نشاط التبييض للمكونات المعزولة من لب Trichosanthes

اتصال:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساب: 008618081934791

Rongchao Zhang ، 1 ، 2 Xiuqin Hu ، 1Bo Zhang ، 1ZhenWang ، 1Chunxiang Hao ، 1 Jie Xin ، 1 و Qingmei Guo 2

الملخص: التبييضيتمتع سوق مستحضرات التجميل بمستقبل مشرق ، وكانت منتجات التبييض الطبيعية النقية للطب الصيني التقليدي دائمًا نقطة ساخنة للبحث. في هذا البحث تم عزل و تنقية المادة الفعالة المبيضة للطب الصيني Trichosanthes اللب لأول مرة وتبييضتم توضيح الآلية. تم استخدام الطرق الكروماتوجرافية مثل هلام السيليكا والمواد المستنفدة للأوزون و HPLC لعزلها وتنقيتها. تم استخدام خلايا B16 لقياس نشاط مضادات الأكسدة ،التيروزينازالنشاط ونشاط إزالة الميلانين. تم عزل ما مجموعه 20 مركبًا ، بما في ذلك p-hydroxybenzaldehyde (1) ، وحمض الساليسيليك (2) ، وحمض الفانيليك (3) ، وحمض isovanillic (4) ، و protocatechuate (5) ، وحمض ترانس سيناميك (6) ، {{9) }} حمض الكوماريك (7) ، حمض الفيروليك (8) ، drechslerol-B (9) ، cyclohexanol 3- بالميتات (10) ، 5- أسيتوكسيميثيل -2- furaldehyde (11) ، 5- hydroxymethylfurfural (12) ، diosmetin (13) ، apigenin (14) ، chrysoberyl (15) ، luteolin (16) ، 4′-hydroxyscutellarin (17) ، quercetin (18) ، 3 ، {{31} } dihydroxy -7- (-D-glucopyranosyloxy) -4 ′ - methoxy flavone (19) و ciprofloxacin -7- O - - D-glucoside (20). من بينها ، المركبات 9 ، 10 ، 11 ، 12 ، 13 ، 14 ، 15 ، 16 ، 17 ، 18 ، 19 ، و 20 لها تأثيرات إصلاح جيدة مضادة للأكسدة ؛ المركبات 3 و 4 و 5 و 6 و 7 لها تثبيط عالٍ للون الأسود ؛ المركبات 1 و 2 و 3 و 4 و 5 و 6 و 7 و 8 و 11 و 12 و 13 و 14 و 15 و 16 و 17 و 18 و 19 و 20 لها نشاط مثبط للتيروزين أوكسيديز. أرست نتائج 1e الأساس لمزيد من التطوير والاستفادة من موارد لب Trichosanthes ، كما توفر أساسًا لتطوير الموارد الطبيعية.تبييضمستحضرات التجميل.

سيستانش هيرباهومكون التبييض الطبيعي.

1 المقدمة

Trichosanthes kirilowii مكسيم. هو عشب متسلق معمر لعائلة Cucurbitaceae. يشيع استخدام ثمارها وبذورها وقشرها وجذورها كأدوية صينية تقليدية. مع مرور الوقت ، غالبًا ما يتم التخلص من لب من Trichosanthes في إنتاج ومعالجة Semen Trichosanthis و Pericarpium Trichosanthis ، مما يؤدي إلى نفايات كبيرة. في الوقت الحاضر ، تركز التقارير حول لب Trichosanthes بشكل أساسي على مقارنة محتوى السكر والأحماض الأمينية والفيتامينات والمغذيات الأخرى [1-4]. 1 لا يوجد تقرير عن التركيب الكيميائي لباب Trichosanthes. 1 لذلك من الضروري دراسة المكونات الكيميائية لللب بشكل منهجي.

في الوقت نفسه ، مع التطور السريع للاقتصاد ، لم تعد مستحضرات التجميل من المنتجات ذات الاستهلاك العالي فحسب ، بل أصبحت أيضًا "الضروريات" الأكثر شيوعًا للنساء. سجلت العديد من كتب الطب الصيني الكلاسيكي أو مادة المواد الطبية أن لب Trichosanthes وظيفةتبييضوآثار إزالة التجاعيد [5-7]. أظهرت النتائج السابقة لمجموعتنا البحثية رقم 1e أن مستخلص الماء من لب Trichosanthes كان أعلىالتيروزينازالتثبيط ، وكان معدل التثبيط التيروزينيز حوالي 70 في المائة. 1 شائعتبييضتم استخدام عوامل فيتامين ج (VC) وأربوتين كمواد رقابة [8]. تم إثبات أن مستخلص لب Trichosanthes له تأثير تبييض معين عن طريق تثبيط نشاط التيروزيناز. 1 لذلك ، من الأهمية بمكان دراسة المكونات الكيميائية وآلية تبييض لب Trichosanthes.

التبييضيمكن تلخيص الآلية على أنها تمنع تخليق الميلانين وتسريع نقل الميلانين. عملية 1e لتكوين الميلانين في الخلايا الصباغية هي كما يلي:التيروزينازيؤكسد التيروزين إلى BA متعدد الأشكال (DOPA) ؛ ثم يتأكسد إلى dopaquinone. بعد سلسلة من التفاعلات الأيضية ، يتم إنتاج الميلانين. يعتبر التيروزيناز هو الإنزيم الوحيد المحدد للمعدل في عملية التفاعل ، ونشاطه يحدد كمية الميلانين التي يتم تصنيعها. عندما يتم تعزيز نشاط التيروزيناز ، يزداد تركيب الميلانين. عندما يتم تثبيط نشاط التيروزيناز ، يتم تقليل تخليق الميلانين [9]. يحتوي المركز النشط 1e من التيروزيناز على موقع نحاسي مزدوج نشط ، وكل اتحاد أيوني نحاسي به 3 بقايا هيستيدين مع 1 أو 2 تكافؤ على التوالي. 1 لذلك ، يمكن أن يتفاعل الاختزال مع التأثيرات المضادة للأكسدة مع ذرة النحاس في الموقع النشط للتيروزيناز أو يقلل الوسيط في عملية تخليق الميلانين لمنع تكوين الميلانين [10 ، 11]. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يلعب منع نقل الخلايا النانوية إلى الخلايا الكيراتينية دورًا في التبييض.

يتم استخدام تقنية زراعة الخلايا لتحديد تأثيرتبييضالمكونات النشطة علىالتيروزينازالنشاط وإنتاج الميلانين في الخلايا الصباغية في المختبر. يُشتق خط خلية الورم الميلاني 1e (خلايا B16) من خلايا الورم الميلانيني من جلد الفأر ، وهيكلها الأساسي ، خاصةً فيما يتعلق بتوليف الميلانين ، هو في الأساس نفس تركيب خلايا الورم الميلانيني البشري الطبيعي. نظرًا لأنه من الصعب جدًا استنبات خلايا سرطان الجلد البشري الأولية ، يمكن استخدام نموذج الفأر كخلية اختبار لتحديدتبييضمكونات نشطة. 1 لذلك تم استخدام خلايا B16 لقياس نشاط مضادات الأكسدة ونشاط التيروزيناز ونشاط إزالة الميلانين ، وتم تحديد مكونات التبييض الفعالة والآلية ذات الصلة بشكل أولي. وضعت 1eresults الأساس لمزيد من التطوير والاستفادة من موارد لب Trichosanthes وأيضًا توفير الوهن لتطوير مستحضرات التجميل الطبيعية للتبييض.

2. التجارب

2.1. المواد.

تم جمع Trichosanthes trichosanthis من قاعدة زراعة الأدوية العشبية في هيباو في بينين ، جينان. تم تحديد عينات 1e بواسطة البروفيسور QingmeiGuo من جامعة شاندونغ للطب الصيني التقليدي. بعد إزالة القشر والبذور ، يتم الحصول على جزء اللب من الفاكهة. بعد التجفيف بالتجميد ، يتم سحق اللب وخلطه ووضعه أخيرًا في مجفف لمزيد من الاستخدام.

cistanche الطازجةمعإشنكوسايدتأثيرات

2.2. حيوية الخلية.

تم شراء خلايا B -16 (خلايا سرطان الجلد في الفئران) من KeyGEN وتم الاحتفاظ بها في وسط DMEM مدعومًا بنسبة 10 في المائة من مصل بقري جنيني (FBS) ، عند 37 درجة في جو رطب مع 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون. تم زرع الخلايا 1en و B -16 في 96- أطباق جيدة (10 × 104 خلية / بئر) لمدة 24 ساعة.

2.3 تحضير المستخلصات المختلفة.

كانت المادة الخام لبذور Trichosanthes kirilowii 4.5 كجم. تم نقع 1e اللب في 1 0 مرة من كمية 95 بالمائة من الإيثانول 3 مرات. تم الجمع بين 1 مستخلص وتركيزه إلى حوالي 3.0 لتر. تم الحصول على مستخلص أسيتات Anethyl عن طريق تشتيت مستخلص الإيثانول في 15 لترًا من الماء ، واستخلاصه باستخدام أسيتات الإيثيل حتى يصبح المستخلص عديم اللون. تم الجمع بين مستخلص 1e وتركيزه تحت ضغط مخفض.

تم خلط مستخلص أسيتات الإيثيل مع هلام السيليكا (شبكة 1 0 0 - 2 0 0) بنسبة 1: 2 (المستخلص: هلام السيليكا ، ت / الخامس). 1 تم تبخير المذيب ، وتم حجز الجل. تم تعبئة عمود الكروماتوغرافيا الزجاجي 1e (8 {{3 0} مم × 12 0 0 مم) بـ 2 0 0 - 300 هلام سيليكا شبكي و D101 راتنج كبير المسام ، ثم تمت تصفية العمود باستخدام أسيتات الإيثيل ، وإيثر البترول (10 في المائة ، 25 في المائة ، 50 في المائة ، 75 في المائة ، 100 في المائة) ، والميثانول ، أسيتات الإيثيل (5 في المائة ، 10 في المائة ، 25 في المائة ، 50 في المائة ، 75 في المائة ، و 100 في المائة) ، لتدفق التجميع. أخيرًا ، تم جمع كل جزء وتكوينه على التركيزات التالية: 0.003125 مجم / مل ، 0.00625 مجم / مل ، 0.0125 مجم / مل ، 0.025 مجم / مل ، 0.05 مجم / مل ، 0.1 مجم / مل ، 0.25 مجم / مل ، 0.5 مجم / مل مل ، 1.0 مجم / مل ، و 2.0 مجم / مل ، ثم تستخدم لمعالجة الخلايا المستنبتة. في نهاية العلاج ، تمت إضافة 20 ميكرولتر من محلول MTT (5 مجم / مل) إلى كل بئر. تم تحضين خلايا 1e لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة. تم التخلص من 1 متطرف ، وتمت إضافة 100 ميكرولتر من DMSO إلى كل بئر. تم قياس الامتصاصية 1e عند 490 نانومتر. 1 تم تكرار التجربة 3 مرات. تم حساب معدل البقاء على قيد الحياة 1e على النحو التالي:

نسبة معدل البقاء على قيد الحياة=(مجموعة تجريبية فارغة مجموعة) / (مجموعة تحكم - مجموعة فارغة) × 100 بالمائة.

تم حساب التركيز الأمثل (C1) لكل جزء وفقًا للعلاقة الوظيفية بين معدل البقاء وتركيز كل جزء. تم تخفيف C1 2 و 4 و 6 و 8 مرات للحصول على التركيزات C2 و C3 و C4 و C5 على التوالي. 1e يتم عرض مقتطفات مختلفة من اللب في الجدول 1.

الجدول 1: المستخلصات القطبية من لب Trichosanthes والتركيز الأمثل.

2.4 تجربة التبييض

2.4.1. اختبار مضادات الأكسدة.

تم استخدام اختبار MTT لتحديد صلاحية الخلية (MTT Kit ، Kaiji Biology). تم زرع 1en و B -16 في 96- ألواح بئر (1 0 × 104 خلية / بئر) لمدة 24 ساعة ومعالجتها بمستخلصات أو مركبات مختلفة لمدة 24 ساعة. بعد المعالجة ، تم التخلص من وسط الاستزراع وغسله مرتين باستخدام PBS. تمت إضافة 1en ، 0.05 في المائة H O ، وزرع الخلايا لمدة 4 ساعات. بعد ذلك ، تم تحضين الخلايا البائية -16 في 20 ميكرولتر من محلول MTT (5 مجم / مل) عند 37 درجة لمدة 4 ساعات. في الشكل 1 ، تمت إزالة المادة الطافية للثقافة ، وتم إذابة البقايا في 100 ميكرولتر من DMSO. تم اكتشاف امتصاص 1e عند 490 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية (Tecan Trading AG). 1 تم إجراء التجارب على التوازي 3 مرات.

2.4.2. تثبيط إنتاج الميلانين.

تم تحديد إنتاج الميلانين من خلال الكشف عن محتوى الميلانين من خلال الانحلال الحراري NaOH [12]. تم زرع الخلايا في 96- لوحات زراعة جيدة لمدة 24 ساعة بكثافة خلية تبلغ 1 0 × 104 خلية / بئر. 1en ، تمت معالجة الخلايا بمستخلصات مختلفة أو مركبة لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، تمت إزالة المادة الطافية لزراعة الخلايا (300 ميكرولتر) ، وتم إذابة المادة المتبقية في NaOH (1 مل ، 1.0 مول / لتر) لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة الغرفة. 1 تم قياس الامتصاصية عند 475 نانومتر ، باستخدام رأس دقيق (Tecan Trading AG). أجريت تجارب 1e بالتوازي مع 3 مكررات. تم تحديد 1e IC50 بواسطة برنامج GraphPad Prism 5 (GraphPad Software، Inc. ، سان دييغو ، كاليفورنيا) ، وتم استخدام أربوتين كعنصر تحكم إيجابي (IC 50 =15. 6 ميكرولتر).

2.4.3. تحديد نشاط التيروزيناز.

تمت إزالة المادة المستنبتة الخلوية ، وتم إذابة البقايا في Tritonx -100 (90 ميكرولتر) والتيروزيناز(1 0 ميكرولتر ، 1.0 مجم / مل ، سيجما ، تي 3824 25 كو). بعد الخلط ، تم تحضين الخليط عند 37 درجة لمدة 30 دقيقة. تم قياس امتصاص 1e عند 475 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية (Tecan Trading AG). 1 تم إجراء التجارب على التوازي 3 مرات. تم تحديد 1e IC50 بواسطة برنامج GraphPadSoftware 5 (GraphPadSoftware، Inc. ، سان دييغو ، كاليفورنيا) ، وتم استخدام أربوتين كعنصر تحكم إيجابي (IC 50 =15. 6 ميكرولتر).

2.5 الاستخراج والعزلة. تمت إذابة مستخلص أسيتات الإيثيل في ميثانول ، وتم تعبئة العمود بـ200-300 شبكة هلام السيليكا ، والتي تمت معايرتها بواسطة الإيثر البترولي. 1en ، شطف متدرج يتكون من البترول وخلات الإيثيل بنسب 2: 1 ، 1: 1 ، و 1: 2 ؛ إيثيل الأسيتات؛ أسيتات الإيثيل والميثانول بنسب 2: 1 و 1: 1 و 1: 2 ؛ والميثانول بالاقتران مع TLC للحصول على مركبات A (11.5 جم) و B (10.4 جم) و C (12.1 جم) و D (5.2 جم) و E (6.1 جم).

تم فصل A بواسطة كروماتوجرافيا عمود البولي أميد ، باستخدام ثنائي كلورو ميثان وميثانول بنسب 2: 1 ، 1: 1 ، و 1: 2 كمذيب شطف. تم رصد 1e eluate بواسطة TLC. تم تجميع البقع التي لها نفس عامل الاحتفاظ (rf) ، وتم الحصول على A1 و A2. تم تحضير 1en ، A1 بواسطة TLC ، باستخدام ثنائي كلورو ميثان وميثانول بنسبة 1: 1 كعامل نامي ، وتنقيته عدة مرات بواسطة عمود الهلام. أخيرًا ، تم الحصول على المركب 1 (17 مجم) والمجمع 2 (27 مجم). تمت تنقية A2 بواسطة كروماتوجرافيا عمود هلام السيليكا ، باستخدام ثنائي كلورو ميثان وميثانول كخليط بنسب 1: 1 و 1: 2. تم الحصول على المركب 3 (11 مجم) والمركب 4 (12 مجم) والمركب 5 (23 مجم). تم فصل B بواسطة كروماتوغرافيا الضغط المتوسط ​​C18 ذات الطور العكسي (RP-C18) ، باستخدام الميثانول والماء في شطف متدرج على النحو التالي: 0 بالمائة ، 10 بالمائة ، 15 بالمائة ، 20 بالمائة ، 25 بالمائة ، 30 بالمائة ، 35 بالمائة و 40 بالمائة و 50 بالمائة و 75 بالمائة و 90 بالمائة و 100 بالمائة. كان معدل التدفق 1e 10 مل · دقيقة -1. تم الجمع بين كسور التدفق 1e مع نفس التردد ، وتم الحصول على B1 و B2. تمت تنقية B1 بشكل متكرر بواسطة عمود الهلام ، باستخدام الميثانول كمذيب شطف. تم الحصول على المركب (24 مجم) و 7 (21 مجم) و 8 (18 مجم) بعد الشطف المتكرر. تمت تنقية B2 بواسطة عمود الهلام والميثانول ، وتم الحصول على المركب 9 (11 مجم). تم فصل C بواسطة RP-C18 وتمت التصفية التتابعية بواسطة الميثانول والماء بمعدل تدفق 10 مل · دقيقة -1. تم تجميع كسور التدفق 1e مع نفس rf ، وتم الحصول على C1 و C2 و C3. تم تحضير C1 بواسطة عمود الهلام وتمت التصفية التتابعية بواسطة الميثانول ، وتم الحصول على المركب 10 (13 مجم). تم فصل C2 بواسطة عمود هلام السيليكا وتمت التصفية التتابعية بواسطة أسيتات الإيثيل والميثانول ، مع شطف متدرج بنسب 2: 1 ، 1: 1 ، و 1: 2. تمت تنقية C2 عن طريق استخلاص الطور السائل التحضيري ، والمركبات 11 (15 مجم) و 12 تم الحصول على (14 مجم). تم فصل C3 بواسطة عمود بولي أميد ، تمت التصفية التتابعية بواسطة الميثانول والماء ، وتنقيته بواسطة HPLC. تم الحصول على المركبات 13 (34 مجم) و 14 (42 مجم) و 15 (38 مجم). تم فصل D بواسطة RP-C18 وتمت التصفية التتابعية باستخدام ميثانول وماء. كان معدل تدفق 1e 10 مل · دقيقة -1. تم الحصول على المركبات 16 (36 مجم) و 17 (19 مجم) و 18 (37 مجم) بواسطة HPLC. تم الحصول على المركبين 19 (29 مجم) و 20 (34 مجم) عن طريق الشطف التدريجي باستخدام أسيتات الإيثيل والميثانول بنسب 1: 1 و 1: 2 ، متبوعًا بالميثانول بنسبة 100٪ على عمود هلام السيليكا.

هربا epimedium sagittatum على الجلد

3. النتائج والمناقشة

3.1. تحديد المستخلصات النشطة (E1 – E11).

تم حساب تركيز 1e الأمثل (أي C1) لكل مستخلص وهو موضح في الجدول 1. توضح تجربة 1 هـ المضادة للأكسدة أن جميع المستخلصات لها تأثير إصلاح مضاد للأكسدة ، ولكن بالمقارنة مع VC ، فإن التأثير المضاد للأكسدة لكل مجموعة ضعيف. 1 انخفض نشاط التأكسد لـ E1 و E3 و E4 و E7 و E11 ضمن زيادة التركيز ، كما هو موضح في الشكل 1. أظهر اختبار تثبيط الميلانين أن جميع المكونات القطبية في اللب من Trichosanthes kirilowii تثبط تخليق الميلانين. على وجه الخصوص ، كان معدل تثبيط الميلانين أعلى بشكل ملحوظ لـ E2 و E3 و E4 من معدل أربوتين التحكم الإيجابي ، كما هو موضح في الشكل 2. نتائج 1eالتيروزينازأظهر النشاط أن جميع المكونات القطبية في لب من Trichosanthes kirilowii تمنع نشاط التيروزيناز ، وكان اتجاه التثبيط مشابهًا لاتجاه تثبيط الميلانين. كان تثبيط 1e لنشاط التيروزينيز أعلى بكثير بالنسبة لـ E2 و E3 و E4 و E8 مقارنةً بعنصر التحكم الإيجابي. بشكل عام ، فإن المستخلصات من الأثير النفطي لها تأثير مثبط منخفض على مستخلصات التيروزيناز. 1e من أسيتات الإيثيل لها تأثير مثبط كبير على التيروزيناز ، وخاصة المكونات القطبية من أسيتات الإيثيل. 1e مقتطفات من n- بيوتانول لها أيضًا تأثير مثبط كبير على التيروزيناز ، كما هو موضح في الشكل 3.

3.2 عزل وتحديد مكونات مونومر.

تم فصل 20 مركبًا بواسطة أعمدة كروماتوجرام هلام السيليكا و ODS بالإضافة إلى HPLC التحضيري. على أساس تحليل بيانات الرنين المغناطيسي النووي ومرض التصلب العصبي المتعدد ، تم توضيح هياكلها. 1 يتم عرض مركبات 1 هـ 20 في الجدول 2 ، وتظهر البيانات التحليلية المحددة للمونومرات في الملحق 1.

3.3 تحليل التحقق من صحة المركبات الفعالة

3.3.1. تحليل التحقق من صحة المركبات المضادة للأكسدة.

E1 و E2 و E3 و E4 و E5 لها تأثيرات مضادة للأكسدة. 1e المركبات الرئيسية المعزولة من المكونات المذكورة أعلاه weredrechslerol-B (المركب 9) ، cyclohexanol 3- بالميتات (المركب 10) ، 5- acetoxymethyl -2- furaldehyde (comp11) ، 5- hydroxymethylfurfural ( مركب 12) ، ديوسميتين (مركب 13) ، أبجينين (مركب 14) ، كريزوبريل (مركب 15) ، لوتولين (مركب 16) ، 4′-هيدروكسي-سكوتلارين (مركب 17) ، كيرسيتين (مركب 18) ، 3 ′ ، {{ 25}} من المركبات الرئيسية كانت جليكوسيدات ، مما يشير إلى أن الجليكوسيدات لها أنشطة جيدة كمضادات الأكسدة. أحماض الفينول ، مثل 5- أسيتوكسيميثيل -2- فورالديهيد (مركب 11) ، 5- هيدروكسي ميثيل فورفورال (مركب 12) ، ديوسميتين (مركب 13) ، أبجينين (مركب 14) ، كريزوبريل (مركب 15) ، لوتولين (مركب 16) ، 4′-هيدروكسي كوتيلارين (مركب 17) ، كيرسيتين (مركب 18) ، و 3 ، 5- ثنائي هيدروكسي -7- (-Dglucopyranosyloxy) -4 ′ - ميثوكسي فلافون ، لها أيضًا أنشطة جيدة مضادة للأكسدة ، بسبب مجموعة الهيدروكسيل الفينولية والروابط المزدوجة غير المشبعة [26 ، 27]. يتم عرض نتائج 1e في الشكل 4.

الشكل 4: معدل بقاء الخلية (النسبة المئوية) لتجربة مضادات الأكسدة لمركبات مختلفة من مستخلصات Trichosanthes

3.3.2. تحليل التحقق من صحة مركبات تثبيط الميلانين.

E11 و E12 و E13 و E16 و E17 و E18 لها تأثيرات مثبطة جيدة على تخليق الميلانين. يتم عرض المركبات الرئيسية المعزولة من المكونات المذكورة أعلاه في الجدول 2. وفقًا للطريقة الواردة في القسم 2.4.2 ، تم تحديد تأثير كل مركب على تخليق الميلانين. تم تقييم كل مركب بالتركيزات التالية: 1000 ميكروجرام / مل ، 800 ميكروجرام / مل ، 400 ميكروجرام / مل ، 200 ميكروجرام / مل ، و 100 ميكروجرام / مل. تم إجراء كل قياس في ثلاث نسخ ، وتم حساب تثبيط تخليق الميلانين.

Protocatechuate (المركب 5) ، 5- acetoxymethyl -2- furaldehyde (مركب 11) ، 5- hydroxymethylfurfural (مركب 12) ، diosmetin (مركب 13) ، p-hydroxybenzaldehyde (مركب 1) ، حمض الساليسيليك (المركب 2) ، حمض الفانيليك (المركب 3) ، حمض الأيزوفانيليك (المركب 4) ، حمض ترانس سيناميك (المركب 6) ، 4- حمض الكوماريك (المركب 7) ، الأبجينين (المركب 14) ، الكريزوبيريل (المركب 15) ) ، luteolin (مركب 16) ، 4′-hydroxy scutellarin (مركب 17) ، كيرسيتين (مركب 18) ، 3 ′ ، 5- ثنائي هيدروكسي -7- (-D-glucopyranosyloxy) -4 ′ - ميثوكسي فلافون (مركب 19) أوفلوكساسين -7- O - - د-جلوكوزيد (مركب 20) يمكن أن يثبط إنتاج الميلانين [28]. على وجه الخصوص ، يحتوي حمض الفانيليك (المركب 3) ، وحمض الأيزوفانيليك (المركب 4) ، والبروتوكاتيكويت (المركب 5) ، وحمض ترانس سيناميك (المركب 6) ، و 4- حمض الكوماريك (المركب 7) على تثبيط مرتفع للميلانين. يتم عرض نتائج 1e في الشكل 5.

3.3.3. التحقق من المركبات المثبطة لنشاط التيروزيناز وتحليلها.

E2 و E3 و E4 و E7 و E8 و E9 لها تأثيرات تثبيط جيدة علىالتيروزينازنشاط. يتم عرض المركبات الرئيسية المعزولة من المكونات المذكورة أعلاه في الجدول 2. وفقًا للطريقة المقدمة في القسم 2.4.3 ، تم استخدام أربوتين كعنصر تحكم ، وكان تركيز المركب 1000 ميكروغرام / مل ، 800 ميكروغرام / مل ، 400 ميكروغرام / مل و 200 ميكروجرام / مل و 100 ميكروجرام / مل. تم إجراء كل قياس 5 مرات ، وتم حساب معدل تثبيط إنزيم التيروزيناز. تظهر نتائج 1e في الشكل 6.

أظهرت نتائج 1e أن ديوسميتين (مركب 13) ، أبجينين (مركب 14) ، كريزوبريل (مركب 15) ، لوتولين (مركب 16) ، 4′-هيدروكسي كوتين (مركب 17) ، كيرسيتين (مركب 18) ، 3 ′ ، {{10} } ثنائي هيدروكسي -7- (-D-glucopyranosyloxy) -4 ′ - ميثوكسي فلافون (مركب 19) ، سيبروفلوكساسين -7- O {18}} D-glucoside (مركب 20) ، p-hydroxybenzaldehyde (مركب 1) ، حمض الساليسيليك (مركب 2) ، حمض الفانيليك (مركب 3) ، حمض أيزوفانيليك (مركب 4) ، بروتوكاتيكويت (مركب 5) ، حمض ترانس سيناميك (مركب 6) ، 4- حمض كوماريك (مركب 7) ) ، وحمض الفيروليك (المركب 8) جميعها واضحةالتيروزينازالأنشطة المثبطة.

يمنع نبات Cistanche نشاط التيروزيناز.

اضغط على الصورة واحصل على مزيد من التفاصيل.

مركبات الهيدروكسيل المستبدلة على حلقة البنزين ، مثل p-hydroxybenzaldehyde (المركب 1) ، حمض الساليسيليك (المركب 2) ، حمض الفانيليك (المركب 3) ، حمض الأيزوفانيليك (المركب 4) ، البروتوكاتيكويت (المركب 5) ، حمض الترانس سيناميك ( المركب 6) ، 4- وحمض الكوماريك (المركب 7) ، وحمض الفيروليك (المركب 8) ، والفلافونويد ، أظهر تثبيطًا عاليًا لإنزيم التيروزيناز ، وكان معدل تثبيط المركبات شبه المستبدلة أعلى بكثير من المركبات المستبدلة. . على سبيل المثال ، كان النشاط التثبيطي لـ p-hydroxybenzaldehyde أعلى بشكل ملحوظ من نشاط حمض الساليسيليك ، وكان النشاط التثبيطي لحمض الفانيليك أعلى بكثير من نشاط isovanillicacid. علاوة على ذلك ، كان النشاط التثبيطي لـ p-hydroxybenzaldehyde أعلى بكثير من نشاط حمض الساليسيليك وحمض الفانيليك وحمض الأيزوفانيليك والبروتوكاتيكويت. قد يكون السبب هو أن المجموعات المحبة للنووية حول مركز نشاطالتيروزيناز، مثل SH و NH2 و –OH ، تحتل المساحة حول المركز النشط وبالتالي تمنع التيروزين من مهاجمة المركز النشط. أخيرًا ، تم إعاقة تصنيع الميلانين [28]. كان النشاط التثبيطي 1e للمركبات المحتوية على o-dihydroxy أقوى من مركبات بارا هيدروكسي ، وكان النشاط التثبيطي للبروتوكاتشات أعلى بكثير من نشاط حمض الفانيليك. 1e أعلاه موجودة أيضًا في مركبات الفلافونويد. كان معدل التثبيط 1 للفلافونويد المحتوي على 7 و 4 مجموعات هيدروكسيل أعلى بكثير مما لو تم استبدال مجموعات هيدروكسيل 7 و 4. على سبيل المثال ، كان النشاط المثبط للكريزوبريل أعلى بكثير من نشاط الديوسميتين ، بينما كان النشاط المثبط للديوسميتين أعلى من 3 ′ ، 5- ثنائي هيدروكسي -7- (-D-glucopyranosyloxy) -4 ′ - ميثوكسي فلافون وسيبروفلوكساسين -7- O - - د-جلوكوزيد. 1 كان المعدل المثبط للفلافونويد المحتوي على 3- هيدروكسي أعلى بكثير من المركبات التي لا تحتوي على 3- هيدروكسي أو إذا تم استبدال 3- هيدروكسي. على سبيل المثال ، كان النشاط التثبيطي للكيرسيتين أعلى بكثير من نشاط 4′-hydroxyscutellarin ، لكن النشاط المثبط لـ4′-hydroxyscutellarin كان أعلى من نشاط الكيرسيتين -3- o glucoside. بالإضافة إلى ذلك ، فإن النشاط المثبط لغسل الكولين أعلى من نشاط الأبيجينين ولكنه أقل من نشاط اللوتولين. اقترح أن بدائل الحلقة B ، خاصة مجموعة الهيدروكسيل ، يمكن أن تعززالتيروزينازالنشاط المثبط ، ومجموعة orthodihydroxy للحلقة B كان لها نشاط مثبط أكبر [29].