استعادة الخلايا المناعية الفطرية والتعديلات المستمرة في المناعة التكيفية في الدم المحيطي للمتبرعين بالبلازما في فترة النقاهة بعد ثمانية أشهر بعد الإصابة بفيروس SARS-CoV -2 الجزء الأول من العدوى

خلاصة:

تم اكتشاف التغيرات المستمرة والتوقيعات المناعية الفريدة سابقًا في الدم المحيطي للمتبرعين بالبلازما (CP) بعد شهرين تقريبًا من الإصابة الأولية بفيروس SARS-CoV -2. تقدم هذه المقالة نتائج التحليل المتسلسل لـ 47 متبرعًا بالشلل الدماغي في وقت متوسط ​​ثمانية أشهر (من 7.5 إلى 8.5 شهرًا) بعد الإصابة ، كما تم تقييمه بواسطة قياس التدفق الخلوي.

مع تفشي وباء الالتهاب الرئوي التاجي الجديد ، بدأ المزيد والمزيد من الناس في الانتباه إلى تأثير بلازما النقاهة على المناعة. تعد بلازما النقاهة حاليًا وسيلة فعالة في علاج الالتهاب الرئوي التاجي الجديد. يمكن أن يحسن مناعة المرضى ، ويعزز مقاومة الجسم ، ويساعد المرضى على التعافي في أسرع وقت ممكن.

البلازما النقاهة هي مادة مستخرجة من بلازما المرضى المتعافين المصابين بالالتهاب الرئوي التاجي الجديد ، والتي تحتوي على عدد كبير من الأجسام المضادة والخلايا المناعية ، والتي يمكن أن تساعد جهاز المناعة في التعرف على الفيروس ومهاجمته ، وبالتالي تلعب دورًا مضادًا للفيروسات. لذلك ، يمكن لبلازما النقاهة أن تحسن المناعة إلى حد ما وتعزز مقاومة الجسم.

في الوقت الحاضر ، بدأت العديد من المستشفيات في استخدام بلازما النقاهة لعلاج مرضى الالتهاب الرئوي التاجي الجديد ، وحققت تأثيرات علاجية معينة. أظهرت الدراسات أن العلاج بالبلازما في فترة النقاهة يمكن أن يقصر بشكل كبير من وقت الاستشفاء للمرضى ، ويخفف من الحالة ويقلل من معدل الوفيات. لذلك ، يجب أن ندعم ونشارك بنشاط في علاج بلازما النقاهة لمساعدة المزيد من المرضى على التعافي في أسرع وقت ممكن.

بالإضافة إلى ذلك ، في الحياة اليومية ، نحتاج أيضًا إلى الاهتمام بتقوية مناعتنا لمنع حدوث أمراض مثل الالتهاب الرئوي التاجي الجديد. على سبيل المثال ، انتبه إلى نظام غذائي متوازن وتناول المزيد من الأطعمة المغذية مثل الخضار والفواكه والأسماك ؛ تقوية التمارين لتعزيز اللياقة البدنية والحصانة ؛ انتبه إلى النظافة ، واغسل يديك باستمرار ، وقلل من خطر الإصابة بالعدوى.

باختصار ، بلازما النقاهة لها تأثير إيجابي على المناعة ، والتي يمكن أن تعزز مقاومة الجسم إلى حد معين وتساعد المرضى على التعافي في أسرع وقت ممكن. يجب أن ندعم ونشارك بفاعلية في علاج بلازما النقاهة ، وأن نهتم بالرعاية الصحية في الحياة اليومية حتى تكون أجسامنا أكثر صحة وحيوية! باختصار ، نحن بحاجة إلى تحسين مناعتنا. يمكن أن يحسن الكستانش المناعة بشكل كبير لأن السكريات المتعددة في اللحوم يمكن أن تنظم الاستجابة المناعية لجهاز المناعة البشري ، وتحسن قدرة الإجهاد للخلايا المناعية ، وتقوي تأثير الخلايا المناعية للجراثيم.

انقر فوق الملحق cistanche deserticola

ومن المثير للاهتمام ، أن نتائجنا تظهر تباينًا كبيرًا في تكوين المجموعة الفرعية المناعية ذات الصلة بين متبرعي الشلل الدماغي. فيما يتعلق بالمناعة الفطرية ، فقد تعافت كل من الخلايا الوحيدة غير الكلاسيكية والخلايا الحبيبية CD11b تمامًا في ثمانية أشهر بعد عدوى COVID -19. تم بالفعل استعادة الخلايا الوحيدة الوسيطة والخلايا القاتلة الطبيعية (NK) في التقييم لمدة شهرين وظلت مستقرة. فيما يتعلق بالمناعة التكيفية ، ظل استقطاب خلية COVID -19- المنحرف المرتبط بـ Th1 و Th2 عند نفس المستويات كما في شهرين. ومع ذلك ، تم الكشف عن مستويات منخفضة من إجمالي الخلايا البائية حتى بعد ثمانية أشهر من الإصابة.

كان الانخفاض المستمر في CD8 plus Tregs والتغيرات في حجرة خلية NKT ملحوظة أيضًا. يتواجد المتبرعون بالشلل الدماغي بمظهر مناعي فريد في ثمانية أشهر بعد الإصابة بـ COVID -19 ، والتي تتميز باستعادة ملحوظة لمكونات المناعة الفطرية جنبًا إلى جنب مع بصمة مستمرة لفيروس SARS-CoV -2 في الخلايا من المناعة التكيفية.

الكلمات الدالة:

SARS-CoV -2 ؛ COVID -19 ، المتبرعين بالبلازما في فترة النقاهة. التنميط المناعي استعادة المناعة 8 أشهر.

1 المقدمة

يحدث مرض فيروس كورونا 2019 (COVID {1}}) بسبب انتقال العدوى المنقولة جواً الذي يحتمل أن يكون مميتًا وشديد العدوى لفيروس كورونا 2 (SARSCoV {3}}). تختلف شدة COVID -19 إلى حد كبير بين الأشخاص المصابين ، وتتراوح من الحالات التي لا تظهر عليها أعراض تمامًا [1] ، إلى الحالات الخفيفة التي تعاني من الحمى والسعال والتعب ، والحالات الأكثر خطورة التي تعاني من الالتهاب الرئوي الذي يؤدي إلى متلازمة الضائقة التنفسية الحادة و فشل غير مقيد لأعضاء متعددة ، والذي غالبًا ما يكون مميتًا [2].

تتميز الحالات المصحوبة بأعراض COVID -19 باستجابة مناعية مفرطة الالتهاب ، وهناك الآن أدلة كثيرة على أن الاختلافات في شدة الأعراض التي تلي عدوى السارس -2 ترتبط ارتباطًا مباشرًا بالأعراض السابقة الحالة المناعية للمضيف [3-5]. العوامل المتعلقة بالمزيد من الملفات المناعية التي تعاني من خلل في الجهاز المناعي ، وبالتالي ارتفاع خطر الوفاة ، بما في ذلك زيادة العمر وبعض الحالات الطبية المزمنة الأساسية ، مثل مرض السكري من النوع 2 ، واعتلال عضلة القلب ، والسمنة ، ومرض الانسداد الرئوي المزمن ، وأمراض الكلى المزمنة [6،7] .
كشفت الأبحاث المكثفة حول COVID -19 عن معلومات مهمة عن الشلالات المناعية وتغيرات معينة في مجموعات فرعية مناعية مختلفة مصاحبة لعدوى SARS-CoV -2 [3،4،8،9]. ومع ذلك ، لا تزال هناك معلومات محدودة بشأن التعديلات التي قد تستمر في الجهاز المناعي للمضيف بمرور الوقت بعد الحل الكامل للعدوى.

مؤخرًا ، ثبت أن المكونات المميزة للذاكرة المناعية لـ SARS-CoV -2 قد يكون لها حركيات مختلفة بمرور الوقت [9،10]. على سبيل المثال ، يبدو أن الذاكرة المضادة لـ SARS-CoV -2 والخلايا التائية السامة للخلايا تتراجع بسرعة أكبر مقارنة بمناعة الخلايا البائية ، في حين أن كل من خلايا الذاكرة B ومستويات الغلوبولين المناعي (Ig) G مقابل البروتين المرتفع لـ SARS-CoV { {8}} يستمر لمدة ستة أشهر على الأقل بعد ظهور COVID -19 [10].

في مجموعة مختلفة ، Breton et al. أظهر أن خلايا الذاكرة المركزية CD4 plus و CD8 plus T انخفضت ، لكن الخلايا التائية النوعية للمستضد استمرت لمدة ستة أشهر بعد الإصابة [11]. بالنسبة لخلايا المناعة الفطرية ، يبدو أن ملفها الشخصي يعتمد على العمر ، وقد لوحظت التغيرات في الخلايا الوحيدة والعدلات حتى كاليفورنيا. شهرين بعد الإصابة [12].

لقد أبلغنا أيضًا مؤخرًا عن تغيرات مستمرة معينة وتوقيعات مناعية فريدة في الدم المحيطي (PB) لمتبرعي بلازما النقاهة (CP) بعد شهرين تقريبًا من الإصابة الأولية بـ SARS-CoV -2. ارتبطت هذه البصمات المناعية بقدرة المرضى على تكوين استجابة خلطية وقائية ، أي لإنتاج أجسام مضادة كافية وقابلة للاكتشاف لمرض السارس -2 IgG و / أو IgA ، ولكن أيضًا مع شدة الأعراض التي تم اختبارها ، مع كون المتبرعين بالشلل الدماغي في المستشفى أقل كفاءة مناعياً من متبرعي الشلل الدماغي الذين عانوا من أعراض أكثر اعتدالاً [13].
باتباع نفس النهج ولاستكشاف البصمات طويلة المدى على الملف المناعي لمتبرعي COVID المتعافين -19- ، نقدم هنا نتائج التحليل المتسلسل لـ 47 متبرعًا بالشلل الدماغي في وقت متوسط ​​ثمانية أشهر (النطاق 7.5– 8.5 شهر) بعد الإصابة.

2. المواد والأساليب

2.1. اختيار المشاركين

يتضمن هذا التقرير اختبارًا متسلسلًا للمتبرعين بالشلل الدماغي الذين شاركوا في دراسة المرحلة الثانية (NCT04408209) وقدموا عينات PB المزدوجة لتحليل ملفهم المناعي في شهرين وثمانية أشهر ، بعد الإصابة بفيروس SARS-CoV -2. أصيب جميع المشاركين بفيروس SARS-CoV -2 وتم تشخيصهم بعد مسحات البلعوم الأنفي الإيجابية و / أو البلعوم الفموي باستخدام RT-qPCR ، كما هو موضح سابقًا [14].

قبل التبرع بالشلل الدماغي ، كان لديهم اختباران سلبيان لـ PCR بفاصل زمني سبعة أيام على الأقل. تم إجراء الاختبار السلبي الثاني قبل 1-7 أيام من فصادة البلازما. كما طوروا أيضًا أجسامًا مضادة لـ SARS-CoV قابلة للاكتشاف -2 ضد بروتين Spike domain 1 (S1) من SARS-CoV -2 عند فحصه باستخدام إنزيم حساس متوفر تجاريًا ، وإنزيم معتمد من إدارة الغذاء والدواء مقايسة الممتز المناعي المرتبط (Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG ، لوبيك ، ألمانيا) ، الموصوفة بالتفصيل سابقًا [14].

تضمنت معايير التضمين أيضًا ما لا يقل عن 14 يومًا بعد الشفاء التام من عدوى SARS-CoV -2 (لا توجد أعراض ، حل كامل لخلل في الأعضاء الناجم عن SARS-CoV -2) ، المتبرعين الذكور دون تاريخ نقل الدم ، والإناث الذين ليس لديهم تاريخ من نقل الدم أو الحمل ، تعداد دم طبيعي كامل ، اختبارات مصلية سلبية لفيروس التهاب الكبد B (HBV) ، فيروس التهاب الكبد C (HCV) ، فيروس نقص المناعة البشرية (HIV) ، مختبر أبحاث الأمراض التناسلية (VDRL) ، فيروس الخلايا اللمفاوية التائية البشرية (HTLV) -1 وسلبي لفيروس نقص المناعة البشرية وفيروس الالتهاب الكبدي الوبائي وفيروس التهاب الكبد الوبائي مع اختبار تضخيم الحمض النووي ، وقد استوفى المتبرعون جميع المعايير العامة للتبرع بالدم من حيث العمر والحالة العامة ومستويات الهيموغلوبين والحيوية علامات.

تم أيضًا تقييم عشرة أفراد أصحاء ذوي أعمار متشابهة (متوسط ​​47 عامًا ، تتراوح أعمارهم بين 45 إلى 73 عامًا) والجنس (6 ذكور / 4 إناث) واستخدامهم كعناصر تحكم عادية. لم يكن لدى هؤلاء الأشخاص أي مشاكل صحية معروفة وكان اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل سلبيًا للكشف عن فيروس SARS-CoV -2 من المسحات الأنفية البلعومية في وقت أخذ عينات الدم.

تم إبلاغ جميع المشاركين بهذه الدراسة وقدموا موافقة مستنيرة موقعة وفقًا لإعلان هلسنكي ولجنة الأخلاق المحلية.

تم تنفيذ جميع إجراءات الدراسة من خلال إعلان هلسنكي (الجمعية الثامنة عشرة للجمعية الطبية العالمية) ، وتعديلاته اللاحقة ، وإرشادات اللوائح اليونانية ، بالإضافة إلى إرشادات الممارسة السريرية الجيدة (GCP) التي حددها المؤتمر الدولي للتنسيق. تمت الموافقة على البروتوكول من قبل لجنة الأخلاقيات بمستشفى "الكسندرا" العام ، أثينا ، اليونان (المرجع رقم 245/16 أبريل 2020).

2.2. تحليل التدفق الخلوي

تم جمع عينات PB في أنابيب جمع الدم المطلية بـ EDTA (BD Vacutainer ، BD Biosciences ، سان خوسيه ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية ؛ # 367841) وتمت معالجتها في غضون ساعة بعد التجميع وفقًا لبروتوكول Stain-Lyse-no-Wash (BD Biosciences ). على وجه التحديد ، لكل عينة PB ، تم نقل 100 ميكرولتر من إجمالي الدم المضاد للتخثر إلى أنبوب FACS من البوليسترين ذو قاع دائري مقاس 12 × 75 مم وملطخًا بلوحة تتكون من أجسام مضادة مناسبة للإنسان مترافقة مع الفلوروفور مقابل أسطح الواسمات CD {{ 12}} PerCP ، CD 4- BV510 ، CD 8- PE ، CD 14- BV605 ، CD 16- APC ، CD 25- PECF594 ، CD {{21} } APCH7 ، CD 56- APCR700 ، CD 183- BV421 ، CD 194- BV650 ، CD 196- BB515 و CD11b-BV786 (جميعها من BD Biosciences) ، في درجة حرارة الغرفة (RT ) لمدة 20 دقيقة محمية من الضوء. علاوة على ذلك ، تمت إضافة 450 ميكرولتر من محلول 1 × FACS Lysing ، وتم تحضين الخلايا لمدة 10 دقائق أخرى عند درجة حرارة الغرفة محمية من الضوء. تم تحليل جميع العينات على 3- ليزر BD FACSCelesta (BD Biosciences) ، وتم الحصول على 100 حدث 000 لكل عينة.

تتكون 12- لوحة الألوان المشار إليها هنا من اللوحة المرجعية لتحليل النمط الظاهري لمتبرعي الشلل الدماغي بعد شهرين من الإصابة وسمحت بتحديد وتحليل 24 مجموعة مناعية متميزة ، بما في ذلك الخلايا البائية والخلايا CD3 بالإضافة إلى الخلايا التائية والخلايا القاتلة الطبيعية (NK) والخلايا الوحيدة والخلايا المحببة ومجموعاتها الفرعية التي تتبع استراتيجية البوابات الموصوفة سابقًا [13].

لكي تكون متسقًا مع تحليلات الدُفعات السابقة ، اتبعنا أداء إعدادًا منتظمًا وشاملًا. تم إجراء إعداد مقياس الخلوي باستخدام خلايا تحكم غير ملوثة لتكوين الفولتية PMT المناسبة ومع BD CompBeads Set Anti-mouse Igκ (BD Biosciences) لتعويض مضان بين القنوات. علاوة على ذلك ، تم تطبيق الأداء اليومي لـ CS&T قبل كل عملية استحواذ للتحقق من حالة مستقرة لجهاز القياس الخلوي.

أخيرًا ، تم تطبيق خطوة توحيد إضافية يوميًا باستخدام خرز قوس قزح (Spherotech Inc ، Lake Forest ، IL ، الولايات المتحدة الأمريكية) للتحقق من ثبات الليزر من خلال التحكم في تقلبات PMT لاكتشاف شدة الفلورسنت المستهدفة للخرز.

2.3 تحليل احصائي

تم تحليل البيانات باستخدام برنامج GraphPad Prism 8. 0. 2 (سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). يتم التعبير عن النتائج كوسائل ± الانحراف المعياري (SD). للتحليل الإحصائي ، تم استخدام اختبار t للطالب لمقارنة عناصر التحكم ومتبرعي CP لمدة ثمانية أشهر بعد عدوى SARSCoV -2 ، بينما تمت مقارنة التغييرات في متبرعي CP في شهرين وثمانية أشهر بعد الإصابة باستخدام اختبار الطالب المزدوج. تم اعتبار القيم p <0. 05 ذات دلالة إحصائية.

3. النتائج

3.1. خصائص متبرعي الإنتاج الأنظف

تضمن التحليل الحالي 47 متبرعًا بالشلل الدماغي مع عينات زوجية من PB تم جمعها بمتوسط ​​شهرين وثمانية أشهر (النطاق 7.5-8.5) بعد الإصابة بـ COVID -19. يتم عرض الخصائص السريرية للمشاركين في الجدول 1.

3.2 التنميط المناعي في ثمانية أشهر بعد الإصابة بفيروس السارس -2 لا يرتبط العدوى بالخصائص السريرية للمتبرعين بالشلل الدماغي

تمشيا مع تحليلنا السابق في شهرين بعد عدوى السارس -2 [13] ، في ثمانية أشهر ، لاحظنا تباينًا كبيرًا في تكوين المجموعة الفرعية المناعية ذات الصلة بين متبرعي الشلل الدماغي. تجاوز هذا الاختلاف الخصائص الديموغرافية والسريرية لمجموعتنا ، حيث لا توجد فروق ذات دلالة إحصائية مرتبطة بالجنس أو العمر أو عدد الأعراض التي تم اختبارها أو قيم الأجسام المضادة الخاصة بمضاد فيروس السارس في الدم -2- ضد الفيروس S1 مولد المضاد.

من الجدير بالذكر أنه لم يتم الحصول على فروق ذات دلالة إحصائية في التنميط المناعي للمتبرعين بالشلل الدماغي الذين تم إدخالهم إلى المستشفى سابقًا والذين لديهم أعراض أكثر اعتدالًا ولم يستوفوا معايير القبول في وحدات العناية المركزة (لا تظهر البيانات). لذلك ، لم نقم بتقسيم متبرعي الشلل الدماغي إلى فئات أكثر في تحليلنا اللاحق لديناميكيات التنميط المناعي بمرور الوقت (الجدول 2).

3.3 الانتعاش الفطري للمناعة في ثمانية أشهر بعد COVID -19

قمنا بتقييم إضافي لتقييم ديناميكيات ملامح مناعية معينة من خلال مقارنة التراكيب ذات الصلة لمختلف مجموعات المناعة الفرعية بمرور الوقت. يعرض الشكلان 1 و 2. تحليل المجموعات السكانية الرئيسية المناعية التي تنتمي إلى الذراعين الفطريين والتكيفين للمناعة ومجموعاتهم السكانية الفرعية في الشكلين 1 و 2. بشكل عام ، تُظهر نتائجنا أنه بحلول ثمانية أشهر بعد الإصابة ، تعافت غالبية المجموعات الفرعية للخلايا المناعية الفطرية إلى مستويات مماثلة لتلك الخاصة بالمجموعة الضابطة ، على عكس خلايا المناعة التكيفية ، حيث أظهرت مجموعات فرعية محددة من الخلايا الليمفاوية دليلًا على التنشيط المستمر على المدى الطويل.

فيما يتعلق بالمجموعات الفرعية للوحيدات ، فقد أبلغنا سابقًا عن زيادة {0} أضعاف في الخلايا الوحيدة الوسيطة وزيادة 2. 2- أضعاف في المقصورة غير الكلاسيكية (على حساب الوحيدات الكلاسيكية) خلال نشط COVID -19 مرض [11]. بحلول شهرين بعد الإصابة ، أظهرت مستويات الخلايا الوحيدة الوسيطة والكلاسيكية دليلًا على الشفاء واستعادتها تمامًا بعد ثمانية أشهر من الإصابة. النسب المئوية للخلايا الوحيدة غير الكلاسيكية ، التي ظلت تزداد بعد شهرين من الإصابة (متوسط ​​النسبة - 1.16 في المائة مقابل 0.27 في المائة في المجموعة الضابطة ، ص=0. 01) ، تعافت تمامًا أيضًا خلال ثمانية أشهر ووصلت مستويات المجموعة الضابطة.

تم تسجيل ملاحظات مماثلة للخلايا المحببة. على الرغم من أن النسبة المئوية الإجمالية عند ثمانية أشهر قد انخفضت بشكل طفيف مقارنةً بالضوابط ، في ثمانية أشهر بعد الإصابة ، انخفض انتشار مجموعات CD11b plus و CD11b بشكل كبير وزاد ، على التوالي ، مما أدى إلى نسبة CD11b plus / CD11b- حبيبات مماثلة. إلى تلك الخاصة بالمتبرعين الأصحاء العاديين ، مقارنةً بالتوسع المحبب غير المنظم في التقييم لمدة شهرين [13].

أما بالنسبة للخلايا القاتلة الطبيعية ، فلم تظهر تحليلاتنا أي تذبذب كبير بين شهرين وثمانية أشهر بعد الإصابة. تمت استعادة النسب المئوية لإجمالي الخلايا القاتلة الطبيعية ومجموعاتها الفرعية تقريبًا بعد شهرين من حل المرض ، وشوهد نفس الملف الشخصي أيضًا في ثمانية أشهر ، مع بقاء النسب المئوية عند مستويات شبه طبيعية.

For more information:1950477648nn@gmail.com