دراسة عن الوظيفة الوقائية للتقيؤ في الكلى: الاختلافات المعتمدة على الأندروجين في كميات CYP MRNAs في كلى الخنزير

الاختلافات المعتمدة على الأندروجين في كميات CYP mRNAs في كلى الخنزير

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

لقد أبلغنا سابقًا عن اختلافات في الجنس والتكاثر المعتمد على الأندروجين في كميات الرنا المرسال للأشكال الإسوية CYP في كبد الخنزير. لتوضيح ما إذا كانت هناك اختلافات في الجنس والتكاثر فيالكلى، قمنا بفحص كميات عدة CYP mRNAs في الكلى باستخدام كلا الجنسين 5- من العمر Landrace و Meishan و / أو الخنازير المهجنة F1 (LM و ML). تم العثور على اختلافات كبيرة بين الجنسين في كميات عدة CYP mRNAs: ذكر <أنثى لـ="" cyp2a19="" و="" cyp3a29="" ؛="" و="" ذكر=""> أنثى لـ CYP4A24 / 25 في جميع السلالات. كما لوحظت الفروق بين الجنسين في كمية CYP2B22 mRNA (ذكر <أنثى) وفي="" cyp2c33="" و="" cyp2c49="" mrnas="" (ذكور=""> أنثى) في جميع السلالات باستثناء خنازير Landrace. علاوة على ذلك ، تم العثور على اختلاف كبير بين الجنسين (ذكر <أنثى) في="" cyp3a46="" mrna="" فقط="" في="" الخنازير="" lm="" و="" ml.="" لم="" يتم="" العثور="" على="" فروق="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" بين="" الجنسين="" في="" أي="" من="" الخنازير="" landrace="" أو="" meishan="" لـ="" cyp1a1="" و="" cyp1a2="" و="" cyp4b1="" mrnas.="" كانت="" كميات="" cyp2c33="" و="" cyp4a24="" 25="" mrnas="" في="" الذكور="" أعلى="" في="" خنازير="" ميشان="" منها="" في="" خنازير="" landrace.="" تجارب="" إضافية="" باستخدام="" الخنازير="" المعالجة="" بالإخصاء="" و="">التستوستيرونأشار البروبيونات إلى أن الاختلافات في الجنس والتكاثر في كميات تلك CYP mRNAs كانت ، جزئيًا على الأقل ، تعتمد على مستويات المصل.التستوستيرون. علاوة على ذلك ، فإن تأثيرات الأندروجين على كميات CYP mRNAs في الكلى لا ترتبط بالضرورة بتلك الموجودة في الكبد ، مما يشير إلى وجود عامل انتقائي للأنسجة مسؤول عن التعبير المرتبط بالأندروجين عن جينات CYP. حمايةسيستانشعلى الالكلىشامل ، والذي يُنسب إلى عناصر مثل إكينكوسايد ، فيرباسكوسايد ، فلافونويد ، وإجمالي جليكوسيدات كحول فينيثيل الموجودة فيسيستانش. سيستانشلا يمكن فقط حمايةالكلىمن المزيد من الضرر ولكن أيضًا إصلاح الضرر الحالي لـالكلى. وبالتالي،سيستانشهو العشب الأكثر استخدامًا في وصفات الطب الصيني التقليدي.سيستانشله قيمة طبية عالية للغاية.

الكلمات الدالة:التستوستيرون؛ CYP.الكلى؛ اختلاف الجنس تولد الفرق خنزير؛الكلىزنزانة؛سيستانش

ميساكي كوجيما وماساكوني ديجواب

وحدة الجينوم الحيواني ، معهد علوم الماشية والأراضي العشبية ، المنظمة الوطنية للبحوث الزراعية والغذائية (NARO) ؛ 2 Ikenodai، Tsukuba، Ibaraki 305–0901، Japan: and b Labour of Molecular Toxicology، School of Pharmaceutical Sciences، University of Shizuoka؛ 52-1 يادا ، سوروجا-كو ، شيزوكا 422-8526 ، اليابان. تم استلامه في 16 أبريل 2021 ؛ قبلت في 19 مايو 2021

المقدمة

تلعب إنزيمات التمثيل الغذائي للأدوية (DMEs) ، مثل CYPs ، و sulfotransferase (SULTs) ، و uridine 5′-diphosphate (UDP) - glucuronosyltransferases (UGTs) ، دورًا مهمًا في استقلاب xenobiotics ، بما في ذلك الأدوية والمركبات الذاتية مثل هرمونات الستيرويد 1،2) الخنازير الداجنة (Sus scrofa localus) ، بما في ذلك الخنازير الصغيرة ، مهمة في الدراسات الدوائية والسمية بسبب تشابه وظيفة DME بين البشر والخنازير ، وخاصة CYPs.3-7) لقد أبلغنا سابقًا عن ممارسة الجنس وتكاثر الاختلافات في كميات جزيئات DME mRNAs الكبدية ، بما في ذلك الأشكال الإسوية CYP ، بين خنازير Landrace و Meishan ، وأثبتنا كذلك أن مستوى الأندروجين في الدم هو أحد العوامل الحاسمة التي تنتج هذه الاختلافات.

سيستانشتوبولوسايمنعمرض كلوي،انقر هنا للحصول على العينة

الالكلىبالإضافة إلى أن الكبد هو النسيج المهم المسؤول عن عملية التمثيل الغذائي وإفراز المواد الغريبة الحيوية بما في ذلك الأدوية والمركبات الذاتية وهو أحد الأهداف الأكثر شيوعًا للسمية التي يسببها الدواء. توجد عائلات CYP1 و CYP2 و CYP3 و CYP4 في الخنازيرالكلى.11-15) تلعب معظم هذه الأشكال الإسوية CYP دورًا مهمًا في عملية التمثيل الغذائي للأجانب الحيوية و / أو الدهون في حيوانات التجارب والبشر.الكلىينظمه الاندروجين 18-21)

في الدراسة الحالية ، قمنا أولاً بفحص الفروق بين الجنسين والتكاثر في كميات CYP mRNAs (CYP1A1 ، CYP1A2 ، CYP2A19 ، CYP2B22 ، CYP2E1 ، CYP2C33 ، CYP2C49 ، CYP3A22 ، CYP3A29 ، CYP3A244 ، CYP3A29 ، CYP3A244 ،الكلىميشان ولاندريس وخنازيرهم المهجنة من الفئة F1. علاوة على ذلك ، قمنا بفحص ما إذا كان الأندروجين عاملاً حاسمًا في تحديد الجنس والفروق في التكاثر في كميات تلك CYP mRNAs في الخنازيرالكلى، عن طريق التجارب مع الإخصاء و / أو إدارةالتستوستيرونبروبيونات (TP).

المواد والأساليب

الحيوانات

تم استخدام خنازير Landrace و Meishan وهجينهم F1 (LM ، أنثى Landrace × ذكر Meishan ؛ ML ، أنثى Meishan × ذكر Landrace) ، نفس تلك المستخدمة في دراساتنا السابقة .22) باختصار ، تم الاحتفاظ بالخنازير في المعهد الوطني علوم الماشية والأراضي العشبية ، تسوكوبا ، اليابان. تم تغذية جميع الخنازير على نظام غذائي تجاري للحبوب وتم تزويدها بالماء حسب الرغبة. قُتلت الخنازير بالصعق الكهربائي تلاها نفاد الدم بين الساعة 10: 00 و 11: 00 صباحًا. تم إخصاء بعض ذكور الخنازير Landrace و Meishan في عمر شهر واحد والقتل الرحيم في سن 5 أشهر. تمت إزالة جزء من الكلى أو الكبد من كل خنزير بسرعة ، وتجميده في النيتروجين السائل ، وحفظه عند درجة -80 درجة حتى التحليلات اللاحقة.

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة رعاية الحيوان التابعة للمعهد الوطني لعلوم الماشية والأراضي العشبية (أرقام 1711B060 ، 1811B032 ، 1911B068 ، 20B005NILGS). تم التعامل مع جميع الحيوانات بطريقة إنسانية بموجب إرشادات اللجنة.

علاج الأندروجين

كما هو موضح في التقارير السابقة ، 23،24)التستوستيرونتم حقن البروبيونات (TP ، Sigma Chemical Co. ، St. وزن الجسم؛ تم قتل الخنازير الرحيم بعد 24 ساعة من الحقن النهائي.

كمية المصلالتستوستيرون

كمية المصلالتستوستيرونفي ذكور الخنازير الفردية تم قياسها باستخدامالتستوستيرونمجموعة مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) (Enzo Life Sciences Inc. ، NY ، الولايات المتحدة الأمريكية) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة ، كما هو موضح سابقًا .24) بالإضافة إلى ذلك ، تم أيضًا استخدام البيانات التي تم الحصول عليها في دراساتنا السابقة.

كميات CYP mRNAs

تم تحضير إجمالي الحمض النووي الريبي من الأنسجة الفردية باستخدام كاشف TRIzol (Invitrogen Corp. ، Carlsbad ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، واستخدم لتحديد كميات CYP1A1 ، CYP1A2 ، CYP2A19 ، CYP2B22 ، CYP2E1 ، CYP2C33 ، CYP2C49 ، CYP3A29 ، CYP3A22 ، CYP4A24 / 25 و CYP4B1 mRNAs. تم تقييم كميات هذه الرنا المرسال باستخدام RT-PCR في الوقت الفعلي باستخدام 7500 Real-Time PCR System و SYBR green master mix (PE Applied Systems ، طوكيو ، اليابان) ، كما هو موضح سابقًا ، 25) باستثناء CYP3A mRNA. تم فحص كميات CYP3A22 و CYP3A29 و CYP3A46 mRNAs باستخدام Eagle Taq Master Mix مع ROX (Roche Molecular Systems ، Inc. ، Branch burg ، NJ ، الولايات المتحدة الأمريكية) كما ورد سابقًا. كانت الدراسة هي نفسها تلك الموجودة في دراساتنا السابقة 22 ، 25) باستثناء CYP1A1 و CYP1A2 و CYP4A24 / 25 و CYP4B1 ، حيث كانت التسلسلات الأولية كما يلي: CYP1A1 ، 5′-ACT TCA TCC CTA TCC TCC GTT ACC {{53} } ′ (للأمام) و 5′-GCA TTC TCG TCC ATC CTC TTG TC -3 ′ (عكسي) ؛ CYP1A2 و 5′-GCT ATC GGG ACT TTG ACA AGA ACT -3 ′ (للأمام) و 5′-CCA GGA GAT GGC TGT GGT AAT TG -3 ′ (عكسي) ؛ CYP4A24 / 25 ، 5′-CAC CGT GCC GCC AGG ATA -3 ′ (للأمام) و 5′-CAA GGA GGA GGA TGT CCA GGA A -3 ′ (عكسي) ؛ CYP4B1 ؛ 5′-GAG CAC CAG CAT CGT TGT CG -3 ′ (للأمام) و 5′-TCC CCA GAT CCT CCC CCT G -3 ′ (عكسي). تم استخدام بروتين الريبوسوم L7 (RPL7) كمعيار داخلي. تم تقييم كمية كل (كدنا) بواسطة طريقة المنحنى المعياري النسبي وفقًا لنشرة مستخدم PE Applied Biosystems # 2 (1997). تم إنشاء المنحنيات القياسية لتحديد كميات CYP mRNAs باستخدام خليط تفاعل RT مع إجمالي الحمض النووي الريبي من كبد 5- أنثى من خنازير Landrace البالغة من العمر شهرًا ، أو من الكلية التي يبلغ عمرها 5- شهرًا أنثى الخنازير Landrace أو Meishan ، حسب الغرض

تحاليل احصائية

تم تقييم فروق ذات دلالة إحصائية من خلال اختبار Tukey اللاحق بعد اختبار ANOVA أو اختبار الطالب. تم تحديد الارتباطات بين المعلمات المشار إليها من خلال تحليل الانحدار.

النتائج

كميات CYP mRNAs في كلية Landrace و Meishan Pigs

تم قياس كميات CYP mRNAs لأول مرة في كلية كلا الجنسين لخنازير Landrace و Meishan البالغة من العمر {{0} شهرًا. لمقارنة كمية كل CYP mRNA بين الكلى والكبد ، تم التعبير عن كمية كل CYP mRNA في الكلى كنسبة نسبية إلى الكمية المقابلة في كبد 5- أنثى من خنازير Landrace البالغة من العمر شهرًا ، وتظهر النتائج في الجدول 1.

في جميع الخنازير التي تم فحصها ، كانت كميات CYP4A24 / 25 و CYP4B1 mRNAs في الكلى أعلى بكثير من تلك الموجودة في الكبد ، بينما كانت كميات CYPs الأخرى عكس ذلك (الجدول 1). بالإضافة إلى ذلك ، على الرغم من اكتشاف CYP2E1 و CYP3A22 mRNAs في الكلى ، كانت هذه الكميات أقل من واحد بالألف من تلك الموجودة في الكبد في كل سلالة (البيانات غير معروضة).

في كلا سلالتي الخنازير ، كانت كميات الرنا المرسال CYP2A19 و CYP3A29 أقل في الذكور منها في الإناث (الجدول 1 ، الشكل 1). على العكس من ذلك ، كانت كمية CYP4A24 / 25 mRNA في كلا سلالتي الخنازير أعلى بشكل ملحوظ في الذكور منها في الإناث. علاوة على ذلك ، في خنازير ميشان ، كانت كميات CYP2C33 و CYP2C49 mRNAs أعلى بشكل ملحوظ في الذكور منها في الإناث. لم يلاحظ أي فروق بين الجنسين في كميات CYP2C33 و CYP2C49 mRNAs في خنازير Landrace. لم يلاحظ وجود فروق ذات دلالة إحصائية بين الجنسين في كميات CYP1A1 و CYP1A2 و CYP2B22 و CYP4B1 mRNAs في أي من سلالات الخنازير ، على الرغم من أن الاختلاف بين الجنسين في كمية CYP2B22 mRNA في خنازير ميشان كان مهمًا من خلال اختبار الطالب t. علاوة على ذلك ، تم اكتشاف CYP3A46 mRNA في كلا الجنسين من خنازير Landrace ، بينما كان أقل من حد الكشف في كلا الجنسين من خنازير ميشان.

Breed  differences  in  the  amounts  of  several  CYP mRNAs were also found. The amounts of CYP2B22 and CYP4B1 mRNAs in Landrace pigs were signifificantly higher than those  in sex-matched Meishan pigs, while those of CYP2C49 and CYP3A29  mRNAs  were the  opposite.  A  significant  breed  difference (Meishan > Landrace) in the amounts of CYP2C33 and CYP4A24/25  mRNA  was  also  observed in  males,  but  no  such  difference  was  found in  females.  Furthermore, the  breed  differences  (Landrace >Meishan) بكميات CYP1A1 و CYP1A2 و CYP2A19 mRNAs بين خنازير Landrace و Meishan المتطابقة جنسياً.

تأثير الأندروجين على التعبير الجيني لـ CYPs التمثيلية ذات الصلة بالجنس لتوضيح اعتماد الأندروجين للتعبير الجيني لـ CYPs (CYP2A19 و CYP2B22 و CYP2C33 و CYP2C49 و CYP3A29) في الكلى ، كانت تأثيرات الإخصاء و / أو علاج TP تم اختباره باستخدام خنازير Meishan و Landrace البالغة من العمر 5- شهرًا (الشكل 1). في الذكور المخصي من كلا السلالتين ، كانت كمية CYP2A19 mRNA أعلى من تلك الموجودة في الذكور السليمة المقابلة. علاوة على ذلك ، أدى علاج TP للذكور المخصي والإناث السليمة من سلالتي الخنازير إلى انخفاض في كمية الرنا المرسال. زادت كميات CYP2B22 و CYP3A29 mRNAs في خنازير ميشان المخصية ، ولكن ليس في خنازير Landrace المخصية ، مقارنة مع الذكور السليمة المقابلة. نتج عن معالجة TP للذكور المخصي والإناث السليمة من سلالتي الخنازير انخفاض في كميات تلك الرنا المرسال ، على الرغم من عدم وجود تأثيرات كبيرة لـ TP على CYP2B22 mRNA في Meishan و CYP3A29 mRNA في خنازير Landrace المخصية لوحظت بسبب التداخل الكبير الفروق الفردية.

الجدول 1. الكميات النسبية من mRNAs للأشكال الإسوية CYP الكلوية في 5- شهر قديم من الخنازير Landrace و Meishan

الشكل 1. آثار الإخصاء و / أو إدارة TP على كميات CYP mRNAs في 5- كلى الخنزير البالغ من العمر شهرًا

تم حقن TP في العضل في {0} شهرًا مخصيًا من الذكور والأنثى السليمة من الخنازير Landrace و Meishan ، كما هو موضح في المواد والطرق. تم تحديد كمية كل CYP mRNA في الكلى بواسطة RT-PCR في الوقت الفعلي وتم تطبيعها مع RPL7 كمعيار داخلي. تم إنشاء المنحنيات القياسية باستخدام خليط RT- التفاعل مع إجمالي الحمض النووي الريبي من الكليتين من خنازير Landrace البالغة من العمر 5- شهرًا ، باستثناء تحديد كمية CYP2C49 mRNA ، حيث تم إنشاء منحنيات قياسية باستخدام خليط تفاعل RT بإجمالي الحمض النووي الريبي المأخوذ من كليتي خنازير ميشان البالغة من العمر 5- شهرًا. يمثل كل عمود متوسط ​​كل مجموعة تجريبية ، ويمثل كل شريط الانحراف المعياري (SD) للمتوسط ​​(n=6 للذكور والإناث من خنازير Landrace و Meishan السليمة ؛ n=3 للآخرين). أ ، ب تم تقييم فروق ذات دلالة إحصائية من ذكور الخنازير السليمة المقابلة بواسطة اختبار Tukey اللاحق: ap <0. {{2="" 0}="" 5،="" bp=""><0.01. c="" ،="" d="" اختلافات="" كبيرة="" عن="" الخنازير="" غير="" المعالجة="" tp="" المقابلة="" ،="" وفقًا="" لتقييم="" الطالب="" t-test:="" cp=""><0.05 ،="" dp=""><0.01. تشير="" المربعات="" في="" cyp2b22="" و="" cyp3a29="" إلى="" خنازير="" meishan="" و="" landrace="" ،="" على="" التوالي="" ،="" مع="">

انخفضت كمية CYP2C33 mRNA في خنازير Meishan المخصية ، ولكن ليس في خنازير Landrace المخصية ، مقارنة بالذكور المقابلة ، وأسفرت معاملة TP للذكور المخصي والإناث السليمة لكلا سلالتي الخنازير عن زيادة في كمية الرنا المرسال. في خنازير ميشان ، انخفضت أيضًا كمية CYP2C49 mRNA عن طريق الإخصاء ، وأدت معالجة TP للذكور المخصي والإناث السليمة إلى زيادة كميتها. لم يلاحظ أي آثار للإخصاء أو علاج TP في خنازير Landrace.

الشكل 2. آثار الإخصاء و / أو إعطاء TP على كميات CYP4A24 / 25 و CYP4B1 mRNAs في الكلى والكبد التي تبلغ من العمر 5- شهرًا من الخنازير

تم حقن TP في العضل في {{{1 0}}} شهرًا مخصيًا من الذكور والأنثى السليمة من الخنازير Landrace و Meishan ، كما هو موضح في المواد والطرق. تم تحديد كمية كل CYP mRNA في الكلى والكبد بواسطة RT-PCR في الوقت الفعلي وتم تطبيعها مع RPL7 كمعيار داخلي. تم إنشاء المنحنيات القياسية باستخدام خليط تفاعل RT مع إجمالي الحمض النووي الريبي من كليتي خنازير Landrace البالغة من العمر 5- شهرًا. يمثل كل عمود المتوسط ​​في كل مجموعة تجريبية ، ويمثل كل شريط SD للمتوسط ​​(n=6 لخنازير Landrace و Meishan من الذكور والإناث ؛ n=3 للآخرين). تم تقييم فروق ذات دلالة إحصائية عن ذكور الخنازير السليمة من خلال اختبار Tukey اللاحق: ap <0. 01.="" ب="" ،="" ج="" فروق="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" من="" الخنازير="" غير="" المعالجة="" tp="" المقابلة="" ،="" كما="" تم="" تقييمها="" بواسطة="" اختبار="" الطالب="" t:="" bp=""><0.05 ،="" cp=""><>

To date, there are no reports concerning the constitutive amounts of CYP4A24/25  and  CYP4B1 mRNAs and sex differences in their amounts in the pig liver, although a clear sex  difference  (male >أنثى) بكمية CYP4A24 / 25 mRNA لوحظ هنا في كلية الخنازير (الجدول 1). لذلك ، لتوضيح تأثيرات الأندروجين على تعبير الرنا المرسال في الكلى والكبد لكل من خنازير Landrace و Meishan ، قمنا بفحص ليس فقط آثار الإخصاء ولكن أيضًا آثار علاج TP للذكور المخصي والإناث السليمة ( الصورة 2). انخفضت كمية CYP4A24 / 25 mRNA في الكلى في كل من خنازير Landrace و Meishan عن طريق الإخصاء ، وأدت معاملة TP للذكور المخصي والإناث السليمة لكلا سلالتي الخنازير إلى زيادة كميتها. ومع ذلك ، في كبد كلا سلالتي الخنازير ، لم يلاحظ أي آثار للإخصاء ، ولم يلاحظ أي فرق بين الجنسين في كمية CYP4A24 / 25 mRNA. وبالمثل ، لم يلاحظ أي تأثير معنوي للعلاج بـ TP على كمية CYP4A24 / 25 mRNA الكبدي في كلا سلالتي الخنازير ، على الرغم من ملاحظة زيادة كميتها بواسطة علاج TP في الذكور المخصي من خنازير Landrace فقط. علاوة على ذلك ، أظهر CYP4B1 mRNA عدم وجود فرق بين الجنسين في كل من الكلى (الشكل 2 والجدول 1) والكبد لكل سلالة من الخنازير. في كلا سلالتي الخنازير ، لم تتغير كمية CYP4B1 mRNA بشكل ملحوظ عن طريق الإخصاء و / أو علاج TP (الشكل 2).

لقد وجدنا سابقًا أن علاج TP أدى إلى زيادة كمية CYP3A46 mRNA في كبد خنازير Landrace ..22) لذلك ، تم فحص تأثيرات علاج TP والإخصاء على كمية mRNA في الكلى باستخدام {{3} } خنازير Landrace عمرها شهر (الشكل 1). على الرغم من أن إخصاء الذكور لم يكن له تأثير معنوي على كمية CYP3A46 mRNA في الكلى ، إلا أن علاج TP للذكور المخصي والإناث السليمة أدى إلى انخفاض في كمية CYP3A46 mRNA. علاوة على ذلك ، كان CYP3A46 mRNA أقل من حد الكشف في كل من الكلى والكبد لجميع خنازير Meishan المعالجة بالإخصاء و / أو TP.22)

العوامل الجينية المسؤولة عن التعبير الجنسي عن CYP mRNAs

We have previously reported that sex-related expression of CYP mRNAs in the pig liver is, at least in part, dependent on the amount of serum testosterone,8) and  that  the  amount  is  determined  by  autosomal  dominant  inheritance.25) Therefore, using F1 progeny (LM and ML) of Landrace and Meishan pigs, the amounts of sex-related CYP mRNAs in the kidney were measured (Fig. 3). Incidentally, the amounts of serum testosterone in 5-month-old male LM and ML pigs, as well as Meishan pigs, were >40 نانوغرام / مل ، وتلك الموجودة في ذكور خنازير Landrace البالغة من العمر {{1} شهرًا كانت<23 ng>

In both LM and ML pigs, the mRNA amounts of CYP2A19, CYP2B22, and CYP3A29 in males were much lower than those in  females,  while  the  converse  was  observed  for  CYP2C33 and CYP4A24/25.  For CYP2C49 mRNA,  a  significant  sex  difference (males >الإناث) في خنازير ML ، ولكن لم يلاحظ أي اختلاف كبير في الخنازير ذات الحركة البطيئة بسبب الاختلافات الكبيرة بين الأفراد بين ذكور الخنازير LM. تم اكتشاف CYP3A46 mRNA في الخنازير LM و ML ، وكذلك الخنازير Landrace ، وفرق الجنس (الذكور< females)="" in="" the="" amount="" of="" cyp3a46 mrna was observed in lm and ml pigs ="">

الشكل 3. الفروق بين الجنسين في كمية CYP mRNAs في الكلى من 5- LM و ML Pigs

تم تحديد كمية mRNA لكل CYP في الكلى عن طريق RT-PCR في الوقت الفعلي وتم تطبيعها مع RPL7 كمعيار داخلي. تم إنشاء المنحنيات القياسية باستخدام خليط RT- التفاعل مع إجمالي الحمض النووي الريبي من كليتي خنازير Landrace البالغة من العمر 5- شهرًا ، باستثناء تحديد كمية CYP2C49 mRNA ، حيث تم إنشاء منحنيات قياسية باستخدام تفاعل RT المخلوط مع إجمالي الحمض النووي الريبي من كليتي خنازير ميشان البالغة من العمر 5- شهرًا. تُظهر كل دائرة خنزيرًا فرديًا (ن=6 و 9 ذكور وإناث خنازير LM ، على التوالي ؛ ن = 7 و 1 0 ذكور وإناث خنازير ML ، على التوالي). يشير الشريط إلى المتوسط ​​في كل مجموعة. أ ، ب تم تقييم فروق ذات دلالة إحصائية بين الذكور والإناث في كل سلالة من خلال اختبار الطالب t: ap <0. 05،="" bp=""><>

العلاقة بين كمية هرمون التستوستيرون في الدم والتعبير عن CYP mRNAs المرتبط بالجنس في الكلى

يُعتقد أن تركيز الأندروجين في الدم هو أحد العوامل الحاسمة التي تؤدي إلى اختلافات الجنس والتكاثر في كميات العديد من CYP mRNAs في كلية الخنازير. لذلك ، تم فحص العلاقة بين تركيز الأندروجين في الدم والتعبير المرتبط بالجنس لـ CYP mRNAs (CYP2A19 و CYP2B22 و CYP2C33 و CYP2C49 و CYP3A29 و CYP3A46 و CYP4A24 / 25) في الكلى باستخدام 1- ، { {17}} و 5- شهر من الخنازير. بعض الخنازير البالغة من العمر 1- شهرًا (غير ناضجة ،< 10 ng  testosterone/ml ="" serum) ="" were ="" treated ="" with ="" tp="" and="" used="" as="" samples="" for="" the="" present="" experiments.="" the="" concentrations="" of="" serum="" testosterone="" in="" the="" tp-treated="" pigs="" were ="" 28–59 ng/ml. ="" in ="" addition, ="" serum ="" testosterone ="" amount ="" increased="" in="" an="" age-dependent="" manner="" in="" males25) ="" but ="" not ="" in ="" females="" of="" all="" the="" pigs=""><7 ng  testosterone/ml ="" serum) ="" used. ="" therefore,="" as="" representative="" samples="" of="" females,="" 1-month-old="" and ="" 5-month-old ="" pigs ="" but ="" not ="" 3-month-old ="" pigs ="" were ="" used ="" for ="" the="" present="">

The mRNA amounts of CYP2A19, CYP2B22, CYP3A29, and CYP3A46 in all the pigs with high concentrations (>تقريبا. 30 نانوغرام / مل) من هرمون التستوستيرون في الدم كانت منخفضة مقارنة مع تلك الموجودة في جميع الخنازير ذات التركيزات المنخفضة من هرمون التستوستيرون في الدم (<30 ng l). ="" in ="" particular, ="" the ="" amount ="" of ="" cyp3a29="" mrna="" decreased="" in="" a="" serum="" testosterone="" concentration-dependent ="" manner ="" in ="" all ="" the ="" breeds ="" of ="" pig ="" examined ="" (fig. ="" 4). ="" furthermore,="" a="" serum="" testosterone="" concentration-dependent="" decrease="" in="" the="" amount="" of="" cyp3a46 mrna was also observed ="" in="" all="" the="" pigs="" except="" meishan="">

ومع ذلك ، زادت كميات CYP2C33 و CYP4A24 / 25 mRNAs بطريقة تعتمد على تركيز هرمون التستوستيرون في الدم في جميع سلالات الخنازير التي تم فحصها (الشكل 5). زادت كمية CYP2C49 mRNA بطريقة تعتمد على تركيز هرمون التستوستيرون في الخنازير Meishan و LM و ML ولكن ليس في خنازير Landrace. بالإضافة إلى ذلك ، لوحظت زيادة طفيفة في كمية CYP2C49 mRNA في خنازير Landrace و Meishan البالغة من العمر شهرًا والتي تمت معالجتها بـ TP 1-. يشير هذا إلى أن التعبير عن هذا التأثير المرتبط بـ TP يعتمد على مستوى التعبير عن عامل (عوامل) النسخ المستجيب لـ TP للتعبير الجيني CYP2C49 ، والذي يشارك في النضج.

نقاش

في الدراسة الحالية ، وجدنا في البداية اختلافات في الجنس والتكاثر في كميات العديد من CYP mRNAs في الكلى باستخدام خنازير Landrace و Meishan البالغة من العمر 5- شهرًا ، وذريتهم F1 (LM و ML). بعد ذلك ، لتوضيح تأثير الأندروجين على كميات CYP mRNAs الكلوية ، قمنا بفحص آثار الإخصاء و / أو علاج TP على هذه الكميات. تم تلخيص هذه النتائج في الجدول 2. من خلال تحليل الفروق بين الجنسين والسلالة فيما يتعلق بتركيز هرمون التستوستيرون في الدم ، أوضحنا هنا أن هرمون التستوستيرون في الدم هو على الأقل أحد العوامل الحاسمة التي تنتج هذه الاختلافات في كمية كل مرنا CYP في الكلى.

الشكل 4. الارتباطات السلبية بين تركيزات التستوستيرون في مصل الدم ومقدار CYP2A19 و CYP2B22 و CYP3A29 و CYP3A46 mRNAs في كلى الخنزير

تم قياس تركيزات هرمون التستوستيرون في الدم وكميات CYP mRNA كما هو موضح في المواد والطرق. تم أخذ بعض تركيزات هرمون التستوستيرون في الدم للخنازير الفردية من البيانات التي تم الحصول عليها مسبقًا .24 ، 25) يمثل كل رمز كل خنزير على حدة. المربعات والمعينات المفتوحة ، 1- ذكور وإناث بعمر شهر ، على التوالي ، من خنازير Landrace و Meishan (ن = 3 لكلا الجنسين من خنازير Landrace و Meishan) ؛ المربعات الرمادية ، 3- خنازير Landrace و Meishan البالغة من العمر شهرًا (ن=4 لخنازير Landrace و n = 6 لخنازير ميشان) ؛ المربعات والمعينات المغلقة ، 5- ذكور وإناث بعمر شهر واحد ، على التوالي ، من خنازير Landrace و Meishan (ن=6 لكلا الجنسين من خنازير Landrace و Meishan) ؛ المثلثات المغلقة والمفتوحة ، 5- ذكور وإناث الخنازير ذات الحركة الوهمية البالغة من العمر شهرًا ، على التوالي (ن=6 للذكور و ن=9 للإناث) ؛ مثلثات عكسية مغلقة ومفتوحة ، 5- ذكور وإناث خنازير ML بعمر شهر ، على التوالي (ن=7 للذكور و ن=10 للإناث) ؛ دوائر مغلقة ومفتوحة ، 1- ذكور وإناث من الخنازير Landrace و Meishan بعمر شهر تم التعامل مع TP ، على التوالي (n = 3 لكلا الجنسين من خنازير Landrace و Meishan). تم فحص الارتباطات باستخدام البيانات من جميع الحيوانات المختبرة والمحددة من خلال تحليل الانحدار ، حيث r هو معامل الارتباط.

وجدنا في السابق اختلافات بين الجنسين (ذكور< female)="" in="" the="" amounts="" of="" cyp1a1="" and="" cyp1a2="" mrnas="" in="" the="" liver="" of="" meishan, lm, and ml pigs but not in landrace pigs.23–25) however, ="" no ="" such ="" sex ="" differences were ="" observed in the ="" kidney ="" of landrace="" and="" meishan="" pigs.="" on="" the="" contrary,="" there="" was="" a="" sex="" difference="" (male="" >="" female)="" in="" the="" amount="" of="" cyp4a24/25="" mrna="" in ="" the ="" kidney ="" but ="" not ="" in ="" the ="" liver. ="" sex ="" differences ="" in ="" the ="" amounts="" of="" cyp2a19,="" cyp2c33,="" and="" cyp2c49="" mrnas="" in="" the="" pig="" kidney,="" especially="" in="" meishan,="" lm,="" and="" ml="" pigs,="" correlated="" with="" the="" previous="" results="" in="" the="">< female="" for="" cyp2a19;="" male="" >="" female="" for="" cyp2c33="" and="" cyp2c49.="" interestingly, ="" sex ="" differences ="">< female)="" in="" the="" amounts="" of="" cyp2b22,="" cyp3a29, and/or cyp3a46="" mrnas="" in="" the="" kidney="" of="" meishan,="" lm,="" and="" ml="" pigs="" were="" the="" opposite="" of="" that="" previously obtained in the liver.22) sex differences in the amount of ="" cyp2a19,="" cyp3a29,="" and="" cyp4a24/25 ="" mrnas ="" were ="" observed ="" in the kidney of all the breeds of pig examined. although ="" sex ="" differences ="" in cyp2b22,="" cyp2c33, ="" and/or cyp2c49 ="" were ="" observed in meishan, lm, ="" and ml ="" pigs, ="" no ="" such ="" sex ="" differences ="">

الجدول 2. ملخص الاختلافات في الجنس والتكاثر المعتمد على الأندروجين في التعبير الجيني للأشكال الإسوية CYP في كلية الخنزير

These  sex  and  breed  differences  can  be  explained  by  the  differences  in  the  concentration  of  serum  testosterone  in  male pigs. Male 5-month-old Meishan, LM, and ML pigs had high concentrations of serum testosterone (>تقريبا. 40 نانوغرام / مل) في حين أن خنازير Landrace لديها تركيزات منخفضة (<23 ng l). ="" because ="" the ="" amount ="" of ="" cyp2a19="" and="" cyp3a29 ="" mrnas ="" considerably ="" decreased ="" in ="" pigs ="" with ="">تقريبا. 20 نانوغرام / مل من هرمون التستوستيرون في الدم ، والاختلافات بين الجنسين (ذكور< female)  in ="" their ="" amounts ="" were ="" observed ="" in ="" all ="" the ="" breeds ="" of ="" pig. ="" likewise, ="" since ="" the ="" amount ="" of ="" cyp4a24/25="" mrna="" increased="" in="" a="" serum="" testosterone="" concentration-dependent manner up to 80 ng/ml, a sex difference (male =""> female) was observed in all the breeds of pig. However, because  clear changes in the amount of CYP2B22, CYP2C33, and CYP2C49 mRNAs occurred at >30 نانوغرام / مل من هرمون التستوستيرون في الدم ، لوحظت فروق بين الجنسين في كمياتها في خنازير Meishan و LM و ML ولكن ليس في خنازير Landrace. وفقًا لذلك ، يُعتقد أن هذه الاختلافات بين الجنسين والسلالة تعتمد على تلك الخاصة بتركيز هرمون التستوستيرون في الدم. يتم دعم هذه الفرضية بشكل أكبر من خلال التجارب التي تستخدم الخنازير المخصية و / أو المعالجة بـ TP. وهي كميات تلك الرنا المرسال في الذكور المخصي (<12 ng  testosterone/ml ="" in ="" serum) ="" were ="" almost ="" the="" same="" as="" the="" corresponding="" females.="" serum="" concentrations="" of="" testosterone="" in="" 5-month-old="" castrated="" males="" and="" intact="" females="" rose="" to="">100 نانوغرام / مل على علاج TP. وبالتالي ، في الخنازير المعالجة بـ TP ، زادت كميات CYP2C33 و CYP4A24 / 25 mRNAs و CYP2C33 و CYP4A24 / 25 mRNAs بقدر أو أعلى من تلك الموجودة في ذكور خنازير ميشان البالغة من العمر 5- شهرًا ، وكميات من انخفضت mRNAs CYP2B22 و CYP3A29 و CYP3A46 بقدر تلك الموجودة في ذكور الخنازير المقابلة.

يُعتقد أن الاختلاف في ملف إفراز هرمون النمو (GH) بين الذكور والإناث في العديد من الحيوانات ، وخاصة في القوارض ، يؤدي إلى اختلافات بين الجنسين في كميات العديد من إنزيمات استقلاب الأدوية ، بما في ذلك CYPs ، في الكبد. على سبيل المثال ، تتأثر الفروق بين الجنسين في كميات الرنا المرسال للأشكال الإسوية Ugh و Sult و Cyp4a في كبد الفأر بإفراز هرمون النمو الذكري و / أو الأندروجين ، في حين يتم تنظيم هذه الفروق بين الجنسين بشكل أساسي بواسطة الأندروجين في الكلى. ، 28) علاوة على ذلك ، يُقترح موضع المعاملات ، المسمى بالقمع المعتمد على GH (GDR) ، لتنظيم الجين الخاص بالستيرويد الخاص بالأنثى 15 - هيدروكسيلاز (Cyp2a4) في كبد الفأر ، 29) ولكن تم الإبلاغ عن هذا الجين يتم تنظيمها بشكل متبادل بواسطة الأندروجين في الكبد والكلى عند ذكور الفئران. العديد من الأشكال الإسوية CYP و SULT و UGT التي تظهر فروقًا بين الجنسين في خنازير ميشان. ومع ذلك ، نظرًا لتعديل ملف إفراز هرمون النمو بواسطة الأندروجين ، 33-35) احتمال حدوث التغييرات في كميات الرنا المرسال التي لوحظت عند الإخصاء و / أو إعطاء TP ، على الأقل جزئيًا ، من خلال تغيير الأندروجين في GH لا يمكن استبعاد نمط الإفراز.

Breed  differences  in  amounts  of  the  mRNAs  of  CYP1A1, CYP1A2, CYP2A19, CYP2B22, and CYP4B1  between  sex-matched  Landrace  and  Meishan  pigs  were  also  observed  in  the  kidney  (Table  1),  while  no  such  clear  breed  differences  were  observed  in  the  liver.22,25) Additionally, as for CYP2C49 mRNA,  individual  differences  in  each  breed  of  pig  were  observed  regardless  of  serum  testosterone  concentration,  suggesting that these varieties have genetic diversity. Incidentally, pig  breeds  are  not  genetically  homogeneous.  Interestingly,  CYP3A46 mRNA was  clearly  detected in  both the  kidney  and  the liver of Landrace pigs but was below the detection limit in  both organs of Meishan pigs.22) Furthermore, CYP3A46 mRNA was  clearly  detected  in  both  the  kidney  and  the  liver  of  LM  and ML pigs, indicating that expression of CYP3A46 mRNA, as well as serum testosterone,25)  is  determined  by  autosomal  dominant inheritance. Because 5-month-old male LM and ML pigs, but not Landrace pigs, had high concentrations of serum  testosterone (>40 نانوغرام / مل) ، لوحظ اختلاف بين الجنسين في كمية CYP3A46 mRNA في الخنازير LM و ML ولكن ليس في خنازير Landrace. تشير هذه النتائج بقوة إلى أن العوامل الوراثية (السلالة) والعوامل الانتقائية للأنسجة ، جنبًا إلى جنب مع هرمون التستوستيرون في الدم ، تشارك في مستويات التعبير المرتبطة بالجنس والسلالة للعديد من جينات CYP. لسوء الحظ ، لا تزال هذه العوامل غير واضحة.

في الختام ، نوضح هنا أن هناك اختلافات في الجنس والسلالة في كميات mRNA من الأشكال الإسوية لعائلة CYP2 و CYP3 و CYP4 في كلية الخنازير ، ونقترح بشدة أن هذه الاختلافات تعتمد على عوامل المضيف الجيني ، بما في ذلك تركيز الأندروجين في الدم. . علاوة على ذلك ، نظهر اختلافات الأنسجة بين الكلى والكبد في الجنس / التعبير المرتبط بالأندروجين لجينات CYP ونقترح بشدة أن هناك عاملًا انتقائيًا للأنسجة مسؤول عن التعبير المرتبط بالأندروجين عن جينات CYP. مطلوب بحث لتحديد عامل المضيف الجيني المرتبط بالجنس والعامل الانتقائي للأنسجة المسؤول عن تنظيم جينات CYP في المستقبل. على أي حال ، نظرًا لأن الأندروجين هو أحد العوامل المضيفة التي تحدد مستويات التعبير للعديد من CYPs المسؤولة عن استقلاب الدواء ، فإن قياس تركيز هرمون التستوستيرون في الدم يُعتبر أنه يساهم في تطوير العلاج الدوائي الفردي المناسب.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل جزئيًا من خلال منحة مساعدة للبحث العلمي من الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (رقم 19K06463 ، MK). يشكر المؤلفون وحدة عمليات Tsukuba 7 ، مركز الدعم الفني للمنطقة الوسطى ، NARO ، Tsukuba ، اليابان لرعاية الحيوانات وجمع الأنسجة.

المراجع

1) Almazroo OA، Miah MK، Venkataramanan R. التمثيل الغذائي للدواء في الكبد. كلين. ديس الكبد ، 21 ، 1-20 (2017).

2) Nebert DW، Wikvall K، Miller WL. السيتوكرومات البشرية P450 في الصحة والمرض. فيلوس. عبر. R. Soc. لوند. ب بيول. علوم ، 368 ، 20120431 (2013).

3) Burkina V ، Rasmussen MK ، Pilipenko N ، Zamaratskaia G. مقارنة بين الكائنات الحية الدقيقة في التمثيل الغذائي للإنسان ، والخنازير ، والقوارض ، والسيتوكروم P450. علم السموم ، 375 ، 10-27 (2017).

4) Nielsen SD ، Bauhaus Y ، Zamaratskaia G ، Junqueira MA ، Blaabjreg K ، Petrat-Melin B ، Young JF ، Rasmussen MK. التعبير التأسيسي ونشاط السيتوكروم P450 في الخنازير التقليدية. الدقة. دكتور بيطري. علوم ، 111 ، 75-80 (2017).

5) Puccinelli E ، Gervasi PG ، Longo V. الاستقلاب Xenobitotic السيتوكروم P450 في الخنزير ، نموذج حيواني واعد. بالعملة. Metab Metab. ، 12 ، 507-525 (2011).

6) Schelstraete W ، Clerck LD ، Govaert E ، Millecam J ، Devreese M ، Deforce D ، Bocxlaer JV ، Croubels S. توصيف CYP450 للكبد والأمعاء: مقارنة مع أخصائي تقويم العظام البشري من منظور الكم والنشاط والانتقائية علوم. مندوب ، 9 ، 9233 (2019).

7) سكانيلد إم تي. سيتوكروم الخنازير P450 والتمثيل الغذائي. بالعملة. فارم. ديس ، 12 ، 1421-1427 (2006).

8) كوجيما م.اختلافات الجنس والتكاثر في التعبير الجيني التأسيسي لإنزيمات استقلاب الأدوية الكبدية في خنازير ميشان ولاندريس: الاختلافات التي تتم بوساطة التستوستيرون. JPn. الزراعية. الدقة. س ، 54 ، 7-12 (2020).

9) Bajaj P ، Chowdhury SK ، Yucha R ، Kelly EJ ، Xiao G. نماذج الكلى الناشئة لفحص التمثيل الغذائي ، النقل ، وسمية الأدوية والمواد الغريبة الحيوية. ميتاب المخدرات. التخلص ، 46 ، 1692-1702 (2018).

10) Knights KM ، Rowland A ، Miners JO. استقلاب الدواء الكلوي في البشر: احتمالية التفاعلات الدوائية التي تشمل السيتوكروم P450 (CYP) و UDP-glucuronosyltransferase (UGT). Br. J. كلين. فارماكول ، 76 ، 587-602 (2013).

11) Kojima M، Morozumi T. استنساخ ستة cDNAs كاملة الطول ترميز إنزيمات السيتوكروم P450 الخنازير والتعبير الجيني لهذه الإنزيمات في الكبد والكلى. علوم الصحة ، 50 ، 518-529 (2004).

12) Lundell K. الاستنساخ والتعبير عن كبد خنزير جديد وهيدروكسيلازات الأحماض الدهنية الكلوية [السيتوكروم P450 (CYP) 4A24 و CYP4A25]. بيوتشيم. J.، 363، 297–303 (2002).

13) Nannelli A، Chirulli V، Longo V، Gervasi PG. التعبير والتحريض بواسطة ريفامبيسين لـ CYP2B و CYP3A الخاضعين للتنظيم CAR- و PXR في الكبد والكلى والمسالك الهوائية للخنزير. علم السموم ، 252 ، 105-112 (2008).

14) Puccinelli E و Gervasi PG و La Marca M و Buffy P و Longo V. Xenobiotica ، 40 ، 525-535 (2010).

15) Shang H ، Guo K ، Liu Y ، Yang J ، Wei H. التعبير التأسيسي لـ CYP3A mRNA في أنسجة خنزير Bama المصغرة. جين ، 524 ، 261-267 (2013).

16) Imaoka S، Hiroi T، Tamura Y، Yamazaki H، Shimada T، Komori M، Degawa M، Funai Y. التنشيط المطوّر لـ 3- methoxy -4- amino azobenzene بواسطة سيتوكروم الفأر الكلوي P450 CYP4B1: الاستنساخ وتوصيف الماوس CYP4B1. قوس. بيوتشيم. Biophys. ، 321 ، 255-262 (1995).

17) جارار واي بي ، لي إس جيه. الوظيفة الجزيئية لتعدد الأشكال الجينية السيتوكروم P 450 4 (CYP4) وآثارها السريرية. كثافة العمليات J. مول. علوم ، 20 ، 4274 (2019).

18) Hiratsuka M و Matsuura T و Watanabe E و Sato M و Suzuki Y. الفروق بين الجنسين في المستوى التأسيسي لأنشطة هيدروكسيلاز حمض اللوريك الكلوي والبروتينات المرتبطة بـ CYP4A في الفئران. بيول. فارم. الثور ، 19 ، 512-517 (1996).

19) Degawa M ، Miura S ، Hashimoto Y. السيتوكروم الكلوي الميكروسومي المعتمد على الأندروجين -450 المسؤول عن N-hydroxylation والتفعيل الطفري لـ 3- methoxy -4- amino azobenzene في BALB / c الفأر. الدقة السرطان. ، 50 ، 2729-2733 (1990).

20) Isern J ، Meseguer A. التنظيم والتوصيف الهرموني للماوس Cyp4b1 الجين 5′ المنطقة المحيطة. بيوتشيم. بيوفيز. الدقة. كومون ، 307 ، 139-147 (2003).

21) Zhang Y، Klaassen CD. التنظيم الهرموني للأشكال الإسوية Cyp4a في كبد الفئران والكلى. Xenobiotica ، 43 ، 1055-1063 (2013).

22) Kojima M ، Degawa M. الاختلافات بين الجنسين في مستويات مرنا التأسيسية لـ CYP2B22 و CYP2C33 و CYP2C49 و CYP3A22 و CYP3A29 و CYP3A46 في كبد الخنزير: مقارنة بين خنازير Meishan و Landrace. ميتاب المخدرات. حركية الدواء ، 31 ، 185-192 (2016).

23) Kojima M ، Sekimoto M ، Degawa M. اختلاف جديد مرتبط بالجنس في التعبير التأسيسي لأنزيمات السيتوكروم الكبدي P4501A في خنازير ميشان. بيوتشيم. فارماكول ، 75 ، 1076-1082 (2008).

24) كوجيما إم ، سيكيموتو إم ، ديغاوا إم.التنظيم الناقص بوساطة الأندروجين لجينات الفصيلة الفرعية CYP1A في كبد الخنزير. J. Endocrinol.، 207، 203–211 (2010).

25) Kojima M، Degawa M. يتم تحديد مستوى الأندروجين في الدم عن طريق الوراثة الجسدية السائدة وينظم جينات CYP المرتبطة بالجنس في الخنازير. بيوتشيم. بيوفيز. الدقة. كومون ، 430 ، 833-838 (2013).

26) واكسمان دي جي ، هولواي إم جي. الفروق بين الجنسين في التعبير عن إنزيمات التمثيل الغذائي للكبد. مول. فارماكول ، 76 ، 215-228 (2009).

27) باكلي دي بي ، قرص كلاسن. آلية تعبير UDP glucuronosyltransferase mRNA المتباين بين الجنسين في كبد الفأر والكلى. ميتاب المخدرات. التخلص ، 37 ، 834-840 (2009).

28) النوتي واي ، قرص كلاسن. آليات التنظيم الخاص بنوع الجنس من الكبريتات في الفئران (Sults). Xenobiotica ، 41 ، 187-197 (2011).

29) عايدة ك ، نيجيشي م. ينظم موضع ذو مفعول تحويل القمع النسخي لجين الستيرويد 15 - هيدروكسيلاز الخاص بالإناث في ذكور الفئران. J. مول. إندوكرينول ، 11 ، 213-222 (1993).

30) Squires EJ ، Negishi M. التنظيم المتبادل للقمع المعتمد على الجنس لهرمون التستوستيرون 15 - هيدروكسيلاز (P -45015) في كبد وكلى ذكور الفئران بواسطة الأندروجين. دليل على جين واحد. J. بيول. كيم ، 263 ، 4166-4171 (1988).

31) Arbona JR، Marple DN، Russell RW، Rahe CH، Mulvaney DR، Sartin JL. الأنماط الإفرازية ومعدل التصفية الأيضية لهرمون نمو الخنازير في الخنازير المختارة للنمو. J. انيم. علوم ، 66 ، 3068-3072 (1988).

32) كوجيما إم ، ديغاوا م. الفروق بين الجنسين في التعبير الجيني التأسيسي لسلفوترانسفيرازات و UDP-glucuronosyltransferases في كبد الخنزير: التنظيم بوساطة الأندروجين. ميتاب المخدرات. حركية الدواء ، 29 ، 192-197 (2014).

33) Chowen JA، Frago LM، Argente J. تنظيم إفراز هرمون النمو بواسطة المنشطات الجنسية. يورو. J. Endocrinol.، 151 (Suppl. 3)، U95 – U100 (2004).

34) Dubreuil P، Pelletier P، Couture Y، Lapierre H، Petitclerc D، Moris set J، Gaudreau P، Brazeau P. تأثيرات الإخصاء والتستوستيرون على إفراز هرمون النمو الداخلي المنشأ والناجم عن السوماتوكرينين في ذكور الخنازير السليمة والمخصية. دومست. الرسوم المتحركة. إندوكرينول ، 6 ، 15-24 (1989).

35) جوستينا أ ، فيلدويس دينار. الفيزيولوجيا المرضية للتنظيم العصبي لإفراز هرمون النمو في حيوانات التجارب والبشر. إندوكر. القس ، 19 ، 717-797 (1998).