خلاصة

الخلفية: تم الإبلاغ عن أن غذاء ملكات النحل من شأنه أن يقلل من تخليق الميلانين ويمنع التعبير عن البروتينات والجينات المرتبطة بتكوين الميلانين. في هذه الدراسة ، قمنا بتقييم النشاط المضاد لتولد الميلانين ومزيل التصبغ لحمض ديكانويك 10- هيدروكسي -2- (10- HDA) من غذاء ملكات النحل Apis mellifera.

اقترحت بعض الدراسات ذلكcistancheقد تساعد في منع شيخوخة الجلد عن طريقتقليل الإجهاد التأكسديواشتعال، وكلاهما يمكن أن يساهم فيالتجاعيد, بقع سوداء، وعلامات الشيخوخة الأخرى. ومع ذلك ، فمن غير الواضح ما إذا كانcistancheيستطيعتفتيح البشرةأوتقليل التصبغ. باختصار ، في حين قد يكون للكيستانش بعض الآثار المفيدة على الجلد ، فليس من الواضح ما إذا كان يمكن استخدامه كعنصر موثوق به.تفتيح البشرةعامل. من الأفضل دائمًا استشارة طبيب أمراض جلدية للحصول على نصائح حول الطرق الآمنة والفعالة للعناية ببشرتك.

انقر فوق Cistanche Tubulosa للتبييض

لمزيد من المعلومات:

david.deng@wecistanche.com WhatApp: 86 13632399501

طُرق:في هذه الدراسة ، قمنا بتقييم {0} نشاط تبييض HDA بالمقارنة مع التغيرات في نشاط التيروزيناز داخل الخلايا ومحتوى الميلانين ومستويات البروتين المرتبطة بإنتاج الميلانين في خلايا سرطان الجلد B16F1 بعد العلاج {{4 }} HDA. علاوة على ذلك ، تم تقييم تأثير تبييض الجلد عن طريق وضع منتج كريمي يحتوي على 0.5 بالمائة و 1 بالمائة و 2 بالمائة من 10- HDA على جلد الفئران (C57BL / 6 J) لمدة 3 أسابيع لملاحظة تأثير DL *-قيم.

نتائج:أظهرت النتائج أن 10- HDA يثبط تعبير بروتين MITF (IC 50 0. 86 ملي مولار) في خلايا سرطان الجلد B16F1. كشف تحليل اللطخة الغربية أن 10- HDA يثبط نشاط التيروزيناز والتعبير عن البروتين 1 المرتبط بالتيروزيناز (TRP -1) ​​و TRP -2 وعامل النسخ المرتبط بالميكروفيلم (MITF) في خلايا سرطان الجلد B16F1. بالإضافة إلى ذلك ، يُظهر 10- HDA المطبق على جلد الفئران زيادة كبيرة في متوسط ​​مؤشر تبييض الجلد (قيمة L).

الاستنتاجات:أشارت بيانات التحقق إلى إمكانية استخدام 10- HDA في منع تصبغ الجلد. تم اقتراح 10- HDA كمرشح لمنع تكون الميلانين ، وبالتالي يمكن تطويره كمنتج للعناية بالبشرة لمستحضرات التجميل.

الكلمات الدالة:غذاء ملكات النحل ، 10- هيدروكسي -2- حمض ديكانويك ، تكوين الميلانين ، تبييض البشرة ، مثبط تكوين الميلانين

خلفية

غذاء ملكات النحل (RJ) هو نحلة عاملة شابة (Apis mellifera) تُفرز عن طريق الغدد البلعومية والفك السفلي ، وقد تم إطعامها من قبل ملكة النحل النامية حصريًا طوال حياتها [1]. يوفر RJ قيمًا غذائية عالية بسبب الكميات الوفيرة من البروتينات والأحماض الأمينية الحرة والدهون والفيتامينات والسكريات [2 ، 3]. إن البروتينات النشطة بيولوجيًا في RJ هي بروتينات غذاء ملكات النحل الرئيسية (MRJPs) ، و apisimin ، و Royalizing ، والتي أظهرت تأثيرات تنظيم مناعة ومضادة للجراثيم في العديد من الدراسات [4-6]. 10- هيدروكسي -2- حمض ديكانويك (10- HDA) هو الأحماض الدهنية الرئيسية في RJ التي تمتلك العديد من الآثار المفيدة للصحة للإنسان ، والتي أظهرت أنشطة مضادة للأورام ومضادة للبكتيريا ومعدلة للمناعة [7 –9]. 10- تم العثور على HDA فقط في RJ لذلك تم استخدامه كعلامة جودة لمنتجات غذاء ملكات النحل [10 ، 11]. تم بالفعل تأكيد العديد من الأنشطة الدوائية لـ RJ من خلال التجارب على الحيوانات ، والأنشطة الدوائية بما في ذلك مضادات الأكسدة [12 ، 13] ، ومكافحة الالتهاب [14] ، ومضاد الأورام [15 ، 16] ، ومضاد التكوّن [17] ، مضاد للجراثيم [18-20] ، موسع للأوعية [21 ، 22] ، ارتفاع ضغط الدم [21 ، 22] ، مضاد لفرط كوليسترول الدم [23] ، مضاد للكلى [24] وتأثيرات تبييض البشرة [25]. بناءً على قيمتها الغذائية وفائدتها لصحة الإنسان ، هناك المزيد والمزيد من منتجات RJ التجارية المتاحة في الأسواق.

يرتبط لون جلد الحيوانات والبشر بمحتوى صبغة الميلانين في الجلد. يتمثل دور الميلانين في حماية الجلد من التلف الناتج عن الأشعة فوق البنفسجية ، لكن التراكم المفرط للميلانين يسبب اضطرابات جلدية خطيرة مثل تغير لون الجلد وتصبغه وتسريع شيخوخة الجلد [26]. تم تصنيع الميلانين في الخلايا الصباغية الموجودة في الطبقة الأعمق من البشرة عبر آليات تكوين الميلانين [27]. تكوين الميلان هو مسار اصطناعي معقد يتحكم فيه التيروزيناز والبروتينات المرتبطة بالتيروزيناز 1 و 2 (TRP -1 و TRP -2) ، وعامل النسخ المرتبط بالميكروفيلم (MITF) [28 ، 29]. Tyrosinase هو إنزيم يحد من المعدل للتحكم في تخليق الميلانين. تتمثل الخطوة الأولى في إنتاج الميلانين في التحلل المائي لـ L-tyrosine إلى L -3 ، 4- dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) وتحويل L-DOPA إلى dopaquinone [30]. TRP -2 يحفز إنتاج 5 ، 6- حمض ثنائي هيدروكسي إندول كربوكسيليك تم تحويله من دوباكروم ، ومنتج TRP -2 ، 5 ، 6- ثنائي هيدروكسي إندول كربوكسيل حمض ك تم تحويل ركيزة TRP -1 إلى إندول -5 ، 6- حمض الكينون الكربوكسيل ، مما أدى في النهاية إلى تخليق الميلانين [31 ، 32]. قد يكون تثبيط تكوين الميلانين عن طريق تعطيل تكوين الميلانين هو الطريقة الرئيسية لمنع أو تحسين اضطرابات فرط التصبغ ، مثل الكلف ، والبقع العمرية. لذلك ، فإن البحث عن مركب محتمل وآمن وفعال لتقليل تنظيم تلك العوامل في تكون الميلانين سيكون أمرًا جديرًا بالملاحظة في الصناعة الطبية ومستحضرات التجميل [25 ، 33 ، 34].

ثبت أن غذاء ملكات النحل يمكن أن يقلل من تخليق الميلانين [22] ، لكن المركب النشط الرئيسي أو الآلية الكامنة وراء أنشطة RJ لا تزال غير معروفة. وجدنا في دراستنا السابقة أن 10- HDA يمكن أن يثبط نشاط التيروزيناز (بيانات غير منشورة). في هذه الدراسة ، تم تقييم التأثير المثبط على التيروزيناز بواسطة 10- HDA. تم إجراء كل من تخليق الميلانين الحيوي في النماذج المختبرية باستخدام زراعة خلايا سرطان الجلد B16F10 ونموذج حيواني لفأر مع تطبيق الجلد للتحقق من تأثير تثبيط تكوين الميلانين لـ 10- HDA.

طُرق

تحضير 10- HDA من غذاء ملكات النحل

تم تحضير غذاء ملكات النحل من قبل شركة فو تشانغ لتربية النحل في هوالين ، تايوان. تم نقل يرقات يبلغ عمرها 3- يوم إلى أكواب ملكة على الإطارات ، واحتوى كل إطار على 3 0 أكواب ملكة. تم نقل الإطارات إلى خلايا النحل ، وتم جمع RJ بعد 72 ساعة من نقل اليرقات. تحتوي كل خلية على ما يقرب من 25 ، 000 نحل العسل [35]. تم الاحتفاظ بعينات RJ التي تم جمعها عند −2 0 درجة حتى مزيد من التحليل. تم إعادة ضخ غذاء ملكات النحل (40 جم) بالميثانول (400 مل × 4 × 30 دقيقة) ، وتم حصاد المادة الطافية عن طريق الطرد المركزي عند 4500 × جم لمدة 30 دقيقة. تم تركيز المادة الطافية تحت ضغط منخفض للحصول على المستخلص الخام (10.76 جم) المسمى RJM. تمت تنقية RJM المعلق في الميثانول بواسطة كروماتوجرافيا عمود هلام السيليكا (SiO2 CC) ثم تمت التصفية التتابعية باستخدام تدرجات الكلوروفورم والميثانول (300: 1 إلى 1: 1) للحصول على عشرة كسور تم تحليلها بواسطة TLC. أظهر الجزءان 4 و 5 نقاطًا مهمة ، وبالتالي فقد تم إخضاعهما لمزيد من التنقية والتحليل. تمت تنقية الجزأين 4 و 5 بشكل متكرر بواسطة SiO2 CC (تمت التصفية التتابعية باستخدام الكلوروفورم / الميثانول ، 300: 1 إلى 1: 1) ثم تمت بلورتهما باستخدام الأسيتون للحصول على 10- هيدروكسي -2- حمض ديكانويك ({{32} } HDA). تم تأكيد التركيب الكيميائي للمنتج المنقى عن طريق تحليل أطياف كتلة الرنين المغناطيسي النووي و GC. تم تحديد التحليل الكمي 10- HDA بواسطة كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) مع نظام ضخ Waters 1525 مزود بكاشف Water 2489 ، وعمود GP250 RP -8 (4.6 مم) ، وماء 717plus جهاز أخذ العينات الأوتوماتيكي. كان الطور المتحرك عبارة عن محلول ميثانول (60:40 ت / ت مع ماء عالي النقاوة ومزيل الأيونات) تم ضبطه باستخدام حمض الفوسفوريك إلى درجة الحموضة 2.5 ، وتم ترشيحه من خلال غشاء (0.45 ميكرومتر) ، وتم تفريغه لمدة 5 دقائق. تم تعديل معدل تدفق الطور المتحرك إلى 1.0 مل / دقيقة ، وتم إجراء الكشف عند 225 نانومتر. محتوى 10HDA في العينة النهائية هو 90 في المئة ، والتي تستخدم لمزيد من التحليل.

ثقافة الخلية 10- علاجات HDA

تمت زراعة خلايا سرطان الجلد B16F10 (رقم المركز الإقليمي لاتفاقية بازل: 60.031) في وسط Dulbecco المعدّل النسر (DMEM) مع 10 بالمائة (حجم / حجم) من مصل بقري جنيني عند 37 درجة في حاضنة مرطبة ، يتحكم فيها ثاني أكسيد الكربون 2- (5 بالمائة) . تم بذر الخلايا بكثافة خلية مناسبة في 24- بئر أو 6- لوحة بئر. بعد يوم واحد من الحضانة ، عولجت الخلايا بتركيزات مختلفة من 10- HDA. تم استخدام الوسيط في المجموعة الضابطة بدلاً من 10- HDA. بعد ذلك ، تم حصاد الخلايا واستخدامها في فحوصات مختلفة.

قياس صلاحية الخلية

تم قياس صلاحية الخلية عن طريق مقايسة {0}} (4 ، 5- ثنائي ميثيلثيازول -2- yl) -2 ، 5 - بروميد ثنائي فينيل تيترازوليوم (MTT) وفقًا لـ الطريقة التي أبلغ عنها كارمايكل وآخرون. [36]. تمت زراعة خلايا سرطان الجلد B16F1 0 في DMEM التي تحتوي على 10 بالمائة FBS و 1 بالمائة L-glutamine (4 مم) في حاضنة 5 بالمائة CO2 عند 37 درجة. تم زرع الخلايا المستنبتة (1 × 104 خلية / بئر) في 96- صفيحة جيدة ، 10- HDA (مذاب في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)) مخفف بالوسط بتركيز 1 ، 0.5 ، 0.1 تمت إضافة مم وحمض كوجيك 1 مم إلى الآبار. تم استخدام الوسيط كفراغ. بعد حضانة 24- ساعة عند 37 درجة تحت 5 بالمائة من ثاني أكسيد الكربون ، تمت إزالة الوسائط من كل بئر ، ثم تم غسل الآبار باستخدام PBS (محلول ملحي فوسفات 1 M) مرتين. تمت إضافة 200 ميكرولتر من محلول MTT (2 مجم / مل) إلى كل بئر. تم إنهاء التفاعل بإضافة 100 ميكرولتر من DMSO بعد 4- ساعة حضانة. تم قياس امتصاص كل بئر عند 540 نانومتر باستخدام قارئ المقايسة المناعية (BIO-TEK ، Winooski ، VT) [20-23]. تم تحديد صلاحية الخلية بالمعادلة التالية: قابلية الخلية للحياة (النسبة المئوية)=[(AB) / C] × 100 بالمائة ، A: حجم امتصاص العينة ، B: حجم امتصاص التعصب الفارغ ، C: التحكم في حجم الامتصاص.

قياس محتوى الميلانين الخلوي

تم قياس محتوى الميلانين داخل الخلايا لخلايا سرطان الجلد B16F10 باستخدام الطريقة المعدلة التي وصفها بيلودو وآخرون ، [37]. في نهاية زراعة خلايا سرطان الجلد B16F10 ، تم حصاد الخلايا وغسلها باستخدام برنامج تلفزيوني. تم تحلل الخلايا التي تم حصادها في محلول تحلل بارد (20 ملي فوسفات الصوديوم (درجة الحموضة 6.8) ، 1 في المائة Triton X -100 ، 1 ملي مولار فينيل ميثيل سلفونيل فلوريد (PMSF) ، 1 ملي إيثيلين ديامينيتتراسيتيك حمض (EDTA)). بعد الطرد المركزي عند 15 ، 000 × جم لمدة 30 دقيقة ، تم إذابة الكريات في 1 N NaOH تحتوي على 20 بالمائة DMSO لمدة ساعة عند 60 درجة. تم تحديد محتوى البروتين في المادة الطافية باستخدام مقايسة برادفورد. تم قياس الامتصاصية عند 405 نانومتر ، وتم حساب محتوى الميلانين مقابل معيار معروف من الميلانين الاصطناعي. مستوى الميلانين (بالمائة)=[(AB) / C] × 100 بالمائة ؛ ج: حجم امتصاص العينة ؛ ب: حجم الامتصاصية الفارغة ؛ ج: التحكم في حجم الامتصاصية.

قياس نشاط التيروزيناز الخلوي

تم إجراء اختبار نشاط التيروزيناز وفقًا للطريقة الموصوفة سابقًا بواسطة Martinez-Esparza et al. ، [38] ، مع تعديلات طفيفة. تم تحليل خلايا سرطان الجلد B16F10 في 20 ملي فوسفات الصوديوم (الرقم الهيدروجيني 6.8) ، و 1 في المائة Triton X -100 ، و 1 ملي مولار من فلوريد السلفونيل فينيل ميثان أو PMSF ، وطردها عند 14 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة. تم تحديد محتوى البروتين لكل مادة طافية باستخدام مقايسة برادفورد مع مصل الأبقار الألبومين (BSA) كمعيار البروتين. تم تحديد نشاط التيروزيناز في خليط تفاعل (1 مل) يحتوي على محلول فوسفات 50 ملي مولار (درجة الحموضة 6.8) ، 2 ملي مولار DOPA ، و 300 ميكروغرام من البروتينات الطافية. بعد الحضانة عند 37 درجة لمدة 15 دقيقة ، تم قياس الامتصاصية عند 475 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية. نشاط Tyrosinase (بالمائة)=[(AB) / C] × 100 بالمائة ؛ ج: حجم امتصاص العينة ؛ ب: حجم الامتصاصية الفارغة ؛ ج: التحكم في حجم الامتصاصية.

تحليل لطخة غربية

تم غسل الخلايا 3 مرات في PBS بارد ومحلول في محلول RIPA (درجة الحموضة 7.4 ، 5 0 ملي تريس ، 0.1 بالمائة SDS ، 50 ملي كلوريد الصوديوم ، 1 بالمائة NP -40 ، 1 ملي مولار PMSF ، 10 ميكروغرام / مل أبروتينين و 10 ميكروغرام / مل ليوببتين). تم استخدام قسامة من المحللة لتحديد محتوى البروتين بطريقة اختبار برادفورد باستخدام ألبومين مصل البقر كمعيار. تم فصل البروتينات (40 ميكروغرام) على 10 بالمائة SDS بولي أكريلاميد هلام الكهربائي وتم مسحها على غشاء Hybond-C Extra nitrocellulose (Amersham Bioscience ، المملكة المتحدة). تم حظر الأغشية باستخدام حليب خالي من الدسم بنسبة 5 في المائة في محلول ملحي Tris-buffer (TBS) يحتوي على 10 ملي مولار من Tris-HCl ، ودرجة الحموضة 7.5 ، و 150 ملي مول كلوريد الصوديوم لمدة 30 دقيقة. تم اكتشاف MITF و tyrosinase و dopachrome tautomerase 2 (TRP -2) و TRP -1 و -actin (كعنصر تحكم داخلي) باستخدام الأجسام المضادة متعددة النسيلة للأرانب ، على التوالي. تم تحضين الأغشية بشكل إضافي باستخدام الأجسام المضادة الثانوية متعددة النسيلة الماعز للأرنب IgG-H & L (HRP). تم بعد ذلك اكتشاف جميع الأجسام المضادة المرتبطة باستخدام Super Signal® West Pico Chemiluminescent Substrate (ECL) (Thermo Scientific). تم قياس شدة الإشارة لكل نطاق باستخدام نظام مقياس الكثافة Gel Doc TM / Chemi Doc TM Universal hood II (Bio-Rad) المجهز بمُدمج وتم تطبيعه مع جهاز التحكم الداخلي.

تحديد نشاط إزالة الصباغ في الفئران

تم تقييم نشاط إزالة الصبغة عبر نظام نموذج الفأر بواسطة البروتوكول المعدل لـ Tai et al.. [39]. تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات بجامعة فورموزا الوطنية (رقم الموافقة: 1 0 ، 4 0 1). تم شراء أنثى فئران سوداء عمرها خمسة أسابيع (C57BL / 6 J) ، تزن 20 إلى 25 جرامًا ، من مركز مختبر الحيوان الوطني ، تايبيه. خلال جميع التجارب ، تم إيواء الحيوانات في غرفة مكيفة مع درجة حرارة ثابتة (25 درجة ± 2 درجة) وتم الاحتفاظ بها في ضوء 12 ساعة: دورة مظلمة. تم تأقلم الحيوانات لمدة 7 أيام قبل التجربة. بعد حلق شعرها ، أعطيت الحيوانات 1- راحة نهارية. تم تحضير عينات جل تحتوي على 10- HDA عن طريق نثر الأدوية في الفازلين. تم تقسيم إجمالي أربعين فأرًا بالتساوي إلى خمس مجموعات وتم تلطيخ كل مجموعة مرتين يوميًا باستخدام 0.1 جم فازلين (مجموعة تحكم) ، 1 بالمائة حمض كوجيك في الفازلين ، 0.5 بالمائة ، 1 بالمائة ، أو 2 بالمائة 10- HDA في الفازلين . استمرت التطبيقات لمدة 3 أسابيع ، وتم قياس مؤشر تبييض البشرة (قيمة L) على نفس منطقة الجلد كل يوم باستخدام DermaLab® Combo (Cotex Technology ، الدنمارك) ، وهي أداة قياس لونية تستخدم لونًا أبيض عالي الكثافة LED كمصدر للضوء. أداة قياس الألوان متصلة بجهاز كمبيوتر [40]. لقد أخذنا في الاعتبار المعلمة L فقط ، وكانت قيمة L هي السطوع النسبي ، بدءًا من الأسود الكلي (L=0) إلى اللون الأبيض الكلي (L=100). تم فحص قيمة L لمؤشر تبييض الجلد الأولي من جلد كل فأر قبل تطبيقه مع المواد المختبرة.

تحليل احصائي

تم تحليل جميع النتائج في هذه الدراسة باستخدام إجراء النموذج الخطي العام المتاح من حزمة برمجيات نظام التحليل الإحصائي الإصدار 9.1 (معهد نظام التحليل الإحصائي ، 2002). تم استخدام اختبار Duncan متعدد المدى [41] لاكتشاف الاختلافات بين وسائل العلاجات. أجريت كل تجربة في ثلاث نسخ.

نتائج

تأثير 10- HDA على صلاحية خلية سرطان الجلد B16F1

يوضح الشكل 1 الجرعة المثلى من مقايسة قابلية بقاء الخلية بواسطة MTT في خلايا سرطان الجلد B16F1. وقد أظهر بوضوح أن 10- HDA لم يكن سامًا للخلايا لخلايا سرطان الجلد B16F1 بتركيزات 0. 1 ، { {8}} .5 و 1 ملي مولار وحمض كوجيك لم يكن سامًا للخلايا لخلايا الورم الميلانيني بتركيز 1 ملي مولار. انخفضت قابلية بقاء الخلية بشكل ملحوظ (2 0 انخفاض في المائة) في خلايا الورم الميلانيني المعرضة لـ 1.5 ملي مولار 10- HDA (P <0. 0 5) (البيانات غير معروضة) و 5 حمض كوجيك مم. لذلك ، تم تطبيق تركيزات 0.1 و 0.5 و 1 ملي مولار من 10- HDA و 1 ملي مولار من حمض كوجيك في التجارب اللاحقة.

تثبيط نشاط التيروزيناز وتخليق الميلانين في خلايا سرطان الجلد B16F10 بواسطة 10- HDA

حمض كوجيك هو عامل مضاد لتكوين الميلانين فعال ومعروف ، وقد استخدم كعنصر تحكم إيجابي في هذه الدراسة. 10- HDA قمع بشكل ملحوظ (p <0. 0 5) تخليق الميلانين ونشاط التيروزيناز مقارنةً بالتحكم في خلايا سرطان الجلد B16F1 غير المعالجة. بجرعة 1 مم ، 10- تسبب HDA في انخفاض بنسبة 28 ± 2.4 في المائة في نشاط التيروزيناز الخلوي (P <0. 0 1) و 4 0. 4 ± 3 . 0 انخفاض في نسبة تخليق الميلانين الخلوي (P <0.001) ، بينما قلل حمض الكوجيك (1 مم) بشكل ملحوظ من نشاط التيروزيناز وتخليق الميلانين بنسبة 14.4 ± 3.7 بالمائة (P <0.05) و 19.3 ± 1.5 بالمائة (P <0.001) ، على التوالي (الشكلان 2 و 3).

قمع تعبير بروتين التيروزيناز ، و TRP -1 ، و TRP -2 في خلايا سرطان الجلد B16F10 بواسطة 10- HDA

للتحقق مما إذا كان 10- HDA يمكن أن يؤثر على تعبير البروتين الميلانيني ، تم إجراء تحليل النشاف الغربي باستخدام محلول خلايا سرطان الجلد B16F10 المعالجة بـ 10- HDA (الشكل 4). إن تعبيرات 10- HDA تمنع بشكل كبير من التيروزيناز ، و TRP -1 ، و TRP -2 في خلايا الورم الميلانيني B16F1 مقارنة بالخلايا غير المعالجة (الشكل 4 ب-د). لم يُظهر البروتين -اكتين ، وهو بروتين التدبير المنزلي الذي تم استخدامه كعنصر تحكم داخلي ، أي تغيير. تثبط 10- HDA مستويات التعبير البروتيني للأنزيمات الصبغية المشابهة لحمض الكوجيك.

التأثير المثبط لـ 10- HDA على مستوى البروتين المرتبط بالعوامل الميلانينية في خلايا B16F10

أثناء عملية تكوين الميلانين في خلايا الثدييات ، يلعب MITF الدور المنظم الرئيسي في تركيب مسار TRPs ، بما في ذلك TYR و TRP {0} و TRP -2 [25 ، 26]. تم تقييم تأثير 10- HDA على تعبير MITF باستخدام النشاف الغربي. تعرضت خلايا سرطان الجلد B16F1 {{1 0} لتركيزات مختلفة من 10- HDA (0.1 و 0.5 و 1 ملي مولار) ، مما أدى إلى تقليل تنظيم تعبير MITF بواسطة 10- HAD ( الشكل 4 هـ). تم تقدير قيمة IC50 لـ 10- إخفاء HDA لتعبير MITF ليكون 0. 86 ملي مولار. تشير النتائج الحالية إلى أن مستويات بروتين MITF تنخفض بواسطة 10- HDA. قد يكون تأثير نقص التصبغ لـ 10- HDA نتيجة لتعبير جين MITF الخاضع للتنظيم ، والذي من شأنه بعد ذلك قمع البروتينات والتعبيرات الجينية للتيروزيناز ، و TRP -1 ، و TRP -2.

تقييم نشاط إزالة الصبغة لـ 10- HDA في الجسم الحي عبر الفئران

للتنبؤ بالجرعة البشرية ، استخدمنا الفئران كنموذج حيواني لفحص نشاط إزالة الصبغة {{0} HDA. بعد الحلاقة ، عولجت الفئران بنسبة 1 بالمائة من حمض الكوجيك في الفازلين ، 0. 5 بالمائة ، 1 بالمائة ، أو 2 بالمائة 10- HDA في الفازلين ، وتم قياس مؤشر تفتيح البشرة وتسجيله. لهذه الدراسة في الجسم الحي ، استخدمنا حمض الكوجيك كعنصر تحكم إيجابي. يستخدم حمض الكوجيك على نطاق واسع كعامل علاج لإزالة تصبغ الجلد في جميع أنحاء العالم. بعد الأسبوع الأول من العلاج ، زادت درجة تبييض الجلد بشكل ملحوظ في الفئران التي عولجت بـ HDA 10- مقارنةً بالمجموعة الضابطة ، واستمرت هذه الزيادة حتى نهاية التجربة. كان نشاط إزالة التصبغ لـ 0. 5 و 1 و 2 في المائة 10- من حمض الكوجيك مقارنة بنسبة 1 في المائة من حمض كوجيك. كشفت نتائجنا أن 10- HDA كان قادرًا على تعزيز تبييض الجلد بشكل كبير على جلد الفئران عند تركيز منخفض يصل إلى 0.5 بالمائة (الشكل 5). لذلك ، 10- يبدو أن HDA مرشح جيد كعامل لتفتيح البشرة لعلاج فرط تصبغ الجلد.

مناقشة

يتم التحكم في تركيب الميلانين من خلال سلسلة إنزيمية معقدة من التيروزيناز ، TRP1 ، و TRP2. تلعب درجة تثبيط الجينات والبروتينات المرتبطة بتكوين الميلانين دورًا مهمًا في فعالية عامل إزالة الصباغ ، والذي يستخدم عادة في علاج فرط التصبغ أو منتجات التجميل [28]. لتوضيح التأثير المثبط الحقيقي لـ HDA 10- على تكوين الميلانين ، تم تقييم محتوى الميلانين ونشاط التيروزيناز داخل الخلايا لخلايا B16F10 في نفس نطاق التركيز. النتائج في Figs. أشارت 2 و 3 إلى أن 10- HDA أظهرت نشاطًا مثبطًا أعلى على تخليق الميلانين في خلايا B16F10 مقارنة بحمض كوجيك. كشفت البيانات أن 10- HDA يمنع تكون الميلانين في خلايا سرطان الجلد B16F10.

تهيمن على تكوين الميلانين على الأقل ثلاثة بروتينات تنظيمية ، التيروزيناز ، TRP1 ، و TRP2 في الخلايا الصباغية للثدييات [29]. تم إعاقة تعبيرات TRP -1 و TRP -2 و MITF في خلايا سرطان الجلد B16F10 ، والتي عولجت بـ 10- HDA. MITF هو عامل نسخ رئيسي لتنظيم التعبير عن الإنزيمات الميلانينية ، مثل التيروزيناز ، و TRP -1 ، و TRP -2 [42 ، 43]. وفقًا لبيانات النشاف الغربية (الشكل 4) ، فإن خلايا الثدييات المعالجة بـ 10- HDA ستقلل من التعبير عن جميع الإنزيمات التي تحد من المعدل ، بما في ذلك التيروزيناز ، و TRP -1 ، و TRP -2 ، ومنع التراكم غير الطبيعي للميلانين أثناء عملية تكون الميلانين. اقترحت هذه البيانات أن 10- HDA يمكن أن يثبط عملية تكون الميلانين عن طريق تثبيط تعبير MITF. في هذه الدراسة ، أوضحنا أن 10- HDA يثبط تكوين الميلانين عن طريق تقليل تنظيم إنتاج بروتين MITF والتيروزيناز والميلانين. كان المسار المثبط لـ 10- HDA على تعبير MITF مختلفًا عن مثبطات تكوين الميلانين الأخرى ، مثل حمض الكوجيك والأربوتين وحمض الأسكوربيك ، والتي لم تؤثر على تعبير MITF [44 ، 45]. يشير هذا إلى أن 10- HDA تتمتع بإمكانيات ممتازة لاستخدامها كعامل مبيض آمن وطبيعي للبشرة لمستحضرات التجميل الوظيفية [46].

الورم الميلانيني ، وهو سرطان جلدي ينشأ من ترانس خبيث يتكون من الخلايا الصباغية. الأورام الميلانينية التي تظهر في الجلد المتضرر بشكل مزمن من الشمس ، والأسطح المخاطية ، والجلد اللامع ناتج عن الإفراط في تنشيط BRAF و NRAS [47] ، وفقدان موضع CDKN2A [48] ، وإفراط في التعبير عن MITF [49] ، والإفراط في تنشيط كيت [50] ] ، الإفراط في تنشيط mGluR1 [51 ، 52] ... وآخرون. في هذه الدراسة ، 10- يمكن أن يمنع HDA تعبير MITF في خلايا سرطان الجلد B16F10. يشير هذا إلى أن 10- HDA لديها القدرة على أن تكون مكونًا في طب الجلد أو مضاد للسرطان ضد سرطان الجلد.

تم استخدام RJ في العديد من مستحضرات الأمراض الجلدية بما في ذلك إنعاش الجلد وتجديد الجلد وتجديده والحرق للشفاء أو التئام الجروح [53 ، 54]. علاوة على ذلك ، تم الإبلاغ عن أن بعض الأحماض الدهنية غير المشبعة في RJ يمكن أن تمنع تخليق الميلانين ونشاط التيروزيناز ، مما يؤدي إلى تقليل تنظيم الميلانين [55] ، وقد أوضحنا أن تأثير إزالة تصبغ RJ قد يكون نتيجة لوجود {{3) }} HDA. نظرًا لأن جلد الفئران مشابه للإنسان ، فقد استخدمنا الفئران كنموذج حيواني في الجسم الحي لفحص نشاط إزالة الصبغة لـ HAD. كما هو مبين في الشكل 5 ، زاد مؤشر تبييض الجلد للون الجلد بشكل ملحوظ في الفئران التي عولجت بـ HAD 10- ، مقارنةً بالتحكم. بالإضافة إلى ذلك ، Koya-Miyata et al. تم تقييم نشاط تعزيز إنتاج الكولاجين لـ 10- HDA في خطوط الخلايا الليفية التي تنتج عامل النمو العابر - 1 (TGF - 1) ، وهو عامل مهم لإنتاج الكولاجين [55] . لذلك ، 10- يبدو أن HDA مركب طبيعي واعد جدًا لتجديد الجلد وعلاج فرط التصبغ.

خاتمة

10- لم يثبط HDA نشاط التيروزيناز فقط ولكن أيضًا تعبيرات إنزيم الميلانوجين ، بما في ذلك التيروزيناز ، و TRP -1 ، و TRP -2 ، عن طريق قمع MITF في خلايا الورم الميلانيني B16F10. ونتيجة لذلك ، تم تقليل صبغة الميلانين في خلايا سرطان الجلد B16F10. علاوة على ذلك ، أظهر النموذج الحيواني في الجسم الحي نشاط إزالة التصبغ لـ 10- HDA في التطبيق الموضعي. تشير هذه النتائج إلى أن 10- HDA لها مرشح يمكن أن يكون مثبطًا آمنًا وطبيعيًا لتكوين الميلانين لصناعة مستحضرات التجميل ، حيث يعد البحث عن مركب طبيعي وفعال أحد الأهداف المهمة جدًا لتطوير منتج أفضل للعناية بالبشرة .

الاختصارات

10- HDA: 10- هيدروكسي -2- حمض ديكانويك ؛ BSA: الزلال المصل البقري ؛ DMEM: وسيط النسر المعدل Dulbecco ؛ DMSO: ثنائي ميثيل سلفوكسيد ؛ EDTA: حمض إيثيلين ديامينيتتراسيتيك ؛ L-DOPA: L -3 ، 4- ثنائي هيدروكسي فينيل ألانين ؛ MITF: عامل النسخ المرتبط بالميكروفيلم ؛ MRJP: بروتينات غذاء ملكات النحل الرئيسية ؛ MTT: 3- (4، 5- dimethylthiazol -2- yl) -2، 5- diphenyltetrazolium bromide؛ برنامج تلفزيوني: محلول ملحي الفوسفات. PMSF: فلوريد فينيل ميثان سلفونيل أو فينيل ميثيل سلفونيل فلوريد ؛ TLC: كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ؛ TRP -1: بروتين 1 المرتبط بالتيروزيناز ؛ TRP - 2: البروتين المرتبط بالتيروزيناز 2

شكر وتقدير

نشكر السيدة Li-Yu Lee من شركة Fu-Chang Beekeeping لإعداد غذاء ملكات النحل

التمويل

تم دعم هذا العمل بمنحة من وزارة العلوم والتكنولوجيا ، تايوان ، جمهورية الصين (MOST102 - 2622- B -150-002- CC2 & MOST 103 - 2313- B -150 -001 - MY2 إلى CC بينغ).

توافر البيانات والمواد

يتم تضمين جميع البيانات التي تم إنشاؤها أو تحليلها خلال هذه الدراسة في هذه المقالة المنشورة وملفات المعلومات التكميلية الخاصة بها.

مساهمات المؤلفين

CCP تصور وصمم التجارب. أجرى HZS و IPL التجارب. حلل CCP و PCK البيانات. ساهمت CCP و PCK و JCL في الكواشف / المواد / أدوات التحليل. كتب CCP و IPL الورقة ومراجعتها. وافقت جميع المؤلفين النسخة النهائية من المخطوط.

معلومات المؤلفين

CCP ، دكتور في التكنولوجيا الحيوية ، أستاذ مشارك في قسم التكنولوجيا الحيوية ، جامعة فورموزا الوطنية. HZS ، ماجستير في التكنولوجيا الحيوية ، تخرج من قسم التكنولوجيا الحيوية ، جامعة فورموزا الوطنية. IPL ، دكتور في التكنولوجيا الحيوية ، مدير في قسم البحث والتطوير ، Challenge Bioproducts Co.، Ltd. PCK ، دكتور في الكيمياء ، أستاذ مشارك في قسم التكنولوجيا الحيوية ، جامعة فورموزا الوطنية. JCL ، المدير العام في شركة Honey Bee Town Co.، Ltd.

موافقة الأخلاق

تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات من قبل لجنة الأخلاقيات بجامعة فورموزا الوطنية (رقم الموافقة: 10401) وتوافق مع المبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام حيوانات المختبر.

الموافقة على النشر

لا ينطبق في هذا القسم. هذه المقالة ليست دراسة سريرية تشمل مشاركين بشريين ولا تحتوي هذه المخطوطة على أي بيانات سريرية فردية.

تضارب المصالح

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم المصالح المتنافسة

ملاحظة الناشر

تظل Springer Nature محايدة بشأن المطالبات القضائية في الخرائط المنشورة والانتماءات المؤسسية.

تفاصيل المؤلف

1 قسم التكنولوجيا الحيوية ، جامعة فورموزا الوطنية ، هووي ، يونلين ، تايوان. 2 قسم البحث والتطوير ، شركة Challenge Bioproducts Co.، Ltd.، Douliou، Yunlin، Taiwan. 3 Honey Bee Town Co.، Ltd.، No. 77-2 Huaxi، 970 Hualien City، Taiwan.

تم الاستلام: 9 مارس 2017 القبول: 21 يوليو 2017

تم النشر على الإنترنت: 09 أغسطس 2017

مراجع

1. Chen C، Chen S. التغييرات في مكونات البروتين واستقرار تخزين غذاء ملكات النحل في ظل ظروف مختلفة. الغذاء تشيم. 1995 ؛ 54: 195-200.

2. Takenaka T. التركيب الكيميائي لغذاء ملكات النحل. علوم نحل العسل. 1982 ؛ 3: 69-74.

3. شميتزوفا جي ، كلوديني جي ، ألبرت إس ، شرودر دبليو ، شريكينجوست دبليو ، هانيس جي ، جودوفا جي ، سيموث جي. عائلة بروتينات غذاء ملكات النحل الرئيسية لنحل العسل Apis Mellifera L. Cell Mol Life Sci. 1998 ؛ 54: 1020-30.

4. Okamoto I ، Taniguchi Y ، Kunikita T ، Kohno K ، Iwaki K ، Ikeda M. بروتين غذاء ملكات النحل الرئيسي 3 ينظم الاستجابات المناعية في المختبر وفي الجسم الحي. علوم الحياة. 2003 ؛ 1: 2029 - 45.

5. Fujiwara S ، Imai J ، Fujiwara M ، Yaeshima T ، Kawashima T ، Kobayashi K. بروتين مضاد للجراثيم قوي في غذاء ملكات النحل. J بيول كيم. 1990 ؛ 265: 11333-7.

6. Bilikova J ، Hanes J ، Nordhoff E ، Saenger W ، Klaudiny J ، Simuth J. Apisimin ، ببتيد جديد غني بالسيرين فالين من غذاء ملكات النحل (Apis Mellifera L.): التنقية والتوصيف الجزيئي. FEBS ليت. 2002 ؛ 528: 125-9.

7. Townsend GF، Brown WH، Felauer EE، Hazlett B. دراسات حول نشاط مضادات الأورام في المختبر للأحماض الدهنية. رابعا. ترتبط إسترات الأحماض ارتباطًا وثيقًا بأحماض ديكانويك 10- هيدروكسي -2- من غذاء ملكات النحل ضد ابيضاض الدم في الفئران القابل للزرع. يمكن J Biochem Physiol. 1961 ؛ 39: 1765–70.

8. بلوم إم إس ، نوفاك إيه إف ، تابر إس 10- هيدروكسي -2 حمض ديكانويك ، وهو مضاد حيوي موجود في غذاء ملكات النحل. علوم. 1959 ؛ 130: 452–3.

9. Vucevic D، Melliou E، Vasilijic S، Gasic S، Ivanovski P، Chinou I، Colic M. الأحماض الدهنية المعزولة من غذاء ملكات النحل تعدل الاستجابة المناعية للخلايا المتغصنة في المختبر. إنت إمونوفارماكول. 2007 ؛ 7: 1211–20.

10. ويفر إن ، لو جيه. عدم تجانس الأحماض الدهنية من غذاء ملكات النحل. طبيعة. 1960 ؛ 188: 938-9.

11. Antinelli JF، Zeggane S، Davico R، Rognone C، Faucon JP، Lizzani L. تقييم (E) -10- hydroxides-enoic acid كمعامل نضارة لغذاء ملكات النحل. الغذاء تشيم. 2003 ؛ 80: 85-9.

12. تاكيشي إن ، ريجي 1. إعداد والخصائص الوظيفية لمستخلص الماء والمستخلص القلوي لغذاء ملكات النحل. الغذاء تشيم. 2004 ؛ 84: 181-6.

13. Takeshi N ، Mizuho S ، Rriji I ، Hachiro I ، Nobutaka S. الأنشطة المضادة للأكسدة لبعض العسل التجاري ، غذاء ملكات النحل ، والعكبر. الغذاء تشيم. 2001 ؛ 75: 237-40.

14. Martos MV، Navajas YR، López JF. الخصائص الوظيفية للعسل والبروبوليس والغذاء الملكي. J Food Sci. 2008 ؛ 73: 117-24.

15. تمنع منتجات Hiroshi I و Masamitsu S و Kazuhiro T و Yoko A و Satoshi M و Hideaki H. Bee تولد الأوعية المستحث بـ VEGF في الخلايا البطانية للوريد السري البشري. BMC تكملة البديل ميد. 2009 ؛ 9: 1-10.

16. Tamura T، Fujii A، Kuboyama N. Antitumor effects of royal jelly (RJ). نيبون ياكوريجاكو زاشي. 1987 ؛ 89: 73-80.

17. بارك إتش إم ، تشو إم إتش ، تشو واي ، كيم سي. يزيد غذاء ملكات النحل من إنتاج الكولاجين في جلد الفئران بعد استئصال المبيض. J ميد فوود. 2012 ؛ 15: 568-75. دوى: 10.1089 / jmf. 2011.1888.

18. تمنع منتجات Izuta H و Shimazawa M و Tsuruma K و Araki Y و Mishima S و Hara H. Bee تولد الأوعية التي يسببها VEGF في الخلايا البطانية للوريد السري البشري. BMC تكملة البديل ميد. 2009 ؛ 6: 489-94.

19. Tseng JM ، Huang JR ، Huang HC ، Tzen JTC ، Chou WM ، Peng CC. الإنتاج الميسر لمضاد الميكروبات الببتيد - روياليسين والأجسام المضادة عن طريق نظام الجسم الزيتي الاصطناعي. برنامج Biotechnol. 2011 ؛ 27: 153–61.

20. Bílikova K، Huang SC، Lin IP، Šimuth J، Peng CC. علاقة التركيب والنشاط المضاد للميكروبات للملكية ، وهو ببتيد مضاد للميكروبات من غذاء ملكات النحل في Apis Mellifera. الببتيدات. 2015 ؛ 68: 190-6.

21. Okuda H ، Kameda K ، Morimoto C ، Matsuura Y ، Chikaki M ، Jiang M. دراسات حول المواد الشبيهة بالأنسولين والمواد المثبطة للإنزيم المحول للأنجيوتنسين في غذاء ملكات النحل. ميتسوباشي كاجاكو. 1998 ؛ 19: 9-14.

22. Shinoda M ، Nakajin S ، Oikawa T ، Sato K ، Kamogawa A ، Akiyama Y. دراسات الكيمياء الحيوية على عامل توسيع الأوعية في غذاء ملكات النحل. ياكوجاكو زاشي. 1978 ؛ 98: 139-45. 23. Vittek J. تأثير غذاء ملكات النحل على دهون المصل في حيوانات التجارب والبشر المصابين بتصلب الشرايين. اكسبرينتيا. 1995 ؛ 51: 927–35.

24. إبراهيم أ ، الدّيم م ، عبد الدايم مم. التأثير الوقائي للكلية لعسل النحل وغذاء ملكات النحل ضد سمية سيسبلاتين تحت المزمنة في الفئران. تكنولوجيا الخلايا. 2016 ؛ 68: 1039-1048.

25. Han SM، Yeo JH، Cho YH، Pak SC. يقلل غذاء ملكات النحل من تخليق الميلانين من خلال التنظيم السفلي لتعبير التيروزيناز. أنا J تشين ميد. 2011 ؛ 39: 1253 - 60.

26. جيلكريست بكالوريوس ، إيلير MS. يحفز التلف الضوئي للحمض النووي على تكوين الميلانين والاستجابات الأخرى الواقية من الضوء. J Investig Dermatol Symp Proc. 1999 ؛ 4: 35-40.

27. D'Mello SAN، Finlay GJ، Baguley BC، Askarian-Amiri ME. مسارات الإشارات في تكون الميلانين. علوم Int J Mol. 2016 ؛ 17: 1144. دوى: 10.3390 / ijms17071144.

28. كوباياشي تي ، فييرا ود ، بوتر ب ، ساكاي سي ، إيموكاوا جي ، هيرنج في جي. تعديل تعبير البروتين الميلانيني أثناء التحول من الاتحاد الأوروبي إلى تكوين الخلايا. ي خلية العلوم. 1995 ؛ 108: 2301-9.

29. Kim SS و Kim MJ و Choi YH و Kim BK و Kim KS و Park KJ و Park SM و Lee NH و Hyun G. Down-Regulation of tyrosinase و TRP -1 و TRP -2 و MITF التعبيرات عن طريق عصارة الحمضيات في سرطان الجلد B16 F10. باك جيه تروب بيوميد الآسيوية. 2013 ؛ 3: 617-22.

30. Land EJ، Ito S، Wakamatsu K، Riley PA. ثوابت المعدل للخطوتين الكيميائيتين الأوليين لتكوين eumelanogenesis. الدقة خلية الصباغ. 2003 ؛ 16: 487-93.

31. Yen FL، Wang MC، Liang CJ، Ko HH، Lee CW. مثبط (مثبطات) تكوين الميلانين من مستخلص Phyla nodiflora. Evid Based Complement Alternat Med 2012 ؛ المعرف: 867494. دوى 10.1155 / 2012 / 867494.

32. تاتشيبانا M. MITF: تيار يتدفق للخلايا الصبغية. الدقة خلية الصباغ. 2000 ؛ 3: 230-40.

33. Jung SO، Kim DH، Son JH، Nam KC، Ahn DU، Jo CR. الخاصية الوظيفية لفوسفيتين صفار البيض كمثبط لتكوين الميلانين. الغذاء تشيم. 2012 ؛ 135: 993-8.

34. Yeon HK ، Youn OJ ، Cho CW ، Son DW ، Park SJ ، Rho JH ، Sang YC. التأثيرات المثبطة لحمض سيناميك على تخليق الميلانين في الجلد. بيول فارم بول. 2008 ؛ 31: 946-8.

35. Liu JR، Yang YC، Shi LS، Peng CC. ترتبط الخصائص المضادة للأكسدة في غذاء ملكات النحل بعمر اليرقات ووقت الحصاد. جي أغري فود تشيم. 2007 ؛ 56: 11447-52.

36. Carmichael J، DeGraff WG، Gazdar AF، Minna JD، Mitchell JB. تقييم المقايسة اللونية شبه الآلية القائمة على التترازوليوم: تقييم اختبار الحساسية الكيميائية. الدقة السرطان. 1987 ؛ 47: 936-42.

. الدقة خلية الصباغ. 2001 ؛ 14: 328-36.

38. Martinez-Esparza M، Jimenez-Cervantes D، Solano F، Lonzano JA، JC CB. آلية تثبيط تكون الميلانين بواسطة عامل نخر الورم ألفا في خلايا الورم الميلانيني الفأري B16 / F10. Eur J Biochem. 1998 ؛ 255: 139-46.

39. Ding HY ، Chang TS ، Shen HC ، Tai SK. مثبطات التيروزيناز الفئران من Cynanchum Bungei وتقييم نشاط إزالة الصباغ في المختبر وفي الجسم الحي. اكسب الجلدية. 2011 ؛ 20: 720-4.

40. Takiwaki H، Serup J. قياس معاملات لون لويحات الصدفية عن طريق قياس الطيف الانعكاسي ضيق النطاق وقياس الألوان ثلاثي الأبعاد. فارماكول الجلد. 1994 ؛ 7: 145-50.

41. مونتغمري DC. تجارب ذات عامل واحد: تحليل التباين. في تصميم وتحليل التجارب. مونتغمري ، دي سي ، محررون ، جون وايلي وأولاده ، نيويورك ، 1991 ؛ 75-77.

42. Park HY، Wu C، Yonemoto L، Murphy-Smith M، Wu H، Stachur CM. يتوسط MITF تعبير بروتين كيناز Cb الناجم عن cAMP في الخلايا الصباغية البشرية. بيوكيم ج .2006 ؛ 395: 571-8.

43. Goding CR. Mitf من القمة العصبية إلى الورم الميلانيني: نقل الإشارة ونسخها في سلالة الخلايا الصباغية. تطوير الجينات. 2000 ؛ 14: 1712–28.

44. Kim DS، Park SH، Kwon SB، Li K، Youn SW، Park KC. (-) - يقلل Epigallocatechin -3- gallate و hinokitiol من تخليق الميلانين عن طريق تقليل إنتاج MITF. أرش فارم ريس. 2004 ؛ 27: 334-9.

45. Choi YK، RhoYK، Yoo KH، Lim YY، Li K، Kim BJ. آثار فيتامين سي مقابل الفيتامينات المتعددة على تكوين الميلانين: دراسة مقارنة في المختبر وفي الجسم الحي. المتدرب ياء ديرماتول. 2011 ؛ 49: 218-26.

46. ​​Dynek JN ، Chan SM ، Liu J ، Zha J ، Fairbrother WJ ، Vucic D. عامل النسخ المرتبط بالميكروفيلم هو منظم نسخي مهم لمثبط سرطان الجلد لموت الخلايا المبرمج في الأورام الميلانينية. الدقة السرطان. 2008 ؛ 68: 3124-32.

47. Curtin JA، Fridlyand J، Kageshita T، Patel HN، Busam KJ، Kutzner H، Cho KH، Aiba S، Bröcker EB، LeBoit PE، Pinkel D، Bastian BC. مجموعات مميزة من التغيرات الجينية في الورم الميلانيني. إن إنجل جي ميد. 2005 ؛ 353 (20): 2135–47.

48. Chan SH، Lim WK، Scott T Michalski ST، Lim JQ، NDB، Met-Domestici M، Young CNC، Vikstrom K، Esplin ED، Fulbright J، Ang MK، Wee J، Sittampalam K، Farid M، Lincoln SE، Itahana K، Abdullah S، BT، Ngeow J. الطب الجينومي npj. 2016 ؛ دوى: 10.1038 / npjgenmed.2016.15

49. هارتمان مل ، كزيز م. MITF في الورم الميلانيني: الآليات الكامنة وراء تعبيره ونشاطه. علوم الحياة مول الخلية. 2015 ؛ 72: 1249–60. دوى: 10.1007 / ث 00018-014- 1791-0.

50. Antonescu CR، Busam KJ، Francone TD، Wong GC، Guo T، Agaram NP، Besmer P، Jungbluth A، Gimbel M، Chen CT، Veach D، Clarkson BD، Paty PB، Weiser MR. ترتبط طفرة L576P KIT في الأورام الميلانينية الشرجية بتعبير بروتين KIT وهي حساسة لتثبيط كيناز معين. Int ياء السرطان. 2007 ؛ 121: 257–64.

51. عبد الدايم م ، فوناساكا واي ، كوموتو إم ، ناكاجاوا واي ، ياناغيتا إي وآخرون. علم الصيدلة الجيني لمستقبلات الجلوتامات الأيضية من النوع الفرعي 1 وتشكيل الورم الميلانيني الخبيث في الجسم الحي. ي ديرماتول. 2010 ؛ 37: 635–46.

52. Ohtani Y و Harada T و Funasaka Y و Nakao K و Takahara C et al. يعتبر النوع الفرعي لمستقبلات الجلوتامات الموجهة نحو الأيض -1 ضروريًا لنمو الورم الميلانيني في الجسم الحي. الأورام. 2008 ؛ 27: 7162–70.

53. Kim J، Kim Y، Yun H، Park H، Kim SY، Lee KG، Han SM، Cho Y. يعزز الغذاء الملكي هجرة الأرومات الليفية الجلدية ويغير مستويات الكوليسترول والسفينغانين في نموذج التئام الجروح في المختبر. نوتر ريس عملي. 2010 ؛ 4: 362–8.

54. Fujii A ، Kobayashi S ، Kuboyama N ، Furukawa Y ، Kaneko Y ، Ishihama S ، Yamamoto H ، Tamura T. زيادة التئام الجروح بواسطة غذاء ملكات النحل (RJ) في الجرذان المصابة بداء السكري بالستربتوزوتوسين. فارماكول Jpn J. 1990 ؛ 53: 331-7.

55. Koya-Miyata S، Okamoto I، Ushio S، Iwaki K، Ikeda M، Kurimoto M. تحديد عامل تعزيز إنتاج الكولاجين من مستخلص غذاء ملكات النحل وآليته المحتملة. Biosci Biotechnol Biochem. 2004 ؛ 68: 767-73.

لمزيد من المعلومات: david.deng@wecistanche.com WhatApp: 86 13632399501