مغلي Tongluo Digui يعالج إصابة الكلى في الفئران المصابة بداء السكري من خلال تعزيز الالتهام الذاتي لخلايا القدم

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

هان جياروي ، زانغ ياجي ، شي شيوجي ، بينغ زينينغ ، شينغ يوفينغ ، بانغ شينجين

الملخص

هدف:

للتحقيق في آثار مغلي Tongluo Digui على إصابة الكلى والالتهام الذاتي الناجم عن الستربتوزوتوسين في الفئران المصابة بداء السكري.

طُرق:

تم تقسيم ذكور جرذان سبراج داولي بشكل عشوائي إلى ست مجموعات: عادية ، نموذجية ، مغلي Tongluo Digui (جرعة عالية ومتوسطة ومنخفضة) ، وفالسارتان. تم حقن الستربتوزوتوسين داخل الصفاق لتكرار النموذج الحيواني المصاب بالسكري. بعد 8 أسابيع ، تم تقييم البيلة البروتينية لتأسيس نموذج اعتلال الكلية السكري. كانت تدار العلاجات يوميا عبر الطريق داخل المعدة. بعد 16 أسبوعًا من التزقيم ، حددنا تركيز بروتين البول على مدار 24 ساعة ، ونسبة الجلوكوز في الدم ، والكرياتينين في الدم ، وتركيزات نيتروجين اليوريا. بعد ذلك ، تم التضحية بالفئران ، وتم حصاد الكلى وتلطيخها بحمض شيف الدوري لتقييم التغيرات المرضية في الكبيبات ، بما في ذلك الخلايا الكبيبية عن طريق الفحص المجهري الإلكتروني. تم استخدام تحليل اللطخة الغربية لتحديد تعبير البروتين nephrin و podocin و p62 و beclin -1 و LC3Ⅱ / Ⅰ و p-mTOR / mTOR في أنسجة الكلى.

النتائج:

مقارنة مع المجموعة النموذجية ، ارتبط مغلي Tongluo Digui بانخفاض في تركيز بروتين البول لمدة 24 ساعة ، وجلوكوز الدم ، والهيموغلوبين A1c ، وكرياتينين المصل ، وتركيزات نيتروجين اليوريا ، وبروتين المصل الكلي ، والألبومين. في الوقت نفسه ، تم تقليل اتساع المساريق المساريقي واندماج عمليات القدم ، ولم يتم زيادة سماكة الغشاء القاعدي الكبيبي بشكل كبير ، كما تم زيادة عدد الخلايا البادئة وعدد البلعمة الذاتية في الخلايا البودوسية. علاوة على ذلك ، تم تنظيم التعبير عن بروتين nephrin و podocin و LC3Ⅱ و beclin -1 في أنسجة الكلى ، بينما تم تقليل التعبير عن البروتين p62 وتم منع فسفرة mTOR.

استنتاج:

قد يمنع مغلي Tongluo Digui تطور اعتلال الكلية السكري عن طريق تثبيط فسفرة mTOR ، وبالتالي زيادة الالتهام الذاتي لحماية خلايا الأقدام وتقليل البيلة البروتينية.

الكلمات الدالة:اعتلال الكلية السكري. الالتهام الذاتي. بودوسيت. مغلي Tongluo Digui

فوائد cistanche الجذعيةإلى عن علىوظيفة الكلى

المقدمة

يُعد اعتلال الكلية السكري (DN) أحد مضاعفات الأوعية الدموية الدقيقة الحادة لمرض السكري ، حيث يعاني 30 بالمائة -40 من مرضى السكري من أمراض الكلى. مع زيادة معدل الإصابة بمرض السكري ، أصبح DN السبب الرئيسي لمرض الكلى في نهاية المطاف في جميع أنحاء العالم.

يعد تلف خلايا بودوسيت سببًا مهمًا لتطور DN. تلعب الالتهام الذاتي ، كخلية متمايزة نهائيًا ، دورًا مهمًا في الحفاظ على الوظيفة الفسيولوجية للخلايا البودوسية. البيئة ، يتم منع الالتهام الذاتي للخلية podocyte ، مما يشير إلى أن الالتهام الذاتي للخلية podocyte يلعب دورًا مهمًا في التسبب في DN.5 DN ينتمي إلى فئات "Xiao Ke" و "Guan Ge" و "الوذمة" في الطب الصيني التقليدي. نظرية الطب الصيني التقليدي هي أن ركود الدم ويين نقصهي أهم أسباب DN.6 لذلك ، يجب أن يعزز علاج DN الدورة الدموية ويغذي الين ، وقد تم إنشاء Tongluo Digui ديكوتيون لهذا الغرض. لقد وجدنا سابقًا أن مغلي Tongluo Digui كان له تأثير علاجي مفيد في DN. في هذه الدراسة ، كنا نهدف إلى استخدام نموذج الفئران DN من النوع 1 المستحث بالستربتوزوتوسين (STZ) لتقييم تأثير مغلي Tongluo Digui على الإصابة الكلوية ، والالتهام الذاتي ، ومسار إشارات mTOR. استكشفنا أيضًا الآلية الجزيئية الكامنة وراء مغلي Tongluo Digui في تأخير تطور DN وقدمنا ​​دليلًا على الوقاية والعلاج السريري لـ DN.

المواد والأساليب

الحيوانات

جرذان محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF) Sprague-Dawley [n=60 ، ذكور ، (150 ± 10) جم ؛ رقم شهادة التأهيل: تم شراء SCXK (Yu) 2017-0001] من مركز Henan التجريبي للحيوانات (Zhengzhou ، الصين). دورة إضاءة قياسية (14 ساعة ضوء ، 10 ساعات ليلاً) ، درجة حرارة داخل الباب (23 ± 2) درجة ، رطوبة (40 بالمائة -50 بالمائة) ، مأوى (ثلاثة حيوانات لكل قفص) ، تغذية (علف معقم و مياه الشرب). اكتملت التجربة في مختبر مركز التصوير الخلوي في مستشفى Henan للطب الصيني التقليدي (Zhengzhou ، الصين). أجريت جميع التجارب وفقًا لدليل رعاية واستخدام حيوانات المختبر الذي نشرته المعاهد الوطنية للصحة.

المخدرات

تم شراء كبسولات فالسارتان (فال) من شركة Novartis Pharma Schweiz AG (X2307 CN-b ، بكين ، الصين). يتكون مغلي Tongluo Digui من Shuichi (Hirudo) 12 جم ، Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) 30 جم ، Dihuang (Radix Rehmanniae) 20 جم ، Huangqi (Radix Astragali Perparata) 20 جم ، Danggui (Radix Angelicae Sinensis) 30 جم Alismatis) 10 جم ، Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) 15 جم ، Gancio (Radix Glycyrrhizae) 6 جم. تم شراء الأعشاب الصينية من مستشفى Henan للطب الصيني التقليدي (Zhengzhou ، الصين).

تصميم تجريبي

تم تقسيم الجرذان بشكل عشوائي إلى ست مجموعات ، كل منها تتكون من 10 جرذان: مجموعة التحكم (Ctrl) ، مجموعة نموذج DN (STZ) ، نموذج DN مع مجموعة معالجة Val (Val) ، نموذج DN مع مجموعة علاج Tongluo Digui ديكوتيون عالية الجرعة (HTL) ، نموذج DN مع مجموعة العلاج بجرعة متوسطة من Tongluo Digui ديكوتيون (MTL) ونموذج DN مع مجموعة العلاج بجرعة منخفضة من Tongluo Digui ديكوتيون (LTL). تم التضحية بمجموعات الفئران الست في 16 أسبوعًا بعد جمع الكلى والتزقيم.

تم إعطاء Val (1 0 mg · kg － 1 · d － 1) و Tongluo Digui ديكوتيون بثلاث جرعات مختلفة بالتزقيم مرة واحدة يوميًا لمدة 16 أسبوعًا. استندت الجرعات المعطاة إلى معادلة التحويل لجرعات الدواء بين الحيوانات والبشر. جرعة الجرذان (مجم / كجم)=جرعة الإنسان البالغ (مجم / كجم) × معامل التحويل (6.25). أعطيت الجرعات العالية والجرعة المتوسطة والجرعة المنخفضة من مغلي Tongluo Digui بتزقيم معدي قدره 5.4 و 2.7 و 1.35 جم · كجم - 1 · د - 1 ، على التوالي. تم وزن الفئران أسبوعيا. تم جمع البول 24- ساعة باستخدام أقفاص استقلابية في نهاية 0 و 12 و 24 أسبوعًا. بعد انتهاء العلاج (في الأسبوع 24) ، تم تخدير الفئران عن طريق الحقن تحت الجلد لهيدرات الكلورال ، وتم حصاد عينات أنسجة الكلى والدم وتخزينها عند درجة 80-. كان للجرذان حرية الوصول إلى نظام غذائي طبيعي للحيوانات المختبرية والمياه النظيفة (باستثناء ما هو موصوف أدناه).

مصنع cistanche

إنشاء نموذج DN

تم استخدام STZ (Sigma ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية) للحث على مرض السكري كما هو موضح سابقًا. 7 كان وصول جميع الفئران الستة 0 إلى المياه محدودًا لمدة 12 ساعة قبل التجارب. من بين هؤلاء ، تم إعطاء 50 فأر حقنة واحدة داخل الصفاق من STZ 60 مجم / كجم مذاب في محلول السترات (0.1 مول / لتر ، درجة الحموضة 4.5). تم تأكيد مرض السكري عن طريق قياس تركيزات الجلوكوز في الدم بعد 72 ساعة من حقن STZ. الحيوانات التي تحتوي على تركيز جلوكوز أكبر من أو يساوي 16.7 مليمول / لتر لمدة ثلاثة أيام متتالية تم اعتبارها مصابة بداء السكري. بعد 8 أسابيع ، تم إيواء الفئران في أقفاص أيضية منفصلة ، وتم جمع البول لمدة 24 ساعة لقياس الألبومين المِكروي في البول (الإمارات العربية المتحدة). تم تأكيد نموذج DN عند الحصول على UAE أكبر من أو يساوي 30 مجم / 24 ساعة.

المؤشرات البيوكيميائية

تم استخدام تقييمات المصل والبول لتقييم وظيفة الكلى للحيوانات. تم تقييم بول الفئران باستخدام القفص الأيضي. تم الحصول على عينات دم الفئران باستخدام طريقة قطع الذيل ، وتم تجميد عينات الدم والبول عند -80 درجة حتى الاستخدام. تم قياس تركيزات الكرياتينين في الدم ، نيتروجين اليوريا في الدم ، الألبومين ، وبروتين البول عن طريق المقايسة المناعية الإشعاعية. تم قياس مستويات الهيموغلوبين A1c (HbA1c) والببتيد C والأنسولين باستخدام HbA1c ELISA Kit (Crystal Chem INC ، قرية Elk Grove ، IL ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، C-peptide Elisa kit (Kainuo Bio Ltd. ، بكين ، الصين) والأنسولين طقم إليسا (شركة ميرك ميليبور المحدودة ، بيد فورد ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) باتباع إرشادات الشركة المصنعة على التوالي. تم تحديد حمض اليوريك ، بروتين المصل الكلي (TP) ، الألبومين (ALB) ، ألانين aminotransferase (ALT) ، و aspartate aminotransferase (AST) في الفئران بواسطة محلل كيميائي حيوي تلقائي.

فحص الأنسجة

تم تضمين نسيج الكلى المثبت بالفورمالين في البارافين ، وتم تقطيعه إلى شرائح بسماكة 3-4 ميكرومتر ، وملطخًا بحمض شيف الدوري (PAS). تم فحص التغيرات المورفولوجية في أنسجة الكلى ، بما في ذلك تكاثر الخلايا المسراق ، والتسلل الخلوي ، وتغييرات المصفوفة ميسانجيل ، لكل قسم ملطخ بواسطة الفحص المجهري الضوئي (NIKON D3100) (× 400).

انتقال المجهر الإلكتروني

تم استخدام TEM لمراقبة مورفولوجيا الخلايا البادوسية والخلايا ميسانجيل في أنسجة الكلى. تم تقسيم أنسجة الكلى الطازجة إلى كتل (< 1="" mm3="" ),="" were="" quickly="" fixed="" in="" 2%="" phosphate-buffered="" glutaraldehyde="" for="" at="" least="" 2="" h,="" washed="" three="" times="" with="" pbs,="" fixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide="" for="" 2="" h,="" and="" then="" embedded="" in="" acetone="" wrap="" after="" dehydration.="" specimens="" were="" sliced="" in="" 50-60="" nm="" ultrathin="" sections,="" double-stained="" with="" 3%="" uranyl="" acetate="" and="" lead="" citrate,="" and="" then="" examined="" under="" a="" tem="" (jeol-jem-1400="" plus,="" japan="" electron="" optics="" laboratory,="">

تحليل لطخة غربية

تم استخلاص البروتين الكلي من الأنسجة الكلوية بواسطة محلول تحلل البروتين (Solarbio Biotech ، بكين ، الصين). تم اختبار تركيزات البروتين في المادة الطافية بواسطة مجموعة اختبار BCA (Solarbio Biotech ، بكين ، الصين ، PC 0 020). تم فصل العينات التي تحتوي على 40 ميكروغرام من البروتين على 12 في المائة من الرحلان الكهربائي للهلام SDS-polyacrylamide (SDS PAGE) (Applygen ، بكين ، الصين ، B1004) ، ثم نقلها إلى غشاء مرشح النيتروسليلوز (Solar bio Biotech ، بكين ، الصين). بعد حجب الحليب الخالي من الدسم بنسبة 5 بالمائة في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين ، -اكتين (Proteintech ، رقم المقالة: 60008-1- lg) ، LC3II / I (Ab cam ، رقم الصنف: ab48394) ، P62 (Proteintech ، رقم العنصر: 18420-1- AP) ، beclin -1 (تقنية البروتين ، رقم العنصر: 11306-1- AP) ، p-mTOR (CST ، رقم العنصر: # 5536) ، mTOR (CST ، رقم العنصر: # 2983) ، nephrin (Abcam ، رقم العنصر: ab58968) ، و podocin (بروتين لكل منهما ، رقم العنصر: 20384 -1- AP) تمت إضافتهما واحتضانهما عند 4 درجات طوال الليل. تم بعد ذلك غسل هذا الخليط خمس مرات باستخدام TBS بالإضافة إلى 0.05 بالمائة توين -20 (Solar bio Biotech ، بكين ، الصين) (TBS-T) لمدة 5 دقائق قبل إضافة الجسم المضاد الثانوي (1 - 2000) قبل الحضانة في الغرفة درجة الحرارة لمدة ساعة واحدة ، وغسلها خمس مرات باستخدام TBST لمدة 5 دقائق ، وتخضع لتطور اللون مع تلألؤ كيميائي محسّن (ECL ، Millipore ، Billerica ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) والتعريض باستخدام برنامج ImageJ لتحليل شريط التدرج الرمادي.

تحليل احصائي

تم تحليل البيانات باستخدام برنامج SPSS (IBM SPSS Statistics for Windows ، الإصدار 23. 0. 2 0 14 ، Armonk ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم اختبار الاختلافات بين المجموعات باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه متبوعًا باختبار Tukey. تم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ​​± الانحراف المعياري. اعتبرت P <0.05>

لوتولين

النتائج

التأثير الوقائي لمغلي Tongluo Digui على كلى الفئران DN

تم قياس المؤشرات البيوكيميائية مثل الجلوكوز في الدم ، والهيموجلوبين السكري ، والكرياتينين في الدم ، وتركيز نيتروجين اليوريا في الدم ، و {0} ساعة من تركيز بروتين البول بعد 16 أسبوعًا من التزقيم. (الجدول 1). أظهرت النتائج أنه عند مقارنتها بالمجموعة العادية ، كان كل من جلوكوز الدم ، والهيموجلوبين السكري ، وكرياتينين المصل ، وتركيز نيتروجين اليوريا في الدم ، و 24- تركيز بروتين البول في الساعة ، و TP و ALB أعلى بشكل ملحوظ في المجموعة النموذجية (P <{{ 7}}.="" 0="" 1)="" ،="" مما="" يشير="" إلى="" أن="" مجموعة="" النموذج="" تعاني="" من="" ضعف="" في="" وظيفة="" الكلى.="" في="" مجموعة="" val="" ،="" انخفض="" كل="" من="" تركيز="" الكرياتينين="" في="" الدم="" وتركيز="" بروتين="" البول="" على="" مدار="" 24="" ساعة="" (p=""><0.05). علاوة="" على="" ذلك="" ،="" لوحظ="" انخفاض="" كبير="" في="" نسبة="" الجلوكوز="" في="" الدم="" ،="" hba1c="" ،="" وكرياتينين="" المصل="" ،="" وتركيزات="" نيتروجين="" اليوريا="" في="" مجموعة="" tongluo="" digui="" ديكوتيون="" عالية="" الجرعة="" ،="" وكذلك="" إفراز="" البول="" لمدة="" 24="" ساعة="" (p=""><0.01). كانت="" هذه="" الآثار="" تعتمد="" على="" الجرعة.="" لم="" تكن="" هناك="" فروق="" ذات="" دلالة="" إحصائية="" في="" مستويات="" حمض="" البوليك="" والأنسولين="" و="" alt="" و="" ast="" في="" كل="" مجموعة="" من="" الفئران.="" مجتمعة="" ،="" أظهرت="" النتائج="" التي="" توصلنا="" إليها="" أن="" مغلي="" tongluo="" digui="" يخفف="" من="" تلف="" الكلى="" ويحسن="" وظائف="" الكلى="" في="" الجرذان="" dn="" بطريقة="" تعتمد="" على="">

تم تقييم التغييرات في الأمراض الكلوية للجرذان DN عن طريق تلطيخ PAS بعد علاج مغلي Tongluo Digui (الشكل 1). بالمقارنة مع المجموعة الطبيعية ، لوحظت زيادة كبيرة في الخلايا المسراق الكبيبية والسدى المسراق مع اتساع منطقة ميسانجيل في المجموعة النموذجية. زادت منطقة ميسانجيل الكبيبي في كل من مستويات جرعة مغلي Tongluo Digui الثلاثة وفي مجموعة Val. علاوة على ذلك ، قللت هذه المجموعات العلاجية الأربع من عرض مصفوفة ميسانجيل مقارنة بمجموعة النموذج ، وكانت منطقة ميسانجيل الكبيبي في مجموعة مغلي تونغلو ديجوي ذات الجرعات العالية أقل مما كانت عليه في مجموعة Val. أشارت هذه النتائج إلى أن مغلي Tongluo Digui يؤخر تطور الآفات الكبيبية DN.

تأثير مغلي Tongluo Digui على إصابة الخلايا الكبيبية في فئران DN

تم استخدام تحليل اللطخة الغربية لتحديد التعبير عن بروتينات علامة podocyte nephrin و podocin (الشكل 2). بالمقارنة مع المجموعة العادية ، انخفض التعبير عن كلا البروتينين في مجموعة النموذج بشكل ملحوظ (P <0. 0="" 1)="" ،="" مما="" يشير="" إلى="" إصابة="" خلية="" البودوسيت.="" بالإضافة="" إلى="" ذلك="" ،="" تم="" تنظيم="" التعبير="" عن="" النيفرين="" والبودوسين="" في="" مجموعات="" مغلي="" tongluo="" digui="" مقارنة="" مع="" المجموعة="" النموذجية="" (p=""><>

تأثير مغلي Tongluo Digui على الالتهام الذاتي الكبيبي في فئران DN

لوحظت تغييرات في autophagosomes في podocytes الكبيبي تحت TEM (الشكل 3). أظهرت النتائج autophagosomes في الخلايا الكبيبية من المجموعة الطبيعية. كانت autophagosomes Podocyte غائبة في المجموعة النموذجية ، واختفت أيضًا عمليات القدم podocyte. في مجموعات جرعة مغلي Tongluo Digui الثلاث ومجموعة فالسارتان ، لاحظنا autophagosomes الكبيبي الكبيبي ، مما يشير إلى أن Tongluo Digui ديكوتيون عزز الالتهام الذاتي للخلية في الفئران DN. تم استخدام لطخة غربية لاكتشاف التعبير عن البروتينات المرتبطة بالبلعمة الذاتية P62 و Beclin -1 و LC3 (الشكل 4). مقارنة بالمجموعة العادية ، انخفض تعبير بيكلين -1 و LC3Ⅱ في مجموعة النموذج بشكل ملحوظ (P <0. 0="" 1)="" ،="" بينما="" زاد="" تعبير="" p62="" بشكل="" ملحوظ="" (p="">< 0.="" 01).="" أشارت="" هذه="" النتائج="" إلى="" ضعف="" الالتهام="" الذاتي="" في="" الفئران="" dn.="" مقارنة="" بمجموعة="" النموذج="" ،="" كانت="" مجموعة="" الجرعة="" العالية="" من="" tongluo="" digui="" ديكوتيون="" تحتوي="" على="" بيكلين="" مُنظَّم="" -1="" وتعبير="" lc3ⅱ="" (p=""><0.05) ،="" جنبًا="" إلى="" جنب="" مع="" التعبير="" الخاضع="" للتنظيم="" عن="" p62.="" أظهرت="" هذه="" النتائج="" معًا="" أن="" التأثير="" الوقائي="" الكلوي="" لمغلي="" tongluo="" digui="" في="" الفئران="" المصابة="" بـ="" dn="" قد="" يكون="" مرتبطًا="" بالالتهام="" الذاتي="" المعزز="" في="" خلايا="">

مغلي Tongluo Digui يعزز الالتهام الذاتي الكبيبي في فئران DN عن طريق تثبيط فسفرة mTOR

تثبيط الفسفرة mTOR يعزز الالتهام الذاتي (الشكل 5). مقارنة بالمجموعة العادية ، تم تحسين فسفرة mTOR في مجموعة النموذج (P <0. 0="" 1)="" ،="" بينما="" تم="" تثبيطه="" في="" مجموعات="" مغلي="" tongluo="" digui="" (p=""><0.05). هذا="" يشير="" إلى="" أن="" مغلي="" tongluo="" digui="" عزز="" الالتهام="" الذاتي="" للخلايا="" البودوسية="" عن="" طريق="" تثبيط="" تنشيط="" مسار="" إشارات="" mtor.="" أظهرت="" الدراسات="" السابقة="" أن="" الالتهام="" الذاتي="" يحمي="" خلايا="" الأقدام="" ويحسن="" وظائف="">

نقاش

يتميز DN بشكل أساسي بعلامات وأعراض مثل وجود البروتين البولي وارتفاع نسبة السكر في الدم و polydipsia و polyphagia و polyuria. تتشابه الأعراض مع أعراض الطب الصيني التقليدي ، مثل "Xiao Ke" و "Guan Ge" و "الوذمة". لا يمكن فصل حدوث وتطور DN عن الأساس المرضي لنقص الين وركود الدم .6 مع تطور نقص يين وركود الدم ، تتضرر الكلى تدريجيًا ، مما يظهر فقدان البروتين البولي ، مما يؤدي إلى تكوين مجهرية و تليف الكلى. يعاني مرضى DN حتما من مرض الكلى في نهاية المرحلة

تم تأسيس Tongluo Digui decoction من قبل Zhang Binghou ، طبيب الطب التقليدي الصيني الشهير ، واستنادًا إلى سنوات خبرته في علاج DN.12 ، 13 يتكون Tougluo Digui ديكوتيون من Shuichi (Hirudo) ، Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) ، Dihuang (Radix Rehmanniae) و Huangqi (Radix Astragali Perparata) و Danggui (Radix Angelicae Sinensis) و Ze Xie (Rhizoma Alismatis) و Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) و Gancio (Radix Glycyrrhizae). من بينها ، شويزي (هيرودو) و جويجيا (كاراباكس و بلاستروم تيستودينيز) من الأدوية الملكية ، والتي نعتقد أنها تلعب دورًا في تغذية يين وتعزيز الدورة الدموية في DN. يحسن Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) مناعة الجسم وحالة الإفراز ويؤخر الشيخوخة .14 Shuizhi (Hirudo) له تأثيرات مضادة للتخثر ومضادة للأورام ومضادة للالتهابات ومضادة للتليف من بين الإجراءات الدوائية الأخرى ، ويمكن أن تحسن الكلى التغيرات المرضية في DN لتقليل تركيزات الكرياتينين في الدم واليوريا في الدم بشكل كبير ، وتقليل إفراز البروتين في البول. بودوسين كلاهما بروتينات غشاء مسامي على سطح الخلايا البودوسية. يتفاعل البروتينان لتكوين مركب يلعب دورًا رئيسيًا في وظيفة حاجز الترشيح الكبيبي .18 يؤدي التوزيع غير الطبيعي لتعبير البروتين إلى درجات مختلفة من البيلة البروتينية .19 في هذه الدراسة ، أظهرت الفئران من النوع 1 DN المستحثة بـ STZ زيادة في إفراز البروتين البولي وضعف وظائف الكلى على مدى 24 ساعة. علاوة على ذلك ، أظهر تلطيخ PAS أن عدد خلايا ميسانجيل ومصفوفة ميسانجيل زاد في مجموعة النموذج ، مما يشير إلى أن النموذج قد تم إنشاؤه بنجاح. جرعات مختلفة من مغلي Tongluo Digui قللت من بروتين البول 24 ساعة وتركيزات الكرياتينين في الدم وحسنت أمراض الكلى لفئران DN مع خلايا ميسانجيل منخفضة ومصفوفة. أظهر تحليل اللطخة الغربية أن التعبير عن النيفرين والبودوسين في مجموعة مغلي Tongluo Digui كان أعلى مقارنةً بالمجموعة النموذجية ، مما يشير إلى أن هذه الصيغة تؤخر تقدم DN في الفئران عن طريق حماية الخلايا البودوسية.

الالتهام الذاتي هو مسار لتدهور البروتينات الليزوزومية في الخلايا ويلعب دورًا حاسمًا في إزالة البروتينات التالفة أو المفرطة التعبير التي تحافظ على توازن الخلية وسلامتها. .5 بعد القضاء على جين Atg5 المرتبط بالتهمة الذاتية في الخلايا البودوسية ، أظهرت الفئران تدريجيًا تراكم البروتين في كل مكان ، وتلف الميتوكوندريا ، ونشاط الالتهام الذاتي في الخلايا البودوسية ؛ تضررت الخلايا البودوسية واختفت عمليات القدم واندمجت ، مما يشير إلى استمرار الالتهام الذاتي. من المهم الحفاظ على وظيفة podocyte الطبيعية. 21،22 في هذه الدراسة ، قمنا بالتحقيق في تأثير مغلي Tongluo Digui على الالتهام الذاتي في الخلايا الكبيبية باستخدام تحليل TEM و Western blot. أظهر TEM أن عدد autophagosomes podocyte في كل مجموعة جرعة مغلي Tongluo Digui زادت مقارنة بمجموعة النموذج. علاوة على ذلك ، أظهرت اللطخة الغربية تعبيرًا عن البروتينات المرتبطة بالتهمة الذاتية LC3 و beclin -1 و p62. بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، زاد تعبير LC3Ⅱ و beclin -1 بشكل ملحوظ في مجموعة مغلي Tongluo Digui ، بينما انخفض تعبير البروتين p62 بشكل ملحوظ. أشارت هذه النتائج إلى أن مغلي Tongluo Digui زاد من مستوى الالتهام الذاتي في الخلايا الكبيبية.

بروتين الهدف Rapamycin (mTOR) هو أحد المنظمين الرئيسيين للالتهام الذاتي .23 ويتم توزيعه على نطاق واسع في القشرة الكلوية والنخاع ويلعب دورًا في الإصابة بإصابة خلية DN. يتم تنشيط mTOR وتفسفره ، مما يؤدي إلى فسفرة أهدافه النهائية وتثبيط الالتهام الذاتي. أظهر Liu et al 26 أن مثبط mTOR ، الراباميسين ، يرتبط على وجه التحديد بـ mTOR kinase ونشاط mTOR المانع ، والالتهام الذاتي المحسن للخلية ، ووظيفة الكلى المحمية. لقد وجدنا أن الفسفرة mTOR قد تم تعزيزها في مجموعة النموذج وأن مغلي Tongluo Digui قد منع هذه العملية ، مما يشير إلى أن Tongluo Digui ديكوتيون عزز الالتهام الذاتي في خلايا podocytes وقد يمنع تنشيط مسار إشارات mTOR.

باختصار ، قد يمنع مغلي Tongluo Digui الالتهام الذاتي في الخلايا البودوسية ، ويحمي الخلايا الكبيبية ، ويحافظ على سلامة غشاء الترشيح الكبيبي ، ويقلل من إفراز بروتين البول لمدة 24 ساعة ، ويؤخر تقدم DN عن طريق تثبيط تنشيط mTOR. توفر هذه النتائج نظرة ثاقبة لمزيد من الفهم للتأثير الوقائي لمغلي Tongluo Digui في DN ، ومع ذلك ، لا يزال يتعين توضيح الآلية الأساسية المعنية.

ما هو الكفالةلأمراض الكلى

المراجع
1 Tesch GH. اعتلال الكلية السكري - هل هذا اضطراب مناعي؟ كلين سسي 2017 ؛ 131 (16): 2183-2199.
2 لي جيه جيه ، كواك إس جيه ، جونج دس ، إت آل. بيولوجيا Podocyte في اعتلال الكلية السكري. ملحق الكلية الدولية 2007 ؛ (106): S 36- S42.
3 Liu N، Xu L، Shi Y، Zhuang S. الالتهام الذاتي للكرات: هدف علاجي محتمل لمنع تطور اعتلال الكلية السكري. J مرض السكري 2017 ؛ 2017 (4): 1-6.
4 Mizushima N، Komatsu M. الالتهام الذاتي: تجديد الخلايا والأنسجة. خلية 2011 ؛ 147 (4): 728-741.
5 تاجاوا أ ، ياسودا إم ، كوم إس ، وآخرون. يؤدي اختلال الالتهام الذاتي لخلايا القدم إلى تفاقم البيلة البروتينية في اعتلال الكلية السكري. مرض السكري 2016 ؛ 65 (3): 755-767.
6 Sun C، Xie QY، Meng QG. دراسة عن قانون توزيع متلازمة الطب الصيني التقليدي لاعتلال الكلية السكري. بكين Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao 2015 ؛ 38 (4): 266-270.
7. Szkudelski T. آلية عمل الألوكسان والستربتوزوتوسين في الخلايا البائية في بنكرياس الفئران. فيسيول ريس 2001 ؛ 50 (6): 537-546.
8 Dang WY ، Hou LY ، Wu HM ، Yan XM ، Zheng XF ، Hao J. فعالية Qingre Lishi Yishen decoction على التليف الكبيبي من الغلوبولين المناعي A اعتلال الكلية في نموذج الفئران. J Tradit Chin Med 2019 ؛ 39 (4): 516-523.
9 Lu MK، Gong XG، Guan KL. mTOR في وظيفة البودوسيت: هل الراباميسين جيد لاعتلال الكلية السكري؟ دورة الخلية 2011 ؛ 10 (20): 3415-3416.
10 Hartleben B ، Godel M ، Meyer-Schlesinger C ، وآخرون. يؤثر الالتهام الذاتي على قابلية الإصابة بمرض الكبيبات ويحافظ على توازن خلايا القدم في الفئران المسنة. J كلين إنفست 2010 ؛ 120 (4): 1084-1096.
11 صن جي دي ، لي سي واي ، كوي WP ، إت آل. مراجعة الطب الصيني التقليدي العشبي لعلاج اعتلال الكلية السكري. J مرض السكري 2016 ؛ 2016: 5749857.
12 Zhao WJ و Cai Z و Meng Y et al. تطبيق طريقة Zhang Binghou لتغذية الكلى Yin في علاج أمراض الكلى المزمنة. بكين تشونغ يي ياو 2016 ؛ 35 (4): 341-343.
13 دوان يف ، تشانغ إتش بي. مقدمة عن تجربة تطبيق البروفيسور Zhang Binghou. شين تشونغ يي 2012 ؛ 44 (4): 147-149.
14 يو XJ ، تشين SH ، لو جي. مسح للبحث في الديناميكا الدوائية لصدفة السلحفاة "Ziyin Bushen". دانغ داي يي شيويه 2009 ؛ 15 (10): 15-17.
15 Pang XX، Tong Y، Li HP، Han JR. تقدم البحث في العلقة ومستخلصاتها في علاج اعتلال الكلية السكري. غوانغ مينغ تشونغ يي 2019 ؛ 34 (1): 168-171.
16 Zhang ZL، Dong H. تقدم أبحاث العلقة ومكوناتها النشطة في علاج اعتلال الكلية السكري. Zhong Xi Yi Jie He Yan Jiu 2018 ؛ 10 (02): 106- 110.
17 Dai H، Liu Q، Liu B. تقدم البحث حول آلية استنفاد الخلايا القرنية في اعتلال الكلية السكري. J مرض السكري 2017 ؛ 2017: 2615286.
18 Martin CE، Jones N. Nephrin الإشارات في خلية البودوسيت: عرض محدث لتنظيم الإشارة في الحجاب الحاجز الشق وما بعده. الجبهة Endocrinol (لوزان) 2018 ؛ 9: 302.
19 Jaakko P، Karl T. التركيب الجزيئي لحاجز الترشيح الكبيبي. Biochem Bioph Res Co 2010 ؛ 396 (1): 164-169.
20 نوبورو إم ، بيث إل ، آنا ماريا سي ، كليونسكي دي جي. يحارب الالتهام الذاتي المرض من خلال الهضم الذاتي الخلوي. طبيعة 2008 ؛ 451 (7182): 1069.
21 Lenoir O ، Jasiek M ، Henrique C ، وآخرون. خلية البطانية
والالتهام الذاتي للعدوى يحمي بشكل تآزري من تصلب الكبيبات الناجم عن مرض السكري. الالتهام الذاتي 2015 ؛ 11 (7): 1130-1145.
22 Ilatovskaya DV ، Levchenko V ، Lowing A ، Shuyskiy LS ، Palygin O ، Staruschenko A. إصابة Podocyte في اعتلال الكلية السكري: الآثار المترتبة على التنشيط المعتمد على الأنجيوتنسين Ⅱ لقنوات TRPC. Sci Rep 2015 ؛ 5: 17637.
23 Rabanal-Ruiz Y، Otten EG، Korolchuk VI. mTORC1 كبوابة رئيسية للالتهام الذاتي. مقالات Biochem 2017 ؛ 61 (6): 565-584.
24 Kim YC، Guan KL. mTOR: هدف دوائي لتنظيم الالتهام الذاتي. J كلين إنفست 2015 ؛ 125 (1): 25-32.
25 Li XY و Wang SS و Han Z et al. يستعيد تريبتوليد الالتهام الذاتي للتخفيف من التليف الكلوي السكري من خلال مسار miR -141-3 p / PTEN / Akt / mTOR. مول الأحماض النووية 2017 ؛ 9: 48-56.
26 Liu L، Yang L، Chang B، Zhang J، Guo Y، Yang X. التأثيرات الوقائية للراباميسين على الالتهام الذاتي الخلوي في الأنسجة الكلوية للفئران المصابة باعتلال الكلية السكري عبر مسار إشارات mTORS6K 1- LC3. رن فايل 2018 ؛ 40 (1): 492-497.