" group="" (p="">< 0.01)="" (fig.="" 4a,="" b).="" besides,="" immunofluorescence="" staining="" showed="" that="" the="" expression="" of="" p-ampk="" and="" sirt1="" was="" found="" obviously="" in="" the="" liver="" tissue="" of="" ech-treated="" mice="" than="" db/db="" group="" (fig.="">

3.6. تأثير إشيناكوسيد على التعبير عن مسار SIRT1 mRNA في الكبد من مجموعات مختلفة الفئران

وفقا لنتائج RT-PCR ، SIRT1 و PGC-1α و PPAR-α و CPT1A انخفضت المستويات بشكل ملحوظ في مجموعة ديسيبل / ديسيبل مقارنة مع ديسيبل / م مجموعة. ومع ذلك ، زادت هذه المستويات بشكل كبير في db / db + ECH المجموعة مقارنة بمجموعة ديسيبل / ديسيبل (الشكل 5).

الشكل 3. الفهارس المتعلقة بالمصل في الفئران من كل مجموعة.

4. المناقشة

مرض السكري هو مصدر قلق طبي كبير في العالم ، وعدد من المتوقع أن يرتفع عدد المصابين بداء السكري إلى حوالي 592 مليون شخص بحلول 2035 [9]. معدل انتشار مرض السكري ، في الغالب T2DM ، في الصين ، يظهر اتجاها متزايدا بشكل كبير [10,11]. يوجد مجمع سكني العلاقة بين T2DM وأمراض الكبد ، و NAFLD ، تتميز عن طريق ترسب الدهون المفرط في الكبد ، هو إصابة الكبد الأكثر شيوعا الناجمة عن T2DM وأمراض الكبد المزمنة الأكثر شيوعا في العالم [12,13]. تشير أبحاث الاختبارات الجينية السريرية إلى أن الجين المرتبط ب T2DM يرتبط بزيادة مؤشر كتلة الجسم وفرط كوليسترول الدم وانخفاض HDL-C ، مما يمنح خطرا أكبر للإصابة ب NAFLD [14]. يرتبط NAFLD ارتباطا وثيقا بمقاومة الأنسولين وخلل شحوم الدم و وبالتالي فهو منتشر بشكل كبير في المرضى الذين يعانون من T2DM و / أو السمنة. الرغم يبدو أن العديد من العوامل الأيضية مرتبطة بتطوير NAFLD ، لا يزال التسبب في المرض غير واضح ومعقد إلى حد كبير [15]. سيستانش deserticola هو نبات طفيلي معمر ينمو على جذور النباتات المثبتة للرمال. وفقا لدستور الأدوية الصيني ، Cistanche deserticola يستخدم كدواء تقليدي لعلاج أمراض الكلى والعقم [16,17]. في السنوات الأخيرة ، أكدت الدراسات أن Cistanche deserticola يمكن أن يمنع بشكل كبير زيادة الصيام وما بعد الأكل مستويات الجلوكوز في الدم في الفئران السكرية ، وتحسين مقاومة الأنسولين و دسليبيدميا، ويساعد على فقدان الوزن [18]. باعتبارها المكون الرئيسي ل Cistanche deserticola ، من المتوقع أن تساهم ECH بشكل أكبر في تحسين إصابات الكبد المرتبطة ب DM. كشفت نتائجنا التجريبية أن السمنة ويمكن أن يسبب مرض السكري إصابة الكبد في الفئران ، والتي تتميز بزيادات كبيرة في مستويات ALT و AST في الدم والأنسجة المرضية النموذجية التغييرات. ECH خفضت بشكل كبير LI والجلوكوز في الدم ، وانخفضت زادت مستويات TC و TG و LDL من مستويات HDL وحسنت الأنسولين حساسية. كشف الفحص النسيجي المرضي عن انخفاض خلايا الكبد تنكس التنكس الدهني وتسلل الخلايا الالتهابية في العلاج ب ech الفئران ، مما يؤكد أن العامل يمكن أن يحسن إصابة الكبد في الفئران السمينة والسكرية.

AMPK هو كيناز بروتين محفوظ للغاية موزع على نطاق واسع في الكائنات الحية ويسمى مستقبلات استقلاب الطاقة. يلعب دورا في تخفيف الإجهاد التأكسدي والالتهابات والانتشار وموت الخلايا المبرمج [19]. تنشيط الإنزيم بواسطة المنشطات غير المباشرة يجذب العلمية الاهتمام بعلاج مرض السكري والسمنة والسرطان وغيرها من عمليات التمثيل الغذائي ذات الصلة الاضطرابات [20,21]. يمكنه تنظيم استقلاب الدهون من خلال عدة طرق ، مثل تثبيط الأحماض الدهنية وتخليق الدهون الثلاثية ، تثبيط تخليق الكوليسترول ، وتعزيز أكسدة الأحماض الدهنية و التحلل [22]. في الكبد ، ينظم AMPK استقلاب الدهون عن طريق فسفرة.

عندما تزداد نسبة AMP إلى ATP داخل الخلايا ، يتم تنشيط AMPK ، مما يزيد من p-AMPK / AMPK ويزيد من تنظيم تعبير SIRT1 عن طريق زيادة مستويات NAD+ الخلوية [23,24]. SIRT1 ، يعتمد على NAD deacetylase ، وقد ثبت مؤخرا أن تكون مرتبطة بالفيزيولوجيا المرضية NAFLD [25]. يشارك الإنزيم في العديد من العمليات الفسيولوجية الخلوية ، مثل توازن الدهون والجلوكوز والأنسولين الحساسية ، وهو منظم رئيسي لعملية التمثيل الغذائي [26]. المرضى الذين يعانون من السمنة المفرطة ، خاصة أولئك الذين يعانون من مقاومة الأنسولين والسكري و NAFLD ، لديهم مستويات أقل من SIRT1 [27,28]. وقد درس برايس وآخرون دور SIRT1 في الوقاية من التنكس الدهني الكبدي ووجدت أن التعبير عن SIRT1 ينخفض في المرضى الذين يعانون من NAFLD [29]. دراسات أخرى أظهرت أن الضربة القاضية الخاصة بخلايا الكبد من SIRT1 يمكن أن تقلل من الدهون أكسدة الحمض والحث على التنكس الدهني والالتهاب في الكبد ، في حين أن الإفراط في التعبير عن SIRT1 يمكن أن يحسن استقلاب الدهون من خلال مسار PGC-1α [30]. ينظم SIRT1 نشاط PGC-1α ، و كلاهما أمر بالغ الأهمية للحفاظ على توازن الطاقة الخلوية. لذلك ، قد يكون SIRT1 وعوامل المصب PGC-1α هو الهدف الرئيسي من إصابة الكبد. PGC coactivator هو بروتين يمكن أن يرتبط بالنسخ العوامل أو المستقبلات النووية لزيادة نشاط النسخ [31]. تحتاج معظم عوامل النسخ إلى منشطات ، خاصة α PAR ، بشكل أساسي في الأنسجة المؤكسدة مثل الكبد وعضلة القلب والعضلات الهيكلية. ومن يمكن تنشيط النسخ الجيني الذي يعزز نقل الأحماض الدهنية و الأكسدة ، إنتاج الكيتون ، وتكوين الجلوكوز [32,33]. CPT1A هو إنزيم رئيسي يحد من المعدل في أكسدة الأحماض الدهنية. يتم تنظيم تعبيره من خلال آليات نسخ معقدة ، تتضمن العديد من عوامل النسخ والمنشطات ، بما في ذلك SIRT1 و PGC-1α و PPARα [34]. في هذه الدراسة ، وجدنا أنه تحت التركيز العالي ل نسبة الجلوكوز في الدم في مجموعة db / db ، تراكم الدهون في خلايا الكبد زيادة مع التنظيم النهائي لعوامل المصب من AMPK / SIRT1 التعبير عن مسار الإشارة; في المجموعة المعالجة ب ech ، كانت تعبيرات pAMPK / AMPK و SIRT1 و PGC-1α كبيرة زيادة، والتعبير عن عوامل المصب PPAR α و وزيدت CPT1A زيادة كبيرة، مما يشير إلى أن AMPK/SIRT1 يلعب محور الإشارة وعوامل المصب دورا مفيدا في علاج إصابة الكبد السكري (الشكل 6). ومع ذلك، استندت البيانات المقدمة هنا إلى تجارب داخل الجسم الحي؛ وبالتالي ، إضافية في المختبر هناك حاجة إلى دراسات لتأكيد تأثير ECH على AMPK / SIRT1 مسارات الإشارات والبروتينات المستجيبة.

بشكل عام ، يمكن ل ECH تنظيم نسبة الجلوكوز في الدم واستقلاب الدهون عن طريق تنظيم التعبير عن AMPK / SIRT1 وعوامل المصب الخاصة به ، وبالتالي تحسين إصابة الكبد السكري.

ECH cistancheيمكنتنظيم نسبة الجلوكوز في الدمواستقلاب الدهون.

لمزيد من المعلومات، يرجى الضغط هنا.