يدعم المحتوى العالي من الكيرسيتين والكاتشين في عصير العنب Airen تطبيقه في إنتاج الغذاء الوظيفي

الرجاء التواصلoscar.xiao@wecistanche.comللمزيد من المعلومات

1 المقدمة

عصير العنب منتج مشتق من توت العنب. العنب - غذاء شائع في النظام الغذائي لمنطقة البحر الأبيض المتوسط ​​- يشمل الماء والسكريات والجلوكوز والفركتوز ، إلى جانب كميات صغيرة من المعادن والفيتامينات والمركبات العضوية الأخرى المعروفة باسم المواد الكيميائية النباتية. تنتمي المركبات الفينولية إلى هذه المجموعة من الجزيئات العضوية الموجودة في النباتات والفواكه والتي تُظهر خصائص مثيرة للاهتمام تتعلق بصحة الإنسان [1]. تم إثبات القدرة المضادة للأكسدة لهذه المركبات على نطاق واسع ، لا سيما فيما يتعلق بخصائصها المضادة للشيخوخة والالتهابات والقلب والمناعة [2-6]. علاوة على ذلك ، هناك أدلة تشير إلى أن الخصائص المضادة للميكروبات والمضادة للسرطان لمركبات البوليفينول المحددة مرتبطة بعائلات الفلافونويد والستيلبين [7]. كل هذه الأدلة عززت اهتمامًا أكبر بهذه الجزيئات النشطة بيولوجيًا فيما يتعلق باستخدامها كمغذيات من أجل تحسين جودة الأطعمة ، وخاصة الأطعمة الوظيفية المصممة للأطفال والرياضيين والأشخاص الذين يعانون من أمراض مختلفة.

الرجاء الضغط هنا لمعرفة المزيد

تمتلك إسبانيا تقليدًا عريقًا في ثقافة إنتاج الكروم والنبيذ. مجموعة Airen من Vitis vinifera هي الحبوب البيضاء المستزرعة الرئيسية (تحتل 215،546 هكتارًا) وتشكل 23 بالمائة من إجمالي مساحة مزارع العنب في البلاد و 50 بالمائة من الأصناف البيضاء [8]. العنب الأبيض الآخر المستزرع في إسبانيا ، مثل Verdejo و Gewurztraminer و Sauvignon Blanc ، يشكل 2 في المائة فقط من سطح الكروم المستزرع. Castilla-La Mancha هي المنطقة الإسبانية التي تضم أعلى منطقة كروم من مجموعة Airen ، والتي تستخدم بشكل أساسي لإنتاج النبيذ. ومع ذلك ، يتم استخدام ما يقرب من 20 في المائة من عنب Airen المزروع في إنتاج عصير العنب المركز ، وهو منتج مطلوب لعملية الفصل في إنتاج النبيذ ، وكذلك في صناعة الأغذية لإنتاج أغذية الأطفال والمشروبات ، بما في ذلك المشروبات الرياضية .

يُعد تضمين عصير العنب في المشروبات والأطعمة أمرًا ذا قيمة بسبب محتواه من البوليفينول وخصائصه المفيدة لتعزيز الصحة والوقاية من تطور الأمراض [9-11]. تعتمد كمية ونوع المركبات الفينولية الموجودة في عصير العنب على صنف العنب ، والمناخ ، وظروف زراعة الكروم ، وعملية الحصول على العصير. حتى الآن ، لم يتم دراسة هذه المركبات على نطاق واسع. توجد غالبية البوليفينول في بذور وجلود توت العنب ، بينما يحتوي اللب على أقل من هذه المركبات [3 ، 12 ، 13].استخراج الصلصا cistancheيحتوي الجلد والبذور على مادة البوليفينول المعقدة المسؤولة عن النكهات المرة والقابضة ، وهي خصائص لا تحظى بتقدير كبير في المنتجات الغذائية. يعتبر عصير العنب الذي يتم الحصول عليه من لب أنواع معينة من العنب منتجًا طبيعيًا له جزيئات نشطة بيولوجيًا ؛ يزداد الطلب على هذا العصير لاستخدامه في المشروبات غير الكحولية مثل العصائر ومشروبات الأطفال والمشروبات التصالحية ومخفوقات الطاقة [14 ، 15].

أظهرت الدراسات السابقة أن استهلاك الأطعمة الغنية بالبوليفينول يقلل من خطر الإصابة بالأمراض المؤكسدة الناجمة عن الإجهاد ، بسبب خصائصها المضادة للأكسدة ، مما يقلل من تراكم أنواع الأكسجين التفاعلية داخل الخلايا (ROS) التي تعد جزيئات مهمة في تطوير التنكس العصبي والقلب والأوعية الدموية ، والأمراض السرطانية [16،17] هناك دراسات وتجارب إكلينيكية في الجسم الحي باستخدام بوليفينول العنب والتي أظهرت آثارها المفيدة في علاج السرطان [18-20] وأمراض القلب والأوعية الدموية [21،22] علاوة على ذلك ، فإن البحث الذي يفحص أظهرت البوليفينول مثل ريسفيراترول أنها تتداخل مع العديد من المسارات الأيضية المتعلقة بتطور بعض أنواع السرطان وأمراض القلب التاجية [23 ، 24]. توجد أيضًا مادة البوليفينول الأخرى الموجودة في العنب ، مثل الكيرسيتين ومشتقاته ، وقد شاركت في إدارة الالتهاب والألم [25] ، وأظهرت خصائص مثيرة للاهتمام مضادة للسرطان و proapoptotic عند استخدامها في علاج أنواع معينة من السرطان [19،26 ، 27].

يمكن للكيستانش مكافحة الشيخوخة

في السنوات الأخيرة ، ميزت العديد من الدراسات محتوى البوليفينول في النبيذ. أظهر هذا البحث أن كمية هذه المركبات في النبيذ الأحمر أعلى بكثير منها في النبيذ الأبيض بسبب صنف العنب والعمليات التكنولوجية المتضمنة في إنتاجها [28 ، 29].تمديد الحياة cistancheومع ذلك ، تشير الدراسات الوبائية والمخبرية الحديثة إلى أن النبيذ الأبيض يمكن أن يكون له فوائد صحية مماثلة عند مقارنته بالنبيذ الأحمر [30-34]. علاوة على ذلك ، فقد ثبت أن قدرة مادة البوليفينول المضادة للأكسدة الموجودة في أصناف العنب الأبيض ليست مهملة ، مما يضيف قيمة إلى أي منتج مشتق من هذه الأصناف ، بما في ذلك عصير العنب [35]. أظهرت دراسة حديثة أن الجزيئات النشطة بيولوجيًا الموجودة في كل من عصير العنب والنبيذ مسؤولة عن الفوائد الصحية عند تضمينها في النظام الغذائي.cistanche nzومع ذلك ، لا ينصح بالكحول الموجود في النبيذ للأطفال وكبار السن والأشخاص الذين يعانون من أمراض مختلفة. نبيذ [37]. هناك العديد من الدراسات التي تبين الآثار الإيجابية لاستهلاك عصير العنب على صحة الإنسان ، بما في ذلك انخفاض مؤشر كتلة الجسم ، ونسبة السكر في الدم ، وأكسدة الدهون في البلازما ، وضغط الدم والكوليسترول الكلي ، بالإضافة إلى زيادة قدرة مضادات الأكسدة في الدم ومستويات البلازما من HDL. -c وصميم البروتين B [37-4]. تستمر هذه النتائج في إثارة الاهتمام بفهم أفضل لتكوين البوليفينول لعصير العنب والتأثيرات المفيدة على الصحة عند تضمينها في النظام الغذائي اليومي [12 ، 14 ، 45].

تنتمي معظم المركبات الفينولية الموجودة في العنب الأبيض إلى المجموعة غير الفلافونويدية ، والتي تتكون أساسًا من الأحماض الفينولية (حمض الغاليك ، والأحماض الأولية ، والحقن ، والفانيليك ، والفلافونويد) ، والفلافونويدات ، بما في ذلك مركبات الفلافونول (كاتشين ، إيبيكاتشين ، بروسيانيدينز وأوليغومرات أعلى) و الفلافونول (كيرسيتين وخمسة جلايكونات أخرى ، بشكل رئيسي على شكل جليكوسيدات). تم الإبلاغ عن أن كل هذه المركبات الفينولية لها خصائص واقية للقلب ، وقائية للأعصاب ، ومضادة للسرطان ، ومضادة للأكسدة ، ومضادة للالتهابات ، ومضادة للميكروبات [3،4،46] ، مما يدعم هدف الدراسة الحالية لتحديد تركيبة البوليفينول لعصير العنب Airen ، وهو منتج في ارتفاع الطلب في صناعة المواد الغذائية. كان الهدف الرئيسي من هذا العمل هو توصيف محتوى البوليفينول في عصائر عنب Airen الطبيعية والمركزة المنتجة في منطقة Castilla-La Mancha الإسبانية. لهذا الغرض ، تم تحليل عينات عصير العنب من أربعة أصناف من العنب الأبيض (Airen و Sauvignon Blanc و Verdejo و Gewurztraminer) والصنف الأحمر Tempranillo.

2. المواد والأساليب

2.1 المواد الكيميائية والكواشف

تم شراء المذيبات المستخدمة في استخلاص البوليفينول وتحليل مواصفات الكتلة الكروماتوجرافية السائلة (LC-MS / MS) والميثانول والأسيتونتريل وحمض الفورميك من شركة Merck (دارمشتات ، ألمانيا). (DPPH) ، الذي يستخدم لردع -- القدرة المضادة للأكسدة ، تم شراؤه من Thermo Fisher (Kandel ، ألمانيا). البوليفينول المستخدم كمعايير ، حمض أمينوبنزويك ، حمض أسيتيل ساليسيليك ، حمض كافيك ، حمض الكلوروجينيك ، حمض إيلاجيك ، حمض الغاليك ، حمض ب-كوماريك ، حمض بروتوكاتيكويك ، حمض الساليسيليك ، حمض الفيروليك ، حمض الفانيليك ، أبيجينيك ، إبيكاتيشين ، إيسكوليتين تم شراء hydrate و isorhamnetin و kaempferol و luteolin و polydatin و quercetin و resveratrol و rutin و syringaldehyde و viniferin من Sigma-Aldrich (مدريد ، إسبانيا). تمت تنقية مياه Mili-Q المستخدمة في جميع المحاليل باستخدام نظام تنقية المياه Merck Millipore Milli-QTM المرجعي فائق النقاء طراز Z ​​00 QSVC01 (دارمشتات ، ألمانيا).

2.2 عينات عصير العنب واستخراج البوليفينول

تم تحليل العصائر الطازجة من أربعة أنواع مختلفة من العنب الأبيض من Vitis oinifera (Airen و Sauvignon Blanc و Gewürztraminer و Verdejo) والصنف الأحمر Tempranillo. كانت جميع كروم العنب موجودة في Castilla-La Mancha ، إسبانيا ، وتم توفير عينات العصير من قبل مصنع النبيذ Vinicola de Tomelloso (Tomelloso ، إسبانيا) خلال موسم حصاد 2017 و 2018. بمجرد تنفيذ مراقبة الجودة من قبل اختصاصي الخمور في مصنع الخمرة ، تم جمع العينات وتجميدها في درجة -20 حتى معالجتها في المختبر.

تم الحصول على عينات عصير العنب المركز من شركة Mostos Es-panioles SA الواقعة في مدينة Tomelloso بإسبانيا. تتكون عملية التركيز من تسخين عصير العنب عند 95 درجة لتبخير الماء ، وزيادة تركيز السكريات من 19 إلى 65 درجة بريكس (غرام من السكر لكل 1 0 0 مل من العصير). للحصول على عصير عنب مركز متغير اللون ، تم إجراء خطوة ترشيح من خلال غشاء أنبوبي نيتروسليلوز يبلغ قطره مسام 0. 45- ميكرومتر (بيرمير ، بادوفا ، إيطاليا) ، قبل التركيز. سمحت هذه العملية بإزالة المركبات المسؤولة عن اللون ، بالإضافة إلى المعادن المعدنية ، والأيونات مثل الحديد والمغنيسيوم والكالسيوم أو البوتاسيوم ، وربما الجزيئات النشطة بيولوجيًا الأخرى الموجودة في العصير [9 ، 15]. تم جمع العينات الصناعية في ثلاث مراحل من عملية التركيز في كل من العصير المركز الطبيعي وغير الملون (NCJ و DCJ ، على التوالي): الأولي عند 19 Bx (NCJI9 / DCJ19) ، والمتوسط ​​عند 30 Bx (NCJao / DCJao) والمنتج النهائي عند 65 درجة Bx (NCJ65 / DCJ65). يحتوي العصير المركز على سكر أكثر 3.5 مرة من عصير العنب الطازج.

تم إجراء استخلاص البوليفينول باتباع الإجراء الموصوف أدناه ، بناءً على تلك الموصوفة سابقًا لاستخراج هذه المركبات من عناقيد العنب وجلودها وبذورها [10،11،47]. تم تحسين الطريقة باستخدام البوليفينول القياسي المتاح تجاريًا. تم استخلاص هذه المركبات بمذيبات مختلفة: الميثانول والإيثانول والأسيتون ، جميعها مخففة بنسبة 100٪ و 50٪ بماء Mili-Q. بعد ذلك ، تم قياس كمية البوليفينول عن طريق القياس الطيفي عند 280 نانومتر ، مما يدل على أن الاستخراج بالميثانول النقي لم ينتج عنه فقد جزيئي كبير.

تم تجميد عينات عصير العنب الطازج والمركز من {0}. 2 مل بالتجميد ، واستخدمت المصفوفة الجافة الصلبة كركيزة للاستخلاص. تم إجراء استخراج البوليفينول بإضافة 1.0 مل من الميثانول إلى المصفوفة الصلبة (نسبة 15 فولت / وتم الاستخلاص على مدى ساعتين عند 4 درجات مع خلط دوراني لطيف.cistanche حجم القضيبتم بعد ذلك طرد العينات عند 13 و 000 دورة في الدقيقة و 4 درجات ، وتم استعادة المادة الطافية وترشيحها باستخدام 0. مرشح غشاء 45 ميكرومتر متعدد رباعي فلورو الإيثيلين (ماء PTFE) تم شراؤه بواسطة شركة ميرك (دارمشتات ، ألمانيا) . تم تجميد مستخلصات البوليفينول التي تم الحصول عليها عند درجة -80 حتى التحليل بواسطة LC-MS / MS. تم تحليل اثني عشر مستخلصاً مختلفاً من كل عينة من عصير العنب في هذه الدراسة.

2.3 تقدير إجمالي البوليفينول

تم تقدير كمية البوليفينول الكلي في المستخلصات وعينات عصير العنب بواسطة القياس الطيفي عند 280 نانومتر باستخدام حمض الغال بتركيزات معروفة (تتراوح بين 2 و 20 مجم / لتر) كمرجع. تم استخدام منحنى معايرة بحمض الغال (y =0. 0179x -0. 0376 ؛ R 2=0. 9998) لتحديد محتوى البوليفينول في مكافئات حمض الغاليك / مجم / لتر (GAE).

2.4.DPPH مقايسة الكسح الجذري

تم تحديد نشاط الكسح الجذور الحرة لعينات عصير العنب ومستخلصات البوليفينول باتباع الإجراء الموصوف بواسطة Brand-Williams [48] مع بعض التعديلات [49]. تم استخدام المركب المؤكسد DPPH كركيزة ، وتم حساب قيم IC50 بالتعبير عن تركيز (مجم / لتر) من البوليفينول (أو المستخلص) الذي ينظف جذور DPPH بنسبة 50 بالمائة. تم إجراء الاختبارات في 96- ألواح البئر （Nunc Delta Surface مع 200 ميكرولتر من DPPH 60 ميكرومتر مذاب في الميثانول ، مع كميات متغيرة من عصير العنب أو مستخلصات البوليفينول （0-20 ميكرولتر）. تم تحضين المخاليط لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة في الظلام ، وتبع التفاعل قياسات الامتصاص عند 562 نانومتر في مقياس الطيف الضوئي TECAN Sunrise (زيورخ ، سويسرا). أدرج حمض الجاليك في الفحص كعنصر تحكم. تشير أدنى قيم ICso إلى أعلى قدرة مضادة للأكسدة في العينة.

2.5. تحليل LC-MS / MS

تم تحليل مستخلصات البوليفينول على نظام قياس الطيف الكتلي QTrap 45 {{1 {14}}} 0 (Sciex ، دارمشتات ، ألمانيا) مزود بمصدر تأين بالرش الكهربائي Turbo V. تم الحصول على البيانات باستخدام برنامج Analyst 1.6 (Sciex ، Darmstadt ، ألمانيا). تم ربط عملية قياس الطيف الكتلي بنظام Agilent 1260 series Infinity LC (Agilent ، Las Rozas ، مدريد ، إسبانيا) بمضخة رباعية ، جهاز أخذ العينات الأوتوماتيكي وفرن عمودي. تم إجراء الكروماتوغرافيا عند 30 درجة باستخدام عمود KromasilC18 (250 × 50 مم ، معرف 4.6 ميكرومتر) باستخدام طور متحرك مكون من حمض الفورميك 0.1 بالمائة (أ) وأسيتونيتريل (ب). شطف متدرج بمعدل تدفق 400 ميكرولتر / دقيقة تم تطبيقه∶ 0-5 دقيقة ، 0 بالمائة ب ؛ 5-8 دقيقة ، 0-20 بالمائة ب ؛ 8-11 دقيقة ، 20-27 بالمائة ب ؛ {{19} } دقيقة ، 27-35 بالمائة ب ؛ 13-20 دقيقة ، 35-45 بالمائة ب ؛ 20-23 دقيقة ، 45-55 بالمائة ب ؛ 23-28 دقيقة ، {{ 26}} بالمائة ب ؛ 28-32 دقيقة ، 63-70 بالمائة ب ؛ 32-37 دقيقة ، 70-80 بالمائة ب ، 37-40 دقيقة ، 80 بالمائة ب ؛ وعاد إلى الظروف الأولية في 5 دقائق. كان حجم حقن العينات 5 ميكرولتر.

تم إجراء التأين بالرش الكهربائي في 45 0 0 فولت سلبي و 5500 فولت وضع إيجابي إعداد معلمات لدرجة الحرارة ، غاز الستارة ، غاز مصدر أيوني 1 والغاز 2 كانت: 500 درجة ، 20 رطل / بوصة مربعة ، 20 رطل / بوصة مربعة عند التدفق 20 لتر / دقيقة . تم الحصول على البيانات باستخدام وضع MRM (مراقبة التفاعل المتعدد). تم تلخيص معلمات قياس الطيف الكتلي MRM DP (إمكانية إزالة الكتلة) ، CXP (احتمال خروج خلية الاصطدام) ، CE (طاقة التصادم) ، EP (إمكانية المدخل) في الجدول SL للمواد التكميلية. تم دمج Chromatograms مع برنامج MultiQuant 1.0.3. (Sciex ، Darmstadt ، ألمانيا).

تم إجراء منحنيات المعايرة باستخدام المعايير التجارية ، كما هو موضح سابقًا (القسم 2.1. المواد الكيميائية والكواشف) ، في النطاق 1 ميكروغرام / لتر -10 مجم / لتر مع إضافة 5 ميكرولتر من حمض أسيتيل الساليسيليك كمحلول عمل داخلي قياسي （50 ميكروغرام / لتر）. تم تحضير مجموعتين من عينات منحنى المعايرة في يومين مختلفين. تم تطبيع الإشارات الفردية ، بناءً على الوزن الإجمالي ، لمراعاة تغير العينة ومناطق الذروة الطبيعية للمعيار الداخلي.

تم تحليل جميع العينات في ثلاث نسخ متماثلة خلال اليوم ، وتكرر التحليل ثلاث مرات على مدار 6- شهر (بين اليوم) ، وتم استخدام حد الكشف (LOD) وحد القياس الكمي (LOQ) لتحديد الخطية ، وتم تلخيص جميع البيانات في الجدول S2 للمواد التكميلية.

2.6 التحليل الإحصائي

تم إجراء التحليل الإحصائي للتركيزات لتحديد البوليفينول المحدد باستخدام SPSS [5 0] و R [51]. وتضمنت الإحصائيات الوصفية: المتوسط ​​، والوسيط ، والوسيلة ، والانحراف المعياري. تم إجراء اختبارات Shapiro-Wilk و Bartlett للتحقق من الحالة الطبيعية والمثلية الجنسية للبيانات ، على التوالي. بعد ذلك ، تم استخدام اختبارات ANOVA واختبارات Tukey اللاحقة (مع تصحيح ويلش) لمقارنة كمية البوليفينول في عصائر العنب المختلفة. نظرًا للدقة العالية لقياسات LC-MS / MS ، كانت الانحرافات المعيارية التي تم الحصول عليها صغيرة جدًا بحيث تم استخدام قيمة حرجة قدرها 0.01 لتقييم الأهمية الإحصائية.

تم دمج نتائج القيمة p مع حظيرة التغيير - التي تُستخدم عادةً في علم الأيض [52] - لتحديد الصلة الوظيفية لاختلافات تركيز البوليفينول في عينات العصير. قيمة أضعاف التغيير هي النسبة بين تركيز كل بوليفينول المحدد في عصائر العنب المختلفة ، والتركيز في عصير العنب Airen ، والذي تم استخدامه كمرجع. تم تحديد مستويات الملاءمة الوظيفية للاختبارات الإحصائية على أنها قيم p <0. 01="" ،="" إلى="" جانب="" أضعاف="" قيم="" التغيير="" الموضحة="" في="" الجدول="" 1="" ،="" تم="" تحديد="" المستويين="" 3="" و="" 4="" على="" أنهما="" المستويات="" ذات="" اختلافات="" التركيز="" ذات="" الصلة="" من="" نقطة="" عرض="" وظائف="" الغذاء="" والمغذيات="" ،="" بينما="" يمثل="" المستويان="" 1="" و="" 2="" اختلافات="" صغيرة="" نسبية="" لا="" يمكن="" اعتبارها="" ذات="">

3. النتائج

3.1 إجمالي محتوى الفينول ونشاط الكسح من المستخلصات

حدد تقدير إجمالي البوليفينول باستخدام التحليل الطيفي أن أعلى تركيز للمركبات حدث في عصير العنب Tempranillo ومستخلصاته (الجدول 2). عند مقارنة الأصناف البيضاء ، كان عصير العنب Gewürztraminer يحتوي على أعلى محتوى من مادة البوليفينول ، يليه عصير العنب Sauvignon Blanc و Airen و Verdejo. كان التركيز المقدر لمجموع البوليفينول في عصير العنب Airen مشابهًا لـ Sauvignon Blanc ، أعلى بنسبة 35 بالمائة من التركيز المقدر في Verdejo و 33 بالمائة أقل من الكمية المكتشفة في عصير العنب Gewürztraminer.

كانت الكمية المقدرة من البوليفينول المكتشفة في المستخلصات أقل مما كانت عليه في عصير العنب الطازج ، مما يشير إلى فقدان البوليفينول أثناء عملية الاستخراج (الجدول 2). تباينت خسارة البوليفينول وفقًا لصنف العنب ، وقدرت بنحو 7.5 في المائة في فيرديجو ، و 15 في المائة في أرين ، و 19.4 في المائة في جيورزترامينير ، و 24.7 في المائة في ساوفيجنون بلانك ، و 33.2 في المائة في تمبرانيلو. يمكن أن تعزى هذه الاختلافات إلى تركيبات البوليفينول المختلفة لعصير العنب. في الواقع ، من المعروف أن عصير العنب الأحمر Tempranillo غني بالبروانثوسيانيدينات والعفص ، وكلاهما عبارة عن بوليفينول معقد غير قابل للذوبان في الميثانول. في عصير العنب الأبيض ، كانت نسبة الخسارة العالية المحددة في Sauvignon Blanc (24.7٪) مفاجئة.

تم تقدير القدرة المضادة للأكسدة لعصير العنب والمستخلصات المدروسة باستخدام طريقة DPPH الموضحة في قسم المواد والطرق. تم اكتشاف أعلى نشاط لكسح DPPH (قيمة ICso أقل) في عصير العنب Tempranillo ، متبوعًا بـ Gewürztraminer و Sauvignon Blanc و Airen و Verdejo (الجدول 2). كان نشاط الكسح المحدد لمستخلصات البوليفينول أقل (متوسط ​​انخفاض 15 بالمائة) في مستخلصات العنب الأبيض ، وأقل بمتوسط ​​27 بالمائة في مستخلص تمبرانيلو - نتيجة متوافقة مع الانخفاض في تركيز البوليفينول الكلي ( الجدول 2).

3.2 تحديد وتقدير البوليفينول بواسطة تحليل LC-MS / MS

تم إجراء توصيف البوليفينول في مستخلصات عصير العنب عن طريق تحليل LC-MS / MS.مسحوق cistancheتم إنجاز فصل المركبات بواسطة LC وفقًا لشروط الشطف الموضحة في قسم المواد والطرق. من أجل القياس الكمي بواسطة MS ، تم إنشاء قاعدة بيانات لـ 56 بوليفينول العنب مع معلمات MS الضرورية لتحديدها باستخدام البيانات المنشورة مسبقًا [53-67] (المواد التكميلية ، الجدول S3). تم اختيار ثلاثة وعشرين من هذه البوليفينول للدراسة ، وتم تحديد 15 في المقتطفات (المواد التكميلية ، الجدول S2). تنتمي هذه البوليفينول إلى العائلات التالية: أحماض هيدروكسي سيناميك (كافيك ، كلوروجينيك وكوماريك) ، أحماض هيدروكسي بنزويك (ثنائي هيدروكسي بنزويك ، جاليك ، بروتوكاتيكويك ، ساليسيليك ، وفانيليك) ، ستيلبين (ريسفيراترول وبوليداتين) ، فلافونويد ، إيزوريتين ، كاترين ) ، و phenylpropanoids (esculetin). تم إجراء القياس الكمي باستخدام مادة البوليفينول دون أي تعديل كيميائي أو أزمرة.

3.2.1. البوليفينول في مستخلصات عصير العنب

تم تحليل ثلاث عينات بيولوجية من كل عصير عنب في ثلاث نسخ ، وقورنت متوسط ​​قيم التركيز التي تم الحصول عليها بواسطة LC-MS / MS لكل بوليفينول في مستخلصات عصير العنب المختلفة. تم استخدام مقتطف من مجموعة Airen كمرجع. أجرينا ANOVA واختبارات Tukey اللاحقة لتحديد ما إذا كانت الفروق الملحوظة بين عصائر العنب ذات دلالة إحصائية. في معظم الحالات ، أسفرت الاختبارات عن فروق ذات دلالة إحصائية ، على الرغم من أن حجم الاختلافات كان صغيرًا باستمرار. يمكن تفسير ذلك من حيث الانحرافات المعيارية الصغيرة بسبب الدقة العالية واستنساخ تقنية LC-MS / MS المستخدمة للقياسات (الجدول 3). تم حساب قيمة التغيير أضعاف لكل بوليفينول تمت دراسته فيما يتعلق بمستخلص Airen ، وتم تحديد الصلة الوظيفية وفقًا للجدول 1.

تم تأكيد قابلية التكاثر والتنوع من خلال التجارب اليومية والتجارب التي أجريت في ثلاث مناسبات أخرى على مدار 6 أشهر (بين اليوم). استكمالًا لمعلمات التحقق ، تم تحديد LOD و LOQ للطريقة التحليلية ، وهي حدود ليست خاصة بـ LC-MS / MS ، ولكن للطريقة التحليلية الكاملة.

تمت دراسة ثلاثة أحماض هيدروكسي سيناميك. تم الكشف عن حمض الكلوروجينيك في جميع مستخلصات عصير العنب الخمسة التي تم تحليلها. كان Tempranillo هو الصنف ذو أعلى تركيز و Sauvignon Blanc هو النوع الذي يحتوي على أقل كمية ، وكلاهما بمستوى صلة وظيفي 1 (الجدول 3). كان الحمضان الآخران اللذان تم تحليلهما هما حمض الكافيين ، الذي تم اكتشافه في جميع الأصناف باستثناء Sauvignon Blanc ، وحمض الكوماريك ، والذي تم اكتشافه فقط في مستخلصات Airen و Verdejo. كانت تركيزات هذه المركبات في المقتطفات متشابهة جدًا ، ولم يتم تحديد أي صلة وظيفية.

تمت دراسة خمسة أحماض هيدروكسي بنزويك. كانت التركيزات المكتشفة من أحماض هيدروكسي بنزويك ، وبروتوكاتيكيك ، وحمض الساليسيليك والفانيليك متطابقة تقريبًا في جميع المستخلصات ، مع مستوى ملاءمة وظيفي 1. لم تظهر تراكيز حمض الغاليك أي دلالة إحصائية بين عصائر العنب المدروسة (الجدول 3).

فيما يتعلق بالستيلبين التي تم فحصها ، كانت تركيزات كل من ريسفيراترول وبوليداتين متشابهة جدًا في جميع أنواع العنب ، على الرغم من أن ريسفيراترول كان غائبًا بشكل غير متوقع في مستخلص Sauvignon Blanc. لم يكن لفروق التركيز التي لوحظت في المقتطفات بأي حال من الأحوال صلة وظيفية (المستوى 1).

تم الكشف عن أقوى الاختلافات في عائلة الفلافونويد. وتجدر الإشارة إلى أن isorhamnetin لم يتم اكتشافه في مستخلص Sauvignon Blanc ، على الرغم من أن التركيزات في عصائر العنب الأربعة الأخرى كانت قابلة للمقارنة (الجدول 3 ، الشكل 1). فيما يتعلق بإبيكاتشين ، تم اكتشاف أعلى تركيز في Gewurztraminer ، يليه Airen ، Sauvignon Blanc باعتباره عصير العنب بأقل كمية (الجدول 3). كانت قيمة الملاءمة الوظيفية 2 لجميع الأصناف ، باستثناء Tempranillo. في حالة كيرسيتين ، تم العثور على أعلى تركيز في مستخلصات Airen و Gewürztraminer ، مع تركيزات أقل لـ Verdejo (مستوى الأهمية الوظيفية 2) ، و Sauvignon Blanc و Tempranillo (مستوى الأهمية الوظيفية 3) (الجدول 3 ، الشكل 1). ومع ذلك ، تم الكشف عن أكبر تباين في التركيز بين المستخلصات المختلفة التي تم تحليلها لمضادات الاكسدة. تم اكتشاف أعلى تركيز من الكاتشين في مستخلص Airen ، يليه Gewürztraminer و Tempranillo و Verdejo و Sauvignon Blanc. في الواقع ، أظهرت الاختلافات في التركيزات مستوى ملاءمة وظيفيًا قدره 3 لجميع الأصناف باستثناء Sauvignon Blanc ، الذي كان له صلة وظيفية 4 (الجدول 3 ، الشكل 1). كان Esculetin هو البوليفينول الوحيد الذي تم قياسه كمياً من عائلة phenylpropanoid. أظهر هذا المركب أدنى تركيز في جميع العينات وقيمة الأهمية الوظيفية (المستوى 1) ، مما يشير إلى عدم وجود فروق ذات صلة (الجدول 3).

Together, these results indicated that the global profiles of the 15 polyphenols analyzed in the Airen, Gewurztraminer, Sauvignon Blanc, Verdejo, and Tempranillo grape juice extracts were very similar. However, the statistical analyses indicated that the majority (>90 في المائة) من فروق التركيز المكتشفة في العينات كانت ذات دلالة إحصائية ؛ وهي نتيجة ، كما أوضحنا سابقًا ، يمكن أن ترجع إلى دقة واستنساخ التقنية المستخدمة (LC-MS / MS). المعيار ، 17 في المائة فقط من الفروق ذات الدلالة الإحصائية تعتبر ذات صلة وظيفية. تتوافق هذه النتيجة مع التحليل النوعي لملف البوليفينول العالمي لمستخلصات عصير العنب الموضحة في الشكل 2 ، والذي يوضح بوضوح أن اثنين فقط من البوليفينول ، كيرسيتين وكاتشين ، يبرزان في عصائر العنب Airen و Gewurztraminer فوق الآخرين. إن كمية الكيرسيتين في هذه العصائر متشابهة جدًا وهي أعلى من الكمية المكتشفة في باقي عصائر العنب (زيادة تتراوح بين 25 بالمائة و 65 بالمائة) ، وفي حالة الكاتشين ، تم العثور على أعلى تركيز في Airen عينات ، تعبر عن مستويات أعلى بنسبة 30 بالمائة من الكمية المكتشفة في Gewurztraminer ، ومستويات أعلى بين 43 بالمائة و 68 بالمائة من الكمية المكتشفة في المستخلصات الأخرى.

تم استخراج هذه المقالة من Foods 2021، 10، 1532. https://doi.org/10.3390/foods10071532 https://www.mdpi.com/journal/foods