الجزء الثاني|الجليكوجين سينثيز كيناز 3 ب فرط النشاط في الخلايا البولية المقشرة يتنبأ بتطور مرض الكلى السكري
Mar 05, 2022
انقر هنا للجزء 1
للمزيد من المعلومات أرجو الأتصال:emily.li@wecistanche.com
نقاش
في الولايات المتحدة والدول الغربية الأخرى ، يظل DKD السبب الرئيسي للتقدمفشل كلوي مزمنويفرض عبئًا ثقيلًا على الخزانة وأنظمة الرعاية الصحية مع عدم وجود علاج نهائي متاح. يصيب من 30٪ إلى 50٪ من مرضى السكر. تقتصر التدابير المعتمدة في الممارسة السريرية الحالية لتحديد مرضى السكري المعرضين لخطر الإصابة بـ DKD إلى حد كبير على فحوصات العين لاعتلال الشبكية وتحليل البول من أجل البول الزلالي. DKD.12،13،26،27 على هذا النحو ، هناك حاجة ملحة لتطوير واصم حيوي جديد من أجل التقسيم الطبقي الدقيق لمرضى السكري المعرضين لخطر DN. تشير الدراسة الحالية ، لأول مرة ، إلى أن GSK3b مفرط في التعبير ونشاط مفرط في متنيالكلىالخلايا في كل من DN التجريبية والسريرية ، المرتبطة بـتطور مرض الكلى. علاوة على ذلك ، من المحتمل أن يتنبأ فرط نشاط GSK3b في الخلايا المقشرة في البول بتطور DN.
يمنع Cistanche tubulosa أمراض الكلى ، انقر هنا للحصول على العينة
![Deterioration of human diabetic nephropathy (DN) is associated with glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) overexpression and hyperactivity in renal glomeruli and tubules. (a) Representative microscopic images of periodic acid–Schiff staining or peroxidase immunohistochemistry staining for GSK3b or the activated form of GSK3b (phosphorylated GSK3b at Y216 [p-GSK3b]) in normal control kidney specimens and in kidney biopsy tissues from diabetic patients, stratified according to histological classes of DN. Specific staining in glomerular podocytes and mesangial cells is indicated by black arrows and black arrowheads, respectively; specific staining in renal tubules is indicated by white arrowheads. Bar ¼ 50 mm. (b) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for GSK3b and integrated pixel density is presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes. n ¼ 6–10. (c) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for p-GSK3b and integrated pixel density presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes.](/Content/uploads/2021842169/202112101057096935b7a7e83b420997b0a2b2ccb12176.png "Deterioration of human diabetic nephropathy (DN) is associated with glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) overexpression and hyperactivity in renal glomeruli and tubules. (a) Representative microscopic images of periodic acid–Schiff staining or peroxidase immunohistochemistry staining for GSK3b or the activated form of GSK3b (phosphorylated GSK3b at Y216 [p-GSK3b]) in normal control kidney specimens and in kidney biopsy tissues from diabetic patients, stratified according to histological classes of DN. Specific staining in glomerular podocytes and mesangial cells is indicated by black arrows and black arrowheads, respectively; specific staining in renal tubules is indicated by white arrowheads. Bar ¼ 50 mm. (b) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for GSK3b and integrated pixel density is presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes. n ¼ 6–10. (c) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for p-GSK3b and integrated pixel density presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes.")
![Deterioration of human diabetic nephropathy (DN) is associated with glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) overexpression and hyperactivity in renal glomeruli and tubules. (a) Representative microscopic images of periodic acid–Schiff staining or peroxidase immunohistochemistry staining for GSK3b or the activated form of GSK3b (phosphorylated GSK3b at Y216 [p-GSK3b]) in normal control kidney specimens and in kidney biopsy tissues from diabetic patients, stratified according to histological classes of DN. Specific staining in glomerular podocytes and mesangial cells is indicated by black arrows and black arrowheads, respectively; specific staining in renal tubules is indicated by white arrowheads. Bar ¼ 50 mm. (b) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for GSK3b and integrated pixel density is presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes. n ¼ 6–10. (c) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for p-GSK3b and integrated pixel density presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes.](/Content/uploads/2021842169/2021121010573409d6aadc2e1d4dc78124d55406c4e0d6.png "Deterioration of human diabetic nephropathy (DN) is associated with glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) overexpression and hyperactivity in renal glomeruli and tubules. (a) Representative microscopic images of periodic acid–Schiff staining or peroxidase immunohistochemistry staining for GSK3b or the activated form of GSK3b (phosphorylated GSK3b at Y216 [p-GSK3b]) in normal control kidney specimens and in kidney biopsy tissues from diabetic patients, stratified according to histological classes of DN. Specific staining in glomerular podocytes and mesangial cells is indicated by black arrows and black arrowheads, respectively; specific staining in renal tubules is indicated by white arrowheads. Bar ¼ 50 mm. (b) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for GSK3b and integrated pixel density is presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes. n ¼ 6–10. (c) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for p-GSK3b and integrated pixel density presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes.")
GSK3b ، وهو كيناز سيرين / ثريونين بروتين كيناز شديد الحفظ والحساسية للأكسدة ، يشارك بشكل مركزي في إشارات الأنسولين بالإضافة إلى عدد من مسارات الإشارات الخلوية الأخرى التي تعتبر حاسمة لعمليات الفيزيولوجيا المرضية المتعلقةالكلىإصابةوالإصلاح والتجديد. في الأنسجة الحساسة للأنسولين ، مثل الكبد والعضلات الهيكلية ، ينشط GSK3b في ظل الظروف القاعدية ويثبط نشاط مركب الجليكوجين. تشير مجموعة متزايدة من الأدلة إلى أن خلل التنظيم GSK3b مرتبط بداء السكري من النوع 2. يؤدي الإفراط في التعبير الجيني عن GSK3b في العضلات الهيكلية للفئران إلى ضعف تحمل الجلوكوز ومقاومة الأنسولين وفرط أنسولين الدم. تحاكي عمل الأنسولين في خطوط الخلايا والأنسجة.الكلىلم يتم اعتباره تقليديًا كعضو مستهدف لعمل الأنسولين. ومع ذلك ، أشارت أدلة دامغة مؤخرًا إلى أن الأنسولين فيالكلىتلعب الخلايا ، ولا سيما في الخلايا الحجرية ، دورًا رئيسيًا في الحفاظ على الكبيبات والكلىمن المحتمل أن تكون إشارات الأنسولين المعيبة في الخلايا البادئة ، بسبب نقص الأنسولين أو المقاومة ، هي البادئ المحوري للعديد من الآفات المرضية التي لوحظت في DN. علاوة على ذلك ، أظهرت الدراسات السريرية أن مقاومة الأنسولين ترتبط بظهور البيلة الزلالية وشدتها حتى في مرضى ضغط الدم الطبيعي الذين لا يعانون من مرض السكري ، مما يشير إلى أن مقاومة الأنسولين بحد ذاتها قد تسبب بيلة ألبومين. الضربة القاضية المشروطة لمستقبلات الأنسولين في الخلايا الكبيبية الكبيبية ، الإصابة بالبيلة الزلالية والآفات الكبيبية التي تلخص DN ، على الرغم من عدم وجود ارتفاع السكر في الدم أو مرض السكري. تشير هذه النتائج إلى أن إشارات الأنسولين تنظم وظيفة الخلايا البودوسية بشكل مستقل عن مستويات السكر في الدم. ومع ذلك ، نظرًا لكونه المحول الرئيسي لمسار إشارات الأنسولين ، فقد تم تقدير دور GSK3b في التسبب في المرض وتطور DN إلى حد كبير.
في الالكلى، يتم التعبير عن GSK3b في الغالب في خلايا podocytes ، وبدرجة أقل ، في الخلايا البطانية والبطانية في الكبيبة ويتم التعبير عنها على نطاق واسع بواسطة الخلايا الأنبوبية الكلوية. هناك بيانات من مجموعاتنا ومجموعات أخرى تشير إلى أن GSK3b يتوسط في إصابة خلايا podocyte المستقلة من خلال دمج مسارات متعددة للإشارات podocy topathic. 21 علاوة على ذلك ، بشكل تدريجيمزمنالكلىمرض، تم العثور على GSK3b ليكون معدلًا للإصابة الكلوية الأنبوبية والخلالية. ومع ذلك ، ما إذا كان GSK3b متورطًا في DN وكيف كان أمرًا غير مؤكد ومثير للجدل بشدة ، على الرغم من أن الدراسة الحالية أظهرت أن تنشيط GSK3b المعزز فيالكلىوفي الخلايا البولية المقشرة قد تترافق مع تطور أو تطور DKD. على سبيل المثال ، في الفئران المصابة بداء السكري الناجم عن الستربتوزوتوسين ، وجد لين وآخرون 46 أن تثبيط GSK3b بواسطة مثبط تنافسي ثلاثي الفوسفات (20 Z ، 30 E) -6- Bromo في indirubin -30 - oxime ( BIO) البيلة البروتينية المخففة والآفات الكبيبية المحسنة لـ DN في غياب تصحيح ارتفاع السكر في الدم ، مما يشير إلى أن GSK3b يلعب دورًا ضارًا في DN. أيضًا ، في الفئران المصابة بداء السكري الناجم عن الستربتوزوتوسين ، توصل Paeng وزملاؤه 22 إلى نتائج مماثلة باستخدام BIO وخلصوا إلى أن نشاط GSK3b المعزز داخل الخلايا البودوسية تحت ظروف السكري يرتبط بموت الخلايا المبرمج وفقدان في DN. يتطابق هذا مع دراسة أخرى في المختبر ، حيث وُجد أن GSK3b يتوسط في اختلال التمايز في خلايا البودوسيت والإصابة بعد التعرض لوسط مرتفع من الجلوكوز.الكلىإصابة. في دراستهم ، عولجت الفئران المصابة بداء السكري الناجم عن الستربتوزوتوسين باستخدام نيتروبروسيد الصوديوم ، وهو مانح بأكسيد النيتريك قادر على تنشيط GSK3b. وجدوا أن البول الزلالي وتضخم الكلى وتراكم المصفوفة خارج الخلية في الكبيبات قد تحسنت جميعها في غياب التحسن في ارتفاع ضغط الدم أو ارتفاع السكر في الدم. ومع ذلك ، فإن هذه النتائج تتعارض بشكل حاد مع البيانات من الفئران التي تستهدف الجينات مع GSK3 النشط بشكل أساسي والتي طورت بيلة الألبومين التلقائية وإصابة خلية البودوسيت. من GSK3b. على الرغم من أنه تم التأكيد مرارًا وتكرارًا على أن BIO مثبط انتقائي لجزيء صغير للغاية لـ GSK3b ، فإن نتروبروسيد الصوديوم ليس منشطًا محددًا لـ GSK3b ولكن من المعروف أن له تأثير ديناميكي قوي ، 50 والذي من المحتمل أن يربك تأثيره في تقليل البيلة الزلالية وعمله الكلوي في الفئران المصابة بداء السكري. مجتمعة ، على الرغم من بعض البيانات المتضاربة ، تميل الأدلة السائدة إلى دعم أن GSK3b من المحتمل أن يكون مرتبطًا بهالكلىإصابةوالبروتينية في DN. يجب ذكر اثنين من قيود الدراسة الحالية. أولاً ، اقتصرت البيانات قبل السريرية فقط على نماذج الفئران DB / DB. لتحديد قابلية تعميم دور GSK3b فيإصابة الكلى السكري، من الضروري التحقق من صحة النتائج في نماذج أخرى من DN ، بما في ذلك نماذج DN من النوع 1. ثانيًا ، تم اشتقاق الملاحظات السريرية هنا من مجموعات بأثر رجعي من مرضى السكري مع حجم عينة محدود ووقت متابعة قصير نسبيًا. من المسلم به أن الدراسات واسعة النطاق والمستقبلية والعشوائية ومتعددة المراكز مطلوبة للتحقق من ملاحظاتنا وتأكيد قوة GSK3b في الخلايا المقشرة في المسالك البولية في التنبؤ بنتيجة DKD.
![Receiver operating characteristic curve analysis of the power of baseline urinary albumin excretion (UAE) or relative glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) activity (phosphorylated glycogen synthase kinase 3b at Y216 [p-GSK3b]/GSK3b) in urinary exfoliated cells for predicting the progression of renal impairment in diabetic patients.](/Content/uploads/2021842169/20211210111332cbda6209b31c4cb483b3aea3a6fafbed.png "Receiver operating characteristic curve analysis of the power of baseline urinary albumin excretion (UAE) or relative glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) activity (phosphorylated glycogen synthase kinase 3b at Y216 [p-GSK3b]/GSK3b) in urinary exfoliated cells for predicting the progression of renal impairment in diabetic patients.")
GSK3b ، وهو كيناز سيرين / ثريونين بروتين كيناز شديد الحفظ والحساسية للأكسدة ، يشارك بشكل مركزي في إشارات الأنسولين بالإضافة إلى عدد من مسارات الإشارات الخلوية الأخرى التي تعتبر حاسمة لعمليات الفيزيولوجيا المرضية المتعلقةالكلىإصابةوالإصلاح والتجديد. في الأنسجة الحساسة للأنسولين ، مثل الكبد والعضلات الهيكلية ، ينشط GSK3b في ظل الظروف القاعدية ويثبط نشاط مركب الجليكوجين. تشير مجموعة متزايدة من الأدلة إلى أن خلل التنظيم GSK3b مرتبط بداء السكري من النوع 2. يؤدي الإفراط في التعبير الجيني عن GSK3b في العضلات الهيكلية للفئران إلى ضعف تحمل الجلوكوز ومقاومة الأنسولين وفرط أنسولين الدم. تقليد الأنسولين
37 علاوة على ذلك ، في الفئران المصابة بداء السكري السمنة ، حسنت مثبطات GSK3 من حساسية الأنسولين وتوازن الجلوكوز .38 لم يتم اعتبار الكلى تقليديًا كعضو مستهدف لعمل الأنسولين. ومع ذلك ، اقترحت أدلة دامغة مؤخرًا أن إشارات الأنسولين في خلايا الكلى ، ولا سيما في الخلايا البودوسية ، تلعب دورًا رئيسيًا في الحفاظ على التوازن الكبيبي والكلى. للعديد من الآفات المرضية التي لوحظت في DN. علاوة على ذلك ، أظهرت الدراسات السريرية أن مقاومة الأنسولين ترتبط بظهور البيلة الزلالية وشدتها حتى في مرضى ضغط الدم الطبيعي الذين لا يعانون من مرض السكري ، مما يشير إلى أن مقاومة الأنسولين بحد ذاتها قد تسبب بيلة ألبومين. الضربة القاضية المشروطة لمستقبلات الأنسولين في الخلايا الكبيبية الكبيبية ، الإصابة بالبيلة الزلالية والآفات الكبيبية التي تلخص DN ، على الرغم من عدم وجود ارتفاع السكر في الدم أو مرض السكري. تشير هذه النتائج إلى أن إشارات الأنسولين تنظم وظيفة الخلايا البودوسية بشكل مستقل عن مستويات السكر في الدم. ومع ذلك ، نظرًا لكونه المحول الرئيسي لمسار إشارات الأنسولين ، فقد تم تقدير دور GSK3b في التسبب في المرض وتطور DN إلى حد كبير.
في الكلى ، يتم التعبير عن GSK3b في الغالب في خلايا podocytes ، وبدرجة أقل ، في الخلايا المسراق والبطاني في الكبيبة 20،21 ويتم التعبير عنها على نطاق واسع بواسطة الخلايا الأنبوبية الكلوية. هناك بيانات من مجموعاتنا ومجموعات أخرى تشير إلى أن GSK3b يتوسط في إصابة خلايا podocyte المستقلة من خلال دمج مسارات إشارات مرضية متعددة الخلايا البودوسية. 21 علاوة على ذلك ، في المزمن التدريجيالكلىمرض، تم العثور على GSK3b ليكون معدلًا للإصابة الكلوية الأنبوبية والخلالية. ومع ذلك ، ما إذا كان GSK3b متورطًا في DN وكيف كان أمرًا غير مؤكد ومثير للجدل بشدة ، على الرغم من أن الدراسة الحالية أظهرت أن تنشيط GSK3b المعزز في الكلى وفي الخلايا المقشرة في المسالك البولية قد يترافق مع تطور أو تطور DKD. على سبيل المثال ، في الفئران المصابة بداء السكري الناجم عن الستربتوزوتوسين ، وجد لين وآخرون .46 أن تثبيط GSK3b بواسطة مثبط تنافسي ثلاثي الفوسفات (20 Z ، 30 E) -6- Bromo في indirubin -30 - oxime ( BIO) البيلة البروتينية المخففة والآفات الكبيبية المحسنة لـ DN في غياب تصحيح ارتفاع السكر في الدم ، مما يشير إلى أن GSK3b يلعب دورًا ضارًا في DN. أيضًا ، في الفئران المصابة بداء السكري الناجم عن الستربتوزوتوسين ، توصل Paeng وزملاؤه 22 إلى نتائج مماثلة باستخدام BIO وخلصوا إلى أن نشاط GSK3b المعزز داخل الخلايا البودوسية تحت ظروف السكري يرتبط بموت الخلايا المبرمج وفقدان في DN. يتطابق هذا مع دراسة أخرى في المختبر ، حيث وُجد أن GSK3b يتوسط في اختلال التمايز في خلايا البودوسيت والإصابة بعد التعرض لوسط مرتفع من الجلوكوز.الكلىإصابة. في دراستهم ، عولجت الفئران المصابة بداء السكري الناجم عن الستربتوزوتوسين باستخدام نيتروبروسيد الصوديوم ، وهو مانح بأكسيد النيتريك قادر على تنشيط GSK3b. وجدوا أن البول الزلالي وتضخم الكلى وتراكم المصفوفة خارج الخلية في الكبيبات قد تحسنت جميعها في غياب التحسن في ارتفاع ضغط الدم أو ارتفاع السكر في الدم. ومع ذلك ، فإن هذه النتائج تتعارض بشكل حاد مع البيانات من الفئران التي تستهدف الجينات مع GSK3 النشط بشكل أساسي والتي طورت بيلة الألبومين التلقائية وإصابة خلية البودوسيت. من GSK3b. على الرغم من أنه تم التأكيد مرارًا وتكرارًا على أن BIO مثبط انتقائي لجزيء صغير للغاية لـ GSK3b ، فإن نتروبروسيد الصوديوم ليس منشطًا محددًا لـ GSK3b ولكن من المعروف أن له تأثير ديناميكي قوي ، 50 والذي من المحتمل أن يربك تأثيره في تقليل البيلة الزلالية وعمله الكلوي في الفئران المصابة بداء السكري. مجتمعة ، على الرغم من بعض البيانات المتضاربة ، تميل الأدلة السائدة إلى دعم أن GSK3b من المحتمل أن يكون مرتبطًا بهالكلىإصابةوالبروتينية في DN. زوجان من قيود
الدراسة الحالية تحتاج إلى ذكرها. أولاً ، اقتصرت البيانات قبل السريرية فقط على نماذج الفئران ديسيبل / ديسيبل. لتحديد قابلية تعميم دور GSK3b فيإصابة الكلى السكري، من الضروري التحقق من صحة النتائج في نماذج أخرى من DN ، بما في ذلك نماذج DN من النوع 1. ثانيًا ، تم اشتقاق الملاحظات السريرية هنا من مجموعات بأثر رجعي من مرضى السكري مع حجم عينة محدود ووقت متابعة قصير نسبيًا. من المسلم به أن الدراسات واسعة النطاق والمستقبلية والعشوائية ومتعددة المراكز مطلوبة للتحقق من ملاحظاتنا وتأكيد قوة GSK3b في الخلايا المقشرة في المسالك البولية في التنبؤ بنتيجة DKD.
باختصار ، أظهرت دراساتنا أن التعبير الكلوي ونشاط GSK3b يتم تضخيمهما في DN التجريبي والسريري. قد يكون نشاط GSK3b في الخلايا المقشرة في المسالك البولية بمثابة علامة بيولوجية جديدة للتنبؤ بتطور DN. قد تمهد بياناتنا الطريق لإجراء فحص واسع النطاق ومتعمق للقيمة التي قد تكون GSK3b في الخلايا المقشرة البولية بمثابة علامة بيولوجية تنبؤية لـ DN.
طُرق
دراسات على الحيوانات
تمت الموافقة على الدراسات التي أجريت على الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسية ، وهي تتوافق مع لوائح وزارة الزراعة الأمريكية ودليل المعاهد الوطنية للصحة للعناية البشرية واستخدام حيوانات المختبر. تم شراء الفئران الذكور DB / DB وزملاء التحكم db / m الذين تتراوح أعمارهم بين 6 أسابيع من مركز أبحاث الحيوانات النموذجية بجامعة Nanjing (نانجينغ ، الصين) وتم إيواؤها في مرفق الحيوانات المركزي بجامعة Zhengzhou. تم تغذية جميع الفئران بالشهرة ، وقتلت 8 إلى 10 فئران في الأعمار المحددة. تم أخذ عينات من البول والدم في النقاط الزمنية المحددة. بعد القتل ، تم حصاد الكلى لمزيد من الفحص. تم قياس مستويات الألبومين البولي باستخدام مجموعة مقايسة الممتز المناعي المرتبط بإنزيم الفأر (Bethyl Laboratories ، Montgomery ، TX). تم تحديد مستويات الكرياتينين في البول باستخدام مجموعة فحص الكرياتينين (BioAssay Systems ، Hayward ، CA).
زراعة الخلايا
تمت تربية خلايا الفئران الخاملة المشروط بين الممرات 21 و 25 في وسط معهد روزويل بارك التذكاري 1640 مكملًا بنسبة 10 في المائة من مصل بقري جنيني في ظل ظروف متساهلة كما هو موصوف سابقًا. ثم تم تعريضها لوسط طبيعي / مستنبت يحتوي على 5 ملي مولار من الجلوكوز ، وهي بيئة لمرضى السكري تتكون من الجلوكوز (25 ملي مولار) ، وعامل النمو المحول b1 (2 نانوغرام / مل) ، أو وسط تحكم عالي الأسمولية يحتوي على 20 ملي مولار مانيتول لمدة 48 ساعات. تم الحفاظ على الخلايا الظهارية الأنبوبية القريبة من Murine وخلايا ميسانجيل الكبيبية في وسط Dulbecco المعدل / F12 المكمّل بمصل بقري جنيني بنسبة 5 بالمائة. تم طلاء الخلايا عند التقاء w70 في المائة في الوسط الذي يحتوي على 5 في المائة من مصل الأبقار الجنينية لمدة 24 ساعة ثم خضعت للجوع في المصل لمدة 24 ساعة أخرى يليها التعرض لوسط طبيعي / مستنبت يحتوي على 5 ملي مولار من الجلوكوز ، وهي بيئة لمرضى السكري تتكون من نسبة عالية. الجلوكوز (25 ملم) وعامل النمو المحول b1 (2 نانوغرام / مل) ، أو وسط تحكم عالي الأسمولية يحتوي على 5 ملي مولار من الجلوكوز و 20 ملي مولار مانيتول لمدة 48 ساعة. تم تقييم بقاء الخلية من خلال استبعاد التريبان الأزرق. في النقاط الزمنية المشار إليها ، تم إصلاح الخلايا أو جمع lysates الخلية لمزيد من التحقيق.
تعداء عابر للنواقل
تم توفير المتجهات المشفرة للناقل الفارغ أو hemagglutinin (HA) - الموسومة النشطة بشكل أساسي (S9A) متحولة (S9A-GSK3b-HA / pcDNA3) من GSK3b بواسطة الدكتور جيل فولكس فاجن جونسون (برمنغهام ، AL) وتم نقلها إلى خلايا بودوسيت مثقفة ، الخلايا ميسانجيال ، والخلايا الظهارية الأنبوبية باستخدام ليبوفيكتامين 2000 (تقنيات الحياة ، كارلسباد ، كاليفورنيا) كما هو موصوف سابقًا. 44 تم التحقق من كفاءة ترنسفكأيشن عن طريق تلطيخ التألق المناعي أو التجلط المناعي لـ HA في 12 ساعة. تم جمع الخلايا لاحقًا وإعدادها لتحليل اللطخة الغربية أو فحوصات أخرى.
رني
مجموعة مكونة من 3 فئران من وحدات RNA المزدوجة الصغيرة الخاصة بـ GSK3b والمتداخلة - 50- CUUGUCCUGUAGAACUUUCtt -30 و 50- AUGAUCCAUUUCCAAUCACtt -30 و 50- AUACCGCAGUCGGACUAUGtt - تم تصميمها وتركيبها وفقًا لتسلسل الترميز الكامل لجين GSK3b الفئران (انضمام GenBank رقم BC060743.1). بالإضافة إلى ذلك ، تم استخدام تسلسل RNA صغير مخلوط متداخل (50- GCGAGUAGCGCUAGGAAGUtt -30) بدون تشابه تسلسلي مع أي تسلسل جيني معروف من الفئران أو الجرذان أو البشر كعنصر تحكم في RNAi. تم تقييم كفاءة إسكات الجينات بوساطة (Invitrogen، Carlsbad، CA) من خلال تحليل اللطخة المناعية لـ GSK3b. لوحظ قمع مُرضٍ لتعبير بروتين GSK3b في خلايا القدم المستزرعة ، والخلايا ميسانجيل ، والخلايا الظهارية الأنبوبية بعد 24 ساعة من RNAi. تم بعد ذلك إخضاع الخلايا لوسط طبيعي / ثقافي ، أو وسط سكري ، أو وسط تحكم عالي الأسمولية لمدة 48 ساعة كما هو مذكور أعلاه قبل معالجة الخلايا لمزيد من الاختبارات.
الدراسات السريرية
يتوافق الجزء السريري من هذه الدراسة مع الإرشادات الأخلاقية لإعلان هلسنكي لعام 1975 وتمت الموافقة عليه من قبل مجلس المراجعة المؤسسية للمستشفى الأول التابع لجامعة تشنغتشو. لم يتم تجنيد المشاركين في البحوث البشرية على وجه التحديد لهذه الدراسة. تم جمع جميع البيانات السريرية عن طريق مراجعة الرسم البياني بأثر رجعي وفحص أقسام الأنسجة المؤرشفة أو عينات البول المخزنة. تم تخزين عينات خزعة الكلى الزائدة أو المهملة ، وكذلك عينات البول المجزأة ، بشكل روتيني في معهد أمراض الكلى في أول مستشفى تابع لجامعة تشنغتشو. تم اختيار أنسجة خزعة الكلى المؤرشفة غير المحددة بالفورمالين المثبتة بالبارافين من المرضى في مراحل مختلفة من DN بشكل عشوائي للفحص. تم الحصول على عينات كلى إضافية بدون آفات نسيجية من الكلى التي تم التخلص منها للزرع بسبب تشوهات الأوعية الدموية أو من أنسجة خزعة ما قبل الزرع وعملت كعناصر تحكم طبيعية. بالنسبة للدراسة الأترابية بأثر رجعي ، تم فحص ما مجموعه 127 مريضًا مصابًا بداء السكري من النوع 2 ، والذين تمت متابعتهم منذ عام 2010 بعينات مخزنة من البول المجزأ ، بأثر رجعي لإدراجهم في هذه الدراسة. تراوحت أعمار المرضى الخاضعين للدراسة ما بين 29 و 80 عامًا وتم تشخيص إصابتهم بمرض السكري من النوع 2 وفقًا لمعايير جمعية السكري الأمريكية. تضمنت معايير الاستبعاد فقدان المتابعة ، وعدم كفاية المعلومات ،الكلىاختلال وظيفي, or overt proteinuria at baseline, or other superimposed kidney diseases such as acute kidney injury or glomerulopathies. Finally, 60 patients have enrolled in this study for further assessment. All patients had been followed up for >5 سنوات. أثناء المتابعة الروتينية ، تم توثيق البيانات الديموغرافية ، وكذلك المعايير السريرية ، بما في ذلك الجنس ، والعمر ، والأمراض المصاحبة ، والأدوية ، ومدة مرض السكري ، وضغط الدم ، ومستوى السكر في الدم ، ومستوى الكرياتينين في الدم ، وبيانات تحليل البول ، والإمارات العربية المتحدة ، و eGFR. كانت النتيجة السريرية بعد 5 سنوات من المتابعة هي وجود أو غياب تطور القصور الكلوي ، والذي تم تعريفه على أنه إما انخفاض بنسبة 25 دولارًا في معدل eGFR أو تطور بيلة الألبومين كما يتضح من تصاعد شدة البول الزلالي على طول المراحل السريرية المختلفة. DN ، أي بيلة الألبومين السوية ، بيلة الألبومين الزهيدة ، بيلة الألبومين الكبيرة ، أو البيلة البروتينية العلنية. جميع المرضى شريطة موافقة خطية مستنيرة.
تقييم مورفولوجيا الكلى وتحليل الكيمياء المناعية
تم قطع كتل أنسجة الكلى الموجودة في الفأر والتي تحتوي على مادة البارافين والمثبتة بالفورمالين إلى أقسام 3- مم. بالنسبة للأنسجة العامة ، تمت معالجة المقاطع من أجل التلوين الدوري لحمض شيف. تم إجراء تلطيخ كيميائي مناعي لـ GSK3b و p-GSK3b باستخدام مجموعة VECTASTAIN ABC (مختبرات Vector ، Burlingame ، كاليفورنيا) كما هو موصوف سابقًا .20 كعنصر تحكم سلبي ، تم استبدال الجسم المضاد الأولي بمصل غير مناعي من نفس النوع ؛ لم يحدث تلطيخ. تم تقييم السمات المورفولوجية لجميع الأقسام من قبل مراقب واحد بطريقة أعمى بمساعدة أخصائي أمراض الكلى.
تلطيخ مناعي
تم إصلاح الخلايا المستنبتة أو أقسام ناظم البرد المجمدة وتلطيخها بالأجسام المضادة الأولية وتبعها تطبيق الأجسام المضادة الثانوية المترافقة من Alexa Fluor (Invitrogen). كعنصر تحكم سلبي ، تم استبدال الأجسام المضادة الأولية بـ IgG من نفس النوع. لم يحدث تلطيخ. أخيرًا ، تمت مواجهة المقاطع بـ 40 ، 6- دياميدينو -2- فينيليندول أو بروبيديوم يوديد وتم تثبيتها بوسيط تركيب VECTASHIELD (مختبرات Vector). بالنسبة للفحص المجهري الفلوري الفلوري ، تم تحليل جميع الأقسام في نفس الوقت لاستبعاد القطع الأثرية بسبب الاضمحلال المتغير للفلوروكروم. تم فحص المقاطع باستخدام مجهر أوليمبوس FL الفلوري المجهز بكاميرا رقمية Spot II (أوليمبوس ، طوكيو ، اليابان). للتلوين ثنائي اللون ، تم الحصول على الصور بالتتابع لتجنب تداخل الصبغة. تم استخدام برنامج ImageJ (المعاهد الوطنية للصحة ، Bethesda ، MD) للمعالجة اللاحقة للصور ، على سبيل المثال ، التحجيم ، والدمج ، وتحليل التنسيق.
قياس الشكل المحوسب
تم التقاط صور تلطيخ الكيمياء المناعية ورقمنتها باستخدام نظام تحليل صور محوسب يتكون من كاميرا رقمية عالية الدقة مقترنة بالشحن متصلة بمجهر (أوليمبوس BX41 ، أوليمبوس) وجهاز كمبيوتر. تم عرض الصور بدقة بكسل تبلغ 1 0 24768 بكسل (الدقة المكانية ، 0.24 مم / بكسل). بالنسبة لصور تلطيخ الكيمياء المناعية لأنسجة الكلى البشرية ، تم استخدام برنامج ImageJ لتجزئة الصور وإنشاء العتبة وقياسات شدة الإشارة. تم إجراء التصحيحات اليدوية حسب الحاجة. بشكل عام ، تم أخذ عينات من 10 كبيبات أو 10 حقول خلوية أنبوبية عشوائية للتحليل المورفومتري ، وتم التعبير عن البيانات النهائية كقيمة كثافة البكسل المتكاملة بالنسبة للمجموعة الضابطة.
تحليل الطعم المناعي الغربي
تم تفكيك الخلايا المستنبتة ؛الكلىمناديلأو الكبيبات الكلوية المعزولة في محلول مؤقت لفحص الترسيب المناعي الإشعاعي مكمل بمثبطات الأنزيم البروتيني ، وتمت معالجة العينات لتحليل اللطخة المناعية. لتحليل اللطخة المناعية للعدد المحدود من الخلايا المقشرة في البول ، تم تعديل بروتوكول اللطخة الغربية كما هو موصوف سابقًا باستخدام NuPAGE Bis-Tris Gels (Invitrogen) عالي الأداء وأغشية النقل عالية الجودة. اكتشاف البروتينات المعبر عنها بشكل معتدل في أقل من 1000 خلية. تم شراء الأجسام المضادة ضد GSK3b ، و fibronectin ، و Collagen IV ، و actin ، و glyceraldehyde -3- من نازعة هيدروجين الفوسفات (GAPDH) من سانتا كروز Biotechnology (سانتا كروز ، كاليفورنيا) ؛ تم شراء مضادات السينابتوبودين من شركة PROGEN Biotechnik GmbH (هايدلبرغ ، ألمانيا) ؛ وتلك ضد ZO -1 و p-GSK3b تم الحصول عليها من Cell Signaling Technology (Danvers، MA).
تحليل احصائي
All in vitro studies were repeated 3 to 6 times. For immunoblot analysis, bands were scanned and the integrated pixel density was determined using a densitometer and the ImageJ analysis program, version 1.48 (National Institutes of Health). Data were expressed as mean -SD or median (interquartile range). All included patients had baseline data. Patients with missing data or lost to follow-up were excluded from this study. Continuous variables were analyzed as appropriate by using the t-test, Mann-Whitney U test, or 1-way analysis of variance (ANOVA) followed by the Student-NewmanKeuls test if there were 3 comparisons or by the Scheffé test if there were >3 مقارنات. تمت مقارنة البيانات الفئوية بين المجموعات باستخدام اختبار خي مربع. تم تطبيق تحليل الانحدار الخطي لفحص العلاقات الممكنة بين معلمتين. تم إجراء تحليلات الانحدار للمخاطر النسبية أحادية المتغير كوكس لتقييم الارتباطات بين المتغيرات ذات الصلة وخطر تطور القصور الكلوي ، تليها تحليلات متعددة المتغيرات فيما يتعلق بالإرباكات المحتملة. تم إجراء تحليل منحنى ROC وتم قياس المناطق الواقعة تحت منحنيات ROC لتحليل قوة بعض المتغيرات في التنبؤ بتطور القصور الكلوي لدى مرضى السكري. تم تحويل المتغيرات غير الموزعة بشكل طبيعي ، مثل الإمارات العربية المتحدة ، عن طريق اللوغاريتم لتحقيق الحالة الطبيعية لتحليلات انحدار نسبة مخاطر كوكس ROC. تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام PSS الإصدار 22 (شركة IBM ، أرمونك ، نيويورك). قيم P.<0.05 in2-tailed="" tests="" were="" considered="" statistically="" significant="" in="" all="">
إفشاء
أعلنت جميع المؤلفين لا المصالح المتنافسة.
شكر وتقدير
تم تقديم جزء من هذه الدراسة كعرض تقديمي شفهي في KidneyWeek 2016: الاجتماع السنوي للجمعية الأمريكية لأمراض الكلى ، 15-20 نوفمبر ، 2016 ، شيكاغو ، إلينوي. تم دعم RG جزئيًا من قبل مؤسسة الصحة. تم دعم XL من خلال زمالة بحثية لتلقي تدريب خارج أسوار. تم دعم ZL من قبل مؤسسة National NaturalScience Foundation في الصين والتي تمنح U1604284 و 81770672 و 81873612. لم يكن للممولين أي دور في تصميم وإجراء هذه الدراسة ، وجمع وتفسير البيانات ، أو إعداد المخطوطة والموافقة عليها.
الكاتب الاشتراكات
ابتكر RG الأفكار المفاهيمية. ساهم كل من XL و ZL و RG في تصميم الدراسة. أجرى كل من XL و PW و BC و YG و AYG و BF تجارب زراعة الخلايا. أجرى كل من XL و ZL التجارب على الحيوانات وجمعوا البيانات من مرضى السكري. XL ، LJW ، DKM ، LDD ، ZL ، وساهمت في مناقشة وتفسير النتائج. أخذ زمام المبادرة في كتابة المخطوطة. ساهم كل من XL و BC و BF في تحرير المخطوطات. اتفق جميع المؤلفين على أن مفهوم وملكية هذا العمل بالكامل ينتميان إلى RG. وافقت كل من الكتاب المخطوط النهائي.
مواد تكميلية
الطرق التكميلية.
الجدول S1. خصائص الأشخاص الضابطين والمرضى الذين يعانون من اعتلال الكلية السكري ، طبقية حسب الفئات النسيجية لاعتلال الكلية السكري. الجدول S2. البيانات الديموغرافية والسريرية والمخبرية الأساسية للمجموعة بأثر رجعي من مرضى السكري في المرحلة المبكرة مع عدم وجود علامات DKD. الجدول S3. البيانات الديموغرافية والسريرية والمخبرية لمرضى السكري من النوع 2 في المرحلة المبكرة ، مقسمة حسب نتائجهم الكلوية بعد 5 سنوات من المتابعة. الشكل S1. يتنبأ النشاط الكلوي المعزز لـ GSK3b بتطور وشدةمريض بالسكرالكلىمرضفي الفئران ديسيبل / ديسيبل. تمت متابعة ذكر ديسيبل / ديسيبل وفئران ديسيبل / الفئران بين 4 و 13 أسبوعًا من العمر. (أ) تم أخذ عينات الدم من الفئران غير الصائمة في عمر 4 و 7 أسابيع ، وتم قياس مستويات الجلوكوز في البلازما. * P <0. 0="" 0="" 1="" مقابل="" ديسيبل="" الفئران="" في="" عمر="" 7="" أسابيع.="" ن="" ¼="" 15-18.="" (ب)="" تم="" أخذ="" عينات="" من="" البول="" النقطي="" في="" 4="" و="" 7="" و="" 10="" و="" 13="" أسبوعًا="" من="" العمر="" وخضعت="" لاختبار="" الألبومين="" البولي="" ومقايسة="" الكرياتينين="" في="" البول="" لتحديد="" نسب="" الألبومين="" البولي="" إلى="" الكرياتينين="" (uacrs).="" *="" p=""><0.001 مقابل="" ديسيبل="" فئران="" في="" عمر="" 10="" أسابيع="" (ن="" ¼="" 15-18)="" ؛="" #p=""><0.001 مقابل="" db="" الفئران="" في="" عمر="" 13="" أسبوعًا.="" ن="" ¼="" 15-18.="" (ج)="" تلقت="" جميع="" الفئران="" خزعة="" كلوية="" مفتوحة="" بعمر="" 7="" أسابيع="" وتمت="" معالجة="" عينات="" الخزعة="" لتحليل="" اللطخة="" المناعية="" لـ="" p-gsk3b="" و="" gsk3b="" و="" gapdh.="" (د)="" تعرضت="" اللطخات="" المناعية="" لتحليل="" قياس="" الكثافة.="" تم="" تحديد="" الوفرة="" النسبية="" لـ="" gsk3b="" و="" p-gsk3b="" كنسب="" قياس="" كثافة="" للجزيء="" المعني="" gapdh="" مع="" تغير="" الطي="" مقارنةً="" بالتحكم="" في="" db="" m="" الفئران.="" تم="" حساب="" النشاط="" النسبي="" لـ="" gsk3b="" كنسب="" من="" p="" gsk3b="" إلى="" gsk3b="" كطيات="" للتحكم="" ديسيبل="" الفئران.="" (هـ)="" أظهر="" تحليل="" الانحدار="" الخطي="" وجود="" علاقة="" إيجابية="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" بين="" نشاط="" gsk3b="" الكلوي="" في="" عمر="" 7="" أسابيع="" في="" الفئران="" ديسيبل="" ديسيبل="" وتطور="" وشدة="" الزلال="" ،="" وهي="" سمة="" مميزة="">مريض بالسكرالكلىمرضفي عمر 13 أسبوعًا. R ¼ 0. 699 ؛ P ¼ 0. 0 {{2 0}} 1. (F) أظهر تحليل منحنى التشغيل المميز للمستقبل أن نشاط GSK3b الكلوي في المراحل المبكرة من مرض السكري (7 أسابيع من العمر) يوفر دقة وقوة ممتازة في التنبؤ بتطور البول الزلالي و DKD عند عمر 13 أسبوعًا في الفئران ديسيبل / ديسيبل. الشكل S2. تعمل مقاومة الأنسولين وارتفاع مستوى الجلوكوز المحيط بشكل تآزري على تنشيط GSK3b في خلايا الكلى. (أ) تم نقل خلايا podocytes الفئران المستزرعة ، (B) خلايا مسراق البول الكبيبية (MMCs) ، و (C) الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية (TECs) باستخدام oligonucleotides SiRNA المخفوق (siCon) أو oligonucleotides siRNA (siIRb) المحدد لـ b isoform مستقبلات الأنسولين (IRB) لنمذجة حالة مقاومة الأنسولين في المختبر. تم بعد ذلك تعريض الخلايا لمدة 48 ساعة للبيئة الطبيعية التي تحتوي على الجلوكوز (NG) أو البيئة السكرية التي تحتوي على نسبة عالية من الجلوكوز (HG). تم جمع محللات الخلايا وإخضاعها لتحليل اللطخة المناعية لـ IRB و p-GSK3b و GSK3b و GAPDH متبوعًا بتحليل قياس الكثافة للبقع. * P <0.01 مقابل="" تعبير="" irb="" في="" الخلايا="" المعالجة="" sicon="" المعرضة="" لنفس="" البيئة="" (ن="" ¼="" 3)="" ،="" #="" p=""><0.05 مقابل="" نفس="" تعبير="" البروتين="" في="" مجموعة="" siirb="" þ="" ng="" أو="" sicon="" þ="" hg="" (ن="" ¼="" 3)="" ،="" &="" p="">< 0.05="" مقابل="" نفس="" تعبير="" البروتين="" في="" المجموعة="" الثانية="" þ="" hg="" أو="" siirb="" þ="" ng="" (n="" ¼="" 3).="" الشكل="" s3.="" مستويات="" التعبير="" عن="" gsk3b="" mrna="" في="" عينات="" الكلى="" البشرية="" المشتراة="" من="" متبرعين="" أحياء="" أصحاء="" والمرضى="" الذين="" يعانون="" من="" اعتلال="" الكلية="" السكري.="" تم="" اشتقاق="" البيانات="" من="" www.nephroseq.org="" على="" أساس="" مجموعة="" بيانات="" ju="" ckd="" glom="" وتم="" التعبير="" عنها="" على="" أنها="" كثافة="" تركز="" على="" متوسط="" log2.="" الشكل="" s4.="" يتنبأ="" النشاط="" المعزز="" لـ="" gsk3b="" في="" الخلايا="" المقشرة="" في="" المسالك="" البولية="" التي="" تم="" جمعها="" من="" مرضى="" السكري="" في="" المراحل="" المبكرة="" من="" الإصابة="" بمرض="" الكلى="" السكري.="" (أ="" ،="" ب)="" الكشف="" عن="" gsk3b="" و="" gsk3b="" المنشط="" في="" الخلايا="" المقشرة="" للبول="" التي="" تم="" جمعها="" من="" مرضى="" السكري="" في="" المراحل="" المبكرة="" (نقاط)="" والضوابط="" الصحية="" (ctrls).="" تم="" جمع="" وفحص="" الخلايا="" البولية="" المقشرة.="" تمت="" معالجة="" lysates="" الخلية="" لتحليل="" immunoblot="" لـ="" gsk3b="" و="" p-gsk3b="" و="" gapdh.="" (ج)="" تعرضت="" اللطخات="" المناعية="" لتحليل="" قياس="" الكثافة.="" تم="" تحديد="" الوفرة="" النسبية="" لـ="" gsk3b="" و="" p-gsk3b="" كنسب="" قياس="" كثافة="" للجزيء="" المعني="" gapdh="" مع="" تغير="" الطي="" مقارنةً="" بعناصر="" التحكم="" (ctrls).="" تم="" حساب="" النشاط="" النسبي="" لـ="" gsk3b="" كنسب="" من="" p-gsk3b="" إلى="" gsk3b="" كطيات="" للتحكم="" العادي="" (ctrls).="" (د)="" أظهر="" تحليل="" منحنى="" التشغيل="" المميز="" للمستقبل="" أن="" نشاط="" gsk3b="" النسبي="" (نسبة="" p-gsk3b="" gsk3b)="" في="" الخلايا="" المقشرة="" البولية="" التي="" تم="" جمعها="" من="" مرضى="" السكري="" في="" المراحل="" المبكرة="" يوفر="" دقة="" ممتازة="" في="" التنبؤ="">مرض الكلى السكريفي 5 سنوات ، مع كون المنطقة تحت المنحنى (AUC) هي 0. 886.
المراجع
1. أوماناث ك ، لويس جي بي. تحديث عن اعتلال الكلية السكري: المناهج الأساسية 2018. Am J Kidney Dis. 2018 ؛ 71: 884-895.
2. جريج إي دبليو ، لي واي ، وانج جي ، وآخرون. التغييرات في المضاعفات المتعلقة بمرض السكري في الولايات المتحدة ، 1990-2010. إن إنجل جي ميد. 2014 ؛ 370: 1514-1523.
3. Haller H ، Ito S ، Izzo JL Jr ، et al. أولميسارتان لتأخير أو منع البيلة الألبومينية الزهيدة في مرض السكري من النوع 2. إن إنجل جي ميد. 2011 ؛ 364: 907-917.
4. Schena FP ، Gesualdo L. الآليات الممرضة لاعتلال الكلية السكري. J آم سوك نفرول. 2005 ؛ 16 (ملحق 1): S30 – S33.
5. Ritz E، Zeng XX، Rychlik I. المظاهر السريرية والتاريخ الطبيعي لاعتلال الكلية السكري. مساهمة نفرول. 2011 ؛ 170: 19-27.
6. هولمان ر آر ، بول إس كي ، بيثيل إم إيه ، وآخرون. 10- سنة من المتابعة للتحكم المكثف في الجلوكوز في مرض السكري من النوع 2. إن إنجل جي ميد. 2008 ؛ 359: 1577-1589.
7. بيركنز با ، فيكوسيلو إل إتش ، أوستراندر بي ، وآخرون. البول الزلالي الزهي وخطر التدهور المبكر في وظائف الكلى في مرض السكري من النوع 1. J آم سوك نفرول. 2007 ؛ 18: 1353-1361.
8. Koye DN ، Magliano DJ ، Reid CM ، et al. خطر تطور CKD السوي الألبومينوريك إلى المرحلة النهائية من مرض الكلى لدى مرضى السكري: دراسة CRIC (الفوج الكلوي المزمن). أنا J الكلى ديس. 2018 ؛ 72: 653-661.
9. Caramori ML، Fioretto P، Mauer M. الحاجة إلى مؤشرات مبكرة لخطر اعتلال الكلية السكري: هل معدل إفراز الألبومين كافٍ؟ داء السكري. 2000 ؛ 49: 1399-1408.
10. Caramori ML ، Fioretto P ، Mauer M. انخفاض معدل الترشيح الكبيبي في مرضى السكري من النوع الأول من الألبومينوريك: مؤشر على الآفات الكبيبية الأكثر تقدمًا. داء السكري. 2003 ؛ 52: 1036-1040.
11. Krolewski AS. التدهور الكلوي التدريجي: النموذج الجديد لاعتلال الكلية السكري في مرض السكري من النوع الأول. رعاية مرضى السكري. 2015 ؛ 38: 954-962.
12. Robles NR، Villa J، Gallego RH. اعتلال الكلية السكري غير البروتيني. J كلين ميد. 2015 ؛ 4: 1761-1773.
13. Adler AI ، Stevens RJ ، Manley SE ، وآخرون. تطور وتطور اعتلال الكلية في داء السكري من النوع 2: دراسة مرض السكري المحتملة في المملكة المتحدة (UKPDS 64). الكلى Int. 2003 ؛ 63: 225-232.
14. Gluhovschi C ، Gluhovschi G ، Petrica L ، وآخرون. المؤشرات الحيوية البولية في تقييم اعتلال الكلية السكري المبكر. J داء السكري الدقة. 2016 ؛ 2016: 4626125.
15. دوي تي ، موريا تي ، فوجيتا واي وآخرون. يعتبر كل من IgG4 و Smad1 البولين من المؤشرات الحيوية المحددة للتغيرات الهيكلية والوظيفية الكلوية في المراحل المبكرة من اعتلال الكلية السكري. داء السكري. 2018 ؛ 67: 986-993.
16. De S، Kuwahara S، Hosojima M، et al. يرتبط إفراز ميغالين كامل الطول بوساطة خروج الخلايا بالبول مع التسبب في اعتلال الكلية السكري. داء السكري. 2017 ؛ 66: 1391-1404.
17. Xu W ، Ge Y ، Liu Z ، وآخرون. يملي Glycogen synthase kinase 3b حركية الخلايا البدائية ودوران الالتصاق البؤري عن طريق تعديل نشاط paxillin: الآثار المترتبة على التأثير الوقائي لجرعة منخفضة من الليثيوم في اعتلال الخلايا. أنا J باتول. 2014 ؛ 184: 2742-2756.
18. علي A ، Hoefiich KP ، Woodgett JR. Glycogen synthase kinase -3: الخصائص والوظائف والتنظيم. القس كيم 200 ؛ 101: 2527-2540.
19. Beurel E، Grieco SF، Jope RS. Glycogen synthase kinase -3 (GSK3): التنظيم والإجراءات والأمراض. فارماكول هناك. 2015 ؛ 148: 114-131.
20. Li C ، Ge Y ، Dworkin L ، وآخرون. يتوسط الشكل الإسوي b لـ GSK3 إصابة ذاتية الخلية في اعتلال الكبيبات البروتيني. ي باتول. 2016 ؛ 239: 23.
