حمض الأسكوربيك ينظم المناعة ومضاد الأكسدة وموت الخلايا المبرمج في أبالون هاليوتيس ديسكوس هاناي إينو الجزء 2

3.5 تعبيرات الجينات والبروتينات ذات الصلة بالمناعة في الغدة الهضمية والخياشيم

يمكن أن يزيد الجليكوزيد من cistanche أيضًا من نشاط SOD في أنسجة القلب والكبد ، ويقلل بشكل كبير من محتوى lipofuscin و MDA في كل نسيج ، ويزيل بشكل فعال العديد من جذور الأكسجين التفاعلية (OH- ، H₂O₂ ، إلخ) والحماية من تلف الحمض النووي الناتج عن ذلك. بواسطة OH- الجذور. جليكوسيدات Cistanche phenylethanoid لديها قدرة قوية على إزالة الجذور الحرة ، وقدرة تخفيض أعلى من فيتامين C ، وتحسن نشاط SOD في تعليق الحيوانات المنوية ، وتقليل محتوى MDA ، ولها تأثير وقائي معين على وظيفة غشاء الحيوانات المنوية. يمكن أن يعزز عديد السكاريد القارص نشاط SOD و GSH-Px في كريات الدم الحمراء وأنسجة الرئة للفئران المسنة تجريبياً الناتجة عن D-galactose ، وكذلك تقليل محتوى MDA والكولاجين في الرئة والبلازما ، وزيادة محتوى الإيلاستين ، تأثير الكسح الجيد على DPPH ، وإطالة وقت نقص الأكسجة في الفئران الشائخة ، وتحسين نشاط SOD في مصل الدم ، وتأخير التنكس الفسيولوجي للرئة في الفئران الشائخة تجريبياً مع التنكس المورفولوجي الخلوي ، أظهرت التجارب أن Cistanche لديه قدرة جيدة على مضادات الأكسدة وله القدرة على أن يكون دواءً لمنع وعلاج أمراض شيخوخة الجلد. في الوقت نفسه ، يتمتع إشنكوسايد في Cistanche بقدرة كبيرة على البحث عن الجذور الحرة لـ DPPH ولديه القدرة على البحث عن أنواع الأكسجين التفاعلية ومنع تدهور الكولاجين الناجم عن الجذور الحرة ، وله أيضًا تأثير إصلاح جيد على تلف أنيون الثايمين الجذور الحرة.

انقر فوق Cistanche Reddit لمكافحة الشيخوخة

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 8613632399501】

مستويات mRNA للجينات المحورية في مسار إشارات المستقبل الشبيه بالرسم (TLR) في الغدة الهضمية لأذن البحر موضحة في الجدولين 6 و 7. وانخفضت بشكل ملحوظ مستويات التعبير عن tlr2 و tlr4 في ​​الغدة الهضمية (p <{ {5}}. 0 5) وكان لها أدنى مستوياتها عند AA1 0 0 0 و AA5 0 0 {{43 }} على التوالي (الجدول 6). تم تنظيم مستوى mRNA لـ a بشكل كبير (p <0. 0 5) ، ولم يتأثر the-b بالمستويات المتدرجة من AA الغذائي (p> 0. 05 ). تم تقليل تعبيرات myd88 ، وجزيء المحول المرتبط بالرحلة (الترام) ، والكيناز 4 المرتبط بمستقبلات إنترلوكين 1 (irak4) ، والعامل المرتبط بمستقبلات عامل نخر الورم 6 (traf6) بشكل ملحوظ بعد مكملات AA الغذائية (P <0.05). لم يتأثر traf4 بمستوى مكملات AA (p> 0.05). لم تتأثر مستويات mRNA لـ iκb kinase (ikk) ومثبط nf-b (iκb) في الغدة الهضمية لأذن البحر بـ AA الغذائي (p> 0.05) (الجدول 7). ومع ذلك ، تم تقليل التعبير عن بروتين كيناز p38 المنشط للميتوجين (علامة p38) والخردة بشكل كبير مع زيادة AA الغذائية (p <0.05). يمكن أن يقلل AA الغذائي بشكل كبير من مستويات التعبير عن nf-b ، والبروتين المنشط 1 (ap -1) ، وعامل نخر الورم (tnf-) (p <0.05) ، ولم يكن مستوى إنترلوكين 16 (il 16) تخضع لـ AA الغذائية (p> 0.05). تظهر تعبيرات البروتين لـ MyD88 و JNK و IL الناضج -1 والنووي NF-κB p65 في الشكل 2. مستويات البروتين لـ MyD88 و IL الناضج -1 والنووي NF-κB p65 في الجهاز الهضمي تم تقليل تنظيم غدة أذن البحر بشكل كبير عن طريق الغذاء AA (P <0.05). في المقابل ، لم يتأثر مستوى بروتين JNK بـ AA (p> 0.05).

لم تكن مستويات mRNA لـ tlr2 و tlr4 و the-b في خياشيم أذن البحر مختلفة بشكل كبير (p> 0. 0 5) ، وانخفض مستوى القطران بشكل كبير بعد المستويات المتدرجة من AA الغذائي (p <0. 0 5) (الجدول 8). علاوة على ذلك ، تم تقليل مستويات التعبير عن myd88 و irak4 و traf6 في خياشيم أذن البحر بشكل كبير مع زيادة مستوى AA الغذائي (p <0. {{2 0}} 5). بدلاً من ذلك ، لم يلاحظ أي اختلافات كبيرة في تعبيرات tram و traf4 (p> {{3 0}}. 0 5). قللت AA الغذائية بشكل كبير من مستوى mRNA لـ ikk (p <0.05) ، ولم تتأثر تعبيرات iκb و p38 mark والخردة في الخيشوم بـ AA (p> 0.05) (الجدول 9). كشف ANOVA أحادي الاتجاه أن مستويات التعبير عن nf-κb و ap -1 و tnf- قد انخفضت بشكل ملحوظ عن طريق AA الغذائي (p <0.05) ، ولم يلاحظ أي اختلاف كبير في مستويات il 16 (p> 0.05). تم تقليل مستويات البروتين في MyD88 والنووي NF-κB p65 بشكل كبير من خلال مستويات متدرجة من AA الغذائي (P <0.05) (الشكل 3). ومع ذلك ، فإن تعبيرات البروتين لـ JNK و IL الناضج -1 في خياشيم أذن البحر لم تتأثر بالحمية الغذائية AA (p> 0.05).

يتم إعطاء تعبيرات عن -defensin و mythmaking 6 و arginase-I في الغدة الهضمية وخياشيم أذن البحر في الجدول 1 0. زادت مستويات -defensin و arginase-I في الغدة الهضمية بشكل ملحوظ بعد AA الغذائي (p <0. 0 5) ، بينما لم يتأثر التعبير عن صناعة الأساطير 6 بـ AA الغذائي (p > 0.05). على النقيض من ذلك ، لم تكن مستويات mRNA لـ -defensin و arginase-I في الخياشيم مختلفة بشكل كبير ، وتم تنظيم التعبير عن صناعة الأساطير 6 بشكل كبير بواسطة AA الغذائي (p <0.05).

3.6 تعبيرات الجينات ذات الصلة بالمناعة في الغدة الهضمية ردا على Vibrio Parahaemolyticus

مستويات التعبير للعديد من الجينات الحرجة في مسار إشارات TLR ، التي تحتوي على tlr4 ، myd88 ، tram ، nf-κb ، ap -1 ، و tnf- في الغدة الهضمية لأذن البحر بعد عدوى V. parahaemolyticus مذكورة في الشكل 4 تم تنظيم تعبيرات mRNA لـ tlr4 و myd88 و tram و nf-κb و ap -1 و tnf- بشكل كبير بعد إعطاء V. parahaemolyticus (p <0. 0 5). كان التغيير الطي لـ tlr4 أعلى مستوى في مجموعة AA 0 (1 0. 24- ضعفًا) بعد 24 ساعة بعد الإصابة ، وبعد ذلك ، انخفض المستوى الأعلى إلى 3. {{ 2 0} أضعاف في المجموعة AA5 0 0 0 عند 6 ساعات. تم تنظيم مستوى mRNA لـ myd88 بشكل كبير عند 12-72 ساعة في مجموعة AA0 (6. 86- أضعاف) وعند 6-12 ساعة في مجموعة AA5000 (3. 88- أضعاف) بعد V. عدوى فقر الدم. تمت زيادة التعبير عن الترام في الغدة الهضمية لأذن البحر بعد الإصابة بالفطر V. parahaemolyticus بشكل ملحوظ من 12 ساعة إلى 72 ساعة في مجموعة AA0 ومن 12 ساعة إلى 24 ساعة في مجموعة AA5000. وصل التغير الطي لـ nf-b إلى أعلى مستوى له عند 48 ساعة في مجموعة AA0 (10. 55- ضعفًا) ، متبوعًا بانخفاض في أعلى مستوى عند 12 ساعة في المجموعة AA5000 (3. {{48) }} أضعاف التغيير). تم تنظيم مستوى التعبير عن ap -1 بشكل كبير من 6 ساعات إلى 72 ساعة في مجموعة AA0 و AA50 قبل أن يتعافى إلى المستوى الطبيعي عند 72 ساعة بعد مكملات AA المستمرة. بلغ التغير الطي لـ TNF- ذروته عند 24 ساعة بعد الإصابة V parahaemolyticus في مجموعات AA0 و AA50 و AA100 و AA200 و AA500 ، وكان أعلى مستوى له عند 12 ساعة في مجموعات AA1000 و AA5000.

نتائج مستويات - ديفنسين وصناعة الأساطير 6 في الغدة الهضمية بعد عدوى ضمة بارا هيموليتيكوس موضحة في الشكل 5. وزادت مستويات التعبير عن -ديفنسين وصنع الأساطير 6 في الغدة الهضمية لأذن البحر بشكل ملحوظ بعد عدوى ضمة بارا هيموليتيكوس ( ف <0. 0 5). تمت زيادة مستوى mRNA لـ -defensin بشكل كبير في مجموعات AA 0 و AA50 و AA100 و AA200 في 12 ساعة و 24 ساعة ، ووصل إلى ذروتها عند 12 ساعة في مجموعات AA200 و AA500 و AA1000 و AA5000 مع 4 . 51- أضعاف ، 4. 74- أضعاف ، 5. 20- أضعاف و 5. 47- أضعاف ، على التوالي. تم تنظيم تغيير أضعاف صنع الأساطير 6 في الغدة الهضمية لأذن البحر بشكل كبير من 12 ساعة إلى 24 ساعة في مجموعات AA0 و AA50 و AA100 و AA200 و AA500 ، ومن 6 ساعات إلى 72 ساعة في مجموعات AA1000 و AA5000. لوحظ أعلى مستوى للتعبير عن صناعة الأساطير 6 عند 12 ساعة في مجموعة AA5000 مع 5. 82- أضعاف.

3.7 تعبيرات الجينات والبروتينات المرتبطة بمضادات الأكسدة والمتعلقة بالاستماتة في الغدة الهضمية والخياشيم

تم رفع مستويات mRNA للعامل المرتبط بـ nf-e 2- -2 (nrf2) و gpx و cat و cuznsod في الغدة الهضمية لأذن البحر بشكل ملحوظ مع المستويات المتدرجة من AA الغذائي (p <{{4) }}. 0 5) (جدول 11). في المقابل ، انخفضت مستويات mRNA والبروتين في Keap1 بشكل كبير بعد AA الغذائي (p <0. 0 5) ، ولم يتأثر الجلوتاثيون-أس-ترانسفيراز (GST) بـ AA (الشكل 6 ، الجدول 11) (p> 0. 0 5). في الخيشوم ، تمت زيادة مستويات mRNA لـ nrf2 و gpx بشكل ملحوظ بواسطة AA الغذائي (p <0.05) (الجدول 11). ومع ذلك ، فإن تعبيرات keap1 و cat و GST و cuznsod في الخيشوم لم تخضع لمستويات متدرجة من AA الغذائي (p> 0.05). لم يلاحظ أي تأثير كبير لـ AA الغذائي على التعبير البروتيني لـ Keap1 في خياشيم أذن البحر (P> 0.05) (الشكل 6).

ما يبرز في الجدول 12 هو أن مستويات التعبير عن Bax و caspase3 في الغدة الهضمية لأذن البحر انخفضت بشكل ملحوظ بعد المستويات المتدرجة من AA الغذائي (p <0. 0 5). في غضون ذلك ، تم تنظيم مستوى mRNA لـ bcl -2 بشكل ملحوظ (p <0. 0 5). ومع ذلك ، فإن تعبير caspase7 لم يتأثر بالحمية الغذائية AA (p> 0. {{2 0}} 5). تم تقليل بروتين cleavedcaspase3 في الغدة الهضمية بشكل كبير بعد مكملات AA (P <0.05) (الشكل 6). في الخيشوم ، انخفضت مستويات mRNA لـ caspase7 و bcl -2 بشكل كبير وزادت ، على التوالي ، بعد AA الغذائي (p <0.05) (الجدول 12). ومع ذلك ، لم تكن تعبيرات Bax و caspase3 مختلفة بشكل كبير بين جميع المعالجات (p> 0.05). بالإضافة إلى ذلك ، لم يتأثر التعبير البروتيني لـ caspase3 المشقوق في خياشيم أذن البحر بمستويات متدرجة من AA الغذائي (p> 0.05) (الشكل 6).

4. مناقشة

4.1 محتوى حمض الأسكوربيك في الأنسجة المختلفة

في هذه الدراسة ، زادت محتويات AA في العضلات والخياشيم والغدة الهضمية مع زيادة مستويات AA الغذائية. تم العثور على نتيجة مماثلة أيضًا في Vundu (Heterobranchus logfiles) ، وثعبان السمك الياباني ، و Chu's croaker (Nibea color) [27،56،57]. كان محتوى AA أعلى في الخياشيم ، تليها الغدة الهضمية لأذن البحر. ومع ذلك ، فإن محتويات AA في الخياشيم والغدة الهضمية وعضلات أذن البحر لم تصل إلى تشبعها بعد 4821.17 مجم / كجم من AA الغذائي. في الماص الصيني (Myxocyprinus asiaticus) ، تمت زيادة محتوى AA في الكبد بشكل ملحوظ عن طريق الغذاء AA [58]. ارتبط محتوى AA المتزايد في كبد المصاص الصيني بعد تناول AA الغذائي بصحة الكبد. في مبروك الحشائش ، ارتفعت محتويات AA في كلية الرأس والطحال والجلد بشكل ملحوظ مع زيادة مكملات AA الغذائية [35]. تعتبر كلية الرأس والطحال والجلد من أجهزة المناعة المهمة في الحيوانات المائية [59-61]. توضح هذه النتائج أن زيادة محتوى AA في الغدة الهضمية وخياشيم أذن البحر كانت مرتبطة ارتباطًا وثيقًا بصحة أذن البحر بعد اتباع نظام AA الغذائي وأن تراكم AA يعكس مستويات التعرض الغذائي لـ AA.

4.2 دور حمض الاسكوربيك في تنظيم مناعة أذن البحر

تعتبر الخلايا الدموية ، باعتبارها مكونات خلوية متعددة الاستخدامات من الدملمف في الرخويات ، مسؤولة عن العديد من جوانب حياة الرخويات ، مثل الاستجابة المناعية ، والتمعدن الحيوي ، والتواصل بين الخلايا الخلوية ، والتجديد [62،63]. لذلك ، يمكن أن تعكس THC و RB و PA من الدملمف بشكل مباشر مناعة الكائن الحي. ارتبط AA ارتباطًا وثيقًا بـ THC و RB و PA للخلايا الدموية ، مما أدى إلى تنشيط جهاز المناعة التكيفي [64،65].

في هذه الدراسة ، تمت زيادة THC و RB و PA في الدملمف لأذن البحر بشكل كبير عن طريق AA الغذائي. يشار إلى أن المستويات المتدرجة من AA الغذائية نجحت في تعزيز وظيفة المناعة في أذن البحر. ولوحظت نتائج مماثلة في البلطي النيلي والجمبري الحشائش (Penaeus monodon) [64،66]. انخفض RB في مصل جراد المستنقعات الأحمر (Procambarus clarkii) والسلطة الفلسطينية في مصل سمك السلور السوروبيم الهجين (Pseudoplatystoma reticulatum × P. corpuscles) بشكل ملحوظ بعد مستوى عالٍ من مكملات AA الغذائية (321.38 مجم / كجم و 850 مجم /. كجم ، على التوالي) [67،68]. ومع ذلك ، لم يلاحظ أي انخفاض كبير في THC و RB و PA في الدملمف لأذن البحر في العلاج بمستويات عالية من مكملات AA الغذائية (4821.17 مجم / كجم).

يلعب الليزوزيم C3 و C4 دورًا محوريًا في المناعة الفطرية وحماية الحيوانات من العدوى المرضية [69-71]. في هذه الدراسة ، تمت زيادة LZM في CFH لأذن البحر بشكل ملحوظ بعد المستويات المتدرجة من AA الغذائي. كان هذا مشابهًا لنتائج الدراسات السابقة في الكوبيا (Rachycentron canadum) وسمك الصخر الكوري (Sebastes schlegelii) والهامور (Epinephelus malabaricus) [29،72،73]. نقص AA يقلل من محتويات C3 و C4 في مبروك الحشائش ، ويمكن أن يعزز AA الغذائي بشكل كبير بارامترات المناعة مثل C3 و C4 في باس ارجموث [35،74]. ومع ذلك ، في هذه الدراسة ، لم يتأثر محتوى C4 في CFH لأذن البحر بمستويات AA الغذائية. كان هناك اتجاه متزايد لمحتوى C3 في CFH لأذن البحر ، على الرغم من أن محتوى C3 لم يتحسن بشكل كبير عن طريق AA الغذائي. أوضحت هذه النتائج أن المكملات الغذائية لـ AA يمكن أن تعزز القدرة على القضاء على مسببات الأمراض عن طريق LZM و C3 ، وليس C4 ، لتحسين الحواجز المناعية لأذن البحر.

المناعة الفطرية أمر حيوي لأذن البحر بسبب غياب المناعة التكيفية في اللافقاريات [43،49]. تلعب المستقبلات TLRs دورًا حيويًا في الجهاز المناعي الفطري ضد الميكروبات المختلفة [75]. تقوم TLRs التي يتم تنشيطها بواسطة PAMP بتجنيد جزيئات محول معينة لتنشيط عوامل النسخ ، مثل NF-κB و AP -1 ، والتي تحدد نتيجة الاستجابة المناعية الفطرية [76]. يتم تصنيف إشارات TLR إلى مسارين متميزين: MyD 88- يعتمد على MyD و MyD 88- مستقل ، والذي يحفز السيتوكينات المختلفة مثل TNF- و IL -1 في الثدييات والحيوانات المائية الأخرى [77،78 ]. في المسار المعتمد على MyD 88- ، يتفاعل MyD88 مع IRAK4 ثم يتفاعل مع TRAF6 [79]. يمكن لـ TRAF6 تنشيط بروتينات ربط TGF - - المنشط 1 (TAK1) و TAK 1- (TABs) [80]. يقوم TAK1 بتنشيط مجمع IKK ، والذي يمكنه فسفرة IκB الذي يرتبط بالوحدات الفرعية NF-κB (التي تتكون من p50 و p65) والفوسفوريلات MAPKs و JNK ، مما يعزز نقل AP -1 إلى النواة [81]. تدمير IκB يسهل الانتقال النووي لـ NF-B [82]. يستهدف كل من NF-κB و AP النوويين -1 نسخ السيتوكينات ، مثل TNF- و IL -1 ، والتي يُعرف عنها جيدًا كوسيطات مؤيدة للالتهابات عززت الالتهاب [76،77،83] . في المسار المستقل MyD 88- ، يكون TRAM مطلوبًا ويحتل دورًا محوريًا في هذا المسار [84]. عادة ما يتم حفظ المكونات داخل الخلايا في اتجاه مجرى مسار إشارات TLR بين الفقاريات واللافقاريات [60،85]. تم تقليل التعبير داخل الكبد لـ TLR4 في الفئران المُدارة من AA (Mus musculus) [86]. تمارس AA حماية كبدية مفيدة ضد الإصابة الكبدية المناعية التي يسببها الكونكانافالين في الفئران عن طريق تثبيط مسار إشارة NF-B [87،88]. وبالتالي ، يمكن الاستدلال من هذه النتائج على أن AA يمكن أن تؤثر على مسار إشارات TLR. ومع ذلك ، لا يزال من غير المعروف كيف تنظم AA مسار إشارات TLR في الحيوانات المائية ، وخاصة في الرخويات.

في هذه الدراسة ، تم تقليل مستويات الرنا المرسال لكل من tlr2 و tlr4 في ​​الغدة الهضمية بشكل كبير عن طريق المستويات المتدرجة من AA الغذائي. يُقترح أن مسار إشارات TLR تم تشغيله بواسطة AA في الغدة الهضمية لأذن البحر (الشكل 7). كان للمصطلحين- a و tlr-b قدرات أوسع للتعرف على الأنماط وشاركا في المناعة المضادة للبكتيريا والفيروسات لأذن البحر [89] ؛ ومع ذلك ، فإن الآلية الأساسية لـ a / b لا تزال غير معروفة. ومع ذلك ، لم يتأثر مستوى tlr-b بالنظام الغذائي AA ، وتم تنظيم tlr-a بشكل كبير بواسطة AA في هذه الدراسة. هناك حاجة إلى مزيد من التحقيقات. تم تقليل تعبيرات myd88 و irak4 و traf6 والتعبير البروتيني لـ MyD88 في الغدة الهضمية لأذن البحر عن طريق مكملات AA ، ولم يتأثر مستوى traf4 بالنظام الغذائي AA. يعمل TRAF4 ككاتم للصوت في الإشارات بوساطة TLR عن طريق قمع TRAF6 [90]. يشار إلى أن تثبيط مسار TLR بواسطة AA الغذائي لم يتم توسطه من خلال traf4 في الغدة الهضمية لأذن البحر. لم يتأثر مستوى mRNA لـ iκb في الغدة الهضمية بـ AA. ومع ذلك ، لا يمكن نقل NF- B إلى النواة إلا بعد تحلل الفوسفات IκB [91]. تم تقليل تعبيرات mRNA لـ nf-b والتعبير البروتيني عن NF-B p65 النووي في الغدة الهضمية بشكل كبير بواسطة AA الغذائي. تشير هذه النتائج إلى أن AA قد يقمع الفسفرة لبروتين IκB لتقليل NF-B النووي. يمكن لـ IKK تنشيط NF-κB p65 لتشغيل المسار المتعارف عليه NF-κB ، ويمكن لـ IKK تنشيط NF-κB p52 لتشغيل المسار غير المتعارف عليه NF-κB [92]. يشار إلى أن AA الغذائي يمكن أن ينشط المسار الكنسي NF-B في الغدة الهضمية لأذن البحر. علاوة على ذلك ، تم تقليل تعبيرات الرنا المرسال للترام ، وعلامة p38 ، والخردة ، و ap -1 ، و tnf- ، ومستوى البروتين لـ IL الناضج -1 بشكل كبير بواسطة AA الغذائي. تشير هذه النتائج إلى أن النظام الغذائي AA يمكن أن يثبط مسار إشارات TLR عبر المسار المعتمد على Myd 88- عبر NF-κB و p38 mark / ap -1 و JNK / ap -1 و Myd {{ 43}} ممرات مستقلة لتخفيف الالتهاب في غدة أذن البحر. في الخيشوم ، أثرت AA أيضًا على مسار إشارات TLR (الشكل 7). ومع ذلك ، لم تكن مستويات الرنا المرسال للترام ، وعلامة p38 ، والخردة ، وتعبير البروتين لـ IL الناضج -1 مختلفة بشكل كبير. أشارت هذه النتائج إلى أن النظام الغذائي AA يمكن أن يثبط مسار إشارات TLR عبر المسار المعتمد على Myd 88- ، وليس MyD 88- المستقل. خفف مسار TLR المثبط من الالتهاب في خياشيم أذن البحر عبر مسار NF-κB و p38 mark / ap -1 ، وليس مسار JNK / ap -1. كان لـ AA الغذائي تأثير أقوى على مسار TLR في الغدة الهضمية مقارنة بخياشيم أذن البحر.

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 8613632399501】