يعتمد التأثير المضاد للشيخوخة لبولي ببتيد قرن الوعل المخملي على تعديل ميكروبيوتا الأمعاء وتنظيم مسار PPAR / APOE4 الجزء 1

لقد بحثنا في التأثيرات المضادة للشيخوخة لعديد ببتيد قرن الوعل المخملي على الفئران التي يسببها D-galactose (D-gal). تم إنشاء الفئران الشيخوخة التي يسببها D-gal وتم تقسيمها بشكل عشوائي إلى خمس مجموعات ، مجموعة التحكم ، والنموذج ، وفيتامين E (VE) ، والجرعة المنخفضة من عديد الببتيد المخملي ، ومجموعة جرعات عالية من عديد الببتيد الوعل المخملية. تم استخدام اختبار Morris Water Maze لتقييم قدرات التعلم والذاكرة للفئران المسنة. لوحظت الخلايا العصبية الحُصَينية عن طريق تلطيخ الهيماتوكسيلين إيوزين والمجهر الإلكتروني النافذ. تم استخدام الطرق البيوكيميائية لاكتشاف نشاط سوبروكسيد ديسموتاز ، مالونالديهيد ، وأنزيمات أخرى وتقييم تأثير بولي ببتيد قرن الوعل المخملي على قدرة مضادات الأكسدة للفئران المسنة. باستخدام تسلسل الجينات 16S rRNA وتكنولوجيا meristem ، قمنا بتقييم تأثير بولي ببتيد قرن الوعل المخملي على الفلورا المعوية للفئران واستقلاب الأحماض الدهنية. أظهرت النتائج التجريبية أن بولي ببتيد قرن الوعل المخملي يمكن أن يحسن بشكل كبير من التعلم والقدرات المعرفية للفئران المسنة ، ويزيد من نشاط ديسموتاز الفائق ، الجلوتاثيون بيروكسيديز ، والكتلاز في المصل لتقليل محتوى مالونالديهيد. أظهر التحليل الإيكولوجي الدقيق المعوي أن بولي ببتيد قرن الوعل المخملي يمكن أن يزيد بشكل كبير من وفرة الجنس البكتيري النافع Lactobacillus. أظهر تحليل اللطخة الغربية أيضًا أن بولي ببتيد قرن الوعل المخملي يمكن أن يعزز استقلاب الأحماض الدهنية عن طريق تنشيط مستقبل البيروكسيسوم المنشط (PPAR) وتنظيم التعبير عن إنزيمات كارنيتين - بالميتويل ترانسفيراز -1 A وأكسيداز أسيل- CoA 1 أثناء تقليل التنظيم من صميم البروتين الشحمي E4 (APOE4) ، وبالتالي تقليل تراكم الأحماض الدهنية وزيادة إنتاج الأدينوزين ثلاثي الفوسفات (ATP). لذلك ، فإن بولي ببتيد قرن الوعل المخملي يحسن البيئة الدقيقة المعوية وينشط مسار PPAR / APOE4 لتنظيم استقلاب الأحماض الدهنية.

يمكن أن يزيد الجليكوزيد من cistanche أيضًا من نشاط SOD في أنسجة القلب والكبد ، ويقلل بشكل كبير من محتوى lipofuscin و MDA في كل نسيج ، ويزيل بشكل فعال العديد من جذور الأكسجين التفاعلية (OH- ، H₂O₂ ، إلخ) والحماية من تلف الحمض النووي الناتج عن ذلك. بواسطة OH- الجذور. جليكوسيدات Cistanche phenylethanoid لديها قدرة قوية على إزالة الجذور الحرة ، وقدرة تخفيض أعلى من فيتامين C ، وتحسن نشاط SOD في تعليق الحيوانات المنوية ، وتقليل محتوى MDA ، ولها تأثير وقائي معين على وظيفة غشاء الحيوانات المنوية. يمكن أن يعزز عديد السكاريد القارص نشاط SOD و GSH-Px في كريات الدم الحمراء وأنسجة الرئة للفئران المسنة تجريبياً الناتجة عن D-galactose ، وكذلك تقليل محتوى MDA والكولاجين في الرئة والبلازما ، وزيادة محتوى الإيلاستين ، تأثير الكسح الجيد على DPPH ، وإطالة وقت نقص الأكسجة في الفئران الشائخة ، وتحسين نشاط SOD في مصل الدم ، وتأخير التنكس الفسيولوجي للرئة في الفئران الشائخة تجريبياً مع التنكس المورفولوجي الخلوي ، أظهرت التجارب أن Cistanche لديه قدرة جيدة على مضادات الأكسدة وله القدرة على أن يكون دواءً لمنع وعلاج أمراض شيخوخة الجلد. في الوقت نفسه ، يتمتع إشنكوسايد في Cistanche بقدرة كبيرة على البحث عن الجذور الحرة لـ DPPH ولديه القدرة على البحث عن أنواع الأكسجين التفاعلية ومنع تدهور الكولاجين الناجم عن الجذور الحرة ، وله أيضًا تأثير إصلاح جيد على تلف أنيون الثايمين الجذور الحرة.

انقر فوق Cong Rong Cistanche

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】

الكلمات الدالة

بولي ببتيد قرن الوعل المخملي ؛ د- الجالاكتوز. شيخوخة؛ علم الأحياء الدقيقة المعوية. تعلُّم؛ الضعف الادراكي؛ مسار PPAR / APOE4 ؛ ميكروبيوتا

1 المقدمة

يمثل عديد ببتيد قرن الوعل المخملي (VAP) 50-60 بالمائة من الوزن الرطب للقرن المخملي وهو أحد مكوناته الأساسية النشطة [1]. VAP غني بالبروتينات ، والأحماض الأمينية ، والفوسفوليبيدات ، والكوليسترول ، وأيونات الكالسيوم ، ويمارس العديد من التأثيرات المعززة للصحة ، مع مضادات الأكسدة [2] ، ومقاومة هشاشة العظام [3] ، وتنظيم المناعة [4] وقد تم الإبلاغ عن تأثيرات. لفهم دور VAP بشكل أفضل في الوقاية من الأمراض التنكسية العصبية وعلاجها ، أكدت الأبحاث السابقة التي أجراها فريق البحث لدينا أيضًا أن VAP يمكن أن يقلل من مستويات مستقبلات القشرانيات السكرية ومستقبلات القشرانيات المعدنية وهرمون إطلاق الكورتيكوتروبين. كما لوحظت آثار VAP على محور المهاد - الغدة النخامية - الكظرية وقدرته على تثبيط موت الخلايا المبرمج للخلايا العصبية [5].

شيخوخة الدماغ هي عملية فسيولوجية طبيعية تتميز بالإجهاد التأكسدي (OS) ، وتراكم جزيئات الضرر التأكسدي ، والتغيرات في بنية ووظيفة الخلايا العصبية ، مما يؤدي في النهاية إلى التدهور المعرفي وفقدان الذاكرة [6]. من بين هذه العوامل ، يعتبر نظام التشغيل السبب الرئيسي للأمراض التنكسية العصبية المرتبطة بالشيخوخة [7]. عندما يتعرض الجسم لمؤثرات ضارة ، يحدث خلل بين توليد وإزالة الجذور الحرة ، مما يؤدي إلى زيادة الجذور الحرة إلى مستوى يتجاوز قدرة الجسم المضادة للأكسدة. والجدير بالذكر أن الجذور الحرة المفرطة سامة للخلايا ، وتسبب ضررًا مباشرًا للجهاز العصبي المركزي [8 ، 9]. يمثل الدماغ البشري 2-3 في المائة فقط من وزن جسم الإنسان. ومع ذلك ، فإن الجهاز العصبي المركزي (CNS) يمثل 20 في المائة من إجمالي إمدادات الأكسجين لجسم الإنسان. لذلك ، فإن محتوى الجذور العصبية الحرة في الجهاز العصبي المركزي كبير ، مما يمثل خطرًا كبيرًا على نظام التشغيل [10].

تضم ميكروبات الأمعاء البشرية ، التي تضم أكثر من 100 نوع ، 10- أضعاف البكتيريا أكثر من الخلايا البشرية [11]. تعتبر المواد الصلبة هي أكثر الأنواع وفرة في الكائنات الحية الدقيقة في الأمعاء البشرية ، حيث تمثل 60 في المائة من إجمالي البكتيريا ، تليها البكتيريا (15 في المائة) والمكونات الأخرى التي تمثل نسبة صغيرة. تكون جراثيم الأمعاء في حالة توازن ديناميكي مع جسم الإنسان ، وللميكروبات المعوية دور مهم في التمثيل الغذائي للإنسان ، ووظيفة الغدد الصماء ، وتنظيم المناعة. لذلك ، عند اضطراب بنية ميكروبيوتا الأمعاء ، قد تحدث أمراض التنكس العصبي وأمراض القلب والأوعية الدموية والسمنة [12]. يمكن أن تؤثر التغييرات في كمية وتنوع الكائنات الحية الدقيقة المعوية أيضًا على الجهاز العصبي المعوي والمركزي. تُعرف هذه التفاعلات بمحور الجراثيم - الأمعاء - الدماغ ، وهو مهم لوظيفة الجسم [13 ، 14]. على الرغم من أن التغييرات في ملامح ميكروبيوتا الأمعاء لا تؤثر بالضرورة على الصحة ، فإن فقدان التنوع في الجراثيم الأساسية يرتبط بانخفاض الوظيفة الإدراكية والذاكرة [15]. في الواقع ، مع تقدم العمر ، تتميز التغيرات في النباتات البكتيرية في المقام الأول بانخفاض التنوع ، والبروبيوتيك ، واللاهوائية الاختيارية ، ومجموع الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة [16].

على الرغم من أن العديد من الدراسات قد أكدت أن مضادات الأكسدة والتأثيرات المضادة للشيخوخة المرتبطة بـ VAP تخفف من الشيخوخة ، إلا أن الآلية الدقيقة الكامنة وراء هذا النشاط ظلت غير واضحة. لذلك ، في العمل الحالي ، تم تقييم التأثير المضاد للشيخوخة لـ VAP في الجسم الحي في الفئران عن طريق اختبار متاهة موريس المائية (MWM) ، والتحليل الكيميائي الحيوي ، وتلطيخ الهيماتوكسيلين إيوزين (H&E) ، والمجهر الإلكتروني للإرسال (TEM). علاوة على ذلك ، قمنا بتقييم التغييرات في علم الأحياء الدقيقة المعوي في نماذج الفئران المسنة التي تم علاجها باستخدام VAP باستخدام تقنية تسلسل الجينات 16S ribosomal RNA (rRNA). كان هدفنا هو توضيح آلية نشاط VAP في سياق الشيخوخة وتوفير أساس نظري لتطوير مناهج علاجية جديدة لمكافحة الشيخوخة.

2. المواد والأساليب

2.1 المواد التجريبية

VAP was provided by the Molecular Pharmacology Laboratory, Changchun University of Chinese Medicine. Dgalactose (D-gal) and VE (purity >90 بالمائة) من Shanghai Yuanye Biotechnology Co.، Ltd. (شنغهاي ، الصين). تم شراء مجموعات ديسموتاز الأكسيد الفائق التجارية (SOD) ، مالونالديهيد (MDA) ، الكاتلاز (CAT) ، وجلوتاثيون بيروكسيديز (GSH-Px) من شركة Nanjing Jiancheng Technology Co.، Ltd. (نانجينغ ، الصين). كانت جميع المواد الكيميائية والكواشف من الدرجة التحليلية.

تم شراء نظام تتبع وتحليل الفيديو لمتاهة موريس المائية (MWM) من شركة Chengdu Taimeng Technology Co.، Ltd. (تشنغدو ، الصين). تم شراء مجهر إلكتروني ناقل من شركة Tecnai Corporation (هيلزبورو ، أوريغون ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم توفير منصة التسلسل عالي الإنتاجية (MiSeq PE300) بواسطة شركة Illumina (سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية).

2.2 التجارب على الحيوانات

تم شراء ستين فأرًا صحيًا من الفئران (درجة عامل الحماية من الشمس ، نصف ذكر ونصف أنثى ، وزنها 22-26 جم) من شركة Changchun Yisi Laboratory Animal Technology Co.، Ltd. (رقم الشهادة SCXK (Ji) -2018-0007). تمت تربية الفئران في أقفاص منفصلة تحت 12 ساعة من دورات الضوء / الظلام ودرجة حرارة قياسية (22 ± 2 درجة مئوية) ، مع توفير الطعام والماء بالشهرة الإعلانية. تم تكييف جميع الفئران مع هذه الظروف لمدة أسبوع واحد على الأقل قبل بدء التجارب. تم تقسيم جميع الفئران إلى خمس مجموعات ، مجموعة التحكم ، النموذج ، فيتامين E (VE) ، جرعة منخفضة من VAP (VAP1) ، ومجموعات VAP عالية الجرعة (VAP2). تم إعطاء مجموعات VE و VAP1 و VAP2 VE (100 مجم / كجم) و VAP (200 مجم / كجم) و VAP (400 مجم / كجم) على التوالي لمدة 10 أيام ، بينما تلقت مجموعات التحكم والنموذج الماء المقطر (نفس الحجم وعبر نفس الطريق داخل المعدة). ابتداء من اليوم الحادي عشر ، تم حقن المجموعة الضابطة تحت الجلد بمحلول ملحي عادي. تم حقن D-gal (1000 مجم / كجم) تحت الجلد في مؤخرة عنق الفئران في المجموعات الأخرى ، واستمرت إدارة النموذج لمدة 60 يومًا.

2.3 متاهة موريس المائية

تم إجراء اختبار MWM بعد ساعة واحدة من إدارة D-gal في اليوم 57. باختصار ، تم وضع منصة في منتصف متاهة الماء. تمت إضافة الماء إلى المنصة حتى تجاوزت 1 سم وتم الحفاظ عليها عند 25 درجة مئوية تقريبًا. تم تدريب الفئران بشكل مستمر لمدة أسبوع واحد ، وتم إجراء اختبار MWM رسميًا وفقًا لإجراء التشغيل القياسي لمتاهة الماء. قبل البدء الرسمي للتجربة ، تمت إضافة ثاني أكسيد التيتانيوم إلى الماء حتى لا تتمكن الفئران من إدراك الموقع المحدد للمنصة. تم صبغ رؤوس الفئران باللون الأصفر لتتبع وجمع البيانات. سجل برنامج تحليل تتبع الفيديو لمتاهة موريس المائية مسار السباحة للفئران ، ونسبة وقت الإقامة في الحلقة الوسطى ، والنسبة المئوية لمسافة حركة الحلقة الوسطى.

2.4 تلطيخ H&E

تم إصلاح أدمغة الفئران بالكامل في محلول بارافورمالدهيد بنسبة 4 في المائة وتم تضمينها في البارافين. بعد 24 ساعة ، تم تقطيع أنسجة المخ ، وإزالة الكافيين منها ، وترطيبها ، وتلطيخها بـ H&E. ثم تمت ملاحظة المقاطع تحت المجهر الضوئي لتسجيل التغيرات المرضية.

2.5 البند

بعد التروية ، تم قطع أنسجة الحصين ، وتثبيتها بنسبة 2 في المائة من بارافورمالدهيد و 2.5 في المائة من محلول فوسفات الجلوتارالدهيد ، وتجفيفها باستخدام تدرج كحول ، وتنظيفها باستخدام إيثوكسي بروبان ، ومضمنة ، وشرائح ، وملطخة بخلات اليورانيل وسيترات الرصاص. لوحظت البنية التحتية للخلايا العصبية في الحُصين تحت المجهر الإلكتروني النافذ.

2.6 التحليلات البيوكيميائية

تم جمع عينات دم الفأر وطردها عند 3000 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية ، وبعد ذلك تم جمع المادة الطافية. تم تنفيذ كل من محتوى مصل MDA و SOD و GSH-Px و CAT من خلال تعليمات المجموعة.

2.7 التنميط الجراثيم لعينات البراز

تم استخراج الحمض النووي الكلي من عينات البراز واستخدم كقالب لتضخيم PCR المنطقة V3-V4 من الجين البكتيري 16S rRNA. يتم إيداع مجموعة البيانات الأولية في NCBI BioProject PRJNA731623 ضمن أرقام الدخول BioSample SAMN19291644 إلى SAMN19291668. تم تحليل منتجات PCR كميًا ، وتم إجراء التسلسل الجيني 16S rRNA باستخدام منصة Illumina MiSeq (Illumina ، سان دييغو ، الولايات المتحدة الأمريكية). تستند البيانات الأولية إلى الحد الأدنى لطول التداخل البالغ 1 0 نقطة أساس ، بحد أقصى مسموح به لنسبة عدم التطابق في منطقة التداخل وهي 0.2 (افتراضي). تم تقطيع قراءات كل عينة ، وتم ترشيح العلامات بأطوال أقل من 75 بالمائة من طول العلامة بعد تصفية مراقبة الجودة. تمت إزالة الكيميرا (أي ، إذا كان للوالدين تسلسل أكثر من 80 بالمائة مشابهًا لتسلسل الاستعلام ، فسيتم الحكم على الاستعلام على أنه وهم) للحصول على تسلسلات علامات عالية الجودة. تم استخدام برامج البحث (سونوما ، الولايات المتحدة الأمريكية) [17] لتجميع العلامات عند مستوى تشابه 97 بالمائة ، وتصنيف وحدات التصنيف التشغيلية (OTUs) ، والحصول على تصنيف الأنواع بناءً على تكوين تسلسل OTU ، وتمديد عينة الرسم [18] ومنحنيات مؤشر شانون . تم استخدام PICRUSt (Halifax ، CAN) [19] لتحديد التركيب الجيني الوظيفي لكل عينة عن طريق مقارنة معلومات تكوين الأنواع وفقًا لنتائج تسلسل الجين 16S rRNA. بهذه الطريقة ، يمكن تحديد الاختلافات الوظيفية بين العينات أو المجموعات المختلفة. تم الحصول على الوفرة والمسارات ومعلومات EC ووفرة OTU في سياق كل فئة وظيفية باستخدام قاعدة بيانات موسوعة كيوتو للجينات والجينوم [20].

2.8 النشاف الغربي

تم استخلاص البروتين الكلي من أنسجة المخ ، واستخدمت طريقة كوماسي الزرقاء الرائعة لتقييم تركيز البروتين. بعد ذلك ، بعد الرحلان الكهربائي SDS-PAGE ، انتقلت البروتينات إلى الغشاء ، والذي تم تحضينه بعد ذلك بأجسام مضادة أولية ضد البروتينات المستهدفة صميم البروتين الشحمي E (APOE4) ، أسيل- CoA أوكسيديز 1 (ACOX1) ، مستقبلات منشط البيروكسيسوم (PPAR) ، كارنيتين - بالميتويل ترانسفيراز -1 أ (CPT1A) ، و {9} فوسفات ديهيدروجينيز (GAPDH) بين عشية وضحاها عند 4 درجات مئوية. بعد ذلك ، تم غسل الغشاء ثم تحضينه بجسم مضاد ثانوي عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. بعد غسل الغشاء بمحلول ملحي Tris-buffered و Tween 20 (TBST) ، تمت إضافة محلول كيميائي محسن (ECL). يستخدم نظام التصوير الهلامي الأوتوماتيكي بالكامل (Aplegen ، Pleasanton ، الولايات المتحدة الأمريكية) لمسح التصوير الفوتوغرافي.

2.9 الكشف عن مستويات الأحماض الدهنية الحرة (FFA) في أنسجة المخ

تم جمع أنسجة دماغ الفأر ، وأضيفت كمية مناسبة من المحلول الملحي الطبيعي. بعد ذلك ، تم طرد العينات عند 4 درجات مئوية عند 3000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ، وتم جمع المواد الطافية. تم تحديد مستويات FFA في أنسجة المخ من خلال تعليمات المجموعة.

2.10 الكشف عن محتوى ATP في أنسجة المخ

تم جمع أنسجة دماغ الفأر وفحصها في أنسجة دماغية: نسبة عازلة تحلل 1: 5. بعد ذلك ، تم طرد العينات عند 12 ، 000 × جم عند 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق ، وتم جمع المواد الطافية. تم تحديد محتويات ATP في أنسجة المخ من خلال تعليمات المجموعة.

2.11 التحليل الإحصائي

تم استخدام SPSS 19. 0 (شيكاغو ، إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكية) لتحليل البيانات. يتم التعبير عن النتائج على أنها متوسط ​​الانحراف المعياري (x ± s). تم استخدام اختبار t للطالب لمقارنة المجموعات ، واعتبرت الاختلافات مهمة في P <0. 0 5 أو P <0.01.

3. النتائج

3.1 تحسين الإدراك والتعلم والذاكرة في الفئران المسنة المعالجة بـ VAP

يعتمد اختبار MWM على غريزة البقاء على قيد الحياة لدى الحيوانات للعثور على منصة الهروب ويتضمن البحث عن موقع مكاني متعلق بالذاكرة. يوضح الشكل 1 المسارات التمثيلية للفئران التي أجرت اختبار MWM في اليوم الأخير. كان مخطط مسار سلوك الفأر لمجموعة النماذج أكثر تعقيدًا وغير منتظم ، ولم تجد الفئران المنصة. تجدر الإشارة إلى أن مخطط مسار سلوك الفئران في مجموعتي VAP1 و VAP2 كان بسيطًا ، وتم العثور على منصة. مقارنةً بمجموعة التحكم ، تم تقليل النسبة المئوية لوقت الاستبقاء في الحلقة الوسطى والنسبة المئوية للمسافة التي تحركها الحلقة الوسطى في مجموعة النموذج بشكل كبير (P <0. 0 1). مقارنة بمجموعة النموذج ، فإن النسبة المئوية لوقت الاستبقاء في الحلقة الوسطى والنسبة المئوية للمسافة التي تحركها الحلقة الوسطى زادت بشكل ملحوظ في مجموعات VE و VAP1 و VAP2 (P <0. 05، P <0.01). تشير هذه النتائج إلى أن إدارة VAP حسنت القدرة المعرفية للفئران التي يسببها الشيخوخة D-gal.

3.2 التأثير الوقائي لـ VAP على الخلايا العصبية في قرن آمون في فئران الشيخوخة

تم استخدام تلطيخ H&E لمراقبة التشكل المرضي لأنسجة المخ في الفئران المسنة لاستكشاف ما إذا كان VAP يمكن أن يحسن الضرر المرضي العصبي الناجم عن D-gal (الشكل 2 أ). كانت خلايا CA1 في الحصين من المجموعة الضابطة وفيرة ، مع بنية خلوية طبيعية ، وتشكل كامل ، ونواة واضحة. في المقابل ، انخفض عدد خلايا CA1 في الحصين من المجموعة النموذجية وأظهر التشكل غير المنتظم ، مع عدم وجود نوى واضحة لوحظت تحت المجهر. كانت الخلايا العصبية في منطقة CA1 من الحصين طبيعية نسبيًا ، وتم تقليل الانكماش النووي في مجموعة VE مقارنة بمجموعة النموذج. بشكل ملحوظ ، كانت منطقة CA1 في الحصين من مجموعتي VAP1 و VAP2 مختلفة بشكل كبير عن تلك التي لوحظت في مجموعة النموذج ومماثلة لتلك الموجودة في المجموعة الضابطة. كان الهيكل طبيعيًا نسبيًا ، وكانت الخلايا مرتبة بشكل وثيق ومنتظم ، وكان التشكل مكتملًا.

تم استخدام TEM أيضًا لمراقبة البنية الدقيقة للخلايا العصبية الحُصَينية في الفئران المسنة وفهم ما إذا كان التأثير العكسي لـ VAP على التدهور في التعلم والذاكرة مرتبطًا بتنظيم البنية المجهرية للخلايا العصبية في الدماغ (الشكل 2 ب). أظهرت الخلايا العصبية الحُصَينية شكلًا سليمًا ، وتوزيعًا موحدًا للكروماتين ، وعضيات وفيرة في السيتوبلازم في المجموعة الضابطة. في التكبير العالي ، كانت الميتوكوندريا بيضاوية الشكل ، مع غشاء خارجي مزدوج واضح وأعراف سليمة. في المقابل ، كانت الخلايا العصبية في منطقة الحصين من مجموعة النموذج غير طبيعية. لوحظت تغيرات مبكرة في موت الخلايا المبرمج مثل تكاثف الكروماتين ؛ كانت كريات الليبوفوسين أكثر تواترا ؛ كان الهيكل المشبكي غير واضح. تم نشر قطرات الدهون ، وتم الكشف عن توسع يشبه الحويصلة لمركب جولجي وخفض الشبكة الإندوبلازمية الخشنة. بشكل ملحوظ ، مقارنة بالمجموعة النموذجية ، كان لمجموعتي VAP1 و VAP2 عصبونات قرن آمون تميل إلى أن تكون طبيعية في البنية والتشكل ، مع أغشية نووية ناعمة ونواة طبيعية وعضيات وفيرة. والجدير بالذكر أنه لوحظ المزيد من نقاط الاشتباك العصبي ، ولم يكن للحويصلات المشبكية في الغشاء الأمامي تراكم غير طبيعي ، وكان التشكل لجسم جولجي داخل الهيولى والميتوكوندريا طبيعيًا ، وكان الليفوفوسين نادرًا.

3.3 تأثيرات VAP على الإنزيمات المرتبطة بالتلف التأكسدي

التأثير السلبي لنظام التشغيل OS هو إنتاج الجذور الحرة في الجسم ، وهي أحد الأسباب الرئيسية للشيخوخة والمرض (الشكل 3). مقارنة بالمجموعة الضابطة ، انخفضت أنشطة SOD و CAT و GSH-Px في مصل الفئران النموذجية D-galadministered بشكل ملحوظ (P <0. 0 1 ، P <{{7) }}. {{1 0} 5) ، وزاد محتوى MDA بشكل ملحوظ (P <0. 0 5) ، مما يشير إلى النمذجة الناجحة. مقارنة بمجموعة النماذج ، زادت أنشطة SOD و CAT و GSH-Px في مجموعة VE بشكل ملحوظ (P <0. 0 1، P <0. 05) . مقارنة بالمجموعة النموذجية ، تمت زيادة أنشطة SOD و GSH-Px في مجموعة VAP1 بشكل كبير (P <0.05 ، P <0.01). في المقابل ، تم زيادة CAT بشكل طفيف ولكن لم يكن مختلفًا بشكل كبير. مقارنة بالمجموعة النموذجية ، تمت زيادة أنشطة SOD و CAT و GSH-Px في مجموعة VAP2 بشكل ملحوظ (P <0.05 ، P <0.01). مقارنة بالمجموعة النموذجية ، تم تقليل محتويات المصل MDA في الفئران في مجموعتي VAP1 و VAP2 بشكل ملحوظ (P <0.05). تشير النتائج المذكورة أعلاه إلى أن التأثير المضاد للشيخوخة لـ VAP مرتبط بتعزيز نشاط إنزيمات مصل مضادات الأكسدة في الفئران المسنة وتقليل بيروكسيد الدهون.

3.4 تأثيرات VAP على تكوين وتنوع ميكروبيوتا الأمعاء في الفئران

أسفرت نتائج التسلسل الجيني 16S rRNA عن 1،999،46 0 قراءة PE ، وبعد تصفية وإزالة الكيميرات ، تم الحصول على 1،776،708 علامة فعالة. كان متوسط ​​أطوال التسلسل للعينات في مجموعات التحكم والنموذج و VE و VAP1 و VAP2 417.2 و 416.2 و 418.2 و 421.0 و 420.4 نقطة أساس على التوالي. تراوحت نسبة القراءات ذات درجة جودة Phred التي تزيد عن 30 (Q30) من 94.15 إلى 95.71 بالمائة.

بعد ذلك ، حددنا تكوين ميكروبيوتا الأمعاء باستخدام قراءات الجين 16S rRNA. تم تجميع العلامات التي تم الحصول عليها عن طريق التسلسل عالي الإنتاجية عند مستوى تشابه بنسبة 97 بالمائة ، وتم إنشاء مخطط Venn (الشكل 4 أ). كان لكل مجموعة 490 OTUs ، ولم يكن هناك أساسًا أي OTUs محدد لكل مجموعة. للتحقق مما إذا كان عمق التسلسل يفي بمتطلبات تحديد الأنواع ، قمنا برسم منحنيات شانون والخلافة لجميع العينات (الشكل 4 ب ، ج). كان كلا المنحنيين في جميع العينات قريبين من هضبة التشبع ، مما يكشف عن تغطية عالية (99 بالمائة). تشير هذه البيانات إلى أنه تم استخراج الغالبية العظمى من معلومات التنوع الميكروبي في العينات وأنه يمكن تحديد بنية المجتمع البكتيري وتنوعه بدقة.

يعكس تنوع ألفا وفرة الأنواع (الثراء) وتنوع الأنواع. تُستخدم فهارس شانون وسيمبسون لقياس تنوع الأنواع وتتأثر بوفرة الأنواع في مجتمع العينة وتساوي الأنواع (تكافؤ المجتمع). كلما زادت قيمة مؤشر شانون ، كانت قيمة مؤشر سيمبسون أصغر ، مما يشير إلى أن تنوع الأنواع في العينة أعلى [21]. النتائج المعروضة في الشكل 4 د تظهر عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية في قيم مؤشر شانون لنبات الفأر بين المجموعات.

بالمقارنة مع مجموعة التحكم ، لا يوجد فرق كبير في قيمة مؤشر Simpson لمجموعة النماذج. لم يلاحظ أي فرق كبير بين مجموعة النموذج وكل مجموعة علاج. تظهر هذه النتائج عدم وجود فرق كبير في تنوع الفلورا المعوية للفئران بين المجموعات.

تم إجراء PCA على الفلورا المعوية للفأر (الشكل 4E) ، حيث PC1 و PC2 هما القيمتان المميزتان اللتان تسببان أكبر فرق بين العينات. أظهرت النتائج أن 32.94 و 19.74 في المائة من درجة التأثير تم حسابها بواسطة PC1 و PC2 على التوالي. كلما كانت النقاط أكبر ، زاد الفرق. يتم تجميع مجموعات العينات الخمس في ثلاث فئات ، مع توزيع عينات مجموعة النموذج في الزاوية اليسرى العليا من الشكل ، بعيدًا عن المجموعات الأخرى. أظهرت مجموعات التحكم و VE و VAP2 المزيد من التداخلات ، وكانت المجموعات الثلاث من العينات قريبة من بعضها البعض. يُظهر الجزء الأوسط العلوي من الشكل 4E أنه بعد تدخل VAP ، تم تحسين تشابه الفلورا المعوية لمجموعة الفئران VAP2 مع الفئران الضابطة.

تم تقييم الاختلافات في وفرة البكتيريا في نموذج التحكم ومجموعات VE و VAP1 و VAP2 لأفضل 20 جنسًا (الشكل 4F). كانت وفرة مجموعة Lachnospiraceae _ NK4A 136_ و Lactobacillus مختلفة بين الحيوانات الضابطة والنموذج ، حيث انخفضت وفرة Lactobacillus في المجموعة النموذجية بشكل ملحوظ. في المقابل ، زادت وفرة الأجناس المتبقية بشكل كبير. والجدير بالذكر أن أعضاء Lactobacillus عبارة عن بروبيوتيك لها تأثيرات مضادة للشيخوخة ومضادة للالتهابات [22 ، 23]. لذلك ، لم تكن هذه النتائج مفاجئة. بشكل ملحوظ ، زادت وفرة Lactobacillus بشكل ملحوظ في مجموعات VAP1 و VAP2 مقارنة بمجموعة النموذج ، مما يشير إلى أن VAP قد يزيد من محتوى البكتيريا المفيدة في الأمعاء ، مما يمنع الشيخوخة.

【لمزيد من المعلومات: george.deng@wecistanche.com / WhatApp: 86 13632399501】