arلغة
الصفحة الرئيسية / معرفة / المحتوى

معرفة

العلاج المناعي المشترك القائم على الجسيمات الشحمية مع ناهض TLR والأقراص المضغوطة 47- SIRP Checkpoint Blockade لعلاج فعال لسرطان القولون

Nov 28, 2023

خلاصة:

تعد المناعة المضادة للأورام عنصرًا أساسيًا في علاج السرطان ويتم التوسط فيها بشكل أساسي عن طريق الاستجابة المناعية الفطرية، والتي تلعب دورًا حاسمًا في بدء وتشكيل الاستجابة المناعية التكيفية. حددت الأدلة الناشئة نقاط التفتيش المناعية الفطرية ومستقبلات التعرف على الأنماط، مثل CD47 ومستقبل Toll-like 7 (TLR7)، كأهداف علاجية واعدة لعلاج السرطان. استنادًا إلى بروتين الاندماج Fc-CV1، الذي يشتمل على متغير SIRP عالي الألفة (CV1)، وجزء Fc من الجسم المضاد IgG1 البشري، استغلنا المستحضر الذي اقترن Fc-CV1 بالجسيمات الشحمية المحملة بـ imiquimod (ناهض TLR7) ( CILPs) لاستهداف CT26 بنشاط. نماذج ورم القولون مسانجي WT. كشفت الدراسات المختبرية أن CILPs أظهرت خصائص إطلاق مستدام متفوقة وكفاءة في امتصاص الخلايا مقارنة بالإيميكيمود الحر. في الجسم الحي، أثبتت الاختبارات أن CILPs أظهرت تراكمًا أكثر كفاءة في الأورام وتأثيرًا أكثر أهمية في قمع الورم من مجموعات التحكم. يمتلك هذا المستحضر للعلاج المناعي مزايا الجرعات المنخفضة والسمية المنخفضة. أظهرت هذه النتائج أن الجمع بين علاج حصار نقاط التفتيش المناعية (ICB) ومنبهات المناعة الفطرية، مثل Fc-CV1 ومستحضر الجسيمات الشحمية المحملة بالإيميكيمود المستخدم في هذه الدراسة، يمكن أن يمثل استراتيجية فعالة للغاية لعلاج الورم.

Benefits of cistanche tubulosa-Antitumor

فوائد cistanche tubulosa-Antitumor

الكلمات الدالة:

imiquimod; الجسيم الشحمي. اف سي-CV1; العلاج المناعي. سرطان القولون

1 المقدمة

تستمر معدلات الإصابة بالسرطان على مستوى العالم في الارتفاع سنويًا، مما يشكل تهديدًا خطيرًا لصحة سكان العالم ويضع عبئًا ثقيلًا على أنظمة الرعاية الصحية. وفقًا لتقرير منظمة الصحة العالمية، في عام 2020، حدثت 19.29 مليون حالة إصابة جديدة بالسرطان و9.96 مليون حالة وفاة بسبب السرطان في جميع أنحاء العالم [1]. ومع ذلك، مع التقدم المستمر في التشخيص السريري والجراحة والعلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي، تحسنت معدلات البقاء على قيد الحياة بشكل عام ونوعية حياة مرضى السرطان بشكل ملحوظ. ومن الجدير بالذكر أن العلاج المناعي، الذي نشأ مع لقاح كولي في تسعينيات القرن التاسع عشر [2]، يسبق كلاً من العلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي وقد حقق تقدمًا كبيرًا في العقد الماضي، مما أفاد مرضى السرطان.

تم التعرف على العلاج المناعي للورم بسبب توافقه الحيوي الممتاز وخصوصيته العالية وهو قادر على تحفيز الاستجابات المناعية للقضاء على الخلايا السرطانية [3-5]. هناك استراتيجيتان رئيسيتان للعلاج المناعي للورم هما تعزيز المناعة وتطبيع المناعة [6]. تتكون أنماط تعزيز المناعة بشكل رئيسي من العلاج السيتوكيني، واللقاحات العلاجية للورم، والأجسام المضادة وحيدة النسيلة. تعتبر مستقبلات Toll-like (TLRs) أهدافًا محتملة للعلاج المناعي للسرطان نظرًا لدورها في تنشيط جهاز المناعة الفطري. تم تطوير منبهات TLR كمساعد مناعي، وتخضع مجموعة متنوعة من منبهات TLR لتجارب سريرية [7]. حصلت الدهون الأحادية الفوسفوريل A ومنبهات imiquimod وTLR4 وTLR7، على التوالي، على موافقة إدارة الغذاء والدواء للتطبيق السريري [7-9]. ينشط Imiquimod، وهو ناهض TLR7 [9]، الاستجابات المناعية ويعزز النشاط المضاد للورم عن طريق تحفيز TLR7 [10،11]. يتم تمثيل استراتيجية التطبيع المناعي عن طريق أدوية حصار نقطة التفتيش المناعية (ICB) التي تنظم الاستجابة المناعية المعيبة للورم. منذ أول مثبط لنقطة التفتيش، تمت الموافقة على استخدام إبيليموماب للاستخدام السريري في الولايات المتحدة الأمريكية في عام 2011، وقد حققت مثبطات نقطة التفتيش المناعية، مثل مثبطات PD1/PDL1، طفرة في العلاج المناعي للسرطان [12-14]. باستثناء نقاط التفتيش المناعية المشابهة لـ PD1/PDL1، فإن بعض نقاط التفتيش المناعية الفطرية، مثل SIRP -CD47، قد جذبت أيضًا الكثير من الاهتمام وأصبحت مجالات ذات أهمية كبيرة في تطوير أدوية الأجسام المضادة [15-17].

تم تحديد نقطة تفتيش SIRP -CD47 لأول مرة في عام 1999 [18،19]. SIRP هو مستقبل CD47 يتم التعبير عنه في الخلايا العصبية للجهاز العصبي المركزي [20] والخلايا النقوية، بما في ذلك الخلايا الوحيدة والبلاعم والخلايا المحببة والخلايا الجذعية. CD47 هو "جزيء ذاتي التوسيم" يتم التعبير عنه في جميع الخلايا الطبيعية تقريبًا ويتم التعبير عنه بشكل مفرط في معظم الخلايا السرطانية [21]. على سطح الخلايا السرطانية، يرتبط CD47 بـ SIRP، مما يمنع البلعمة بوساطة البلاعم، وهي وسيلة مهمة للهروب المناعي للورم [22]. لقد ثبت أنه يمكن تعزيز بلعمة الخلايا البلعمية داخل البيئة الدقيقة للورم عند حظر ارتباط CD47 وSIRP [20-25]. لذلك، تم تطوير مثبطات نقاط التفتيش المناعية التي تمنع مسار CD47/SIRP وتطبيقها في علاج السرطان [26].

Desert ginseng—Improve immunity (2)

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

انقر هنا لعرض منتجات Cistanche Enhance Immunity

【اطلب المزيد】 البريد الإلكتروني: cindy.xue@wecistanche.com / تطبيق Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

في هذه الدراسة، استخدمنا مزيجًا من بروتين الإيميكيمود والبروتين الاندماجي (Fc-CV1) لعلاج سرطان القولون. CV1 عبارة عن بروتين SIRP مؤتلف بشريًا معدلاً وله درجة تقارب أعلى بمقدار 50000-مرة لـ CD47 مقارنة بالبروتين الأصلي [27]. تم إنشاء Fc-CV1 باستخدام تقنية "Knobs-into-holes"، استنادًا إلى مونومر CV1 وجزء Fc من IgG1 البشري. للتغلب على القيود المفروضة على الفعالية العلاجية الضعيفة والسمية الجهازية المرتبطة بالإيميكيمود [28،29]، قمنا بإعداد الجسيمات الشحمية النانوية من خلال طريقة حقن الإيثانول. تتميز الجسيمات الشحمية النانوية بخصائص السمية المنخفضة في توصيل الدواء [30،31]. بعد ذلك، تم تغليف الإيميكيمود في الجسيمات الشحمية التي سطحها مترافق مع Fc-CV1. أخيرًا، يمكن لهذا المستحضر النانوي الجديد أن يوصل بفعالية منبهات TLR7 إلى أنسجة الورم وله وظائف مزدوجة كدواء ICB وناهض TLR. تم استخدامه لعلاج نموذج ورم القولون الجيني CD 47+ CT26.WT [32].

2. النتائج والمناقشة

2.1. توصيف LPs (الجسيمات الشحمية الفارغة)، وILPs (الجسيمات الشحمية المغلفة بـ Imiquimod غير المضغوطة)، وCLPs (الجسيمات الشحمية المستهدفة CD47)، وCILPs (المقترنة Fc-CV1 إلى Imiquimod (ناهض TLR7) -الجسيمات الشحمية المحملة)

تم إعداد CILPs بنجاح عن طريق حقن الإيثانول وطريقة التدرج كبريتات الأمونيوم. يعرض الشكل 1A عملية تركيب CILPs. أظهر تحليل TEM أن CILPs كانت كروية وموحدة في الشكل (الشكل 1B). وعلاوة على ذلك، كشفت نتيجة DLS أن حجم الجسيمات من الجسيمات الشحمية الأربعة كان التوزيع الأحادي (الشكل 1C). تم التحقق من معدل الربط (BR) بواسطة SDS-PAGE، والذي يتم عرضه في الشكل 1D، E. ويبين الشكل 1D الوزن الجزيئي لـ Fc-CV1 وسطوع النطاق النسبي لـ CILPs المُدَالة والمُدَالة مسبقًا. تم حساب BR ليكون 67.13 ± 37.10% من خلال قياس كثافة المسح الضوئي للصورة J للنطاقات الكهربية (الشكل 1E)، مما يوفر إمكانية استهداف الخلايا السرطانية على القرص المضغوط 47-.

Figure 1. (A) Schematic illustration of the synthesis of CILPs. (B) TEM image of CILPs


الشكل 1. (أ) رسم تخطيطي لتوليف CILPs. (ب) صورة TEM لـ CILPs

تم استخدام HPLC للكشف عن كفاءة التغليف (EE) لـ imiquimod (الشكل التكميلي S1). كما هو موضح في الشكل التكميلي S1A، أظهر imiquimod المجاني ذروة واحدة كبيرة، في حين لم تظهر CLPs أي ذروة في ظل نفس ظروف الاختبار (الشكل التكميلي S1B). ولذلك، فمن الممكن الكشف عن CILPs مباشرة في ظل ظروف الاختبار. كما هو متوقع، تم اعتبار قيم اكتشاف CILPs قبل وبعد غسيل الكلى بمثابة محتوى الدواء الإجمالي ومحتوى الدواء في الجسيمات الشحمية، على التوالي (الشكل التكميلي S1C، D). تم حساب EE لـ imiquimod ليكون 85.44 ± 4.11%. بالمقارنة مع نظام توصيل الدواء السلبي المُبلغ عنه [33-35]، حققت هذه الدراسة كفاءة تغليف أعلى وعملية تحضير أكثر ملاءمة.

أظهرت DLS أن أقطار LPs كانت 111.567 ± 0.655 نانومتر، بينما أظهرت CLPs وILPs وCILPs حجمًا أكبر قليلاً قدره 117.467 ± 0.34{{10} } نانومتر، 12 0.233 ± 0.776 نانومتر، و 13 {{3 0}}.033 ± 0.974 نانومتر، على التوالي (الجدول 1). قد تعزى التغييرات في حجم هذه الجسيمات الشحمية إلى تعديل Fc-CV1 وimiquimod. وكان مؤشر PDI قريبًا من 0.1 (الجدول 1)، مما يشير إلى أن مركبات توصيل الأدوية هذه كانت متجانسة للغاية في توزيعها. بالإضافة إلى ذلك، تم قياس القيم زيتا المحتملة لـ LPs وCLPs وILPs وCILPs لتكون −2.231 ± 0.167 mV، −2.492 ± 0.033 mV، −2.383 ± 0.070 mV، و −2.075 ± 0.070 mV، على التوالي (الجدول 1) ، مما يشير إلى أن Fc-CV1 المترافق مع السطح والإيميكيمود المغلف كان لهما تأثير ضئيل على شحنة الجسيمات الشحمية.

الجدول 1. أقطار، زيتا المحتملة، PDI، وEE من LPs، CLPs، ILPs، وCILPs، على التوالي.

Table 1. The diameters, zeta-potential, PDI, and EE of LPs, CLPs, ILPs, and CILPs, respectively.


2.2. كفاءة امتصاص الخلايا في المختبر

تم تقييم كفاءة امتصاص الخلايا لـ CILPs من خلال كثافة مضان Cy5 التي تناولتها خلايا CT26.WT باستخدام نظام تصوير عالي المحتوى. كما هو مبين في الشكل 2، مقارنة بمجموعات Cy5 وILP-Cy5 المجانية، أظهرت مجموعات CILPs-Cy5 قدرة أقوى على امتصاص الخلايا بعد 30 دقيقة من الحضانة. استنتجت هذه النتائج أن Fc-CV1 عزز قدرة التوصيل داخل الخلايا للجسيمات الشحمية المحملة بالإيميكيمود بسبب التقارب المحدد لمستقبل Fc-CV1، مما أدى إلى تأثير أكثر فعالية مضاد للورم.


Figure 2. The images of CT26.WT cells after incubation with the free Cy5, ILPs-Cy5, and CILPs-Cy5 (red) for 0.5 h, and staining with DAPI (blue). Scale bar: 50 µm. (n = 3). * p < 0.05; **** p < 0.0001


الشكل 2. صور الخلايا CT26.WT بعد الحضانة مع Cy5 الحرة، ILPs-Cy5، وCILPs-Cy5 (الأحمر) لـ 0.5 ح، وتلطيخ مع DAPI (الأزرق). شريط النطاق: 5 0 ميكرومتر. (ن {{10}}). * ف < 0.05؛ **** ع <0.0001

2.3. منحنيات الافراج عن الجسيمات الشحمية

تم قياس منحنيات إطلاق الدواء الخاصة بـ imiquimod وILPs وCILPs المجانية في بيئة محاكاة في الجسم الحي. يوضح الشكل 3 أن imiquimod المجاني تم إطلاقه بالكامل بعد ساعة واحدة، بينما كان معدل إطلاق imiquimod المغلف بـ ILPs وCILPs 54.75 ± 4 فقط.08% و39.70 ± 0.05% عند 12 ساعة ، على التوالى. علاوة على ذلك، يمكن إغلاق الإطلاق البطيء للإيميكيمود في ILPs وCILPs من خلال خاصية إطلاق الدواء الخاضعة للرقابة في الجسيمات الشحمية. لم يُظهر RR لـ imiquimod في ILPs وCILPs أي فرق كبير عند 96 ساعة، مما يشير إلى أن "الإدراج اللاحق" أظهر تأثيرًا ضئيلًا على استقرار غشاء الجسيمات الشحمية.

figure 3. Imiquimod release curves of the free imiquimod, ILPs, and CILPs in PBS at 37 ◦C. Data are presented as means ± standard deviation (n = 3). * p < 0.05, ** p < 0.01

الشكل 3. منحنيات إطلاق Imiquimod لـ imiquimod وILPs وCILPs المجانية في PBS عند 37 درجة مئوية. يتم تقديم البيانات كوسيلة ± الانحراف المعياري (ن=3). * ع < 0.05، ** ع < 0.01

2.4. دراسة السمية الخلوية

لدراسة السمية الخلوية لـ CILPs في المختبر، تم إجراء اختبار CCK {{0}} على خلايا CT26.WT. كما هو مبين في الشكل 4، فإن CILPs بتركيزات منخفضة (0.1-1 ميكروغرام/مل) لم تظهر السمية الخلوية، وهو ما يتوافق مع سلامة العلاج بالتحصين. انخفضت صلاحية الخلية بشكل طفيف بعد علاج imiquimod بـ 5 ميكروغرام / مل، ربما بسبب ROS وموت الخلايا المناعية بوساطة الشبكة الإندوبلازمية الناجم عن imiquimod [36]. وعلاوة على ذلك، يؤدي CILPs إلى انخفاض كبير في بقاء الخلية مقارنة بمجموعات المراقبة، وهو ما يعزى إلى التأثير التآزري لـ imiquimod وFc-CV1.


Figure 4. The viability of the cells treated with Fc-CV1, imiquimod, CLPs, ILPs, and CILPs for 24 h. The concentration of the Fc-CV1 and imiquimod were both 0–10 µg/mL. * p < 0.05, ** p < 0.01, ns = no significant differences

الشكل 4. جدوى الخلايا المعالجة بـ Fc-CV1، وimiquimod، وCLPs، وILPs، وCILPs لمدة 24 ساعة. كان تركيز Fc-CV1 وimiquimod كلاهما 0–10 ميكروغرام/مل. * ع < 0.05، ** ع < 0.01، نانوثانية=لا توجد فروق ذات دلالة إحصائية

2.5. دراسة التوزيع الحيوي

يؤثر توزيع وتراكم التركيبات المختلفة في الأورام والأعضاء الرئيسية بشكل مباشر على التأثير العلاجي. بعد الإعطاء عن طريق الوريد، تمت مراقبة إشارات التألق باستخدام نظام تشريح الأحياء تحت الحمراء القريبة لتقييم توزيع وتراكم التركيبات المختلفة في الأورام والأعضاء الرئيسية بعد 24 ساعة. كما هو مبين في الشكل 5، كانت كثافة التألق الإجمالية لـ ILPs-Cy5 وCILPs-Cy5 أعلى من Cy5 الحر، مما يشير إلى أن الجسيمات الشحمية تمتلك خاصية طويلة الانتشار في الجسم الحي. بالإضافة إلى ذلك، كانت شدة التألق لمجموعة العلاج CILPs-Cy5 هي الأعلى في أنسجة الورم، وهو ما يمكن أن يعزى إلى تأثير استهداف الورم بروابط Fc-CV1، وبالتالي تعزيز التأثير المضاد للورم. ومن المثير للدهشة أن شدة مضان الكبد والطحال كانت أكثر فعالية من الأعضاء الأخرى، وهو ما يرجع على الأرجح إلى بلعمة الجسيمات الشحمية بواسطة الجهاز الشبكي البطاني (RES) في الكبد والكلى [37].

Figure 5. The distribution of Cy5-fluorescence in tumors and major organs at 24 h after intravenous administration. Data are shown as means ± standard deviation (n = 3). **** p < 0.0001


الشكل 5. توزيع مضان Cy5- في الأورام والأعضاء الرئيسية عند 24 ساعة بعد تناوله عن طريق الوريد. تظهر البيانات كوسيلة ± الانحراف المعياري (ن=3). **** ع < 0.0001

2.6. دراسة تثبيط الورم في الجسم الحي

يظهر الجدول العلاجي (الشكل 6A) وتأثيرات الاستعدادات المختلفة في الشكل 6. بالمقارنة مع مجموعتي PBS وLP، أظهرت مجموعات العلاج الأخرى بعض التأثيرات الكابتة للورم. والجدير بالذكر أن حجم الورم كان ضئيلاً بعد العلاج باستخدام CILPs، مما يشير إلى أن CILPs يمتلك تأثيرًا ممتازًا لقمع الورم (الشكل 6B).

Figure 6. (A) Schematic illustration of anti-colon cancer treatment on the CT26.WT tumor model. (B) The growth curves of tumor volume during the treatment period. (C) Relative tumor photographs and (D) weight of the tumor collected from different treatment groups on day 17. (E) The relative body weight ratio of the body weight compared with 0 day. Data are presented as mean ± standard deviation (n = 5). * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001.


الشكل 6. (أ) رسم تخطيطي لعلاج سرطان القولون المضاد على نموذج الورم CT26.WT. (ب) منحنيات نمو حجم الورم خلال فترة العلاج. (ج) الصور الفوتوغرافية النسبية للورم و(د) وزن الورم الذي تم جمعه من مجموعات علاجية مختلفة في اليوم 17. (هـ) نسبة وزن الجسم النسبية لوزن الجسم مقارنة بيوم 0. يتم تقديم البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط ​​(ن=5). * ع < 0.05، ** ع < 0.01، *** ع < 0.001.

وفي نهاية التجربة، تم التضحية بالفئران واستئصال أورامها وتصويرها ووزنها لتحديد الفعالية العلاجية للمستحضرات المختلفة. كما هو مبين في الشكل 6C، D، كانت مجموعة علاج CILPs أصغر وأخف الأورام مقارنة بالمجموعات الأخرى، مما يدل على أن CILPs تمتلك أكبر تأثيرات مثبطة للورم. يوضح الجدول 2 أن معدل تثبيط نمو الورم لـ CILPs تم حسابه ليكون 84.35٪. بالإضافة إلى ذلك، كان معدل تثبيط الورم 84.35% أعلى بكثير من مجموعتي CLPs وILPs، وهذا يعني أن هناك تأثير تآزري لحجب محور "لا تأكلني" وتفعيل الاستجابة المناعية. . بالمقارنة مع المستحضر المكافئ في المختبر (2.5-5 ميكروغرام/مل)، كان معدل التثبيط الأعلى مرتبطًا ارتباطًا وثيقًا بمعدل الاستجابة المناعية المنشّطة بالتركيبة وعرقل آلية الهروب المناعي في الجسم الحي، والتي لم تكن متوفرة في المختبر.

الجدول 2. بيانات وزن الورم وتثبيط نمو الورم (TGI) لمجموعات العلاج المختلفة.

Table 2. The data of tumor weight and tumor growth inhibition (TGI) of various treatment groups.


2.7. CILPs يزيد من تسلل الخلايا التائية وإفراز الإنترفيرون

لاستكشاف بيئة الخلايا المناعية للأورام، تم تحليل الخلية المناعية الناجمة عن CILPs مناعيًا كيميائيًا في نهاية الاختبار المضاد للورم. تمت زيادة الخلايا التائية CD 4+ وCD 8+ في أقسام الورم في مجموعات CILPs (الشكل 7). أدى التسليم المشترك لـ Fc-CV1 والعلاج imiquimod إلى تسلل كبير للخلايا التائية CD4+ وCD8+. بالإضافة إلى ذلك، كان هناك إفراز كبير للإنترفيرون في الأورام التي تخضع لعلاج CILPs، وذلك لأن CILPs أثارت مستقبلات Toll-like 7 ونشطت الاستجابة المناعية.

Figure 7. Immunohistochemistry of mouse tumor tissues; positive cells are stained brown. Scale bar, 50 µm (n = 5).

الشكل 7. الكيمياء المناعية لأنسجة ورم الفأر؛ الخلايا الإيجابية ملطخة باللون البني. شريط النطاق، 50 ميكرومتر (ن=5).

2.8. تقييم الأمن الحيوي لـ CILPs

كانت السلامة الحيوية للعلاج بوساطة CILPs أيضًا مؤشرًا مهمًا من حيث الوصول إلى التقييم العلاجي. أثناء دراسة تثبيط الورم في الجسم الحي، لم يحفز CILPs فقدانًا كبيرًا للوزن في فترة العلاج (الشكل 6D). كانت المعلمات البيوكيميائية للكبد والكلى كلها في المعدل الطبيعي وفقا للنطاق المرجعي القياسي للفئران (الجدول 3)، ولم تظهر أنسجة الأعضاء أي تغييرات كبيرة، مما يشير إلى أن CILPs تمتلك سلامة بيولوجية ممتازة (الشكل 8). تعتبر هذه النتائج حاسمة في تقييم إمكانات CILPs كعامل علاج مناعي آمن وفعال لعلاج السرطان.

الجدول 3. المعلمات البيوكيميائية للكبد والكلى

Table 3. The biochemical parameters of the liver and kidney

Figure 8. H&E (hematoxylin and eosin) staining of the main organs. Scale bar, 50 µm (n = 3)


الشكل 8. تلطيخ H&E (الهيماتوكسيلين ويوزين) للأعضاء الرئيسية. شريط النطاق، 50 ميكرومتر (ن=3)

3. المواد والأساليب

3.1. مواد

تم شراء Imiquimod من MedChem Express (شنغهاي، الصين). تم توفير Fc-CV1 من قبل مختبر الدولة الرئيسي لأدوية الأجسام المضادة والعلاج الموجه. تم شراء الكوليسترول والليسيثين المهدرج (HSPC) وDSPE-PEG2000 وDSPE-PEG2000-NHS وDSPE-PEGCy5 من شركة Xi'an Ruixi Biological Technology Co., Ltd. (شيان، الصين). تم الحصول على 40,6-diamidino-2-فينيليندول (DAPI) من شركة Keygen Biotech (نانجينغ، الصين). تم الحصول على كبريتات الأمونيوم من سينوفارم (شنغهاي، الصين). تم شراء الميثانول (الدرجة الكروماتوغرافية) والأسيتونيتريل (الدرجة الكروماتوغرافية) من شركة Aladdin Reagent Company (شنغهاي، الصين). الكواشف الأخرى كلها من الدرجة التحليلية المحلية. خط خلايا سرطان القولون الفأري CT26. تم توفير WT بواسطة البنك الخلوي التابع للأكاديمية الصينية للعلوم. تمت زراعة الخلايا في حاضنة خلايا في وسط RPMI 1640 تحتوي على 10٪ FBS (Thermo Fisher Scientific، New York، NY، USA) بنسبة 5٪ من ثاني أكسيد الكربون و 95٪ من الهواء. تم توفير إناث فئران BALB / c لمدة 4-6 أسابيع من قبل شركة Pengyue Laboratory Animal Breeding Co., Ltd. (جينان، الصين).

3.2. تحضير الجسيمات الشحمية الفارغة

أولاً، تم وزن 13.455 مجم من HSPC، و4.3595 مجم من DSPE-PEG2000، و4.7095 مجم من الكوليسترول بدقة وتم إذابته في 0.1 مل من الإيثانول (HSPC: DSPE-PEG2000: الكوليسترول=55.5: 5.05:39.3 النسبة المولية). ثانياً، تم حقن محلول الإيثانول بسرعة في محلول كبريتات الأمونيوم المسخن مسبقاً (250 ملم، 1 مل، 65 درجة مئوية) عن طريق محقنة ثم تم تحضينه لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 65 درجة مئوية مع التحريك المغناطيسي. بعد ذلك، تم بثق المحلول المُجهز على التوالي من خلال أغشية البولي كربونات (Avanti، Alabaster، AL، USA)؛ وكان الحجم 200 نانومتر، 100 نانومتر، و 50 نانومتر، على التوالي. وأخيراً، كان الحل الناتج هو الجسيمات الشحمية الفارغة (LPs) بتركيز دهني قدره 22.5 ملغم/مل.

3.3. تحضير CD47 الجسيمات الشحمية المغلفة بالإيميكيمود المستهدفة

أولاً، تم إذابة DSPE-PEG2000-NHS في ddH2O (60 ◦C) ثم خلطه مع Fc-CV1 وحضنه في طاولة رج عند درجة حرارة الغرفة لمدة 5 ساعات (Fc-CV1:DSPEPEG2000- NHS=12:1 النسبة المولية). تتضمن آلية التفاعل الكيميائي للارتباط بين Fc-CV1 وDSPE-PEG2000-NHS تفاعل إستر NHS مع الأمين الأولي على Fc-CV1 وتشكيل اتحاد رابطة أمين الجدول. تم خلط المحلول المحضر بشكل متناسب مع LPs واحتضانه عند 60 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لإدخال Fc-CV1 في الجسيمات الشحمية، والذي تم تسميته "بعد الإدراج" [38]. كانت نسب الخليط أنه تم تعديل 2.25 مجم Fc-CV1 لكل 22.5 مجم من الجسيمات الشحمية. بعد ذلك تم الحصول على الجسيمات الشحمية المستهدفة CD47 (CLPs).

بعد ذلك، تم وضع CLPs في كيس غسيل الكلى (300 كيلو دالتون) وتم غسيلها ضد HEPES (10 مم، الرقم الهيدروجيني=7.4) لمدة ساعة واحدة لإزالة كبريتات الأمونيوم وFc-CV1 المتبقية في الطور المائي الخارجي. تم تحضين CLPs التي تم غسيلها بمحلول imiquimod (5 مجم / مل) بنسبة 1 مجم إلى 7 ميكرومول من الدهون الفوسفاتية الكلية في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة ثم تمت غسيلها ضد PBS (300 كيلو دالتون) ثلاث مرات للتخلص من imiquimod غير المغلف، والذي يشير إلى تقنية التدرج كبريتات الأمونيوم [39]. ثم تم الحصول على CILPs. بالإضافة إلى ذلك، تم تحضير الجسيمات الشحمية المغلفة بـ imiquimod (ILPs) التي لا تحتوي على أقراص مضغوطة. تم اعتبار CLPs و ILPs بمثابة عنصر تحكم في CILPs.

3.4. التوصيف

تم تصوير مورفولوجيا هذه الجسيمات الشحمية باستخدام المجهر الإلكتروني النافذ (TEM، Joel، Tokyo، Japan). تم تحديد الحجم وإمكانات زيتا ومؤشر تشتت البوليمر (PDI) لهذه الجسيمات الشحمية عن طريق تشتت الضوء الديناميكي (DLS) وانتثار الضوء الكهربي (ELS) باستخدام ZSE بحجم Malvern's Zeta (Malvern، UK). تم قياس معدل الارتباط (BR) لـ Fc-CV1 المدرج في الجسيمات الشحمية بنسبة 15٪ من كبريتات الصوديوم لوريل بولي أكريلاميد الكهربائي (SDS-PAGE) وبرنامج Image J (Bethesda، MD، USA). تم الكشف عن كفاءة التغليف (EE) لـ imiquimod بواسطة تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء (HPLC، Thermo Fisher Scientific، New York، NY، USA).

effects of cistance-antitumor

فوائد cistanche tubulosa-Antitumor

3.5. في دراسة امتصاص الخلايا المختبرية

تم تحديد امتصاص الخلايا المختبرية لهذه الجسيمات الشحمية من خلال شدة التألق التراكمي لـ Cy5 في CT26. خلايا WT. تم تحضين DSPE-PEG-Cy5 مع CILPs وILPs (DSPE-PEG-Cy5: CILPs أو ILPs=1:5 نسبة الكتلة) عند 60 ◦C لمدة ساعة واحدة، على التوالي، ثم الجسيمات الشحمية الفلورية تم الحصول على اسمه CILPs-Cy5 وILPs-Cy5. تم زرع خلايا CT26.WT في 96- صفائح جيدة وتقسيمها عشوائيًا إلى ثلاث مجموعات (1 × 104 خلية / بئر، n=3). بعد أن وصل التقاء الخلية إلى 50-70٪، تم تحضين كل مجموعة باستخدام Cy5 وILPs-Cy5 وCILPs-Cy5 مجانًا، على التوالي، لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية، حيث كانت التركيزات النهائية لـ Cy5 1 ميكروغرام / مل في 0.1 مل RPMI 1640 متوسط. بعد ذلك، تم تجميد الخلايا بنسبة 4% من بارافورمالدهيد لمدة 15 دقيقة بعد غسلها مرتين باستخدام PBS ثم صبغها بـ 10 ميكرولتر DAPI (1 ميكروجرام/ميكرولتر) لمدة 10 دقائق بعد غسلها مرتين باستخدام PBS. أخيرًا، تم تسجيل امتصاص كل مجموعة من الخلايا بواسطة نظام تصوير عالي المحتوى (Molecular Devices، Sunnyvale، CA، USA) بعد الغسيل مرتين باستخدام PBS.

3.6. دراسة إطلاق Imiquimod

تم إجراء منحنيات إطلاق العديد من الجسيمات الشحمية المحملة بالأدوية باستخدام طريقة غسيل الكلى (300 كيلو دالتون)، وتمت مقارنة النتائج بمحلول الإيميكيمود المجاني. باختصار، تم تعبئة 0.6 مل من ILPs وCILPs ومحلول imiquimod بشكل منفصل في أكياس غسيل الكلى ثم تم وضعها في 500 مل من محلول PBS (الرقم الهيدروجيني=7.4، 37 ◦C). تم استخراج كميات متساوية من العينات من الأكياس على فترات زمنية محددة سلفا (0، 0.5، 1، 2، 4، 6، 8، 10، 12، 24، 48، 72، و 96 ساعة)، ومعدل الإطلاق (RR) تم حساب imiquimod باستخدام المعادلة التالية:

image


حيث يمثل Sund وSd منطقة الذروة HPLC لـ imiquimod في المستحضرات التي تم غسيلها مسبقًا وغسيلها في أوقات مختلفة، على التوالي (n=3).

3.7. السمية الخلوية لـ CILPs

CT {{0}}. تم ​​زرع خلايا WT في 96- صفيحة بئر (1 × 104 / بئر، n=3) وتم زراعتها في 100 ميكرولتر من وسط RPMI 1640 حتى التقاء وصلت إلى 70% بشكل قريب. من أجل تحديد السمية الخلوية لـ CILPs، تمت إزالة وسط RPMI 1640 من كل بئر واستبداله بمحلول معقد من CILPs ووسط RPMI 1640، بتركيزات Fc-CV1 وimiquimod تتراوح من 0 إلى 10 ميكروغرام/مل. تم تحضين الخلايا بمحلول معقد لمدة 24 ساعة. وبالإضافة إلى ذلك، فإن الخلايا التي عولجت بـ Fc-CV1 وCLPs ومحلول imiquimod وILPs بتركيز مماثل اعتبرت مجموعات مراقبة. تم اكتشاف الخلايا الباقية باستخدام اختبار CCK-8 بعد 24 ساعة، واعتبرت صلاحية الخلايا غير المعالجة 100%.

3.8. دراسة التوزيع الحيوي

تم حقن تسع فئران أنثى BALB/c تحت الجلد باستخدام CT26. تم تقسيم خلايا WT (5 × 105 ) الموجودة في الجهة اليمنى وهذه الفئران الحاملة للورم بشكل عشوائي إلى ثلاث مجموعات (ن=3). تم قياس أحجام الورم باستخدام الفرجار وتم حسابها بالصيغة التالية:

image


عندما وصل حجم الورم إلى 100 مم3، تم حقن Cy5 وILP-Cy5 وCILPs-Cy5 مجانًا عن طريق الوريد بجرعة Cy5 قدرها 0.4 مجم/كجم. وبعد أربع وعشرين ساعة من الحقن في الوريد، تم إخراج الورم والقلب والكبد والطحال والرئة والكلى. تم الكشف عن إشارات مضان للأورام والأعضاء الرئيسية بواسطة نظام التصوير البصري IVIS (IVIS Lumina LT III، PerkinElmer، Waltham، MA، USA).

3.9. دراسة تثبيط الورم في الجسم الحي

تم تقسيم خمسة وثلاثين أنثى من الفئران BALB/c بشكل عشوائي إلى سبع مجموعات (ن=5)، و5 × 1 05 CT26. تم حقن خلايا WT تحت الجلد في الجهة اليمنى من كل فأر. عندما أصبح حجم ورم الفأر حوالي 100 مم3، بدأ العلاج. تم حقن PBS وLPs وimiquimod وFc-CV1 وILPs وCLPs وCILPs عن طريق الوريد في الأيام 0 و4 و8 و12. وكانت جرعة imiquimod 2.5 ملغم/كغم في الحقنتين الأولى والثانية و5 ملغم/كغم في الحقنة الثالثة والرابعة. في جميع الحقن، كانت جرعة Fc-CV1 5 ملغم/كغم. عند هذه الجرعة، كان تركيز الدواء في الجسم 2.5-5 ميكروغرام/مل، مما أدى إلى تسمم الخلايا في تجربة في المختبر. تم قياس أقطار الورم ووزن الجسم كل يوم أثناء العلاج. وفي اليوم السابع عشر، تم استئصال أورام الفئران وقياس أوزانها. تم حساب تثبيط نمو الورم (TGI) وفقًا للصيغة التالية:


image


3.10. الكيمياء المناعية

تم إجراء تلطيخ الكيمياء المناعية لـ CD4 وCD8 وIFN في أنسجة الورم وفقًا للبروتوكول القياسي. بعد إزالة البارافين وإعادة ترطيب قسم البارافين من أقسام أنسجة الورم، تمت إضافة 3٪ من BSA إلى الدائرة لتغطية الأنسجة، ثم تم إغلاقها لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. تم تلوين المقاطع بالأجسام المضادة CD4 وCD8 وIFN (Servicebio، ووهان، الصين) طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية، ثم تم تحضينها بجسم مضاد ثانوي (مسمى HRP، Servicebio، ووهان، الصين) في درجة حرارة الغرفة لمدة 50 دقيقة. بعد غسلتين مع برنامج تلفزيوني. في النهاية، تم تصور المقاطع تحت المجهر (نيكون، E100، طوكيو، اليابان) بعد التفاعل مع عامل مولد اللون DAB.

Desert ginseng—Improve immunity (9)

cistanche tubulosa-تحسين الجهاز المناعي

3.11. تقييم الأمن الحيوي لـ CILPs

وفي نهاية دراسة تثبيط الورم تم جمع كافة الأورام وقياس وزن هذه الأورام. تم الكشف عن المعلمات البيوكيميائية، بما في ذلك ناقلة أمين الألانين (ALT)، وناقلة أمين الأسبارتات (AST)، والكرياتينين (CREA)، واليوريا (اليوريا)، في دم الفئران. تم إصلاح أنسجة الورم الطازجة والأعضاء الرئيسية باستخدام بارافورمالدهيد بنسبة 4٪ ودمجها في البارافين باستخدام آلة التضمين (Wuhan Junjie Electronics، JB-P5، Wuhan، China). تم قطع شرائح الأنسجة بسماكة 5 ميكرون من خلال مشراح (Leica Instrument، RM2016، شنغهاي، الصين)، ثم تم تلوينها بالهيماتوكسيلين ويوزين (H&E) وفقًا للبروتوكول. وفي وقت لاحق، لوحظت شرائح تلطيخ تحت المجهر (نيكون، E100، طوكيو، اليابان).

3.12. تحليل احصائي

يتم التعبير عن جميع البيانات على أنها تعني ± SD. تم اختبار مستوى الأهمية بين المجموعات بواسطة ANOVA أحادي الاتجاه باستخدام Graphpad Prism 8.0.2. تم تعريف p <0.05 على أنه فرق كبير.

3.13. أخلاقيات الحيوان

تمت الموافقة على جميع الإجراءات والتوصيات المتعلقة بالحيوانات من قبل اللجنة الخاصة لأخلاقيات البحث العلمي بجامعة لياوتشنغ باتباع الإرشادات الوطنية لرعاية واستخدام حيوانات المختبر (رمز الموافقة: 2022111010؛ تاريخ الموافقة: 1 نوفمبر 2022).

Cistanche deserticola—improve immunity (6)

نبات السيستانش - يعمل على زيادة جهاز المناعة

4 - نتائج

باختصار، تم تطوير الجسيمات الشحمية المستهدفة بالقرص المضغوط47-المغلفة بـ imiquimod بنجاح، وأثبتت النتائج المختبرية أن CILPs تمتلك إطلاقًا أفضل استدامة وتأثير استهداف محدد. أظهرت النتائج في الجسم الحي أن الخلايا السرطانية يمكن أن تتناول المستحضر بشكل فعال وأنه أظهر كفاءة ممتازة في علاج الورم والسلامة الحيوية بسبب الوظيفة المزدوجة للاستجابة المناعية وحصار نقطة التفتيش المناعية الفطرية. لذلك، يبدو أن الجسيمات الشحمية المغلفة بالإيميكيمود والمقترنة بـ Fc-CV1 تعد بمثابة دواء نانوي جديد واعد لتحسين علاج ورم التعبير CD47. قد يكون العلاج المناعي المعتمد على المناعة الفطرية بمثابة استراتيجية عامة ضد نمو الورم من أجل التوليفات التآزرية مع ICB في المستقبل.

مراجع

1. سونغ، هـ؛ فيرلي، J .؛ سيجل، ر.ل. لافيرسان، م.؛ سورجوماتارام، أنا؛ جمال، أ.؛ براي، ف. إحصاءات السرطان العالمية 2020: تقديرات جلوبوكان لمعدلات الإصابة والوفيات في جميع أنحاء العالم لـ 36 حالة سرطان في 185 دولة. كاليفورنيا السرطان J. كلين. 2021, 71, 209-249. [CrossRef] [مجلات]

2. كارلسون، أردي. فليكينجر، جي سي، الابن؛ سنوك، AE Talkin 'Toxins: من Coleys إلى العلاج المناعي الحديث للسرطان. السموم 2020، 12، 241. [CrossRef] [PubMed]

3. بارباري، سي؛ فونتين، T.؛ باراجولي، ب. لاميشان، ن.؛ جاكوبسكي، س. لاميشان، ب. ديشموخ، العلاج المناعي RR واستراتيجيات الجمع بين الأورام المناعية. كثافة العمليات. جيه مول. الخيال العلمي. 2020، 21، 5009. [المرجع المتقاطع]

4. هيغدي، ملاحظة؛ تشن، DS أهم 10 تحديات في العلاج المناعي للسرطان. الحصانة 2020, 52, 17-35. [المرجع المتقاطع]

5. جاين، ك.ك علاج الأورام المناعي الشخصي. ميد. برينس. تدرب. 2021, 30, 1–16. [المرجع المتقاطع]

6. سنمحمد، م.ف. تشين، إل. تحول نموذجي في العلاج المناعي للسرطان: من التعزيز إلى التطبيع. خلية 2018، 175، 313-326. [المرجع المتقاطع]

7. حسين، وم. ليو، تي واي؛ سكوارتشينسكي، م.؛ توث، آي. منبهات المستقبلات الشبيهة بالتول: مراجعة براءات الاختراع (2011-2013). رأي الخبراء. هناك. تربيتة. 2014، 24، 453-470. [المرجع المتقاطع]

8. تشي، ه.؛ لي، C.؛ تشاو، خ. تشانغ، L.؛ نانوغرام، السل . جين، ج. Sha، O. النشاط المضاد للورم لمنبهات مستقبلات Toll-Like 7. أمام. فارماكول. 2017، 8، 304. [CrossRef] [PubMed]

9. وانغ، ي.؛ تشانغ، S.؛ لي، ه.؛ وانغ، ه.؛ تشانغ، T.؛ هاتشينسون، السيد؛ يين، ه.؛ وانغ، X. مُعدِّلات الجزيئات الصغيرة للمستقبلات المشابهة. لجنة التنسيق الإدارية. الكيمياء. الدقة. 2020، 53، 1046-1055. [CrossRef] [مجلات]

10. لو ميرسييه، آي.؛ بوجول، د.؛ سانلافيل، أ؛ سيسيراك، V.؛ جوبيرت، م. دوراند، أنا. دوبوا، ب. تريلوكس، أنا. مارفل، J.؛ فلاش، J.؛ وآخرون. يتم عكس تعزيز الورم عن طريق الخلايا الجذعية البلازمية داخل الفم عن طريق علاج Tlr7 Ligand. الدقة السرطان. 2013، 73، 4629-4640. [المرجع المتقاطع]

11. ما، ف. تشانغ، J.؛ تشانغ، J.؛ Zhang، C. The Tlr7 Agonists Imiquimod وGardiquimod يحسنان العلاج المناعي القائم على DC لعلاج سرطان الجلد في الفئران. خلية. مول. إيمونول. 2010، 7، 381-388. [المرجع المتقاطع]

12. بيلان، س. كايدار بيرسون، أو. جيل، Z. العلاج بعد التقدم في عصر العلاج المناعي. لانسيت أونكول. 2020, 21, ه463-ه476. [CrossRef] [مجلات]

13. دارفين، ب.؛ تور ، سم . ساسيدهاران ناير، ف؛ Elkord، E. مثبطات نقاط التفتيش المناعية: التقدم الحديث والمؤشرات الحيوية المحتملة. إكسب. مول. ميد. 2018, 50, 1–11. [CrossRef] [مجلات]

14. لي، ب. تشان، HL؛ تشن، P. مثبطات نقاط التفتيش المناعية: الأساسيات والتحديات. العملة. ميد. الكيمياء. 2019، 26، 3009-3025. [CrossRef] [مجلات]

15. جيا، إكس؛ يان، ب. تيان، X.؛ ليو، س. جين، J.؛ شي، J.؛ هو، Y. Cd47/Sirpalpha Pathway يتوسط الهروب المناعي للسرطان والعلاج المناعي. كثافة العمليات. جي بيول. الخيال العلمي. 2021، 17، 3281-3287. [المرجع المتقاطع]

16. سوبودا، مارك ألماني؛ سالمان، DA الوعد بمثبطات نقاط التفتيش الموجهة من البلاعم في الأورام النخاعية الخبيثة. أفضل الممارسات والأبحاث. كلين. الهيماتول. 2020، 33، 101221.

17. لينتز، آر دبليو؛ كولتون، ماريلاند؛ ميترا، سس. ميسيرسميث، WA مثبطات نقاط التفتيش المناعية الفطرية: التقدم التالي في علم الأورام الطبي؟ مول. السرطان هناك. 2021، 20، 961-974. [المرجع المتقاطع]

18. جيانغ، ب. لاجينور، CF. نارايانان، ف. البروتين المرتبط بالإنتجرين هو رابط لجزيء الالتصاق العصبي P84. جي بيول. الكيمياء. 1999، 274، 559-562. [المرجع المتقاطع]

19. سيفرت، م. غير قادر، C.؛ تشن، Z .؛ رابولد، أنا. بروجر، دبليو؛ كانز، ل.؛ براون، إي جيه؛ أولريش، أ.؛ Buhring، HJ يتم التعبير عن البروتين المنظم للإشارة البشرية على المستوى الطبيعي، ولكن ليس على مجموعات فرعية من خلايا النخاع النخاعي اللوكيميا ويتوسط الالتصاق الخلوي الذي يتضمن مستقبله المضاد Cd47. الدم 1999، 94، 3633-3643. [المرجع المتقاطع]

20. ماتلونج، HL؛ سزيلاجي، ك.؛ باركلي، NA؛ فان دن بيرج، TK The Cd47-محور إشارات Sirpalpha كنقطة تفتيش مناعية فطرية في السرطان. إيمونول. القس 2017، 276، 145-164. [CrossRef] [مجلات]

21. أولدنبورج، بنسلفانيا؛ زيليزنياك، أ. فانغ، واي إف؛ لاجينور، CF. جريشام، HD. Lindberg, FP دور Cd47 كعلامة ذاتية على خلايا الدم الحمراء. العلوم 2000، 288، 2051-2054. [المرجع المتقاطع]

22. لي، Z .؛ لي، Y.؛ جاو، J.؛ فو، Y.؛ هوا، ب. جينغ، Y.؛ كاي، م. وانغ، ه.؛ تونغ، تي. دور Cd47- نقطة التفتيش المناعية Sirpalpha في التهرب المناعي للورم والعلاج المناعي الفطري. علوم الحياة. 2021، 273، 119150. [المرجع المتقاطع]

23. حياة، إس إم جي؛ بيانكوني، V.؛ بيرو، م.؛ الجعفري، م. حاتاميبور، م.؛ صاحبكار، أ. Cd47: الدور في الجهاز المناعي وتطبيقه على علاج السرطان. خلية. أونكول. 2020, 43, 19-30. [المرجع المتقاطع]

24. هوانغ، ي.؛ يمكن.؛ جاو، ب. ياو، Z. استهداف Cd47: إنجازات واهتمامات الدراسات الحالية حول العلاج المناعي للسرطان. جيه ثوراك. ديس. 2017، 9، إي168 – إي174. [المرجع المتقاطع]

25. تشانغ، دبليو؛ هوانغ، س. شياو، دبليو؛ تشاو، Y.؛ بي، J.؛ شو، ه.؛ تشاو، ه.؛ شو، J.؛ إيفانز، م. جين، هـ. التقدم في العلاجات المضادة للورم التي تستهدف محور Cd47/Sirpalpha. أمام. إيمونول. 2020، 11، 18. [CrossRef] [PubMed]

26. ليو، العاشر. بو، Y.؛ كرون، ك. دينغ، ل.؛ كلاين، J.؛ فرايزر، واشنطن؛ شو، ه.؛ بنغ، ه.؛ فو، واي إكس؛ Xu, MM Cd47 يؤدي الحصار إلى تدمير الأورام المناعية بوساطة الخلايا التائية. نات. ميد. 2015، 21، 1209-1215. [CrossRef] [مجلات]

27. فايسكوبف، ك.؛ رينغ، صباحا؛ هو، CC. فولكمير، جي بي؛ ليفين، صباحا؛ فولكمير، ألاسكا؛ أوزكان، إي. فيرنهوف، ملحوظة: فان دي راين، م.؛ وايزمان، إلينوي؛ وآخرون. متغيرات Sirpalpha المهندسة كمساعدات علاجية مناعية للأجسام المضادة المضادة للسرطان. العلوم 2013، 341، 88-91. [المرجع المتقاطع]

28. شيونغ، Z .؛ Ohlfest, JR Topical Imiquimod له تأثيرات علاجية ومناعية ضد الأورام داخل الجمجمة. J. مناعة. 2011، 34، 264-269. [المرجع المتقاطع]

29. كاماث، ب.؛ داروين، إي. أرورا، ه.؛ نوري، ك. مراجعة حول علاج إميكويمود ومناقشة حول الإدارة المثلى لسرطان الخلايا القاعدية. كلين. تحقيق المخدرات. 2018، 38، 883-899. [المرجع المتقاطع]

30. ليو، ي.؛ كاسترو برافو، كم. Liu, J. توصيل الأدوية الدهنية المستهدفة: منظور علم النانو والفيزياء الحيوية. هوريز النانوي. 2021, 6, 78-94. [CrossRef] [مجلات]

31. فرجاديان، ف.؛ قاسمي، ع؛ جوهري، O.؛ روينتان، أ. كريمي، م.؛ هامبلين، م.ر. المستحضرات الصيدلانية النانوية والأدوية النانوية الموجودة حاليًا في السوق: التحديات والفرص. طب النانو 2019, 14, 93-126. [المرجع المتقاطع]

32. تشو، العاشر. جياو، L.؛ تشيان، Y.؛ دونغ، س. صن، واي؛ تشنغ، دبليو؛ تشاو، دبليو؛ تشاي، دبليو؛ تشيو، L.؛ وو، Y.؛ وآخرون. إعادة وضع أزيلنيديبين كمثبط مزدوج يستهدف مسارات Cd47/Sirpalpha وTigit/Pvr للعلاج المناعي للسرطان. الجزيئات الحيوية 2021، 11، 706. [CrossRef]

33. ني، ك. لو، T.؛ كولبيرت، أ. كوفمان، م.؛ جيانغ، X.؛ لين، دبليو. الإطار المعدني العضوي النانوي يشارك في توصيل منبهات Tlr-7 والأجسام المضادة لـ Cd47 لتعديل البلاعم وتنظيم العلاج المناعي للسرطان. ج. صباحا. الكيمياء. شركة نفط الجنوب. 2020, 142, 12579-12584. [المرجع المتقاطع]

34. تشين، س. شو، L.؛ ليانغ، C.؛ وانغ، C .؛ بنغ، ر. ليو، زد. العلاج الحراري الضوئي بالجسيمات النانوية المساعدة المناعية جنبًا إلى جنب مع حصار نقطة التفتيش للعلاج المناعي الفعال للسرطان. نات. مشترك. 2016، 7، 13193. [CrossRef] [PubMed]

35. وي، J.؛ لونغ، واي. قوه، ر. ليو، X.؛ تانغ، X.؛ راو، J.؛ يين، س.؛ تشانغ، Z .؛ لي، م. He، Q. العلاج المناعي الكيميائي متعدد الوظائف القائم على المذيلة مع حصار نقطة التفتيش المناعية لعلاج فعال لسرطان الثدي العظمي والمنتشر. اكتا فارم. الخطيئة. ب 2019، 9، 819-831. [المرجع المتقاطع]

36. هوانغ، جنوب غرب؛ وانغ ، سانت. تشانغ، ش. تشوانغ، كانساس؛ وانغ، HY؛ كاو، جك؛ ليانغ، إس إم؛ وو، قبرصي؛ كاو، ش. تشن، YJ. وآخرون. يمارس Imiquimod تأثيرات مضادة للأورام عن طريق تحفيز موت الخلايا المناعية ويتم تعزيزه بواسطة مثبط تحلل السكر 2- ديوكسي جلوكوز. جيه إنفستيج. ديرماتول. 2020، 140، 1771-1783.e6. [CrossRef] [مجلات]

37. وانغ، ب. هو، العاشر؛ تشانغ، Z .؛ تشاو، Y.؛ فنغ، دبليو. استقلاب المواد النانوية في الجسم الحي: الدورة الدموية وتصفية الأعضاء. لجنة التنسيق الإدارية. الكيمياء. الدقة. 2013، 46، 761-769. [المرجع المتقاطع]

38. أختاري، ج.؛ رضايات، سم؛ تيموري، م.؛ علوي زاده، SH؛ غيبي، ف.؛ بديع، أ. الجعفري، استهداف الرنين المغناطيسي، التوزيع الحيوي ونمو الورم الذي يثبط توصيف اقتران الأجسام المضادة لـ Her2 مع الدوكسوروبيسين الشحمي باستخدام فئران Balb/C التي تحمل أورام البوق. كثافة العمليات. جي فارم. 2016, 505, 89-95. [المرجع المتقاطع]

39. وودل، ماك. Papahadjopoulos، D. إعداد الجسيمات الشحمية وتوصيف الحجم. طرق الانزيمول. 1989، 171، 193-217. [مجلات]

قد يعجبك ايضا