تأثيرات الصابونين من بذور الليتشي تشينينسيس سون على TGF - 1 و FN و SOCS -1 في الخلايا الطلائية الأنبوبية الكلوية تحت الجلوكوز المرتفع

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

هاي يانغ ني ، روي تشين ، هونغ نا زانغ ، زي بان

1 جامعة تشانغتشون للطب الصيني ، تشانغتشون ، الصين.

2 مستشفى Shunyi لمستشفى الطب الصيني في بكين ، بكين ، الصين.

يسلط الضوء

يقلل الصابونين من بذرة Litchi chinensis Sonn من موت الخلايا المبرمج للخلايا الأنبوبية الكلوية وإفراز TGF - 1 و FN.

الملخص

الهدف: دراسة تأثير السابونين من بذرة Litchi chinensis Sonn (SLS) على نمو وموت الخلايا المبرمج.بشريالكلىالخلايا الظهارية (HKC) المزروعة في نسبة عالية من الجلوكوز. الطريقة: تمت زراعة HKC في وسط DMEM / F12 مُكمل بـ 30 مليمول / لتر جلوكوز وتم معالجته باستخدام أو بدون SLS. في المجموعة العادية ، تمت إضافة وسيط DMEM / F12 متساوي القياس مع 5.5 مليمول / لتر جلوكوز. تم الكشف عن إفراز TGF - 1 والفيبرونيكتين (FN) بواسطة ELISA. تم الكشف عن موت الخلايا المبرمج بواسطة طريقة التلوين المزدوج Annexin V-FITC / PI. تم استخدام لطخة غربية لاكتشاف مستوى مثبط إشارات السيتوكين -1 (SOCS -1).

النتائج: أظهرت نتيجة ELISA أن إفراز TGF {0} و FN انخفض في مجموعات SLS مقارنة بتلك الموجودة في 3 0 مليمول / لتر مجموعات معالجة بالجلوكوز (P <{{ 9}}.="" 0="" 5).="" كان="" هناك="" موت="" الخلايا="" المبرمج="" للخلايا="" في="" المجموعة="" المعالجة="" بالجلوكوز="" 30="" مليمول="" لتر="" أكثر="" من="" المجموعة="" الطبيعية="" (p=""><0.01). بالمقارنة="" مع="" المجموعة="" المعالجة="" بالجلوكوز="" 30="" مليمول="" لتر="" ،="" انخفض="" موت="" الخلايا="" المبرمج="" لـ="" hkc="" بشكل="" ملحوظ="" في="" مجموعات="" sls="" (p=""><0.01). أظهرت="" اللطخة="" الغربية="" أن="" مستوى="" socs="" -1="" في="" مجموعة="" الجلوكوز="" المرتفع="" بالإضافة="" إلى="" sls="" انخفض="" (p=""><0.01) ،="" مقارنة="" بمجموعة="" الجلوكوز="">

الخلاصة: يمكن أن يقلل SLS من إفراز TGF - 1 و FN في HKC عن طريق تقليل ترسب المصفوفة خارج الخلية. كما قلل SLS بشكل كبير من موت الخلايا المبرمج لـ HKC عن طريق تثبيط مستوى SOCS -1. تشير هذه النتائج إلى دور SLS في منع تقدم التصلب الكبيبي.

الكلمات الرئيسية: سابونين ، بذور الليتشي تشينينسيس سون ، الجلوكوز ،الكلىالخلايا الظهارية ، TGF - 1 ، فيبرونيكتين ، موت الخلايا المبرمج

cistancheيمكن أن يعالجمرض كلويتحسنوظيفة الكلى

خلفية

اعتلال الكلية السكري (DN) هو واحد من أخطر مضاعفات مرض السكري مع ارتفاع معدل الإصابة والفتك ، ويتميز بالتصلب الكبيبي والتليف الخلالي الكلوي. بشرالكلىالخلايا الظهارية (HKC) هي الأهداف الرئيسية في DN وهي تفرز عددًا كبيرًا من السيتوكينات ، مثل TGF - 1 والفيبرونيكتين (FN) ، مما يؤدي إلى حدوث التليف الكبيبي والتليف الخلالي الكلوي. وفي الوقت نفسه ، تم الإبلاغ عن أن ارتفاع الجلوكوز يمكن أن يسرع موت الخلايا المبرمج HKC عن طريق زيادة مستوى مثبط إشارات السيتوكين -1 (SOCS -1) [1،2]. لذلك ، فإن تثبيط مستوى TGF - 1 و FN و SOCS -1 مهم لمنع تقدم التصلب الكبيبي. بذرة Litchi chinensis Somm (SLS) ، هي عشب صيني يتم توزيعه بشكل رئيسي في قوانغدونغ. تم تسجيل مقاطعتي فوجيان وجوانجشي في الصين لأول مرة في بينكاوجانجمو في عهد أسرة مينج الصينية (1518 م -1593 م). Saponin هو العنصر النشط لبذور Litchi chinensis Sony. بناءً على دراستنا السابقة ، تستكشف هذه الدراسة تأثير SLS على مستوى TGF - 1 و FN في HKC المزروع بجلوكوز مرتفع ، وموت الخلايا المبرمج لـ HKC ، والآلية الأساسية للوقاية من تصلب الكبيبات وعلاجه [ 3].

cistancheيمكن أن يعالجفشل كلوي حاد

المواد والطرق المواد

تم شراء SLS بنقاوة تزيد عن 98 بالمائة من Xianqingle Biological Co.، LTD (Xi'an ، الصين). تم شراء HKC من Shanghai Fuxiang Biotechnology Co.، Ltd (شنغهاي ، الصين) .DMEM / F12 متوسط ​​، جنين قياسي المصل البقري و التربسين كانا من Hyclone (الولايات المتحدة الأمريكية). كانت عائلة ثنائي ميثيل من سيجما (الولايات المتحدة الأمريكية). تم شراء مجموعة ELISA من شركة Shanghai Longton Biotechnology Company (شنغهاي ، الصين). إن مجموعة أنكسين V-FITC / PI لاكتشاف موت الخلايا المبرمج كانت من شركة Nanjing Kaiji Biotechnology Co.، Ltd (نانجينغ ، الصين).

ثقافة الخلايا

تم الحفاظ على HKC في DMEM / F12 مع 1 0 بالمائة من مصل العجل الجنيني وتم تربيته عند 37 درجة في جو رطب بنسبة 95 بالمائة من الهواء و 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون. تم هضم الخلايا بنسبة 0.25 بالمائة من التربسين بعد 2-3 أيام للاستخدام.

انزيم مرتبط المناعي فحص

تم تقسيم HKC إلى ست مجموعات ، بما في ذلك المجموعة الضابطة (DMEM مع 5.5mmo / L من الجلوكوز) ، ومجموعة عالية الجلوكوز (DMEM مع 30mmol / L الجلوكوز) ، ومجموعة جرعة منخفضة من SLS (5mg / ml ، S1 بالإضافة إلى 30mmol / L الجلوكوز) ، SLS مجموعة جرعة متوسطة (10 مجم / مل ، S2 بالإضافة إلى 30 ملمول / لتر جلوكوز) ، مجموعة جرعات عالية من SLS (20 مجم / مل ، S3 زائد 30 ملي مول / لتر جلوكوز) ، ومجموعة نغمة فارغة (DMEM بدون خلايا).

بعد 48 ساعة ، تم جمع المادة الطافية لكل مجموعة ، واكتشاف محتوى TGF - 1 و FN بواسطة ELISA. تم تنفيذ العملية حسب الدليل. تمت قراءة قيمة OD عند 450 نانومتر بواسطة قارئ صفيحة ميكروسكوبية. تم تحديد تركيزات TGF - 1 و FN وفقًا للمنحنى القياسي.

أكتيوسيدفيcistancheلها تأثيرات جيدة علىالكلى

التدفق الخلوي

كانت المجموعات التجريبية هي نفسها على النحو الوارد أعلاه. تم الكشف عن خلايا موت الخلايا المبرمج عن طريق قياس التدفق الخلوي مع تلطيخ مزدوج من Annexin V-FITC / PI. يمثل الربع العلوي الأيسر النسبة المئوية للخلايا النخرية ، ويمثل الربع الأيمن العلوي النسبة المئوية لخلايا موت الخلايا المبرمج المتأخرة ، ويمثل الربع السفلي الأيسر النسبة المئوية للخلايا القابلة للحياة ، ويمثل الربع الأيمن السفلي النسبة المئوية لخلايا موت الخلايا المبرمج المبكر.

تحليل لطخة غربية

تم علاج HKC بـ 10 * مول / لتر من Angiotension (Ang) ، 20 مجم / Lof SLS و 10 * مول / لتر من ANGⅡ ، متوسط ​​DMEM / F12 ، 20 مجم / لتر من SLS و 25 مللي مول / لتر من الجلوكوز و 25 مللي مول / لتر من الجلوكوز ، على التوالى.

تم حل البروتينات المحللة للخلايا على الرحلان الكهربائي لهلام دوديسيل كبريتات-بولي أكريلاميد وتم نقلها إلى أغشية PVDF. تم تحضين كل غشاء بجسم مضاد أحادي النسيلة ، متبوعًا بحضانة مع الأجسام المضادة الثانوية المقترنة بالبيروكسيديز واكتشاف التلألؤ الكيميائي.

تحليل احصائي

تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام الإصدار 19 من SPSS. 0. تم تحليل الفرق بين مجموعات البيانات التجريبية بواسطة ANOVA أحادي الاتجاه ، واستخدم الفرق الأقل أهمية بين المجموعات. ص<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" statistical="">

نتائج

تأثيرات SLS على إفراز TGF-B1 و FN مقارنة بمجموعة الجلوكوز المرتفعة ، يمكن أن يثبط SLS مستويات TGF-B1 و FN في HKC (P<0.01 or=""><0.05)(figure 1,="" figure="">

مقارنة بمجموعة الجلوكوز المرتفعة: * ص<0.05, **=""><0.01. control="" group:="" dmem="" with="" 5.5mmol/l="" glucose,="" high="" glucose="" group:="" dmem="" with="" 30mmol/l="" glucose,="" s1="" group:="" 5mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s2="" group:="" 10mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s3="" group:="" 20mg="" l="" sls+30mmol/l="" glucose.="" sls,="" seed="" of="" litchi="" chinensis="">

تأثير SLS على موت الخلايا المبرمج HKC أظهرت نتيجة قياس التدفق الخلوي أن موت الخلايا المبرمج لمجموعة الجلوكوز المرتفع كان أعلى بكثير من المجموعة العادية (P <{{0}. 01).="" بالمقارنة="" مع="" مجموعة="" الجلوكوز="" المرتفعة="" ،="" كان="" معدل="" موت="" الخلايا="" المبرمج="" لـ="" hkc="" مرتبطًا="" سلبًا="" بتركيزات="" sls="" (p=""><0.01) (الشكل="">

تأثير SLS على مستوى SOCS {0} كان مستوى بروتين SOCS -1 في مجموعة AngII أعلى بكثير من المجموعة العادية (P <0. {="" {8}}="" 1).="" كان="" مستوى="" socs="" -1="" في="" مجموعة="" angii="" plus="" sls="" أقل="" من="" ذلك="" في="" مجموعة="" angii="" ولكنه="" لا="" يزال="" أعلى="" من="" ذلك="" في="" المجموعة="" الضابطة="" (p=""><0. 01).="" مقارنة="" بالمجموعة="" العادية="" ،="" ارتفع="" مستوى="" بروتين="" socs="" -1="" في="" مجموعة="" الجلوكوز="" المرتفعة="" (p=""><0.01). بالمقارنة="" مع="" مجموعة="" الجلوكوز="" المرتفع="" ،="" انخفض="" مستوى="" البروتين="" لمجموعة="" الجلوكوز="" المرتفع="" بالإضافة="" إلى="" مجموعة="" sls="" (p=""><0.01) (الشكل="">

الشكل 4 تأثير SLS على التعبير عن SOCS -1 أ. مجموعة AngII: 10-6 mol / L Angiotension Ⅱ، b. مجموعة AngII plus SLS: 20mg / L SLS و 10-6 mol / L AngⅡ، c. مجموعة التحكم: متوسط ​​DMEM / F12 ، د. مجموعة SLS عالية الجلوكوز: 20 ملغ / لتر SLS بالإضافة إلى 25 ملمول / لتر من الجلوكوز ، ه. مجموعة التحكم: متوسط ​​DMEM / F12 ، ص. مجموعة الجلوكوز المرتفعة: 25 ملمول / لتر جلوكوز. SOCS -1 ، مانع إشارات السيتوكينات -1. SLS ، بذور الليتشي تشينينسيس سون.

مناقشة

ترسب المصفوفة خارج الخلية وموت الخلايا المبرمج للظهارة الأنبوبية الكلوية هي التغيرات المرضية الرئيسية في تطور DN. في ظل الظروف العادية ، ظلت مورفولوجيا وعدد HKC مستقرًا نسبيًا. ولكن في مجموعة متنوعة من العوامل المحفزة مثل الالتهاب ، يمكن أن تتكاثر HKC بشكل ملحوظ [4]. يؤدي ارتفاع الجلوكوز إلى إفراز مرتفع لـ TGF - 1 و FN من HKC ويسرع من موت الخلايا المبرمج لـ HKC ، وهو عامل مباشر في تعزيز حدوث DN. في هذه التجربة ، تم استخدام نسبة عالية من الجلوكوز كمحفز. لقد وجد أن SLS يمكن أن يمنع إفراز TGF - 1 ، FN ويقلل من موت الخلايا المبرمج HKC عن طريق خفض مستوى SOCS -1.

يتم توزيع Litchi chinensis Sonn بشكل أساسي في مقاطعات Guangdong و Fujian و Guangxi في الصين. تم الإبلاغ عن أن SLS تمتلك أنشطة مضادة لفرط سكر الدم ، ومضادة لفرط شحميات الدم ، ومضادة للصفيحات ، وأنشطة مضادة للفيروسات [5]. وفقًا لسجل Bencaogangmu في عهد أسرة Ming في الصين (1518 م - 1593 بعد الميلاد) ، يمكن لـ SLS أن "يخفف العطش". في السنوات الأخيرة ، أجرى العديد من العلماء الكثير من الأبحاث حول التأثيرات الدوائية والتركيب الكيميائي. المكونات الكيميائية الرئيسية لـ SLS هي مركبات مثل lychee saponins ، flavonoids ، polyphenols ، الأزاميل ، الأحماض الأمينية ، الأحماض الدهنية ، والمكونات المتطايرة. SLS هو العنصر النشط الرئيسي. يستخدم SLS على نطاق واسع في مرض السكري واعتلال الكلية السكري ، مع نقص السكر في الدم ، نقص شحميات الدم ، تثبيط تأثيرات الالتهاب المناعي [6]. أكدت الدراسات التجريبية الحديثة أيضًا أن SLS له تأثير خافض لسكر الدم [7]. ومع ذلك ، فإن آلية هذا التأثير غير واضحة.

في هذه الدراسة ، زاد مستوى TGF - 1 و FN في HKC بشكل ملحوظ بعد التحفيز مع ارتفاع الجلوكوز ، وانخفض مستوى TGF - 1 و FN بشكل ملحوظ بعد علاج SLS بطريقة تعتمد على الجرعة . انخفض مستوى بروتين SOCS -1 بشكل ملحوظ بعد علاج SLS. قدمت هذه الدراسة أساسًا نظريًا للتطبيق السريري لـ SLS.

سيستانشيمكن أن يخففمرض كلوي

مراجع

1 Zhang AH ، Huang SM ، Ding GX ، وآخرون. JNK-c-Jun / AP -1 مسار الإشارة الذي ينظم انتشار الخلايا ميزانجي البشرية الناجم عن الأنجيوتنسين. اكتا نانجينغ ميد جامعة 2004 ، 24 (1): 4-8.

2. نيشيموتو إن ، كيشيموتو تي ، يوشيزاكيك. علاج الأجسام المضادة لمستقبلات الإنترلوكين 6 في الأمراض الروماتيزمية. آن ريوم ديس 2000 ، 59 (ملحق 1): 121.

3. Lou ZM ، Tian XJ ، Wang WX ، et al. تأثير مستخلص الصابونين الكلي من قلب الليتشي على مستويات السكر في الدم لدى الفئران المصابة بداء السكري. Zhejiang Med J 2007 ، 29 (6): 548-550.

4. Kolset SO ، Reinholt FP ، Jenssen T. اعتلال الكلية السكري والمصفوفة خارج الخلية. J Histochem Cytochem 2012 ، 60 (12): 976-986.

5. لي جي دبليو. القاموس الطبي الصيني (الطبعة الثانية). بكين: دار نشر بيبولس ميد 2013 ، 1184. 6. زانج يي ، زانج سي. تقدم بذور الليتشي على المكونات النشطة الرئيسية والتأثيرات الدوائية. J Guangdong Pharm Univ 2014 ، 30 (6): 792-797. 7. جيانغ زدج ، رن ك ، لين زد ، وآخرون. دراسة عن الجزء الفعال من الليتشي تشينينسيس لخفض نسبة السكر في الدم. J Changchun Univ Tradit Chin Med 2011 ، 27 (1): 14-16.