التأثير الوقائي للزيت العطري Thymus Serrulatus على السمية الكلوية التي يسببها الكادميوم في الجرذان ، من خلال قمع الإجهاد التأكسدي وتقليل تنظيم تعبير MRNA NF-κB و INOS و Smad2
Mar 17, 2022
جهة الاتصال: ali.ma@wecistanche.com
محمد نظام أنصاري1,*نجيب الرحمن1,*امان كريم2فيصل إمام3 وأبو بكر محمد حمد4,5
Cistanche deserticola ma لأمراض الكلى ، انقر هنا للحصول على العينة
الملخص:
كان الغرض من البحث هو فحص التأثير الوقائي للزيت العطري من الغدة الصعترية serru latus Hochst. السابق بينث. (زيت TSA) ضدالكادميوم(قرص مضغوط) المستحثكلويتسمم. تم تصميم البروتوكول التجريبي باستخدام 30 جرذًا بالغًا يتمتع بصحة جيدة من جرذان Wistar البيضاء المخصصة في مجموعات ملفات تحتوي على ستة حيوانات في كل مجموعة. عولجت المجموعة 1 على أنها مجموعة تحكم طبيعية وتم التعامل مع المجموعات 2 ، 3 ، 4 ، 5الكادميومكلوريد (CdCl2 ، 3 مجم / كجم ، IP) لمدة 7 أيام. عولجت المجموعة 3 أيضًا بسيليمارين (100 مجم / كجم ، PO) كمجموعة قياسية ، بينما تم إعطاء المجموعتين 4 و 5 بزيت TSA بجرعات 100 و 200 مجم / كجم PO على التوالي. تم قياس السمية الكلوية بمعايير مختلفة مثلالكلىعلامات الوظيفة ، وعلامات الإجهاد التأكسدي (الجلوتاثيون (GSH) و malondialdehyde (MDA)) ، ومستويات التعبير عن عوامل الالتهاب. كما تم تقييم الدراسات النسيجية في البروتوكول التجريبي. أظهرت المجموعات المعالجة بـ CdCl 2- زيادة ملحوظة في مستويات المصلالكلىعلامات الوظيفة جنبا إلى جنب مع مستويات MDA في تجانس الكلى. لكن،كلويتم العثور على مستوى GSH أن ينخفض بشكل ملحوظ. وجد أن CdCl2 ينظم بشكل كبير مستويات العامل النووي لـ kappaB (NF-B p65) ، سينثاز أكسيد النيتريك المحرض (iNOS) ، والأمهات الصغيرات ضد decapentaplegic (Smad2) مقارنة بمجموعة التحكم العادية. من ناحية أخرى ، تحسن زيت TSA بشكل ملحوظ من زيادة مستويات علامات وظائف الكلى في الدم ، ومضادات الأكسدة غير الأنزيمية ، وبيروكسيد الدهون. بالإضافة إلى ذلك ، أدى زيت TSA إلى تقليل التنظيم بشكل كبير للتعبير المتزايد عن NF-Bp65 و iNOS و Smad2 في الفئران التي تعاني من تسمم الكادميوم. علاوة على ذلك ، تم تحسين التغيرات النسيجية في عينات أنسجة الكلى للمجموعات المعالجة بالـ Cd بشكل ملحوظ في المجموعات المعالجة بالسيليمارين وزيت TSA. تكشف الدراسة الحالية أن زيت TSA يخفف من تأثير الكادميومكلويالإصابة ، ويُقترح أيضًا أن التأثير الواقي للكلية الملحوظ يمكن أن يكون بسبب القدرة المضادة للأكسدة لزيت TSA والشفاء بسبب تأثيره المضاد للالتهابات.
الكلمات الدالة:الكادميوم؛ اشتعال؛ NF- B ؛ إصابة كلوية صمد 2 الغدة الصعترية serrulatus
1 المقدمة
لا يزال التعرض للمواد الكيميائية البيئية يمثل مشكلة صحية عامة رئيسية على مستوى العالم. زاد التعرض للكادميوم (الكادميوم) ، وهو أحد أكثر المعادن السامة تفاعلًا ، في المحيط الحيوي من كل من المصادر الطبيعية والبشرية المنشأ [1]. يرجع التعرض للكادميوم أيضًا إلى تلوث التربة والهواء والماء والغذاء ، فضلاً عن دخان السجائر [2]. يؤدي الامتصاص المتزايد بشكل كبير مع انخفاض معدل الإخراج إلى زيادة عبء الكادميوم في الأعضاء المختلفة. يمكن أن يتسبب القرص المضغوط في تلف أعضاء متعددة اعتمادًا على جرعته وطريقه ومدته ولكنه يؤثر بشكل أساسيالكلىويسبب القصور الكلوي [3].
الالكلىهي أعضاء حيوية في جسم الإنسان وهي مسؤولة عن وظائف أساسية مختلفة ، بما في ذلك إزالة المستقلبات الضارة ، والنفايات النيتروجينية ، وبعض الأدوية مع البول [4]. أفادت دراسات سابقة أن سمية الكادميوم تؤدي إلى خلل وظيفي لا رجعة فيهكلويالأنابيب [5] وتؤدي إلى انخفاض إزالة المواد الكيميائية السامة أو الأدوية أو كليهما التي تؤدي إلى الإصابة بمرض حادالكلىخزي. علاوة على ذلك،كلويقد تؤدي الإصابة الناجمة عن التعرض المزمن للـ Cd إلى فشل كلوي مزمن وإذا لم يتم علاجها يمكن أن تؤدي إلى الوفاة [6،7]. تراكم الكادميوم في الأنابيب الملتوية القريبة يعيق إعادة الامتصاص الأنبوبي ويؤدي إلى بوال وبيلة بروتينية. كانت هناك دراسات حول التأثيرات الشاذة الشائعة للـ Cd على وظائف الكلى ، ولكن لا يزال هناك نقص في المعلومات التفصيلية حول الآليات الجزيئية والحاجة إلى استكشاف هذا الأمر بشكل أكبر [8].
كشفت الدراسات على مدى العقود القليلة الماضية أن الاحتمال الأقصىكلوييحدث الضرر بسبب إطلاق الكادميوم في الخلية الذي يثير الإجهاد التأكسدي [9،10]. إحدى الآليات المقترحة هي الاضطراب في نظام الدفاع الطبيعي لمضادات الأكسدة ، والذي يتسبب في زيادة إنتاج الجذور الحرة للأكسجين (OFR) [11] ويؤدي إلى انخفاض مستويات الجلوتاثيون (GSH) ، وبالتالي موت الخلايا المبرمج المرتبط بالإجهاد التأكسدي [11]. 12]. من بين العديد من الآليات التي تم الإبلاغ عنها ، فإن انخفاض محتوى GSH وتلف الخلايا الناجم عن OFR هما المسؤولان بشكل أساسي عن بيروكسيد الدهون [13 ، 14].
وجدت الأدبيات السابقة أيضًا أن العلاقة بين الإجهاد التأكسدي والالتهاب الداخلي تعزز العديدكلويالأمراض [15]. لذلك ، يمكن اقتراح أن السمية الكلوية ناتجة عن الكادميوم من خلال مسارات الإشارات المعقدة داخل الخلايا والتي يتم توجيهها بشكل أساسي عن طريق الإجهاد التأكسدي. يتحكم العامل النووي κB (NF-B) في العديد من الجينات الالتهابية في جميع أنواع الخلايا [16]. NF-B هو السبب الرئيسي لمختلفالكلىالأمراض ويمكن تنشيطها عن طريق التعرض لأقراص الكادميوم. تم العثور على مرض الكلى المزمن في كل من النماذج البشرية والحيوانية عن طريق تنظيم بروتينات Smad2 [9]. ذكرت دراسات سابقة أن تقليل تنظيم NF-B و Smad2 قد يكون آليات مفيدة للأدوية المضادة للالتهاب [17].
من بين سياسات العلاج ، يُفترض أن تخفيف الإجهاد التأكسدي الناجم عن الكادميوم باستخدام مضادات الأكسدة سواء من المصادر الطبيعية أو الاصطناعية يعتبر النهج الرئيسي الممكن لعلاج السمية الكلوية التي يسببها الكادميوم. لذلك ، سعى الباحثون مؤخرًا إلى إيجاد آليات دفاعية ضد السمية التي تسببها المواد الكيميائية أو الأدوية ، كما درسوا أيضًا المركبات النشطة بيولوجيًا ذات التأثير المضاد للأكسدة والالتهابات [18،19].
في أجزاء مختلفة من العالم ، تم استخدام أنواع مختلفة من جنس الغدة الصعترية بشكل تقليدي لعلاج الاضطرابات المختلفة مثل التهاب الشعب الهوائية والربو والسعال الديكي والتهاب الحنجرة والتهاب اللوزتين والسعال [20]. Thymus serrulatus Hochst. تنمو Ex Benth (عائلة Lamiaceae) في إثيوبيا وتستخدم تقليديًا لعلاج الإنفلونزا [21] والسعال [22]. T. serrulatus هو شجيرة فرعية معمرة كثيرة التشعب تنمو في مناطق Afromontane و Afroalpine في إثيوبيا وإريتريا [23].
تم الإبلاغ عن أن T. serrulatus له أنشطة طاردة للديدان ومضاد للبكتيريا ومبيد للفطريات [23] ومدر للبول [22] وموسع للأوعية [24] ومضاد لفرط شحميات الدم [25]. علاوة على ذلك ، تم الإبلاغ عن أن الزيت العطري لـ T. serrulatus (زيت TSA) يمتلك خصائص مطهرة ومضادة للفطريات ومضاد للديدان ، من بين أمور أخرى [26]. أظهر الزيت العطري للنبات من مناطق إثيوبية مختلفة نشاطًا واعدًا في حماية الكبد في الفئران [27]. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت الدراسات السابقة أن الأنشطة الدوائية للزيت العطري مرتبطة ارتباطًا إيجابيًا بوجود المكونات النشطة مثل الثيمول ، والكارفاكرول ، والفاسيمين ، والتربينين ، وحمض روزمارينيك [26 ، 27]. من ناحية أخرى ، يعتبر الثيمول والكارفاكرول ، اللذان تم العثور عليهما كمكونين رئيسيين في الزيوت العطرية ، من المنتجات الطبيعية المهمة مع أنشطة إزالة الجذور الحرة وخصائصها المضادة للأكسدة [28]. ذكرت دراسة سابقة أن مزيجًا من الثيمول والكارفاكرول له تأثير تآزري على الكلى
التأثير الذي يمكن أن يعزى إلى الأنشطة المضادة للأكسدة والالتهابات ومضادات التبويض [29]. بالإضافة إلى ذلك ، تسبب الثيمول والكارفاكرول ، اللذان تم العثور عليهما كمكونات رئيسية في النباتات التي تحتوي على زيوت عطرية ، أيضًا على انخفاض في الغلوبولين المناعي E (IgE) والإنترلوكين -4 (IL -4) والإنترلوكين { {6}} (IL -5) ، ومستويات إنترلوكين -13 (IL -13) بالإضافة إلى عدد الخلايا الالتهابية التي تسبب اضطرابات مجرى الهواء [30].
بقدر ما نعلم ، لم يتم الإبلاغ عن تأثير T. serrulatus على السمية الكلوية. وهكذا ، في هذه الدراسة ، افترضنا وحاولنا التحقيق في التأثير الوقائي للكلية للزيت العطري المستخرج من T.الكلىعلامات الوظيفة ، وعلامات الالتهاب ، وحالة مضادات الأكسدة ، والتغيرات النسيجية.
2. النتائج
2.1. محصول الزيت العطري (نسبة مئوية)
أعطى التقطير المائي للجزء الجوي من T. serrulatus 0. 09 بالمائة (وزن / وزن) زيت عطري أصفر شاحب ذو رائحة مميزة.
2.2. تأثير زيت TSA على المؤشرات الحيوية لوظيفة الكلى
تم العثور على مستويات اليوريا في الدم ، وحمض البوليك ، والكرياتينين ، ونيتروجين اليوريا في الدم (BUN) مرتفعة بشكل ملحوظ (p <0. 01)="" في="" الفئران="" التي="" تم="" علاجها="" بمضادات="" الأكسدة="" (cd)="" فقط="" (3="" مجم="" كجم="" ،="" ip="" )="" لمدة="" 7="" أيام.="" ومع="" ذلك="" ،="" فإن="" إعطاء="" زيت="" tsa="" والسيليمارين="" في="" الفئران="" المصابة="" بالكادميوم="" أدى="" إلى="" تحسن="" كبير="" في="" إنتاج="">الكلىالضرر كما هو محدد عن طريق المستويات المكبوتة من اليوريا في الدم ، وحمض البوليك ، والكرياتينين ، و BUN (الشكل 1 أ-د).
2.3 تأثير زيت TSA على بيروكسيد الدهون والإجهاد التأكسدي
الكلويأظهرت أنسجة الفئران زيادة معنوية في مستويات بيروكسيد الدهون من حيث MDA وانخفاض محتوى GSH بعد تناول الكادميوم. بالإضافة إلى ذلك ، فإن معالجة زيت TSA بجرعات 100 و 200 مجم / كجم تقلل من مستويات MDA اعتمادًا على الجرعة في الفئران المصابة بالـ CD. علاوة على ذلك ، تم رفع مستويات GSH بشكل ملحوظ في المجموعات المعالجة TSA-oil- وسيليمارين مقارنة مع مجموعة Cd (الشكل 2A ، B).
2.4 تأثيرات زيت TSA على تعبير p65 و NF-B و iNOS و Smad2 mRNA
تم تقييم التغييرات في أحداث الإشارات بواسطة النشاف الغربي. اقترح تحليل اللطخة الغربية أن التعرض للقرص المضغوط بشكل كبير (p <0. 001)="" ينظم="" تعبير="" nf-κb="" p65="" و="" inos="" و="" smad2="" mrna="" مقارنة="" بالمجموعة="" المرجعية.="" قللت="" معالجة="" زيت="" tsa="" بشكل="" كبير="" من="" التعبير="" p65="" و="" nf-b="" و="" inos="" و="" smad2="" mrna="" بطريقة="" تعتمد="" على="" الجرعة="" بالنسبة="" للفئران="" المعرضة="" للتعرض="" للقرص="" المضغوط="" فقط="" (الشكل="" 3="">
2.5 تأثير زيت TSA على التشريح المرضي
أظهر التحليل التشريحي المرضي لجرذان المجموعة الضابطة طبيعيةالكلىالبنية النسيجية مع الأنابيب الملتوية الطبيعية ، والكبيبات ، وكبسولة بومان مع مساحة طبيعية بالإضافة إلى الحالة الطبيعية لألياف الكولاجين والحمض الدوري - شيف (PAS) - المواد الإيجابية مثل الغشاء القاعدي (الشكل 4). تُظهر الصور المجهرية للمجموعة السامة الكبيبات غير الطبيعية (G) ، والتنكس (D) ، والنخر (N) للأنابيب الملتوية ، ومساحة بومان المتدهورة والغائبة تقريبًا. تشير الأنابيب الملتوية غير الطبيعية إلى حدوث خلل نسيجي (T) ، يتم حظره بواسطة الأنسجة التالفة (B) ، والنخر. يُظهر التصوير المجهري لمجموعة سامة ماسون ثلاثية الألوان (MT) السامة زيادة في المواد الكولاجينية (C). علاوة على ذلك ، يُظهر الرسم المجهري للمجموعة السامة الملطخة بـ PAS ترسبًا غير طبيعي للمواد الإيجابية PAS (P) التي أزاحت حمة الكلى ؛ كما يظهر ضعف أو فقدان الغشاء القاعدي السليم (L). أعاد العلاج بزيت TSA بجرعة منخفضة الكبيبات الطبيعية والأنابيب الملتفة الطبيعية ، على الرغم من استمرار وجود معاناة طفيفة من التأثيرات السامة في شكل أنابيب مانعة للتسرب (B) وزيادة طفيفة في مادة الكولاجين (C) ، بالإضافة إلى ترسب غير طبيعي من مواد إيجابية PAS (P). أعطت المعاملة بزيت TSA بجرعة عالية صورًا نسيجية للمظهر النسيجي الطبيعي تقريبًا بالقرب من المعاملة القياسية (التكبير 400 × وشريط المقياس 20 ميكرومتر لجميع الصور المجهرية).
3. مناقشة
في البيئة ، توجد المعادن الثقيلة عادة وتكون عرضة للامتصاص والأكسدة والتدخل في مصير الخلايا. على وجه الخصوص ، الكادميوم مركب صناعي طبيعي يسبب العديد من التأثيرات السامة والخطيرة ، بما في ذلك السمية الكلوية ، على صحة الإنسان [31 ، 32]. يؤدي ترسبه في أعضاء مختلفة إلى إجهاد تأكسدي يضعف وظيفة نظام مضادات الأكسدة الأصلي ، ونتيجة لذلك ، يؤدي إلى تطور العديد من الأمراض المرضية الشديدة [33]. يشمل مسار السمية التي يسببها الكادميوم إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ، والتي تسبب لاحقًا إصابة كلوية [34]. لذلك ، يمكن افتراض أن مضادات الأكسدة قد تكون هدفًا جيدًا للنهج العلاجي المحتمل تجاه السمية المرتبطة بالـ Cd [35]. في هذا التقرير ، درسنا التأثير التحسيني الواعد لزيت TSA على الإجهاد التأكسدي الناجم عن الكادميوم وإصابة الكلى باستخدام الفئران.
قد يترافق الضرر الكلوي الخطير الناجم عن الكادميوم مع ارتفاع مستويات المصل من اليوريا وحمض البوليك والكرياتينين بسبب التسرب في مجرى الدم [36 ، 37]. في هذه الدراسة ، تم الإبلاغ أيضًا عن زيادة كبيرة في مستويات اليوريا وحمض البوليك والكرياتينين في مصل الدم بعد التعرض لأقراص الكادميوم لمدة 7 أيام ، مما أكد الإصابة الكلوية الشديدة (الشكل 1). تؤكد النتائج المرصودة الدراسات السابقة [19،38]. إن تناول زيت TSA بجرعتين (100 و 200 مجم / كجم ، PO) يحسن بشكل كبير الخلل الكلوي الناجم عن الكادميوم المدعوم بانخفاض مستويات المصل من اليوريا وحمض البوليك والكرياتينين. في هذه الدراسة ، لوحظ أن التعرض للكادميوم يؤدي إلىالكلىالضرر عن طريق تعزيز بيروكسيد الدهون وتعطيل نظام مضادات الأكسدة الطبيعية ، مما يشير إلى زيادة الإجهاد التأكسدي. تشير النتائج المرصودة إلى أن زيت TSA يمكن أن يمنع التغيرات التي يسببها الكادميوم في المتغيرات المتعلقة بمضادات الأكسدة في الفئران. تتوافق هذه النتائج مع نتائج Kawamoto et al. [39] ، الذين أبلغوا عن زيادة بيروكسيد الدهون بعد التعرض لأقراص الكادميوم. أفادت دراسات سابقة أن التعرض المزمن للكادميوم أدى إلى تناقص مضادات الأكسدة غير الأنزيمية (نسيج GSH) [40]. تؤكد النتائج المستخلصة من هذه الدراسة تلك التي توصل إليها Koyuturk et al. [41] ، الذي وصف انخفاض محتوى GSH الكلوي في الفئران المصابة بالـ CD. قد يكون انخفاض محتوى GSH بسبب استهلاكه في الوقاية من بيروكسيد الدهون الناجم عن الإجهاد التأكسدي [41] وإزالة السموم من المعادن الثقيلة [42 ، 43]. ومع ذلك ، فإن نتائجنا لا تتفق مع نتائج Kamiyama et al. [44] ، الذي وصف مستوى مرتفع من GSH الكلوي في الفئران المعالجة بالـ Cd. تم تعديل بيروكسيد الدهون ومستوى مضادات الأكسدة في الفئران المعالجة بالـ CD بشكل كبير باستخدام زيت TSA ، مما يشير إلى انخفاض في ROS ، أو إعادة توازن نظام الدفاع المضاد للأكسدة ، أو كليهما. تدعم هذه النتائج تلك التي توصلت إليها دراسة سابقة وصفت التأثير التحسني للثيموكينون ضد الإصابة الكلوية الناجمة عن المواد الكيميائية [45].
يحدث موت الخلايا المبرمج في الأنسجة ويختلف من نخر تحت اضطرابات وظيفية معينة [46]. موت الخلايا المبرمج هو أحد الخصائص الرئيسية للـ Cd المرتبطالكلىإصابة. في وقت سابق ، تم وصف أن سمية الكادميوم تسبب موت الخلايا المبرمج في الأنابيب القريبة من خلال تحفيز مسار NF-kB ، والذي يساهم في الخلل الكلوي [47 ، 48]. في هذه الدراسة أيضًا ، لوحظ زيادة في تعبير البروتين NF-kBp65 في الفئران المعالجة بالـ Cd. ومع ذلك ، فإن إعطاء زيت TSA في الفئران المعالجة بالـ CD أعاد بشكل كبير التعبير البروتيني NF-kBp65. النتائج المرصودة تتفق مع النتائج السابقة [18 ، 19]. لذلك ، فإن تثبيط NF-kB في الفئران التي تعاني من تسمم الكادميوم قد أثبت القدرة المضادة للالتهابات لزيت TSA.
يتم التعبير عن سينثيز أكسيد النيتريك المحرض (iNOS) بشكل كبير في الحالات الالتهابية والالتهابات. وبالتالي ، فهو مكون حيوي للاستجابة التكيفية للمضيف للمنبهات الضارة. تم الإبلاغ في وقت سابق أن الإصابة الكلوية التي يسببها الكادميوم تتم بوساطة تخليق أكسيد النيتريك عن طريق تحفيز iNOS [49]. في هذه الدراسة أيضًا ، وجد أن التعرض للقرص المضغوط يتسبب في زيادة تعبير iNOS (الشكل 3 ب) ، في حين أن زيت TSA في كلتا الجرعتين يمكن أن يعكس بشكل كبير تعبير iNOS في الفئران المصابة بالقرميد.
ذكرت الأدبيات السابقة أن الكادميوم هو أحد أكثر المعادن الثقيلة سمية ويتم امتصاصه بشكل أساسي بواسطة الأنابيب القريبة ويتراكم في الغالب في القشرة الكلوية ، مما يؤدي إلى حدوث آفات في الأنابيب الملتفة القريبة [50]. هذه النتائج تؤكد نتائج الدراسة الحالية. رئيسيالكلىتم التحقق من الضرر من خلال وجود أضرار كبيرة في الكبيبات في الفئران المعالجة بالـ Cd. تؤكد هذه النتائج نتائج Damek Poprawa و Sawicka-Kapusta [51] ، اللذين أبلغا عن ضمور في الشعيرات الدموية الكبيبية ونخر في الأنابيب القريبة. نتائجالكلىعلامات الوظيفة وعلامات الإجهاد التأكسدي - حيث قام زيت TSA بتحسين التغيرات التنكسية التي يسببها الكادميوم وتحسينالكلىوظيفتها بسبب الآثار المحتملة المضادة للأكسدة والمضادة للالتهابات - تم تأكيدها من خلال ملاحظات التشريح المرضي.
4. المواد والطرق
4.1 المواد الكيميائية والكواشف
تم الحصول على كلوريد الكادميوم (CaCl2) من شركة Sigma Chemicals Co. (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية).الكلىتم الحصول على مجموعة أدوات تشخيص الوظائف من شركة الهلال للتشخيص (جدة ، المملكة العربية السعودية). تم شراء الأجسام المضادة (الأولية والثانوية) من سانتا كروز (دالاس ، تكساس ، الولايات المتحدة الأمريكية). كانت المواد الكيميائية المستخدمة ذات درجة تحليلية وذات جودة عالية لا تتطلب مزيدًا من التنقية.
4.2 المواد النباتية واستخراجها
الأجزاء الهوائية الطازجة من T. serrulatus Hochst. تم جمع Benth السابق من منطقة Amba Alajemountain ، جنوب Tigray ، إثيوبيا. تمت المصادقة على المادة النباتية من قبل عالم النبات ، د. جيتينيت مصريشة ، قسم علم الأحياء ، جامعة جوندار ، وتم إيداع العينة في معشبة الجامعة (TH -001 / 2011).
تم تقطيع الأجزاء الهوائية الجديدة إلى قطع صغيرة وتعريضها للتقطير المائي لمدة 3 ساعات باستخدام جهاز Clevenger. تم إجراء التقطير المائي 11 مرة حتى تم جمع كمية كافية. تم تجفيف الزيت العطري الذي تم الحصول عليه باستخدام كبريتات الصوديوم اللامائية وتخزينه في وعاء مغلق بإحكام عند 4 درجات مئوية حتى الاستخدام الإضافي [26]. تم التعبير عن محصول الزيت العطري المحسوب بالنسبة المئوية (النسبة المئوية v / w) ، بناءً على وزن المادة النباتية الطازجة.
4.3 الحيوانات
تم الحصول على ثلاثين فأر ذكور من الجرذان البيضاء وزنها 180-220 جم من بيت الحيوان ، كلية الصيدلة ، جامعة الأمير سطام بن عبد العزيز (PSAU) ، المملكة العربية السعودية. تم تأقلم الفئران لمدة أسبوع واحد وصيانتها أقل من 12 ساعة من دورات الضوء / الظلام مع مرافق المختبرات القياسية. خلال الفترة التجريبية والتأقلم ، تم تغذية الحيوانات بنظام غذائي بيليه والوصول المجاني إلى الماء. تم اتباع التعليمات والإرشادات المقدمة من وحدة رعاية الحيوان ، PSAU ، المملكة العربية السعودية ، عند إجراء جميع التجارب. تمت الموافقة على البروتوكول مسبقًا من قبل لجنة البحوث الأخلاقية الحيوية (BERC) ، PSAU (BERC -004-12-19).
4.4. تصميم تجريبي
لتقييم التأثير الوقائي للكلية لزيت TSA ضد السمية التي يسببها الكادميوم ، تم تقسيم الفئران بشكل عشوائي إلى خمس مجموعات (ن=6). المجموعة 1 (السيطرة العادية) تلقت محلول الملح الفسيولوجي (0. 9٪ كلوريد الصوديوم) يوميا لمدة 7 أيام. تلقت المجموعة 2 (السيطرة على السموم) كلوريد الكادميوم (3 ملغ / كغ ، IP ، 7 أيام). المجموعة 3 (التحكم الإيجابي) تم إعطاؤها CdCl2 والسيليمارين (100 مجم / كجم ، PO) لمدة 7 أيام متتالية. تم تعقيم المجموعتين 4 و 5 بزيت CdCl2 و TSA بجرعات 100 و 200 مجم / كجم (PO ، 7 أيام) ، على التوالي. تم اختيار جرعة CdCl2 بناءً على الأدبيات التي تم الإبلاغ عنها مسبقًا [19،52].
بعد 24 ساعة من العلاج ، تم تخدير جميع ذكور الفئران بكمية صغيرة من ثنائي إيثيل إيثر لجمع عينات الدم من الضفيرة المدارية الرجعية متبوعة بالطرد المركزي ، وتم إجراء فصل المصل وتخزينه في درجة حرارة -20 درجة مئوية حتى الاستخدام الإضافي لتحديدالكلىعلامات الوظيفة (مثل حمض اليوريك والكرياتينين واليوريا). بعد جمع المصل بنجاح ، تم عزل الكليتين من جميع الفئران. اليسارالكلىتم تخزينه على الفور عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى التحليل الإضافي لعلامة الإجهاد التأكسدي (MDA و GSH) وتحليل اللطخة الغربية. في غضون ذلك ، تم تخزين الكلية اليمنى للدراسات النسيجية المرضية.
4.5 تحديد المرقم الحيوي لوظيفة الكلى
sBiomarkers ofالكلىوظيفة ، مثل حمض اليوريك ، واليوريا ، والكرياتينين ، تم تقييمها باستخدام مجموعات تجارية محددة وفقا للطرق المذكورة في بروتوكولات الشركات المصنعة.
4.6 تحديد علامات الإجهاد التأكسدي في الكلى
تم تجانس الأنسجة وفرمها (1 0 بالمائة وزن / حجم) في محلول فوسفات بارد 0.1 مولار عند درجة الحموضة 7.4 ، وتم طرد المحلول لمدة 30 دقيقة عند 12 ، 000 × جم و 4 ◦ ج. تم استخدام المجانسة التي تم الحصول عليها لتقدير مستويات GSH و MDA.
تم تقدير علامة فوق الأكسدة الدهنية MDA باستخدام طريقة موصوفة مسبقًا [53]. باختصار ، 0 تم تحضين 25 مل من المتجانسة عند درجة حرارة 37 درجة لمدة ساعة واحدة في شاكر أيضي. بعد الحضانة ، تمت إضافة 0. 5 مل من 0. 67 بالمائة من حمض الثيوباربيتوريك (TBA) و 0. 5 مل من 5 بالمائة (وزن / حجم) حمض ثلاثي كلورو الخليك المبرد (TCA) ، متبوعًا بالطرد المركزي (1000 × جم ، 15 دقيقة). بعد ذلك ، تم الاحتفاظ بالمادة الطافية في حمام مائي مغلي لمدة 10 دقائق. تم قياس الامتصاصية المطورة عند 535 نانومتر ، أي لوحظ اللون الوردي.
بالنسبة لـ GSH ، فإن Jollow et al. [54] تم اتباع الأسلوب. Shortlfly ، بعد ترسيب 1 مل PMS مع 1 مل من حمض السلفوساليسيليك (4 في المائة) ، تم تحضين عينات الاختبار (4 درجات مئوية ، ساعة واحدة) ، متبوعة بالطرد المركزي (12 0 0 × جم ، 15 دقيقة ، 4 درجات مئوية). احتوى خليط الفحص على مادة طافية (0. 1 مل) ، ومخزن الفوسفات (0. 1 م ، ودرجة الحموضة 7.4) (1.7 مل) ، وثانيول ثنائي -2- حمض نيتروبنزويك (DTNB) (0. 4 بالمائة في محلول الفوسفات ، 0. 1 م ، الرقم الهيدروجيني 7.4) (0.2 مل) بحجم إجمالي قدره 2.0 مل. تم تحليل امتصاص العينات عند 412 نانومتر في غضون 5 دقائق بعد إضافة DTNB إلى مخاليط التفاعل.
4.7 تقنية اللطخة الغربية
تم إجراء تحليل البقعة الغربية واستخراج البروتين كما هو مذكور في الدراسة السابقة [55].الكلىتم فرم الأنسجة وتحضير المتجانسة في خليط مثبط البروتياز ومحلول تحلل البروتين البارد [55]. لعزل البروتينات الكلية ، تم حفظ محلولات الأنسجة في الجليد لمدة 60 دقيقة ، مع دوامة بديلة (بعد 10 دقائق) ، واستمر بالطرد المركزي عند 12 ، 000 × جم (4 درجات مئوية ، 10 دقائق). طريقة لوري وآخرون. [56] تمت متابعته لتحديد البروتين الكلي. لتحليل اللطخة الغربية ، تم عزل البروتين (25-50 ميكروغرام) لفترة وجيزة من كل مجموعة وتحويله إلى أغشية النيتروسليلوز التي تم الحصول عليها من Bio-Rad USA. تم إجراء حجب فوري للبقع البروتينية عند 4 درجات مئوية (لمدة 24 ساعة) ؛ بعد ذلك ، تم إجراء حضانة بالأجسام المضادة الأولية ضد NF-B p65 و iNOS و Smad2 والأجسام المضادة الثانوية المقترنة بالبيروكسيديز في درجة حرارة الغرفة. تم تحليل البروتينات بمساعدة مجموعة أدوات الكشف عن اللمعان الكيميائي (GE Health Care ، ميسيسوجا ، كندا). تم تطبيع شدة نطاق البروتين إلى نطاقات بيتا أكتين باستخدام ImageJ (المعاهد الوطنية للصحة ، بيثيسدا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم التقاط الصور باستخدام ماسح ضوئي لطخة غربية من طراز aC-Digit chemiluminescent تم الحصول عليه من LI-COR ، الولايات المتحدة الأمريكية.
4.8 تحليل الأنسجة
الصحيحالكلىتم التحكم في أنسجة العينة المثبتة في فورمالين محايد بنسبة 10 في المائة في آلة معالجة الأنسجة (ASP300s ، Leica Biosystems ، IL ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ تم تضمين كل عينة في شمع البارافين وتقطيعها إلى شرائح بسماكة 4 - 5- ميكرومتر. تم اختيار ثلاثة أقسام من كل مجموعة وصبغها بصبغة الهيماتوكسيلين والأيوزين (H&E) وصبغة حمض شيف الدورية (PAS) وصبغة ماسون ثلاثية الكروم (MT) [57]. تم تحليل جميع أقسام الأنسجة باستخدام مجهر (أوليمبوس BX 52) لوصف الأنسجة المرضية والتي تم تسجيلها من قبل أخصائي أمراض الأنسجة ، أعمى عن المجموعات التجريبية. تم استخدام كاميرا أوليمبوس DP21 المثبتة فوق المجهر لالتقاط الصور.
4.9 تحليل احصائي
تم التعبير عن القيم على أنها تعني ± SEM. تم استخدام تحليل ANOVA أحادي الاتجاه باستخدام اختبار ما بعد hocTukey لقياس أهمية البيانات البيوكيميائية للمجموعات المختلفة. تم قياس الاختلافات بشكل ملحوظ عند قيم p <0. 0="" 5="" بالنسبة="" إلى="" مجموعة="" التحكم="" العادية="" أو="" مجموعة="" التحكم="" السامة.="" تم="" إجراء="" التحقيق="" الإحصائي="" باستخدام="" graphpadprism="" v.="" 4.0="" (الولايات="" المتحدة="">
5. الاستنتاجات
خلصت هذه الدراسة إلى أن الزيت العطري لـ T. serrulatus يحسن القصور الكلوي الناجم عن الكادميوم ، والذي ربما توسط من خلال التحسين في متغيرات الإجهاد الكيميائي الحيوي والأكسدة بالإضافة إلى تحسين الهياكل النسيجية. علاوة على ذلك ، قد يكون T. serrulatus عاملًا مناسبًا يتم تطويره في المستقبل لحماية الكلى والكلىالاضطرابات ذات الصلة.
التمويل:لم يتلق هذا البحث أي تمويل خارجي.
بيان توفر البيانات:مشاركة البيانات غير قابلة للتطبيق.
تضارب المصالح:أعلن المؤلفون أنه لا يوجد اختلاف في الاهتمامات. لم يكن للممولين دور في تصميم الدراسة ؛ في جمع البيانات أو تحليلها أو تفسيرها ؛ في كتابة المخطوطة. أو في قرار نشر النتائج.
توافر العينة:تتوفر عينات من الزيت العطري TSA من المؤلفين.
مراجع
1. دعاء ، المعارف التقليدية ؛ ديوانجي ، إس. خنرة ، ر. بهاتاشاريا ، إن. بهاسكار ، ب. ضياء الحق ، م. De Feo، V. تأثيرات عشبين شائعين صالحين للأكل ، Ipomoea aquatic و Enhydra uctuans ، على الفيزيولوجيا المرضية التي يسببها الكادميوم: التركيز على الدفاع التأكسدي وآلية مكافحة موت الخلايا المبرمج. ترجمة J. ميد. 2015، 13، 245. [CrossRef] [PubMed]
2. Elkhadragy، MF؛ عبد المنعم ، AE التأثير الوقائي لمستخلص فراجاريا أناناسا الميثانولي على كلوريد الكادميوم (CdCl2) - السمية الكبدية في الجرذان. توكسيكول. ميكانيكي. طرق 2017 ، 27 ، 335-345. [CrossRef]
3. وو ، H. لياو ، س. شيلرود ، SN ؛ يانغ ، س. هوانغ ، إل. بي ، ياء ؛ التعرض البيئي للكادميوم: تقييم المخاطر الصحية وارتباطاته بارتفاع ضغط الدم واختلال وظائف الكلى. علوم. مندوب. 2016، 6، 29989. [CrossRef]
4. فيرجسون ، ماساتشوستس ؛ فيديا ، VS ؛ Bonventre ، JV المؤشرات الحيوية لإصابة الكلى الحادة السامة للكلية. علم السموم 2008 ، 245 ، 182-193. [CrossRef] [PubMed]
5. إبراهيم ، ماجستير ؛ المادن ، ع. المنعم، ماجستير؛ تمام ، نيافة ؛ خليفة ، آم ؛ Nasibe ، MN الكادميوم الناجم عن السمية الدموية والكلى والكبدية: التحسين بواسطة سبيرولينا بلاتنسيس. السعودية J. الطب الشرعي. علوم. 2018 ، 1 ، 5-13. [CrossRef]
6. لوح ، HF هل يمكن منع الفشل الكلوي الحاد؟ JR كول. سورج. إدينب. 2000 ، 45 ، 45-50. [PubMed]
7. Finn، W .؛ بورتر ، جي المؤشرات الحيوية البولية والسمية الكلوية. في السموم الكلوية السريرية ، الطبعة الثانية ؛ الناشرون الأكاديميون كلوير: نورويل ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية ، 2003 ؛ ص 621-655.
8. Prozialeck، WC؛ إدواردز ، JR آليات إصابة النبيب القريبة التي يسببها الكادميوم: رؤى جديدة مع آثار على المراقبة الحيوية والتدخلات العلاجية. فارماكول. إكسب. هناك. 2012 ، 343 ، 2-12. [CrossRef] [PubMed]
9. لان ، HY أدوار متنوعة لـ TGF -8 / Smads في التليف الكلوي والالتهاب. كثافة العمليات J. بيول. علوم. 2011 ، 7 ، 1056-1067. [CrossRef] [PubMed]
10. لو ، تي. ليو ، جي. طويل ، م ؛ يانغ ، ياء ؛ سونغ ، ر. وانغ ، واي. يوان ، واي. بيان ، ياء ؛ ليو ، إكس. قو ، ياء ؛ وآخرون. علاج الضرر التأكسدي الكلوي الناجم عن الكادميوم في الجرذان بإعطاء حمض ألفا ليبويك. بيئة. علوم. بولوت. الدقة. كثافة العمليات 2017 ، 24 ، 1832-1844. [CrossRef] [PubMed]
11. Angeli، JK؛ كروز بيريرا ، كاليفورنيا ؛ دي أوليفيرا فاريا ، ت. ستيفانون ، أنا. باديلها ، أ. يؤدي التعرض للكادميوم Vassallo، DV إلى إصابة الأوعية الدموية بسبب الإجهاد التأكسدي البطاني: دور الأنجيوتنسين 2 المحلي و COX -2. راديك مجاني. بيول. ميد. 2013 ، 65 ، 838-848. [CrossRef]
12. Orororo، OC؛ Asagba ، SO ؛ تونوكاري ، نيوجيرسي ؛ Okandeji ، OJ ؛ Mbanugo ، JJ آثار الكركديه Sabdarrifa L. الأنثوسيانين على الإجهاد التأكسدي الناجم عن الكادميوم في فئران ويستار. J. أبل. علوم. بيئة. ماناج. 2018 ، 22 ، 465-470. [CrossRef]
13. Inoue، M. آليات الحماية ضد أنواع الأكسجين التفاعلية. في الكبد: علم الأحياء وعلم الأمراض ، الطبعة الخامسة ؛ Arias، IM، Boyer، JL، Fausto، N.، Jokoby، WB، Schachter، DA، Shafritz، DA، Eds .؛ مطبعة رافين: نيويورك ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية ، 2011 ؛ ص 443-459.
14. Yadav، RK؛ سينغ ، م. روي ، س. أنصاري ، مينيسوتا ؛ سعيد ع. Kaithwas، G. تعديل استجابة الإجهاد التأكسدي بواسطة زيت بذور المحوري: دور بيروكسيد الدهون والآليات الكامنة وراءه. البروستاجلاندين أخرى ليبيد ميديات. 2018 ، 135 ، 21-26. [CrossRef] [PubMed]
15. Gong، X .؛ إيفانوف ، ف. ديفيدسون ، مم ؛ Hei ، TK Tetramethylpyrazine (TMP) يحمي من السمية الكلوية التي يسببها زرنيخ الصوديوم عن طريق قمع إنتاج ROS ، والخلل الوظيفي في الميتوكوندريا ، ومسارات التأشير المؤيدة للداخل ، وموت الخلايا المبرمج. قوس. توكسيكول. 2015 ، 89 ، 1057-1070. [CrossRef] [PubMed]
16. Bonizzi، G.؛ كارين ، م. مساران تنشيط NF- KB ودورهما في المناعة الفطرية والتكيفية. اتجاهات. إمونول. 2004 ، 25 ، 280-288. [CrossRef]
17. الإمام ف. ؛ الحربي لا. الحربي ، م. أنصاري ، ماجستير ؛ الأسمري ع. أنصاري ، مينيسوتا ؛ العنزي ، و. بهاشوان ، إس. المطيري ، م. الشمري ، م. وآخرون. يمنع أبريميلاست موت الخلايا المبرمج الناجم عن دوكسوروبيسين وتضخمه في القلب من خلال تثبيط التنشيط التأكسدي بوساطة الإجهاد لمسارات إشارات NF-B. فارماكول. مندوب. 2018، 70، 993–1000. [CrossRef]
18- إيربوجا ، م. كانتر ، م. أكتاس ، سي. سينر ، يو. Erboga ، ZF ؛ دونمز ، يب ؛ Gurel ، A. Thymoquinone يخفف من السمية الكلوية التي يسببها الكادميوم ، والاستماتة ، والإجهاد التأكسدي في الفئران على أساس خصائصه المضادة للاستماتة والمضادة للأكسدة. بيول. تتبع إليم. الدقة. 2016 ، 170 ، 165 - 172. [CrossRef]
19. أنصاري ، مينيسوتا ؛ Aloliet ، RI ؛ جاني ، ماساتشوستس ؛ خان ، TH ؛ رحمن ، ن. إمام ف. حمد ، am romilast ، مثبط الفوسفوديستريز 4 ، يخفف من سمية الكلى الناجم عن الكادميوم عن طريق تعديل تنشيط NF- KB وتحريض NQO1 في الفئران. إكسب الإنسان. توكسيكول. 2019 ، 38 ، 588-597. [CrossRef]
20. Begrow، F.؛ إنجلبرتز ، ياء ؛ فيستل ، ب. لينفيلد ، ر. باور ، ك. Verspohl، EJ تأثير الثيمول في مستخلصات الزعتر على مفعولها المضاد للتشنج والتصفية الهدبية. بلانتا ميد. 2010 ، 76 ، 311-318. [CrossRef]