كيف تلعب المكونات النشطة لـ Cistanche Tubulosa دورًا في مرض الزهايمر؟

JIANHUA YANG1 * و BOWEI JU1.2 * و YAO YAN1 و HUANHUAN XU1 و SHANSHAN WU1 و DANDAN ZHU1 و DANDAN CAO1 و JUNPING HU2

الملخص.تهدف الدراسة الحالية إلى التحقيق في تأثيرات الحماية العصبية لـجليكوسيدات فينيلثانويد(PhGs) على H2O 2- و- ببتيد اميلويد (A) 1-42- تسبب في إصابة خلايا PC12 كنموذج في المختبر منمرض الزهايمر (ميلادي). تم تحديد الظروف الحثية المثلى من خلال فحص أوقات الحضانة المختلفة والتركيزات. عولجت خلايا PC12 بـ 0 .5 ميكرومتر A 1-42 و H2O2 في وجود PhGs لمدة 24 ساعة ثم تم تقييم قابلية بقاء الخلية بواسطة مقايسة MTT ؛ تم أيضًا قياس إطلاق اللاكتات ديهيدروجينيز (LDH) ومحتوى مالونديالديهيد (MDA). الظروف المثلى لإنشاءميلاديكان النموذج هو علاج خلايا PC12 بـ 0 .5 ميكرومتر 1-42 لمدة 48 ساعة ، أو مع 25 ميكرومتر من H2O2 مذاب في DMEM باستخدام PBS. زادت PhGs بتركيزات 5 و 25 و 50 ميكروغرام / مل من الصلاحية وخفضت إطلاق LDH و MDA بواسطة خلايا PC12 المصابة بـ A 1-42 أو H2O2. في الختام ، تم بنجاح إنشاء نموذج إصابة خلية PC12 المستحثة بـ A 1-42- و H2O 2-. ثبت أن PhGs لها تأثير اعصاب كبير ضد إصابة الخلايا التي يسببها A 1-42- أو H2O 2-.

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

يحتوي Cistanche tubulosa على العديد من التأثيرات ، انقر هنا لمعرفة المزيد

مقدمة

مرض الزهايمر (ميلادي) ، وهو اضطراب تنكسي عصبي له خصائص سريرية لفقدان الذاكرة التدريجي وضعف الوظيفة الإدراكية (1) ، وهو السبب الأكثر شيوعًا للخرف في جميع أنحاء العالم (2). التكاليف المالية هائلة بسبب انتشار م (3). وبالتالي ، من الضروري تطوير الوسائل المناسبة لإدارة والوقايةميلادي.

التسبب فيميلادييرتبط ارتباطًا وثيقًا بتراكم التشابك الليفي العصبي ولويحات الشيخوخة (SPs) في مناطق الدماغ المصابة (4،5). -ببتيد اميلويد (A) ، المكون الرئيسي لـ SPs ، تم الإبلاغ عن أن له دور مسبب في تطورميلاديكما له تأثير سام على الخلايا العصبية (6). تم إنشاء شظايا ، بما في ذلك A 1-40 و 25-35 و 1-42 ، من خلال انقسام بروتين طليعة الأميلويد (7). تم العثور على السمية العصبية لـ A 1-42 أعلى بكثير من سمية A 25-35 و A 1-40 ، ويمكن لـ A 1-42 تحفيزميلاديالنموذج (1 ، 8-10). قد يكون الإجهاد التأكسدي متورطًا في التسبب فيميلاديوهي الآلية الرئيسية الكامنة وراء السمية العصبية المستحثة A (11-13). اقترحت العديد من الدراسات أن 1-42 تسبب في التراكم داخل الخلايا لأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ، مما أدى إلى أكسدة الدهون والبروتينات ، وتلف الحمض النووي وتفعيل إشارات نقطة فحص دورة الخلية (1 ، 14 ، 15). قد تؤدي الكميات الزائدة من H2O2 إلى تلف مؤكسد وتحفيز موت الخلايا المبرمج لخلايا PC12 (16). لذلك ، قد يكون استهداف الإجهاد التأكسدي نهجًا واعدًا لتطوير استراتيجيات علاجية لتثبيط السمية العصبية التي يسببها الزهايمر.

هربا (H.)سيستانش، وهو دواء عشبي صيني يستخدم بشكل شائع في الصين لتغذية الكلى وتجديد الجوهر والدم ، وقد استخدم لعلاج فقدان الذاكرة والإمساك الخرف (17). جليكوسيد فينيلثانويد (PhG) ، أحد المكونات الرئيسية في H.سيستانش، يحسن ضعف الاستماتة العصبية الناجم عن أ 25-35 من خلال آثاره المضادة للأكسدة (18 ، 19). حددت دراسة سابقة خمسة مكونات رئيسية من مجموع PhGs ، وهيأكتيوسيد، 2'-acetylacteoside ،إشنكوسايد، cistanosides و isoacteoside (20). من بين هذه المكونات ،أكتيوسيدوإشنكوسايدتم الإبلاغ عن أن لها تأثيرات وقائية للأعصاب على السمية العصبية المستحثة A 25-35- أو H2O 2- (21-23). على سبيل المثال ، اقترح Wu et al (24) أن Acteoside وإشنكوسايد

الكلمات الدالة:فينيليثانويدجليكوسيدات، خلايا PC12 ، H2O2 ، ببتيد اميلويد 1-42 ، حماية الأعصاب ، cistanche

المواد والأساليب

تحضير دكتوراه في الطب تم استخراج مجموع PhGs من H.سيستانشكما هو موضح سابقًا (25). يتم تجفيف الجذع المجفف بالهواء لـ H.سيستانشتم سحقه واستخلاصه عن طريق الترشيح بنسبة 8 0 بالمائة EtOH. تم تبخير الراشح تحت ضغط منخفض ، متبوعًا بإعادة التعليق بكمية مناسبة من H2O2 (1 {{2 0} 0 ميكرو مول / لتر). تم عزل الخليط على عمود راتنج كبير مسامي SP -825 (Mitsubishi Chemical ، طوكيو ، اليابان) وتمت التصفية التتابعية باستخدام 0 ، 30 ، 50 ، 70 و 90 بالمائة EtOH في الماء. للحصول على الجزء الغني بـ PhG ، تم تركيز 30-50 بالمائة من شطف EtOH وتجفيفها تحت ضغط منخفض. تم إجراء القياس الطيفي فوق البنفسجي (UV) لتحديد مجموع درجات الحرارة. تم ردع محتوى إشنكوسايد وأكتيوسيد بواسطة كروماتوجرافيا سائل عالي الضغط وفقًا لبروتوكول سابق (26). تم استخدام عمود Hypersil ODS -2 (4.6 × 250 مم ، 5 ميكرومتر ؛ Dalian Elite Analytical Instruments، Co.، Ltd. ، داليان ، الصين) وصيانته في درجة حرارة الغرفة. كانت المراحل المتنقلة عبارة عن ميثيل سيانيد وماء يحتوي على 0.4 في المائة من حمض الفوسفوريك (ت / ت ؛ سيجما الدريتش ؛ ميرك KGaA ، دارمشتات ، ألمانيا). كان معدل التدفق 0.75 مل / دقيقة وتم ضبط الطول الموجي على 333 نانومتر.

زراعة الخلايا والعلاج من تعاطي المخدرات. تم توفير خط خلية ورم القواتم في الفئران PC12 من قبل الدكتور He Chunhui ، كلية الطب ، جامعة Xinjiang الطبية (أورومتشي ، الصين). تمت زراعة الخلايا في وسط النسر المعدل لـ Dulbecco (DMEM ؛ Thermo Fisher Scientific ، Inc. ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) يحتوي على 1 0 في المائة من مصل الأبقار الجنيني (Sangon Biotech Co. Ltd. ، شنغهاي ، الصين) ، 100 وحدة / مل من البنسلين ، و 100 وحدة / مل من الستربتومايسين في حاضنة عند 37 درجة مئوية تحتوي على 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون و 95 بالمائة من الهواء. عند الوصول إلى نقطة التقاء 80 في المائة ، عولجت الخلايا بنسبة 0.25 في المائة من التربسين وتم تمريرها.

من أجل القضاء على تدخل الدواء نفسه في نمو خلايا PC12 ، تم إجراء تجربة سمية. باختصار ، تم زرع خلايا PC12 (3 × 104 خلية / مل) في 96- أطباق جيدة عند 100 ميكرولتر / بئر وحضنت عند 37 درجة مئوية طوال الليل. بعد التخلص من المادة الطافية ، تمت إضافة 200 ميكرولتر كامل من DMEM في المجموعة الفارغة ، بينما عولجت الخلايا في مجموعات التدخل بجرعات مختلفة (5 ، 25 ، 50 ، 75 ، 100 ، 125 ، 150 ، 175 ، و 200 ميكروغرام / مل). بعد حضانة الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة ، تمت إضافة 20 ميكرولتر من محلول MTT (Sigma - Aldrich ؛ Merck KGaA) إلى كل بئر. بعد الحضانة لمدة 4 ساعات ، تم التخلص من المادة الطافية وإضافة 150 ميكرولتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد لكل بئر ، متبوعًا بالتحريك لمدة 10 دقائق. تم اكتشاف قيم الكثافة البصرية (OD) عند 490 نانومتر باستخدام قارئ لوحة ELISA.

إصابة خلية PC12 بنسبة 1‑ 42. تم إذابة 1-42 ببتيد تم شراؤه من Bioss Biotech (بكين ، الصين) في الماء (100 ميكروغرام / مل). بعد ذلك ، تم تحضين الخليط عند 37 درجة مئوية لمدة 4 أيام وتخزينه عند 4 درجات مئوية قبل الاستخدام.

تم زرع خلايا PC12 في 96- ألواح بئر (3xl 0 4 خلايا في 1 0 0 ميكرولتر لكل بئر). بعد الثقافة لمدة 24 ساعة للالتزام ، تمت إضافة 5 0 µl A 1-42 بتركيزات نهائية مختلفة (0 ، 0.25 ، 0.5 ، 1 ، 1.5 أو 2 ميكرومتر) مذابة في DMEM الخالي من المصل ، متبوعًا بـ الحضانة لمدة 24 أو 48 أو 72 أو 96 ساعة. تم تقييم صلاحية الخلية عن طريق اختبار MTT. تم تحديد تركيز A 1-42 الأمثل ليكون 0.5 ميكرومتر.

تم علاج خلايا PC12 (3xl 0 4 خلايا لكل بئر) بجرعات مختلفة من PhGs (0 ، 0. 5 ، 5 ، 25 ، أو 50 ميكروغرام / مل) في وجود 0.5 µM A 1-42 لمدة 24 ساعة. تم تقييم صلاحية الخلية عن طريق اختبار MTT.

H2O2 ‑ التي يسببها إصابة خلية PC12. تم طلاء خلايا PC12 بالبذور في 96- ألواح بئر (3xl 0 4 خلايا في 1 0 0 ميكرولتر لكل بئر). بعد الزراعة لمدة 24 ساعة للالتزام ، تمت إضافة 100 ميكرولتر من H2O2 بتركيزات نهائية مختلفة (0 ، 25 ، 50 ، 100 ، 200 ، 300 ، 400 ، و 500 ميكرومتر) مذابة في DMEM مع أو بدون PBS (0.01 مول / لتر) ، تليها حضانة لمدة 24 ساعة. تم تقييم صلاحية الخلية عن طريق اختبار MTT. تم تحديد تركيز ومذيب H2O2 الأمثل لتأسيس النموذج المختبر لـ AD.

عولجت خلايا PC12 (3xl 0 4 خلايا لكل بئر) بجرعات مختلفة من PhGs (0 ، 0.5 ، 5 ، 25 و 50 ميكرومتر). بعد الزراعة لمدة 24 ساعة للالتزام ، عولجت خلايا PC12 بـ 100 ميكرولتر من H2O2 مذاب في DMEM مع PBS في وجود PhGs لمدة 24 ساعة. تم تقييم صلاحية الخلية بواسطة اختبار MTT.

مقايسة إطلاق اللاكتات ديهيدروجينيز (LDH). تم تقييم إصابة الخلية عن طريق قياس نشاط LDH في المادة الطافية لخلايا PC12 باستخدام مجموعة LDH وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة (القط رقم 2 0 15 0 604 ؛ Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute ، Nanjing ، الصين). باختصار ، تمت إضافة H2O المقطر المزدوج ، 0.2 ميكرولتر / مل من حمض البيروفيك ، ومخزن المصفوفة ، ومخزن الإنزيم الأول بالتسلسل عند 48 ساعة بعد العلاج بالعقاقير. بعد الحضانة عند 37 ْم لمدة 15 دقيقة ، تمت إضافة 2،4 ‑ دينيترو ‑ فينيل هيدرازين. بعد ذلك ، تمت إضافة 250 ميكرولتر من محلول 0.4 مولار هيدروكسيد الصوديوم إلى كل بئر. تم جمع المادة الطافية بعد الحضانة لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. ثم تم قياس الامتصاصية عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية.

قياس malondialdehyde (MDA). تم قياس MDA في المادة الطافية لخلايا PC12 باستخدام مجموعة تجارية (القط رقم 20150604 ؛ معهد Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة باختصار ، تمت إضافة الكحول المجفف والكواشف الأخرى بالترتيب ، تليها الحضانة في حمام مائي عند 95 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة. تم طرد الخليط عند 1،006 x جم و 25 ْم لمدة 10 دقائق بعد التبريد. ثم تم استخدام المادة الطافية لتحديد محتوى MDA. تم قياس الامتصاصية لاحقًا باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية عند 532 نانومتر.

تقييم التأثيرات الوقائية لإشنكوسايد وأكتيوسيد ضد مرض الزهايمر في المختبر. تم زرع خلايا PC12 بكثافة 3xl 0 4 خلايا / بئر في 96- أطباق جيدة (100 ميكرولتر / بئر). تم تحضين الخلايا بالعقاقير بما في ذلك إشنكوسايد (رقم القط 111670-200503 ؛ المعاهد الوطنية للتحكم في الغذاء والدواء ، بكين ، الصين) والأسيتونيد (رقم القط 111530-200505 ؛ المعاهد الوطنية لمراقبة الغذاء والدواء ) بتركيزات مختلفة (0.5 ، 25 ، 50 ميكروغرام / مل). بعد ذلك ، عولجت الخلايا بـ A 1-42 أو H2O2 لمدة 24 ساعة وتم قياس صلاحية الخلية بمقايسة MTT.

تحليل احصائي. يتم التعبير عن القيم على أنها متوسط ​​± الانحراف المعياري. تم استخدام اختبار t للطالب للمقارنات بين المجموعات. تم إجراء التحليلات الإحصائية باستخدام SPSS 18. 0 (SPSS ، Inc. ، Chicago ، IL ، USA). ص<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

نتائج

الكمي من PhGs من H. Cistanches. أطياف الأشعة فوق البنفسجيةفغسالمستخرجة وكذلك الحلول القياسية لـإشنكوسايدوأكتيوسيدوأظهرت النتائج أن أطياف الأشعة فوق البنفسجية كانت متسقة (الشكل 1). قياس الطيف الضوئي بالأشعة فوق البنفسجية

أظهر أن محتوى PhG كان 87.6 في المائة. أظهرت نتائج HPLC أن محتويات إشنكوسايد وأكتيوسيد كانت 37.7 في المائة و 17.8 في المائة على التوالي (الشكل 2).

تحديد تركيز PhG المثالي. بالمقارنة مع المجموعة الفارغة ، كان لـ PhG عند 75 و 100 و 125 و 150 و 175 و 200 ميكروغرام / مل تأثير مثبط كبير على خلايا PC12 (P<0.05), while="" phg="" at="" 5,="" 25="" and="" 50="" µg/ml="" showed="" low="" toxicity="" on="" pc12="" cells,="" and="" the="" cell="" viability="" was="">80 بالمائة (الشكل 3). وهكذا ، تم استخدام PhGs بتركيز 5 و 25 و 50 ميكروغرام / مل لمعالجة خلايا PC12 في التجارب اللاحقة بسبب عدم التأثير على حيوية الخلية.

إصابة خلية PC12 بفارق 1‑42 ‑. بالمقارنة مع تلك الموجودة في المجموعة الضابطة ، كانت قابلية بقاء الخلية في مجموعة الإصابات 0 .5 µM A 1-42 63 بالمائة (P<0.05). the="" cell="" viability="" was="" decreased="" by="" aβ1-42="" in="" a="" concentration-dependent="" manner,="" and="" the="" viability="" was=""><50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups="" (fig.="" 4).="" thus,="" treatment="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" in="" vitro="" ad="">

تم أيضًا تحديد نشاط خلايا PC12 المعالجة بـ 0. 5 ميكرومتر A 1-42 في وجود جرعات آمنة من PhGs (5 ، 25 ، و 50 ميكروغرام / مل) لمدة 24 ساعة. مقارنة بمجموعة الطراز (P<0.01), phgs="" showed="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" rescued="" by="" phgs="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (fig.="">

H2O2 ‑ التي يسببها إصابة خلية PC12. كانت جدوى خلايا PC12 المعالجة بـ 25 ميكرومتر من H2O2 المذاب في DMEM مع PBS 56.43 بالمائة. كانت جدوى خلايا PC12 المعالجة بـ 200 ميكرومتر من H2O2 مذابة في DMEM بدون برنامج تلفزيوني 71.64 بالمائة (الجدول الأول). وهكذا ، تم اختيار خلايا PC12 المعالجة بـ 25 ميكرومتر من H O مذاب في DMEM باستخدام PBS كشرط مثالي لإنشاء نموذج AD.

مقارنة بمجموعة التحكم ، كانت قابلية بقاء الخلية في مجموعة النماذج 48.8 بالمائة (P<0.05). compared="" with="" the="" model="" group,="" phgs="" had="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" dose-dependently="" increased="">

كانت درجة الحموضة ، وجدوى خلايا PC12 المعالجة بـ PhGs بتركيزات 5 و 25 و 50 ميكروغرام / مل 54 و 57 و 64 بالمائة على التوالي (الجدول 2).

تمنع PHGs إطلاق LDH الناجم عن الإصابة بواسطة خلايا PC12. مقارنة بالمجموعة الضابطة ، تمت زيادة محتوى LDH للطاف لخلايا PC12 المصابة ، والذي تم تثبيته بواسطة PhGs بطريقة تعتمد على التركيز. أشارت هذه النتيجة إلى أن PhGs لها تأثير اعصاب مهم على خلايا PC12 (الشكل 6).

الجدول الأول: قابلية بقاء الخلية (في المائة) بعد علاج H2O2.

الجدول الثاني. بقاء الخلية بعد تدخل الدواء.

تمنع بواسطة PhGs بطريقة تعتمد على التركيز. أشارت هذه النتيجة إلى أن PhGs لها تأثير اعصاب مهم على خلايا PC12 (الشكل 7).

ينقذ PhG ومكوناته echinacoside و acteoside جدوى خلايا PC12 المصابة. مقارنة بمجموعة النموذج ، أدى العلاج باستخدام أكتيوسيد إلى زيادة جدوى 1-42- خلايا PC12 المصابة بطريقة تعتمد على الجرعة. كما أدت مركبات PhGs و echinacoside إلى زيادة كبيرة في قابلية بقاء خلايا PC12 المصابة 1-42- في جميع التركيزات المختبرة (الشكل 8 أ).

**P<0.05, vs.="" model="" group.="" aβ,="" â-amyloid="" peptide;="" phgs,="" phenylethanoid="" glycosides;="" ech,="" echinacoside;="" as,="">

بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، زاد الأكتيوسايد بشكل كبير من قابلية خلايا PC12 المعالجة بـ H2O2. زادت PhGs أيضًا من قابلية خلايا PC12 المعالجة بـ H2O2 ، بينما لم يكن التأثير معنويًا بتركيزات 5 و 25 ميكروغرام / مل (الشكل 8 ب). بالإضافة إلى ذلك ، زاد إشنكوسايد من قابلية بقاء الخلية عند 25 ميكروغرام / مل.

في الختام ، أثر أكتيوسيد و PhGs و echinacoside تأثيرات اعصاب كبيرة على خلايا PC12 المعرضة للإصابة بـ A 1-42 أو H2O2.

مناقشة

الإجهاد التأكسدي هو الآلية الرئيسية الكامنة وراء السمية العصبية الوسيطة في مرض الزهايمر (11-13). لذلك ، قد يمثل استهداف الإجهاد التأكسدي نهجًا لعلاج مرض الزهايمر. في هذه الدراسة ، تم بنجاح إنشاء نموذج في المختبر لمرض الزهايمر يشتمل على إصابة خلية PC12 المستحثة بـ A 1-42- و H2O 2-. أظهرت نتائج فحوصات MTT و LDH و MDA أن PhGs تزيد من قابلية الخلية للحياة ، وتقلل من إطلاق LDH و MDA بواسطة خلايا PC12 المعرضة للإصابة. يمكن أن نستنتج أن PhGs لها تأثيرات اعصاب كبيرة على خلايا PC12.

من أجل تقليل تأثيرات PhGs نفسها على نمو خلايا PC12 ومنع الانتشار غير الطبيعي ، تم تحديد الجرعة الآمنة من PhGs في اختبار الفحص. أوضحت النتائج أن PhGs عند 75 و 100 و 125 و 150 و 175 و 200 ميكروغرام / مل لها تأثير مثبط كبير على خلايا PC12 (P.<0.05,><0.01), while="" cell="" viability="" remained="">80 في المائة بتركيزات 5 و 25 و 50 ميكروغرام / مل. وهكذا ، فإن تركيز PhGs بتركيز 5 و 25 و 50 ميكروغرام / مل آمن لخلايا PC12.

تأثرت إصابة {0}} بعوامل معينة ، بما في ذلك المذيب ووقت الحضانة وجودة المنتج. في هذه الدراسة ، تم إذابة 1-42 ببتيد في الماء (100 ميكروغرام / مل) وتم تحضينه عند 37 درجة مئوية لمدة 4 أيام في حاضنة ثاني أكسيد الكربون قبل الاستخدام. عولجت خلايا PC12 بـ A 1-42 بتركيزات 0.5 و 1 و 1.5 و 2 ميكرومتر. أظهرت النتائج أن قابلية الخلية للبقاء انخفضت مع زيادة A 1-42 ، وكانت الصلاحية كذلك<50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups.="" thus,="" treatment="" of="" pc12="" cells="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" ad="" model.="" aβ25-35="" has="" been="" commonly="" used="" to="" establish="" ad="" models="" due="" to="" its="" low="" cost="" and="" simple="" operation="" (27-29).="" the="" neurotoxicity="" of="" aβ1-42="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" aβ25-35,="" and="" aβ1-42="" is,="" therefore,="" the="" optimal="" aβ="" fragment="" for="" establishing="" an="" ad="" model="">

H2O2 هو عامل مؤكسد وقد يتسبب H2O2 المفرط في أضرار مؤكسدة ويحث على موت الخلايا المبرمج (30). في هذه الدراسة ، عولجت خلايا PC12 بـ 25-500 ميكرومتر من H2O2 مذاب في DMEM مع أو بدون برنامج تلفزيوني. أظهرت النتائج أن H2O2 المذاب في DMEM بدون برنامج تلفزيوني تسبب في تكاثر غير طبيعي لخلايا PC12. وبالتالي ، فإن علاج خلايا PC12 مع 25 ميكرومتر من H2O2 مذاب في DMEM باستخدام PBS كان الشرط الأمثل لإنشاء نموذج AD. كانت الإصابة المستحثة 1-42- أكبر من الإصابة الناجمة عن H2O 2- بسبب ضعف استقرار H2O2 وتأثيرات المذيبات.

عندما تتلف الخلية ، يتم زيادة تسرب LDH في وسط الثقافة بشكل كبير. من المعروف أن ROS تسبب إنتاج MDA. يعكس محتوى MDA و LDH مقدار الضرر التأكسدي. في هذه الدراسة ، انخفض نشاط LDH و MDA الناجم عن التلف مع زيادة جرعات PhGs. أشارت هذه النتائج إلى أن PhGs لها تأثير اعصاب كبير على خلايا PC12. أظهر فحص MTT أن PhGs أظهرت تأثيرًا عصبيًا يعتمد على الجرعة على خلايا PC12.

في الختام ، تم بنجاح إنشاء نموذج في المختبر لمرض الزهايمر يشتمل على إصابة خلية PC12 يسببها A 1-42- و H2O 2-. أدى العلاج باستخدام PhGs إلى زيادة صلاحية الخلية وتقليل إطلاق LDH و MDA بواسطة خلايا PC12 المعالجة بـ A 1-42 أو H2O2. كان للـ PhGs تأثير واقي عصبي كبير على إصابة الخلايا التي يسببها A 1-42- أو H2O 2-.

مراجع

1. Qu M و Zhou Z و Xu S و Chen C و Yu Z و Wang D: يخفف الإفراط في التعبير عن Mortalin السمية العصبية التي يسببها بيتا أميلويد في خلايا SH-SY5Y. Brain Res 1368: 336-345 ، 2011.

2. Uzun S ، Kozumplik O ، و Folnegovi Small V: خرف ألزهايمر: مراجعة البيانات الحالية. Collegium antropologicum 35: 1333-1337 ، 2011.

3. Brookmeyer R و Johnson E و Ziegler-Graham K و Arrighi HM: التنبؤ بالعبء العالمي لمرض الزهايمر. ألزهايمر والخرف 3: 186-191 ، 2007.

4. Castellani RJ، Rolston RK and Smith MA: مرض الزهايمر. المرض في الشهر 56: 484-546 ، 2010.

5. ماتسون إم بي: مسارات نحو وبعيد عن مرض الزهايمر. Nature 430: 631-639 ، 2004.

6. Gouras GK ، و Tsai J ، و Naslund J ، وآخرون: تراكم الخلايا العصبية الداخلية A 42 في الدماغ البشري. المجلة الأمريكية لعلم الأمراض 156: 15-20 ، 2000.

7. Shen C ، Chen Y ، Liu H ، et al: يعزز بيروكسيد الهيدروجين إنتاج A من خلال التنشيط المعتمد على JNK لـ -secretase. مجلة الكيمياء البيولوجية 283: 17721-17730 ، 2008.

8. Shih PH و Wu CH و Yeh CT و Yen GC: التأثيرات الوقائية للأنثوسيانين ضد الضرر الناجم عن الأميلويد الببتيد في الخلايا العصبية -2 أ. مجلة الكيمياء الزراعية والغذائية 59: 1683-1689 ، 2011.

9. Figueiredo CP ، Bicca MA ، Latini A ، Prediger R ، Medeiros R ، و Calixto JB: حمض الفوليك بلس-توكوفيرول يخفف السمية العصبية من خلال تعديل نشاط معقدات الميتوكوندريا. مجلة مرض الزهايمر: JAD 24: 61-75 ، 2010.

10. Dumont M و Lin MT و Beal MF: استراتيجيات علاجية تستهدف الميتوكوندريا ومضادات الأكسدة لمرض الزهايمر. مجلة مرض الزهايمر: JAD 20: S633 ، 2010.

11. Sonnen JA و Breitner JC و Lovell MA و Markesbery WR و Quinn JF و Montine TJ: تلف الجذور الحرة للدماغ في مرض الزهايمر ونماذج الفئران المعدلة وراثيًا. علم الأحياء الراديكالي والطب المجاني 45: 219-230 ، 2008.

12. Lin MT و Beal MF: الخلل الوظيفي في الميتوكوندريا والإجهاد التأكسدي في الأمراض التنكسية العصبية. Nature 443: 787-795 ، 2006.

13. Trushina E و McMurray C: الإجهاد التأكسدي واختلال وظائف الميتوكوندريا في الأمراض التنكسية العصبية. علم الأعصاب 145: 1233-1248 ، 2007.

14. Huang SH و Lin CM و Chiang BH: التأثيرات الوقائية لمستخلص أنجليكا سينينسيس على السمية العصبية التي يسببها الأميلويد. طب النبات 15: 710-721 ، 2008.

15. Burhans WC و Heintz NH: دورة الخلية عبارة عن دورة الأكسدة والاختزال: ربط أهداف خاصة بالطور بمصير الخلية. علم الأحياء الراديكالي والطب المجاني 47: 1282-1293 ، 2009.

16. Xue HY و Gao GZ و Lin QY و Jin LJ و Xu YP: التأثيرات الوقائية للأوكوبين على موت الخلايا المبرمج الناتج عن HO في خلايا PC12. العلاج بالنباتات

18. Liu و Fx Wang و Xw Luo L و Xin H و Na B و Wang Xf: آثار الجليكوزيدات من cistanche على التعلم والذاكرة في مرض الزهايمر الناجم عن بيتا أميلويد في الفئران وآليته المحتملة. نشرة الأدوية الصينية 22: 595 ، 2006.

19. Bao B و Tang X و Tian H و Tong Y و Wu W و Hong Y: نشاط مضادات الأكسدة من مقتطفات من الحياة الصحراوية Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wright Shanghai J Tradit Chin Med 44: 68-71، 2010 .

20. Jiang Y و Li S و Wang Y و Chen X و Tu P: تمييز Herba Cistanches عن طريق بصمات الأصابع مع مقياس الطيف الكتلي للصفيف اللوني السائل عالي الأداء. مجلة الكروماتوغرافيا أ 1216: 2156-2162 ، 2009.