العلاقة بين بصمات الأصابع HPLC وتأثير الطيف المضاد للورم للتمييز بين Mylabris Phalerata Pallas و Mylabris Cichorii Linnaeus

جهة الاتصال: emily.li@wecistanche.com

Jian-Yong Zhang ، Qi-Hong Chen ، Xian Pei1 ، Rong Yan ، Can-Can Duan ، Yun Liu4 ، Xiao-Fei Li

1 كلية الصيدلة ، جامعة Zunyi الطبية ، Zunyi ، الصين ،

2 المختبر الرئيسي لعلم الأدوية الأساسي التابع لوزارة التعليم ومختبر الأبحاث الدولي المشترك للطب الإثني التابع لوزارة التعليم ، جامعة زوني الطبية ، زوني ، قويتشو ، الصين.

3 كلية العلوم الطبية الأساسية ، جامعة Zunyi الطبية ، Zunyi ، الصين ، مختبر رئيسي تابع لكلية مقاطعة 4Guizhou للوقاية من الأورام وعلاجها بالأدوية المميزة ، جامعة Zunyi الطبية ، Zunyi ، الصين.

انقر هنا للحصول على مزيد من المعلومات حول مضاد الأورام Cistanche

يسلط الضوء

توفر هذه الدراسة طريقة HPLC قابلة للتطبيق وذات مصداقية وأكثر كفاءة للتمييز بين نوعين من Mylabris. و HPLC البصمات والطيف-آثار أنتيتومورتم دمج العلامات التفاضلية الثلاثة المهمة لعلامة جديدة من Mylabris.

الملخص

الهدف: تقييم التمييز بين نوعين من Mylabris بناءً على بصمات الأصابع HPLC والطيف-تأثير مضاد للورمصلة. الطرق: في هذه الدراسة ، طريقة كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) بسيطة وفعالة تتكامل مع التحليل الكيميائي والطيف.تأثير مضاد للورمتم تطوير العلاقة للتمييز بين نوعين من Mylabris: Mylabris phalerata Pallas (MP) و Mylabris cichorii Linnaeus (MC). النتائج: في تحليل بصمات الأصابع ، تم اختيار 14 قمة مميزة لتقييم الاختلافات بين MP و MC باستخدام تحليل التشابه والتعرف على الأنماط باستخدام PCA و OPLS-DA. أظهرت مخططات كروماتوجرام HPLC لعينات من 10 مناطق في الصين اختلافات بين MP و MC ، وتم العثور على 7 علامات كيميائية مميزة. في الطيف-تأثير مضاد للورمتحليل العلاقة ، لعبت 4 علامات نشاط دورًا حيويًا في تقليل IC50 وقد تكون المكونات المضادة للورم في Mylabris عن طريق التحليل العلائقي الرمادي وتحليل الانحدار الخطي متعدد المتغيرات. أشار التحليل الكيميائي بالاقتران مع نتائج علاقة تأثير الطيف إلى أن القمم 2 (السيتوزين) و 4 (غير معروف) و 14 (غير معروف) كانت علامات تفاضلية مهمة للتمييز بين نوعي Mylabris.

الخلاصة: هذه الطريقة قابلة للتطبيق ، وذات مصداقية ، وأكثر كفاءة للتمييز بين MP و MC ، وستوفر طريقة جديدة لتسهيل مراقبة جودة أدوية الحشرات.

الكلمات الرئيسية: HPLC ، البصمات ، الطيف-تأثير مضاد للورم، ميلابريس ، التمييز

خلفية

تم استخدام Mylabris ، المسمى بان ماو في الصين ، كدواء صيني تقليدي (TCM) لعلاج القرحة العميقة الجذور ، وكتلة البطن ، وهو مهممضاد للورموكيل. بالإضافة إلى ذلك ، يتم استخدامه على نطاق واسع في أوروبا كطب شعبي [1]. المكون النشط الرئيسي لـ Mylabris هو الكانثاريدين ، وهو فعالمضاد للورممركب [2]. أثبتت الدراسات الدوائية الحديثة أن عقار ميلابريس يمتلك أنشطة متعددة ، ويحظى بتقدير كبير في علاج الأورام بسبب ثنائيته.مضاد للسرطانوالقدرة على زيادة عدد الكريات البيض [3-4]. في الوقت الحاضر ، تم استخدام Mylabris على نطاق واسع في بعض وصفات الطب الصيني التقليدي المضادة للسرطان في الصين ، مثل حقن Aidi وكبسولة Compound ban mao.

وفقًا لدستور الأدوية لجمهورية الصين الشعبية (إصدار 2015) ، يتم تعريف Mylabris على أنه جسم جاف من Mylabris phalerata Pallas (MP) و Mylabris cichorii Linnaeus (MC) ، والتي تختلف في خصائصها النباتية وديناميكيات السكان والبيئة [ 5-6]. الميلابريس عقار شديد السمية. نظرًا لأن الأدوية المتوفرة في الصين عادة ما تكون مزيجًا من MP و MC ، فمن الضروري تحديد الاختلافات الكيميائية والنشاط بين النوعين.

نظرًا لأن الطب الصيني التقليدي يحتوي على العديد من المكونات المعروفة وغير المعروفة ، فإن التحليل الكمي للملف الشخصي لمكوناتها الكيميائية يمثل تحديًا كبيرًا. تلعب بصمة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) دورًا مهمًا في مراقبة الجودة (QC) للطب الصيني التقليدي نظرًا لخصائصها الشاملة لمعظم المركبات في نظام معقد. علاوة على ذلك ، فإن تحليل بصمات الأصابع للطب الصيني التقليدي له قابلية استنساخ جيدة واستقرار لمصادقة الأنواع وتقييم الجودة ، وهو مقبول من قبل منظمة الصحة العالمية ، وإدارة الغذاء والدواء في الصين (SFDA) ، والوكالة الأوروبية لتقييم الأدوية (EMEA). في الآونة الأخيرة ، تم تطوير تحليل كيميائي يجمع بين بصمات HPLC لمراقبة الجودة والتمييز بين المصادر الطبيعية المعقدة المختلفة [7]. ومع ذلك ، من غير الفعال التمييز بين الاختلافات في الطب الصيني التقليدي لأنه لا يمكن أن يعكس الاختلافات المكونة النشطة ، وهو الأمر الأكثر أهمية للاستخدام السريري. حتى الآن ، الطيف-مضاد للورم تأثيرتم استخدام نهج العلاقة لتحديد المكونات النشطة بيولوجيًا للطب الصيني التقليدي بنجاح [8]. إن بصمة HPLC جنبًا إلى جنب مع التحليل الكيميائي وعلاقة تأثير الطيف المضاد للأورام ستوضح بشكل أفضل الاختلاف في المصادر المتعددة للطب الصيني التقليدي.

تم الإبلاغ مؤخرًا عن بعض الطرق لتحديد محتوى الكانثاريدين ، والتي يمكن استخدامها لتحديد جودة Mylabris [9]. تم أيضًا تطبيق بعض بصمات الأصابع الكروماتوغرافية على QC [10-11]. استخدمت دراسة واحدة فقط طريقة تتضمن شطف متدرج لمركبات Mylabris القابلة للذوبان في الماء بناءً على HPLC. وفي الوقت نفسه ، تم استخدام عشر عينات فقط ، ولم يتم استخدام عينات MC [12]. على حد علمنا ، لم تتم دراسة تمييز MP و MC على أساس التركيب الكيميائي والنشاط من قبل.

هدفت هذه الدراسة إلى تطوير طريقة بسيطة وفعالة للتمييز بين نوعين من Mylabris باستخدام بصمة HPLC جنبًا إلى جنب مع التحليل الكيميائي والطيف.مضاد للورمتأثيرالعلاقة ، والتي ستوفر أساسًا لمراقبة الجودة في Mylabris. يمكن أيضًا تطبيق هذه الطريقة لتحديد علامة مراقبة الجودة لأشكال الطب الصيني التقليدي الأخرى.

المواد والأساليب

في المجموع ، تم جمع 20 دفعة من Mylabris phalerata Pallas (MP) و Mylabris cichorii Linnaeus (MC) من مقاطعات مختلفة في الصين (الجدول 1) وحددها الأستاذ Xiao-Fei Li. تم إيداع عينات القسيمة في مختبراتنا.

تم شراء السيتوزين المرجعي القياسي ، اليوريدين ، الغوانوزين ، والأدينوزين من شركة ChengduPush Biotechnology Co.، Ltd. (تشنغدو ، الصين). تم شراء الأسيتونيتريل والميثانول بدرجة HPLC من Thermofisher Scientific (Fairlawn ، NJ ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم استخدام مياه Watson النقية طوال الدراسة. المواد الكيميائية والمذيبات الأخرى كانت من الدرجة التحليلية وتم الحصول عليها من Aladdin Reagent (شنغهاي ، الصين) ، Chengdu Kelong Reagent (Chengdu ، الصين) و Sinopharm Chemical Reagent (بكين ، الصين)

الجهاز والظروف الكروماتوغرافية

تم إجراء تحليل HPLC باستخدام نظام Agilent 126 0 Infinity HPLC بدرجة 3 0 على Phenomenex Synergy Polar-RP80 (4.6 مم × 250 مم ، 5 ميكرومتر) لأخذ البصمات. تم استخدام شطف التدرج الخطي مع شطف A (ماء / حمض أسيتيك جليدي ، 100: 1 ، حجم / حجم) و B (ميثانول) للفصل. تم تطوير برنامج التدرج على النحو التالي: 0-1 دقيقة ، 3. 0-4. 6 بالمائة ب ؛ 1-9 دقيقة ، 4. 6-6. 8 بالمائة ب ؛ 9-25 دقيقة ، 6. 8-51. 0 بالمائة ب ؛ 25-30 دقيقة ، 51. 0-100 بالمائة. كان معدل تدفق الطور المتحرك 1.0 مل / دقيقة. تمت مراقبة مخطط الكروماتوجرام عند 254 نانومتر. بعد فترة موازنة مدتها 15 دقيقة ، تم استخدام 10 ميكرولتر من العينات للحقن.

إعداد عينة

تم سحق العينات المجففة إلى مسحوق ، وتم استخلاص 2.5 جم من كل عينة مسحوق مرتين باستخدام 5 0 مل من الإيثانول بنسبة 75 بالمائة عن طريق إعادة التدفق لمدة 1.5 ساعة في كل مرة. تم خلط العينة المستخلصة وتركيزها تحت ضغط مخفض إلى 20 مل. ثم تم ترسيب الخليط بـ 80 مل ماء لمدة 24 ساعة تحت 4 درجات. بعد ذلك ، تم الطرد المركزي للمستخلص عند 3000 جم دقيقة -1 لمدة 10 دقائق لفصل المادة الطافية. تم تركيز المادة الطافية تحت ضغط مخفض إلى 25 مل. أخيرًا ، تم ترشيح المادة الطافية من خلال فيلم ميليبور بحجم 0.22 ميكرومتر قبل تحليل HPLC.

التحقق من صحة المنهجية

تم التحقق من صحة طريقة HPLC من أجل الدقة والتكاثر والاستقرار (0 ساعة ، ساعتان ، 4 ساعات ، 8 ساعات ، 12 ساعة ، 24 ساعة). تم تقدير المصادقة بناءً على وقت الاستبقاء (RT) ومنطقة الذروة (PA). أخيرًا ، تم إنشاء بصمات كيميائية لعشرين دفعة من Mylabris لتحديد الخصائص الكيميائية المتكاملة للمركبات المتعددة. تم إدخال بعض تقنيات القياس الكيميائي على البصمة الكيميائية لتحليلها.

تحليل التعرف على الأنماط

تم تقييم الفروق بين نوعين من مناطق الذروة من أجل الأهمية الإحصائية باستخدام اختبار الطالب غير المقيد. القيمة الاحتمالية أقل من 0. 0 5 تعتبر ذات دلالة إحصائية. كطريقة كلاسيكية غير خاضعة للإشراف ، يتم تطبيق تحليل المكونات الرئيسية (PCA) على نطاق واسع لتحليل البيانات الإحصائية. بدلاً من استخدام العديد من المتغيرات ، يأخذ PCA عددًا صغيرًا من أجهزة الكمبيوتر دون فقدان الكثير من المعلومات ، ثم يتم تصور مخططات النقاط لفصل الملاحظات مجانًا. في هذه الدراسة ، تم إجراء PCA في مناطق الذروة الطبيعية لكل مكون في بصمات HPLC باستخدام برنامج SIMCA-P plus 14.0 (Umetrics ، Umea ، السويد) للعثور على التمييز بين نوعي Mylabris.

لمزيد من التمييز المفضل بين نوعي Mylabris ، تم تطبيق طريقة خاضعة للإشراف للتحليل المتعامد الجزئي للتمييز في المربعات الصغرى (OPLS-DA) لتحليل الاختلافات في مناطق الذروة الطبيعية لكل مكون في بصمات HPLC. قيمة VIP عبارة عن مجموع مرجح لمربعات أوزان OPLS ، مما يعكس المساهمة النسبية لكل متغير X في النموذج. تم اعتبار المتغيرات مع VIP> 1 ، جنبًا إلى جنب مع S-plot ، مؤثرة في فصل العينات في مخططات النتيجة الناتجة عن تحليل OPLS-DA. ثم تم الحصول على العلامات الكيميائية المميزة للتمييز.

تحليل العلاقة بين تأثير الطيف والتأثير المضاد للورم

لاستكشافمضاد للورممنطقة ذروة التأثير لعينات Mylabris المدمجة مع بيانات بصمات الأصابع ، ومقارنة الاختلافات بين النوعين ، والعلاقة بين ذروة بصمات الأصابع ومضاد-ورمتمت دراسة الآثار. تم تطبيق طريقتين للجمع بين التحليل العلائقي الرمادي وتحليل الانحدار الخطي متعدد المتغيرات (MLRA) بواسطة SPSS19. 0 (IBM ، الولايات المتحدة الأمريكية) و GM6. 0 soft (Gray Systems Theory Institution ، NUAA ، الصين). المضاد-ورمتم إجراء الاختبار من خلال طرقنا المنشورة [12] ، تم الحفاظ على خلايا HepG2 لسرطان الخلايا الكبدية البشرية في وسط RPMI1640 مع 10 بالمائة من مصل الأبقار الجنيني. نمت الخلايا في جو رطب يحتوي على 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية. تم استخدام طريقة SRB لتقييم انتشارمضاد-ورمأنشطة، ثم تم حساب IC لخلايا HepG2 ، وأخيراً ، تم استخدام IC ومناطق الذروة الطبيعية للتحليل الكيميائي. بعد ذلك ، تم الحصول على علامات النشاط المميزة لـ Mylabris.

النتائج والمناقشة

تحسين ظروف الاستخراج

للحصول على استخلاص كافٍ للمركبات المذابة في الماء من Mylabris ، تم تحسين نظام الاستخلاص. أظهر الموجات فوق الصوتية والارتجاع أنه يمكن استخلاص هذه المركبات على النحو الأمثل عن طريق الارتداد.

تحسين طريقة HPLC

للحصول على قمم كروماتوجرافية قصوى لوصف السمة الكلية للعشب ، تم فحص تكوين العمود الكروماتوغرافي ، والطور المتحرك ، وأطوال موجات الكشف (200 ، 254 ، 265 ، 278 نانومتر). أظهرت النتائج أن عمود Phenimenex Synergy Polar-RP80 والماء (الذي يحتوي على 1 في المائة من حمض الخليك الجليدي) والميثانول و 254 نانومتر كانت أفضل الظروف لتحليل Mylabris HPLC (الشكل 1) ، ويظهر هيكل 4 مواد قياسية في الشكل 2 .

التحقق من صحة طريقة

في هذه الدراسة ، تم فصل 14 قمة بشكل جيد واستخدمت كـ "قمم مشتركة". استندت الدقة والتكرار والاستقرار إلى زمن الاستبقاء (RT) ومنطقة الذروة (PA). لم تتجاوز قيم RSD لـ RT و PA للدقة (n =6) 0. 2 و 4 بالمائة على التوالي ؛ كانت قيم RSD لـ RA و PA للتكرار (n =6) أقل من 0. 2 و 4 بالمائة ، على التوالي ، وكانت قيم RSD للاستقرار (0-24 ساعة) أقل من { {10}} .4 و 5 بالمائة على التوالي ، مما يدل على أن العينات كانت مستقرة خلال 24 ساعة. أوضحت هذه النتائج أن جودة العينات المدروسة وطريقة HPLC كانت مستقرة وجيدة التحكم.

تقييم تشابه بصمات الأصابع

The fingerprint similarity analysis was used to evaluate the similarity of HPLC peaks. The similarities of MP and MC were calculated by the reference HPLC fingerprint, respectively. As shown in Table 1, except for two MP samples (from Guizhou2 and Guizhou5) with lower similarities (0.880 and 0.920, respectively), other samples of MP were >0.930. The similarities of MC samples were >{{0}}. 921 باستثناء عينات MC (من Guizhou2 و Guizhou4) ، التي كانت أوجه التشابه بينهما 0. 888 و 0. 887 على التوالي. أشارت هذه البيانات إلى أن جودة Mylabris داخل نوع واحد كانت مستقرة. ومع ذلك ، فإن أوجه التشابه بين ثلاث عينات MP فقط مقارنة ببصمة HPLC المرجعية كانت> 0 .930؛ وكانت أوجه التشابه بين عينتين MC فقط مقارنة ببصمة HPLC المرجعية> 0.921. أظهرت هذه النتائج أن نوعي Mylabris كانا متباينين ​​بشكل كبير في بعض مناطق الذروة.

التمييز بين MP و MC من خلال تحليل التعرف على الأنماط

For global analysis of the difference, PCA was used to find the quality variation of the samples from the two species of Mylabris. Figure 3 shows that the two-dimensional PCA model was constructed by the first two PCs, which included approximately 61.8% of the original data. The score plot showed that the MP and MC samples could not be separated by PCA. To understand the differences between MP and MC, an OPLS-DA model was established. As shown in Figure 4, the Mylabris samples could be classified into two groups with R2X=0.502, R2Y=0.492, and Q2=0.0769 as compared to the PCA model. These results showed that the OPLS-DA model was more suitable than the PCA model for distinct separation of the test samples based on their different components. From the S-plot of OPLS-DA, peak markers including peaks 1, 2, 4, 7, 9, 12, and 14 between MP and MC could be found (Figure 5). Based on VIP>1 ، القمم 1 ، 2 ، 4 ، 7 ، 9 ، 12 ، 14 قد تكون المتغيرات الأكثر أهمية في التمييز بين النوعين (الشكل 6). قد تلعب مجموعة الذروة (1 و 2 و 4 و 7 و 9 و 12 و 14) دورًا حيويًا في التمييز بين MP و MC كواسمات كيميائية مميزة.

علاقة تأثير الطيف عن طريق التحليل العلائقي الرمادي

To further evaluate the relationship between the variations of normalized peak area and IC50, grey relational analysis (GRA) was performed. The influence rank by normalized peak area was P13>P14>P3>P2>P12>P4>P9>P1>P10>P7>P6>P8>P5> P11 as shown in Table 2. The results indicated that the top-6 peak including peaks 13, 14, 12, 2, 3, and 4 were the main influencing factors for the antitumor effect based on the standard of Relative Grey correlative degree (RGCE) >0.75.

علاقة تأثير الطيف بواسطة MLRA

نموذج MLRA هو أكثر طرق النمذجة شيوعًا لاستنتاج تعقيد العلاقة بين متغيرين أو أكثر والاستجابة التي تم إنشاؤها بواسطة الصيغة التالية

حيث Y هي القيمة المقدرة وتمثل الاستجابة ؛ Xn متغير مستقل ، b {{0} هو التقاطع ، و bn هو معامل الانحدار لـ Xn. في هذه الدراسة ، تم تطبيق MLRA لتأسيس علاقة فعالية بصمات الأصابع بين قيم مناطق الذروة في بصمات HPLC و IC5 0 لمضاد HepG2 ، ثم العثور على المكونات المحتملة المضادة للأورام. تم العثور على ربط البيانات بواسطة نموذج MLRA الشائع ، وهو غير مناسب لاستكشاف العلاقة بين Y (IC50) و X (PA). تم استخدام نموذج PCA MLRA لدراسة علاقة تأثير بصمات الأصابع ، وتم اختيار أجهزة الكمبيوتر الستة الأولى ذات معدل مساهمة التباين التراكمي: 91.068 بالمائة للتحليل. أخيرًا ، تم إنشاء المعادلة التالية وفقًا لإخراج SPSS وأجهزة الكمبيوتر: IC 50=1. 115864 plus （1.87268PA 1- 699. 722PA2 بالإضافة إلى 25.7138PA 3 - 24. 1528PA4 plus 7.22878PA {{ 23}}. 2114PA6 بالإضافة إلى 2.95283PA 7- 15. 5305PA8 بالإضافة إلى 13.0297PA9 بالإضافة إلى 22.5683PA 10 - 10. 3462PA11 بالإضافة إلى 123.762PA12 بالإضافة إلى 31.0428PA 13 - 10. 702PA14) × 10-6. (كان R 0.682 ، P <>

دمج تحليل نوعين من Mylabris

أظهرت التجربة أنه يمكن استخدام بصمة HPLC لعكس الخصائص الكيميائية لمايلابريس. تم تطبيق خوارزميات التشابه و PCA و OPLS-DA لإيجاد الفرق بين MC و MP. تم تعريف مجموعة الذروة (1 و 2 و 4 و 7 و 9 و 12 و 14) على أنها علامات كيميائية مميزة.

بالإضافة إلى ذلك ، أثبت كل من GRA و MLRA أنهما وسيلة مرضية لمزيد من التمييز. يجب أن يكون دمج نتائج تحليل GRA و MLRA ، القمم 2 و 4 و 14 كعلامات نشاط لـ Mylabris مسؤولاً عن التأثير المضاد للورم ، والذي قد يكون أساس المادة الديناميكية الدوائية لـ Mylabris.

تم تحديد العلامات التفاضلية الهامة للذروة بخصائص كيميائية وعلامة نشاط مميزة. لذلك ، بين MC و MP على بصمات أصابع HPLC بعد تحليل علاقة تأثير الطيف ، كانت القمم 2 (السيتوزين) و 4 (غير معروف) و 14 (غير معروف) علامات تفاضلية مهمة للاختلافات بين MP و MC كما هو موضح في الشكل 7.

استنتاج

بشكل قاطع ، في البحث الحالي ، تم اقتراح طريقة HPLC للبصمات الكيميائية لـ MP و MC. من خلال الجمع بين تحليل بصمات الأصابع HPLC و PCA وتحليل علاقة تأثير الطيف مثل GAS و MLRA ، يمكن التمييز بين الخصائص الكيميائية والدوائية لنوعين قريبين من Mylabris. يشير هذا إلى أن المركبات من القمم 2 (السيتوزين) و 4 (غير معروف) و 14 (غير معروف) كعلامات تفاضلية مهمة لعبت دورًا مهيمنًا في التمييز بين MP و MC. يجب تحديد هيكل القمم 4 و 14 بواسطة تقنية أخرى. أثبتت طريقة أخذ بصمات HPLC جنبًا إلى جنب مع التحليل الإحصائي والقياسي الكيميائي وتحليل علاقة تأثير الطيف أنها فعالة في اكتشاف مكونات العلامة أو لتعزيز مراقبة الجودة منالاعشاب الطبية.

مراجع

1 وانغ جي إس. الاستخدامات الطبية لمايلابريس في الصين القديمة والدراسات الحديثة. J Ethnopharmacol 1989 ، 26 (2): 147-162.

2. Lin YS ، Lia YH ، Peng ZP ، وآخرون. تحديد محتوى الكانثاريدين وتأثيره المثبط على خلايا الورم الكبدي البشري HepG2. Biomed Res-India 2016 ، 27 (2): 533-536.

3. Xu MZ ، Lee WS ، Kim MJ ، وآخرون. Acyl-CoA: الأنشطة المثبطة لكولسترول أسيل ترانسفيراز لأميدات الأحماض الدهنية المعزولة من Mylabris phalerate Pallas. بيورج ميد كيم ليت 2004 ، 14 (16): 4277-4280.

4. Day RM ، Harbord M ، Forbes A ، et al. بثور الكانثاريدين: تقنية للتحقيق في تهريب الكريات البيض وإنتاج السيتوكين في مواقع الالتهاب عند البشر. J Immunol Methods 2001، 257 (1-2): 213-220.

5. Mo RY، Sun NX، Peng R. دراسة عن الغذاء المفضل للبالغين Mylabris phalerata في مجموعات جغرافية مختلفة. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2014 ، 39 (22): 4293-4296.

6. Wang XM ، Cheng XS ، Li XF. الخصائص البيولوجية للميلويديا وتغذيتها الاصطناعية. Guizhou Agricultural Sciences (Chin) 2007 ، 35 (2): 140-142.

7. Yang Y و Zhang J و Jin H وآخرون. التحليل الكمي بالاشتراك مع تقنية بصمات الأصابع والتحليل الكيميائي المطبق لتقييم ستة أنواع من Wild Paris باستخدام UHPLC-UV-MS. طرق الشرج J Chem 2016: e3182796.

8. Liu Y و Liu Z و Sun G وآخرون. مراقبة وتقييم اتساق جودة أقراص البزموت المركب Aluminate من خلال طريقة بسيطة لبصمة الإصبع مع التحديد المتزامن لخمسة مركبات وربطها بأنشطة مضادات الأكسدة. بلوس وان 2015 ؛ 10: e0118223.

9. Mehdinia A ، Asiabi M ، Jabbari A ، et al. تحليل الكانثاريدين في الخنافس البثرية الزائفة (Coleoptera: Oedemeridae) عن طريق الاستخراج المجهري للطور الصلب في فراغ الرأس ومقياس الطيف الكتلي للغاز اللوني. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2011 ، 879 (27): 2897-2901.

10. لي XM ، شياو شبيبة. دراسة على بصمات GC في Mylabris phalerata. المجلة الصينية لصيدلة المستشفيات (تشين) 2010 ؛ 30 (2): 116-119.

11. Luo CX و Sun و GX و Shi XF. بصمات Mylabris الرقمية بواسطة HPCE. صيدلية الجنوب الأوسط (تشين) 2008 ؛ 6 (2): 230-235.

12. Sun GX ، Luo CX ، و Wang ، Z. دراسة عن بصمات HPLC الرقمية من Mylabris. المجلة الصينية للتحليل الصيدلاني (تشين) 2008 ، 28 (7): 1031-1036.

13. Guo K و Li XF و Yan R et al. سرطان الخلايا الكبدية المضادة للإنسان HepG 2 نشاط خلايا الكانثاريدين المستمدة من مقاطعة قويتشو والمناطق المحيطة بها. مجلة الطب الحديث والصحة (تشين) 2016 ؛ 32 (5): 648-650.